JP5404400B2 - 光マイクロトモグラフィのための焦点面追跡 - Google Patents
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Description
本発明は、(米)国立衛生研究所/(米)国立癌研究所(NIH/NCI)によって与えられるSBIRフェーズI補助金番号HHSN2612004330106のもとに政府援助を受けて行われた。合衆国政府は、本発明に一定の権利を有する。
本出願は、「OPTICAL TOMOGRAPHY OF SMALL OBJECTS USING PARALLEL RAY ILLUMINATION AND POST−SPECIMEN OPTICAL MAGNIFICATION」と題する2005年8月15日出願のMeyer他の同時係属米国出願第11/203878号の一部継続出願の優先権を主張し、それは今度は、「OPTICAL TOMOGRAPHY OF SMALL OBJECTS USING PARALLEL RAY ILLUMINATION AND POST−SPECIMEN OPTICAL MAGNIFICATION」と題する2005年9月13日発行のJohnsonおよびNelsonの米国特許第6944322号の一部継続であり、それは今度は、2003年2月18日発行のAlan C.Nelsonの米国特許第6522775号の一部継続であり、それは今度は、2001年3月28日出願のAlan C.Nelsonの米国仮出願第60/279244号に関連し、両方とも「APPARATUS AND METHOD FOR IMAGING SMALL OBJECTS IN A FLOW STREAM USING OPTICAL TOMOGRAPHY」と題する。Meyer他の米国出願第11/203878号は、参照により本明細書に組み込まれる。米国特許第6944322号および米国特許第6522775号もまた、参照により本明細書に組み込まれる。
「毛細管」は、その一般的に認められた意味を有し、100ミクロン以下の内径を持つ微小毛細管および同等のものを含むことが意図される。そのような微小毛細管は、アリゾナ州のPolymicro Technologies、LLCによって製造されている。
「対象」は、個々の細胞または他の実体を意味する。1つまたは複数の対象は、試料を含んでもよい。
「疑似投影」は、光学系の自然な被写界深度よりも大きな広さの標本化体積を表す単一画像を含む。
「試料」は、個々の患者からの単一検査または処置から得られる完全な生成物(例えば、分析のために提出される痰、生検、または鼻腔用綿棒)を意味する。試料は、1つまたは複数の対象でできていてもよい。試料診断の結果は、症例診断の一部となる。
「標本」は、アリコートまたは試料のすべてまたは一部を含む、分析の準備が整っている完成した細胞準備品を意味する。
次に図8を参照すると、本発明の実施形態によって検討されるような、平行光線ビーム光源の例となる実施形態が、概略的に示される。この実施例では、平行光線ビーム光源は、光ファイバー110に結合されるレーザー105を含む。光ファイバー110は、個々のファイバーまたは光ファイバー束または同等のものを含んでもよい。動作時には、複数の光ファイバー110は、レーザー・ビーム107を受け取り、流管または毛細管を囲む光源位置へ平行放射ビーム36を配送する。このようにして、例えば、図5および図5Aに関して上で述べられたような複数光源システムに必要なレーザーの数は有利には、多数の光ファイバーを通って単一のレーザーから光ビームを送ることによって低減されてもよい。レンズおよび/またはミラーなどの光学素子は、光ファイバー110の入射または出射、または両方に組み込まれてもよい。
・それは、小さな円形点光源に近似してもよく、
・それは、レーザー、レーザー・ダイオードまたは発光ダイオードでもよく、
・それは、既知のスペクトル成分で光ってもよく、
・光源から放出される光子は、すべての光子線が平行である鉛筆ビームのような既知の幾何学形状のビームを形成してもよい。
各光源は、1つの投影角度に対してデータを創出する。例となるデータ収集幾何学配置では、その軸が対象収容管の中心軸であるらせんに沿って配列された複数の光源は、細胞がモジュールを通って移動するとき複数投影角度からのデータを創出する。センサ幾何学形状に応じて、投影がセンサにおいて重複しないように、いくつかの点光源は、同じ円周の周囲に角度分離を持たせて配置することが可能である可能性がある。光源の所望の数は、各平面再構成(x−y平面)または体積再構成内で必要とされる分解能の関数である。さらに、光源の波長は、様々なダイオードもしくは他のレーザーの使用によってまたは白色もしくは他の広帯域光源、例えば水銀もしくはキセノン・アーク・ランプの帯域通過フィルタリングによってのどちらかで選択可能である。点光源を創出するために用いることができるいくつかのオプションがあり、例えば、
