JP5073270B2 - 凝固検査用試薬及びその製造方法 - Google Patents
凝固検査用試薬及びその製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5073270B2 JP5073270B2 JP2006308061A JP2006308061A JP5073270B2 JP 5073270 B2 JP5073270 B2 JP 5073270B2 JP 2006308061 A JP2006308061 A JP 2006308061A JP 2006308061 A JP2006308061 A JP 2006308061A JP 5073270 B2 JP5073270 B2 JP 5073270B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tissue factor
- reagent
- insect
- recombinant
- factor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
前記昆虫又は昆虫培養細胞由来の可溶性成分は、前記昆虫又は昆虫培養細胞由来の可溶性タンパク質を含んでいることが好ましい。
従って、本発明の凝固検査用試薬は、天然のトロンボプラスチンに代えて組換え組織因子を使用することから、製造現場において狂牛病などの原因となる大脳を扱わずに済み、安全である。さらに、本発明の凝固検査用試薬は、その製造方法において、組換え組織因子の精製工程を簡略化することができるので、生産性に優れ、しかも生産コストの低減を図ることができる。
はじめに、本発明の凝固検査用試薬に用いられる組換え組織因子、及び当該組換え組織因子とリン脂質との複合体(組換え組織因子−リン脂質複合体)について説明する。
本発明で用いられる組換え組織因子は、昆虫又は昆虫培養細胞を宿主とする遺伝子工学的手法によって得られたもので、このような遺伝子工学的手法によって得られた組換えウシ組織因子、組換えウサギ組織因子、組換えヒト組織因子などが挙げられる。
本発明の凝固検査用試薬は、上記の組換え組織因子−リン脂質複合体、及び組換え組織因子を得るときに用いられた宿主である昆虫又は昆虫培養細胞由来の可溶性成分を含有している。
凝固検査用試薬に含まれる組換え組織因子は、昆虫又は昆虫培養細胞を宿主とする遺伝子工学的手法により得られるものである。そして、宿主として用いた昆虫又は昆虫培養細胞の可溶性成分は、宿主から組換え組織因子とともに抽出されてくるものであり、最終的に凝固検査用試薬に含まれることになる。
上記カルシウムイオン源としては、通常、塩化カルシウム、乳酸カルシウムやグルコン酸カルシウム等から選ばれる。
本発明の凝固検査用試薬の製造方法は、組織因子のcDNAをバキュロウィルスDNAへ組み込んだ組換えバキュロウィルスを昆虫又は昆虫培養細胞に感染させる工程;前記昆虫又は昆虫培養細胞において、前記cDNAから組換え組織因子を発現させる工程;前記組換え組織因子を発現した昆虫又は昆虫培養細胞を破砕して得られる破砕物を含む溶液から不溶性成分を除去することにより、前記組換え組織因子を含む可溶性成分を得る工程;及び前記可溶性成分とリン脂質とを混合して、前記組換え組織因子とリン脂質との複合体を形成させる工程を含む。
このようなcDNAをバキュロウィルスDNA中に組み込んで、組換えバキュロウィルスを作製する。
宿主が昆虫である場合、昆虫の種類は特に限定しないが、鱗翅目が好ましく用いられ、鱗翅目昆虫の中でもカイコがより好ましく用いられる。カイコの種類は特に限定しないが、裸蛹系統のカイコが好ましく用いられる。裸蛹系統のカイコは、繭形成にかかる遺伝子が変異したもので、蛹化はしても繭をつくらない。このような裸蛹系統のカイコとしては例えば、Nd系、Ndb系、Nd−s系、Nd−t系等のカイコが知られている。また、このようなカイコの蛹を用いることが好ましい。蛹は、カイコ幼虫の消化管に存在する、食物(桑)を分解するためのセリンプロテアーゼの活性が、カイコ虫体に比べてはるかに低いからである。これにより、カイコ内で発現されたタンパク質の分解を防止することができる。また、カイコ蛹は、バキュロウィルスに対する感受性が幼虫に比べても高く、容易に個体内でウィルスが増殖し、大量の組織因子の発現が可能となるからである。
昆虫培養細胞を用いる場合、発現された産生タンパクである組織因子は、細胞外に分泌されてもよいし、細胞内に蓄積されるものであってもよい。
所定時間飼育又は培養後、生産された組織因子を、宿主体内又は培養細胞内又は培地から抽出する。
培養細胞は、ホモジナイザーや超音波などを用いた機械的な処理により破砕してもよいし、界面活性剤などを用いた非機械的処理により破砕(溶解)してもよいし、これらの処理を組合わせて破砕してもよい。破砕に際しては、宿主として昆虫を用いる場合と同様に、適当な破砕処理溶液中で行なうことが好ましい。破砕物を含む溶液からの不溶性成分の除去は、濾過、遠心分離、又はこれらを適宜組合わせて行なうことができる。
