JP5187802B2

JP5187802B2 - 緩下剤及びこれを含む食品

Info

Publication number: JP5187802B2
Application number: JP2006213784A
Authority: JP
Inventors: 宗和飯沼; 英彰原; 雅義大山
Original assignee: API Co Ltd; Nagoya Industrial Science Research Institute
Current assignee: API Co Ltd; Nagoya Industrial Science Research Institute
Priority date: 2006-01-18
Filing date: 2006-08-04
Publication date: 2013-04-24
Anticipated expiration: 2026-08-04
Also published as: WO2007083594A1; JP2007217398A

Description

本発明は、穏やかな瀉下作用を有し、副作用の少ない植物由来の緩下剤及びこれを含む食品に関する。

便秘は、一般的に排便が順調に行われず不快に感じる状態のことをいい、高度のストレス社会の今日、ストレスから生じる過敏性腸症により便秘になる人の数は増加傾向にある。また、便意を我慢することの多い女性は、慢性便秘に悩む人が多い。さらに、高齢者は、腸の蠕動運動の低下や筋力の低下により慢性的な便秘になることが多く、特に高齢化社会の到来は便秘に悩まされる人の大幅な増加を招くことが予想され、老人介護の上でも大きな問題となる可能性がある。従来から不快な便秘を予防、解消する方法は、食物繊維の充分な摂取、水分の充分な補給、腹部のマッサージなどいろいろあるが、下剤を服用することが最も一般的で確実な方法として実行されている。

従来、様々な作用機序を有する多種の下剤が使用されている。これらの中で、植物に由来するセンナ（特許文献１参照）やダイオウは、作用が比較的穏やかで緩下剤とも呼ばれ、主に常習便秘に汎用されている。

特開平１１−１８０８８４号公報

しかしながら、センナやダイオウのような緩下剤は、作用は比較的穏やかであるものの、日本薬局方に収載されていることから分かるように常用ができるほど穏やかな作用ではなく、また、下剤の副作用である下痢症状を招くことがあるので、食品として毎日のように常用することは困難であった。

本発明は、かかる事情に鑑みなされたもので、瀉下作用が穏やかで、下痢症状が少ない緩下剤及びこれを含む食品を提供することを課題とする。

本発明の緩下剤は、ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシド（genkwanin5-O-β-primeveroside）を有効成分として含むことを特徴とする緩下剤を要旨とする。

また、ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシド（genkwanin5-O-β-primeveroside）が含まれる沈香葉エキスを有効成分として含むことを特徴とする緩下剤を要旨とする。

また、沈香葉を有効成分として含むことを特徴とする緩下剤を要旨とする。

また、ゲンクワニン５−Ｏ−β―プリメベロシドが含まれる沈香葉エキスを含む食品であって、緩下作用に有効量の濃縮した沈香葉エキスを含む、食品を要旨とする。さらに、沈香葉の抽出物から単離及び精製したゲンクワニン５−Ｏ−β―プリメベロシドを含む、食品を要旨とする。上記に記載のいずれかの緩下剤を含む食品を要旨とする。食品は、サプリメントでもよい。

本発明の緩下剤又は食品は、穏やかな瀉下作用を有し、下痢となる副作用も少ないので、常用により便秘の予防、改善を円滑に行うことができ、ますます増加が予想される便秘に悩む人に大きな福音となる。

本発明の緩下剤の有効成分であるゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシドとイリフロフェノン２−Ｏ−α−ラムノシドは、それぞれ化１と化２で示すように、前者がフラボノイド配糖体で、後者がベンゾフェノン配糖体である。これらの配糖体は、植物成分としてこれらを含む沈香葉などの植物の抽出物を分画し単離・精製することで得ることができる
る。分離、精製は、クロマトグラフィーなど、樹脂、膜、晶析等の一般的な分離技術を用いて行うことができる。また、化学合成により得ることも、酵素を用いてアグリコンのフラボノイド又はベンゾフェノンと糖をグリコシド結合させ配糖化することにより得ることもできる。

沈香葉は、沈香（学名；Aquilaria sinensis)の葉部をいう。沈香は、タイ、ベトナム、カンボジア、マレーシアなどの東南アジアの密林で生育するジンチョウゲ科アキラリア属の植物である。沈香の樹脂は、「沈香」と呼ばれ天然香料として線香などに利用されているが、葉部は利用されていないので、沈香葉の入手は容易である。

