JP3814683B2 - アミノ酸組成物 - Google Patents
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Description
【発明の技術分野】
【０００１】
本発明は、スズメバチ（Vespa 属）の幼虫が分泌するだ液中に含まれるアミノ酸類で構成される組成物の知見から得られたアミノ酸組成物に関し、さらに詳しくは、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物及びそれを含有する補液に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、スズメバチの幼虫に関する報告、特に幼虫が分泌するだ液に関する報告はほとんどなく、その組成は全く解明されていなかった。またスズメバチの驚異的な筋持続力はどの様な栄養に由来するのかも全く不明であった。
本発明者らは、種々のスズメバチの幼虫が分泌するだ液について研究し、その組成を明らかにするとともに、その組成物が極めて有効な脂質、糖質代謝調節作用を有することを見出し、その有効成分を解明してきた。スズメバチの幼虫が分泌するアミノ酸栄養液は、経口投与により運動時の脂質及び糖質代謝を調節することが明らかになっている（例えば、特開平３−１２８３１８号公報、特開平４−９５０２６号公報、特開平４−１１２８２５号公報、特開平４−１２００２０号公報参照）。
【０００３】
本発明者は既に、スズメバチ栄養液が運動時に疲労物質の生成を抑制し、血糖値の低下を防ぎ、さらに運動能力の向上をもたらすことを明らかにしている。その作用機作は運動時のエネルギーとして脂肪の利用を促進する働きであることを示した。この栄養液の主成分であるＶＡＡＭ（Vespa Amino Acid Mixture) は、上記の作用の他にも運動を伴う疲労の回復など様々な効果が示唆されている。一方、運動による疲労で血液中のアミノ酸バランスが大きく崩れることが知られている。これは運動に伴うストレスによる体組織の磨耗、破壊の結果もたらされるものと考えられる。しかしながら、今日に至るまで、その生理的な意味と重大性に付いて全く注意が向けられていない。
【０００４】
本発明者はさらに運動後の血中アミノ酸濃度とＶＡＡＭのアミノ酸組成について検討した結果、ＶＡＡＭのアミノ酸組成は運動による疲労で減少する血中アミノ酸と極めて高い相関を示していることを見出した。つまり、疲労により、減少の激しいアミノ酸ほどＶＡＡＭ中に多く含まれることが明らかになった。
従って、これらのアミノ酸の補填は運動機能の向上と疲労の改善に不可欠であると考えられる。本発明は、上記のとおり、ヒトにおいて運動による疲労で減少する血中アミノ酸がＶＡＡＭのアミノ酸組成と極めて高い相関を示しているという発見に基づいて完成されたものである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物、特に補液を提供することである。
本発明の他の目的は、激しい運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制しその保持を高める方法及びそれに使用するアミノ酸組成物、特に補液を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記のアミノ酸を下記のモル比で含むアミノ酸組成物（以下「ＨＶＡＡＭ」ということもある。）である。
プロリン １２．６〜２３．４ モル
アラニン ８．４〜１５．６ モル
グリシン １３．３〜２４．９ モル
バリン ８．２〜１５．４ モル
スレオニン ５．０〜 ９．４ モル
ロイシン ４．３〜 ８．１ モル
ヒスチジン １．８〜１１．９ モル
セリン １．７〜 ３．３ モル
リジン ６．０〜１１．２ モル
イソロイシン ３．１〜 ５．９ モル
グルタミン酸 ２．２〜１０．４ モル
アルギニン ２．４〜 ４．６ モル
フェニルアラニン ２．６〜 ５．０ モル
チロシン ４．２〜 ７．８ モル
トリプトファン １．５〜 ２．９ モル
【０００７】
本発明はまた、ＨＶＡＡＭを哺乳動物に投与することを特徴とする運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制する方法を提供するものである。