リン脂質との複合体化は、以上のような組換え組織因子含有溶液、リン脂質溶液、ニッケル塩溶液を混合攪拌し、1〜2時間ほど反応させればよい。
ウシ大脳のcDNAライブラリー(クローンテック社)を入手し、非特許文献1の方法に基づいて、PCRによりウシ組織因子の遺伝子を増幅させ、ウシ組織因子の可溶性ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする完全長のウシ組織因子コード遺伝子をクローニングした。PCR法での増幅に際しては、forwardプライマーとしてBgIII切断配列を有するプライマー(5’−agatctatggcgacccccaacgggcc)を使用し、backwardプライマーとしてEcoRI切断配列を有するプライマー(5’−acttaagaatacgtcgcaactcgccgc)を使用した。クローニングした遺伝子の塩基配列を、シーケンサー(4200型、ライカ)で調べたところ、配列番号2のタンパク質をコードするDNAであることが確認できた。
ウシ大脳のcDNAライブラリー (ストラタジーン社)を入手し、非特許文献1の方法に基づいて、PCRによりウシ組織因子の遺伝子を増幅させ、ウシ組織因子の可溶性ドメイン及び膜貫通ドメインをコードする完全長のウシ組織因子コード遺伝子をクローニングした。PCR法での増幅に際しては、forwardプライマーとしてBamHI切断配列を有するプライマー(5’−ggatccatggcgacccccaacgggccccg)を使用し、backwardプライマーとしてXhoI切断配列を有するプライマー(5’−ctcgagttatgcagcgttgagcggcgtg)を使用した。クローニングした遺伝子の塩基配列を、4000L DNAシーケンサー(LI−COR社)で調べたところ、配列番号2のタンパク質をコードするDNAであることが確認できた。
上記の調製方法の過程で得られる組換えウシ組織因子含有溶液SW及び組換えウシ組織因子含有溶液SFを用いてSDS−PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis)を行った。
得られたSDS用試料SW 10μLを5〜10%グラジエントポリアクリルアミドゲルのウェルに注入し、泳動槽(ミニプロテインII電気泳動装置(日本バイオラッドラボラトリーズ(株))を用いて50Vで3時間の泳動を行った。泳動後、ポリアクリルアミドゲルを銀染色キット(第一化学薬品株式会社)を用いて染色した。その結果を図1に示す。図1において、レーン1は分子量マーカー(プレシジョンPlus、日本バイオラッドラボラトリーズ(株))であり、レーン2はSDS用試料SWの泳動結果である。組換えウシ組織因子のバンドが出現する位置(およそ分子量40kDaの位置)を矢印で示した。
得られたSDS用試料SF 10μLを5〜10%ポリアクリルアミドゲルのウェルに注入し、泳動槽(ミニプロティアンII電気泳動装置(日本バイオラッドラボラトリーズ(株))を用いて100Vで1時間の泳動を行った。泳動後、ポリアクリルアミドゲルをCCB染色キット(和光純薬工業(株))を用いて染色した。その結果を図2に示す。図2において、レーン1は分子量マーカー(プレシジョンPlus、日本バイオラッドラボラトリーズ(株))を、レーン2はSDS用試料SFの泳動結果である。組換えウシ組織因子のバンドが出現する位置(およそ分子量40kDaの位置)を矢印で示した。
図1の結果から、組換えウシ組織因子含有溶液SWにおける組換えウシ組織因子の純度は約5〜10%程度であると考えられる。
図2の結果から、組換えウシ組織因子含有溶液SFにおける組換えウシ組織因子の純度は約1〜5%程度であると考えられる。
0.25%デオキシコール酸ナトリウムDOC(20mL)にベイシス大豆レシチン0.4g(日清製油(株))を溶解した。ローテータで室温下、完全に溶解させ、これに1,2−オレイル−sn−グリセロ−3−ホスホエタノールアミン(DOPE)0.1g及び1,2−ジオレイル−sn−グリセロ−3−ホスホ−L−セリン(DOPS)0.3g(いずれもAvanti polar lipid、Inc.)を懸濁させてリン脂質溶液を調製した。
(1)硫酸バリウム吸着血漿の調製
クエン酸を添加したウシ血漿に、ウシ血漿の30w/v%量の硫酸バリウム、及びウシ血漿の20v/v%量の生理食塩水を、添加し、60分間ローテータで攪拌した。
この混合液を、4℃、5000rpm、15分間遠心分離した後、上清を回収した。この上清に、当該上清の30w/v%の硫酸バリウムを、少しずつ添加して、硫酸バリウムに血漿中のII、VII、IX、X因子吸着させた。その後遠心分離して上清を回収した。その上清を、透析チューブ(透析用セルロースチューブ、三光純薬(株))にいれ、生理食塩水を外液として、2〜8℃で透析を行なった。透析後の透析チューブ内の溶液を0.45μmのフィルターで濾過した濾液を、硫酸バリウム吸着血漿として、以下の試薬の調製に用いた。
