JP5214085B2 - 細胞懸濁液の作製方法及び細胞懸濁液 - Google Patents
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Description
本発明は、独自の細胞懸濁液と、作製および適用が迅速で、効率的で、簡単であるその作製方法とに関する。本発明はまた、独自の細胞懸濁液を使用して患者を治療する方法と、その作製方法に使用するのに好適な装置とにも関する。記載されているが本発明を実施するために必須ではない装置の用途は、CEAなどの従来の移植技術の用途に関連する複雑さをかなり軽減することが見出されている。
(a)組織試料中の細胞層を解離することができる少なくとも1つの物理的および/または化学的解離手段に、患者に移植するのに好適な細胞を含む組織試料を付するステップと、
(b)ステップ(a)において使用する組織解離手段の存在から組織試料を取り出して、栄養液の存在下において組織試料から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで、細胞の生存性を維持することができ、(iii)移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適であるステップと、
(c)ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップと
を含む方法が提供される。
(a)上記方法により細胞懸濁液を作製するステップと、
(b)移植領域に比較的均一に分布するような細胞懸濁液の拡散を容易にする方法で、細胞移植を必要としている患者の領域に直接懸濁液を投与するステップとを含む方法が提供される。
(a)患者に移植するのに好適な細胞を含む組織試料を、試料中の粘着性の組織層片を解離するのに好適な酵素に付するステップと、
(b)ステップ(a)において使用する酵素液から試料を取り出して、栄養液の存在下において組織試料から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで、細胞の生存性を維持することができ、(iii)組織移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適であるステップと、
(c)ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップと
により作製される移植に好適な細胞懸濁液の、移植術を必要とする組織障害を治療するのに好適な医薬品を作製するための用途からなる。
(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持することができる加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離することができるフィルター手段を備えるフィルター陥凹部分と
を備える装置が提供される。
〈一般〉
本明細書に記載されている本発明は、具体的に記載されているもの以外の変更および改良を受けることができると当業者は考えるだろう。本発明はこのような変更および改良を全て含むと理解するべきである。本発明はまた、本明細書に個別または集合的に言及されまたは示されているステップ、特徴、組成物および化合物の全て並びにステップまたは特徴の任意の2つ以上の任意および全ての組み合わせを含む。
上記を考慮すると、本発明は、患者への移植に好適な生組織の移植可能な細胞懸濁液を作製に好適である独自の方法および/または装置を提供する。本発明の方法を適用する際および/または本発明の装置を使用する際には、ドナー組織を採取し、組織解離手段に付し、患者への移植に好適な細胞を回収し、レシピエントの移植部位への速やかな分散に好適である溶液に分散する。
(i)(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持することができる少なくとも1つの加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離することができるフィルター手段を備える少なくとも1つのフィルター陥凹部分と、
(c)栄養液を貯蔵するための少なくとも1つの流体保持ウェルと
を備える第1の部材と、
(ii)前記流体保持ウェルに組織試料および栄養液を保持することができる容器を形成する第2の部材と
を備え、組織操作中に前記第2の部材を配置することができる座部を前記第1の部材が提供する。
本発明のさらに別の特徴は、以下の限定するものではない実施例にさらに詳細に記載されている。しかし、この詳細な説明は、本発明を例示する目的にのみ加えられていることが理解されるべきである。上記に記載されている本発明の広範な説明を制限するものといかなる意味においても理解されるべきではない。
皮膚移植の成功率を最適にするために、創傷をきれいにし、適当な深さであることを評価する。さらに、止血を確立し、周囲の蜂巣炎または感染の徴候について創傷をチェックする。領域を調製する技法には、シャープな切開、削皮術またはレーザーリサーフェイシングが挙げられる。