本発明はさらに、ＶＡＡＭのアミノ酸組成、又はその各構成アミノ酸のモル比の±３０％（好ましくは±２０％、さらに好ましくは±１０％）の範囲内の割合でアミノ酸を含む組成物、すなわち、下記のアミノ酸を下記のモル比で含む、運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制するためのアミノ酸組成物（以下これらのアミノ酸組成物を総称して「ＶＡＡＭ」ということもある。）、及びこのアミノ酸組成物を哺乳動物に投与することを特徴とする運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制する方法を提供するものである。
プロリン １２．６〜２３．４ モル
アラニン ４．２〜 ７．８ モル
グリシン １３．３〜２４．９ モル
バリン ４．１〜 ７．７ モル
スレオニン ５．０〜 ９．４ モル
ロイシン ４．３〜 ８．１ モル
ヒスチジン １．８〜 ３．８ モル
セリン １．７〜 ３．３ モル
リジン ６．０〜１１．２ モル
イソロイシン ３．１〜 ５．９ モル
グルタミン酸 ２．２〜 ４．２ モル
アルギニン ２．４〜 ４．６ モル
フェニルアラニン ２．６〜 ５．０ モル
チロシン ４．２〜 ７．８ モル
トリプトファン １．５〜 ２．９ モル
【０００８】
本発明はさらに、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物を製造するためのＨＶＡＡＭの使用；激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物を製造するためのＶＡＡＭの使用；血中アミノ酸濃度の変動を抑制しその保持を高めるためのアミノ酸組成物を製造するためのＨＶＡＡＭの使用；血中アミノ酸濃度の変動を抑制しその保持を高めるためのアミノ酸組成物を製造するためのＶＡＡＭの使用に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の好ましいアミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）は、下記のアミノ酸を下記のモル比で含む。
プロリン １４．４〜２１．６ モル
アラニン ９．６〜１４．４ モル
グリシン １５．２〜２３．０ モル
バリン ９．４〜１４．２ モル
スレオニン ５．８〜 ８．７ モル
ロイシン ５．０〜 ７．５ モル
ヒスチジン ２．０〜１１．０ モル
セリン ２．０〜 ３．０ モル
リジン ６．８〜１０．４ モル
イソロイシン ３．６〜 ５．４ モル
グルタミン酸 ２．５〜 ９．６ モル
アルギニン ２．８〜 ４．２ モル
フェニルアラニン ３．０〜 ４．６ モル
チロシン ４．８〜 ７．２ モル
トリプトファン １．７〜 ２．７ モル
【００１０】
本発明の更に好ましいアミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）は、下記のアミノ酸を下記のモル比で含む。
プロリン １６．２〜１９．８ モル
アラニン １０．８〜１３．２ モル
グリシン １７．１〜２１．１ モル
バリン １０．６〜１３．０ モル
スレオニン ６．４〜 ８．０ モル
ロイシン ５．５〜 ６．８ モル
ヒスチジン ２．３〜１０．１ モル
セリン ２．２〜 ２．８ モル
リジン ７．７〜 ９．５ モル
イソロイシン ４．０〜 ５．０ モル
グルタミン酸 ２．８〜 ８．８ モル
アルギニン ３．１〜 ３．９ モル
フェニルアラニン ３．４〜 ４．２ モル
チロシン ５．４〜 ６．６ モル
トリプトファン １．９〜 ２．５ モル
【００１１】
本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）において、ヒスチジンのモル比は、好ましくは６．４〜１１．９モル、更に好ましくは７．２〜１１．０モル、最も好ましくは８．１〜１０．１モルである。また、グルタミン酸のモル比は、好ましくは５．６〜１０．４モル、更に好ましくは６．４〜９．６モル、最も好ましくは７．２〜８．８モルである。
【００１２】
