JP5072286B2 - Animal immunomodulator - Google Patents

Description

本発明は、オーレオバシディウム属に属する微生物の菌体を含有してなる免疫調節剤に関し、詳細には、分泌型イムノグロブリンＡ（以下、「ＩｇＡ」と略記する。）の産生を増強すると共に、イムノグロブリンＥ（以下、「ＩｇＥ」と略記する。）の産生を抑制することにより、動物の微生物による感染を予防乃至治癒し、アレルギーの発症を抑制して、動物の健康状態を維持、増進、或いは、改善するための免疫調節剤に関するものである。   The present invention relates to an immunomodulator comprising a microorganism belonging to the genus Aureobasidium, and in particular, enhances the production of secretory immunoglobulin A (hereinafter abbreviated as “IgA”). In addition, by suppressing the production of immunoglobulin E (hereinafter abbreviated as “IgE”), the infection by microorganisms of animals is prevented or cured, the onset of allergies is suppressed, and the health of animals is maintained. The present invention relates to an immunomodulator for enhancement or improvement.

近年、農業生産上重要な家畜である牛、豚、鶏等の利用度が益々高まり、そのため家畜を飼育するための飼料が重要な位置を占めている。現在、家畜用飼料は昔ながらの素材型飼料から各飼料メーカーが配合調製した濃厚飼料への移行が進んでおり、それらを給餌してその経済効果を高めている。また、家庭で飼育するペットの増加に伴いペットフードの需要も高まっている。   In recent years, the utilization of cattle, pigs, chickens and the like, which are important livestock for agricultural production, has been increasing, and feed for raising livestock occupies an important position. Currently, livestock feed is shifting from traditional feeds to concentrated feeds formulated and prepared by various feed manufacturers, and feeding them increases the economic effect. In addition, the demand for pet food is increasing with the increase of pets raised at home.

しかしながら、濃厚飼料を与えることによる弊害も報告されている。一般にいわれている影響のひとつは体内の酸性化で、特に胃腸にかかる負担が大きく、阻害例としては家畜の成長性等の問題が挙げられる。また、微生物の感染に対して抗生物質を使用した場合には、その残留に伴う安全性の面、多用による耐性菌の出現等も問題視されるようになってきた。その結果、家畜に感染症などの様々な要因が複合し、下痢、軟便等の症状が多く見られ、特に幼畜の体重増加の鈍化が問題となっている。また、ペットについても、室内での飼育に伴う運動不足やストレスにより免疫能が低下し、微生物感染やアレルギーの発生が認められ、感染症に起因する下痢や軟便、体重の減少など、健康状態が悪化する例が多数発生している。このような家畜の症状を改善したり、飼料効果を賦与するための家畜用飼料添加剤も提案されているものの（例えば、特許文献１乃至３参照）、より効果的に、上記問題を解決し、動物の健康を維持・増進することのできる免疫調節剤の開発が求められている。 However, adverse effects caused by feeding a concentrated feed have been reported. One of the commonly called effects is acidification in the body, especially the burden on the gastrointestinal tract. Examples of inhibition include problems such as growth of livestock. In addition, when antibiotics are used against microbial infections, there have been problems such as the emergence of resistant bacteria due to heavy use in terms of safety associated with the residue. As a result, various factors such as infectious diseases are combined in livestock, and many symptoms such as diarrhea and loose stool are observed. Particularly, the slowing of weight gain of young animals is a problem. In addition, pets also have poor health due to lack of exercise and stress associated with rearing indoors, microbial infections and allergies are observed, diarrhea and loose stool resulting from infections, and weight loss. There have been many examples of deterioration. Although animal feed additives for improving the symptoms of livestock and providing feed effects have been proposed (see, for example, Patent Documents 1 to 3), the above problems can be solved more effectively. There is a need for the development of immunomodulators that can maintain and enhance animal health.

特開平７−５０９９９号公報Japanese Patent Laid-Open No. 7-50999 特開平８−１５７３７７号公報JP-A-8-157377 特公平４−３４３７１号公報Japanese Examined Patent Publication No. 4-34371

本発明は、動物が継続的に経口摂取可能であり、副作用の心配がなく、安全性の高い免疫調節剤、及び、この免疫調節剤を使用する動物の免疫調節方法を提供することを課題とする。   An object of the present invention is to provide a highly safe immunomodulating agent that can be continuously taken orally by an animal, without worrying about side effects, and an animal immunomodulating method that uses this immunomodulating agent. To do.

本発明者は、上記課題を解決するために鋭意研究を重ねた結果、オーレオバシディウム（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ）属に属する微生物（以下、「オーレオバシディウム菌」という。）の菌体を含有する組成物、とりわけ、当該微生物の菌体と珪藻土とを配合した組成物が、家畜やペットなどの飼育動物に経口摂取せしめることで、その腸管内でのＩｇＡの産生を効果的に増強する免疫調節能を有することを見出した。さらに、この組成物が、経口摂取せしめることで、ＩｇＥの産生を効果的に抑制する免疫調節能も有することを見出して本発明を完成した。 As a result of intensive studies to solve the above problems, the inventor of the present invention has a composition containing the cells of microorganisms belonging to the genus Aureobasidium (hereinafter referred to as “Aureobasidium bacteria”). , In particular, a composition containing microbial cells of the microorganism and diatomaceous earth is orally ingested by domestic animals such as domestic animals and pets, thereby effectively enhancing IgA production in the intestinal tract. It was found to have Furthermore, the present invention was completed by finding that this composition also has an immunoregulatory ability to effectively suppress the production of IgE by ingestion.

すなわち、本発明は、オーレオバシディウム菌の菌体を含有する免疫調節剤、とりわけ、当該微生物の菌体と珪藻土とを含有してなる免疫調節剤を提供することにより、上記課題を解決するものである。 That is, the present invention solves the above-mentioned problems by providing an immunomodulator containing microbial cells of Aureobasidium, particularly an immunomodulator comprising microbial cells of the microorganism and diatomaceous earth. Is.

本発明の免疫調節剤は、牛、豚、鶏、羊、ネコ、イヌ等の動物の種類や生育段階の別なく、抗体産生能を有するあらゆる動物に使用することができる。さらに、該免疫調節剤は、種々の動物に摂取させることにより、当該動物の粘膜免疫を増強し、ＩｇＡ抗体の産生を増強し、及び／又は、ＩｇＥ抗体の産生を低減することができる。その結果、家畜やペットなどの飼育動物、とりわけ、その幼畜や幼獣における有害微生物の腸内感染や腸内の増殖、呼気系の器官を通しての感染や増殖、アレルギーの発生などを防止し、動物の健康状態の維持、増進、或いは、改善を図り、幼畜や幼獣の歩留まりや肥育効果を高める共に、これらの動物による、肉、乳、卵などの畜産製品の生産性の向上を図ることができる。 The immunomodulating agent of the present invention can be used for any animal having antibody-producing ability, regardless of the kind of animal such as cattle, pigs, chickens, sheep, cats and dogs and the growth stage. Furthermore, the immunomodulator can enhance the mucosal immunity of the animal, enhance the production of IgA antibody, and / or reduce the production of IgE antibody when ingested by various animals. As a result, domesticated animals such as livestock and pets, especially intestinal infection and proliferation of harmful microorganisms in their larvae and cubs, infection and proliferation through breathing organs, the occurrence of allergies, etc. Maintain, enhance, or improve the health of animals to increase the yield and fattening effect of young animals and young animals, and improve the productivity of livestock products such as meat, milk and eggs. be able to.

本発明でいう免疫調節とは、消化器系や呼気系の器官を通じて感染したり、それらの器官で増殖すると、宿主である家畜やペットをはじめとする動物の健康状態を悪化させる微生物の感染やその増殖を抑制する効果を有する分泌型ＩｇＡなどの抗体の産生を増強すること、及び／又は、このＩｇＡの産生を促進する脾臓、パイエル板、腸間膜リンパ節などのリンパ球からのサイトカイン類、例えば、インターロイキン６（ＩＬ−６）やトランスフォーミングファクター−β（ＴＧＦ−β）の産生を増強することをいう。また、即時型のアレルギーを誘発するＩｇＥの産生抑制、及び／又は、このＩｇＥの産生を増強する脾臓、パイエル板、腸間膜などのリンパ節などのリンパ球からのインターロイキン−４（ＩＬ−４）などのサイトカイン類の産生抑制をいう。   In the present invention, immunoregulation refers to infection of microorganisms that worsen the health of animals such as livestock and pets that are hosts when infected through organs of the digestive system or the breathing system or proliferate in those organs. Cytokines from lymphocytes such as spleen, Peyer's patch, and mesenteric lymph nodes that enhance the production of antibodies such as secretory IgA that have the effect of suppressing their proliferation and / or promote the production of IgA For example, it refers to enhancing production of interleukin 6 (IL-6) and transforming factor-β (TGF-β). Furthermore, suppression of IgE production that induces immediate allergy and / or interleukin-4 (IL-) from lymphocytes such as spleen, Peyer's patch, mesentery and other lymph nodes that enhance this IgE production 4) refers to suppression of cytokine production.

本発明でいう動物とは、抗体産生能を有する動物をいう。具体的には、牛、豚、羊、山羊、ネコ、イヌなどのほ乳類、鶏、家鴨、鴨などの鳥類をいい、は虫類、両生類、魚類を含む脊椎動物をいう。   The animal referred to in the present invention refers to an animal having antibody production ability. Specifically, it refers to mammals such as cows, pigs, sheep, goats, cats and dogs, and birds such as chickens, domestic duck and duck, and vertebrates including reptiles, amphibians and fish.

本発明で使用するオーレオバシディウム菌の菌体は、所期の効果が得られるのであれば、オーレオバシディウム属に属する菌由来であれば、特別の制限はなく、例えば、特許第３２３２４８８号公報や特公平６−９２４４１号公報などに開示されたオーレオバシディウム プルランス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｐｕｌｌｕｌａｎｓ）ＩＦＯ ４４６４、ＩＦＯ ４８７５、ＩＦＯ ６３５３、ＩＦＯ ６４０１、ＩＦＯ ６７２５、オーレオバシディウム マンソーニ（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｍａｎｓｏｎｉ）ＩＦＯ ９２３３、オーレオバシディウム ファーメンタンス バル ファーメンタンス（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ｖａｒ ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ）ＩＦＯ ６４１０、オーレオバシディウム ファーメンタンス バル フスカ（Ａｕｒｅｏｂａｓｉｄｉｕｍ ｆｅｒｍｅｎｔａｎｓ ｖａｒ ｆｕｓｃａ）ＩＦＯ ６４０２などのような公知の菌を使用してもよいし、又は、それらの変異株でもよく、新たに土壌中などから分離した菌を使用してもよい。なかでも、免疫調節作用の強い、オーレオバシディウム プルランスの菌体が特に望ましい。   The cells of Aureobasidium used in the present invention are not particularly limited as long as the desired effects can be obtained, so long as they are derived from bacteria belonging to the genus Aureobasidium, for example, Patent No. 3322488. Aureobasidium pullulans IFO 4464, IFO 4875, IFO 6353, IFO 6251, AFO 6725, Aureobasidium mansoni IIF 4725, disclosed in Japanese Patent Publication No. 6-92441 Aureobasidium fermentans var Fermentans IFO 6410, Aureobasidium fermentans Known bacteria such as Mentans barfuska (Aureobasidium fermentans var fusca) IFO 6402 may be used, or mutants thereof may be used, or bacteria newly isolated from the soil may be used. . Among these, Aureobasidium pullulans cells having strong immunomodulatory action are particularly desirable.

