JP4202660B2 - サロモニオサイド及びその製造方法、並びにグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、プラーク形成抑制剤及び口腔用組成物 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規なトリテルペン配糖体であるサロモニオサイド及びその製造方法、う蝕の原因となるグルカンを合成する酵素（グルコシルトランスフェラーゼ）の活性を阻害する作用があるグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、口腔内微生物の生育場所となるプラーク（歯垢）の形成を抑制する作用があるプラーク形成抑制剤、並びにう蝕予防作用を付与した口腔用組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
う蝕の発生には口腔内の微生物、特にストレプトコッカス・ミュータンス（以下「Ｓ．ｍｕｔａｎｓ」と略記する）及びストレプトコッカス・ソブリナス（以下「Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ」と略記する）が産生する酵素であるグルコシルトランスフェラーゼが関与している。
【０００３】
即ち、口腔内に残った飲食物中のショ糖の一部がグルコシルトランスフェラーゼの作用によって水不溶性且つ付着性の強いグルカンに変化し、それが口腔内微生物と共に歯の表面に付着してプラーク（歯垢）を形成する。そして、プラーク内の微生物が糖類を代謝して酸を作り、この酸が歯のエナメル質を脱灰し侵食するのがう蝕である。また、プラークはう蝕の他、口臭の原因となったり、その進行によって歯周病、歯肉炎、更には歯槽膿漏に発展する場合もある。
【０００４】
従って、う蝕を防ぐには、歯の表面に付着したプラークを歯磨き等を行って除くだけではなく、口腔におけるＳ．ｍｕｔａｎｓ及びＳ．ｓｏｂｒｉｎｕｓの増殖やグルコシルトランスフェラーゼの作用を阻害することによってグルカンの生成を防止し、ひいてはプラークが生じないようにするのが最も効果的である。
【０００５】
このような観点から、近年、グルコシルトランスフェラーゼ阻害作用を有する物質を含有させることにより、う蝕予防作用を付与した口腔用組成物が提供されている。
【０００６】
このような用途に適したグルコシルトランスフェラーゼ阻害物質としては、例えば、タイソウ、ウイキョウ、芍薬、ゲンチアナ、センソ、龍胆、黄連、センブリ（特開昭５８−１２１２１８号公報）、エラグ酸及びエラグ酸を含有するゲンノショウコ、ユーカリ（特開昭６４−１０９８５号公報）、シャクヤク、ビワヨウ、ジョウインチン、チユ（特開平４−９５０２０号公報）、ムタスティン、生薬タンニン類、エラグ酸、緑茶ポリフェノール、ウーロン茶抽出物などが提案されているが、更なる、安全かつ安価でありながら高いグルコシルトランスフェラーゼ阻害作用及びプラーク形成抑制作用を有する抗う蝕剤の速やかな提供が望まれている。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、このような状況下、従来における諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。
即ち、本発明は、新規なトリテルペン配糖体であるサロモニオサイド及びその製造方法、該サロモニオサイドを有効成分とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、プラーク形成抑制剤、及びこれらを配合してう蝕予防作用を付与した口腔用組成物を提供することを目的とする。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、前記課題を解決すべくヒメハギ科植物の抽出物の構成成分とその活性について鋭意検討を重ねた結果、ヒメハギ科吹雲草の抽出物中に未確認の活性物質（サロモニオサイド）が存在することを知見すると共に、このサロモニオサイドが優れたグルコシルトランスフェラーゼ阻害作用及びプラーク形成抑制作用を有し、う蝕予防に効果的であることを見出した。
【０００９】
即ち、本発明は、前記課題を解決するため、下記のサロモニオサイド及びその製造方法、並びにグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、プラーク形成抑制剤及び口腔用組成物を提供する。
【００１０】
