JP4802103B2 - 組成物及び方法 - Google Patents

Description

哺乳類のＧＩ管の満足な状態を維持することは、非常に望ましい目標である。特に関連のあるのは、ＧＩ管の炎症性状態である。デサルホビブリオｓｐｐ．（Desulfovibrio spp.）細菌（こうしたものとしては、デサルフリカンス（desulfuricans）、インテスティナリス（intestinalis）、ブルガリス（vulgaris）等が挙げられるが、これらに限定されるものではない）は、細菌によって放出された場合にＧＩ管の炎症細胞を生じ得る硫化水素を生成する硫酸塩還元細菌である。ヘリコバクター細菌（こうしたものとしては、ヘイルマンニイ（heilmannii）、フェリクス（felix）、ピロリ、ビッゾゼロニイ（bizzozeronii）、サロモニス（salomonis）が挙げられるが、これらに限定されるものではない）は、胃及び上部腸の細胞の潰瘍化及び炎症を引き起こし得る。ＧＩ管の炎症の幾つかの徴候は、急性または慢性下痢、軟質の大便、大便中の血液、嘔吐、不満足な栄養素消化及び吸収、体重減少及び不満足な食欲を含む。疾患の例えば胃炎、腸炎、炎症性腸疾患、潰瘍、幾つかのタイプの癌等は、ＧＩ炎症を主な構成要素として有することが周知である。硫酸塩を硫化物に還元するデサルホビブリオｓｐｐ．のような病原菌はまた、大便中の増大したレベルの硫化物または他の臭気のある化合物が理由となって、ガスまたは大便臭気の増大を引き起こし得る。

本願発明者らは現在、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有する猫は、正常で健康な猫よりも、多数のデサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．を有することを見い出した。本願発明者らはまた、ヘリコバクターは、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を有する全ての猫において検出可能だったが、処理された１２匹の正常な猫につき５匹のみが、ヘリコバクターの検出可能なレベルを有したことを見い出した。本願発明者らはまた、試験されたＩＢＤの猫の４５％は、標準的な検出レベル未満のビフィズス菌（有益な細菌群）のレベルを有し、一方、正常で健康な猫の９％は、標準的な検出レベル未満のビフクドファクテリア（bifcdofactria）を有したことを見い出した。

本発明によれば、コンパニオン動物におけるデサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．のレベルを低下する成分と組み合わせた可食フード組成物を含む、コンパニオン動物による使用のための経口可食フード組成物が存在する。

本発明のさらなる態様は、本発明のフードを経口投与することを含む、コンパニオンペットにおけるデサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．のレベルを低下する方法である。

先に述べたように、デサルホビブリオｓｐｐ．は、ＧＩ管炎症障害であるＩＢＤを有する猫において、この障害を有しない正常な猫よりも高いことが今や発見された。従って、一般にＧＩ管炎症が伴う疾患または障害の明白な臨床的徴候はあってもなくてもデサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．の高いレベルを有する任意のコンパニオンペットにとって、レベルを低下させることは有益であると思われる。利益はまた、デサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．が増大するのを予防すること、すなわち予防効果、から得ることができる。

細菌は、活性剤によって低減させることができる。こうしたものは、抗菌材料の例えば抗生物質、化学療法薬及びその他同様なものを含む。驚くべきことに、繊維も、デサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．のレベルを同様に低下することができる。このような繊維の例としては、オリゴ糖、ガラクタン、ベータグルカン及びこれらの混合物が挙げられる。オリオサッカライド（oliosaccharide）の例としては、キシロオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フルクトオリゴ糖及びその他同様なものが挙げられる。ベータグルカンの例としては、酵母細胞エキス、発芽した大麦、エンバク繊維、カードラン（微生物発酵から得られた多糖）、及びその他同様なものが挙げられる。ガラクタンの例としては、アラビノガラクタン、及びその他同様なものが挙げられる。特に活性剤が繊維である場合、より詳細には繊維がガラクタンの例えばアラビノガラクタンである場合、好ましくは、単数種または複数種のポリフェノールも活性剤と共に存在することができる。ポリフェノールは一般に少なくとも２つのフェノールを有する構造を有し、より好ましくはフラボノイドの例えばタキシフォリン（taxifolin）である。組成物中のポリフェノールの最小量は、最小約０．０１、０．０５または０．１重量％であり、これはコンパニオンペットの日常食に関して測定したものである。最大は一般には約２、１、または０．７５重量％を超えず、これはコンパニオンペットの日常食に関して測定したものであり、全ての重量は乾物ベースである。

