JP4044599B2 - カワラタケ株及びその抽出物及びその利用 - Google Patents
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- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/125—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives containing carbohydrate syrups; containing sugars; containing sugar alcohols; containing starch hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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-
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Description
また、近年では、TGF−βやPDGFへの選択的結合作用(特許文献1)、免疫系未熟期動物への投与による癌や感染症の予防効果(特許文献2)、前駆脂肪細胞分化抑制効果(特許文献3)なども報告されている。
本発明の血小板凝集抑制剤、ケモカイン遺伝子発現抑制剤、抗変異原性剤、抗腫瘍剤、抗高血圧剤、あるいは免疫賦活剤は、前記カワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含む。
また、前記カワラタケ及び/又はその抽出物は、飲食物、医薬組成物などの経口用組成物に配合できる。
また、前記カワラタケ及び/又はその抽出物は、化粧料、医薬用外用剤などの皮膚外用組成物に配合できる。
また、本発明において、前記カワラタケ及び/又はその抽出物とともに、さらにクロレ ラピレノイドーサ(Chlorella pyrenoidaosa)、アガリクス(A garicus blazei)、メシマコブ(Phellinus linteus) 、シイタケ(Lentinus edodes)及び冬虫夏草(Cordyceps s inesis)及びこれらの抽出物からなる群から選ばれる一つ以上を併用することが好適である。
1.科学的性質…菌の特徴:炭素源と窒素源を含む栄養培地下において、白色のコロニーを形成する。また、光学顕微鏡下において、クランプコネクション(かすがい連結)が観察される。
2.分類学上の位置…担子菌
(1)培地名…SMYA培地(S:サッカロース、M:マルトエキストラクト、Y:イーストエキストラクト、A:寒天)
S,A→市販品 M,Y→ディフコ社製(Difco)
(2)培地の組成…培地1000ml当たり
1% サッカロース (10gに相当)
1% マルトエキストラクト (10gに相当)
0.4% イーストエキストラクト( 4gに相当)
2% 寒天 (20gに相当)
(3)培地のpH…5.0〜7.0(最適pH5.5)
(4)培地の殺菌条件…121℃ 20分
(5)培地温度…28℃
(6)培養期間…10日間
(7)酸素要求性…好気性
凍結法にて保管できる。
(1)凍結条件…−80℃
(2)保護剤…10〜20%グリセリン水溶液(最適は20%)
(3)凍結後の復元率…1年で100%、3年で99%
5.生存試験の条件
(1)微生物の復元…40℃
(2)接種・培養・確認法…培養条件と同一条件による。
また、本発明においては、好適には子実体を用いるが、その菌糸体にも効果が期待できる。菌糸体は炭素源および窒素源を含む培地で種菌を培養して得られる生あるいは乾燥菌糸体を利用できる。乾燥したものが簡便である。
本発明のカワラタケ抽出物を得るためには、前述のように組織を破壊処理したカワラタケに、抽出溶媒を加え適宜攪拌し、抽出処理すればよい。