ドナー部位は、レシピエント部位に適当に適合するように選択した。ドナー部位の皮膚の下部の皮下組織に局所麻酔剤およびアドレナリンを浸潤させた。これにより、ドナー部位は固定され、薄い分層植皮生検を採取する助けとなった。生検の寸法は、被覆するレシピエント部位の表面領域のサイズに決定された。
創傷の治療は、以下の実施例2にさらに詳細に説明されている、Re−Cell(商標)迅速技術による細胞採取装置を使用して実施した。装置は、創傷治療に必要な器具、溶液、酵素および包帯の全てを有した。
Claims (13)
- 患者に皮膚を移植するための細胞懸濁液を作製する方法であって、
(a)組織層間の凝集結合を弱めるのに十分な時間をかけて皮膚組織試料中の細胞層を解離する少なくとも1つの物理的および/または化学的解離手段に、患者に移植する細胞を含む皮膚組織試料を付するステップであって、前記皮膚組織試料が、真皮、表皮、それらの間の真皮−表皮接合部を含む、ステップと、
(b)該ステップ(a)で使用する解離手段から皮膚組織試料を取り出して、栄養液の存在下において前記真皮及び表皮から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、前記栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで細胞の生存性を維持することができ、(iii)移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適である、ステップと、
(c)該ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップであって、前記細胞懸濁液が、ケラチノサイトの基底細胞、メラニン細胞及び繊維芽細胞を含む、ステップと、
を含む細胞懸濁液の作製方法であって、
細胞をペレットにして再懸濁するステップを含まない方法。 - 試料中の粘着性の組織層片を解離するのに好適な酵素がトリプシンまたはトリプシン様酵素である請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
- 前記酵素が、トリプシン、トリプシン−EDTA、ディスパース、コラゲナーゼ、サーモリシン、プロナーゼ、ヒアルロニダーゼ、パンクレアチン、エラスターゼおよびパパインからなる群から選択される請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
- 前記ステップ(a)の組織層間の凝集結合を弱めるための時間が、5分から60分である請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
- 前記ステップ(a)の組織層間の凝集結合を弱めるための時間が、15分から20分である請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
- 前記栄養液がハートマン液である請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法。
- 請求項1に記載の細胞懸濁液の作製方法により作製される患者の皮膚に移植するための細胞懸濁液であって、前記細胞懸濁液が、ケラチノサイトの基底細胞、メラニン細胞及び繊維芽細胞を含む、患者の皮膚に移植するための細胞懸濁液。
- 自家細胞から作製される、請求項7に記載の細胞懸濁液。
- (a)患者に移植するのに好適な細胞を含む皮膚組織試料を、試料中の粘着性の組織層片を解離するのに好適な酵素に付するステップであって、前記皮膚組織試料が、真皮、表皮、それらの間の真皮−表皮接合部を含む、ステップと、
(b)該ステップ(a)において使用する酵素液から組織試料を取り出して、栄養液の存在下において前記真皮及び表皮から、患者に移植するのに好適な細胞を回収するステップであって、栄養液は、(i)異種血清を含有せず、(ii)患者に適用するまで、細胞の生存性を維持することができ、(iii)移植術を受ける患者の領域への直接適用に好適である、ステップと
(c)該ステップ(b)により作製した細胞懸濁液をろ過して、大きい細胞凝集塊を除去するステップであって、前記細胞懸濁液が、ケラチノサイトの基底細胞、メラニン細胞及び繊維芽細胞を含む、ステップと
により作製される移植のための細胞懸濁液の使用であって、移植術を必要とする皮膚組織障害の治療のための治療用製剤を作製するための使用。 - 前記栄養液がハートマン液である請求項9に記載の使用。
- 請求項1に記載の患者の皮膚に移植するための細胞懸濁液を作製する方法に用いる装置であって、
(a)酵素液を必要な温度に加熱するのに好適であり、その液を好適な期間にわたって望ましい温度に維持する加熱手段と、
(b)細胞懸濁液から大きい細胞凝集塊を分離するフィルター手段を有するフィルター陥凹部分と、
を備えている細胞懸濁液作製装置。 - 組織試料および栄養液を保持する容器をさらに備えている、請求項11に記載の細胞懸濁液作製装置。
- 流体を貯蔵するための1つ以上の流体保持ウェルを備えている請求項11に記載の細胞懸濁液作製装置。
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