抗デサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．有効量の成分を用いることができる。抗菌剤の例えば抗生物質または化学療法剤を、最小約２及び５mg／kgの体重で経口でペットに提供できる。最大は一般に、約２５、５０mg／kgの体重を超えない。繊維に関して、最小は約０．１、０．５、または１．０重量％であり、最大は一般に約５、１０、または２０重量％を超えるべきではなく、これはコンパニオンペットの日常食に関して測定したものであり、乾物ベースである。

デサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．の低減は、ＧＩ管炎症が主な構成要素であるコンパニオンペットにおける疾患及び状態を管理するのを助ける際に有効であることができる。コンパニオンペットの例は、犬、猫、馬、及びその他同様なものである。

実施例−ＩＢＤの猫における増大したレベルの病原菌の存在を示す。
１．猫から得た大便試料をスクリーニングするためのプロトコール：
大便試料を正常で健康な猫及びＩＢＤに関して診断された猫から集めた。正常な猫をサイエンスダイエット（登録商標）フィーラインメンテナンス（登録商標）ドライ（Science Diet （登録商標） Feline maintenance（登録商標） dry）で維持し、一方、ＩＢＤを有する猫を治療のための胃腸用の食餌（therapeutic gastrointestinal diet）で維持した。大便試料を分析の前に−７０℃に凍結した。分析のために、試料をリン酸緩衝液と１：１０（w/w）の比に混合し、ガラスビーズと共に撹拌し、遠心分離して、粒子状物質を除去した。３７５μlの試料のアリコートを、１．１２５mlの４％パラホルムアルデヒドを含む管に加え、４℃で４〜５時間放置した。試料を遠心分離し、ＰＢＳ中で２回洗浄し、次に１５０μlのろ過済みエタノールと混合し、蛍光インシトゥハイブリダイゼーション分析（微生物計数のためのＦＩＳＨ）の前に−２０℃で貯蔵した。属特異的１６ＳｒＲＮＡ標的プローブを合成し、５’末端で蛍光染料を用いて単一標識して（monolabelled）、発酵媒質中の考察の対象となっている細菌を検出した。総核酸を染色して、総細胞計数を得た。データをlog_１０細胞／gの大便として表す。ＦＩＳＨは貯蔵した試料の細菌の定量化を可能にし、培養可能な及び非培養可能な多様性の両方を含む。
結果

こうした結果は、ＧＩ管炎症、特にＩＢＤ、を有する猫は、ＧＩ管中に存在する増大した量の病原菌を有したことを示す。
実施例２：ＩＢＤ及び正常な猫においてＡＧがデサルホビブリオに及ぼすインビボ効果
２．供給の研究のためのプロトコール
ＩＢＤを有する１１匹の猫及び１０匹の正常で健康な猫に、ウェスタンラーチから得た０．６％のアラビノガラクタン抽出物と共に１．０％のビートパルプを含むフードを供給した。抽出物は、約９０重量％のアラビノガラクタン及び約４重量％のポリフェノールであり、主なポリフェノールはタキシフォリンであり、残りは水分であり、全て２週間の乾物ベースだった。これに続いて、猫を、１．５％のビートパルプを単独で含むフードに切り換えた。大便試料を、０日、１４日及び２８日に集めた。試料をＦＩＳＨ分析のために次の通り作製した：各大便試料を凍結するために、５．０gの大便を、無菌の袋またはプラスチック容器中、無酸素性のリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）中でpH７．３で懸濁して、最終濃度１０％（５gの場合４５ml）を与えた。スラリーを袋中で均質化／混合して汚染を避けた。異なる容器を各試料につき使用した。５mlのスラリーを等しい量のグリセロールと混合して、５０：５０混合物を与え、これをＦＩＳＨによる分析のために凍結した。
結果：
１３の完全な組の大便試料を得た。猫が０．６％のＡＧ抽出物を含むフードを摂取した場合、１３匹の猫につき４匹は、０．３log単位以上の減少したデサルホビビロｓｐｐ．（Desulfovibiro spp.）を有した。１３匹の猫につき８匹は、デサルホビブリオｓｐｐ．のレベルの小さな低下を有するかまたは変化がなく、一方、１３匹の猫につき１匹のみがデサルホビブリオｓｐｐ．の増大を有した。猫を、ＡＧを有しないフードに切り換えた場合、１３匹の猫につき１０匹は、０．３log単位以上のデサルホビブリオｓｐｐ．の増大したレベルを有し、１３匹の猫につき２匹は変化がなく、１３匹の猫につき１匹のみがデサルホビブリオｓｐｐ．の低下したレベルを有した。