請求項１の発明は、下記式（１）で表されることを特徴とするサロモニオサイドである。
【化２】
（但し、式中Ａｃはアセチル基を示す。）
請求項２の発明は、下記（ｉ）〜（ｉｖ）工程により得られることを特徴とする上記式（１）で表されるサロモニオサイドである。
（ｉ）ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）の地上部を、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒により抽出する工程
（ｉｉ）前記（ｉ）工程で得られた抽出物を多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出する工程
（ｉｉｉ）前記（ｉｉ）工程のアルコール抽出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理し、水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いて溶出する工程
（ｉｖ）溶出後の溶出液を、移動相として水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する工程
請求項３の発明は、下記（ｉ）〜（ｉｖ）工程を順次行うことを特徴とする上記式（１）で表されるサロモニオサイドの製造方法である。
（ｉ）ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）の地上部を、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒により抽出する工程
（ｉｉ）前記（ｉ）工程で得られた抽出物を多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出する工程
（ｉｉｉ）前記（ｉｉ）工程のアルコール抽出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理し、水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いて溶出する工程
（ｉｖ）溶出後の溶出液を、移動相として水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する工程
請求項４の発明は、請求項１又は２に記載の上記式（１）で表されるサロモニオサイドを有効成分として含むことを特徴とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤である。
請求項５の発明は、請求項１又は２に記載の上記式（１）で表されるサロモニオサイドを有効成分として含むことを特徴とするプラーク形成抑制剤である。
請求項６の発明は、請求項４に記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤及び／又は請求項５に記載のプラーク形成抑制剤を配合してなることを特徴とする口腔用組成物である。
【００１１】
なお、トリテルペン配糖体のうち、構造が確定したものとして、３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２β，３β，２７−トリヒドロキシオレアン−１２−エン−２３，２８−ジオイックアシッド ２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４）−［β−Ｄ−アピオフラノシル（１→３）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−フコピラノシドが挙げられるが、上記式（１）で表されるサロモニオサイド、即ち３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２β，３β，２７−トリヒドロキシオレアン−１２−エン−２３，２８−ジオイックアシッド２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４）−［５−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−アピオフラノシル（１→３）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−３，４−Ｏ−ジアセチル−β−Ｄ−フコピラノシドとは明らかに構造が異なる。しかも、このサロモニオサイドがグルコシルトランスフェラーゼ阻害作用及びプラーク形成抑制作用を兼ね備え、う触予防に効果的であることは全く知られておらず、これらのことは本発明者らの新知見である。