上記で調製したウシ組織因子−リン脂質複合体含有液と硫酸バリウム吸着血漿と40mM HEPES緩衝液(pH7.3、4mMの乳酸カルシウムを含む)とを、1:2:1の比率で混合して撹拌し、II、VII、IX、X因子測定用試薬を調製した。ここで、ウシ組織因子−リン脂質複合体含有液SWを用いて調製されたII、VII、IX、X因子測定用試薬を試薬SWとし、ウシ組織因子−リン脂質複合体含有液SFを用いて調製されたII、VII、IX、X因子測定用試薬を試薬SFとした。
上記調製方法に基づいて、試薬SWを3ロット(SW−1、SW−2及びSW−3)調製した。また、バキュロウィルスを感染させていないカイコ蛹から、上記調製方法に準じてII、VII、IX、X因子測定用試薬SWを調製した。これを試薬SW(未感染)とする。試薬SW(未感染)には、カイコ個体由来の可溶性成分は含有されているが、組換えウシ組織因子及びバキュロウィルス由来の可溶性成分は含有されていない。さらに、カイコ蛹にウシ組織因子cDNAが組み込まれていないバキュロウィルスを感染させ、感染したカイコ蛹から上記調製方法に準じてII、VII、IX、X因子測定用試薬SWを調製した。これを試薬SW(cDNA不含有)とする。試薬SW(cDNA不含有)には、カイコ個体由来及びバキュロウィルス由来の可溶性成分は含有されているが、組換えウシ組織因子は含有されていない。
上記で調製した試薬SW及び試薬SFについて、予めEQUSTAサーベイサンスでINR表示値が決定された4種類のAKキャリブラント(AK−Aa、AK−Bb、AK−Cc、AK−Dd、(いずれもImmuno社製、オーストリア)の凝固時間(秒)及び国際標準感度指標(ISI値)を、全自動血衛凝固分析装置コアグレックス800(島津製作所(株))で測定した。
各試薬を用いて得られた凝固時間(秒)及びISI値の結果を表2に示す。
上記「試薬SW及び試薬SFの感度」において使用したものと同じ試薬(試薬SW、試薬SF、対照試薬1及び対照試薬2)を使用して、ワルファリン投与患者血漿(N=20)の凝固活性(%)を、全自動血液凝固分析装置コアグレックス800(島津製作所(株))で測定した。尚、活性値(%)の算出に用いる検量線の作成には、コアグトロールN(シスメックス(株))を用いた。また、ワルファリン投与患者血漿は、Multi−Coumadin Set(Georoge King Biomedical社)を用いた。
各試薬を用いて得られた活性値(%)の結果を表3に示した。
組換えウシ組織因子含有溶液SWを用いて、PIVKAの感受性を調べた。
具体的には、II、VII、IX、X因子測定用試薬SWと20mM塩化カルシウム溶液を等量混合し、さらにヒト吸着血漿をそれぞれに混合して、PIVKA感受性試験用の試薬を調製した。
尚、対照として、ウシ大脳から抽出したトロンボプラスチンを含有するウシ大脳由来トロンボプラスチン溶液、およびウサギの脳から抽出したトロンボプラスチンを含有するウサギ脳由来トロンボプラスチン溶液を用いて、上記と同様にしてPIVKA感受性試験用の試薬を調製した。
調製したPIVKA感受性試験用試薬を使用して、全自動血液凝固分析装置コアグレックス800(島津製作所(株))により、正常血漿及び3種類のワルファリン投与患者血漿の凝固時間を測定した。
正常血漿としては、コアグトロールN(シスメックス(株))、及びこれを生理食塩水で希釈したものを用いた。コアグトロールNの希釈倍率は、3倍希釈、5倍希釈及び7希釈である。
ワルファリン投与患者血漿は、Multi−Coumadin Set(Georoge King Biomedical社)、及びこれを生理食塩水で希釈したものを用いた。ワルファリン投与患者血漿の希釈倍率は、2倍希釈、3倍希釈及び5倍希釈である。
得られた結果を図5に示した。
Claims (10)
- 昆虫又は昆虫培養細胞を宿主とする遺伝子工学的手法によって得られた組換え組織因子とリン脂質との複合体、及び前記昆虫又は昆虫培養細胞由来の可溶性成分を含有する凝固検査用試薬。
- 前記組換え組織因子は、可溶性ドメイン及び膜貫通ドメインを有する組換えウシ組織因子である請求項1に記載の凝固検査用試薬。
- 前記組換え組織因子は、配列番号1で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列の1又は数個のアミノ酸が置換、付加又は欠失したアミノ酸配列からなる組換えウシ組織因子である請求項1に記載の凝固検査用試薬。
- 前記昆虫は、鱗翅目昆虫である請求項1〜3のいずれか1項に記載の凝固検査用試薬。
- 前記鱗翅目昆虫はカイコである請求項4に記載の凝固検査用試薬。
- 前記昆虫又は昆虫培養細胞由来の可溶性成分は、前記昆虫又は昆虫培養細胞由来の可溶性タンパク質を含んでいる請求項1〜5のいずれか1項に記載の凝固検査用試薬。
- 組織因子のcDNAをバキュロウィルスDNAへ組み込んだ組換えバキュロウィルスを昆虫又は昆虫培養細胞に感染させる工程;
前記昆虫又は昆虫培養細胞において、前記cDNAから組換え組織因子を発現させる工程;