本発明の免疫調節剤に使用するオーレオバシディウム菌の菌体を製造する方法としては、オーレオバシディウム菌を増殖させることのできる培養方法であれば、特に制限はなく、公知の方法により、上記オーレオバシディウム菌を、炭素源、窒素源、無機塩などの適当な栄養源を含有する固体培地、又は、液体培地に植菌して静置、又は、通気撹拌などの培養方法で培養・増殖せしめ、これを分離し採取すればよい（例えば、特許第３２３２４８８号公報参照）。菌体の分離採取の容易さからいえば、液体培地での培養が望ましい。また、プルランの製造に使用した後の、菌体を分離し採取することもきわめて有利に実施できる。この場合の培地の栄養源としては、本発明のオーレオバシディウム菌の菌体を得ることのできるものであればよく、炭素源としては、グリセロール、キシロース、グルコース、ソルビトール、フラクトース、マルトース、シュクロース、ラクトース、セロビオース、マルトトリオース、マルトテトラオース、デキストロース イクイバレント（ＤＥ）１０乃至ＤＥ７０の澱粉部分分解物、廃糖蜜などが適している。プルランを同時に産生させる場合には、これら糖類を約３質量％乃至２０質量％含有せしめた液体培地を用いて好気的条件で培養するのが好適である。窒素源としては、硝酸塩、アンモニウム塩、尿素などの化合物やポリペプトン、酵母エキス、麦芽エキス、コーンスティープリカー、脱脂大豆抽出物、ペプチド、アミノ酸などの天然有機物などが適宜利用できる。また、無機塩としては、リン酸塩、カリウム塩、硫酸塩、マグネシウム塩、必要に応じて鉄塩、マンガン塩、カルシウム塩などが適宜選択できる。培養時のｐＨ、温度は、該微生物が生育しうる条件であればよく、通常、ｐＨ２．０乃至ｐＨ９．０、温度１５℃乃至３５℃が選ばれる。また、培養期間は、菌数が最大になる期間が選ばれ、通常、液体培地で通気撹拌する場合１日乃至１０日間である。培養物から菌体を分離採取する方法としては、例えば、前記液体培養物を、濾過又は遠心分離などの方法で分離すればよい。この際、プルランを採取する場合には、菌体を分離した液又は上清から常法に従って採取すればよく、例えば、培養液に珪藻土を添加して、プレコートフィルターなどにより、菌体と培養上清を分離すれば、特に強い免疫調節効果を有するオーレオバシディウム菌の菌体と珪藻土とからなる免疫調節剤を容易に調製することができるので特に望ましい。 The method for producing Aureobasidium cells used in the immunomodulator of the present invention is not particularly limited as long as it is a culture method capable of growing Aureobasidium bacteria, and can be obtained by known methods. The aureobasidium is inoculated into a solid medium or liquid medium containing a suitable nutrient source such as a carbon source, a nitrogen source, or an inorganic salt, or is left still, or a culture method such as aeration stirring. What is necessary is just to culture | cultivate and proliferate and to isolate | separate and extract | collect this (for example, refer patent 3322488). In view of the ease of separating and collecting cells, culturing in a liquid medium is desirable. In addition, it is possible to very advantageously carry out separation and collection of bacterial cells after use in the production of pullulan. In this case, the nutrient source of the medium is not particularly limited as long as it can obtain the cells of Aureobasidium of the present invention, and the carbon source includes glycerol, xylose, glucose, sorbitol, fructose, maltose, sucrose. Claus, lactose, cellobiose, maltotriose, maltotetraose, dextrose equivalent (DE) 10 to DE70 partially decomposed starch, molasses and the like are suitable. When pullulan is produced simultaneously, it is preferable to culture under aerobic conditions using a liquid medium containing about 3% to 20% by mass of these sugars. As the nitrogen source, compounds such as nitrates, ammonium salts and urea, polypeptone, yeast extract, malt extract, corn steep liquor, defatted soybean extract, peptides, amino acids and other natural organic substances can be used as appropriate. In addition, as the inorganic salt, phosphate, potassium salt, sulfate, magnesium salt, iron salt, manganese salt, calcium salt and the like can be appropriately selected as necessary. The pH and temperature during the culture may be any conditions that allow the microorganism to grow. Usually, pH 2.0 to pH 9.0 and temperature 15 ° C. to 35 ° C. are selected. The culture period is selected so that the number of bacteria is maximized, and is usually 1 to 10 days when aerated and stirred in a liquid medium. As a method for separating and collecting cells from the culture, for example, the liquid culture may be separated by a method such as filtration or centrifugation. In this case, when pullulan is collected, it may be collected according to a conventional method from a liquid or supernatant from which the bacterial cells have been separated. For example, diatomaceous earth is added to the culture solution, and the bacterial cells and the culture are collected by a precoat filter or the like. It is particularly desirable to isolate the Qing because an immunomodulating agent composed of microbial cells of Aureobasidium bacteria and diatomaceous earth having a particularly strong immunomodulating effect can be easily prepared.

また、本発明の免疫調節剤は、オーレオバシディウム菌の培養物をそのまま使用してもよく、菌体を分離して使用してもよい。また、菌体は生菌であってもよく、滅菌した死菌であってもよく、両者が混在していてもよいし、これらの菌体を、そのままで、或いは、エチルアルコール、アセトンなどの親水性有機溶媒の１種又は２種以上で処理し、当該溶媒に溶解する成分を除去したものであってもよい。また、さらにこれらを、通風乾燥、熱風乾燥、噴霧乾燥、ドラム乾燥、凍結乾燥などの方法で乾燥したものであってもよい。培養物からの菌体の分離方法に特に制限はなく、その形態により、遠心分離法や濾過法などの適宜の方法により分離すればよい。   Moreover, the immunomodulator of this invention may use the culture of Aureobasidium as it is, and may use it, isolate | separating a microbial cell. In addition, the microbial cell may be a live bacterium, a sterilized dead bacterium, or a mixture of both, and these microbial cells may be used as they are or with ethyl alcohol, acetone or the like. What processed by 1 type (s) or 2 or more types of the hydrophilic organic solvent, and removed the component melt | dissolved in the said solvent may be used. Furthermore, these may be dried by a method such as ventilation drying, hot air drying, spray drying, drum drying, freeze drying and the like. There is no particular limitation on the method for separating the cells from the culture, and the cells may be separated by an appropriate method such as a centrifugal separation method or a filtration method depending on the form.

本発明の免疫調節剤は、オーレオバシディウム菌の菌体単独であってもよいが、オーレオバシディウム菌の菌体を含む組成物であってもよい。とりわけ、乾燥質量で、オーレオバシディウム菌１質量部に対して珪藻土を０．０１質量部乃至２５質量部、望ましくは０．１質量部乃至２５質量部、特に望ましくは、１質量部乃至１０質量部を配合した組成物は、オーレオバシディウム菌のもつ免疫調節作用を増強することができるので、本発明の免疫増強剤として好適である。また、当該免疫調節剤は、水、栄養剤、ミルクなどに混合して使用してもよく、家畜、家禽、は虫類、両生類、魚類の飼料、餌料やペットフードなどに、飼料用添加剤として配合することも随意である。また、本発明の免疫調節剤は、エビ、カニなどの甲殻類やタコ、イカ、貝などの軟体動物などに摂取させると、当該動物のもつ貪食細胞などの原始的な免疫系を活性化する作用も有しているので、上記脊椎動物用の免疫調節剤と同様の用量、用法で、これらの無脊椎動物の免疫増強剤として使用することも随意である。 The immunomodulator of the present invention may be an Aureobasidium bacterium alone or a composition containing an Aureobasidium bacterium. In particular, 0.01 to 25 parts by weight, preferably 0.1 to 25 parts by weight, particularly preferably 1 to 10 parts by weight of diatomaceous earth with respect to 1 part by weight of Aureobasidium bacteria by dry weight. Since the composition containing part by mass can enhance the immunomodulating action of Aureobasidium, it is suitable as the immunopotentiator of the present invention. In addition, the immunomodulator may be used by mixing it with water, nutrients, milk, etc., formulated as a feed additive in livestock, poultry, reptiles, amphibians, fish feed, feed and pet food, etc. It is also optional to do. Moreover, the immunomodulator of the present invention activates the primitive immune system such as phagocytic cells of the animal when ingested by crustaceans such as shrimps and crabs and molluscs such as octopus, squid and shellfish. Since it also has an action, it is optional to use it as an immunopotentiator for these invertebrates in the same dosage and usage as the above-mentioned immunomodulators for vertebrates.

本発明の免疫調節剤は、本発明の作用効果を妨げない範囲で、必要に応じて、さらに、他の成分を任意に含有させることができる。例えば、ブドウ糖、果糖、マルトース、イソマルトースをはじめとするマルトオリゴ糖、水飴、ニゲロース、ニゲロオリゴ糖などの還元性糖類、α，α−トレハロース、α，α−トレハロースの糖質誘導体、α，β−トレハロース、ラクトスクロース、ラクトネオトレハロース、ラフィノース、エルロース、α−サイクロデキストリン、β−サイクロデキストリン、γ−サイクロデキストリン、国際公開ＷＯ ０２／１０３６１号明細書などに開示されたサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→３）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（サイクロニゲロシルニゲロース：Ｃｙｃｌｏｎｉｇｅｒｏｓｙｌｎｉｇｅｌｏｓｅ）、特開平２００５−９５１４８号公報などに開示されたサイクロ｛→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝の構造を有する環状四糖（サイクロマルトシルマルトース：Ｃｙｃｌｏｍａｌｔｏｓｙｌｍａｌｔｏｓｅ）、国際特許願ＰＣＴ／ＪＰ２００５／１７６４２号明細書に開示されたサイクロ｛→６）−［α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）］ｎ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→｝（ｎは４又は５を意味する）の構造を有する環状五糖や環状六糖や、これらの環状オリゴ糖の糖質誘導体などの非還元性糖類、グルコサミン、ガラクトサミン、マンノサミンなどのアミノ糖、マルチトール、マルトトリイトール、ラクチトールなどのオリゴ糖の糖アルコール、エリスリトール、キシリトール、ソルビトール、マンニトールなどの単糖類の糖アルコール類、アスパルテーム、ステビア抽出物、スクラロース、アセスルファムＫなどの高甘味度甘味料、プルラン、カラギーナン、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸やその塩類、キチン、キトサンなどの天然ガム類、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースなどの合成高分子ポリマー、コラーゲン、ゼラチンなどの増粘剤の何れか１種又は２種以上を添加することができる。なかでも、環状四糖、環状五糖、環状六糖、α，α−トレハロース、ラクトスクロース、キチン、キトサンなどは、何れも、腸管における免疫調節能、及び、ビフィズス菌や乳酸菌などの酸（有機酸）生成菌の増殖促進活性を有し、本発明の免疫調節剤の免疫調節能を増強すると共に、腸内環境の改善にも役立つことから、特に望ましい。これらの免疫調節能を有する糖質を併用する場合の糖質の使用量は、オーレオバシディウム菌の菌体のもつ免疫調節能を増強できる量であれば、特に制限はなく、通常は、該菌体（乾燥質量）１質量部に対して、０．０１質量部乃至１００質量部添加すればよく、０．１質量部乃至１０質量部の添加が望ましく、０．５質量部乃至１０質量部の添加が特に望ましい。 The immunomodulator of the present invention can optionally contain other components as necessary, as long as the effects of the present invention are not hindered. For example, glucose, fructose, maltose, maltooligosaccharides and other isomaltose, starch syrup, nigerose, nigerooligosaccharide of which reducing sugars, alpha, alpha-trehalose, alpha, alpha-trehalose saccharide derivatives of, alpha, beta-trehalose , lactosucrose, lacto neotrehalose, raffinose, Erurosu, alpha-cyclodextrin, beta-cyclodextrin, .gamma.-cyclodextrin, International Publication WO 02/10361 Pat cyclo disclosed in like {→ 6) -α-D -Glucopyranosyl- (1 → 3) -α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl- (1 → 3) -α-D-glucopyranosyl- (1 →} cyclic tetrasaccharide (Cyclonigerosylnigerose), Cyclo {→ 6) -α-D-glucopyranosyl- (1 → 4) -α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl- (1 →) disclosed in Kaihei 2005-95148 4) Cyclic tetrasaccharide having a structure of -α-D-glucopyranosyl- (1 →) (cyclomaltosyl maltose), cyclo {→ 6) − disclosed in International Patent Application No. PCT / JP2005 / 17642 [Α-D-glucopyranosyl- (1 → 4)] n-α-D-glucopyranosyl- (1 →} (n means 4 or 5) Non-reducing sugars such as carbohydrate derivatives of cyclic oligosaccharides, amino sugars such as glucosamine, galactosamine, mannosamine, maltitol, maltotriite Oligosaccharide sugar alcohols such as le, lactitol, monosaccharide sugar alcohols such as erythritol, xylitol, sorbitol, mannitol, aspartame, stevia extract, high sweetness sweeteners such as sucralose, acesulfame K, pullulan, carrageenan, chondroitin Add one or more of sulfuric acid, hyaluronic acid and its salts, natural gums such as chitin and chitosan, synthetic polymer polymers such as hydroxypropyl starch and carboxymethylcellulose, and thickeners such as collagen and gelatin Among them, cyclic tetrasaccharides, cyclic pentasaccharides, cyclic hexasaccharides, α, α-trehalose, lactosucrose, chitin, chitosan, etc. all have immunomodulatory ability in the intestine, bifidobacteria, lactic acid bacteria, etc. Of acid (organic acid) producing bacteria It has ingrowth promoting activity, as well as enhance the immunomodulatory ability of immunomodulating agents of the present invention, since also help to improve the intestinal environment, especially desirable. The amount of carbohydrate used when these saccharides having immunomodulating ability are used in combination is not particularly limited as long as it is an amount capable of enhancing the immunomodulating ability of cells of Aureobasidium, and usually, What is necessary is just to add 0.01 mass part thru | or 100 mass parts with respect to 1 mass part of this microbial cell (dry mass), and addition of 0.1 mass part thru | or 10 mass parts is desirable, 0.5 mass part thru | or 10 mass parts Part addition is particularly desirable.

また、上記以外にも、例えば、小麦、燕麦、トウモロコシなどの種実類、サツマイモデンプンかす、おから、大豆油抽出かす、ビールかす、バガスなどのかす類、米ぬか、ふすまなどのぬか類などの植物性飼料素材やこれらの植物性素材を微生物発酵したもの、魚粉、全脂乳、脱脂乳などの動物性飼料素材、飼料用酵母などの飼料原料、さらには、ビタミンＢ_１、ビタミンＢ_２、ビタミンＢ_６、ビタミンＢ_１２、アスコルビン酸、ビタミンＥ、ルチン・ヘスペリジン・ナリンジンなどのバイオフラボノイド類或いは、これらビタミンやフラボノイドの誘導体など、α−リポ酸、アミノ酸類、ＣｏＱ１０（コエンザイムＱ１０）、アデノシン・イノシンやその誘導体、それらのモノフォスフェイト、ジフォスフェイト或いはトリフォスフェイトのような核酸関連物質、プロポリス、カテキンなどのポリフェノール成分、カルシウム、マグネシウム、海洋深層水などのミネラル類、食物繊維、抗菌剤、抗ウイルス剤、殺菌剤、整腸剤、ホルモン剤、栄養剤、酵素剤、食物繊維、感光素、賦形剤、結合剤、被覆剤、滑沢剤、崩壊剤、増量剤、抗酸化剤、矯味矯臭剤、呈味剤、乳化・可溶化・分散剤、安定剤、ｐＨ調節剤、着色料、香料、甘味料、酸味料などから選ばれる何れか１種又は２種以上を、適量含有させることも随意である。 In addition to the above, for example, seeds such as wheat, buckwheat and corn, sweet potato starch meal, okara, soybean oil extract residue, beer residue, bagasse residue, rice bran, bran and other plants Animal feed materials, animal feed materials such as fish meal, whole milk and skim milk, feed materials such as feed yeast, and vitamin B ₁ , vitamin B ₂ , vitamins Bioflavonoids such as B ₆ , vitamin B ₁₂ , ascorbic acid, vitamin E, rutin, hesperidin, naringin, derivatives of these vitamins and flavonoids, α-lipoic acid, amino acids, CoQ10 (coenzyme Q10), adenosine inosine And their derivatives, their monophosphate, diphosphate, or triphosphate Nucleic acid-related substances such as Ito, polyphenol components such as propolis and catechin, minerals such as calcium, magnesium, deep sea water, dietary fiber, antibacterial agent, antiviral agent, bactericidal agent, intestinal agent, hormone agent, nutrient agent, enzyme Agent, dietary fiber, photosensitizer, excipient, binder, coating agent, lubricant, disintegrant, extender, antioxidant, flavoring agent, flavoring agent, emulsifying / solubilizing / dispersing agent, stabilizer It is also optional to add an appropriate amount of any one or more selected from pH adjusters, colorants, flavors, sweeteners, acidulants and the like.

本発明の免疫調節剤やそれを配合した組成物は、その形状を問わず、例えば、液状、ペースト、半固状、固状、粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤などの何れの形状であってもよく、そのままで、又は、必要に応じて、増量剤、賦形剤、結合剤などと混合して、顆粒、球状、短棒状、板状、立方体、錠剤など各種形状に成型して使用することも随意である。   The immunomodulating agent of the present invention and the composition containing the same may be any shape such as liquid, paste, semi-solid, solid, powder, granule, tablet, capsule, etc., regardless of its shape. It can be used as it is or mixed with extenders, excipients, binders, etc. as necessary, and molded into various shapes such as granules, spheres, short bars, plates, cubes, tablets, etc. It is also optional.

本発明の免疫調節剤の１日当たりの摂取量は、所期の作用効果が得られるのであれば、特に制限はないものの、これに含まれるオーレオバシディウム菌の菌体の摂取量として、菌体の乾燥質量で、動物のｋｇ・体重／日当たり０．０５ｇ乃至２５ｇ（湿菌体として、０．５ｇ乃至２５０ｇに相当）とするのが望ましく、ｋｇ・体重／日当たり１ｇ乃至１０ｇ（湿菌体として、１０ｇ乃至１００ｇに相当）が特に望ましい。乾燥質量として、ｋｇ・体重／日当たり０．０５ｇよりも少ない摂取量では、免疫調節効果が得られず、ｋｇ・体重／日当たり２５ｇを超える量を摂取しても、摂取量に見合う程の免疫調節効果は望めない。また、その摂取時期は、本発明の所期の作用効果が得られるのであれば、制限はなく、通常は、対象とする動物に飼料を与える時期に使用され、とりわけ、授乳期や離乳直後の哺乳動物に与えると、腸内の有害微生物の増殖を抑制し、動物の食欲を増進して、その生育を促進し、卵や肉など生産性を向上すると共に、それらの品質の向上に著効を発揮するので、望ましい。また、本発明の免疫調節剤は、整腸作用も有していることから、下痢や軟便の改善や、糞便の臭気を低減することもできる。本発明の免疫調節剤は、毎日摂取させてもよく、一定（２日乃至７日に１回程度）の間隔をあけてもよい。また、一度に１日の必要量を摂取させても、複数回に分けて摂取させてもよい。さらに、ＩＦＮ−αの経口剤のような、飼育用動物の免疫系に作用して免疫能を高める機能を有する薬剤や、整腸剤、抗生物質などと併用することも随意である。   The daily intake of the immunomodulator of the present invention is not particularly limited as long as the desired action and effect can be obtained, but as an intake of the cells of Aureobasidium contained therein, The dry mass of the body is preferably 0.05 to 25 g / kg / body weight / day of the animal (corresponding to 0.5 to 250 g of wet cells), and 1 to 10 g / kg / weight / day (wet cells) As an equivalent of 10 to 100 g). When the intake amount is less than 0.05 g / kg / body weight / day, the immunoregulatory effect is not obtained, and even if the intake amount exceeds 25 g / kg / body weight / day, the immunoregulation is commensurate with the intake amount. The effect cannot be expected. Further, the intake time is not limited as long as the intended effect of the present invention can be obtained, and is usually used at the time of feeding the target animal. When given to mammals, it suppresses the growth of harmful microorganisms in the intestines, increases the appetite of the animals, promotes their growth, improves the productivity of eggs and meat, and is effective in improving their quality. Is desirable. In addition, since the immunomodulator of the present invention also has an intestinal regulating action, it can improve diarrhea and loose stool and reduce stool odor. The immunomodulator of the present invention may be ingested every day or at regular intervals (about once every 2 to 7 days). Moreover, even if it takes the required amount of the day at once, it may be divided into a plurality of times. Furthermore, it is optional to use together with a drug having a function of acting on the immune system of a breeding animal and enhancing immunity, such as an oral preparation of IFN-α, an intestinal regulating agent, an antibiotic and the like.

本発明の免疫調節剤の組成物への配合量については、免疫調節効果を発揮できる量であれば、対象となる組成物のテクスチャーなどに大きな変化を及ぼさない限り、特に制限はなく、通常は、組成物の総質量に対して、オーレオバシディウム菌の菌体を、菌体の乾燥質量に換算して、約０．０５質量％乃至２５質量％配合（以下、本明細書では特に断らない限り、質量％を「％」と表記する。）したものが適しており、望ましくは約０．１％乃至１０％配合したものが好適であり、約０．５％乃至５％配合したものが特に望ましい。組成物の総質量に対して、添加量が０．０５％より少ないと、免疫調節作用が発揮できない場合がある。なお、本発明でいう菌体の乾燥質量とは、真空乾燥した菌体の質量をいい、菌体の湿質量とは培養液から遠心により分離した菌体の質量をいう。   The amount of the immunomodulating agent of the present invention to be added to the composition is not particularly limited as long as it does not significantly change the texture of the composition of interest, as long as it is an amount capable of exerting an immunomodulatory effect. In addition, about 0.05 to 25% by mass of the cell of Aureobasidium is converted to the dry mass of the cell with respect to the total mass of the composition (hereinafter specifically referred to in this specification). Unless otherwise specified, the mass% is expressed as “%”.), Preferably about 0.1% to 10%, and about 0.5% to 5% Is particularly desirable. If the added amount is less than 0.05% with respect to the total mass of the composition, the immunomodulatory action may not be exhibited. In addition, the dry mass of the microbial cell as used in the field of this invention means the mass of the microbial cell dried in vacuum, and the wet mass of a microbial cell means the mass of the microbial cell isolate | separated from the culture solution by centrifugation.

本発明の免疫調節剤は、目的の組成物が完成するまでの工程で、或いは、完成品に対して、含有せしめればよく、その具体的な方法としては、例えば、混和、混捏、溶解、融解、分散、懸濁、乳化、浸透、晶出、散布、塗布、付着、噴霧、被覆、注入、浸漬、固化などの１種又は２種以上の公知の方法の組み合わせが適宜に選ばれる。   The immunomodulator of the present invention may be contained in the process until the target composition is completed or in the finished product. Specific methods thereof include, for example, mixing, kneading, dissolving, One or a combination of two or more known methods such as melting, dispersion, suspension, emulsification, infiltration, crystallization, spraying, application, adhesion, spraying, coating, pouring, dipping, and solidification are appropriately selected.

本発明の免疫調節剤は、動物の粘膜部位における免疫すなわち、腸管などの消化管や呼吸器系器官での分泌型ＩｇＡの産生を調節することから、肝炎ウイルス、ロタウイルス、インフルエンザウイルス、ニューカッスル病ウイルスをはじめとするウイルス、コレラ菌、赤痢菌、サルモネラ菌、病原性大腸菌、腸炎ビブリオなどの細菌、条虫、吸虫、ミクロフィラリアなどの寄生虫などの腸内や呼吸器への感染乃至増殖を、抑制乃至阻止し、これらの有害生物に起因する動物の疾患を予防乃至治癒することができる。また、本発明の免疫調節剤は、ＩｇＥ産生調節能を併せ持っているので、食品や花粉などに由来するアレルゲンに起因する動物のアレルギー症状の改善にも著効を発揮する。従って、本発明の免疫調節剤を摂取させることにより、動物の健康の維持・改善を図り、幼畜の歩留まりや、肥育効果を向上させると共に、乳、卵などの生産性を向上させることができる。   The immunomodulator of the present invention regulates immunity in mucosal regions of animals, that is, production of secretory IgA in the digestive tract such as the intestine and respiratory organs, so that hepatitis virus, rotavirus, influenza virus, Newcastle disease Viruses and other viruses, bacteria such as Vibrio cholerae, Shigella, Salmonella, pathogenic Escherichia coli, Vibrio parahaemolyticus, parasites such as tapeworms, flukes, microfilariae, etc. It can suppress or prevent and prevent or cure animal diseases caused by these pests. In addition, since the immunomodulator of the present invention has the ability to regulate IgE production, it is also effective in improving allergic symptoms in animals caused by allergens derived from foods, pollen and the like. Therefore, by ingesting the immunomodulator of the present invention, it is possible to maintain and improve the health of animals, improve the yield and fattening effect of young animals, and improve the productivity of milk, eggs and the like. .

以下、実験に基づいて、本発明をさらに詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on experiments.

＜実験１＞
＜オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体を経口摂取した場合のＩｇＡ産生に及ぼす影響
＜オーレオバシディウム菌の菌体を配合した飼料の調製＞
日本国特許第３２３２４８８号公報に記載された方法に基づき、ジャーファーメンターに、酸糖化水飴（ＤＥ４３）１５質量部、ペプトン０．２質量部、リン酸水素２カリウム０．２質量部、塩化ナトリウム０．２質量部、硫酸マグネシウム・７水和物０．２質量部、硫酸鉄・７水和物０．００１質量部に、適量の水を加えて撹拌・溶解し、全量を１００質量部として、栄養培地を調製した。これを、常法通り、１２０℃、２０分間加圧滅菌し、約２７℃に冷却後、無菌的にオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）を植菌して、塩酸又は水酸化ナトリウムの添加により、ｐＨを調整しつつ、通気撹拌しながら１２０時間培養した。培養終了後、培養液を遠心分離し、オーレオバシディウム菌の菌体を回収した。これらの菌体を洗浄するために、再度、水に懸濁した後、遠心分離して菌体を回収し、試験標品１とした。この試験標品１を、常法により、１２０℃、２０分間加圧滅菌して、オーレオバシディウム プルランスの死菌体からなる試験標品２を調製した。また、上記オーレオバシディウム プルランスの培養液に濾過助剤として珪藻土（白山工業株式会社販売、商品名「ゼムライトスーパーＭ」）を加えて、常法により、濾過して、菌体と珪藻土からなる標品を回収した。この標品を、再度水に懸濁後、濾過し、試験標品３（珪藻土中にオーレオバシディウム プルランスの生菌体を乾燥質量で２０％含有）とした。この試験標品３を、常法により、１２０℃、２０分間加圧滅菌して試験標品４を調製（オーレオバシディウム プルランスの死菌体を乾燥質量で２０％含有）した。これら４種類の試験標品を、それぞれ、乾燥質量で、０．１％となるように、市販のマウス用固形飼料に添加して、４種類の飼料を調製した。なお、試験標品中の菌体の乾燥質量は、培養終了後の培養液の一部を採取して、遠心分離により菌体と培養上清を分離し、この菌体を真空乾燥して、質量を測定して、培養液の単位容積当たりに含まれる乾燥菌体質量に基づき、計算により求めた。
＜対照を配合した飼料の調製＞
上記試験標品とは別に、飼料効果があることが報告されているビフィドバクテリウム ビフィダムを、特許文献３に記載の試験例１の方法に基づいて培養し、培養液を、遠心分離して、その菌体と培養上清を分離・採取した。さらに、その菌体については、常法により、１２０℃で２０分間加圧滅菌して、その死菌体標品を調製した（対照１）。このビフィダムの死菌体１質量部とあらかじめ水に懸濁して濾過した珪藻土４質量部とを均質に撹拌混合したものを調製した（対照２）。対照１又は２の何れかを、乾燥質量で、０．１％となるように、市販のマウス用固形飼料に添加して、２種類の飼料を調製した。さらに、ビフィドバクテリウム ビフィダムの培養上清（対照３）、及び、オーレオバシディウム菌の菌体の調製の項で調製したオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の培養上清（対照４）を、それぞれ、水で透析した後、濃縮して、固形物換算で、０．５％となるようにマウス用固形飼料に添加して、２種類の飼料を調製した。また、特公平６−９２４４１号公報の実施例２に記載の方法に基づき、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）を培養して、その培養上清を採取し、これを濃縮、精製して、免疫賦活効果があるといわれているオーレオバシラン（β−Ｄ−グルカン）の粉末を調製し（対照５）、これをＰＢＳで溶解し、後述のＢＡＬＢ／ｃマウスに対して、その０．２ｍｌの摂取で、０．５ｍｇ／ｋｇ・体重／匹となるよう希釈したオーレオバシランのＰＢＳ溶液を調製した。
＜試験方法＞
オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体を経口摂取した場合のＩｇＡ産生に及ぼす影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、６週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、表１に示す、上記の４種類のオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体標品（試験標品１乃至４）の何れか、又は、２種類のビフィドバクテリウム ビフィダムの死菌体（対照１又は２）の何れかを添加した飼料の何れかを、各群１０匹のマウスに与えて、２週間飼育した。さらに、上記ビフィドバクテリウム ビフィダムの培養上清（対照３）又はオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の培養上清（対照４）の何れかを添加して調製した飼料の何れかを、各群１０匹のマウスに与えて、２週間飼育した。オーレオバシラン（β−Ｄ−グルカン）（対照５）のＰＢＳ溶液の場合のみ、１０匹のマウスに、毎日、ゾンデを使用して口腔内に直接投与して、２週間飼育した。また、市販のマウス用固形飼料のみ（対照６）を、１０匹のマウスに与えて２週間飼育した。これらの試験標品若しくは対照の何れかを添加した飼料を、２週間、毎日摂取させた翌日に、マウスから、採糞、採血した。採取したマウスの糞中及び血液（血清）中のＩｇＡ量を、抗マウスＩｇＡ抗体を使用した酵素抗体法により測定して、試験標品又は各対照を添加した飼料を摂取させたマウスの糞中又は血中（血清中）のＩｇＡ量を、なにも添加していない市販のマウス用固形飼料のみ（対照６）を摂取させたマウスの糞中又は血中（血清中）のＩｇＡ量を１００とする相対値（％）として、表１に示す。 <Experiment 1>
<Effects on Oral Ingestion of Aureobasidium Pullulans (IFO 6353) Bacteria <Preparation of Feed Containing Aureobasidium Bacteria>
Based on the method described in Japanese Patent No. 3322488, a jar fermenter was charged with 15 parts by mass of acid saccharified starch syrup (DE43), 0.2 parts by mass of peptone, 0.2 parts by mass of dipotassium hydrogen phosphate, sodium chloride. Add 0.2 part by weight, 0.2 part by weight of magnesium sulfate heptahydrate, 0.001 part by weight of iron sulfate heptahydrate, add an appropriate amount of water, stir and dissolve, and make the total amount 100 parts by weight A nutrient medium was prepared. This was autoclaved at 120 ° C. for 20 minutes as usual, cooled to about 27 ° C., aseptically inoculated with Aureobasidium pullulans (IFO 6353), and added with hydrochloric acid or sodium hydroxide. The mixture was cultured for 120 hours with aeration and stirring while adjusting the pH. After completion of the culture, the culture solution was centrifuged to recover the cells of Aureobasidium. In order to wash these cells, the cells were suspended again in water and then centrifuged to collect the cells, which was designated as test sample 1. This test sample 1 was autoclaved at 120 ° C. for 20 minutes by a conventional method to prepare a test sample 2 composed of dead cells of Aureobasidium pullulans. In addition, diatomaceous earth (sold by Hakusan Kogyo Co., Ltd., trade name “Zemlite Super M”) as a filter aid is added to the culture medium of the above Aureobasidium pullulans, filtered by a conventional method, and from bacterial cells and diatomaceous earth. The resulting specimen was collected. This sample was suspended again in water and filtered to obtain a test sample 3 (containing 20% by weight of live Aureobasidium pullulans in diatomaceous earth). This test sample 3 was autoclaved at 120 ° C. for 20 minutes by a conventional method to prepare test sample 4 (containing 20% of dead cells of Aureobasidium pullulans by dry mass). These four types of test specimens were added to a commercially available mouse solid feed so that the dry mass would be 0.1% to prepare four types of feed. In addition, the dry mass of the microbial cells in the test sample is obtained by collecting a part of the culture solution after completion of the culture, separating the microbial cells and the culture supernatant by centrifugation, and vacuum-drying the microbial cells, The mass was measured and obtained by calculation based on the dry cell mass contained per unit volume of the culture solution.
<Preparation of feed containing control>
Bifidobacterium bifidum, which is reported to have a feed effect separately from the above test preparation, is cultured based on the method of Test Example 1 described in Patent Document 3, and the culture solution is centrifuged. The bacterial cells and culture supernatant were separated and collected. Further, the cells were sterilized by autoclaving at 120 ° C. for 20 minutes by a conventional method to prepare dead cell samples (Control 1). A mixture prepared by uniformly stirring and mixing 1 part by mass of this dead cell of bifidum and 4 parts by mass of diatomaceous earth previously suspended in water and filtered (control 2) was prepared. Two types of feeds were prepared by adding either Control 1 or 2 to a commercially available mouse chow so that the dry mass was 0.1%. Furthermore, the culture supernatant of Bifidobacterium bifidum (Control 3) and the culture supernatant of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) prepared in the section on preparation of Aureobasidium cells (Control 4) Each of these was dialyzed with water, concentrated, and added to a solid feed for mice so as to be 0.5% in terms of solid matter to prepare two types of feed. Further, based on the method described in Example 2 of JP-B-6-92441, Aureobasidium pullulans (IFO 6353) was cultured, and the culture supernatant was collected, concentrated and purified, Aureobasilane (β-D-glucan) powder, which is said to have an immunostimulatory effect, was prepared (Control 5), dissolved in PBS, and 0.2 ml of the BALB / c mouse described below. A solution of aureobasilane in PBS diluted to 0.5 mg / kg · body weight / animal was obtained.
<Test method>
A test for examining the effect of orally ingesting Aureobasidium pullulans (IFO 6353) on IgA production was performed as follows. That is, 6 week-old female BALB / c mice, any of the above-mentioned four kinds of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) cell preparations (test preparations 1 to 4) shown in Table 1, or Any of the two types of Bifidobacterium bifidum dead cells (Control 1 or 2) was added to any of the 10 mice in each group and reared for 2 weeks. Further, each of the feeds prepared by adding either the above Bifidobacterium bifidum culture supernatant (Control 3) or the culture supernatant of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) (Control 4), Groups of 10 mice were given and raised for 2 weeks. Only in the case of PBS solution of aureovasilane (β-D-glucan) (control 5), 10 mice were administered directly into the oral cavity daily using a sonde and reared for 2 weeks. Further, only commercially available mouse chow (control 6) was given to 10 mice and reared for 2 weeks. Feces and blood samples were collected from mice on the day following the intake of either of these test preparations or controls for 2 weeks. The amount of IgA in the collected mouse feces and blood (serum) was measured by an enzyme antibody method using an anti-mouse IgA antibody, and in the feces of mice fed with a test sample or a feed supplemented with each control. Alternatively, the amount of IgA in the blood (serum) is 100, the amount of IgA in the feces or blood (serum) of mice fed with only commercially available mouse chow (control 6) without any addition. The relative values (%) are shown in Table 1.

表１から明らかなように、４種類のオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体標品（試験標品１乃至４）を添加した飼料を摂取させたマウスでは、市販のマウス用固形飼料（対照６）のみで飼育したマウスと比較して、糞中及び血中のＩｇＡ量が増加し、その増加率は、糞中のＩｇＡの方が高かった。また、増加率の程度で比較すると、オーレオバシディウム プルランスの生菌体を添加した飼料と死菌体を添加した飼料の摂取（試験標品１又は２を添加した飼料を摂取させた群間、或いは、試験標品３又は４を添加した飼料を摂取させた群間）ではほとんど差が認められなかったものの、珪藻土を含む菌体を添加した飼料を摂取させた場合には、菌体のみを添加した飼料を摂取させた場合よりも（試験標品１又は３を添加した飼料を摂取させた群間、或いは、試験標品２又は４を添加した飼料を摂取させた群間）、ＩｇＡの産生量が増強（約１．５倍）された。これに対して、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）由来のβ−Ｄ−グルカン（対照５）を摂取させた場合には、市販のマウス用固形飼料のみ（対照６）で飼育したマウスと比較して、糞中のＩｇＡ量のわずかな増加が認められたものの、ビフィドバクテリウム ビフィダムの死菌体（対照１）、当該死菌体と珪藻土との混合物（対照２）、当該菌体の培養上清（対照３）、又は、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の培養上清（対照４）を添加した飼料を摂取させた場合には、何れの場合にも、市販の固形飼料のみ（対照６）を摂取させた場合と、ＩｇＡの産生量に差は認められなかった。   As is apparent from Table 1, in mice fed with a diet prepared by adding 4 types of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) bacterial preparations (test preparations 1 to 4), a commercially available solid chow for mice Compared with the mouse bred with (Control 6) alone, the amount of IgA in feces and blood increased, and the rate of increase in IgA in feces was higher. In addition, when compared with the degree of increase, intake of feed to which live cells of Aureobasidium pullulans were added and feed to which dead cells were added (between groups ingested feed to which test sample 1 or 2 was added) Or, there was almost no difference between the groups to which the feed containing the test sample 3 or 4 was added), but when the feed containing diatomaceous earth was added, only the cells IgA (between groups fed with feed containing test sample 1 or 3 or between groups fed with feed containing test sample 2 or 4) Was increased (about 1.5 times). In contrast, when β-D-glucan (control 5) derived from Aureobasidium pullans (IFO 6353) was ingested, it was compared with a mouse bred only with a commercially available mouse chow (control 6). Although a slight increase in the amount of IgA in feces was observed, dead cells of Bifidobacterium bifidum (control 1), a mixture of the dead cells and diatomaceous earth (control 2), When the feed containing the culture supernatant (control 3) or the culture supernatant (control 4) of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) was fed, in each case, only the commercially available solid feed No difference was observed in the amount of IgA produced when (Control 6) was ingested.

この結果は、オーレオバシディウム プルランスの菌体は、経口摂取により、動物の腸管内及び血液中のＩｇＡ量を効果的に増強する免疫調節剤として利用できること、その増強効果は、珪藻土との併用により、増強することができることを物語っている。また、オーレオバシディウム菌の菌体は、当該菌体に由来するβ−Ｄ−グルカンの摂取よりも優れた免疫調節作用を有していることを物語っている。   This result shows that the cells of Aureobasidium pullulans can be used as an immunomodulator that effectively enhances the amount of IgA in the intestinal tract and blood of animals by ingestion, and the enhancement effect is in combination with diatomaceous earth. Tells you that it can be enhanced. Moreover, it shows that the cells of Aureobasidium have an immunomodulatory action superior to the intake of β-D-glucan derived from the cells.

＜実験２＞
＜オーレオバシディウム菌の菌体を経口摂取した場合のＩｇＡ産生量及びリンパ球からのＩＬ−４産生に及ぼす影響＞
実験１で、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体に免疫調節能のあることが判明したので、この菌株以外のオーレオバシディウム菌の菌体を経口摂取した場合のＩｇＡ産生及びリンパ球からのＩＬ−４産生に及ぼす影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、実験１の方法に基づき、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ４８７５）、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ４４６４）、オーレオバシディウム マンソーニ（ＩＦＯ ９２３３）、オーレオバシディウム ファーメンタンス バル ファーメンタンス（ＩＦＯ ６４１０）及びオーレオバシディウム ファーメンタンス バル フスカ（ＩＦＯ ６４０）を、それぞれ培養し、それぞれの菌株について、実験１で調製したものと同様に、試験標品１乃至４を調製した。なお、各菌株に珪藻土を加えて調製した試験標品３及び４は、何れも、乾燥質量で、菌体を２０±２％含有するように調製した。これらの試験標品の何れか１種を、６週齢雌性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、オーレオバシディウム菌として、乾燥質量で、０．１％となるように添加した飼料を与え、２週間飼育した（従って、試験標品３及び４は、乾燥質量で０．５％となるように飼料に添加）。また、対照として、試験標品を添加していない飼料（対照１）、或いは、珪藻土を水に懸濁して濾過したものを０．５％添加した飼料（対照２）を与えて２週間飼育した。試験には、各群１０匹のマウスを使用した。試験標品若しくは対照を、２週間毎日摂取させた翌日に、これらのマウスから、採糞、採血後、脾臓を採取し、常法により、１×１０^６細胞／ｍｌの単細胞の懸濁液を調製した。これらの懸濁液に、リポポリサッカライド（以下、「ＬＰＳ」と略記する。）を５μｇ／ｍｌとなるように、又は、抗マウスＣＤ３抗体を３．５μｇ／ｍｌとなるように添加して、３７℃で４８時間培養後、培養上清を回収して、ＩＬ−４の産生量を、ＩＬ−４に対する抗体を使用した酵素抗体法により測定した。また、これらのマウスの糞中及び血清中のＩｇＡ量を、マウスＩｇＡに対する抗体を使用した酵素抗体法により測定した。さらに、採取した糞を、常法により、適宜の濃度に希釈し、ＢＣＰ寒天プレートを用いて、３５℃で２日間混釈培養し、プレート当たり３０個乃至３００個のハローが認められたプレートのコロニー数をカウントして、酸生成菌数を求めた。試験標品又は対照２摂取させたマウスのＩｇＡ量、ＩＬ−４産生量、酸生産菌数を、対照１で飼育したマウスの各々の項目の測定値を１００とする相対値（％）として、表２に示す。 <Experiment 2>
<Effects on the production of IgA and the production of IL-4 from lymphocytes when oral cells of Aureobasidium are ingested>
In Experiment 1, it was found that cells of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) have immunoregulatory properties. Therefore, IgA production and lymph when ingesting cells of Aureobasidium other than this strain were orally ingested. The test which investigates the influence which it has on IL-4 production from a sphere was performed as follows. That is, based on the method of Experiment 1, Aureobasidium pullance (IFO 4875), Aureobasidium pullance (IFO 4464), Aureobasidium mansoni (IFO 9233), Aureobasidium fermentans Val fermentans (IFO 6410) and Aureobasidium fermentans Valfuska (IFO 640) were cultured, and test specimens 1 to 4 were prepared in the same manner as those prepared in Experiment 1 for each strain. Test preparations 3 and 4 prepared by adding diatomaceous earth to each strain were prepared so as to contain 20 ± 2% of bacterial cells by dry mass. Any one of these test preparations was fed to a 6-week-old female BALB / c mouse as aureobasidium, with a dry mass of 0.1%, and fed for 2 weeks (Thus, test specimens 3 and 4 were added to the feed so that the dry mass would be 0.5%). In addition, as a control, a feed containing no test preparation (Control 1) or a feed containing 0.5% diatomaceous earth suspended in water and filtered (Control 2) was fed for 2 weeks. . Ten mice were used for each test. The day after the test specimen or control was ingested daily for 2 weeks, the spleen was collected from these mice after collection of feces and blood, and a single cell suspension of 1 × 10 ⁶ cells / ml was prepared by a conventional method. Prepared. To these suspensions, lipopolysaccharide (hereinafter abbreviated as “LPS”) was added to 5 μg / ml, or anti-mouse CD3 antibody was added to 3.5 μg / ml, After culturing at 37 ° C. for 48 hours, the culture supernatant was collected, and the production amount of IL-4 was measured by an enzyme antibody method using an antibody against IL-4. Further, the amount of IgA in feces and serum of these mice was measured by an enzyme antibody method using an antibody against mouse IgA. Further, the collected feces were diluted to an appropriate concentration by a conventional method, and cultured in a BCP agar plate at 35 ° C. for 2 days, and 30 to 300 halos per plate were observed. The number of colonies was counted to determine the number of acid-producing bacteria. As a relative value (%) where the measured value of each item of the mouse bred in Control 1 is 100, the IgA amount, IL-4 production amount, and number of acid-producing bacteria of the mouse ingested in the test preparation or Control 2 It shows in Table 2.

＜ＩｇＡ量及び酸生成菌数＞
表２から明らかなように、５種類のオーレオバシディウム菌を摂取させた場合には、何れの場合も、マウスの糞中のＩｇＡ量、及び、糞中の酸生成菌数は、通常の餌のみで飼育したマウス（対照１）及び珪藻土のみを添加した餌を摂取させたマウス（対照２）よりも増強された。その増強率の程度は、何れの菌株においても、試験標品１及び試験標品２よりも、試験標品３及び試験標品４の方が強く、試験標品１と試験標品２と、或いは、試験標品３と試験標品４とはほぼ同程度であった。さらに、オーディオバシディウム プルランスの菌体と珪藻土との混合物を摂取させた場合には、弱いながら血液中のＩｇＡ量も増加した。また、試験に使用した５種類のオーレオバシディウム菌について、ＩｇＡ産生増強率及び酸生成菌数の増強率の強さで比較すると、２種類のオーレオバシディウム プルランスの菌体を摂取した場合の方が、他の３種類のオーレオバシディウム菌の菌体を摂取させた場合よりも高かった。
＜リンパ球からのＩＬ−４産生＞
ＬＰＳ或いは抗ＣＤ３抗体刺激による脾細胞からのＩＬ−４産生は、何れの試験標品を摂取させた場合にも、通常の餌のみで飼育したマウス（対照１）及び珪藻土のみ添加した餌を摂取させたマウス（対照２）の脾細胞を刺激した場合に比べて抑制された。その抑制の強さの程度は、試験標品１及び試験標品２よりも、試験標品３及び試験標品４の方が強く、試験標品１と試験標品２とはほぼ同程度であり、試験標品３と試験標品４とはほぼ同程度であった。また、試験に使用した５種類のオーレオバシディウム菌について、ＩＬ−４産生の増強率についてみると、２種類のオーレオバシディウム プルランスの菌体を摂取した場合の方が、他の３種類のオーレオバシディウム菌の菌体を摂取させた場合よりも、強い抑制が認められた。 <IgA amount and acid-producing bacteria count>
As can be seen from Table 2, when 5 types of Aureobasidium were ingested, in any case, the amount of IgA in the feces of the mouse and the number of acid-producing bacteria in the feces were normal. It was enhanced over mice fed with food alone (Control 1) and mice fed with food supplemented with diatomaceous earth alone (Control 2). The degree of the enhancement rate is stronger in the test sample 3 and the test sample 4 than in the test sample 1 and the test sample 2 in any strain, Alternatively, the test specimen 3 and the test specimen 4 were approximately the same level. Furthermore, when a mixture of cells of bacterium Bacillus pullulans and diatomaceous earth was ingested, the amount of IgA in the blood also increased although it was weak. In addition, when the five types of Aureobasidium bacteria used in the test were compared in terms of the strength of the IgA production enhancement rate and the increase rate of the number of acid producing bacteria, when two types of Aureobasidium pullulans cells were ingested This was higher than when the other three types of Aureobasidium were ingested.
<IL-4 production from lymphocytes>
IL-4 production from spleen cells stimulated with LPS or anti-CD3 antibody is ingested with mice fed only with normal diet (control 1) and diet supplemented only with diatomaceous earth, when any test sample is ingested It was suppressed as compared with the case where the spleen cells of the mouse (control 2) were stimulated. The degree of suppression is higher in test specimen 3 and test specimen 4 than in test specimen 1 and test specimen 2, and test specimen 1 and test specimen 2 are approximately the same. Yes, the test specimen 3 and the test specimen 4 were almost the same level. In addition, regarding the five types of Aureobasidium bacteria used in the test, regarding the enhancement rate of IL-4 production, the other three kinds of cells were ingested with two types of Aureobasidium pullulans cells. Stronger suppression was observed than when the cells of Aureobasidium were ingested.

これらの結果は、マウスにオーレオバシディウム菌の菌体を摂取せしめることにより、糞中及び血液中へのＩｇＡの分泌を増強すると共に、腸内の酸生成菌数を増加させて、腸内の免疫を増強すると共に、腸内環境を整えることができることを物語っている。また、マウスにオーレオバシディウム菌の菌体を摂取せしめることにより、ＩｇＥ抗体の産生を増強する作用を有するＩＬ−４の産生を抑制することから、アレルギーを抑制することができることを物語っている。さらに、これらのＩｇＡやＩｇＥの産生に関わる免疫調節作用は何れも、オーレオバシディウム菌の菌体を単独で摂取させた場合よりも、珪藻土に混合したものを摂取させた方が効果的であること、及び、生菌と死菌とはほぼ同等の効果を有していることを物語っている。また、これらの効果は、オーレオバシディウム菌のなかでもオーレオバシディウム プルランスで特に強いことを物語っている。 These results show that by ingesting mice with Aureobasidium cells, secretion of IgA into feces and blood is enhanced, and the number of acid-producing bacteria in the intestine is increased. It tells you that you can enhance the immunity of your body and prepare the intestinal environment. In addition, by ingesting mice with Aureobasidium cells, the production of IL-4, which has the effect of enhancing the production of IgE antibodies, is suppressed, which indicates that allergies can be suppressed. . Furthermore, all of these immunoregulatory effects related to the production of IgA and IgE are more effective when they are mixed with diatomaceous earth than when Aureobasidium cells are ingested alone. It shows that there are almost the same effects as live bacteria and dead bacteria. In addition, these effects, tells us that particularly strong in Wow Leo Basi di Umm pullulans Among Aureobasidium bacteria.

＜実験３＞
＜オーレオバシディウム プルランスの菌体を経口摂取した場合のＩｇＥ産生及びリンパ球からのＩＬ−４産生に及ぼす影響＞
実験２で、オーレオバシディウム菌の菌体を経口摂取した際に、ＩＬ−４の産生が抑制されたことから、ＩｇＥ産生も抑制される可能性があったので、オーレオバシディウム菌の菌体を経口摂取した場合の抗原特異的なＩｇＥ産生及びリンパ球からのＩＬ−４産生に及ぼす影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、８週齢雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、実験１で調製した、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体を使用した試験標品１乃至４を、各々リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に懸濁して、オーレオバシディウム プルランスの菌体を乾燥質量として５ｍｇ／０．２ｍｌ／匹／日となるように、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。対照として、０．２ｍｌのＰＢＳを、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。試験には、各群１０匹のマウスを使用した。試験標品又は対照投与開始、７日目及び２１日目に、感作抗原として２０μｇの卵白アルブミン（ＯＶＡ）と２ｍｇの水酸化アルミニウム（アラムアジュバント）を含有する水溶液を、各マウスの腹腔内に投与した。試験標品又は対照投与開始２４日目に、尾静脈から採血を行い、２８日目に、脾臓を摘出した。この脾臓から調製した、１×１０^６細胞／ｍｌの単細胞の懸濁液に、抗原として使用したＯＶＡを、３．５μｇ／ｍｌとなるように添加して、３７℃で４８時間培養後、培養上清を回収して、ＩＬ−４の産生量を、ＩＬ−４産生に対する抗体を使用した酵素抗体法により測定した。また、採血した血液の血清中の総ＩｇＥ量、及び、抗ＯＶＡ−ＩｇＥ抗体量を、マウスＩｇＥに対する抗体を使用した酵素抗体法により測定した。各群のマウスの測定値の平均を求め、各試験標品を摂取させたマウスのＩＬ−４の産生量及びＩｇＥ量を、対照を摂取させたマウスのＩＬ−４の産生量及びＩｇＥ量を１００とした相対値（％）として、表３に示す。 <Experiment 3>
<Effects of Oreobasidium pullulans cells orally ingested on IgE production and IL-4 production from lymphocytes>
In Experiment 2, when the cells of Aureobasidium were orally ingested, since production of IL-4 was suppressed, there was a possibility that IgE production could also be suppressed. A test was conducted as follows to examine the effect on antigen-specific IgE production and IL-4 production from lymphocytes when the cells were ingested orally. That is, test preparations 1 to 4 using the cells of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) prepared in Experiment 1 were mixed with phosphate buffered saline (PBS) in 8-week-old male BALB / c mice. The cells of Aureobasidium pullulans were administered once daily every day for 4 weeks in the stomach cavity using a sonde so that the dry mass of 5 mg / 0.2 ml / animal / day was obtained. As a control, 0.2 ml of PBS was administered into the stomach cavity using a sonde once daily for 4 weeks. Ten mice were used for each test. On the 7th and 21st day from the start of test preparation or control administration, an aqueous solution containing 20 μg of ovalbumin (OVA) and 2 mg of aluminum hydroxide (Alum adjuvant) as a sensitizing antigen was intraperitoneally injected into each mouse. Administered. On the 24th day from the start of the test preparation or the control administration, blood was collected from the tail vein, and on the 28th day, the spleen was removed. OVA used as an antigen was added to a suspension of 1 × 10 ⁶ cells / ml single cell prepared from this spleen so as to be 3.5 μg / ml, and cultured at 37 ° C. for 48 hours. The supernatant was collected, and the production amount of IL-4 was measured by an enzyme antibody method using an antibody against IL-4 production. Further, the total IgE amount and anti-OVA-IgE antibody amount in the serum of the collected blood were measured by an enzyme antibody method using an antibody against mouse IgE. The average of the measured values of each group of mice was determined, and the amount of IL-4 produced and the amount of IgE in the mice fed with each test sample were determined. The amount of IL-4 produced and the amount of IgE in the mice fed with the control were determined. Table 3 shows relative values (%) of 100.

表３から明らかなように、ＯＶＡ刺激による脾細胞からのＩＬ−４産生、血液中の総ＩｇＥ、及び、抗ＯＶＡ−ＩｇＥ抗体は、何れの試験標品を摂取させた場合にも、通常の餌のみで飼育したマウスに比べて抑制された。その抑制率の強さの程度は、試験標品１及び試験標品２よりも試験標品３及び試験標品４の方が強く、試験標品１と試験標品２と、或いは、試験標品３と試験標品４とはほぼ同程度であった。これらの結果は、オーレオバシディウム プルランスの菌体を摂取することにより、アレルギーを効果的に抑制することができることを物語っている。また、このＩｇＥ産生を抑制する免疫調節作用は菌体をそのまま摂取するよりも、珪藻土と混合した形態で摂取する場合の方が強いこと、及び、生菌と死菌とはほぼ同等の効果を有していることを物語っている。   As can be seen from Table 3, IL-4 production from splenocytes by OVA stimulation, total IgE in blood, and anti-OVA-IgE antibody are normal when any test sample is ingested. It was suppressed compared to mice bred with food alone. The strength of the inhibition rate is higher for test specimen 3 and test specimen 4 than for test specimen 1 and test specimen 2, and for test specimen 1 and test specimen 2 or test specimen. The product 3 and the test sample 4 were almost the same level. These results indicate that allergy can be effectively suppressed by ingesting microbial cells of Aureobasidium pullulans. In addition, the immunoregulatory action that suppresses the production of IgE is stronger when ingested in a form mixed with diatomaceous earth than ingesting the cells as it is, and the effect of viable and dead bacteria is almost equivalent. It tells you that you have.

＜実験４＞
＜オーレオバシディウム プルランスの菌体を経口摂取した際の、菌体の摂取量の、免疫調節能に及ぼす影響＞
実験１乃至３において、オーレオバシディウム菌の菌体が免疫調節能を有することが確認されたので、その摂取量の免疫調節能に及ぼす影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、８週齢雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、実験１で調製した、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の菌体を使用した試験標品４（珪藻土中にオーレオバシディウム菌の死菌体を乾燥質量で２０％含有）を、表４に示す摂取量（菌体の乾燥質量として）となるように、試験試料の摂取量に応じて０．２ｍｌ乃至０．４ｍｌのＰＢＳに懸濁して毎日強制的に摂取させた。摂取は、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。なお、５０００ｍｇ／ｋｇ・体重／匹の投与の場合のみ、試験標品４を０．８ｍｌのＰＢＳに懸濁し、０．４ｍｌずつ、朝晩２回に分けて投与した。対照として、餌のみ（対照１）で飼育、若しくは、０．２ｍｌのＰＢＳ（対照２）を、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。試験には、各群１０匹のマウスを使用した。試験標品或いは対照を４週間投与した翌日に、採糞、採血後、脾臓を採取し、１×１０^６細胞／ｍｌの単細胞の懸濁液を調製した。血液中のＩｇＡ量、ＩｇＥ量、糞中の酸生成菌数、脾細胞をＬＰＳ刺激した際のＩＬ−４産生量を測定し、対照２又は試験標品４を投与した時の各測定項目の値を、対照１を投与した群の各測定項目の測定値を１００とした相対値として表４に示す。 <Experiment 4>
<Effects of oral intake of Aureobasidium pullulans cells on the immunoregulatory capacity of the cells>
In Experiments 1 to 3, since the cells of Aureobasidium were confirmed to have immunoregulatory ability, a test for examining the effect of the intake amount on the immunoregulatory ability was performed as follows. That is, test specimen 4 using dead cells of Aureobasidium pullans (IFO 6353) prepared in Experiment 1 on 8 weeks old male BALB / c mice (dead cells of Aureobasidium in diatomaceous earth) Is suspended in 0.2 ml to 0.4 ml of PBS according to the amount of intake of the test sample so that the amount of intake shown in Table 4 (as dry mass of the bacterial cells) is obtained. Ingested daily. Ingestion was administered once daily for 4 weeks in the stomach cavity using a sonde. Only in the case of administration of 5000 mg / kg · body weight / animal, the test sample 4 was suspended in 0.8 ml of PBS, and 0.4 ml was administered in two portions in the morning and evening. As a control, the animals were reared with food alone (Control 1), or 0.2 ml of PBS (Control 2) was administered once daily into the stomach cavity using a sonde for 4 weeks. Ten mice were used for each test. The day after the test preparation or control was administered for 4 weeks, the spleen was collected after collection of feces and blood, and a single cell suspension of 1 × 10 ⁶ cells / ml was prepared. The amount of IgA in blood, the amount of IgE, the number of acid-producing bacteria in feces, the amount of IL-4 produced when spleen cells were stimulated with LPS were measured, and each measurement item when control 2 or test sample 4 was administered The values are shown in Table 4 as relative values with the measured value of each measurement item of the group administered with Control 1 being 100.

表４から明らかなように、マウスにオーレオバシディウム プルランスの死菌体を、乾燥質量で、体重・ｋｇ／日当たり０．０５ｍｇ乃至２５００ｍｇ経口的に投与することにより、糞中のＩｇＡ量及び酸生成菌の菌数が、増加し、その増加は０．５ｍｇ乃至５００ｍｇの摂取で明確となり、５ｍｇ乃至５００ｍｇの投与でより顕著となった。また、オーレオバシディウム菌の菌体を、乾燥質量で、体重・ｋｇ／日当たり０．０５ｍｇ乃至２５００ｍｇ投与することにより、ＬＰＳの刺激による脾細胞からのＩＬ−４産生の抑制が観察され、その増加は０．５ｍｇ乃至５００ｍｇの投与で明確になり、５ｍｇ乃至５００ｍｇの投与でより顕著となった。そして、ＩＬ−４産生の抑制と併行して、血中のＩｇＥ抗体量が、乾燥質量で、体重・ｋｇ／日当たり、０．５ｍｇ乃至２５００ｍｇの投与で減少し、その減少は５ｍｇ乃至５００ｍｇの投与で顕著となった。この結果は、オーレオバシディウム菌の菌体を、乾燥質量で、体重・ｋｇ／日当たり０．０５ｍｇ乃至２５００ｍｇ経口摂取させることにより優れた免疫調節機能と整腸機能を発揮できることを物語っている。また、これらの機能は、０．５ｍｇ乃至５００ｍｇの摂取で明確となり、５ｍｇ乃至５００ｍｇの摂取でより顕著となることを物語っている。なお、５０００ｍｇの摂取でもＩｇＡ量の増加は認められたものの、その増強率は、０．０５ｍｇ乃至２５００ｍｇを摂取させた場合よりも遙かに低いため、５０００ｍｇの摂取では、その摂取量に見合うほどのＩｇＡ産生の増強効果は期待できないと判断した。   As is apparent from Table 4, the dead cells of Aureobasidium pullulans were orally administered to mice in a dry mass of 0.05 mg to 2500 mg per body weight / kg / day. The number of produced bacteria increased, and the increase became clear with ingestion of 0.5 mg to 500 mg, and became more prominent with administration of 5 mg to 500 mg. In addition, by administering 0.05 mg to 2500 mg of body cells of Aureobasidium per body weight / kg / day at a dry mass, suppression of IL-4 production from spleen cells by LPS stimulation was observed. The increase became clear with administration of 0.5 mg to 500 mg and became more prominent with administration of 5 mg to 500 mg. In parallel with the suppression of IL-4 production, the amount of IgE antibody in the blood is decreased by administration of 0.5 mg to 2500 mg per body weight / kg / day in terms of dry mass, and the decrease is caused by administration of 5 mg to 500 mg. It became remarkable. This result indicates that an excellent immunoregulatory function and intestinal function can be exhibited by ingesting 0.05 to 2500 mg of Aureobasidium cells per body weight / kg / day in a dry mass. In addition, these functions become clear when ingesting 0.5 mg to 500 mg, and indicate that they become more prominent when ingesting 5 mg to 500 mg. Although an increase in IgA amount was observed even when 5000 mg was ingested, the enhancement rate was much lower than when 0.05 mg to 2500 mg was ingested. It was judged that the effect of enhancing IgA production could not be expected.

＜実験５＞
＜オーレオバシディウム プルランスの菌体を経口摂取した場合の菌体と珪藻土との配合割合の、ＩｇＡ産生、ＩｇＥ産生及びリンパ球からのＩＬ−４産生に及ぼす影響＞
実験１で調製したオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の死菌体（試験標品２）１質量部を２０質量部の水に懸濁し、これに、珪藻土を適量加えて撹拌し、濾過して、オーレオバシディウム
プルランスの死菌体と珪藻土との混合割合が、表５に示す比率（乾燥質量比）となるように試験標品を調製した。これらの試験試料を、８週齢雄性ＢＡＬＢ／ｃマウスに、菌体摂取量として、乾燥質量で、１０ｍｇ／ｋｇ・体重／匹となるように、試験試料の摂取量に応じて０．２ｍｌ乃至０．４ｍｌのＰＢＳに懸濁して毎日強制的に摂取させた。摂取は、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。対照として、試験標品の調製に使用した珪藻土を、ＰＢＳに乾燥質量で５０ｍｇ／ｍｌとなるように懸濁した溶液を、０．２ｍｌ／匹（珪藻土を、乾燥質量で、１０ｍｇ／ｋｇ・体重／匹摂取）、ゾンデを用いて胃腔内に、毎日１回、４週間投与した。試験には、各群１０匹のマウスを使用した。試験標品或いは対照を４週間投与した翌日に、実験４と同様に、採糞、採血後、脾臓を採取し、１×１０^６細胞／ｍｌの単細胞の懸濁液を調製した。血液中のＩｇＡ量、ＩｇＥ量、糞中のＩｇＡ量、酸生成菌数、脾細胞をＬＰＳで刺激した際のＩＬ−４産生量を測定し、試験標品を投与した時の各測定項目の値を、対照を投与した群の各測定項目の測定値を１００とした相対値として表５に示す。 <Experiment 5>
<Effect of mixing ratio of microbial cells and diatomaceous earth when orally ingesting microbial cells of Aureobasidium pullulans on IgA production , IgE production and IL-4 production from lymphocytes>
1 part by mass of dead cells (test sample 2) of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) prepared in Experiment 1 is suspended in 20 parts by mass of water, and an appropriate amount of diatomaceous earth is added to this and stirred and filtered. Then, the test sample was prepared so that the mixing ratio of dead cells of Aureobasidium pullulans and diatomaceous earth became the ratio shown in Table 5 (dry mass ratio). These test samples were placed in 8-week-old male BALB / c mice in an amount of 0.2 ml or more depending on the amount of the test sample so that the dry cell mass would be 10 mg / kg · body weight / animal. It was suspended in 0.4 ml PBS and forcibly ingested daily. Ingestion was administered once daily for 4 weeks in the stomach cavity using a sonde. As a control, a solution obtained by suspending diatomaceous earth used for the preparation of a test sample in PBS to a dry mass of 50 mg / ml was 0.2 ml / animal (diatomaceous earth was 10 mg / kg · body weight by dry mass). Per animal) and administered once daily for 4 weeks into the stomach cavity using a sonde. Ten mice were used for each test. The day after the test specimen or control was administered for 4 weeks, the spleen was collected after collection of feces and blood as in Experiment 4, and a single cell suspension of 1 × 10 ⁶ cells / ml was prepared. The amount of IgA in blood, the amount of IgE, the amount of IgA in feces, the number of acid-producing bacteria, the amount of IL-4 produced when spleen cells were stimulated with LPS, and the measurement items when the test preparation was administered The values are shown in Table 5 as relative values with the measured value of each measurement item in the group to which the control was administered as 100.

表５から明らかなように、乾燥質量で、オーレオバシディウムの菌体と珪藻土との配合割合が、１：０．０１乃至１：２５の試験試料を、マウスに、体重・ｋｇ／日当たり、菌体摂取量として、乾燥質量で、１０ｍｇ、毎日経口的に投与することにより、糞中のＩｇＡ量及び酸生成菌の菌数が増加し、その増加は、１：０．１乃至１：２５の配合で明確になり、１：１乃至１：１０の配合割合の場合に特に顕著となった。また、乾燥質量で、オーレオバシディウム菌の菌体と珪藻土との配合割合が、１：０．０１乃至１：２５の試験試料を、マウスに、体重・ｋｇ／日当たり、菌体投与量として、乾燥質量で、１０ｍｇ、毎日経口的に投与することにより、血液中のＩｇＥ量及びＬＰＳ刺激による脾細胞からのＩＬ−４産生が抑制され、その抑制は、１：０．１乃至１：２５の配合割合のものの投与で明確になり、１：１乃至１：１０の配合割合の場合に特に顕著となった。この結果は、免疫調節剤としては、乾燥質量で、オーレオバシディウム菌の菌体と珪藻土との配合割合が、１：０．０１乃至１：２５のものが望ましく、１：０．１乃至１：２５の配合割合のものがより望ましく、１：１乃至１：１０の配合割合のものが特に望ましいことを物語っている。   As is clear from Table 5, a test sample with a dry mass and a mixing ratio of aureobasidium cells and diatomaceous earth of 1: 0.01 to 1:25 was given to a mouse per body weight / kg / day, By daily oral administration of 10 mg of dry cell mass daily, the amount of IgA in feces and the number of acid-producing bacteria increased, and the increase was from 1: 0.1 to 1:25. It became clear when the blending ratio was 1: 1 to 1:10. In addition, a test sample having a dry mass and a mixing ratio of Aureobasidium bacteria and diatomaceous earth of 1: 0.01 to 1:25 was given to a mouse as a bacterial cell dose per body weight / kg / day. In the dry mass, 10 mg orally administered daily suppresses the amount of IgE in blood and IL-4 production from spleen cells by LPS stimulation, and the suppression is from 1: 0.1 to 1:25. It became clear by administration of those having a mixing ratio of 1 to 1, and became particularly remarkable when the mixing ratio was 1: 1 to 1:10. As a result, it is desirable that the immunomodulating agent has a dry mass and a mixing ratio of Aureobasidium cells and diatomaceous earth is 1: 0.01 to 1:25, and 1: 0.1 to A ratio of 1:25 is more desirable, and a ratio of 1: 1 to 1:10 is particularly desirable.

以下、本発明について実施例を挙げて具体的に説明するが、本発明は何らこれらの実施例に限定されるものではない。   EXAMPLES Hereinafter, although an Example is given and this invention is demonstrated concretely, this invention is not limited to these Examples at all.

日本国特許第３２３２４８８号公報に記載された方法に基づき、ジャーファーメンターに、酸糖化水飴（ＤＥ４３）１５質量部、ペプトン０．２質量部、リン酸水素２カリウム０．２質量部、塩化ナトリウム０．２質量部、硫酸マグネシウム・７水和物０．２質量部、硫酸鉄・７水和物０．００１質量部を入れ、水に溶解して全量を１００質量部として、撹拌溶解して栄養培地を調製した。これを、常法通り、１２０℃、２０分間加圧滅菌し、約２７℃に冷却後、無菌的にオーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）を植菌して、塩酸又は水酸化ナトリウムの添加により、ｐＨ３．６乃至ｐＨ３．８に維持しつつ、通気撹拌しながら９６時間培養した。培養終了後、遠心により菌体と培養上清を分離した。この菌体を、洗浄するために、再度水に懸濁して、遠心分離により菌体を回収した。本品は、そのままで、常法により加圧滅菌して、及び／又は、常法により乾燥して、動物用の免疫調節剤として使用することができる。また、これらの免疫調節剤は、代用乳に添加して、或いは、飼料、餌料、ペットフードなどに配合して使用することができる。   Based on the method described in Japanese Patent No. 3322488, a jar fermenter was charged with 15 parts by mass of acid saccharified starch syrup (DE43), 0.2 parts by mass of peptone, 0.2 parts by mass of dipotassium hydrogen phosphate, sodium chloride. Put 0.2 parts by weight, 0.2 parts by weight of magnesium sulfate heptahydrate, 0.001 parts by weight of iron sulfate heptahydrate and dissolve in water to make 100 parts by weight. Nutrient medium was prepared. This was autoclaved at 120 ° C. for 20 minutes as usual, cooled to about 27 ° C., aseptically inoculated with Aureobasidium pullulans (IFO 6353), and added with hydrochloric acid or sodium hydroxide. While maintaining at pH 3.6 to pH 3.8, the cells were cultured for 96 hours with aeration and agitation. After completion of the culture, the cells and the culture supernatant were separated by centrifugation. In order to wash the cells, the cells were suspended again in water, and the cells were collected by centrifugation. This product can be used as an immunomodulator for animals as it is, autoclaved by a conventional method and / or dried by a conventional method. In addition, these immunomodulators can be used by adding to milk substitutes or by blending them in feed, feed, pet food and the like.

実施例１で調製した、オーレオバシディウム プルランス（ＩＦＯ ６３５３）の培養液に、活性炭と、濾過助剤として珪藻土（昭和化学工業株式会社販売、商品名「ラヂオライト」）を加えて、濾過することにより培養上清を除去し、乾燥質量で、珪藻土約７９％、菌体約２０％、活性炭約１％を含有する組成物を得た。この組成物を１２０℃で２０分間加圧滅菌して、オーレオバシディウム プルランスの死菌体を含む組成物を得た。これらの組成物は、そのままで、又は、常法により乾燥して、動物用の免疫調節剤として使用することができる。また、これらの免疫調節剤は、代用乳に添加して、或いは、飼料、餌料、ペットフードなどに配合して使用することができる。 Activated carbon and diatomaceous earth (sold by Showa Chemical Industry Co., Ltd., trade name “Radiolite”) as a filter aid are added to the culture solution of Aureobasidium pullulans (IFO 6353) prepared in Example 1 and filtered. Thus, the culture supernatant was removed to obtain a composition containing about 79% diatomaceous earth, about 20% microbial cells, and about 1% activated carbon by dry mass. This composition was autoclaved at 120 ° C. for 20 minutes to obtain a composition containing dead cells of Aureobasidium pullulans. These compositions can be used as animal immunomodulators as they are or after drying by conventional methods. In addition, these immunomodulators can be used by adding to milk substitutes or by blending them in feed, feed, pet food and the like.

この珪藻土、活性炭とオーレオバシディウム プルランスの死菌体とを含む組成物を通風乾燥して、又は、実施例１で調製したオーレオバシディウム プルランスの死菌体を通風乾燥して、各々、乾燥質量で菌体として、１％となるように配合飼料に添加した。これらの配合飼料の何れかを、それぞれ離乳直後の子ウシ２０頭に３０日間摂取させた。また、実験１で調製したオーレオバシディウム プルランスの培養上清を、濃縮後、水で透析して、再度濃縮した標品（培養上清を濃縮した標品）を、固形物換算で、０．５％となるように添加した配合飼料を、離乳直後の子ウシ２０頭に３０日間摂取させた。対照として、菌体やその培養上清を添加していない配合飼料のみを子ウシ２０頭に３０日間摂取させた。何れかの飼料を３０日間摂取させた翌日に、子ウシの体重測定と、採糞を行い、その糞中のＩｇＡ量と酸生成菌数を、実験２と同様の方法で測定した。なお、ウシのＩｇＡの測定には、ウシのＩｇＡに対する抗体を使用した酵素抗体法を使用した。珪藻土、活性炭とオーレオバシディウム プルランスの死菌体とを含む組成物、その死菌体のみ、若しくは、その培養上清を濃縮した標品を添加した配合飼料の何れかを摂取させた子ウシの糞中のＩｇＡ量と酸生成菌数を、飼料のみを摂取させた子ウシの、各々の測定値を１００とした相対値として、表６に示す。また、糞の臭を嗅いで、飼料のみを摂取させた子ウシの糞の臭と比較した結果を、表６に併せて示す。さらに、各飼料を摂取させた子ウシの健康状態を観察して、感染に起因すると考えられる発熱・下痢などの異常（臨床症状）の認められた個体数を表６に併せて示す。   A composition comprising the diatomaceous earth, activated carbon and dead cells of Aureobasidium pullulans is air-dried, or dead cells of Aureobasidium pullulans prepared in Example 1 are air-dried, It was added to the blended feed so as to be 1% as microbial cells by dry mass. Each of these mixed feeds was ingested by 20 calves immediately after weaning for 30 days. In addition, after concentrating the culture supernatant of Aureobasidium pullulans prepared in Experiment 1, dialyzed with water and concentrated again, the standard (concentrated culture supernatant) was converted to 0 The mixed feed added to 5% was fed to 20 calves immediately after weaning for 30 days. As a control, 20 calves were ingested for 30 days only with a formulated feed to which no cells or culture supernatant was added. The day after any feed was ingested for 30 days, calf body weight measurement and feces were collected, and the amount of IgA and acid producing bacteria in the feces were measured in the same manner as in Experiment 2. For the measurement of bovine IgA, an enzyme antibody method using an antibody against bovine IgA was used. Calves fed either diatomaceous earth, activated charcoal and aureobasidium pullulans dead cells, only the dead cells, or a mixed feed supplemented with a preparation enriched with the culture supernatant Table 6 shows the amount of IgA and the number of acid-producing bacteria in the feces of each calf, relative to each measured value of 100 for calves fed only feed. In addition, Table 6 shows the results of comparing the odor of the feces of a calf that sniffs the odor of feces and ingests only the feed. Furthermore, the health condition of calves fed each feed was observed, and the number of individuals with abnormalities (clinical symptoms) such as fever and diarrhea considered to be caused by infection is also shown in Table 6.

表６から明らかなように、オーレオバシディウム プルランスの死菌体を添加した配合飼料、及び、当該菌体、活性炭と珪藻土とを添加した配合飼料を摂取させた子ウシでは、配合飼料のみ、或いは、培養上清を濃縮した標品を添加した配合飼料を摂取させた場合と比較して、糞中のＩｇＡ量、酸生成菌数及び体重の何れについても、高い増強率を示した。また、糞の臭も、オーレオバシディウム プルランスの死菌体を添加した配合飼料、及び、当該菌体、活性炭と珪藻土とを添加した配合飼料を摂取させた子ウシでは、配合飼料のみ、或いは、培養上清を濃縮した標品を添加した配合飼料を摂取させた場合と比較して、弱いと判定された。また、試験に使用した各子ウシの健康状態についてみると、オーレオバシディウム プルランスの死菌体、活性炭と珪藻土の混合物を添加した配合飼料を摂取させた子ウシでは異常の発生は認められず、当該死菌体のみを添加した配合飼料を摂取した子ウシでは、２０頭中１頭に異常が認められたのに対して、配合飼料のみ、或いは、培養上清を濃縮した標品を添加した配合飼料を摂取させた場合には、何れの場合も、２０頭中４頭の子ウシで異常が認められた。これらの結果は、オーレオバシディウム プルランスの死菌体を摂取せしめることにより、糞中へのＩｇＡの分泌が増強させると共に、腸内の酸生成菌数を増加させて、腸管免疫が増強すると共に、腸内環境が整うので、効果的に子ウシの健康を維持することができることを示している。また、これらの効果は、菌体のみを摂取させるよりも、菌体と珪藻土との混合物を摂取させる方がより効果的に発揮させることができることを示している。 As is clear from Table 6, in the mixed feed to which the dead cells of Aureobasidium pullulans were added, and the calf ingested the mixed feed to which the cells, activated carbon and diatomaceous earth were added, only the mixed feed, Or compared with the case where the mixing | blending feed which added the sample which concentrated the culture supernatant was ingested, the enhancement rate was high also about all the amounts of IgA in feces, the number of acid producing bacteria, and a body weight. In addition, the fecal odor can be obtained only in the mixed feed, or in the calf fed with the mixed feed to which the dead cells of Aureobasidium pullulans are added and the mixed feed to which the cells, activated carbon and diatomaceous earth are added. It was determined to be weak compared to the case where a mixed feed supplemented with a preparation in which the culture supernatant was concentrated was added. In addition, regarding the health status of each calf used in the study, no abnormalities were observed in calves fed with a dead diet of Aureobasidium pullulans, a mixed feed supplemented with a mixture of activated carbon and diatomaceous earth. In calves that ingested a mixed feed supplemented only with the dead cells, abnormalities were observed in one of 20 cows, whereas only the mixed feed or a sample that concentrated the culture supernatant was added. In each case, abnormalities were observed in 4 out of 20 calves. These results show that ingestion of dead cells of Aureobasidium pullulans enhances secretion of IgA into feces and increases the number of acid-producing bacteria in the intestine, thereby enhancing intestinal immunity. It shows that the intestinal environment is in place, so that calf health can be effectively maintained. In addition, these effects indicate that it is more effective to ingest a mixture of microbial cells and diatomaceous earth than to ingest only microbial cells.

上記試験に使用した珪藻土、活性炭とオーレオバシディウム プルランスの死菌体との組成物を通風乾燥したものを、菌体として、乾燥質量で、１％となるように、市販の鶏用の配合飼料に添加して、雌の鶏２０羽に１ヶ月間摂取させた。この期間の産卵数を、市販の配合飼料のみを摂取させた雌の鶏２０羽と比較したところ、オーレオバシディウム プルランスの死菌体、活性炭と珪藻土とを配合した配合飼料を摂取させた群の方が、平均で約１１％産卵数が増加した。この結果は、オーレオバシディウム プルランスの死菌体と珪藻土とを摂取せしめることにより、効果的に鶏の産卵数を増加させて、卵の生産効率をあげることができることを示している。   Combining commercially available chickens so that the dry mass of the composition of the dead cells of diatomaceous earth, activated carbon and Aureobasidium pullulans used in the above test is 1% in terms of dry mass. It was added to the feed and fed to 20 female chickens for 1 month. The number of eggs laid during this period was compared with 20 female chickens that were fed only commercially available mixed feed. The average number of eggs laid increased by about 11%. This result shows that by ingesting dead cells of Aureobasidium pullulans and diatomaceous earth, it is possible to effectively increase the number of eggs produced by chickens and increase the egg production efficiency.

ジャーファーメンターに、酵素水飴１０質量部、ペプトン０．２質量部、リン酸水素２カリウム０．２質量部、塩化ナトリウム０．２質量部、硫酸マグネシウム・７水和物０．２質量部、硫酸鉄・７水和物０．００１質量部を入れ、水に溶解して全量を１００質量部として、撹拌溶解して栄養培地を調製した。これを、常法通り、１２０℃、２０分間加圧滅菌し、約３０℃に冷却後、無菌的にオーレオバシディウム ファーメンタンス バル ファーメンタンス（ＩＦＯ６４１０）を植菌して、塩酸又は水酸化ナトリウムの添加により、ｐＨ４に維持しつつ、通気撹拌しながら１２０時間培養した。培養終了後、遠心分離により菌体を回収した。菌体を、脱イオン水に再度懸濁、遠心して洗浄し、菌体を回収した。本品は、動物用の免疫調節剤として、そのまま、滅菌して、及び／又は、乾燥して動物に摂取させることもできる。また、これらの免疫調節剤は、ミルクや代用乳などに添加して、或いは、飼料、餌料、ペットフードなどに配合して使用することも有利に実施できる。 In a jar fermenter, 10 parts by weight of enzyme starch syrup, 0.2 parts by weight of peptone, 0.2 parts by weight of dipotassium hydrogen phosphate, 0.2 parts by weight of sodium chloride, 0.2 parts by weight of magnesium sulfate heptahydrate, A nutrient medium was prepared by adding 0.001 part by mass of iron sulfate heptahydrate and dissolving in water to a total amount of 100 parts by mass with stirring. This was autoclaved at 120 ° C. for 20 minutes as usual, cooled to about 30 ° C., aseptically inoculated with Aureobasidium fermentans val fermentans (IFO6410), and then added with hydrochloric acid or water. While maintaining pH 4 by adding sodium oxide, the cells were cultured for 120 hours with aeration and stirring. After completion of the culture, the cells were collected by centrifugation. The cells were suspended again in deionized water, washed by centrifugation, and the cells were collected. This product can be used as an animal immunomodulator as it is by sterilizing and / or drying the animal as it is. In addition, these immunomodulators can be advantageously used by adding to milk, milk substitute or the like, or blending with feed, feed, pet food or the like.

本品を、滅菌して、通風乾燥後、乾燥質量で、死菌体１質量部に対して珪藻土９質量部、ラクトスクロース含有糖質（株式会社林原商事販売、商品名「乳果オリゴ７００」、ラクトスクロース純度７０％）１質量部、キトサン０．０２質量部を加えて撹拌混合し、免疫調節剤を調製した。この免疫調節剤は、動物用の免疫調節剤として、そのままで、ミルクや代用乳などに添加して、或いは、飼料、餌料、ペットフードなどに配合して使用することができる。 This product is sterilized, dried by ventilation, and dried by dry mass, 9 parts by mass of diatomaceous earth and 1 part by mass of dead microbial cells, lactosucrose-containing saccharides (trade name “Fruit Oligo 700” sold by Hayashibara Corporation) 1 part by mass of lactosucrose purity 70%) and 0.02 part by mass of chitosan were added and mixed by stirring to prepare an immunomodulator. This immunomodulator can be used as an immunomodulator for animals as it is, added to milk, milk substitute or the like, or blended in feed, feed, pet food and the like.

この通風乾燥したオーレオバシディウム ファーメンタンス バル ファーメンタンスの死菌体に珪藻土とラクトスクロースを加えた上記免疫調節剤を、市販のドッグフードに、菌体として、乾燥質量で２％配合して、スギの花粉症を発症しているイヌ１０匹に、３０日間摂取させたところ、１０匹中６匹で、くしゃみ及び鼻水の症状が改善した。また、これらのイヌから血液を採取し、スギ花粉アレルゲンに対するＩｇＥ量を、イヌのＩｇＥに対する抗体を使用した酵素抗体法を用いて測定し、摂取前と比較したころ、摂取後の方が、摂取前に比べて、平均で約２１％減少していた。   The above-mentioned immunoregulatory agent in which diatomaceous earth and lactosucrose are added to dead cells of this aerobasidium fermentans val fermentans, which has been dried by ventilation, is blended in a commercially available dog food with 2% by dry mass. When 10 dogs developing cedar pollinosis were ingested for 30 days, sneezing and runny nose symptoms improved in 6 out of 10 dogs. In addition, blood was collected from these dogs, and the amount of IgE against cedar pollen allergen was measured using an enzyme antibody method using an antibody against IgE in dogs. Compared to before, it was about 21% lower on average.

実施例１及び実施例２の方法で調製した免疫調節剤を、各々、常法により凍結乾燥して、粉砕し、粉末状の免疫調節剤を調製した。これらは、飼育動物用の免疫調節剤として、そのままで使用することができる。また、これらの免疫調節剤は、ミルクや代用乳などに添加して、或いは、飼料、餌料、ペットフードなどに配合して使用することができる。   Each of the immunomodulators prepared by the methods of Example 1 and Example 2 was lyophilized and ground by a conventional method to prepare a powdery immunomodulator. These can be used as they are as immunomodulators for domestic animals. In addition, these immunomodulators can be used by adding to milk, milk substitute or the like, or by blending in feed, feed, pet food or the like.

実施例３で調製したオーレオバシディウム ファーメンタンス バル ファーメンタンスの死菌体１質量部を、水８質量部に再度懸濁し、これに、α，α−トレハロース０．５質量部とサイクロニゲロシルニゲロース０．５質量部を加えて撹拌し、これを常法により噴霧乾燥して、免疫調節剤を調製した。本品は、飼育動物用の免疫調節剤として、そのままで、ミルクや代用乳等に添加して、或いは、飼料、餌料、ペットフードなどに配合して使用することができる。   1 part by mass of dead cells of Aureobasidium fermentans Val fermentans prepared in Example 3 was suspended again in 8 parts by mass of water, and 0.5 parts by mass of α, α-trehalose and cyclo 0.5 parts by mass of nigerosyl nigerose was added and stirred, and this was spray-dried by a conventional method to prepare an immunomodulator. This product can be used as an immunomodulator for domestic animals as it is, added to milk, milk substitute or the like, or blended in feed, feed, pet food or the like.

トウモロコシ２４質量部、ふすま３質量部、ショ糖１質量部、トレハロース１．５質量部、乳糖果糖オリゴ糖（株式会社林原商事販売、商品名「乳果オリゴ５５０」）１．５質量部、脱脂米ぬか６質量部、大麦１２質量部、脱脂大豆１５質量部、魚粉７質量部、ビール酵母粉末２質量部、ホエー粉末１０質量部、小麦９質量部、炭酸カルシウム０．４質量部、リン酸２カルシウム０．９質量部、食塩０．５質量部、ミネラル類混合物０．１質量部、ビタミン類混合物１．１質量部に、実施例２の方法で調製したオーレオバシディウム プルランスの死菌体、珪藻土及び活性炭を含む免疫調節剤を、加熱乾燥して、その５質量部を添加して、混合し、配合飼料を調製した。本品は、飼育動物、とりわけ子豚用の配合飼料として使用することができる。   Corn 24 parts by weight, bran 3 parts by weight, sucrose 1 part by weight, trehalose 1.5 parts by weight, lactose fructose oligosaccharide (Hayashibara Shoji Co., Ltd., trade name “milk fruct oligo 550”) 1.5 parts by weight, defatted Rice bran 6 parts, barley 12 parts, defatted soybean 15 parts, fish meal 7 parts, beer yeast powder 2 parts, whey powder 10 parts, wheat 9 parts, calcium carbonate 0.4 parts, phosphoric acid 2 Dead cells of Aureobasidium pullulans prepared by the method of Example 2 in 0.9 parts by mass of calcium, 0.5 parts by mass of sodium chloride, 0.1 parts by mass of minerals, and 1.1 parts by mass of vitamins The immunomodulating agent containing diatomaceous earth and activated carbon was dried by heating, and 5 parts by mass of the immunomodulating agent was added and mixed to prepare a mixed feed. This product can be used as a mixed feed for domestic animals, particularly piglets.

本品を、生後３０日の子豚１５頭に３０日間摂取させ、本品に代えて、オーレオバシディウム プルランスの菌体を含まない点を除いて、本品と同じ組成の配合飼料（対照）を３０日間摂取させた１５頭の子豚と比較したところ、本品を摂取させた子豚の方が、餌の摂取量が約５％増加し、それに伴い、対照を摂取させた場合と比較して、平均体重が約１０％増加した。また、これらの子豚の新鮮な糞中のＩｇＡ量及び酸生成菌の菌数を比較したところ、本品を摂取させた子豚の方が、対照を摂取させた場合と比較して、ＩｇＡ量は２．３倍、酸生産菌数で約４．７倍の増強が認められた。また、各子豚の健康状態を観察したところ、本品を摂取させた群では、健康状態に異常のある子豚は認められなかったのに対して、対照を摂取させた場合には、３頭の子豚で、発熱・下痢などの感染症に起因すると考えられる異常（臨床症状）が、対照を用いて飼育した期間中に、３日以上観察された。また、対照を摂取させた子豚の糞は、臭が強かったのに対して、本品を摂取させた場合は、糞の臭が抑制されていた。   This product is fed to 15 piglets 30 days of age for 30 days, and instead of this product, the mixed feed (control) has the same composition as this product except that it does not contain Aureobasidium pullulans. ) Was compared to 15 piglets fed 30 days, the piglet fed this product increased the intake of food by about 5%, and accordingly the control was fed. In comparison, the average body weight increased by about 10%. In addition, when comparing the amount of IgA in the fresh feces of these piglets and the number of acid-producing bacteria, the piglet fed with this product had IgA compared with the control fed. The amount was 2.3 times, and the number of acid-producing bacteria was increased by about 4.7 times. In addition, when the health condition of each piglet was observed, in the group fed with this product, no piglet with an abnormal health condition was found, whereas when the control was fed, 3 In the head piglets, abnormalities (clinical symptoms) thought to be caused by infections such as fever and diarrhea were observed for 3 days or more during the period of breeding with the control. In addition, the feces of the piglets fed with the control had a strong odor, whereas when the product was ingested, the odor of the feces was suppressed.

本発明の免疫調節剤は、動物の腸管内などの粘膜における分泌型ＩｇＡの産生及びその産生を増強するサイトカイン類の増強効果に優れている。また、本発明の免疫調節剤は、ＩｇＥ及びＩｇＥの産生を増強するサイトカイン類の産生抑制効果に優れている。本発明の免疫調節剤を、動物に経口摂取させることにより、効果的に腸管内などでの有害微生物の増殖や食物等によるアレルギーを抑制し、動物の健康状態の維持、増進或いは改善を図ることができる。また、本発明の免疫調節剤は、安全性に優れ、長期間連続的に摂取しても、副作用の発生がない。本発明は、斯くも顕著な作用効果を奏する発明であり、斯界に多大の貢献をする、誠に意義のある発明である。 The immunomodulator of the present invention is excellent in the production of secretory IgA in mucous membranes such as in the intestinal tract of animals and the enhancing effect of cytokines that enhance the production. Moreover, the immunomodulator of the present invention is excellent in the production suppression effect of cytokines that enhance the production of IgE and IgE. To effectively suppress the growth of harmful microorganisms in the intestinal tract or allergies caused by food, etc., and maintain, enhance or improve the health condition of animals by ingesting the immunomodulator of the present invention orally. Can do. Moreover, the immunomodulator of the present invention is excellent in safety and does not cause side effects even when taken continuously for a long period of time. The present invention is an invention that exhibits such remarkable effects, and is a truly significant invention that contributes greatly to the world.

Claims (2)

オーレオバシディウム属に属する微生物の菌体と、乾燥質量で、菌体１質量部に対して珪藻土を０．０１質量部乃至２５質量部含有してなる、経口摂取によりイムノグロブリンＡ産生を増強する作用を有する動物用の免疫調節剤。 Bacterial cells of microorganisms belonging to the genus Aureobasidium , and dry mass, containing 0.01 to 25 parts by mass of diatomaceous earth per 1 part by mass of cells. An animal immunomodulator having an effect of オーレオバシディウム属に属する微生物が、オーレオバシディウム プルランスである請求項１記載の動物用の免疫調節剤。 Microorganisms belonging to the genus Aureobasidium is, immunomodulatory agents for animals according to claim 1, wherein the Aureobasidium pullulans.