JP4903984B2 - オリゴヌクレオチドのinvivoでの効率を増加するおよび哺乳動物において炎症を阻害するための方法 - Google Patents
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Description
本出願は、2001年7月6日に出願された合衆国仮出願60/303,071の優先権を主張し、これによりその開示は完全にここで参考文献により受け入れられる。
(a) 発明の分野
本発明は核酸分子のin vivo効率を増加するための、およびまた哺乳動物において炎症を阻害するためのヌクレオチド代替物の使用に関する。
核酸分子の使用に基づく治療的アプローチは、ますます一般的になってきている。遺伝子をベースとする治療およびアンチセンスをベースとする治療は、おそらく近い将来に医学を根本的に変化させるであろう。
また、高い効果および低い毒性を示す一方で、体内で安定を維持する核酸分子が長い間必要と思われている。
本発明の目的は、高い効果および低い毒性を示す一方で、体内で安定を維持する遺伝子構築物およびアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸分子を提供することである。
本発明は、高い効果および低い毒性を示す一方で、体内で安定を維持する遺伝子構築物およびアンチセンスオリゴヌクレオチドなどの核酸分子に関する。それはまた、炎症を阻害するために2'6'-ジアミノプリンおよびその類似体を使用することに関する。
以下の実施例は、本発明の広範囲の適用の実例であり、その範囲を限定する意図はない。修飾および変化は、その中で本発明の意図および範囲を逸脱せずに行われうる。本明細書中に記載されるものと同様あるいは同等ないずれかの方法および材料は、本発明のテストを実行する際に使用されうるが、好ましい方法および材料が記載される。
アンチセンスオリゴヌクレオチド(AS)は、科学文献および特許文献にて広く記載された新規分野の薬剤である。この治療的ストラテジーは、1つあるいはいくつかの遺伝子の過剰発現が疾患の存在あるいは持続を引き起こすと信じられているいずれかの疾患に潜在的に適用されうる。効率の向上および抗炎症効率の向上によりASは、喘息、細気管支炎、ウイルスあるいはその他の形式の感染、鼻炎、嚢胞性線維症、慢性気管支炎、慢性閉塞性肺疾患、好酸球性およびその他の形式の咳、肺線維症、成人呼吸窮迫症候群、結膜炎およびその他の形式の眼あるいは皮膚炎症疾患を含む全ての呼吸器疾患のための重要な治療的ストラテジーとなりうる。
細胞株を用いた実験
実験は、(本明細書中に援用される)国際出願WO 99/66037に記載されるIL-3、IL-5およびGM-CSF受容体の共通ベータサブユニットに対するアンチセンスオリゴヌクレオチドが、アデノシンを2-アミノ-2'-デオキシアデノシンあるいはイノシンのどちらかで置換することによって修飾したとき、この受容体の発現および機能を阻害しうるかどうかを評価するために行われた。TF-1およびU937細胞は、高レベルのGM-CSF受容体を発現する。加えて、TF-1細胞は生存に関して、GM-CSFに依存している。これらの細胞は、10%熱不活化ウシ胎仔血清、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびl-グルタミンを補充したRPMI 1640中で5%CO2中37℃にて培養した(TF-1細胞にはGM-CSFを補充した)。それらを12時間、培地のみ、あるいはIL-3、IL-5およびGM-CSF受容体の共通ベータサブユニットに対するセンス(107S: 5'-ACCATCCCGCTGCAGACCC-3'; SEQID番号:19)あるいはアンチセンス(107A:5'-GGGTCTGCAGCGGGATGGT-3'; SEQ ID NO: 20)オリゴヌクレオチドを用いた培地のどちらかで培養した。107A-DAPの配列は5'-GGGTCTGCDapGCGGGDapTGGT-3'(SEQ ID NO: 21);107A-イノシン(107A-I)の配列は:5'-GGGTCTGCIGCGGGITGGT-3'(SEQ ID NO: 22)であった。細胞を回収して3回洗浄した。そして、RNAを回収し、受容体のベータ鎖の存在を半定量RT-PCRによって評価した。
6-8週齢および220-275 gのブラウンノルウェーラットを、Harlan-Sprague-Dawley(Walkerville, MD)から得た。ラットは従来の動物施設で維持した。
ラットの能動感作は、1 mgの鶏卵オボアルブミン(OA)(Sigma, St.Louis, MO)および3.5 mgの水酸化アルミニウムゲル(BDH Chemicals, Poole, UK)を含有する1 mlの生理食塩水を皮下注射することにより行った。
オボアルブミンでの感作後14日目に、65 mg/kgでのペントタールを用いて全身麻酔しおよび気管内挿管した後、オボアルブミンチャレンジを60μl中200マイクログラムのオボアルブミンを気管内に注入することで行う。8時間あるいは15時間の後、ラットを全身麻酔後に再び挿管して、そして5回の0.9%生理食塩水5 mlの喉頭注入することからなる肺洗浄を行う。細胞を洗浄して、計数してそしてCytospin IIITMにてスライド上で遠心分離する。差異細胞計数を行う。