・レーザーまたはレーザー・ダイオード、
・レーザー−ファイバー束の組合せ、
・レーザーまたは他の高強度光子源の前にある開口、
・ピンホールの入口および出口の両側で光子の表面プラズモン集束を利用する開口、
・小さな断面を持つ光ファイバー、
・光子源の前の短焦点距離レンズからの仮想点光源、
・リン光体表面上の点を照射する電子ビーム(CRTの形態)、および
・上記の様々な組合せである。
興味のある対象を撮像するための光トモグラフィ・システムは、本明細書で述べられるように本発明によってさらに検討される。光トモグラフィ・システムは、興味のある対象を複数の放射ビームで照射するための光源、対象物収容管を含み、ここで対象収容管から出現する放射を生成するために、それが複数の放射ビームによって照射されるように、興味のある対象は、対象収容管内に保持される。検出器アレイは、出現する放射を受け取り、撮像データを生成するために置かれる。興味のある対象を追跡するための手段は、撮像データを受け取り、それに応答するために結合される。
R−管中心から対象中心までの半径、
Θ−シータ、画像獲得の開始時に測定されるときの0度軸に対する対象の角度配置または角度誤差値(画像獲得は最も好ましくは、Θが0のときに開始され、それで画像獲得の開始時の任意の他の値は、角度誤差の表示である)、
を含む。
対象に対する焦点面Fは次のようにモデル化されてもよい。
式1
F=Ftube center−Rtruecos(Θ)sin(πPP/249)
ただしPPは画像数であり、PP=0、1、2、・・・、249。
この経路は、Rが真の値(Rtrue)であり、Θ=0のときの対象の真のおよび所望の経路に対応する。この軌道は、式2でのようにモデル化されてもよい。
式2
Ftrue=Ftube center−Rtruesin(πPP/249)
焦点誤差Ferrorは、式1および2を使用して差(F−Ftrue)のようにモデル化されてもよい。
式3
Ferror=Rtruesin(πPP/249)(1−cos(Θ))
焦点誤差の全体的な重大性を評価するための測定基準は、式3を全PPにわたって積分することによって見出されてもよい。
式4
FAllError=(2π×Rtrue/249)×(1−cos(Θ))
Rtrue/Rtube=Rratioと取ると、この式の第2の半分は、−30°≦Θ≦30°および0≦Rratio≦0.8にわたる等高線図として表わされる。これは、図15で表わされ、FAllErrorのRratioおよびΘへの依存性に対する感度を与える。この実施例の目的のために、249は、250疑似投影画像が入手される場合を表すことに留意されたい。もし異なる数の疑似投影画像が入手されるならば、定数249は、それに応じて調節されなければならない。
1.Rを推定する、および
2.対象中心がゼロ軸310を通過するときデータが取得されるように、画像獲得をトリガーするための手段を確立する
ための方法を提供することが、本発明の目的である。
1.しきい値:疑似投影PP0に対するしきい値は、箱領域320内の平均光レベルを求めることによって求められる。
2.全非ゼロ画素が接続される対象を分割するために、接続成分アルゴリズムが、しきい値化画像322に適用される。この処理は、ラベル付き画像324をもたらす。例えば特長323のような、異質の非接続特徴は、しきい値および接続成分アルゴリズムによって実質的に除去されたおよび/または暗くされた。
3.興味のある対象に対応する成分は、興味のある対象内の画素325を認識することに基づいて選択される。
4.対象の選択326は、次いで最初のグレー値画像に適用されるマスクをもたらす。対象中心は、反転グレー値に基づいて質量中心Cmを計算することによって求められる。
式5
X’m=R×cos(πPP(1+ζ)/249+π+Θ)+34.7+A+B×PP+C×PP2
式5において、モデルのパラメータは、表1で示されるような意味を有する。
表1のパラメータは、次の式に従って、すべての250疑似投影に対するXmとX’mとの間のRMS誤差を最小化することによって解かれてもよい。
誤差=√Σ(Xm−X’m)2/250
式6において、ボールドフェースXmは、すべてのPPにわたるXmのアンサンブルを表すために使用される。図17の場合に対しては、モデルに対して次のパラメータをもたらす探索が行われた。図18は、測定されたXmとモデル化されたX’mとの間の密接な対応を示す。