緩下剤の他の有効成分である沈香葉エキスは、ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシドやイリフロフェノン２−Ｏ−α−ラムノシドを含む。沈香葉を抽出してエキスを得る方法は、抽出溶媒を用いる公知の方法で行うことができる。沈香葉に加えられる抽出溶媒は、少なくともゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシドを抽出エキスの成分として抽出できる限り特に限定されないが、例えば、アセトン、ヘキサン、エーテル、酢酸エチル、ブタノール、プロパノール、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、１，３ブチレングリコール等の有機溶媒、水、有機溶媒の２種以上の混合溶媒、水と有機溶媒の混合溶媒などを用いることができる。また、抽出溶媒は、水の場合、熱水が好ましく、他の抽出溶媒の場合、通常、室温で抽出する。

沈香葉エキスは、抽出された溶液のまま用いても良いが、必要に応じて濾過等の処理をし、濃縮、粉末化したものを用いることもできる。

本発明の緩下剤として使用する際の形態は特に限定されず、カプセル状、粉末、粒状、タブレット状、液状などの形態とできる。沈香葉は、乾燥葉をティーパックなどにし、健康茶として飲用することもできる。また、本発明の緩下剤は、医薬としてではなく、食品として用いることもできる。食品として用いる場合、便秘を予防、改善する保健機能食品やあるいは健康食品のようなサプリメントとして供することも可能である。サプリメントとして使用する場合も使用する際の形態は特に限定されず、カプセル状、粉末、粒状、タブレット状、液状などの形態とできる。製剤に当たって、薬学的に許容される賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、コーティング剤のような担体を添加でき、また、着色料、香料、防腐剤などを添加できる。

食品は、例えば飴、クッキー、チューインガム、ビスケットのような固形物に含ませ、あるいは清涼飲料水、牛乳、ヨーグルト、シロップのような液状物に含ませ、さらにはゼリーのような半固形物に含ませ、用いてもよい。食品とする場合、クエン酸、乳酸、カゼインなど、通常食品に使用される添加剤を配合することができる。

本発明の緩下剤の服用量は、服用者の年齢、性別、体重、便秘の症状などを考慮して適宜増減できるが、0.1g〜10g/日が好ましい。

次いで、本発明を実施例を挙げて説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

〔実施例１〕（沈香葉エキスの調製）
乾燥沈香葉1.5kgをアセトン8Lで2日間常温抽出を行い (×4)、その抽出液を減圧下濃縮することにより、68gのアセトン抽出エキスを得た (収率 4.53%)。残渣を同条件下、 MeOH（MeOHはメチルアルコール、以下、同様）8Lで2日間常温抽出を行い (×6)、150gの MeOH抽出エキスを得た (収率 10.0%)。調製した沈香葉エキスのうち2gを以下の瀉下作用の検討に用いた。

〔実施例２〕（沈香葉エキスの瀉下作用の検討）
実施例１で得られた沈香葉エキスの瀉下作用を検討した。沈香葉のアセトン抽出エキスとMeOH抽出エキスのそれぞれ100、300及び1000mg/kgの用量を蒸留水で充分に溶解又は懸濁して調整し、0.1ml / 10g 宛ddY雄性マウスに食道を介して直接消化管に強制経口投与法により投与した。瀉下活性の検討を行うにあたって、被験体の生後7〜10週齢のddY雄性マウスは10日間前後、飼育環境化に慣らした上で実験に用いた。投与後8時間までの間、2時間ごとに、マウスの糞の個数及び重量を測定し、瀉下作用を評価した。この間、摂食と摂水を遮断して実験を行った。各時間の各項目毎に有意差検定（t検定対応なし）を行い、有意差の認められた項目において瀉下作用有りと評価した。瀉下作用の評価結果を表１と表２に示した。なお、対照は蒸留水で、以下の各瀉下作用の検討においても同様である。

表１と表２より、アセトン抽出エキス投与群の100, 300 mg/kg投与群においては、有意な瀉下作用は認められなかったが、1000mg/kg投与群で、投与後2〜4時間の糞の個数と重量の項目で瀉下作用が認められた。また、投与後6〜8時間の糞の個数と重量の両項目で瀉下作用が認められた。一方、MeOH抽出エキス投与群では瀉下作用は認められなかった。

以上より、沈香葉のアセトン抽出エキスは、瀉下作用を有することが確認された。また、アセトン抽出エキスの瀉下作用は、投与後2〜4時間と6〜8時間に認められ、早期型の作用であることが確認された。