【００１２】
【発明の実施の形態】
以下、本発明について、更に詳しく説明する。
＜サロモニオサイド＞
本発明のサロモニオサイドは、下記式（１）で表されるものである。
【００１３】
【化３】
（但し、式中Ａｃはアセチル基を示す。）
【００１４】
ここで、前記サロモニオサイドが、上記式（１）で表される３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２β，３β，２７−トリヒドロキシオレアン−１２−エン−２３，２８−ジオイックアシッド ２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４）−［５−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−アピオフラノシル（１→３）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−３，４−Ｏ−ジアセチル−β−Ｄ−フコピラノシドの構造をとることは、後述する実施例において確定されている。
【００１５】
前記式（１）で表されるサロモニオサイドは、ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）の抽出物から初めて単離された新規物質であるが、吹雲草以外の植物体、例えば、同じヒメハギ科（Ｐｏｌｙｇａｌａｃｅａｅ）のセネガ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｓｅｎａｇａ Ｌ．）、ヒロハセネガ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｓｅｎａｇａ Ｌ．ｖａｒ．ｌａｔｉｆｏｌｉａ Ｔｏｒｒｅｙ ｅｔ Ｇｒａｙ）、オンジ（Ｐｏｌｙｇａｌａ ｔｅｎｕｉｆｏｌｉａ Ｗｉｌｌｄ．）にも存在する可能性がある。従って、上記式（１）で表されるサロモニオサイドを含有する植物であれば特に制限されず、いずれも抽出原料とすることができる。
【００１６】
次に、本発明の上記式（１）で表されるサロモニオサイドは、下記（ｉ）〜（ｉｖ）工程により得ることができる。
（ｉ）ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）を、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒により抽出する工程
（ｉｉ）前記（ｉ）工程で得られた抽出物を多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出する工程
（ｉｉｉ）前記（ｉｉ）工程のアルコール抽出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理する工程
（ｉｖ）吸着処理後の溶出液を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する工程
【００１７】
＜（ｉ）の抽出工程＞
抽出原料である吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）は、葉、茎等の地上部のみを使用することができる。
前記抽出原料は、抽出効率を向上させる観点から適当な大きさに粉砕してから、水、親水性有機溶媒、又はこれらの混合溶媒を溶媒の沸点程度の温度で抽出処理する。
【００１８】
前記親水性有機溶媒としては、例えばメタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコールなどが挙げられ、これら親水性有機溶媒と水との混合溶媒などを用いることができる。なお、水と親水性有機溶媒との混合系溶媒を使用する場合には、低級アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部、低級脂肪族ケトンの場合は水１０質量部に対して１〜４０質量部、多価アルコールの場合は水１０質量部に対して１〜９０質量部添加することが好ましい。
【００１９】
本発明において、吹雲草から有効成分を抽出するにあたり特殊な抽出方法を採用する必要は無く、還流加熱下で、溶媒の種類や抽出規模に応じて任意の装置を用いて抽出を行うことができる。
【００２０】