次に図19を参照すると、本発明の方法の焦点追跡ブロック図が示される。前節の分析は、適切な焦点追跡のためのパラメータが、Xmに対する測定値を式5のモデルと適合させることによって小さな誤差で推定されてもよいことを示す。本発明によって検討されるような光トモグラフィ・システムでは、所望の対象が視界に入ってくるとき、再構成のための画像獲得が開始されてもよいように、Rを求め、対象中心がゼロ軸を通過するときを推定することが必要である。対象が獲得のために認識された直後に、1組のk画像pp1〜ppkが収集され、ここでkは、3−D画像を再構成するために有用な画像の任意の数であってもよい。1組のk画像は、Rに対する初期推定とともに収集される。1組のk画像は、Rの真値を推定し、再構成のために使用されるべき疑似投影画像を収集するためのトリガー点を確立するために使用されるだろうから、対象が任意の特定の方法で置かれるときは、1組のk画像を収集する必要はない。X成分に対する質量中心値Xm1、Xm2、Xm3・・・Xmkは、疑似投影pp1〜ppk内の対象に対して求められ、各画像に対する収集時間t1、t2、t3、・・・、tkもまたステップ332で記録される。時間tkにおけるRおよびΘの値は、ステップ334で計算される。このデータおよびPP収集に対するクロック336に基づいて、Θの実時間値が、ステップ338で推定される。この値は、ステップ340で値0に近いことを検査される。Θが次のクロック周期で0であると予想されるとき、疑似投影の250組の獲得に対するトリガーは、ステップ350で有効にされる。
Claims (16)
- 光トモグラフィのためのシステムで対象(414)を追跡する方法であって、前記対象(414)は、回転中心(422)を有する管(410)内に収容され、前記対象(414)はセントロイド(415)を有し、そして、前記対象(414)は前記回転中心からオフセットされ、前記方法は、
前記対象(414)が回転させられている間に、拡張被写界深度を通って前記対象(414)を走査することによって画像データを取得するステップと、
前記回転中心からの前記対象(414)セントロイド(415)の距離値を計算するステップであって、前記距離値は、前記取得された画像データから計算されるステップと、
選択された位置(Pn)にある前記対象(414)の回転角度値(βn)を計算するステップとを含み、前記回転角度値(βn)は、前記取得された画像データから計算されており、前記方法はさらに、
前記対象(414)の広さを決定するステップと、
結果として得られる疑似投影画像における画像分解能を高めるように、走査されている前記拡張被写界深度を前記対象(414)の前記広さ以下に制限するステップとを含む方法。 - 画像データを取得する前記ステップが、焦点面(Fn)に対物レンズ(420)の焦点を合わせることを含み、前記方法が、前記距離値および1組の回転角度値(βn)を、前記焦点面が前記対象(414)の中心を追跡するように前記対物レンズ(420)の平行移動を制御するための制御信号に変換するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記対象(414)の広さを決定する前記ステップが、次の関係式に従って計算され、
object_extentは、前記対象(414)の前記広さを表し、
extentθは、選択された回転角θにおいて取られる前記対象(414)広さの第1の測定を表し、
extentθ+90°は、選択された回転角θ+90°において取られる前記対象(414)広さの第2の測定を表す、請求項2に記載の方法。 - 前記対物レンズ(420)が、前記対象(414)の平行移動するセントロイド(415)に従って正弦波的に移動する、請求項2に記載の方法。
- 前記管(410)が回転周期を有し、前記距離値および1組の角度値が、対物レンズ(420)位置のための正弦波関数を計算するために使用され、前記正弦波関数が、前記回転周期に比例する波長を有する、請求項1に記載の方法。
- 前記正弦波関数が、疑似投影を形成するために前記対物レンズ(420)の走査を制御するために追加の関数によって変調される、請求項5に記載の方法。
- 回転させられている前記対象(414)の投影画像を創出するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 1組の画像を生成するために1組の視角で前記対象(414)の少なくとも1つの特徴を走査するステップと、
前記1組の画像から、少なくとも1つの特徴が管軸から最大距離で測定されるところに存在する0度視角を決定するステップと、