センナ葉の50%EtOH抽出エキスを用い陽性対照試験を行った。センナ葉の50%抽出エキスは、センナの乾燥葉0.5kgを50%EtOH（EtOH:H₂O=50:50)3Lで1日間常温抽出を行い、その抽出液を減圧下濃縮することにより32.4gを得た（収率 6.84%)。センナ葉の50%抽出エキスの30、100、 300及び1000mg/kg の用量を蒸留水に充分に溶解し、0.1ml / 10g 宛ddY雄性マウスに食道を介して直接消化管に強制経口投与法により投与した。瀉下作用の評価を沈香葉エキスと同様の方法で行った。その結果を表３と表４に示した。

表３と表４より、センナ葉の50%抽出エキスは、300mg/kg以上の投与群で瀉下作用が認められた。300mg/kg 投与群において２〜４時間後の両項目と６〜８時間後の両項目で瀉下作用が認められた。しかし、1000mg/kg 投与群は、２〜４時間後の両項目では瀉下作用が認められたが、６〜８時間後の両項目では認められなかった。1000mg/kg投与群で、投与後２〜４時間において、後記のようにそのすべてに下痢症状が観察されたことから（表５参照）、1000mg/kg投与群は過剰投与となり、副作用の下痢を誘発し、以降の正常な瀉下作用が阻害されたものと推測される。以上より、センナは投与後２〜４時間及び６〜８時間後と早期型の瀉下作用を示し、その最少有効用量は300 mg/kgであることが確認された。

また、沈香葉エキスとセンナ葉エキスについて、瀉下作用の評価と同時に下痢症状の有無についても観察を行った。表５にその結果を示した。

表５より、センナ葉エキスは、投与後２〜４時間、４〜６時間において、300mg/kgと1000mg/kg投与群に下痢症状が観察された（300mg/kg投与群は６〜８時間も下痢症状有り）。他方、沈香葉エキスのいずれにも下痢症状が観察されなかった。

以上より、沈香葉エキスは、投与後２〜４時間と６〜８時間後の早期型の瀉下作用を有することが認められたが、陽性対照のセンナ葉エキスでも同様に早期型の瀉下作用が認められた。よって沈香葉エキスは、大黄・センナに代わる代替植物由来瀉下剤になり得る可能性が示唆された。また、沈香葉エキスは、大黄・センナで認められた下痢などの副作用が認められなかったことより、その作用は大黄・センナに比較して緩和であるが、副作
用の少ない有用な瀉下剤になり得る可能性が示唆された。

〔実施例３〕（沈香葉エキスの有効成分の単離・精製）
実施例２で瀉下作用が認められた沈香葉エキスの主要活性物質を特定するため、実施例１で得たアセトン抽出エキス及びMeOH抽出エキスの分画・単離操作を行い、主要活性物質の特定を行った。この際、各画分の成分分析には、薄層クロマトグラフィー（TLC)(Kiesel-gel60F₂₅₄、RP-18F₂₅₄₈(Merck社)を使用）を用いた。

１）粗分画
アセトン抽出エキス68gをCHCl₃:MeOH=1：1、2500mlに充分溶解し、可溶部を用いた。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Kiesel-gel60、70-230mesh、Merck社）(CHCl₃-MeOH= 10:1-1:1,グラディエント)に付し、５のフラクションの粗分画を行った。
また、MeOH抽出エキス150gを用いて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Kiesel-gel 60、70-230 mesh、Merk社）（CHCl₃：MeOH=10：1-1：1, MeOH )に付し、６のフラクションに粗分画を行った。粗分画の過程は、図１に示した。

２）主要化合物の単離
主要化合物４種の単離過程を以下に記載する。なお、分離及び精製過程は、図２にフローチャートとして示した。

（１）化合物１の単離
上記１）粗分画のアセトン抽出エキスの可溶部を取り除いた残渣の析出物を吸引ろ過し精製した結果、マンギフェリン（mangiferin）（以下、「化合物１」ともいう、 (2.45g)）（図２参照）を単離した。

（２）化合物２の単離
アセトン抽出エキスの粗フラクション3〔以降Fr.3 (5：1)のように略記〕を用い、セファデックスLH-20（Sephadex LH-20、ファルマシアファインケミカルズＡＢ社）カラムクロマトグラフィーに付し、MeOHで溶出させることで精製した。結果、イリフロフェノン２−Ｏ−α−ラムノシド（iriflophenone 2-O-α-rhamnoside ）（以下、「化合物２」ともいう、 (1.5g)）（図２参照）を単離した。