本発明のアミノ酸組成物に使用するアミノ酸は、特にＬ−アミノ酸であることが好ましい。本発明のアミノ酸組成物は上記アミノ酸の他に、メチオニン（好ましくは０．３〜０．７モル％、更に好ましくは０．４〜０．６モル％）、アスパラギン酸（好ましくは０．１〜０．３モル％）、タウリン（Tau)（好ましくは３モル％以下）、リン酸エタノールアミン（P-EtAm）（好ましくは２モル％以下）、シスチン（Cys)（好ましくは0.５モル％以下）、β−アラニン（β−Ala)（好ましくは１モル％以下）、γ−アミノ酪酸（GABA) （好ましくは0.５モル％以下）、オルニチン（Orn)又はエタノールアミン（EtAm) （好ましくは３モル％以下）、アンモニア（NH3)（好ましくは２モル％以下）、１−メチルヒスチジン（1-MeHis)（好ましくは３モル％以下）、３−メチルヒスチジン（3-MeHis)（好ましくは１モル％以下）を含んでいてもよい。
【００１３】
本発明のアミノ酸組成物を製造するにあたっては、市販の上記アミノ酸を上記の所定割合で混合すれば良い。また補液として使用する場合にはこれを、蒸留水に溶解すれば良い。通常は粉末状で均一に混合して組成物としておき、用事蒸留水に溶解すれば良い。本発明の組成物を製造、保存する温度は特に限定されないが、室温以下で製造、保存することが好ましい。本発明の組成物は微弱な苦味を呈し、マウスに経口投与した場合２０g/kgでも全く毒性を発現せず、ＬＤ50は２０g/kgを遥かに上まわる。
【００１４】
本発明の組成物は、医薬又は飲料等の食品として有用である。医薬として用いる場合の投与形態は特に限定されないが、経口投与、直腸投与、注射、輸液による投与等の一般的投与経路を経ることができる。経口投与の場合には、上記組成を有する組成物として、あるいは医薬上許容される担体、賦形剤とともに錠剤、カプセル剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤等の製剤として用いてもよい。ただし、錠剤や散剤等の固形製剤では吸収に時間がかかる場合もあるので、液剤等による経口投与が好ましい。その場合には、適当な添加物、例えば塩化ナトリウム等の塩類、緩衝剤、キレート剤等とともに水溶液として投与することが好ましい。また、注射剤としては、適当な緩衝剤、等張剤等を添加し、滅菌蒸留水に溶解したものを用いて、例えば静脈内に点滴静注すればよい。
食品として用いる場合には、適当な風味を加えてドリンク剤、例えば清涼飲料や粉末飲料、例えば、スプレードライ法、凍結乾燥法、ミクロファインパウダー法等により作成した粉末をカプセル化したもの、あるいは錠剤の形態とすることができる。
【００１５】
本発明の組成物は極めて低毒性であり、投与量は非常に広範に設定できる。投与量は、投与方法、使用目的により異なるが、組成物の固形分として通常、１回１〜１２ｇ、一日の投与量として３〜１８ｇ、好ましくは１回に２〜４ｇ、１日投与量として６〜１２ｇである。
本発明の組成物を、運動開始前、運動中、または運動後の補液として使用する場合、０．８〜１．５重量％溶液として、１日当たり２００〜５００mlを１〜３回投与すればよい。注射剤としては０．８〜１．５重量％溶液として１回あたり１００〜４００ml、好ましくは１５０〜３００mlを投与すればよい。
【００１６】
【実施例】
以下に本発明を試験例及び実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されることはない。
【００１７】
試験例１（人による運動実験）
この試験は、人の運動前と運動後の血中アミノ酸組成の変化を調べるためのものである。
（１）血中アミノ酸の定量
検体として血液0.１ｍｌを採り、同量の１Ｎ過塩素酸を加え、蛋白の変性を行った後、遠心により上清を５０μｌ採り、アミノ酸分析用サンプルダイリューターを１ｍｌ加えて分析サンプルとした。アミノ酸は日立アミノ酸分析機８３５を用いてニンヒドリン法で分析した。
（２）人体テスト
被検者は室温（２４℃）において９０分間トレッドミル上で７０％ＶＯ2 ｍａｘ（最大酸素摂取量の７０％）の負荷のもとで走り、その後、自転車エルゴメーターで９０分間疲労するまで運動し、運動開始時と運動後に採血した血液中のアミノ酸組成を分析した。結果を表１に示す。
【００１８】
【表１】
アミノ酸 アミノ酸の濃度（μモル／Ｌ） 減少率
の種類 運動前 (A) 運動後 (B) 減少量 (A-B) [(A-B)/A] x 100
Pro 160.70
Ala ** 309.50 222.50 87.00 28.11
Gly ** 206.20 140.20 66.00 32.01
Val ** 214.50 150.00 64.50 30.07
Thr ** 130.70 106.10 24.60 18.82
Leu ** 114.00 92.40 21.60 18.95
His ** 62.40 42.00 20.40 32.70
