JP5395669B2 - 血液試料中の第xa因子インヒビターの電気化学測定のための方法および装置 - Google Patents
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Description
本発明は、血液試料中の、第Xa因子インヒビター、特にヘパリンおよびヘパリン誘導体ならびに直接の第Xa因子インヒビターの電気化学測定のための方法に関する。
特にヘパリンをも含む抗凝固剤は、血液停止障害(凝固系の障害)の予防および治療の臨床実施でよく使用される。ヘパリンおよびヘパリン誘導体は血栓塞栓症の治療および予防に特に使用される。これらは、足静脈血栓、肺血栓の予防および治療、ならびに不安定な狭心症および急性心筋梗塞の治療に非常に有効である。また、これらは、手術中、特に心臓学手順(バイパス)および輸血によく使用される。
1. FXa + [ヘパリン/アンチトロンビンIII] → [FXa/ヘパリン/ATIII]複合体+残存するFXa
2. a) 残存するFXaがFXa-特異的基質の発色残基を切断する(発色試験)
b) 残存するFXaがプロトロンビンを切断してトロンビンを形成する(トロンビンが誘導したフィブリン架橋を介した凝固試験)
本発明の目的は、先行技術の不都合を回避する、血液試料中の第Xa因子インヒビターの測定方法および測定デバイスを提供することである。
本発明は、独立した特許請求項に記載されるこれらの目的を達成するための、血液試料中の第Xa因子インヒビターを測定するための方法、電気化学試験エレメントおよび試験エレメント分析系を提供する。好ましい態様は従属した請求項に記載されている。
本発明の試験エレメントの可能性のある配置およびその製造を以下の実施例に記載する。
である。
第Xa因子インヒビター測定を実施するために、適量、例えば1〜1000μl、好ましくは約10μlの分析対象の血液を、試験エレメント上に配置される試薬コンパートメントおよび電極と接触するように、例えば実施例1に従って製造可能な本発明の試験エレメントに供する。このことは、好ましくは、試験エレメント上のキャピラリーチャンネルが存在することおよび試験エレメント上でこのキャピラリーチャンネル中に試薬コンパートメントおよび電極を適切に配置することにより達成することができる。好ましい態様において、第Xa因子インヒビター測定に必要な試料液体、試験エレメントおよび/または他のデバイスを、特定の温度、特に約37℃に維持し得る。電気化学的な検出反応を検出するために、試験エレメントは適切な測定デバイス、例えば、特に電流の時間経過を測定および保存し得る電流測定システムに連結される。
図2は、試験エレメント上にアクチベーター試薬および検出試薬/第X因子試薬の組合せの試薬ラインを様々に配置した、電気化学的なトロンビン測定の結果を示す。それぞれの場合において、測定された電流強度の時間経過を、血液試料を供して以降の時間t(秒)をx軸にプロットし、それぞれの時点で測定された電流強度I(ナノアンペア)をy軸にプロットして示す。本実施例において、検出試薬/第X因子試薬の組合せの試薬ラインは、0.8mlの還元型Chromozym THおよび38.1μl第X因子(American Diagnosticsの第X因子;2U/mlの第Xa因子に相当)を含み、アクチベーター試薬の試薬ラインは80μlのラッセルクサリヘビ毒(Pentapharm Ltd.のラッセルクサリヘビ毒(RVV-X))および0.04%のリン脂質(PHL)を含む。
曲線A:まず、検出試薬/第X因子試薬の組合せの試薬ラインを適合して、次いでアクチベーター試薬の試薬ラインをこのラインの上に適合した。
曲線B:まず、検出試薬/第X因子試薬の組合せの試薬ラインを適合して、次いでアクチベーター試薬の試薬ラインをこのラインの上に適合したが、アクチベーター試薬の試薬ラインの適合をずらして、その少なくとも一部を、試料の流れの方向において検出試薬/第X因子試薬の組合せの試薬ラインの前に配置し、少なくとも一部をこのラインに重ねた。
Claims (17)