（３）化合物４の単離
アセトン抽出エキスの粗フラクションFr.4 (3：1)を用い、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Kiesel-gel60、70-230mesh、Merck社）に付し、Benzene:MeOH:H₂O 混合溶媒にて溶出させた。Benzene:MeOH:H₂O = 8:2:1の画分を混合濃縮した後、これをMeOH-H₂O（90:10) 混合溶媒にて結晶化し、得られた結晶を吸引ろ過にて精製した。結果、ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシド（genkwanin5-O-β-primeveroside）（以下、「化合物４」ともいう、 (0.63g)）（図２参照）を単離した。

（４）化合物７の単離
MeOH抽出エキスの粗フラクションFr.6 (MeOH)を用い、ダイヤイオンHP-20(Diaion HP-20、Nippon Rensui Co.)カラムクロマトグラフィーに付した。H₂O、H₂O-EtOH= 1:1、EtOHで順次溶出し、EtOHフラクションを濃縮した。得られたEtOHフラクションを用い、DMS（Fuji Silysia Chemical Chromatorex社）カラムクロマトグラフィーに付し、MeOH-H₂O混合溶媒にて溶出し、得られた（MeOH-H₂O=20:80）画分を濃縮した。これをセファデックスLH-20（Sephadex LH-20)カラムクロマトグラフィーに付し、MeOH-H₂O（50:50）混合溶媒にて溶出し、同様に再度MeOH-H₂O（90:10）混合溶液にて溶出し、精製した。結果、イリフロフェノン3,5−Ｏ−β−ジグルコシド（iriflophenone 3,5-O-β-diglucoside）（以下、「化合物７」ともいう、 (0.72g)）（図２参照）を単離した。

上記の化合物１、化合物２、化合物４、化合物７の４種の構造及びNMR、MSは順次表１４〜表１７に示した。

〔実施例４〕（単離された各化合物の瀉下作用の検討）
実施例３で単離された４種の各化合物の瀉下作用を評価し、主要活性物質の特定を行った。各化合物は、それぞれ1000mg/kgの用量で実施例２と同様に投与後8時間までの間、2時間ごとに、マウスの糞の個数と重量を測定し、瀉下作用を評価した。結果は、表６と表７に示した。

沈香葉のアセトン抽出エキスの主要化合物のうち、化合物２投与群と化合物４投与群において瀉下作用が認められた。なお、化合物１投与群とMeOH抽出エキスで単離された主要な化合物７投与群では瀉下作用は認められなかった。また、化合物２投与群では、投与後6〜8時間において瀉下作用が認められた。

化合物２は、1000mg/kg投与群で瀉下作用が認められたので、100mg/kg、300mg/kg、1000mg/kgの用量を投与して用量依存性試験を行った。結果は、表８及び表９に示した。

表８及び表９より、化合物２は、1000mg/kg投与群のみで投与後６〜８時間において瀉下作用が認められた。表には示さないが、瀉下作用は投与後8〜24時間後においても認められた。以上より、化合物２は遅発型の瀉下作用を有することが確認された。実施例２でアセトン抽出エキスの瀉下作用が早期型であったことを考慮すると、アセトン抽出エキスの瀉下作用において、化合物２の瀉下活性は化合物４の瀉下活性より寄与が低いと推測される。このことは、表８と表９に示す用量依存性試験によれば、化合物２は1000 mg/kg投与群のみで瀉下作用が認められたことからも支持される。また、化合物４投与群では、投与後2〜4時間と6〜8時間において瀉下作用が認められている。以上のことより、化合物４は、早期型の瀉下作用を有することが示唆された。化合物４の瀉下作用は、実施例２のアセトン抽出エキスと同じように経時的な早期型であった。従って、化合物４は、アセトン抽出エキスの瀉下作用に寄与している可能性が高く、主要活性物質の一つであると推測された。以上より、化合物４をアセトン抽出エキスの瀉下作用の主要活性物質の一つと特定した。

〔実施例５〕（ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシド（genkwanin5-O-β-primeveroside）の瀉下作用の検討）
上記より、主要な活性物質の化合物４について実施例２と同様の方法で瀉下作用の検討を行った。

１）化合物４の用量依存性試験
まず化合物４の用量依存性を検討した。用量依存性試験の結果を表１０と表１１に示した。その結果、化合物４投与群は100mg/kg投与群より瀉下作用が認められた。すなわち、化合物４の最少有効用量は100mg/kgであった。また、100mg/kg投与群でも1000mg/kg投与群と同程度の作用を示すことが確認された。