Ser ** 113.40 101.10 12.30 10.85
Lys 147.90 135.90 12.00 8.11
Ile ** 67.00 55.30 11.70 17.46
Glu ** 22.40 16.10 6.30 28.13
Arg 63.80 57.80 6.00 9.40
Met 24.90 23.40 1.50 6.02
Cys 43.70 43.10 0.60 1.37
Asp 2.80 4.30 -1.50 -53.57
Phe 45.60 48.60 -3.00 -6.58
Tyr 53.90 59.90 -6.00 -11.13
Trp 36.80
【００１９】
運動に伴う血中アミノ酸組成の変動とＶＡＡＭのアミノ酸組成との比較
疲労するまでの激しい運動によって血中アミノ酸は著しく減少するものとあまり変動しないもの、そして僅かに増えるものの三つのグループに分かれた。有意差（0.０５＜ｐ）をもって減少したアミノ酸（＊＊を付した）は、アラニン、グリシン、バリン、スレオニン、ロイシン、ヒスチジン、セリン、イソロイシン、グルタミン酸等であった。また、有意差を示し増加したアミノ酸はチロシンであった。有意差を示さず増加したアミノ酸はフェニルアラニンとアスパラギン酸であった。同様に有意差を示さず減少したアミノ酸はリジン、アルギニン、メチオニン、シスチン及びトリプトファンであった。これらのうち有意に減少するアミノ酸はＶＡＡＭの成分として高い含有量を示していた（図１）。図１において、ＡはＶＡＡＭのアミノ酸組成（モル％）を示し、Ｂは表１に示した運動後の血中アミノ酸の減少量（μモル／Ｌ）を示している。
このことはＶＡＡＭの運動に対するアミノ酸組成物としての有用性を示している。
【００２０】
実施例１
ＶＡＡＭのアミノ酸組成と運動に伴う血中アミノ酸の減少率の間の相関性とその結果に基づくヒト・アミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）の作製とその効果
図１から示唆されるようにアラニンとバリンのＶＡＡＭ中の含有量（Ａ）は、ヒトにおける運動後の減少量（Ｂ）に比べて少ない。また、ヒスチジンやグルタミン酸は既に明らかにしたように脂質誘導効果を示さない。これらの点を考慮して、運動後の血中に含まれる各アミノ酸の減少率（％）を、ＶＡＡＭに含まれるアミノ酸の含有モル比に対してプロットしたものが図２である。図２から、運動後の血中アミノ酸の減少率（％）は、ＶＡＡＭに含まれるアミノ酸の含有モル比にほぼ相関していることがわかる（ｒ＝0.８４）。この結果は、ＶＡＡＭの運動時における有用性を強く示唆するものである。しかしながら、図２から明らかなように、アラニン、バリン、ヒスチジン及びグルタミン酸はこの相関回帰直線から著しく外れて減少している。このためこの相関性に合わせてこれらのアミノ酸の量を増大させたアミノ酸組成物は、ＶＡＡＭよりも更に優れたヒトに対する運動機能増進、疲労回復効果に優れていることが期待される。
【００２１】
図２に示した相関関係を示す直線から期待される減少率に比べて、ヒスチジンは3.５倍、グルタミン酸は2.５倍、バリンとアラニンはそれぞれ２倍高い減少率を示している。従って、ＶＡＡＭと同一組成のアミノ酸組成物においてこの４種のアミノ酸の量をそれぞれ増大させたものが本発明のアミノ酸組成物である。
これらのアミノ酸を補填することによって、ヒトの運動機能増進や疲労回復に対してより適切なアミノ酸組成物とすることができる。そのアミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）の一例を表２に示す（ＨＶＡＡＭＡ）。
更に、比較的、含有量も低く、脂肪誘導効果の少ないヒスチジンとグルタミン酸は補填しなくても、目的とする効果の低下は見られない。その一例を表２に合わせて示す（ＨＶＡＡＭＢ）。実際、表２のＡ及びＢに示したアミノ酸組成物の1. ５重量％水溶液を、運動後、３００ｍｌ経口投与することにより、運動後の疲労感や筋肉痛が著しく改善された。
【表２】
アミノ酸 アミノ酸の濃度（モル比）
の種類 ＶＡＡＭ ＨＶＡＡＭＡ ＨＶＡＡＭＢ ＣＡＡＭ
Pro 18.00 18.00 18.00 8.50
Ala 6.00 12.00 12.00 4.50
Gly 19.10 19.10 19.10 4.50
Val 5.90 11.80 11.80 5.50
Thr 7.20 7.20 7.20 2.50