具体的には、抽出溶媒を満たした処理槽に抽出原料を投入し、時々攪拌して可溶性成分を溶出する。その後、濾過して抽出残査を除き、得られた抽出液を濃縮、乾燥することにより、有効成分を含有する抽出物を得ることができる。抽出条件は、抽出溶媒として水を用いた場合には、通常５０〜９０℃で３０分〜２時間程度である。また、抽出溶媒として水とエタノールとの混合溶媒を用いた場合には、通常４０〜８０℃で３０分〜２時間程度である。
【００２１】
＜（ｉｉ）の多孔性樹脂による精製工程＞
（ｉｉ）工程では、前記（ｉ）工程で得られた抽出物を、脱色、脱臭、活性向上などを目的として多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出し、精製する。この場合、多孔性樹脂としては、特に制限はなく目的に応じて適宜選択でき、例えば、セパビーズＳＰ−２０７、ダイアイオンＨＰ−２０（いずれも三菱化学（株）製）などを用いることができる。また、アルコールとしては、メタノール、エタノールなどを用いることが好ましい。
【００２２】
＜（ｉｉｉ）の吸着工程＞
（ｉｉｉ）の工程では、前記（ｉｉ）工程のアルコール溶出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理する。
前記移動相としては、水と水溶性溶媒との混合物が用いられ、水溶性溶媒としては、メタノールなどが挙げられる。具体的には、メタノール：水＝５０：５０（容量比）などを用いることができる。
また、吸着剤としてはオクタデシルシリカゲル（ＯＤＳ）が好適に使用される。
具体的には、ＯＤＳを充填したガラス製のカラムを用い、移動相としてメタノール：水＝６０：４０（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、サロモニオサイド濃縮物を得ることができる。
【００２３】
＜（ｉｖ）の液体クロマトグラフィー工程＞
前記（ｉｖ）の工程では、吸着処理後の溶出液を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する。
これにより、本発明の上記式（１）で表されるサロモニオサイドを含有する区分を分画して、純粋なサロモニオサイドを単離することができる。
液体クロマトグラフィーによる分画方法としては、特に制限されず、通常の方法で行うことができる。例えば、固定相としては、シリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂などの公知の担体を適宜選択して使用することができる。また、移動相としては、水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒が用いられ、水溶性溶媒としては、メタノールなどが好適に用いられる。
なお、前記分画操作は、単独の固定相を用いてもよく、また、別種の固定相を組み合わせて行うこともできる。
【００２４】
＜サロモニオサイドの製造方法＞
本発明のサロモニオサイドの製造方法は、下記（ｉ）〜（ｉｖ）工程を順次行うものである。これにより、優れたう触防止効果を有するサロモニオサイドを効率良く製造することができる。
（ｉ）ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）の地上部を、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒により抽出する工程
（ｉｉ）前記（ｉ）工程で得られた抽出物を多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出する工程
（ｉｉｉ）前記（ｉｉ）工程のアルコール抽出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理する工程
（ｉｖ）吸着処理後の溶出液を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する工程
なお、前記（ｉ）〜（ｉｖ）工程の詳細については、上述した通りである。
【００２５】
＜グルコシルトランスフェラーゼ阻害剤、プラーク形成抑制剤、口腔用組成物＞次に、本発明のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤及びプラーク形成抑制剤は、下記式（１）で表されるサロモニオサイドを有効成分として含有するものである。
【００２６】
【化４】
（但し、式中Ａｃはアセチル基を示す。）