抽出溶媒としては特に限定されず、例えば、水、メタノール、エタノール等の一級アルコール、1,3−ブチレングリコール、プロピレングリコール等の多価アルコール、酢酸エチル等の低級アルキルエステル、ベンゼン、ヘキサン等の炭化水素、エチルエーテル、アセトン等が挙げられ、これらを2種以上組み合わせて用いることもできる。好ましい抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、1,3−ブチレングリコール又はこれらの混合溶媒が挙げられる。特に、カワラタケ子実体乾燥粉末を熱水で抽出したものが好ましい。
なお、抽出残渣に対して前記と同様の条件下再抽出処理を行ない、この抽出操作を数回繰り返してもよい。
また、抽出物は、抽出液でもその乾燥物でもよい。乾燥物とする場合には、抽出液を減圧濃縮、殺菌、フリーズドライ、スプレードライ等の処理に供して抽出溶媒を除去する。
また、本発明のカワラタケ株は、抗高血圧作用を有し、高血圧症を改善することができる。
また、本発明のカワラタケ株は、免疫賦活作用を有するので、生体内における免疫系のバランスを整えて疾病予防や健康体維持に寄与することができる。
本発明のカワラタケ株を、経口により摂取する場合には、個々の状態により異なり特に限定されるものではないが、カワラタケ抽出物(乾燥質量)としては、成人(60kg体重)1日当たり0.001〜1g、さらには0.01〜0.5gとすることができる。
微細藻類としては、クロレラ属が好適に使用でき、特にクロレラピレノイドーサ(Chlorella pyrenoidaosa)が好適に使用できる。
また、他の担子菌類としては、アガリクス(Agaricus blazei)、メシマコブ(Phellinus linteus)、シイタケ(Lentinus edodes)及び冬虫夏草(Cordyceps sinesis)から選ばれる少なくとも一つが好適に使用できる。
これら微細藻類や担子菌類の抽出方法については、前期カワラタケの抽出方法あるいはその他の公知の方法により行うことができる。
両者の混合比は特に限定されるものではないが、カワラタケ及び/又はその抽出物と、微細藻類、他の担子菌類及びこれら抽出物の合計量との比率は、質量比で1:1〜25:1、さらには5:3〜15:1の範囲が好ましい。
なお、これらは医薬用途に限らず、機能性食品、健康食品、サプリメントなどとしても摂取することができる。これらは例えば、ゼリー、キャンディー、グミ、クラッカー、ジュース、その他様々な形態で摂取される。
これら経口用組成物中あるいは皮膚外用組成物中へのカワラタケ配合量は、目的や用途などに応じて適宜決定することができるが、通常カワラタケ抽出物(乾燥質量)として、組成物中0.0001質量%以上とする。好ましくは0.001〜20質量%、さらには0.01〜10質量%である。
以下、具体例により本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
本発明にかかるカワラタケ株FERM BP−10633は、下記のように、プロトプラスト化技術を利用した交雑育種法により得られた試験菌株のうち、生理生化学的試験及び薬理活性試験おいて従来品種や親株に比べて最も優れた株(試験株1)として選択、採用されたものである。
下記胞子由来一核菌糸である親株A1、及びプロトプラスト由来一核菌糸である親株B1を用いて、キノコ類の一般的な交雑育種法により得られた二核化菌糸体を顕微鏡下で観察し、複数の試験株(雑種株)を得た。
熊本県菊池市に自生していた野生のカワラタケ子実体Aから、無菌的に胞子(一核)を採取し、重層寒天培地で培養した。再生した一核菌糸のコロニーを培養し、交雑用菌株(親株A1)とした。培養条件は、26±2℃、関係湿度80%以上で行った。
熊本県菊池市に自生していた野生のカワラタケ子実体Bから、無菌的に二核菌糸体を分離した。
この菌糸体を、SMY寒天培地(1%ショ糖、1%麦芽抽出物、0.4%酵母抽出物、2%寒天含有)で7日間培養し、得られた菌糸体を内径5mmのコルクボーラーで打ち抜いた。これを、100mL容三角フラスコに入れたSMY液体培地(1%ショ糖、1%麦芽抽出物、0.4%酵母抽出物含有)40mL中に接種した。7日間静置培養後、菌糸体をマグネチックスターラーと攪拌子で磨砕し、菌糸体懸濁液を調製した。
この懸濁液2mLを別のSMY液体培地中に接種して、3日間毎に継代培養を行い、プロトプラスト調製用菌糸体を得た。なお、培養条件は26±2℃、関係湿度80%以上で行った。