前記組換え組織因子を発現した昆虫又は昆虫培養細胞を破砕して得られる破砕物を含む溶液から不溶性成分を除去することにより、前記組換え組織因子を含む可溶性成分を得る工程;及び
前記可溶性成分とリン脂質とを混合して、前記組換え組織因子とリン脂質との複合体を形成させる工程
を含む凝固検査用試薬の製造方法。 - 前記cDNAは、ウシ組織因子の可溶性ドメイン及び膜貫通ドメインをコードするcDNAである請求項7に記載の凝固検査用試薬の製造方法。
- 前記cDNAは、配列番号2で示されるアミノ酸配列又は当該アミノ酸配列の1又は数個のアミノ酸が置換、付加又は欠失したアミノ酸配列をコードするcDNAである請求項7に記載の凝固検査用試薬の製造方法。
- 前記可溶性成分を得る工程において、破砕物を含む溶液が、界面活性剤を含有する請求項7〜9のいずれか1項に記載の凝固検査用試薬の製造方法。
Priority Applications (6)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006308061A JP5073270B2 (ja) | 2006-11-14 | 2006-11-14 | 凝固検査用試薬及びその製造方法 |
CN2007101878140A CN101183109B (zh) | 2006-11-14 | 2007-11-13 | 凝固检查用试剂及其试剂的生产方法 |
EP07022109A EP1935902B1 (en) | 2006-11-14 | 2007-11-14 | Reagent for measuring clotting time and method for manufacturing the reagent |
ES07022109T ES2371363T3 (es) | 2006-11-14 | 2007-11-14 | Reactivo para medir el tiempo de coagulación y procedimiento para fabricar el reactivo. |
AT07022109T ATE529443T1 (de) | 2006-11-14 | 2007-11-14 | Reagenz zur messung der gerinnungszeit und verfahren zur reagenzherstellung |
US11/940,008 US7897333B2 (en) | 2006-11-14 | 2007-11-14 | Reagent for measuring clotting time and method for manufacturing the reagent |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2006308061A JP5073270B2 (ja) | 2006-11-14 | 2006-11-14 | 凝固検査用試薬及びその製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2008122288A JP2008122288A (ja) | 2008-05-29 |
JP5073270B2 true JP5073270B2 (ja) | 2012-11-14 |
Family
ID=39259545
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2006308061A Active JP5073270B2 (ja) | 2006-11-14 | 2006-11-14 | 凝固検査用試薬及びその製造方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US7897333B2 (ja) |
EP (1) | EP1935902B1 (ja) |
JP (1) | JP5073270B2 (ja) |
CN (1) | CN101183109B (ja) |
AT (1) | ATE529443T1 (ja) |
ES (1) | ES2371363T3 (ja) |
Families Citing this family (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4829828B2 (ja) | 2007-03-28 | 2011-12-07 | シスメックス株式会社 | 血液凝固測定用試薬及び組織因子安定化方法 |
EP2380905A1 (en) | 2010-04-19 | 2011-10-26 | Thrombotargets Europe, S.L. | Phospholipid-enriched vesicles bearing tissue factor having haemostatic activities and uses thereof |
JP6250306B2 (ja) * | 2013-05-28 | 2017-12-20 | 株式会社Lsiメディエンス | リポ化トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法 |