前記決定された0度視角に対して前記疑似投影システムを較正するステップとをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記管(410)が管軸を含み、
1組の画像を生成するために1組の視角で前記対象(414)の少なくとも1つの特徴を走査するステップと、
前記1組の画像から、少なくとも1つの特徴が前記管(410)の中間の第1の画像内に現れるところで、前記対物レンズ(420)に最も近い90度位置(P90)を決定するステップと、
0度位置に戻るために前記管(410)を90度回転させることに対応する第2の画像を選択するステップと、
半径を決定するために前記管軸からの対象距離に対して前記第2の画像を測定するステップと、
前記決定された0度位置に対して前記疑似投影システムを較正するステップとをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 1組の画像を生成するために1組の視角で前記対象(414)の少なくとも1つの特徴を走査するステップと、
前記1組の画像から、前記1組の視角に対応する前記画像に対して管軸からの前記少なくとも1つの特徴の距離を測定するステップと、
前記1組の視角の少なくとも1つに対して半径および角度を求めるために余弦関数フィットを計算するステップとをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記管(410)内に最初に置かれるとき、画像を取得し、前記対象(414)の少なくとも1つの特徴を探すステップと、
前記少なくとも1つの特徴から管軸までの距離を測定するステップと、
前記少なくとも1つの特徴に対して深さを求めるために対物レンズ(420)をその光軸に沿って走査するステップと、
前記少なくとも1つの特徴の半径および角度を前記距離および深さ測定から決定するステップとをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記管(410)が内管壁(412)を有し、
初期焦点面(F0)が、その中心軸を通って前記管(410)を横切る平面上に置かれるところの断面において、前記内管壁(412)に焦点を合わせることによって焦点を前記初期焦点面(F0)に設定するステップと、
セントロイド(415)を有する興味のある構造が、前記内管壁(412)の1つに近接して現れるまで、前記管(410)を回転させるステップと、
前記興味のある構造の前記セントロイド(415)に印を付けるステップと、
前記回転中心までの前記セントロイド(415)の距離(a)を測定するステップと、
式Fn=F0+(a sin(βn))に従って、回転角(β)当たりの焦点面の変化(hn)を計算するステップと、
前記興味のある構造の前記平行移動するセントロイド(415)に従って、前記対物レンズを正弦波関数で移動させる対物レンズ・ポジショナー(421)に送られる信号にhnを変換するステップとをさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 前記管(410)が回転周期を有し、前記距離値および1組の角度値が、対物レンズ(420)位置のための正弦波関数を計算するために使用され、前記正弦波関数が、前記回転周期に比例する波長を有し、前記正弦波関数が、全視野にわたる最良焦点の軸方向シフトを修正するために事前補償値で事前に変形される、請求項1に記載の方法。
- 前記管(410)が回転周期を有し、前記距離値および1組の角度値が、対物レンズ(420)位置のための正弦波関数を計算するために使用され、前記正弦波関数が、前記回転周期に比例する波長を有し、前記正弦波関数を調節するための事前補償ルックアップ・テーブルが、視野の異なる領域に置かれた孤立微小球を使用して較正される、請求項1に記載の方法。
- 前記管(410)が回転周期を有し、前記距離値および1組の角度値が、対物レンズ(420)位置のための正弦波関数を計算するために使用され、前記正弦波関数が、前記回転周期に比例する波長を有し、前記正弦波関数を調節するための事前補償が、前記管(410)が回転している間に実施される、請求項1に記載の方法。
- 前記管(410)が回転周期を有し、前記距離値および1組の角度値が、対物レンズ(420)位置のための正弦波関数を計算するために使用され、前記正弦波関数が、前記回転周期に比例する波長を有し、前記正弦波関数が、前記管(410)の回転中のゲルの厚さ変化に対する事前補償である、請求項1に記載の方法。
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