【００２７】
また、本発明の口腔用組成物は、前記グルコシルトランスフェラーゼ阻害剤及びプラーク形成抑制剤を配合口腔におけるグルカン生成の防止とプラーク形成の抑制に利用することができる。
【００２８】
前記口腔用組成物としては、各種歯磨き類、マウスウォッシュ、トローチ、口腔用パスタ、歯肉マッサージクリーム、うがい剤、口中清涼剤、菓子、パン、キャンディー、チューインガム、グミ、ゼリー、チョコレート、錠菓、ペットフードなどが挙げられる。この場合、う触防止剤の口腔用組成物に対する配合量は活性の強さや添加対象物によって異なり一概には規定することはできないが、上記式（１）のサロモニオサイドとして約０．００１〜５．０質量％であり、特に約０．０５〜１．０質量％であることが好ましい。
【００２９】
本発明の口腔用組成物には、前記サロモニオサイド以外にも他のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤を併用してもよく、また、ストレプトコッカス・ミュータンスに対して有効な抗菌剤を添加してもよい。更に、任意の抗炎症剤、抗菌剤、消臭剤等を添加することにより、口腔用剤として一層優れたものを提供することができる。
【００３０】
前記抗炎症剤としては、例えば、アセンヤク、カンゾウ、ウワウルシ、オウゴン、コウキ、サイコ、サンザシ、シゾ、シャクヤク、ソウハクヒ、キョウニン、タイソウ、チョウジ、トウニン、ニクズク、ボタンピ、クワの葉等の抽出物；アズレン、アラントイン、ウルソール酸、オレアノール酸、グリチルリチン酸、グリチルレチン酸又はその誘導体；トコフェロール、トラネキサム酸などを挙げることができる。
【００３１】
前記抗菌剤としては、例えば、ゴバイシ、サイシン、サンショ、ショウキョウ、ディル、タイム、ローズマリー、油溶性甘草エキス等の抽出物；アスコルビン酸、ムタスティン、フミン酸、リノール酸、リノレン酸などを挙げることができる。
【００３２】
前記消臭剤としては、例えば、アマチャ、ウイキョウ、ウラジロガシ、ケイヒ、コショウ、メース、セージ、シソ、イチョウ、カキ葉、緑茶、ウーロン茶、トウガラシ、タマリンドハスク等の抽出物；ロジン、カキ渋、アクチゾル、クロロフィリン誘導体、エラグ酸、クロルヘキシジン、メイラード反応物などを挙げることができる。
【００３３】
また、本発明の口腔用組成物には、上記成分以外にも口腔用組成物に普通に用いられる研磨剤、界面活性剤、粘着剤、粘稠剤、甘味剤、防腐剤、香料、各種色素などを目的に応じて適宜選択して配合することができる。
例えば、リン酸水素カルシウム、炭酸カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、アルミノシリケート、無水ケイ酸、レジン等の研磨剤；長鎖アルキル硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、ラウリルジエタノールアマイド、ショ糖脂肪酸エステル等の界面活性剤；ＣＭＣ、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラゲナン、アラビアガム、ポリビニルアルコール等の粘着剤；ポリエチレングリコール、ソルビトール、グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤；サッカリン、ステビオサイド類、グリチルリチン酸、ソーマチン、アスパルテーム等の甘味剤；デヒドロ酢酸、デヒドロ酢酸ナトリウム等の防腐剤；メントール、カルボン、オイゲノール、アネトール、ハッカ油、スペアミント油、ペパーミント油、ユーカリ油、ジンジャー油、アニス油等の香料；各種色素などを配合し得る。
【００３４】
【実施例】
以下、実施例を示して本発明をより具体的に説明するが、本発明は下記実施例に何ら制限されるものではない。
【００３５】
［実施例１］
吹雲草地上部５３．１ｇを粉砕してフラスコに取り、５０％エタノール水溶液を加えて、８０℃で２時間抽出した後、ろ過した。このろ液を４０度以下の温度で減圧下濃縮した後、４０度で減圧乾燥を行い、抽出物１１．５ｇを得た。
【００３６】
得られた抽出物７ｇに水１００ｍＬを加え懸濁させ、多孔性樹脂（ＤＩＡＩＯＮ ＨＰ−２０：三菱化学（株）製，５００ｍＬ）上に付し、水２Ｌ、メタノール２Ｌの順で溶出させた。
【００３７】
前記メタノール２Ｌで溶出させた画分を、メタノールを留去してメタノール溶出画分３．２ｇを得た。