この精製プロトプラストを重層寒天培地で培養し、再生したコロニーから一核菌糸をスクリーニングして、交雑用菌株(親株B1)とした。
菌株を安定的に利用するには、菌糸の成長性や生理的機能の高いことが重要である。そこでまず、菌糸成長ならびにラッカーゼ活性を指標とするスクリーニングを行った。試験方法は、次の通りである。
(1)固体培地での菌糸成長
菌糸体をそれぞれSMY寒天培地で7日間培養し、得られた菌糸体を内径5mmのコルクボーラーで打ち抜いた。これを、内径90mmのシャーレに分注した新しいSMY寒天培地25mLの上に接種した。培養温度26±2℃、関係湿度80%以上で8日間培養を行った後の菌糸体成長量(mm)と菌糸密度を肉眼で測定した(n=10)。菌糸密度は、「高い:++++」「普通:+++」「低い:++」「極めて低い:+」で評価した。
菌糸体をそれぞれSMY寒天培地で7日間培養し、得られた菌糸体を内径5mmのコルクボーラーで打ち抜いた。100mL容三角フラスコに入れたSMY液体培地40mL中に接種した。培養温度26±2℃、関係湿度80%以上で21日間静置培養後、予め恒量を計量した濾紙で菌糸体を濾過集菌した。乾燥機にて乾燥後、菌糸体を含む濾紙の恒量を計量し、差し引き法によって菌糸体増殖量(mg)を算出した(n=10)。
菌糸体を1mMベラトルム酸(Veratric acid)を含むSMY液体培地に接種し、培養温度26±2℃、関係湿度80%以上で13日間培養した。濾液のラッカーゼ活性(nkat/L)を、分光光度計を用いて常法(木材学会誌,40(1),107−110(1994)等参照)により測定した。
試験結果を表1に示す。
親株A1及び親株B1は、上記のようにして得られた一核菌糸である。
親株A2及び親株B2は二核菌糸であり、それぞれ、親株A1及び親株B1を作出する前に、カワラタケ子実体A及びカワラタケ子実体Bから分離しておいた原種菌を継代して得られたものである。
カワラタケI、カワラタケIIは、それぞれ群馬県高崎市、東京都奥多摩町で採取した野性カワラタケから得られた分離株(二核菌糸)である。
試験の結果、得られた複数の試験株(表1には試験株1〜4のみを示す)の中でも、特に試験株1は菌糸の成長性、生理的機能が高く、親株や従来品種に比べても非常に優れていた。
さらに、血小板凝集抑制試験、ケモカイン遺伝子発現抑制試験、抗変異原性試験を行った。
(1)カワラタケ熱水抽出エキス末の調製
カワラタケ乾燥子実体の微粉末40gを750mlの蒸留水と混合し、90℃で1〜2時間攪拌しながら抽出を行った。その後、遠心分離(3000rpm、15分)し、回収した上清をエバポレーターにて濃縮(約10倍)した。濃縮液を−80℃で凍結させ、凍結乾燥してカワラタケ熱水抽出エキス末3.5gを回収し、これを試料として試験に供した。
なお、試験株1〜4の他に、親株であるカワラタケ子実体A及びカワラタケ子実体B、ならびにカワラタケI(群馬県高崎市産)及びカワラタケII(東京都奥多摩町産)の子実体についても同様に処理して熱水抽出エキス末を調製し、試験に供した。
ヒト血液を室温にて1100rpmで20分間遠心し、多血小板血漿(PRP)を分取した後、さらに3000rpmで5分間遠心して乏血小板血漿(PPP)を分取した。PRP 223μLを37℃にて予備加温した後、カワラタケ熱水抽出エキス末(2%濃度となるようにDMSOに溶解したもの)又はコントロールとしてDMSOをそれぞれ2μL添加し、さらに3分間37℃でインキュベートした後、凝集誘発物質であるアラキドン酸ナトリウム水溶液(500nM)を25μL添加した。
惹起された凝集はアグリゴメーター(MCMヘマトレーサー MCMメディカル株式会社製)を用いて測定した。被験試料の最大凝集率(PPPの値を100として被験試料の凝集曲線より求められた最大値)をコントロールの最大凝集率と比較することにより、被験物質のアラキドン酸ナトリウム水溶液惹起血小板凝集に対する抑制作用を評価した。
ヒト皮膚線維芽細胞を直径6cmの培養皿で、10%ウシ胎児血清を含むDMEM培地(ダルベッコ変法イーグル培地)でコンフルエントになるまで培養し、被験培地として実験に供した。
被験培地にカワラタケ熱水抽出エキス末(適量のDMSOに溶解したもの)、DMSO(陰性対照)、又はハイドロコルチゾン(陽性対照)を添加した。カワラタケ熱水抽出エキス末及びDMSOの終濃度はそれぞれ0.01%(乾燥質量)、ハイドロコルチゾンの終濃度は10−7Mであった。
次に常法に従って、細胞からRNAを単離し、cDNAを合成したのち、定量的PCR法(TaqMan PCR法)により、IL−8遺伝子の発現量を測定した。なお、内部標準遺伝子としてGAPDH(グリセルアルデヒド3リン酸脱水素酵素)遺伝子を用い、得られたデータを補正した。
なお、ヒト皮膚線維芽細胞は市販品として入手可能であり、例えば倉敷紡績株式会社から入手可能である。また、ヒト線維芽細胞の培養は、動物細胞を培養するための常法に従って行えばよいが、10%ウシ胎児血清を含むDMEM培地が特に好ましい。
試験管に変異原(0.2Mの2−アミノ−3−メチルイミダゾ(4,5−f)キノリンを含有するDMSO溶液)0.1mL及びカワラタケ熱水抽出エキス末(0.25〜1%濃度となるようにDMSOで溶解したもの。後記図表においては1%)1.9mLを混合し、37℃で6時間静置した。
その後、この試験管にサルモネラTA98株液(His+復帰変異、5〜7%濃度となるようにDMSOに添加したもの、後記図表においては7%)0.1mL、S9mix0.5mL、及び軟寒天2mLを加えて混合した。
この混合液0.05mLを最小グルコース寒天培地に播種し、37℃で48時間培養した。増殖したヒスチジン非要求性コロニー数をカウントし、抗変異原性(%)を次式により算出した。
NS:試料液を加えた時のコロニー数
NC:試料液の代わりにDMSOを加えた時のコロニー数(コントロール)
NB:試料液と変異原の代わりにDMSOを加えた時のコロニー数(ブランク)
結果を図1に示す。図1からわかるように、試験株1は血小板凝集抑制作用、ケモカイン(IL−8)遺伝子発現量の抑制作用、抗変異原性作用の何れにおいても非常に高い活性を有しており、他の試験株や親株、従来品種に比べて非常に優れていた。
皮膚疾患においては、接触性皮膚炎、アトピー性皮膚炎などの炎症部位に好中球や好酸球などの炎症細胞が遊走・活性化し、炎症の発生・増幅に関与していると考えられている。そして、この場合に皮膚の角化細胞、線維芽細胞などの細胞からインターロイキン−8(IL−8,interleukin−8)等のケモカインが産生されることが知られている。また、炎症性異常角化性疾患である乾癬ではその皮膚患部にIL−8が多量に存在していることが知られている。
また、環境中には様々な変異原性物質が存在しており、これが生体内でDNAを傷つけることが、ガンやその他の疾病の原因の一つであると考えられている。よって、変異原の活性を抑制することができる抗変異原性物質はこのような病気の予防に有用である。
以上の試験により、成長性、生理的機能性、及び活性の最も優れていた試験株1の安全性を調べるため、急性毒性試験、亜急性毒性試験を行った。
(1)試験方法
(a)急性毒性
OECD化学物質毒性試験指針(1987)に準拠して、マウスにおける急性経口毒性試験を行った(n=10)。試料としては、前記カワラタケ熱水抽出エキス末を用いた。投与量は200、400、600、800及び2000mg/kgで単回投与を行った。投与後、24日まで個体観察を行った。
(b)亜急性毒性
OECD化学物質毒性試験指針(1987)に準拠して、マウスによる亜急性毒性試験(経口投与)も行った(n=10)。試料としては、前記カワラタケ熱水抽出エキス末を用いた。投与量は200、400、600、800及び2000mg/kg・日で、一日一回、28日間毎日投与を行った。
(a)急性毒性
試験株1は、急性毒性試験において2000mg/kgの経口投与量においても死亡個体ならびに臓器・血液における変性は認められず、非常に安全性が高いことが確認された。
(b)亜急性毒性
試験株1は、亜急性毒性試験において2000mg/kgの経口投与量においても死亡個体ならびに臓器・血液における変性は認められず、非常に安全性が高いことが確認された。
また、試験株1について、親株A、親株B、ならびに従来品種に対してそれぞれ対峙培養を行った。この試験では、対峙させた両者の菌そう(コロニー)の接触面での帯線(ゾーンライン)形成の有無を観察することにより、両者の相同性を簡便に判定することができる。試験は次のようにして行った。
径0.8mm(20メッシュ)のふるいを通過したブナ(Fagus crenata Blume)の木粉と米糠とを5:1(質量比)の割合で混合し、含水率が75%となるように水を加えた。これを長さ250mm、径30mmのガラス管の中央に詰め、120℃、1.2気圧の条件で30分間オートクレーブ滅菌した。この木粉培地の両端から菌株をそれぞれ接種して、温度26℃、関係湿度75%以上の条件で培養した。帯線形成の有無は肉眼で観察した。
その結果、試験株1は、何れの親株及び従来品種に対しても帯線を形成し、よってこれらとの相同性は低く、異なる品種であると考えられた。
図2は、抽出溶媒を含水エタノールとし、抽出温度を室温(25℃)とした以外は前記と同様の方法でカワラタケ抽出エキス末を調製し、薬理活性試験を行った結果である。図2からわかるように、熱水抽出の場合が最も活性は高かったが、含水エタノール抽出でも活性が認められた。また、抽出エキス末の回収率の点でも熱水抽出が好ましい傾向が認められた。
さらに、カワラタケ株FERM BP−10633の抗腫瘍作用について、サルコーマ180培養細胞を用いて試験を行った。
(1)被験培地の調製
MEMアール液体培地(グルタミン不含、重層含:INC Biomedicals Inc.)87%、ウシ胎児血清(56℃で30〜60分間の不活性化処理をしたもの:GIBCO)10%、200mMグルタミン液(29.23mg/mL:INC Biomedicals Inc.)2%、ペニシリン・ストレプトマイシン(10,000unit/mL:GIBCO)1%の割合で添加混合したものを被験培地として使用した。
カワラタケ(FERM BP−10633)熱水抽出エキス末を、PBSで1000倍希釈し、オートクレーブにて滅菌処理した溶液を試料液として用いた。コントロールとしては、PBSのみを同様に滅菌処理した溶液を用いた。
被験培地を96wellプレートにそれぞれ180μLづつ分注し、さらにサルコーマ180癌細胞株10μL、及び試料液10μLを添加した。サルコーマ180癌細胞数は、5×103cells/well(200μL)であった。37℃、5%CO2で48時間静置した後、細胞数を計測した。
結果を表2に示す。試料液はサルコーマ180癌細胞に対して著しい増殖抑制効果を発揮した。よって、本発明にかかるカワラタケFERM BP−10633は抗腫瘍作用を有するものと考えられる。
また、カワラタケ株FERM BP−10633のサルコーマ180癌細胞に対する増殖抑制効果をin vivoで試験した。
(1)試験方法
BALB/c−nu/nu(ヌードマウス)4週齢雌マウス24個体を供試動物とした。5週齢よりマウスの左腹部にサルコーマ180癌細胞を1×106cells/0.05ml移植し、以下のような3群に分けて投与を行った。
(i)コントロール群:水を強制経口投与(カワラタケ子実体熱水抽出エキス末非投与)。
(ii)50mg/kg投与群:5週齢からカワラタケ子実体熱水抽出エキス末を一日当たり50mg/kg(マウス40g当たり2mg/0.2ml)を毎日強制経口投与。
(iii)500mg/kg投与群:5週齢からカワラタケ子実体熱水抽出エキス末を一日当たり500mg/kg(マウス40g当たり20mg/0.2ml)を毎日強制経口投与。
サルコーマ180癌細胞移植後、1週間ごとに腫瘍の体積測定を行った。
上記のように、本発明にかかるカワラタケ株FERM BP−10633は非常に高い活性を有するものであるが、さらなる活性の向上を目的として、微細藻類や他の担子菌類との併用についても検討を行った。
(1)試験1
まず、被験試料として、前記カワラタケ(FERM BP−10633)熱水抽出物エキス末、ならびに下記(i)〜(iii)のクロレラエキス末、シイタケエキス末、及びクロレラシイタケエキス末を用いて、前記と同様の方法により、血小板凝集抑制試験、ケモカイン遺伝子発現抑制試験、ならびに抗変異原性試験を行った。
その結果、図3に示すように、カワラタケ(FERM BP−10633)熱水抽出エキス末に、クロレラ抽出エキス末あるいはシイタケ抽出エキス末あるいはクロレラシイタケエキス末を併用した場合には、それぞれ単独の場合に比べて、血小板凝集抑制試験作用、ケモカイン遺伝子抑制作用、抗変異原性作用の相乗的な向上が認められた。特に、クロレラシイタケエキス末を混合した場合には、その効果が顕著であった。
クロレラ抽出槽に、クロレラ(Chlorella pyrenoidosa)40kgと蒸留水750Lを入れ、90℃に昇温後、30分間抽出を行った。その後、遠心分離により上清を回収して、クロレラ抽出液を得た。
この抽出液をエバポレーターにて約45L(約18倍)まで濃縮し、これにβ−サイクロデキストリン40kgを添加して、ニーダーで攪拌しながらドラム乾燥(ドラム表面温度約150℃、反応温度約90℃)により水分含量5%以下となるまで乾燥した。乾燥物中に生じたチップ状乾燥物を粉砕機により粉砕し、約50kgのクロレラエキス末を得た。
シイタケ抽出槽に、シイタケ(Lentinus edodes)のチップ状乾燥子実体40kgと蒸留水750Lを入れ、85℃に昇温後、60分間抽出を行った。その後、シイタケ絞り機にて絞りながらエキス分を回収し、これをさらに遠心分離により上清を回収して、シイタケ抽出液を得た。
この抽出液をエバポレーターにて約45L(約18倍)まで濃縮し、これにβ−サイクロデキストリン40kgを添加して、ニーダーで攪拌しながらドラム乾燥(ドラム表面温度約150℃、反応温度約90℃)により水分含量5%以下となるまで乾燥した。乾燥物中に生じたチップ状乾燥物を粉砕機により粉砕し、約50kgのシイタケエキス末を得た。
前記クロレラ抽出液650Lと、前記シイタケ抽出液620Lとを混合し、エバポレーターにて70Lまで濃縮した。これに、β−サイクロデキストリン27.5kgを添加し、ニーダーで攪拌しながらドラム乾燥(ドラム表面温度約150℃、反応温度約90℃)により水分含量5%以下となるまで乾燥した。乾燥物中に生じたチップ状乾燥物を粉砕機により粉砕し、約40kgのクロレラシイタケエキス末を得た。
さらに、下記処方例1〜2に従ってドリンク剤も調製し、前記と同様の方法により試験を行った。その結果、表4に示すように、何れのドリンク剤も血小板凝集抑制作用、ケモカイン遺伝子抑制作用、抗変異原性作用において、非常に高い活性を示した。
カワラタケ(FERM BP−10633)熱水抽出エキス末 200mg
アガリクス熱水抽出物 10
シイタケ菌糸体熱水抽出物 10
メシマコブ菌糸体熱水抽出物 20
冬虫夏草菌糸体熱水抽出物 10
クロレラエキス 200
カロテニック1%(β−カロチン1%含有乳液) 50
グリセリン脂肪酸エステル 100
果糖ブドウ糖液糖 5000
ハチミツ 1000
ヒハツエキス末 150
クエン酸 200
ビタミンB6 10
香料 200
カワラタケ(FERM BP−10633)熱水抽出エキス末 200mg
アガリクス熱水抽出物 10
シイタケ菌糸体熱水抽出物 10
メシマコブ菌糸体熱水抽出物 20
冬虫夏草菌糸体熱水抽出物 10
クロレラエキス 200
カロテニック1%(β−カロチン1%含有乳液) 50
グリセリン脂肪酸エステル 100
果糖ブドウ糖液糖 5000
ハチミツ 1000
緑茶抽出物(カテキン) 500
クエン酸 200
ビタミンB6 10
香料 200
高血圧自然発症ラット(Spontaneously Hypertensive Rat:SHR(4週齢)、日本チャールスリバー(株)から入手)を用いてin vivoで試験を行った。SHRは7〜15週齢で100%の個体が高血圧を自然発症する。その血圧は10週齢で平均約171mmHg、最高血圧は約200mmHg以上に達する。SHRマウスはコレステロール代謝異常やインスリン抵抗性も示す。
SHR(10週齢、雄)に、カワラタケ(FERM BP−10633)熱水抽出エキス末、クロレラエキス末、またはその1:1混合物(質量比)をゾンデを用いてエキス末として3.3mg/kg用量で経口投与し、血圧をモニターした(n=6)。コントロールには水を投与した。投与後8時間の平均収縮期血圧を下記表5に示す。
表5のように、各投与群において血圧降下作用が認められ、混合物投与群で血圧が最も低下した。
図4に、コントロール群(非投与群)の平均収縮期血圧をゼロとして、試験群(投与群)の平均収縮期血圧をプロットした。この結果からわかるように、試験群では投与後30分でコントロールよりも血圧が低下し始め、投与後4〜10時間で血圧は最も低下した。その後は徐々に血圧が上昇したが、上昇は緩慢で、コントロールと同レベルの血圧になるまでに約48時間を要した。
SHR(5週齢、雄)に、前記処方例2のドリンク剤をゾンデを用いてカワラタケ熱水抽出エキス末として3.3mg/kg用量で16週齢まで11週間、一日一回、毎日経口投与した。投与開始直前及び各経口投与の直前に、血圧を測定した(n=5)。
図5に、コントロール群(非投与群)及び試験群(投与群)の1週間毎の平均収縮期血圧の変化を示した。コントロール群では週齢の増加とともに血圧が徐々に上昇し、16週齢(11週間投与)では血圧が220mmHgを超えた。これに対して、試験群では8週齢(3週間投与)までは徐々に血圧が上昇したが、その後は170〜180mmHgの範囲で安定に推移した。
このことから、本発明のカワラタケ抽出物含有組成物の継続的な摂取により、高血圧が改善され、さらには血圧が一定の範囲にコントロールされることが示唆された。
さらに、高血圧症患者に対する抗高血圧作用について臨床的に調べた。
(1)試験方法
被験患者は、収縮期血圧が常時150〜170mm/Hg前後の高血圧患者10名(男7名、女3名)であった。被験者の平均収縮期血圧は162mmHg、平均拡張期血圧は96mmHgであり、これらは投与開始前10日間ほぼ同じであった。
投与開始日(dayゼロ)から70日間、毎日、一日一回、被験患者に前記処方例2のドリンク剤を経口摂取してもらった。摂取量は、1日に50mL(カワラタケ熱水抽出エキス末として200mg)であった。投与期間中は、投与直前に血圧を測定した。
また、患者の血液を凝固抑制剤入り採血管に採血し、一般的な臨床検査測定法に基づいて血中レニン濃度、血中アンジオテンシンI濃度も測定した。
図6に、投与開始日(dayゼロ)の血圧をゼロとして、(a)拡張期血圧、及び(b)収縮期血圧の変化を5日毎にプロットした。収縮期血圧は投与開始5日目には降下し始め、70日目まで徐々に低下する傾向があった。拡張期血圧も投与開始10日目には降下し始めたが、30日目ぐらいからはほとんど低下せずに一定の範囲内で安定に推移した。
この結果から、本発明のカワラタケ抽出物含有組成物は高血圧患者の血圧を降下させるが、慢性的に摂取しても血圧を低下させ過ぎる懸念が非常に少ないことが示唆された。
また、図7に、被験者の血中レニン濃度、血中アンジオテンシンI濃度の変化を示した。投与日数の増加に伴って、レニン濃度は上昇し、一方、アンジオテンシンI濃度は減少していた。このことから、内分泌におけるレニン、アンジオテンシン及びその他ホルモンを生体内へ過剰に分泌あるいは過剰に抑制することなく血圧をコントロールできることが示唆された。
さらに、免疫調節作用についても調べた。
(1)試験方法
被験患者は、健常な成人30名であった。被験患者に1ヶ月間、毎日、一日一回、前記処方例2のドリンク剤を経口摂取してもらった。摂取量は、1日に50mL(カワラタケ熱水抽出エキス末として200mg)であった。その後、摂取を2ヶ月間停止した。
摂取開始前、摂取開始後10日及び1ヶ月、摂取停止後2ヶ月に、被験患者の血液を血液凝固抑制剤入り採血管に採血し、一般的臨床検査測定法に基づいてT細胞及びNK細胞の免疫細胞百分率をそれぞれ測定した。
図8に、投与期間(1ヶ月間)及びその後の投与停止期間(2ヶ月)のT細胞数(%)、NK細胞数(%)を示した。慢性投与期間中、投与日数の増加に伴って、T細胞数とNK細胞数は共に増加した。そして、投与停止後は、NK細胞数とT細胞数は共に低下し始めたが、その低下は緩慢で、投与開始前のレベルに戻るまでに2ヶ月を要した。
このことから、本発明のカワラタケ抽出物含有組成物に免疫賦活効果があり、継続的な摂取により効果の持続性が高いことが示唆された。
処方例3 クリーム
ステアリン酸 2.0 質量%
ステアリルアルコール 7.0
水添ラノリン 2.0
スクワラン 5.0
2−オクチルドデシルアルコール 6.0
POE(25)セチルエーテル 3.0
グリセリンモノステアリン酸エステル 2.0
プロピレングリコール 5.0
カワラタケ熱水抽出物 0.05
亜硫酸水素ナトリウム 0.03
エチルパラベン 0.3
香料 適量
イオン交換水 残余
マイクロクリスタリンワックス 1.0 質量%
ミツロウ 2.0
ラノリン 20.0
流動パラフィン 10.0
スクワラン 5.0
ソルビタンセスキオレイン酸エステル 4.0
POE(20)ソルビタンモノオレイン酸エステル 1.0
プロピレングリコール 7.0
カワラタケ熱水抽出物 2.0
クロレラ熱水抽出物 0.5
シイタケ熱水抽出物 0.5
亜硫酸水素ナトリウム 0.01
エチルパラベン 0.3
香料 適量
イオン交換水 残余
エタノール 10.0 質量%
ジプロピレングリコール 15.0
POE(50)オレイルエーテル 2.0
カルボキシビニルポリマー 1.0
水酸化ナトリウム 0.15
L−アルギニン 0.1
カワラタケ熱水抽出物 7.0
2−ヒドロキシ−4−メトキシベンゾフェノン
スルホン酸ナトリウム 0.05
エチレンジアミンテトラアセテート・ナトリウム・2水 0.05
メチルパラベン 0.2
香料 適量
イオン交換水 残余
1,3−ブチレングリコール 5.0質量%
グリセリン 2.0
プロピレングリコール 2.0
オレイルアルコール 0.1
カワラタケ熱水抽出物 0.5
クロレラ熱水抽出物 0.1
シイタケ熱水抽出物 0.1
POE(20)ソルビタンモノラウリン酸エステル 0.5
POE(15)ラウリルエーテル 0.5
エタノール 10.0
香料 適量
防腐剤 適量
緩衝剤 適量
イオン交換水 残余
Claims (13)
- 受託番号がFERM BP−10633であるカワラタケ株。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含む血小板凝集抑制剤。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含むケモカイン遺伝子発現抑制剤。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含む抗変異原性剤。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含む抗腫瘍剤。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含む抗高血圧剤。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を有効成分として含む免疫賦活剤。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を含む経口用組成物。
- 請求項8記載の組成物において、さらにクロレラピレノイドーサ(Chlorella pyrenoidaosa)、アガリクス(Agaricus blazei)、メシマコブ(Phellinus linteus)、シイタケ(Lentinus edodes)及び冬虫夏草(Cordyceps sinesis)及びこれらの抽出物からなる群から選ばれる一つ以上を含むことを特徴とする経口用組成物。
- 請求項8又は9記載の組成物からなる飲食物。
- 請求項8又は9記載の組成物からなる医薬組成物。
- 請求項1記載のカワラタケ及び/又はその抽出物を含む皮膚外用組成物。
- 請求項12記載の組成物において、さらにクロレラピレノイドーサ(Chlorella pyrenoidaosa)、アガリクス(Agaricus blazei)、メシマコブ(Phellinus linteus)、シイタケ(Lentinus edodes)及び冬虫夏草(Cordyceps sinesis)及びこれらの抽出物からなる群から選ばれる一つ以上を含むことを特徴とする皮膚外用組成物。
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