- a) 分析対象の血液試料を、トロンビンにより切断され得、かつカルボキシル末端を介して電気発生物質とアミド結合するペプチド残基からなる少なくとも1つのトロンビン基質を含む検出試薬、ならびに既知の量の第X因子試薬および第X因子の第Xa因子への転換を誘導するアクチベーター試薬と接触させること、ここで、第X因子試薬は、アクチベーター試薬の該試料への添加と共通する工程で、該試料に添加される、
b) 第Xa因子媒介性トロンビン活性化によりトロンビン基質から切断される電気発生物質の量もしくは活性、および/またはその時間経過を、電気化学的方法を使用した測定シグナルとして測定すること、ならびに
c) 分析対象の血液試料中の第Xa因子インヒビターの量またはそれに相関する測定された量を、この測定シグナルに基づいて測定すること
を特徴とする、血液試料中の第Xa因子インヒビターを測定するための方法。 - 該それに相関する測定された量が、分析対象の血液試料中の第Xa因子インヒビターの量に相関する凝固時間である、請求項1記載の方法。
- 血漿凝固の外因性経路に関連するアクチベーターもしくは複合体、または血漿凝固の内因性経路に関連するアクチベーターもしくは複合体、または第X因子の第Xa因子への転換を誘導する物質を、アクチベーター試薬として使用することを特徴とする、請求項1または2記載の方法。
- 該血漿凝固の外因性経路に関連するアクチベーターもしくは複合体が、組織因子および/または第VIIa因子である、請求項3記載の方法。
- 該血漿凝固の内因性経路に関連するアクチベーターもしくは複合体が、第XIIa因子である、請求項3記載の方法。
- 第X因子試薬とアクチベーター試薬が乾燥状態で一緒に存在し、第X因子が該試料と接触するまで第Xa因子に転換されないことを特徴とする、請求項1〜5いずれか記載の方法。
- 第X因子試薬、アクチベーター試薬および検出試薬が乾燥状態で一緒に存在し、第X因子が該試料と接触するまで第Xa因子に転換されないことを特徴とする、請求項6記載の方法。
- 第Xa因子インヒビターが、ヘパリン、間接的な選択性第Xa因子インヒビターまたは直接的な第Xa因子インヒビターであることを特徴とする、請求項1〜7いずれか記載の方法。
- 該ヘパリンが、分画ヘパリンまたは低分子量ヘパリンである、請求項8記載の方法。
- 第Xa因子インヒビターを測定するための乾燥化学系の電気化学的センサーを有する試験エレメントであって、該試験エレメントは、不活性担体上に、少なくとも2つの電極およびトロンビンにより切断され得、かつカルボキシル末端を介して電気発生物質にアミド結合するペプチド残基からなる少なくとも1つのトロンビン基質を含む検出試薬、ならびに少なくとも特定量の第X因子試薬およびアクチベーター試薬を有し、第X因子が試料と接触するまで第Xa因子への転換が生じないように、第X因子試薬が、アクチベーター試薬の試料への添加と共通する工程で、該試料に添加される、試験エレメント。
- 該第Xa因子インヒビターが、未分画ヘパリン、分画ヘパリンまたは低分子量ヘパリン、間接的な選択性第Xa因子インヒビターおよび直接的な第Xa因子インヒビターからなる群より選択される、請求項10記載の試験エレメント。
- アクチベーター試薬が、第X因子試薬と少なくとも部分的に、空間的に離れて試験エレメント上に存在することを特徴とする、請求項10記載の試験エレメント。
- 該アクチベーター試薬が、試料の流れの方向において第X因子試薬の少なくとも部分的に前に配置される、請求項12記載の試験エレメント。
- 検出試薬が、アクチベーター試薬または第X因子試薬と一緒に試験エレメント上に存在することを特徴とする、請求項12記載の試験エレメント。
- 該試験エレメントが、乾燥化学試薬として、第X因子試薬および第X因子の第Xa因子への転換を誘導するアクチベーター試薬を含み、第X因子が試料と接触するまで第Xa因子への転換が生じないように、アクチベーター試薬が、第X因子試薬と一緒に試験エレメント上に存在することを特徴とする、請求項10記載の試験エレメント。
- 該アクチベーター試薬が、第X因子試薬および検出試薬と一緒に試験エレメント上に存在することをさらに特徴とする、請求項15記載の試験エレメント。
- 電流または電圧を測定するための少なくとも1つのデバイス、および
請求項11〜15いずれか記載の試験エレメント
を含む、電気化学的試験エレメント分析システム。
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