結果は、ＡＧ抽出物は、猫の大部分においてデサルホビブリオｓｐｐ．の増大を予防することができ、猫の幾匹かにおいて減少させる傾向があったことを示す。これは、猫の大部分においてデサルホビブリオｓｐｐ．の増大を引き起こす傾向があったビートパルプと比較して供給されたレベルにおいてであった。
実施例３−様々な繊維がデサルホビブリオｓｐｐ．のレベルを低下したことを示すインビトロ実験
無酸素性のリン酸緩衝媒質を含む発酵容器を用意し、１mlの犬の大便接種材料（１０％w/vの大便試料を緩衝させた）を加えた。媒質の組成は、Sunvold GD, Hussein HS, Fahey GC, Merchen NR, and Reinhart GA (1995), In vitro fermentation of selected fiber sources by dogs fecal inoculum and in vivo digestion and metabolism of fiber supplemental diets. J. Animal Sci. 73: 1099-1109 (1995)において説明されている。発酵を３９℃で実行した。実験を、様々な繊維を用いてブラインドコード化方法（blind-coded manner）で行った。８時間のインキュベーションの後、１mlの培養流体を除去した。これのアリコートをＦＩＳＨのために作製した。８時間後に、１mlの培養流体を除去し、ＰＢＳ中の４％パラホルムアルデヒドと混合し、ＦＩＳＨのために固定した。属特異的１６ＳｒＲＮＡ標的プローブを合成し、５’末端で蛍光染料を用いて単一標識して、発酵媒質中の考察の対象となっている細菌を検出した。総核酸を染色して、総微生物計数を得た。結果は、幾つかの異なるタイプの繊維は、８時間の発酵の最中デサルホビブリオｓｐｐ．の増殖を０．５〜１．０log単位減少できることを示した（表２を参照されたい）。

従って、本願発明者らは、ＡＧはデサルホビブリオｓｐｐ．のレベルを低下したことをインビトロ及びインビボの両方で示した。

Claims (8)

1. 犬または猫のＧＩ管におけるデサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．の量を低減する方法であって、前記犬または猫にフードを経口投与することを含み、前記フードは、オリゴ糖、ガラクタン、ベータグルカン及びこれらの混合物からなる群から選択される繊維を乾物ベースで０．１から２０重量％含む方法。
2. 前記犬または猫は前記投与を必要とする、請求項１に記載の方法。
3. 前記犬または猫は、ＧＩ管炎症が主な構成要素である疾患を有する、請求項２に記載の方法。
4. 前記繊維は、アラビノガラクタン、キシロオリゴ糖、ガラクトオリゴ糖、フルクトオリゴ糖、イヌリン、発芽した大麦及びこれらの混合物からなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
5. フード中に繊維と共にポリフェノールも存在する、請求項１に記載の方法。
6. ＧＩ管におけるデサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．の高いレベルを有する犬または猫におけるＧＩ管炎症を治療する方法であって、前記犬または猫にフードを経口投与することを含み、前記フードは、オリゴ糖、ガラクタン、ベータグルカン及びこれらの混合物からなる群から選択される繊維を乾物ベースで０．１から２０重量％含む方法。
7. フード中に繊維と共にポリフェノールも存在する、請求項６に記載の方法。
8. デサルホビブリオ及び／またはヘリコバクターｓｐｐ．の高いレベルを有する犬または猫における腸ガス臭気、大便臭気及び任意のこれらの混合物からなる群から選択される臭気を低減する方法であって、前記犬または猫にフードを経口投与することを含み、前記フードは、オリゴ糖、ガラクタン、ベータグルカン及びこれらの混合物からなる群から選択される繊維を乾物ベースで０．１から２０重量％含む方法。