このメタノール溶出画分をメタノール：水＝２０：８０（容量比）の混合溶液に溶解し、ＯＤＳ（商品名 クロマトレックスＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ、富士シリシア化学（株）製）を充填したガラス製のカラム上部より流入して、ＯＤＳに吸着させた。
移動相としてメタノール：水＝６０：４０（容量比）を流し、その溶出液を集め、脱溶媒して、サロモニオサイド濃縮物３００ｍｇを得た。
得られたサロモニオサイド濃縮物を下記の条件で液体クロマトグラフィーを用いて分画した。
【００３８】
＜液体クロマトグラフィー条件＞
固定相 ：ＪＡＩＧＥＬ ＧＳ−３１０（日本分析工業製）
カラム径 ：２０ｍｍ
カラム長 ：２５０ｍｍ
移動相流量：９ｍＬ／ｍｉｎ
検出 ：ＲＩ
【００３９】
ここで、保持時間６０分〜７０分に流出する画分を、リサイクルにより精製を行い、サロモニオサイドを単離した。
この単離したサロモニオサイドについてＥＳＩ−マススペクトル、^１Ｈ−ＮＭＲ及び^１３Ｃ−ＮＭＲ分析を行った。結果を下記に示す。
＜ＥＳＩ−マススペクトル＞
ｍ／ｚ １３８５（Ｍ＋Ｎａ）^＋，ｍ／ｚ １３６２（Ｍ⁻）
【００４０】
【化５】
【００４１】
< ^１ Ｈ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属水素）： >
０．７８（３Ｈ，ｓ，２９−Ｈ３），０．９８（３Ｈ，ｓ，３０−Ｈ３），１．０８（３Ｈ，ｓ，２６−Ｈ３），１．１９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｒｈａ−６−Ｈ３），１．５８（３Ｈ，ｓ，２５−Ｈ３），１．８５（３Ｈ，ｓ，Ａｃ’’−２−Ｈ３），１．９６（３Ｈ，ｓ，２４−Ｈ３），２．０４（３Ｈ，ｓ，Ａｃ’’’−２−Ｈ３），２．０９（３Ｈ，ｓ，Ａｃ’−２−Ｈ３）３．１９（１Ｈ，ｄｄ−ｌｉｋｅ，１８−Ｈ），３．９０，４．０２（１Ｈ ｅａｃｈ，ｂｏｔｈ ｍ，２７−Ｈ２），４．２０，４．２６（１Ｈ ｅａｃｈ，ｂｏｔｈ ｍ，Ｒｈａ−５−Ｈ２），４．５９（１Ｈ，ｄ−ｌｉｋｅ，３−Ｈ），４．７０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，２−Ｈ），５．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｇｌｃ−１−Ｈ），５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｘｙｌ−１−Ｈ），５．５３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６，９．８Ｈｚ，Ｆｕｃ−３−Ｈ），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ，Ｆｕｃ−４−Ｈ），５．６２（１Ｈ、ｂｒ ｓ，Ｒｈａ−１−Ｈ），５．７７（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１２−Ｈ），５．９４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ，Ａｐｉ−１−Ｈ），６．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ，Ｆｕｃ−１）
【００４２】
< ^１３ Ｃ−ＮＭＲケミカルシフトδ（帰属炭素）： >
１４．４（２４−Ｃ），１６．２（Ｆｕｃ−６−Ｃ），１７．７（２５−Ｃ），１８．９（Ｒｈａ−６−Ｃ），１９．２（２６−Ｃ），２０．５（Ａｃ’’’−２−Ｃ），２０．７（Ａｃ’’−２−Ｃ），２０．８（Ａｃ’−２−Ｃ），２１．４（６−Ｃ），２３．７（１５−Ｃ），２３．９（７−Ｃ），２４．１（１１−Ｃ），２４．２（３０−Ｃ），２４．７（１６−Ｃ），３０．９（２０−Ｃ），３２．５（２２−Ｃ），３３．２（２９−Ｃ），３４．０（２１−Ｃ），３７．２（１０−Ｃ），４１．３（８−Ｃ），４２．１（１８−Ｃ），４４．４（１−Ｃ），４５．６（１９−Ｃ），４７．１（１７−Ｃ），４８．１（１４−Ｃ），４９．４（９−Ｃ），５３．０（４−Ｃ），５２．６（５−Ｃ），６２．９（Ｇｌｃ−６−Ｃ），６４．７（２７−Ｃ），６７．１（Ａｐｉ−４−Ｃ），６７．３（Ｘｙｌ−５−Ｃ），６９．２（Ｒｈａ−５−Ｃ），７０．０（Ｆｕｃ−５−Ｃ），７０．４（２−Ｃ），７１．２（Ｘｙｌ−４−Ｃ），７１．３（Ｆｕｃ−４−Ｃ），７１．６（Ｒｈａ−２−Ｃ），７１．７（Ｇｌｃ−４−Ｃ），７４．