JP6595247B2 (ja) * | 2015-07-30 | 2019-10-23 | シスメックス株式会社 | 凝固時間の測定方法およびその装置、凝固時間測定用試薬ならびに試薬キット |
CN105372424A (zh) * | 2015-11-12 | 2016-03-02 | 武汉景川诊断技术股份有限公司 | 肝促凝血活酶试验测定试剂盒及其制备方法 |
CN113005176A (zh) * | 2019-12-20 | 2021-06-22 | 深圳市帝迈生物技术有限公司 | 稳定剂、凝血酶原时间检测试剂及其制备方法、试剂盒 |
CN115508569A (zh) * | 2022-09-15 | 2022-12-23 | 上海太阳生物技术有限公司 | 蛋白s试剂及检测试剂盒 |
Family Cites Families (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7084251B1 (en) * | 1987-02-12 | 2006-08-01 | Genentech, Inc. | Methods and Deoxyribonucleic acid for the preparation of tissue factor protein |
US5314695A (en) * | 1990-11-13 | 1994-05-24 | Corvas International, Inc. | Tissue factor based prothrombin time reagent |
EP0565665B1 (en) | 1991-10-04 | 1998-03-04 | Dade International Inc. | Preparation of prothrombin time reagents from recombinant human tissue factor and synthetic phospholipids |
DE69832628T2 (de) | 1997-04-23 | 2006-09-07 | Instrumentation Laboratory S.P.A. | Rekombinant-kaninchengewebefaktor basiertes prothrombinzeitreagenz |
DE19749259A1 (de) * | 1997-11-07 | 1999-05-12 | Dade Behring Marburg Gmbh | Verfahren zur Herstellung von funktionalem rekombinantem Gewebsfaktor |
EP0984280A1 (en) * | 1998-09-03 | 2000-03-08 | Sysmex Corporation | Anticoagulant and hemanalysis method |
US7049087B2 (en) | 2002-11-05 | 2006-05-23 | Lifescan, Inc. | Method for manufacturing a tissue factor-based prothrombin time reagent |
US7148067B2 (en) | 2004-08-31 | 2006-12-12 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Thromboplastin reagents |
WO2006096345A2 (en) * | 2005-03-04 | 2006-09-14 | The Board Of Trustees Of The University Of Illinois | Coagulation and fibrinolytic cascades modulator |
-
2006
- 2006-11-14 JP JP2006308061A patent/JP5073270B2/ja active Active
-
2007
- 2007-11-13 CN CN2007101878140A patent/CN101183109B/zh active Active
- 2007-11-14 US US11/940,008 patent/US7897333B2/en active Active
- 2007-11-14 EP EP07022109A patent/EP1935902B1/en active Active
- 2007-11-14 AT AT07022109T patent/ATE529443T1/de active
- 2007-11-14 ES ES07022109T patent/ES2371363T3/es active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US7897333B2 (en) | 2011-03-01 |