Leu 6.20 6.20 6.20 8.50
His 2.60 9.10 2.60 2.50
Ser 2.50 2.50 2.50 8.00
Lys 8.60 8.60 8.60 7.00
Ile 4.50 4.50 4.50 5.50
Glu 3.20 8.00 3.20 19.60
Arg 3.50 3.50 3.50 3.00
Met 0.50 0.50 0.50 2.50
Asp 0.20 0.20 0.20 7.50
Phe 3.80 3.80 3.80 4.00
Tyr 6.00 6.00 6.00 5.00
Trp 2.20 2.20 2.20 1.00
Cys − − − 0.40
【００２２】
本発明の組成物において各アミノ酸のモル比は、表２に示したＨＶＡＡＭＡ及びＢの各アミノ酸のモル比の±３０％、好ましくは±２０％、さらに好ましくは±１０％程度であれば好適に使用できる。
【００２３】
試験例２（持久運動時の運動負荷を軽減する効果）
この試験は、本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）を運動前に投与することにより、持久運動時の運動負荷が軽減することを、マウスを用いた実験により確認したものである。
実験は、Jpn. J. Phys. Fitness Sports Med. 1995, 44:225-238記載の方法により行った。すなわち、マウス（雄；ddY)（５週齢）（各群10匹）を室温で16時間絶食させた後、表２に記載の組成物ＶＡＡＭ及び組成物ＨＶＡＡＭＢを、1.８重量％水溶液として、37.5μl/ｇ体重、経口投与し、次いで室温で30分間休ませた。これを、流水プール（直径３２cm、深さ３０cmの円筒型の水槽に水を入れ、３５℃に保持し、循環装置で８m/分の速度の水流を作ったもの）の中で、３０分間遊泳させた。遊泳後のマウスの血中乳酸値、血糖（グルコース）値、及び血中遊離脂肪酸値を測定した。結果を図３、図４及び図５に示す。
ＶＡＡＭ投与群と比較して、ＨＶＡＡＭＢ投与群は、３０分間の負荷遊泳後、血中乳酸値が低く（図３）、これとは逆に、血糖値（図４）及び血中遊離脂肪酸値（図５）は、ＨＶＡＡＭＢ投与群の方が有意に高い値を示した。これらの結果は、ＨＶＡＡＭが、運動に伴う運動負荷を、ＶＡＡＭより更に軽減することを示している。
【００２４】
試験例３（血中アミノ酸組成の変動を抑制しその保持を高める効果）
この試験は、運動前のＨＶＡＡＭ投与が、運動時の血中アミノ酸濃度の低下を抑制することを、マウスを用いた実験により確認したものである。
実験は、Jpn. J. Phys. Fitness Sports Med. 1995, 44:225-238記載の方法により行った。すなわち、マウス（雄；ddY)（５週齢）（各群10匹）を室温で16時間絶食させた後、表２に記載のＨＶＡＡＭＢ、ＣＡＡＭ（カゼインアミノ酸混合物）又はグルコースの1.8 重量％水溶液又は蒸留水を、37.5μl/ｇ体重、経口投与した後、室温で30分間休ませた。これを、流水プール中で、３０分間遊泳させた。遊泳後のマウスの血中全アミノ酸濃度の減少を図６に、無投与群（蒸留水投与群）に対する各栄養液投与群の血中各アミノ酸濃度の変動を図７に示す。
図６に示すように、ＨＶＡＡＭＢを投与した場合には、運動による血中アミノ酸（全アミノ酸）の濃度低下が、ＣＡＡＭ投与の場合と比較して１／２、グルコース投与の場合と比較して１／２．３７、水投与の場合と比較して１／２．１に減少することがわかる。ＨＶＡＡＭＢを投与した場合に濃度が低下するアミノ酸についてみると、図７に示すように、アルギニン、ヒスチジン、メチオニン、アスパラギン酸が僅かに減少しているが、他のアミノ酸、特にグリシン、リジン、バリン、グルタミン酸、及びスレオニンは、ＣＡＡＭやグルコース投与の場合と比較して濃度低下が少ないことがわかる。これは、血中非エステル化脂肪酸濃度の上昇に伴う脂肪酸の酸化促進により、ＴＣＡサイクルにおいて、これらのアミノ酸の利用が抑制されていることを示唆するものである。
【００２５】
試験例４（血中アミノ酸組成の変動を抑制しその保持を高める効果）
この試験は、運動前のＶＡＡＭ投与が、運動時の血中アミノ酸濃度の低下を抑制することを、ラットを用いた実験により確認したものである。