１（Ｆｕｃ−３−Ｃ），７４．６（Ｆｕｃ−２−Ｃ，Ａｐｉ−５−Ｃ），７５．３（Ｇｌｃ−２−Ｃ），７５．６（Ｘｙｌ−２−Ｃ），７７．７（Ａｐｉ−３−Ｃ），７８．２（Ｒｈａ−４−Ｃ，Ａｐｉ−２−Ｃ），７８．４（Ｇｌｃ−３−Ｃ），７８．５（Ｇｌｃ−５−Ｃ），７８．６（Ｘｙｌ−３−Ｃ），８１．９（Ｒｈａ−３−Ｃ），８６．１（３−Ｃ），９４．４（Ｆｕｃ−１−Ｃ），１０２．４（Ｒｈａ−１−Ｃ），１０５．２（Ｘｙｌ−１−Ｃ），１０５．４（Ｇｌｃ−１−Ｃ），１１１．４（Ａｐｉ−１−Ｃ），１２７．８（１２−Ｃ），１３８．９（１２−Ｃ），１７０．１（Ａｃ’−１−Ｃ），１７０．６（Ａｃ’’’−１−Ｃ），１７０．７（Ａｃ’’−１−Ｃ），１７６．３（２８−Ｃ），１８０．６（２３−Ｃ）
【００４３】
以上の結果から、多孔性樹脂による精製、ＯＤＳによる分離、更に液体クロマトグラフィーで単離して得られたサロモニオサイドが、前記式（１）で表される３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−２β，３β，２７−トリヒドロキシオレアン−１２−エン−２３，２８−ジオイックアシッド ２８−Ｏ−β−Ｄ−キシロピラノシル（１→４）−［５−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−アピオフラノシル（１→３）］−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−３，４−Ｏ−ジアセチル−β−Ｄ−フコピラノシドであることが確定した。
【００４４】
〔実施例２〕 グルコシルトランスフェラーゼ阻害試験
実施例１のサロモニオサイド試料溶液（溶媒：５０％エタノール）５０μＬ、アジ化ナトリウム０．１％を含有した２％ショ糖水溶液１０００μＬ、粗グルコシルトランスフェラーゼ溶液（ストレプトコッカス・ミュータンスより調製したもの）５０μＬ及び蒸留水９００μＬを試験管に加え、混合した。３７℃で５時間反応させた後、生成したグルカンを撹拌器により水中に分散させ、５５０ｎｍの吸光度を濁度の指標として測定した。
【００４５】
別に、コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液の溶媒を加えた場合について同様の操作を行った。更に、それぞれの場合について粗グルコシルトランスフェラーゼ溶液を添加せずに同様の操作と測定を行った。
測定結果から、下記の計算式（１）によりグルコシルトランスフェラーゼ活性の阻害率を算出した。
【００４６】
＜数式１＞
阻害率（％）＝〔１−（Ａ−Ｂ）／（Ｃ−Ｄ）〕×１００
但し、Ａ：試料溶液の酵素反応後の吸光度
Ｂ：試料溶液の酵素無添加時の吸光度
Ｃ：コントロールの酵素反応後の吸光度
Ｄ：コントロールの酵素無添加時の吸光度
【００４７】
実施例１のサロモニオサイド１０００ｐｐｍについて上記試験を行った。結果を表１に示す。
【００４８】
【表１】
表１の結果から、サロモニオサイドは高いグルコシルトランスフェラーゼ活性阻害作用を有することが認められた。
【００４９】
〔実施例３〕 プラーク形成抑制試験
予め、秤量した試験管にショ糖２％を含むブレインハートインフュージョンブロス（日水製薬社製）５．３５ｍＬを加えた。加熱滅菌処理後、実施例１のサロモニオサイド試料溶液(溶媒：５０％エタノール)０．１５ｍＬ及びストレプトコッカス・ミュータンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｍｕｔａｎｓ）６７１５の培養液０．５ｍＬを添加し、３７℃で１９時間培養を行った。培養終了後、上清を静かに除き、試験管壁のプラーク状付着物をそのまま蒸留水で３回洗浄した後、１０５℃で５時間乾燥した。最後に、試験管ごと秤量して、管内のプラーク状付着物の乾燥質量（ｗ）ｇを求めた。
【００５０】
別に、コントロールとして、試料溶液の代わりに試料溶液の溶媒を用いて上記と同様の操作を行い、プラーク状付着物の乾燥質量（Ｗ）ｇを求めた。
測定されたプラーク状付着物の乾燥質量（ｗ）ｇ及び（Ｗ）ｇから、下記計算式（２）によりプラーク形成抑制率（％）を算出した。
【００５１】
＜数式２＞
プラーク形成抑制率（％）＝（１−ｗ／Ｗ）×１００
【００５２】
実施例１のサロモニオサイド１０００ｐｐｍについて上記試験を行った。結果を表２に示す。
【００５３】
【表２】
表２の結果から、サロモニオサイドは高いプラーク形成抑制作用を有することが認められた。
【００５４】
〔実施例４〕
下記の原料を混合して、う蝕防止性の練り歯磨きを製造した。
実施例１のサルモニオサイド １質量部
第二リン酸カルシウム ４５質量部
ＣＭＣ・ナトリウム塩 １質量部
グリセリン ２０質量部
ラウリル硫酸ナトリウム ２質量部
１−メントール １質量部
水 ３０質量部
【００５５】
〔実施例５〕
下記の原料を混合して、う蝕防止性のマウスウォッシュを製造した。
実施例１のサルモニオサイド １質量部
エタノール ２０質量部
グリセリン ０．２質量部
クロルヘキシジン ５質量部
１−カルボン ０．００５質量部
水 ７４質量部
【００５６】
〔実施例６〕
下記の原料をチューインガム製造の常法により処理して、う蝕予防作用を有するチューインガムを製造した。
実施例１のサルモニオサイド ５質量部
チューインガムベース ２０質量部
ショ糖 ５０質量部
水飴 ２０質量部
軟化剤 ４質量部
香料 １質量部
【００５７】
〔実施例７〕
下記の原料を飴製造の常法により混合、濃縮、成形して、う蝕予防作用を有する飴を製造した。
実施例１のサルモニオサイド ３質量部
ショ糖 ７０質量部
水飴 ３０質量部
クエン酸 １質量部
香料 ０．１質量部
水 １５質量部
【００５８】
【発明の効果】
以上説明したように、本発明の新規なトリテルペン配糖体であるサロモニオサイドは、う蝕の原因となるグルカンを合成する酵素（グルコシルトランスフェラーゼ）の活性を阻害する作用と、口腔内微生物の生育場所となるプラーク（歯垢）の形成を抑制する作用を備えている。
従って、サロモニオサイドを有効成分として含むグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤又はプラーク形成抑制剤を配合することにより高いう蝕予防作用を有する口腔用組成物が得られる。

Claims (6)

1. 下記式（１）で表されることを特徴とするサロモニオサイド。
   （但し、式中Ａｃはアセチル基を示す。）
2. 下記（ｉ）〜（ｉｖ）工程により得られることを特徴とする上記式（１）で表されるサロモニオサイド。
   （ｉ）ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）の地上部を、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒により抽出する工程
   （ｉｉ）前記（ｉ）工程で得られた抽出物を多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出する工程
   （ｉｉｉ）前記（ｉｉ）工程のアルコール抽出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理し、水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いて溶出する工程
   （ｉｖ）溶出後の溶出液を、移動相として水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する工程
3. 下記（ｉ）〜（ｉｖ）工程を順次行うことを特徴とする上記式（１）で表されるサロモニオサイドの製造方法。
   （ｉ）ヒメハギ科吹雲草（Ｓａｌｏｍｏｎｉａ ｃａｎｔｏｎｉｅｎｓｉｓ Ｌｏｕｒ．）の地上部を、水、親水性有機溶媒又はこれらの混合溶媒により抽出する工程
   （ｉｉ）前記（ｉ）工程で得られた抽出物を多孔性樹脂により水、アルコールの順で溶出する工程
   （ｉｉｉ）前記（ｉｉ）工程のアルコール抽出分画を、移動相として水、水溶性溶媒又はこれらの混合溶媒を用いて吸着剤で吸着処理し、水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いて溶出する工程
   （ｉｖ）溶出後の溶出液を、移動相として水溶性溶媒又は水と水溶性溶媒の混合溶媒を用いた液体クロマトグラフィーで単離する工程
4. 請求項１又は２に記載の上記式（１）で表されるサロモニオサイドを有効成分として含むことを特徴とするグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤。
5. 請求項１又は２に記載の上記式（１）で表されるサロモニオサイドを有効成分として含むことを特徴とするプラーク形成抑制剤。
6. 請求項４に記載のグルコシルトランスフェラーゼ阻害剤及び／又は請求項５に記載のプラーク形成抑制剤を配合してなることを特徴とする口腔用組成物。