US20080124704A1 (en) | 2008-05-29 |
CN101183109B (zh) | 2012-09-05 |
EP1935902B1 (en) | 2011-10-19 |
CN101183109A (zh) | 2008-05-21 |
JP2008122288A (ja) | 2008-05-29 |
ES2371363T3 (es) | 2011-12-30 |
ATE529443T1 (de) | 2011-11-15 |
EP1935902A1 (en) | 2008-06-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5073270B2 (ja) | 凝固検査用試薬及びその製造方法 | |
JP3246749B2 (ja) | 組換えウサギ組織因子に基づくプロトロンビン時間試薬 | |
JP3416778B2 (ja) | 組換えヒト組織因子及び精製された天然及び合成のリン脂質からのプロトロンビン時間試薬の製造 | |
US11959109B2 (en) | Recombinant Factor C and method for producing the same, and method for measuring endotoxin | |
JP4829828B2 (ja) | 血液凝固測定用試薬及び組織因子安定化方法 | |
JP5819725B2 (ja) | 組換えフィブリノゲン | |
US8211640B2 (en) | Identification of a family of secreted proteins in vascular endothelium | |
JP4414499B2 (ja) | 機能性組換え組織因子の製造法 | |
CN102443548B (zh) | 生产伽马-羧化的蛋白的方法 | |
JP6216647B2 (ja) | 組換え型プロトロンビンの製造方法およびその利用 | |
JP2008088103A (ja) | Ii、vii、ix、x因子測定用試薬及びその製造方法 | |
US11067572B2 (en) | Methods and assays for factor VIII activity | |
JP4039722B2 (ja) | 複合因子測定試薬 | |
RU2744592C1 (ru) | Рекомбинантная плазмида pET21-TF7, обеспечивающая синтез модифицированного тканевого фактора, и штамм Escherichia coli BL21(DE3) pET21-TF7 - продуцент рекомбинантного тканевого фактора человека | |
Ojala | Structural and functional studies of class A scavenger receptors MARCO (SCARA2) and SCARA5 | |
Chitta | Development of a murine model for von Willebrand factor signaling | |
Ayombil | Defining platelet-derived components regulating the Prothrombinase enzyme complex | |
Plewnia | Biochemical and biophysical characterization of extrinsic and intrinsic modulators of the antigen transporter TAP | |
JP2014126367A (ja) | 組織トロンボプラスチン含有血液凝固能測定試薬及び測定方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091001 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120607 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120629 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120725 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120822 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5073270 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150831 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |