JP4020638B2

JP4020638B2 - 走査型レーザ顕微鏡システム

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Publication number: JP4020638B2
Application number: JP2001400320A
Authority: JP
Inventors: 満雄原田
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2001-12-28
Filing date: 2001-12-28
Publication date: 2007-12-12
Anticipated expiration: 2021-12-28
Also published as: JP2003195174A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は標本にレーザ光を走査し、標本の画像を得る走査型レーザ顕微鏡システムに関する。
【０００２】
【従来の技術】
今日、生体標本を蛍光色素等で標識し、励起光の走査によって標本から発する蛍光を顕微鏡で観察する走査型レーザ顕微鏡が注目されている。このような走査型レーザ顕微鏡を用いて生体標本の観察を行う場合、例えば標本に対してＸＹ面の走査を行い、得られたＸＹ二次元層面をＺ方向に順次積層し、標本の三次元画像を生成し、ＣＲＴモニタ上に三次元の立体画像を表示して観察を行っている。
【０００３】
また、特に標本内の部分的な情報、例えば標本に含まれる細胞等の樹状情報を得る場合、上記三次元画像からＸＹ二次元画像を作成し、作成したＸＹ二次元画像をモニタ画面に表示し、表示したモニタ画面上で対応する経路をマウス等の入力装置を使用してなぞり、手動操作によって必要なデータを得ている。尚、図１０は従来の二次元断面像の概略図である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、上記従来の方法ではＸＹ二次元画像上での手動操作であり、標本に含まれる細胞等の樹状情報を得るためには、得られた二次元情報を三次元情報に変換しなければならず、標本の厚さ方向（Ｚ方向）にデータを蓄積する必要がある。この為、処理に時間を要する。
【０００５】
また、モニタ画面を見ながらマウス等の入力機器を使用して、樹状の経路をなぞる操作は、相当に訓練を要する操作であり、正確なデータを得ることが難しい。
本発明は上記のような実情に鑑みてなされたものであり、その目的とするところは、生きた生物標本等の局所的な部分の情報を高速に取得できるようにするものであり、更に標本観察を行うための設定を容易に行うことができる走査型レーザ顕微鏡システム、及び該システムの処理方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
請求項１記載の発明は、立体標本に対してレーザ光を照射し、該標本の三次元画像情報を取得する画像情報取得手段と、該画像情報取得手段によって取得した標本の三次元画像情報から蛍光標識された前記標本内部にあって蛍光を発する線状の観察対象物の形状である基線経路曲線を演算する演算手段と、該演算手段によって得られた基線経路曲線に沿って走査を行い、単一波長又は複数波長の光輝度情報を取得する光輝度情報取得手段とを備えることを特徴とする走査型レーザ顕微鏡システムを提供するものである。
【０００７】
このような構成とすれば、作成した標本の三次元画像情報から、例えばＸＹ面、ＹＺ面、ＸＺ面の中の少なくとも２面に投影した二次元データを使用し、該二次元データから標本に含まれる、例えば神経細胞等の基線経路曲線を直接演算して得ることができ、基線経路曲線の最適な作成処理を容易に行うことができる。
【０００８】
また、得られた基線経路曲線をメモリ等に記憶し、必要に応じてメモリから読み出して基線経路曲線に沿った走査を行うことによって、例えば生きた生物標本に含まれる局所的な細胞の観察を高速に行うことができる。
請求項２の記載は、上記請求項１記載の発明において、前記演算手段による基線経路曲線の演算は、取得した前記標本の三次元画像情報からＸＹ面、ＹＺ面、ＸＺ面の中の少なくとも２面に投影した二次元データを作成し、該作成された二次元データに含まれる高い輝度値データの連続した座標を検出し、演算することによって得られることを特徴とする。
【０００９】
このような構成とすれば、三次元画像データに含まれる神経細胞等の基幹部分は、輝度が高く、容易に基線経路曲線を得ることができる。したがって、より容易に基線経路曲線のデータを得、この基線経路曲線データを利用して神経細胞等の標本の特性を高速に知ることができる。
【００１０】
請求項３の記載は、上記請求項１、又は２の記載において、前記基線経路曲線の走査経路は、徐々にオフセットして複数回走査する、束ねられた肉太状の経路であることを特徴とする。
このような構成とすれば、例え基線経路曲線が極めて細い場合でも経路を外すことがなく、また観察の対象が標本内で移動した場合でも、基線経路曲線を外すことなく走査することができる。
【００１１】
請求項５記載の発明は、立体標本に対してレーザ光を照射し、該標本の三次元画像情報を取得する処理と、取得した前記標本の三次元画像情報からＸＹ面、ＹＺ面、ＸＺ面の中の少なくとも２面に投影した二次元データを作成する処理と、該処理によって作成された二次元データに基づいて蛍光標識された前記標本内部にあって蛍光を発する線状の観察対象物の形状である基線経路曲線を演算する処理と、該基線経路曲線に沿って走査を行い、単一波長又は複数波長の光輝度情報を取得する処理とを行うことを特徴とするレーザ顕微鏡システムにおける処理方法を提供するものである。
【００１２】
本発明は走査型レーザ顕微鏡システムの処理方法の発明であり、このような構成としても、作成した標本の三次元画像情報からＸＹ面、ＹＺ面、ＸＺ面の中の少なくとも２面に投影した二次元データを生成し、該二次元データから標本に含まれる、例えば神経細胞等の主幹を演算し、基線経路曲線を得ることができ、生きた生物標本等に含まれる局所的な観察を高速で行うことができる。
【００１３】
【発明の実施の形態】
（第１の実施形態）
以下、本発明の第１の実施の形態に係る走査型レーザ顕微鏡システムについて図面を参照して説明する。
【００１４】
図１は、本発明の実施形態を説明する走査型レーザ顕微鏡システムのシステム構成図である。尚、本システムで使用する顕微鏡は走査型共焦点レーザ顕微鏡である。
同図において、本システムは励起光源１、顕微鏡本体２、焦点位置制御部３、演算装置４、及び表示装置５で構成されている。励起光源１は所定波長λ1 の励起光を出力する装置であり、励起光源１から出力される励起光はシャッタ１ａの開駆動に従って顕微鏡本体２内のビームエクスパンダ２ａに照射される。尚、ビームエクスパンダ２ａは励起光源１から出力される励起光のビーム幅を広げる機能を有し、ビームエクスパンダ２ａによってビーム幅が広げられた励起光はダイクロイックミラー６に照射される。
【００１５】
顕微鏡本体２には、上記ダイクロイックミラー６、及び偏光素子７x、７y、対物レンズ８、Ｚ軸アクチュエータ９、光電検出器１０等が配設され、上記励起光源１から出力された励起光はダイクロイックミラー６によって反射し、偏光素子７x、７y によって照射位置が制御される。偏光素子７x には焦点位置制御部３からＸ方向の位置情報が入力し、偏光素子７y には焦点位置制御部３からＹ方向の位置情報が入力し、励起光は上記偏光素子７x 、７y によって位置制御され、対物レンズ８に入射する。
【００１６】
対物レンズ８はＺ軸アクチュエータ９に取り付けられ、焦点位置制御部３から供給される位置情報に従って、Ｚ方向の照射位置が制御される。したがって、対物レンズ８に入射した励起光は、上記各位置情報に従って標本１１の焦点位置に照射される。また、励起光が照射された標本１１の位置から蛍光が出力される。この蛍光は、上記と逆の経路を辿ってダイクロイックミラー６に達し、ダイクロイックミラー６を透過し、共焦点レンズ１２によって共焦点ピンホール１３に集光し、フィルタ１４を透過して光電検出器１０に達する。尚、フィルタ１４はλ1 の波長を除去するフィルタであり、前述の励起光を完全に遮断する。
【００１７】