肺抵抗性を測定する道具および方法論は先に記載されているとおりである(Renzi, P. M., et al. Am. Rev. Respir. Dis 146:163-169, 1992)。全身麻酔は腹腔内へのペントタール(50 mg/kg)あるいはウレタン(1.1 g/kg)のどちらかを用いて導入した。そして、気管内挿管は6 cm長のPE-240TMポリエチレンカテーテルを使用して行った。熱パッドを使用して、一定体温を維持し、そして電子温度計を用いて継続的に直腸温をモニターした(TelethermometerTM, Yellow Springs Instrument Co., Yellowsprings, OH)。肺抵抗性(RL)は動物を側臥位にして自然換気呼吸の間測定した。流量は小さなPlexiglassTMボックス(容積265 ml)の内側に気管チューブの先端を置くことにより測定した。差圧トランスデューサー(MP-45+ 2 cm. H20; Validyne Corp, Northridge, CA)と連結したFleishTM No. 0呼吸気流計をボックスの他の端に取り付けて気流を測定し、そして量はフローシグナルの数値積分法により得た。食道圧の変化は、生理食塩水で満たしたカテーテルおよび差圧トランスデューサー(Sanborn 267 BCTM; Hewlett Packard, Waltham, MA)を使用することによって測定した。トランスデューサーのその他の端子はボックスに接続した。食道カテーテルは、より短い長さ(6 cm)のチュービング(PE-100TM)を取り付けた20 cm長のポリエチレンチュービング(PE-200TM)から構成された。肺圧差は食道およびボックス圧の間の差として算出した。気道反応は、市販ソフトウェア(RHT-Infodat Inc., Montreal, Quebec, Canada)を使用して多重線形回帰によって肺の運動方程式に適合させて決定させたRLから評価した。
オボアルブミンでの感作後14日目に、65 mg/kgのペントタールを用いて全身麻酔しおよび気管内挿管した後、GM-CSF、IL-3およびIL-5受容体のラット共通ベータ鎖に対するPS ASオリゴヌクレオチド(AS141A:5'-TGGCACTTTAGGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 23)の60μgを気管内に注入した。肺抵抗性は基準にて、30分間の間5分毎に、そして15分間隔で、測定した。アデノシンをDAPに置換した修飾AS141、つまりAS141-DAP(5'-TGGCDapCTTTDapGGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 24)、あるいはイノシンで置換したAS141-I(5'-TGGCICTTTIGGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 25)を用いて同様な実験を繰り返した。
感作後14日に、ラットはペントタール(65 mg/kg)を用いて全身麻酔して、挿管して、そして基準RLを測定した。ラットには、50μlの生理食塩水あるいは酢酸を加えた生理食塩水中で0.125μgから100μgの用量幅にわって、アデノシン(CAS 58-61-7)、2,6ジアミノプリンヘミスルフェート塩(CAS 69369−16−0)、DAP(2-アミノ-2'-デオキシアデノシン; CAS 4546-70-7)、2-アミノ-9-(B-D-2'-デオキシリボフラノシル)プリン(CAS 3616-24-8)、7-デアザ-2'デオキシアデノシン(CAS 60129-59-1)、N6-メチル-2'-デオキシアデノシン(CAS 2002-35-9)、2-アミノアデノシン/2,6ジアミノプリンリボシド(CAS 2096-10-08)の増分用量を気管内に投与した。各々の投与の直後に、RLを測定した。DAPは次のように溶解した:3 mgのDAPを100μlの酢酸と組み合わせて、追加の生理食塩水によって1.5から3 mlに調節して、そして70℃に加熱した。これにより最終濃度は1から2μg/μlとなった。希釈は同じ緩衝液によって行った。対照動物は示したように同じ最終濃度で酢酸を用いた生理食塩水を投与した。
我々は、ラットCCR3受容体に対するアンチセンスASA4(5'-ACTCATATTCATAGGGTG-3'; SEQ ID NO: 26)が抗原チャレンジ後に肺内への好酸球の流入を効果的に阻害することを先に示した(WO 99/66037参照)。我々は、これらの実験のために同じオリゴヌクレオチド配列を使用した。14日目に、ラットをペントタール(65 mg/kg)を用いて全身麻酔した後に挿管して、50μlの0.9%NaCl中200μgのASA4、ASA4-DAP(5'-DapCTCDapTDapTTCDapTDapGGGTG-3'; SEQ ID NO: 27)、ミスマッチASA4-DAP(5'-CDapTCDapT TDapTCATGDapGGTG-3'; SEQ ID NO: 28)、AS141-DAP(5'-TGGCDapCTTTDapGGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 29)、ミスマッチAS141-DAP(5'-GTGCCDapTTTGDapGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 30)、ASA4-DAPおよびASA141-DAPの組み合わせ(全100μg)あるいは生理食塩水を気管内に投与した。10分後、オボアルブミンチャレンジを50μlの0.9%生理食塩水中200マイクログラムのオボアルブミンを気管内に注射することにより行った。15時間後、ラットを全身麻酔した後に再び挿管して、基準肺抵抗性を測定して、基準肺抵抗性が2倍になるまで(EC200)2倍濃度のロイコトリエンD4(50 ngから1600 ng)を気管内に接種した。
14日目に、ラットをペントタール(65 mg/kg)を用いて全身麻酔した後に挿管して、50μlの0.9%NaCl中200μgのASA4、ASA4-DAP(5'-DapCTCDapTDapTTCDapTDapGGGTG-3'; SEQ ID NO: 27)、AS141-DAP(5'-TGGCDapCTTTDapGGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 29)、ミスマッチAS141-DAP(5'-GTGCCDapTTTGDapGTGGCTG-3'; SEQ ID NO: 30)、ASA4-DAPおよびASA141-DAPの組み合わせ(全100μg)あるいは生理食塩水を気管内に投与した。20分後、オボアルブミンチャレンジを50μlの0.9%生理食塩水中200μgのオボアルブミンを気管内に注射することにより行った。15時間後、ラットを全身麻酔した後に再び挿管して、そして5回の5 mlの喉頭注入を含有する肺洗浄を行った。細胞を洗浄して、計数してそしてCytospin IIITMにてスライド上で遠心分離した。最後に差異細胞計数を行った。
感作の14日後に、ラットをペントタール65 mg/kgを用いて麻酔した後に挿管して、そして50μl中100μgのアデノシンあるいは2-アミノ-2'-デオキシアデノシン、あるいは2-アミノ-2'-デオキシアデノシンに続いて10分後にアデノシン、あるいは生理食塩水にて気管内に注入した。15時間後、ラットをペントタールを用いて全身麻酔した後に挿管して、そして肺洗浄を行い、そして上記のように細胞を計数した。
実施例1:DAPによるアデノシンの置換は、in vitroにて通常のホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドと少なくとも同等の効果がある
実験の最初のセットは、DAPによるアデノシンの置換がASオリゴヌクレオチドのin vitroでの効率に影響するかどうかを決定するために設計された。図2Aにて注目すべきは、ヒトGM-CSF、IL-3およびIL-5受容体の共通ベータ鎖に対するアンチセンスの生物学的効果は、この受容体を発現するU937細胞において、アデノシンを2-アミノ-2'デオキシアデノシンにより置換することによっては影響されないということである。AS107は2アデノシン塩基を含有する19 merのオリゴヌクレオチドである。アデノシン塩基はDAPにより置換された(AS107-DAP)。この修飾オリゴヌクレオチドは、半定量PCR(ハウスキーピング遺伝子としてG3PDHを有する)によって評価するとき、共通ベータ鎖のmRNAの阻害においてはアデノシン含有AS107(AS107)と少なくとも同等の効果がある。
その他の細胞株での効率を確認するため、生存についてGM-CSFに依存するTF1細胞にて繰り返し実験を行った。図2Bにて注目すべきは、ヒトGM-CSF、IL-3およびIL-5受容体の共通ベータ鎖に対するAS107-DAPは、mRNA発現の阻害においてはアデノシン含有AS107(AS107)と少なくとも同等の効果があったということである。アンチセンスオリゴヌクレオチドにおけるDAPによるアデノシンの置換はin vitroでは効果的である。
アデノシンの置換がアンチセンスオリゴヌクレオチドの効率に影響を与えうるかどうかを決定するために実験を行った。図3にて注目すべきは、上述したように同じアンチセンスオリゴヌクレオチド(AS107)の効果は両方のアデノシンをイノシンに置換するときには消失するということである。イノシン含有アンチセンス(AS107-I)は、半定量PCRによって評価して、そしてアデノシン含有AS107と比較するとき、mRNA発現の阻害に関して効果はなかった。培地のみ、10μmol濃度のAS107あるいはAS107-Iと共にU937細胞をRNA単離前の6時間インキュベーションすること、および半定量PCRを行うことにより実験を行った。
50μlの生理食塩水に含有されるホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドの急速気管内注入後の肺抵抗性の効果を評価するために実験を行った。
図4Aは、感作したブラウンノルウェー(BN)ラットの肺抵抗性に対する、各々60μg用量での、ラットGM-CSF、IL-3およびIL-5受容体の共通ベータ鎖に対するアンチセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチド(AS141、2アデノシンを含有する19 merオリゴヌクレオチド)の気管内投与の効果、および同じ配列のDAP-置換ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を説明する。これらの実験および続くものに関して、感作したブラウンノルウェーラットは先に記載したように利用した(Renzi PM, Am Rev Respir Dis 146:163-9; 1992)。リン酸緩衝生理食塩水の注射は、最大25%増の肺抵抗性の穏やかな増加を引き起こした。通常のアンチセンスは、15%以下のアデノシンを含み、中等度の肺抵抗性の増加(87%)を引き起こした。DAP修飾オリゴヌクレオチドは肺抵抗性の穏やかから中等度の増加(33%)を引き起こした。NyceはWO 00/62736およびWO 00/09525において、肺抵抗性の増加はオリゴヌクレオチドに含まれるアデノシンにより引き起こされることを示唆した。しかし、オリゴヌクレオチドにはアデノシンを分解および放出する時間(2-3分間)を見出せないであろうし、そして利用したアンチセンスオリゴヌクレオチドは10%しかアデノシンを含有していなかった(それは、WO 00/62736およびWO 00/09525によると、肺抵抗性に対する効果を有さない)。
イノシンはアデノシンに比べて肺/気道の気管支収縮は引き起こさないことが知られているので、AS141において2イノシンで置換した2アデノシンにより気管支攣縮が起きたのかどうかを評価するためにアッセイを行った(Mann, J.C. et al., J Appl Physiol 61: 1667-76, 1986)。図4Bに示すように、ラットGM-CSF、IL-3およびIL-5受容体の共通ベータ鎖に対する同じアンチセンスホスホロチオエートオリゴヌクレオチド(AS141)においてイノシンでアデノシンを置換したもの(AS141-イノシン)の気管内投与もまた、肺抵抗性の一時的な増加(108%まで)を引き起こした。これらの結果は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの気管内注入はアデノシンとは関連しないように思われている機序により、一時的に肺抵抗性を増加させることを示す。
我々はブラウンノルウェーラットにおいて肺抵抗性に対するDAP類似体の気管内投与およびアデノシンの気管内投与の効果を評価した。図5に示すように、アデノシン、DAP、および5つの異なるDAPの類似体を研究した。各々の化合物に関して、最少6尾のラットを研究し、そして平均%基準肺抵抗性を、DAPあるいはその類似体の気管内用量の関数として示す。この図で示されるように、肺抵抗性は5μgのアデノシンの濃度では次第にピークまで増加するのに対し、これは研究中には2-アミノ-2'デオキシアデノシン(DAP)あるいはその類似体では起こらない。これらの結果は、アデノシンとは対照的に、DAPおよびその類似体は肺抵抗性を著しくは増加させないことを示す。オリゴヌクレオチドは肺内では徐々に分解されるため、アデノシンの代わりにこれらの化合物を使用することは予期せず好都合になりうる。
ラットCCR3および喘息のラットモデルにおけるIL-3/IL-5/GM-CSF受容体の共通β鎖に対するDAP修飾アンチセンスのin vivoでの生物学的活性を図6Aに示す。ASA4は、CCR3受容体の阻害および抗原チャレンジ後に起こる好酸球流入の阻害を示した18 merのホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドである(WO 99/66037参照)。ASA141もまた、IL-3/IL-5/GM-CSF受容体の共通β鎖の阻害および抗原チャレンジ後に起こる好酸球流入の阻害を示した18 merのホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドである(WO 99/66037参照)。ASA4は5アデノシン塩基を含有する(28%アデノシン)。AS143は2アデノシン塩基を含有する。ASA4-DAPは、ASを与えていないラット(チャレンジした対象; p<0.01)あるいはDAPミスマッチ処理ラットと比較するとき、オボアルブミンチャレンジ後15時間でロイコトリエンD4に対する気道過敏性を著しく減少させたということに注目すべきである。また、ASA4-DAPは非修飾ASA4よりも効果的な傾向があり、そして非チャレンジラットから得た結果と違いがなかったことにも注目すべきである。AS141もまた、対照チャレンジおよび141-DAPミスマッチ処理ラットと比較するとき、LTD4に対する過敏性を著しき減少させた(P<0.05)。さらに、CCR3および共通β鎖オリゴヌクレオチドの組み合わせを用いて処理したラットにおいて、各々のアンチセンスオリゴヌクレオチドのものと比較すると、LTD4に対する気道過敏性が著しく減少し、そしてこの組み合わせはDAPオリゴヌクレオチドの組み合わせ(全50μg;図6B)と同等の効果であった。
これらの実験は、ラットCCR3受容体あるいはIL-3、5およびGM-CSFの共通ベータ鎖に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて行った。オボアルブミン感作およびチャレンジされたラットは、オボアルブミンチャレンジの10分前に、生理食塩水、200μgの通常ASA4あるいは200μgのASA4-DAPの気管内注入により処理した。15時間後、ラットを麻酔して挿管して、そして気管支肺胞洗浄を総細胞計測および差異のために行った。結果は、両方の通常ASA4(図7A)およびAS141(図7B)および両方のASA4-DAPおよびAS141-DAPが好酸球の補充を効果的に阻害したことを示す(各々84%および83%まで;図7A)。しかし、AS4DAPは好中球およびマクロファージを減少させる傾向があり、そしてリンパ球の補充を著しく減少させた(74%まで)。141-DAPは同じくマクロファージの補充を著しく減少させた(p<0.05)。2つのA4-DAPおよび141-DAPオリゴヌクレオチドの組み合わせ(全200μg)もまた、リンパ球およびマクロファージの補充を著しく減少させた(図7C)。これらの結果は、DAP修飾オリゴヌクレオチドが通常のオリゴヌクレオチドより効果的であるだけでなく、より広範な抗炎症効果を有していることを示す。
他の実験において、6尾の感作はしたがチャレンジしていないブラウンノルウェーラットの群をペントタールで麻酔し、そして気管内に挿管した。そして、ラットに(1)生理食塩水(対照)、(2)100μgのアデノシン、(3)100μgの2-アミノ-2'-デオキシアデノシン(DAP)あるいは(4)100μgのDAPのいずれかを、続いて10分後に100μgのアデノシンを気管内注入した。肺洗浄のために15時間後にラットを覚醒させ、再び麻酔および挿管をした。洗浄液から回収した媒質に存在した細胞を計数して、そして差異をCytospinTMスライド上で得た。
図8に示すように、アデノシンは肺において前炎症性であり、他の細胞型に著しい影響は及ぼさずに好酸球の選択的補充(10倍以上の増加)をもたらした。対して、DAPは肺洗浄の細胞性を増加させず、そしてアデノシンにより誘導される好酸球の補充を完全に阻害した。
上記のことを考慮すると、DAP置換アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非修飾アンチセンスあるいはイノシン修飾アンチセンスと比較するとき次の利点を有する:
a)図1から8に示されるようにそして本特許出願に記載されるように、DAPおよびDAP類似体の化学的構造および特性はアデノシンとは異なる。これらの異なる化学的性質は、DAPおよび/またはDAP類似体を含有するアンチセンスオリゴヌクレオチドが、非修飾アンチセンスと比べて異なる化学的性質、ハイブリダイゼーション特性および安定性を有するようにする。
b)実施例1は、DAPホスホロチオエートアンチセンスがin vitroにて異なる細胞株でどのくらい効果的なのかを示す。
c)実施例2は、(イノシンで示されるように)ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれるとき、アデノシンの代替物のすべてが遺伝子を阻害することに効果的であるわけではないことを示す。
d)実施例3は、肺抵抗性の増加はホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドの気管内注入後に起こること、およびこの増加はアデノシンとは関連しないことを示す。実際、イノシンはアデノシン受容体を刺激しないのにもかかわらず、イノシンオリゴで肺抵抗性の増加が認められた。しかし、この増加はDAP修飾オリゴのものよりも重要度は低かった。
e)実施例4は、アデノシン、DAPおよびDAPの類似体の様々な代替物はin vivoにて気管内注入をするとき肺抵抗性に対して異なる効果を有するが、これらの化合物は全てアデノシンよりも毒性が低かった。例えば、図5で示すように、ピークアデノシン毒性(5μg)では、テストした化合物の相対的順位は、アデノシン>N6-メチル-2'デオキシアデノシン>DAPを含む残りであった。しかし、5倍低い濃度(1μg)では、毒性順位は異なり、アデノシン>2-アミノ-2デオキシアデノシン/DAP>残りであった。遊離DAP塩基は構造対照として、毒性に糖が要求されるかどうかを決定するために使用した。
f)実施例5は、DAP修飾ホスホロチオエートアンチセンスヌクレオチドがin vivoでの抗原チャレンジ後に起こるロイコトリエンD4に対する気道過敏性を阻害することに効果があり、そして従来のPSオリゴヌクレオチドよりも効果的な傾向であることを示す。2つのDAP修飾オリゴヌクレオチドの組み合わせは、それぞれのオリゴヌクレオチド単独よりも効果的であり、相乗作用が確認されている。
g)実施例6は、DAP修飾ホスホロチオエートアンチセンスヌクレオチドが従来のオリゴヌクレオチドよりも、in vivoでの抗原チャレンジ後に起こるロイコトリエンD4に対する気道過敏性を阻害することにより、効果的であることを示す。ASA4に関しては好中球およびマクロファージを減少させ、そしてまたリンパ球を著しく減少させる強い傾向があったのに対し、これらの効果は従来のPSアンチセンスオリゴヌクレオチドでは直面することがなかった。AS141に関しては、好中球を減少させそしてまたリンパ球およびマクロファージを著しく減少させる強い傾向があったのに対し、これらの効果は従来のPSアンチセンスオリゴヌクレオチドでは直面することがなかった。ASA4およびAS141の組み合わせに関しては、好中球を減少させそしてまたリンパ球およびマクロファージを著しく減少させる強い傾向があったのに対し、これらの効果は従来のPSアンチセンスオリゴヌクレオチドでは直面することがなかった。
h)実施例7は、アデノシンがラットの肺において前炎症性効果を有し、好酸球を選択的に補充すること、およびそれはリンパ球に対しては著しい効果は有していないことを示す。同時に、実施例7はDAPが好酸球流入を阻害すること、つまりDAP自身がアデノシンのアンタゴニストであることの説明を示す。
Claims (41)
- SEQ ID NOs: 21、24および27〜30からなる群から選択される、単離あるいは精製された核酸分子。
- アデノシン置換した後の核酸分子がSEQ ID NO: 21である、請求項1の核酸分子。
- メチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホロチオエート、ホスホジエステル、ホスホロジチオエート、ボラノホスフェート、ホルムアセタール、チオホルムアセタール、チオエーテル、カーボネート、カルバメート、スルフェート、スルホネート、スルファメート、スルホンアミド、スルホン、スルファイト、スルホキシド、スルフィド、ヒドロキシルアミン、メチレン(メチルイミノ)、メチレンオキシ(メチルイミノ)、およびホスホールアミデート残基からなる群から選択される少なくとも1つのモノヌクレオチド連結残基を含む、請求項1または2の核酸分子。
- 前記の核酸分子がDNAからなる、請求項1から3のいずれかの核酸分子。
- 前記の核酸分子がRNAからなる、請求項1から3のいずれかの核酸分子。
- 2から10000ヌクレオチドまでを含む、請求項1から4のいずれかの核酸分子。
- 前記核酸分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ペプチド模倣物、低分子化学物質、リガンド、脂質、核酸、あるいは炭水化物部分からなる群から選択される分子に連結する、請求項1から6のいずれかの核酸分子。
- 前記核酸分子が、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項1から7のいずれかの核酸分子。
- 前記アンチセンスオリゴヌクレオチドが、10から100ヌクレオチドを含む、請求項8の核酸分子。
- 前記核酸分子が治療的遺伝子産物をコードする配列を含む、請求項1から7のいずれかの核酸分子。
- 少なくとも1つのアデノシン塩基を2-アミノ-2’-デオキシアデノシンにより置換するSEQ ID NO: 1から6、8から18、23および26からなる群から選択される核酸配列を有する、単離あるいは精製された核酸分子。
- 得られたオリゴヌクレオチドが、気道の過敏反応性を低下させまたは阻害させる、請求項1〜11のいずれかの核酸分子。
- 請求項1〜12にて定義される核酸分子からなる群から選択される少なくとも1つの核酸分子、および医薬的に許容可能なキャリアを含む、医薬的組成物。
- 呼吸器系疾患を治療および/または予防するための、請求項13の医薬的組成物。
- 前記核酸分子が、組成物の1%から90%の量で存在する、請求項13または14の医薬的組成物。
- 薬物、抗酸化剤、サーファクタント、香料添加剤、揮発性油分、緩衝化剤、分散剤、推進剤、および防腐剤からなる群から選択される薬剤をさらに含む、請求項13から15のいずれかの医薬的組成物。
- 前記の医薬的に許容可能なキャリアが、固体キャリア、液体キャリアおよびガス相キャリアからなる群から選択される、請求項13から16のいずれかの医薬的組成物。
- 前記の医薬的に許容可能なキャリアが、液体粒子、液体小胞、微結晶およびサーファクタントからなる群から選択される、請求項17の医薬的組成物。
- 呼吸器系疾患が、肺、気道および/または鼻の炎症に関連する病気である、請求項14から18のいずれかの医薬的組成物。
- 呼吸器系疾患が、肺線維症、成人呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、好酸球性気管支炎、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎および好酸球増加症からなる群から選択される、請求項14から18のいずれかの医薬的組成物。
- 前記の哺乳動物被検体の呼吸器系に直接的に投与される、請求項14から20のいずれかの医薬的組成物。
- 前記哺乳動物の体重kgあたり2μgから1 mgまでのアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む、請求項14から21のいずれかの医薬的組成物。
- 加圧型噴霧器、鼻腔用スプレー、ネブライザー、定量吸入器、ドライパウダー吸入器、あるいはカプセル中に含有される、請求項14から22のいずれかの医薬的組成物。
- 得られたオリゴヌクレオチドが、気道の過敏反応性を低下させまたは阻害させる、請求項14から23のいずれかの医薬組成物。
- 哺乳動物の呼吸器系におけるオリゴヌクレオチドのin vivo抗炎症性効率を増加させるために、オリゴヌクレオチドの少なくとも1つのアデノシン残基を2-アミノ-2’デオキシアデノシンおよびその塩からなる群から選択されるヌクレオチド代替物により置換するための、アデノシン置換した後のオリゴヌクレオチドが、SEQ ID NOs: 21、24、27〜30からなる群から選択される核酸配列を有する、前記ヌクレオチド代替物の使用。
- ヌクレオチド代替物が2-アミノ-2’デオキシアデノシンである、請求項25の使用。
- 核酸分子がDNAからなる、請求項25または26の使用。
- 核酸分子がRNAからなる、請求項25または26の使用。
- 核酸分子が2から10 000ヌクレオチドを含む、請求項25〜28のいずれかの使用。
- 核酸分子が、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ペプチド模倣物、低分子化学物質、リガンド、脂質、核酸、あるいは炭水化物部分からなる群から選択される分子に連結する、請求項25〜29のいずれかの使用。
- 核酸分子がアンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項25〜30のいずれかの使用。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが10〜100ヌクレオチドを含む、請求項31の使用。
- 核酸分子が治療的遺伝子産物をコードする配列を含む、請求項25〜33のいずれかの使用。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが呼吸器系疾患を予防しまたは治療することに対する、請求項33の使用。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが、肺、気道および/または鼻の炎症に関連する病気である呼吸器系疾患を予防しまたは治療することに対する、請求項34の使用。
- アンチセンスオリゴヌクレオチドが、肺線維症、成人呼吸窮迫症候群、嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、慢性気管支炎、好酸球性気管支炎、喘息、アレルギー、アレルギー性鼻炎、副鼻腔炎および好酸球増加症からなる群から選択される呼吸器系疾患を予防しまたは治療することに対する、請求項35の使用。
- アデノシン置換した後のオリゴヌクレオチドが、SEQ ID NO: 21核酸配列を有し、そして少なくとも1つのホスホロチオエート連結残基を含む、請求項25〜36のいずれかの使用。
- 得られたオリゴヌクレオチドが、複数のホスホロチオエート連結残基を含む、請求項37の使用。
- 得られたオリゴヌクレオチドの全てのヌクレオチドが、ホスホロチオエート残基により連結されている、請求項38の使用。
- アデノシン置換する前のオリゴヌクレオチドが、SEQ ID NO. 8の核酸配列を有する、請求項25〜36のいずれかの使用。
- 得られたオリゴヌクレオチドが、気道の過敏反応性を低下させまたは阻害させる、請求項25〜40のいずれかの使用。
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EP2806900B1 (en) * | 2012-01-27 | 2021-12-15 | BioMarin Technologies B.V. | Rna modulating oligonucleotides with improved characteristics for the treatment of duchenne and becker muscular dystrophy |
US9272016B2 (en) * | 2012-04-20 | 2016-03-01 | University Of Iowa Research Foundation | Methods to enhance RNAi oligonucleotide delivery to respiratory epithelial cells |
SI2841578T1 (sl) * | 2012-04-23 | 2017-12-29 | Biomarin Technologies B.V. | Rna modulirajoči oligonukleotidi z izboljšanimi karakteristikami za zdravljenje nevromuskularnih motenj |
FR3057774A1 (fr) | 2016-10-21 | 2018-04-27 | Museum National D'histoire Naturelle | Derives de la purine pour leur utilisation dans le traitement ou la prevention de maladies dues a une mutation non-sens |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3337530A (en) * | 1965-09-20 | 1967-08-22 | Upjohn Co | Dinucleoside 3', 5' -and 2', 5'-phosphates containing one 7-deazapurin riboside moiety |
WO1999066037A2 (en) * | 1998-06-17 | 1999-12-23 | Recherches Expertises Et Developpement Medicaux Parenz Inc. | Antisense oligonucleotides for treating or preventing atopic diseases and neoplastic cell proliferation |
WO1999067378A1 (en) * | 1998-06-19 | 1999-12-29 | Mcgill University | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE CONSTRUCTS BASED ON β-ARABINOFURANOSE AND ITS ANALOGUES |
WO2000012563A1 (en) * | 1998-09-01 | 2000-03-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Improved process for the synthesis of oligonucleotides incorporating 2-aminoadenosine |
Family Cites Families (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH01173818A (ja) * | 1987-12-28 | 1989-07-10 | Aisin Aw Co Ltd | 車両用ナビゲーション装置 |
US5523205A (en) * | 1988-08-02 | 1996-06-04 | Institut Pasteur | DNA probes specific for hemolytic listeria |
US5646265A (en) | 1990-01-11 | 1997-07-08 | Isis Pharmceuticals, Inc. | Process for the preparation of 2'-O-alkyl purine phosphoramidites |
US5112961A (en) * | 1990-07-18 | 1992-05-12 | Schering Corporation | Dna encoding subunits of a high affinity gm-csf receptor |
WO1992018628A1 (en) * | 1991-04-19 | 1992-10-29 | Schering Corporation | Subunit of the human interleukin-3 receptor |
US5872242A (en) | 1992-10-05 | 1999-02-16 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Antisense oligonucleotide inhibition of ras |
GB9301000D0 (en) | 1993-01-20 | 1993-03-10 | Glaxo Group Ltd | Chemical compounds |
US6077668A (en) * | 1993-04-15 | 2000-06-20 | University Of Rochester | Highly sensitive multimeric nucleic acid probes |
CA2333901A1 (en) * | 1998-08-03 | 2000-02-24 | East Carolina University | Low adenosine anti-sense oligonucleotide agent, composition, kit and treatments |
CN1330513A (zh) | 1999-04-06 | 2002-01-09 | 东卡罗来纳大学 | 低腺苷反义寡核苷酸、组合物、试剂盒及与支气管紧缩、肺炎、过敏及表面活性剂缺失相关的通气途径疾病的治疗方法 |
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Patent Citations (4)
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US3337530A (en) * | 1965-09-20 | 1967-08-22 | Upjohn Co | Dinucleoside 3', 5' -and 2', 5'-phosphates containing one 7-deazapurin riboside moiety |
WO1999066037A2 (en) * | 1998-06-17 | 1999-12-23 | Recherches Expertises Et Developpement Medicaux Parenz Inc. | Antisense oligonucleotides for treating or preventing atopic diseases and neoplastic cell proliferation |
WO1999067378A1 (en) * | 1998-06-19 | 1999-12-29 | Mcgill University | ANTISENSE OLIGONUCLEOTIDE CONSTRUCTS BASED ON β-ARABINOFURANOSE AND ITS ANALOGUES |
WO2000012563A1 (en) * | 1998-09-01 | 2000-03-09 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Improved process for the synthesis of oligonucleotides incorporating 2-aminoadenosine |
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