JP4723630B2 - グルコシルセラミド画分 - Google Patents

Description

本発明は、新規なグルコシルセラミド画分に関する。

セラミドは、炭素数１６から２０の長鎖アミノアルコールであるスフィンゴイド塩基に脂肪酸が結合した、いわゆるスフィンゴ脂質の一種である。このセラミドは、皮膚の角質細胞間脂質の主成分として多量（４０％から６０％）に含まれており、皮膚内部からの水分の蒸発を防止するバリア機能を担っている。

近年の研究では、細胞間脂質中のセラミドが加齢に伴い減少して、しわ、ドライスキンあるいは肌荒れの原因になることが示唆されている。また、アトピー性皮膚炎の患者では、健常者よりもセラミドの含量が大幅に減少していることも確認されている。

このように、皮膚におけるセラミド含量は皮膚の健康状態や年齢の指標として重要視されており、また、セラミドの補充が肌の保湿効果や美白効果があることが知られてからは化粧品原料としてのニーズが高くなった。更に、セラミドの内服効果が認められてからは、美容サプリメント素材としてのニーズが高まった。

ところで、従来、セラミドとして牛脳由来のガラクトシルセラミドや化学合成品が利用されてきたが、前者はＢＳＥ問題以降の利用が困難になり、後者は安全性の観点からは食品素材としての利用には制限があった。このため、現在では、米糠や小麦胚芽などの植物由来のグルコシルセラミドが利用されている（例えば、特許文献１参照）。
特開２００２−１３８０３７号公報 特開２００３−２３１６４０号公報 特開２００５−２２００８４号公報 特開２００５−１８７３９２号公報

しかしながら、これらの植物に含まれるグルコシルセラミドの量は０．１から０．２（ｍｇ／ｇ乾燥重量）と微量であるので、抽出や精製に多大なコストを要するという問題があった。

本発明は、このような問題に基づきなされたものであり、低コストで得ることができるグルコシルセラミド画分を提供することを目的とする。

なお、セラミドの効果あるいは機能としては、皮膚保湿作用や美白・美肌作用に加えて、大腸ガン抑制作用、抗嘔吐作用、免疫賦活作用あるいは抗腫瘍効果などが知られている（例えば、特許文献２から４参照）。

本発明のグルコシルセラミド画分は、桃に、クロロホルムとメタノールとを１：１の体積比で混合したものおよびメタノール性水酸化カリウムを加えて溶出させることにより桃から抽出した、グルコース部位と、脂肪酸残基と、スフィンゴイド塩基部位とを有するグルコシルセラミドを含み、脂肪酸残基として２−ヒドロキシパルミチン酸の割合が最も多く、スフィンゴイド塩基部位としてトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンの割合が最も多いものである。このグルコシルセラミド画分は、例えば、桃の果肉または摘果桃から抽出され、２−ヒドロキシ脂肪酸残基の炭素数が１８，２０，２２，２３，２４，２５または２６でありかつ飽和脂肪酸である少なくとも１種の脂肪酸残基と、４−ヒドロキシスフィンガニン、４−ヒドロキシ−トランス−８−スフィンゲニン、４−ヒドロキシ−シス−８−スフィンゲニン、スフィンガニン、トランス−４−スフィンゲニン、およびトランス−４，トランス−８−スフィンガジエニンからなる群のうちの少なくとも１種のスフィンゴイド塩基部位とを更に含んでいる。

本発明のグルコシルセラミド画分によれば、脂肪酸残基として２−ヒドロキシパルミチン酸を最も多く含み、スフィンゴイド塩基部位としてトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンを最も多く含んでいるので、人体に対して優れた効果を得ることができる。特に、桃から抽出することができるので、このようなグルコシルセラミド画分を容易に低コストで得ることができると共に、グルコシルセラミドを多く抽出することができる。よって、このグルコシルセラミド画分を用いるようにすれば、低コストで人体に優れた効果を有する加工品が得られる。

また、ステロール配糖体を含んでいれば、人体に対してより優れた効果を得ることができる。更に、桃の果肉または摘果桃から抽出するようにすれば、低コストでグルコシルセラミドおよびステロール配糖体を多く抽出することができる。

以下、本発明の実施の形態について、図面を参照して詳細に説明する。

本発明の一実施の形態に係るグルコシルセラミド画分は、例えば桃から抽出されるものであり、グルコース部位と、脂肪酸残基と、スフィンゴイド塩基部位とを有するグルコシルセラミドを含んでいる。このグルコシルセラミドは、脂肪酸残基として２−ヒドロキシパルミチン酸を最も多く含んでおり、また、スフィンゴイド塩基部位としてトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンを最も多く含んでいる。主要なグルコシルセラミドの分子種の一例としては、化１に示したものが挙げられる。

また、このグルコシルセラミドは、脂肪酸残基として、２−ヒドロキシパルミチン酸に加えて、例えば、炭素数が１８，２０，２２，２３，２４，２５または２６でありかつ飽和脂肪酸である少なくとも１種の２−ヒドロキシ脂肪酸残基を含んでいる。更に、スフィンゴイド塩基部位として、トランス−４，シス−８−スフィンガジエニンに加えて、例えば、４−ヒドロキシスフィンガニン、４−ヒドロキシ−トランス−８−スフィンゲニン、４−ヒドロキシ−シス−８−スフィンゲニン、スフィンガニン、トランス−４−スフィンゲニン、およびトランス−４，トランス−８−スフィンガジエニンからなる群のうちの少なくとも１種を含んでいる。

なお、グルコシルセラミド画分におけるグルコシルセラミドの脂肪酸残基およびスフィンゴイド塩基部位の組成は、例えば、グルコシルセラミドを分解してガスクロマトグラフィーおよびマススペクトロメトリーにより解析することができる。

このグルコシルセラミド画分を抽出する桃の部位は、果肉、皮、葉、摘果桃などのいずれでもよいが、果肉または摘果桃に多く含まれているので果肉または摘果桃を用いるようにすれば好ましい。

このグルコシルセラミド画分は、また、ステロール配糖体を含んでいることが好ましい。植物性のステロール配糖体はコレステロールを下げる効果があるからである。

グルコシルセラミド画分は、例えば、次のようにして、桃から抽出することができる。まず、桃を乾燥粉砕した試料に有機溶媒を加え、例えば超音波処理することによりグルコシルセラミドを溶出させる。続いて、必要に応じて、溶出液中に共雑するグリセロ脂質の分解を促進させるために、例えば、４２℃程度で保温したのち、有機溶媒および蒸留水を加えて混和し、遠心分離を行う。得られた有機溶媒層を濃縮乾固することによりグルコシルセラミド画分が得られる。

このグルコシルセラミド画分は、皮膚保湿作用、大腸がん抑制作用、抗嘔吐作用、免疫賦活作用、抗腫瘍効果、美肌・美白作用を有しているので、例えば、食品素材、経口医薬・医療品、サプリメント、栄養剤、美容剤などの飲用剤や、外用剤に用いられる。このグルコシルセラミド画分は、安全性が高く、かつ、安価で多量に得ることが可能であるので、食品、栄養剤、美容剤などの飲用剤に適している。

このグルコシルセラミド画分によれば、脂肪酸残基として２−ヒドロキシパルミチン酸を最も多く含み、スフィンゴイド塩基部位としてトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンを最も多く含んでいるので、人体に対して優れた効果を得ることができる。特に、桃から抽出することができるので、このようなグルコシルセラミド画分を容易に低コストで得ることができると共に、グルコシルセラミドを多く抽出することができる。よって、このグルコシルセラミド画分を用いるようにすれば、低コストで人体に優れた効果を有する加工品が得られる。

また、ステロール配糖体を含んでいれば、人体に対してより優れた効果を得ることができる。更に、摘果桃から抽出するようにすれば、低コストでグルコシルセラミドおよびステロール配糖体を多く抽出することができる。

さらに、実施例に基づいて具体的に説明する。

（実施例１−１〜１−４）
まず、桃の果肉、皮、葉、摘果桃を用意し、水洗いした後、凍結乾燥し、粉砕して乾燥粉末とした。次いで、乾燥粉末とした各試料０．３ｇに、クロロホルムとメタノールとを１：１の体積比で混合したもの、およびメタノール性０．８Ｍ水酸化カリウムをそれぞれ２ｍｌずつ加え、５分間の超音波処理(ケニス 超音波ホモジナイザーＶＣ−１３０)によってグルコシルセラミドを溶出させた。続いて、溶出液中に共雑するグリセロ脂質の分解を促進させるために４２℃で３０分間保温した後、クロロホルム５ｍｌおよび蒸留水２．２５ｍｌを加えてよく混和し、３５００ｒｐｍで１５分間遠心分離した。そののち、クロロホルム層を濃縮乾固させ、これをグルコシルセラミド画分として回収した。

次いで、乾固させたグルコシルセラミド画分をクロロホルムとメタノールとを２：１の体積比で混合した混合溶媒１５０μｌに溶解させ、そのうち４μｌをクロロホルムとメタノールと酢酸と水とを２０：３．５：２．３：０．７の体積比で混合した展開溶媒を用いてケイ酸薄層クロマトグラフィーに供した。展開後、オルシノール−硫酸試薬を用いて発色させ、レーンアンドスポットアナライザー（Lane&Spot analyzer）（アトー）によって標準物質（グルコシルセラミドおよびステロール配糖体，いずれもマトレア（Matreya）製の大豆由来精製品）とのスポットの濃さからグルコシルセラミドおよびステロール配糖体の含量を推定した。

比較例１−１〜１−４として、温州みかんパルプ、りんご搾汁残渣、米糠、および小麦胚芽を用意し、実施例１−１〜１−４と同様にして、乾燥粉末試料を作製し、グルコシルセラミド画分を抽出して、グルコシルセラミドおよびステロール配糖体の含量を推定した。

表１に得られた結果を示す。表１に示したように、桃にはグルコシルセラミドが多く含まれていることが分かった。また、桃の部位では、果肉または摘果桃に多く含まれていることが分かった。更に、桃から抽出したグルコシルセラミド画分には、ステロール配糖体が多く含まれていることも分かった。

（実施例２）
桃の果肉から抽出したグルコシルセラミドの構成成分の組成を調べた。まず、実施例１−１と同様にして桃の果肉からグルコシルセラミド画分を抽出し、ケイ酸薄層クロマトグラフィーによりグルコシルセラミドを分離精製した。次いで、分離精製したグルコシルセラミド２ｍｇをスクリューキャップ付ガラス試験管に入れ、無水メタノール性１Ｎ塩酸２ｍｌを加えて１００℃で4時間加熱して分解した。放冷後、蒸留水１ｍｌを加えてから、脂肪酸メチルエステルを２ｍｌのヘキサンで３回抽出し、抽出液をガスクロマトグラフィーおよびマススペクトロメトリーに供し、脂肪酸残基の鎖長を推定した。

また、分離精製したグルコシルセラミド２ｍｇを１ｍｌの含水メタノール性１Ｎ塩酸とともに７０℃で１８時間反応させて分解した。次いで、共雑する脂肪酸メチルエステルおよび遊離脂肪酸を１ｍｌのヘキサンで３回回収した。続いて、精製後のメタノール層に濃水酸化カリウム液を加えてｐＨを９．７以上に調整し、等容の蒸留水を加えてから、２ｍｌのジエチルエーテルで３回スフィンゴイド塩基を抽出した。ジエチルエーテル層を濃縮乾固した後、スフィンゴイド塩基をメタノール１ｍｌに溶解させ、これに新鮮な０．２Ｍ過ヨウ素酸ナトリウム０．２ｍｌを加え、室温の暗所で２時間静置した。ヘキサン２．４ｍｌと蒸留水１．２ｍｌを混和して３５００ｒｐｍで１５分間遠心し、上層をヘキサンで３回抽出した。抽出液を濃縮乾固し、得られた脂肪性アルデヒドをガスクロマトグラフィーおよびマススペクトロメトリーに供し、スフィンゴイド塩基の鎖長および極性部位の構造を推定した。

表２に得られた結果を他の植物から抽出したグルコシルセラミドの構成成分の組成と共に示す。表２において、２−ヒドロキシ脂肪酸はｘｈ：ｙ(ｘは=炭素数、ｙは二重結合数)と略記した。また、スフィンゴイド塩基の略記の意味は、ｔ１８：０が４−ヒドロキシスフィンガニン、ｔ１８：１^８ｔが４−ヒドロキシ−トランス−８−スフィンゲニン、ｔ１８：１^８ｃが４−ヒドロキシ−シス−８−スフィンゲニン、ｄ１８：０がスフィンガニン、ｄ１８：１^８ｔがトランス−８−スフィンゲニン、ｄ１８：１^８ｃがシス−８−スフィンゲニン、ｄ１８：１^４ｔがトランス−４−スフィンゲニン、ｄ１８：２^{４ｔ，８ｔ}がトランス−４，トランス−８−スフィンガジエニン、ｄ１８：２^{４ｔ，８ｃ}がトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンである。