光電検出器１０は標本１１から出力された蛍光を検出し、光電変換を行い、蛍光の強さに対応する電気信号を演算装置４に出力する。演算装置４では光電検出器１０から供給される電気信号に従って画像形成を行い、形成した画像データを表示装置５に送り、表示装置５に標本１１の画像表示を行う。また、マウス１５は表示装置５に表示されるカーソル位置の指定等に使用される。尚、上記演算装置４と表示装置５はパーソナルコンピュータＰＣで構成できる。
【００１８】
また、演算装置４は内部にＣＰＵ、ＲＯＭ、ＲＡＭ、ＥＥＰＲＯＭ等を備え、例えばＲＯＭに記憶したプログラムに従ってＣＰＵを制御し、焦点位置制御部３に位置情報を送る。また、表示装置５に画像情報を送り各種画像の表示指示を行う。また、ＥＥＰＲＯＭには後述する処理によって得られる基線経路曲線データが記憶され、ＥＥＰＲＯＭに記憶された上記データは焦点位置制御部３に出力され、後述する走査に使用される。
【００１９】
焦点位置制御部３は上記演算装置４から供給される位置情報によって焦点位置の制御を行い、出力Ｘから前述の偏光素子７x にＸ方向の位置情報を出力し、出力Ｙから偏光素子７y にＹ方向の位置情報を出力し、出力ＺからＺ軸アクチュエータ９にＺ方向の位置情報を出力する。
【００２０】
次に、上記構成において、本実施形態の処理動作を説明する。
図２は本実施形態の処理動作を説明する図である。本実施形態の処理は、先ず像取得処理を行い（図２に示す（ａ））、取得した三次元画像に基づいてＸＹ面とＹＺ面、又はＹＺ面とＸＺ面、又はＸＹ面とＸＺ面に投影した画像データを作成して基線経路曲線（ｆ(x,y,z)）を抽出し（同図（ｂ））、演算装置４のメモリ（ＥＥＰＲＯＭ）に記憶する（同図（ｃ））。その後、メモリに記憶した基線経路曲線に従ってＬＳＭ（レーザスキャニングマイクロスコープ）走査を行い（同図（ｄ））、上記基線経路曲線に従って走査された結果得られる蛍光データを取得し（同図（ｅ））、表示装置５に表示する（同図（ｆ））。
【００２１】
以下、図３に示すフローチャートに従って具体的な処理を説明する。尚、この処理を行う際、蛍光色素等を標本１１に導入し、予め標本１１内の対象を標識しておく。
先ず、像取得処理を行う（上記図２に示す（ａ））。この処理は、焦点位置制御部３にＸＹＺの初期位置情報（例えば、ＸＹＺを（１，１，１））を設定し（ステップ（以下、ＳＴで示す）１）、この位置情報に従って偏光素子７x、７y、Ｚ軸アクチュエータ９の初期位置を設定する。
【００２２】
次に、励起光源１から励起光を出力し、前述の光経路を経て標本１１に励起光を照射し、標本１１から発せられる蛍光を検出する（ＳＴ２）。この検出データは、前述のように光電検出器１０から演算装置４に送られる。
次に、Ｘ方向への走査が全て完了したか判断する（ＳＴ３）。最初のこの判断（ＳＴ３）はＮＯであり、偏光素子７x をＸ方向に＋１移動し（ＳＴ４）、標本１１に励起光を照射し、標本１１からの蛍光を検出する（ＳＴ２）。以後、Ｘ方向走査が全て完了するまで上記処理を繰り返し、標本１１から発せられる蛍光を光電検出器１０で順次検出し、演算装置４に送る（ＳＴ２〜ＳＴ４）。
【００２３】
その後、Ｘ方向の走査が完了すると（ＳＴ３がＹＥＳ）、偏光素子７y をＹ方向に＋１移動し（ＳＴ５）、Ｙ方向への走査が全て完了したか判断する（ＳＴ６）。この場合も最初の判断（ＳＴ６）はＮＯであり、処理（ＳＴ２）に戻って上記蛍光の検出処理を繰り返す（ＳＴ２〜ＳＴ６）。すなわち、前述と同様、Ｘ方向の走査を順次行い、Ｘ方向の走査が完了すると、Ｙ方向に＋１移動し（ＳＴ３がＹＥＳ、ＳＴ５）、この処理を繰り返す。
【００２４】
その後、Ｙ方向の走査が完了すると（ＳＴ６がＹＥＳ）、Ｚ軸アクチュエータ９を駆動し、Ｚ方向に＋１し（ＳＴ７）、上記と同じ走査を繰り返す（ＳＴ８がＮＯ、ＳＴ２〜ＳＴ８）。そして、Ｚ方向への走査が完了すると（ＳＴ８がＹＥＳ）、演算装置４への標本１１の全情報の入力も完了し、演算装置４では入力した情報を基に、標本１１の三次元画像を作成し、表示装置５に表示する（ＳＴ９）。尚、図４は上記処理によって得られた標本１１の三次元画像の例である。また、同図に示すａ、ｂ、ｃ、ｄの各位置は標本１１内の対象（例えば、神経細胞）の各位置を示す。
【００２５】
次に、基線経路曲線（ｆ(x,y,z)）の作成処理を行う（上記図２に示す（ｂ））。この処理は、上記像取得処理によって得られた三次元画像から主幹ラインを抽出する処理であり、例えば得られた三次元画像が神経細胞を含む標本１１の画像情報であれば、含まれる神経細胞の主幹ラインを抽出する処理である。この場合、先ず図５に示すように得られた三次元画像をＸＹ面に重ねて投影し、ＸＹ二次元データを得る（ＳＴ１０）。同様に、三次元画像をＹＺ面に重ねて投影し、ＹＺ二次元データを得る（ＳＴ１１）。例えば、図５に▲１▼で示す三次元画像情報を、▲２▼で示すＸＹ面に投影してＸＹ二次元データを得、更に▲３▼で示すＹＺ面に投影してＹＺ二次元データを得る。
【００２６】
但し、上記▲２▼、▲３▼の画像では、主幹の経路のみを示すが、実際には主幹から枝分かれした細かいラインが存在する。本例では上記主幹は太く輝度も高いので、輝度によってフィルタをかけ主幹の経路を抽出する。
この為、先ず上記ＸＹ二次元データについて、画素毎のＸ座標をＸｉ（ｉ＝１、２、３、・・・）とし、画素毎のＹ座標をＹｉ（ｉ＝１、２、３、・・・）とする。次に、Ｘi 毎の輝度値の高い点のＹ座標を抽出し、Ｘi に対応するＹ座標をメモリに格納する。すなわち、Ｘ座標Ｘ1 から順次輝度値の高い点のＹ座標を抽出する。例えば、図５に示す▲２▼の例で説明すると、先ずＸ1 において輝度値の高いＹ座標を抽出して例えばＹａを得、Ｘ2 において輝度値の高いＹ座標Ｙｂを得、Ｘ3 において輝度値の高いＹ座標Ｙｃを得、更にＸ4 において輝度値の高いＹ座標Ｙd を得る。以下、同様に処理を行い、輝度の高いＹ座標を順次抽出する。
【００２７】
このようにして抽出したデータは、Ｘ座標毎に輝度値の高いＹ座標のデータであり、演算装置４内の例えばＲＡＭに一旦格納する。ここで、図６（ａ）は上記処理によって得られるＸＹ二次元データの例である。尚、この場合、同図（ａ）に示すように完全に主幹からの枝分かれが除去されておらず、また不連続で走査が不能な座標データである可能性がある。そこで、演算装置４において近似化処理を行い、例えば同図（ｂ）に示す連続走査可能な曲線ｆ(x,y)を得る。
【００２８】
次に、同様にしてＹＺ二次元データを生成する。すなわち、画素毎のＹ座標をＹｉ（ｉ＝１、２、３、・・・）とし、画素毎のＺ座標をＺｉ（ｉ＝１、２、３、・・・）とし、Ｙi 毎の輝度値の高い点のＺ座標を演算し、Ｙi に対応するＺ座標の抽出処理を行う。このようにして抽出したデータは、Ｙ座標毎に輝度値の高いＺ座標のデータであり、演算装置４内のＲＡＭに格納する。また、このようにして得られたデータは、上記と同様不連続で走査不能な座標データである可能性もあり、演算装置４において近似化処理を行い、連続走査可能な曲線ｆ(y,z)とする。
【００２９】
次に、上記処理によって得られた曲線ｆ(x,y)とｆ(y,z)から三次元曲線ｆ(x,y,z)を演算する（ＳＴ１２）。例えば、この演算処理は
ｆ(x,y)＋ｆ(y,z)−ｆ(y)＝ｆ(x,y,z)
の演算式を使用することによって得られる。また、このようにして得られたｆ(x,y,z)（基線経路曲線データ）は、演算装置４のメモリ（ＥＥＰＲＯＭ）に記憶される（ＳＴ１３）。尚、この処理は前述の図２の（ｃ）の処理に対応する。
【００３０】
以上のようにして、演算装置４には標本１１内の対象物の基線経路曲線データが記憶され、以後対象物の特性等を知るため、上記メモリ（ＥＥＰＲＯＭ）から基線経路曲線データが読み出され、基線経路曲線に従った走査が行われる（ＳＴ１４、上記図２に示す（ｄ））。すなわち、演算装置４はメモリ（ＥＥＰＲＯＭ）に記憶した上記基線経路曲線のデータを読み出し、焦点位置制御部３に走査の位置情報を送信し、焦点位置制御部３から偏光素子７x、７y、及びＺ軸アクチュエータ９に位置情報を出力する。また、同時に励起光源１から励起光を出力し、標本１１に励起光を照射して基線経路曲線に沿った走査を行う。
【００３１】
この走査は、前述のようにして取得した基線経路曲線データに従って行われるものであり、基線経路曲線データに従って自動的に標本１１内の神経細胞の基幹に沿った走査を行うことができる。したがって、このように標本１１を走査することによって、正確に神経細胞等の基幹に沿った走査を行うことができ、短時間で効率よく必要な観察データを得ることができる（ＳＴ１５、（上記図２に示す（ｅ））。また、このようにして得たデータは表示装置５に表示される（ＳＴ１６、（上記図２に示す（ｆ））。
【００３２】
尚、上記実施形態の説明では、予め取得した三次元画像データからＸＹ二次元データ及びＹＺ二次元データを抽出し、上記演算式（ｆ(x,y)＋ｆ(y,z)−ｆ(y)＝ｆ(x,y,z)）によって基線経路曲線（ｆ(x,y,z)）を得たが、取得した三次元画像データからＹＺ二次元データとＸＺ二次元データを得て演算処理を行い、基線経路曲線データを得る構成としてもよい。また、ＸＹ二次元データとＸＺ二次元データを得て演算処理を行い、基線経路曲線データを得る構成としてもよい。
【００３３】
また、本実施形態において標本１１に蛍光色素を導入して対象を標識したが、タンパク質自体が発光する場合には、標本１１にこのようなタンパク質を導入する構成としてもよい。
また、本実施形態においては、励起光源として単一の励起光源を示したが、標本１１内に複数の対象が存在する場合には、複数の励起光源を使用する構成としてもよい。この場合、複数の対象の光輝度情報を同時に取得することができる。
【００３４】
（第２の実施形態）
次に、本発明の第２の実施形態について説明する。
前述の第１の実施形態では、基線経路曲線として１本の線状経路のデータを使用したが、この場合走査する経路は非常に細い線状の経路である。また、標本１１として生きた細胞を使用する場合もあり、基幹が移動する場合もある。本実施形態では上記の点を考慮し、基線経路曲線を中心に微少に変移させて得られる曲線データを複数作成し、基線経路曲線を走査したデータの他、変移させた複数の曲線データに沿って励起光を照射することによって、対象の移動等にも対応できる走査型レーザ顕微鏡システムを提供するものである。以下、具体的に説明する。
【００３５】
図７は、第２の実施形態を説明する図である。先ず、図７（ａ）は基線経路曲線及び、基線経路曲線を中心に変移した複数の曲線の束を示す模式図である。また、同図（ｂ）及び（ｃ）は、上記曲線の束の断面構成を示す。ここで、同図（ｂ）、（ｃ）に示す基線「１」は、前述の第１の実施形態の処理によって得られた基線経路曲線（基線「１」）であり、この基線「１」に対して曲線「２」〜「９」（同図（ｂ）の場合）が所定長（オフセットピッチ）変移して生成される。このオフセットピッチは、例えば数ミクロン〜数十ミクロンである。また、この曲線「２」〜「９」の形成は、例えば基線「１」に対して曲線「２」、「３」、「４」、・・・「９」の順に演算して生成される。
【００３６】
尚、同図（ｃ）に示す場合も同様であり、基線「１」に対して、オフセットピッチ分変移して、曲線「２」、「３」、「４」、・・・「７」が順次演算され、生成される。
以上のようにして得られる曲線経路は一定の太さを有する走査経路の束であり、この経路に沿って励起光を走査することによって、１本の走査経路では外れてしまう可能性のある情報の取得を行い、より確実な観測データを得ることができる。
【００３７】
尚、この場合励起光の走査順序は、基線「１」を走査し、以下曲線「２」〜「９」（又は曲線「２」〜「７」）の走査を順次走査してもよく、また他の走査順序で走査してもよい。
また、本実施形態における走査曲線の束は、上記曲線「２」〜「９」（又は曲線「２」〜「７」）の外側に更にオフセットピッチを保持して生成してもよい。
【００３８】
（第３の実施形態）
次に、本発明の第３の実施形態について説明する。
本実施形態は、例えば標本１１内の細胞に刺激を与えた場合、細胞内の変化を知るための構成である。以下、具体的に説明する。
【００３９】
図８は、第３の実施形態を説明する図である。先ず、同図は横軸にＸＹ二次元データにおける基線経路曲線の位置を示し、縦軸は各位置における輝度の強さを示す。また、同図に示すａ、ｂ、ｃ、ｄは対象の各位置を示す。
この状態において、例えば標本１１内の細胞に刺激を与え、励起光を照射して細胞から発する蛍光の輝度を測定する。この場合、時間の経過に従って輝度の変化を測定する。図９この結果を示す図であり、表示装置５に表示される画像である。この例は、時間ｔ1 、ｔ2 、ｔ3 、・・・の経過に従って、それぞれの時間において励起光を基線経路曲線に沿って走査し、得られた結果である。
【００４０】
同図の例では位置ｂ〜ｄにおいて、特に変化が見られ、時間の経過に伴って各位置の輝度が変化していることが分かる。したがって、例えば細胞に加えた刺激の伝搬速度や伝搬特性、細胞の違いによる特性等を知る有力な手がかりとなる。以上のように、本実施形態によれば、時間経過に従った標本（対象）の変化を知ることができ、標本（対象）の解析に役立てることができる。また、時間経過に従った標本の解析を簡単かつ高速に行うことができる。
【００４１】
【発明の効果】
以上詳細に説明したように、標本内に含まれる樹状の神経細胞等の対象の基線経路曲線の取得を容易に行うことができ、また正確な基線経路曲線を得ることができる。
【００４２】
また、取得した基線経路曲線に沿って走査することにより、短時間で膨大な観察データを取得することができる。
また、走査経路を束状に形成することによって、対象が移動するような場合でも確実に観察データを得ることができる。
【００４３】
さらに、時間経過に従って同じ基線経路曲線に沿った走査を行うことによって、対象の時間経過に伴った変化を容易に知ることができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施形態を説明する走査型レーザ顕微鏡システムのシステム構成図である。
【図２】第１の実施形態の処理を説明する図である。
【図３】第１の実施形態の処理を説明するフローチャートである。
【図４】第１の実施形態の処理によって得られた標本の三次元画像の例である。
【図５】第１の実施形態の処理を説明する図である。
【図６】（ａ）は抽出されるＸＹ二次元データの例であり、（ｂ）は連続走査可能な曲線ｆ(x,y)の例である。
【図７】第２の実施形態を説明する図であり、（ａ）は基線経路曲線及び、基線経路曲線を中心に変移した複数の曲線の束を示す模式図であり、（ｂ）及び（ｃ）は、上記曲線の束の断面構成を示す。
【図８】第３の実施形態を説明する図であり、基線経路曲線上の位置を示す。
【図９】第３の実施形態を説明する図であり、表示装置の表示例を示す。
【図１０】従来例を示す図である。
【符号の説明】
１励起光源
１ａシャッタ
２顕微鏡本体
２ａビームエクスパンダ
３焦点位置制御部
４演算装置
５表示装置
６ダイクロイックミラー
７x 偏光素子
７y 偏光素子
８対物レンズ
９Ｚ軸アクチュエータ
１０光電検出器
１１標本
１２共焦点ピンホール
１４フィルタ
１５マウス

Claims

立体標本に対してレーザ光を照射し、該標本の三次元画像情報を取得する画像情報取得手段と、
該画像情報取得手段によって取得した標本の三次元画像情報から蛍光標識された前記標本内部にあって蛍光を発する線状の観察対象物の形状である基線経路曲線を演算する演算手段と、
該演算手段によって得られた基線経路曲線に沿って走査を行い、単一波長又は複数波長の光輝度情報を取得する光輝度情報取得手段と、
を備えることを特徴とする走査型レーザ顕微鏡システム。
前記演算手段による基線経路曲線の演算は、取得した前記標本の三次元画像情報からＸＹ面、ＹＺ面、ＸＺ面の中の少なくとも２面に投影した二次元データを作成し、該作成された二次元データに含まれる高い輝度値データの連続した座標を検出し、演算することによって得られることを特徴とする請求項１記載の走査型レーザ顕微鏡システム。
前記基線経路曲線の走査経路は、徐々にオフセットして複数回走査する、束ねられた肉太状の経路であることを特徴とする請求項１、又は２記載の走査型レーザ顕微鏡システム。
前記基線経路曲線は、神経細胞の主幹ラインであることを特徴とする請求項１、２、又は３記載の走査型レーザ顕微鏡システム。
立体標本に対してレーザ光を照射し、該標本の三次元画像情報を取得する処理と、
取得した前記標本の三次元画像情報からＸＹ面、ＹＺ面、ＸＺ面の中の少なくとも２面に投影した二次元データを作成する処理と、
該処理によって作成された二次元データに基づいて蛍光標識された前記標本内部にあって蛍光を発する線状の観察対象物の形状である基線経路曲線を演算する処理と、
該基線経路曲線に沿って走査を行い、単一波長又は複数波長の光輝度情報を取得する処理と、
を行うことを特徴とするレーザ顕微鏡システムにおける処理方法。