化合物４は、100mg/kg投与群において、投与後2〜4時間の糞の個数の項目で瀉下作用が認められた。300mg/kg投与群においては、投与後2〜4時間の糞の個数と糞の重量の両項目で瀉下作用が認められた。1000mg/kg投与群では、投与後２〜４時間と6〜8時間における糞の個数と糞の重量の両項目で瀉下作用が認められた。化合物４は、用量が増加すると、瀉下作用の認められた項目が増加している。この結果より、化合物４は、用量依存的な瀉下作用を有する可能性が示唆された。また、化合物１、２、４、７について、下痢の有無を観察した表１２の結果より、化合物４はいずれの用量においてもセンナ葉で認められたような下痢症状は認められなかった。

２）化合物４の作用機序
（１）ウサギ摘出回腸の自動運動に及ぼす影響
大黄及びセンナの瀉下作用は、回腸自動運動の促進によるとの報告（Wilkins J L; Hardcastle J D. Buritish journal of surgery(1970), 57(11),864、VALETTE G; HUREAU M L. Therapie(1957), 12(6), 885-97)があるので、化合物４のウサギ摘出回腸自動運動に及ぼす影響をMagnus試験法により検討した。すなわち、ウサギをペントバルビタールにて麻酔し、放血致死後、回腸を摘出した。摘出した回腸をMagnus管(Tyrode液の設定温度：37℃)に懸垂し、95%0₂+5%C0₂混合ガスの通気下、約1gの張力を負荷した。懸垂した標本は、30分以上平衡化し、自動運動の波形が安定していることを確認した後、DMSOに溶解した検体（化合物４）を低用量から累積投与した。
回腸の自動運動は、等張性トランスデューサー(TD-112S、日本光電工業株式会社)を介し、張力変化はアイソトニックカプラ(EG-650H、日本光電工業株式会社）を介してカプラ用アンプ(AA-601H、日本光電工業株式会社)で受感・増幡してレコーダー(U-228、株式会社パントス)に記録した。結果を表１３、図３及び図４に示した。

表１３、図３及び図４より、化合物４は1.11×10^-3g/ml(1×10^-3g/ml)でウサギ摘出回腸の弛緩が認めら、回腸自動運動を有意に促進した。

（２）モルモット摘出回腸のアセチルコリン受容体に対する作用
回腸自動運動には、神経伝達物質のアセチルコリンを介した副交感神経が関与している。したがって、以下に化合物４の副交感神経に及ぼす影響を検討した。すなわち、モルモットをジェチルエーテルにて麻酔し、放血致死後、回腸を摘出した。摘出した回腸をMagnus管(Tyrode液の設定温度：30℃）に懸垂し、95%O₂+5%CO₂混含ガスの通気下、約0.5gの張力を負荷した。懸垂した標本は、30分以上平衡化した後、アセチルコリンを投与し回腸を収縮させた。同程度の収縮波高が2回以上連続して観察されるまでこの操作を繰り返した。同程度の収縮波高が2回以上観察された標本に対して受容体拮抗薬を投与し、5分後にDMSOに溶解した検体（化合物４）を添加し収縮波高を確認した。
アセチルコリン収縮は、等張性トランスデューサー(TD-112S、日本光電工業株式会社)を介し、張力変化はアイソトニックカプラ(EG-650H、日本光電工業株式会社）を介してカプラ用アンプ(AA-601H、日本光電工業株式会社)で受感・増幡してレコーダー(U-228、株式会社パントス)に記録した。
アゴニストには、アセチルコリン1×10^-7g/mlを用いる。アンタゴニストにはアトロピン1×10^-7g/ml（いずれも添加後の終濃度）を用いた。結果を図５に示した。

図５より、対照で認められた化合物４の回腸の収縮作用は、アトロピンにより抑制された。これより、化合物４による瀉下作用の作用機序は、アセチルコリン受容体に作用し、副交感神経を介した回腸自動運動の促進によるものと推察された。

沈香葉エキスの粗分画過程を示すフローチャートである。沈香葉エキスの化合物の単離過程を示すフローチャートである。ウサギ摘出回腸の自動運動を示すチャートである。濃度とウサギ摘出回腸の自動運動との関係を示すグラフである。モルモット摘出回腸の収縮を示すチャートである。

Claims

ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシド（genkwanin5-O-β-primeveroside）を有効成分として含むことを特徴とする緩下剤。
ゲンクワニン５−Ｏ−β−プリメベロシド（genkwanin5-O-β-primeveroside）が含まれる沈香葉エキスを有効成分として含むことを特徴とする緩下剤。
沈香葉エキスの起源たる沈香葉を有効成分として含むことを特徴とする緩下剤。
ゲンクワニン５−Ｏ−β―プリメベロシドが含まれる沈香葉エキスを含む食品であって、緩下作用に有効量の濃縮した沈香葉エキスを含む、食品。