表２に示したように、桃の果肉から抽出したグルコシルセラミドは、脂肪酸残基として２−ヒドロキシパルミチン酸を最も多く含んでおり、スフィンゴイド塩基部位としてトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンを最も多く含んでいた。また、他の脂肪酸残基としては、炭素数が１８，２０，２２，２３，２４，２５または２６でありかつ飽和脂肪酸である２−ヒドロキシ脂肪酸残基を含んでいた。他のスフィンゴイド塩基部位としては、４−ヒドロキシスフィンガニン、４−ヒドロキシ−トランス−８−スフィンゲニン、４−ヒドロキシ−シス−８−スフィンゲニン、スフィンガニン、トランス−４−スフィンゲニン、およびトランス−４，トランス−８−スフィンガジエニンを含んでいた。このように、桃の果肉から抽出したグルコシルセラミドは、他の植物から抽出したグルコシルセラミドとは構成成分の組成が異なっていたが、他の果物から抽出したグルコシルセラミドとは類似が見られた。

（実施例３−１〜３−６）
桃の果実の収穫時期を変えて成熟度の異なる果肉を６種類用意した。各果肉について、実施例１−１と同様にして、乾燥粉末試料を作製し、グルコシルセラミド画分を抽出して、ケイ酸薄層クロマトグラフィーによりグルコシルセラミドおよびステロール配糖体の含量を推定した。

表３および図１に得られた結果を示す。表３および図１に示したように、果実の成熟と共に桃の果肉に含まれるグルコシルセラミドおよびステロール配糖体の量は増加する傾向が見られたが、グルコシルセラミドについては顕著な差異ではなかった

以上、実施の形態を挙げて本発明を説明したが、本発明は上記実施の形態に限定されるものではなく、種々変形可能である。例えば、上記実施の形態および実施例では、グルコシルセラミド画分の組成を具体的に説明したが、他の組成を含んでいてもよい。また、組成比は実施例に限定されるものではない。

食品素材、医薬品、医療品、サプリメント、栄養剤、美容剤などに用いることができる。

桃の果実の成熟度と、果肉から抽出したグルコシルセラミド画分に含まれるグルコシルセラミドおよびステロール配糖体の量との関係を表す特性図である。

Claims (5)

1. 桃に、クロロホルムとメタノールとを１：１の体積比で混合したものおよびメタノール性水酸化カリウムを加えて溶出させることにより桃から抽出した、
   グルコース部位と、脂肪酸残基と、スフィンゴイド塩基部位とを有するグルコシルセラミドを含み、
   脂肪酸残基として２−ヒドロキシパルミチン酸の割合が最も多く、スフィンゴイド塩基部位としてトランス−４，シス−８−スフィンガジエニンの割合が最も多い
   ことを特徴とするグルコシルセラミド画分。
2. 桃に、クロロホルムとメタノールとを１：１の体積比で混合したもの、およびメタノール性水酸化カリウムを加え、加熱して抽出したことを特徴とする請求項１記載のグルコシルセラミド画分。
3. 桃の果肉または摘果桃から抽出したことを特徴とする請求項１または請求項２に記載のグルコシルセラミド画分。
4. ２−ヒドロキシ脂肪酸残基の炭素数が１８，２０，２２，２３，２４，２５または２６でありかつ飽和脂肪酸である少なくとも１種の脂肪酸残基と、
   ４−ヒドロキシスフィンガニン、４−ヒドロキシ−トランス−８−スフィンゲニン、４−ヒドロキシ−シス−８−スフィンゲニン、スフィンガニン、トランス−４−スフィンゲニン、およびトランス−４，トランス−８−スフィンガジエニンからなる群のうちの少なくとも１種のスフィンゴイド塩基部位と
   を更に含むことを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか１項に記載のグルコシルセラミド画分。
5. 更に、ステロール配糖体を含むことを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか１項に記載のグルコシルセラミド画分。
   

Images