ラット（Sprague Dawley rats;雄)(６週齢）（各群８匹；平均体重１９０ｇ）を一夜絶食させた後、表２に記載のＶＡＡＭ、ＣＡＡＭ（カゼインアミノ酸混合物）の3.8 重量％水溶液又は蒸留水0.4 mlを経口投与し、次いで室温で30分間休ませた。次に、７°に傾斜したモーター駆動ローデントトレッドミル（23m/分) で90分間ランニングさせた。血液サンプルを試験液の投与前(-30分) 、ランニングスタート時(0分) 、中間点 (45分) 及び最後 (90分) に採取し、乳酸、グルコース及び非エステル化脂肪酸（NEFA) の濃度を測定した。ランニングをさせない他は全く同様に処理したラットについても同様の測定を行った。結果を図８〜図１２に示す。
【００２６】
図８〜図１０は、ＶＡＡＭ、ＣＡＡＭ又は蒸留水の投与が、ラットの血中グルコース濃度、血中乳酸濃度及び血中非エステル化脂肪酸濃度に及ぼす効果を示すものである。図８〜図１０において、（ａ）は、ランニング群、（ｂ）は非ランニング群を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
図８（ａ）に示すように、血中グルコース濃度は、ＣＡＡＭ又は蒸留水投与群では、僅かに高くなるが、４５分及び９０分のランニングにより、有意に低下する。これに対してＶＡＡＭ投与群では、４５分のランニングでは低下せず、９０分のランニングでも他の２群と比較して、有意（ｐ＜０．０５）に高い。非ランニング群（図８（ｂ））では、血中グルコース濃度の有意（ｐ＜０．０５）な変化は認められない。
【００２７】
また、図９（ａ）に示すように、血中乳酸濃度は、ＣＡＡＭ又は蒸留水投与群では、４５分のランニングにより、有意（ｐ＜０．０５）に高くなり、９０分後には低くなる。これに対してＶＡＡＭ投与群では、有意（ｐ＜０．０５）な変化は認められない。非ランニング群（図９（ｂ））では、血中乳酸濃度の有意な変化は認められない。
さらに、図１０に示すように、血中非エステル化脂肪酸濃度は、いずれも、投与前（０時間）において（絶食のため）低下するが、ランニングにより、ＣＡＡＭ及びＶＡＡＭ投与群では有意に高くなり、４５分後の値では、ＶＡＡＭ投与群が、ＣＡＡＭ投与群と比較して有意に高い。非ランニング群では、血中非エステル化脂肪酸濃度の有意な変化は認められない（図１０（ｂ））。
【００２８】
図１１及び図１２は、ＶＡＡＭ、ＣＡＡＭ又は蒸留水の投与が、ラットの血中アミノ酸濃度に及ぼす効果を示すものである。図１１及び図１２において、黒バーはＶＡＡＭ投与群、斜線バーはＣＡＡＭ投与群、白バーは蒸留水投与群ラットの血中各アミノ酸濃度を示す。
図１１（ランニング群）において、（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後（ランニング０分）、（ｃ）は、４５分ランニング後、及び（ｄ）は、９０分ランニング後の血中アミノ酸組成を示す。図１２（非ランニング群）において、（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後、（ｃ）は、投与７５分後、及び（ｄ）は、投与１２０分後の血中アミノ酸組成を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
図１１（ａ）及び図１２（ａ）に示すように、試験液投与前において、３群の血中アミノ酸濃度に有意差は認められなかった。
【００２９】
投与３０分後、ランニング群ラットの血中アミノ酸濃度は、有意に上昇した。但し、ＶＡＡＭ投与群では、グルタミン、メチオニン及びシスチンが、ＣＡＡＭ投与群では、シスチン及びグリシンが上昇しなかった（図１１（ｂ））。
ＶＡＡＭ又はＣＡＡＭ投与３０分後の、非ランニング群ラットの血中アミノ酸濃度の上昇は、投与３０分後の、ランニング群ラットの場合と同様であった（図１２（ｂ））。
４５分ランニング後の、各アミノ酸濃度は、ＶＡＡＭ投与群のチロシンを除いて、すべての群において低下した（図１１（ｃ））。ＶＡＡＭ投与群のグリシン、アラニン、バリン、スレオニン、チロシン、リジン、及びプロリンの濃度は、蒸留水投与群と比較して有意に高い。また、ＶＡＡＭ投与群のグリシン、スレオニン、チロシン、及びプロリンの濃度は、ＣＡＡＭ投与群と比較して有意に高い。ＣＡＡＭ投与群のバリンとリジンの濃度は、対照群（蒸留水）と比較して有意に高いが、ＶＡＡＭ投与群と比較して高いものはない。
【００３０】
非ランニング群では、ＶＡＡＭ投与群において、アラニン及びリジンの濃度上昇はない（図１２（ｃ））。ＶＡＡＭ投与群において、非ランニング群のチロシンの濃度は、ランニング群のそれより低いが、ＣＡＡＭ又は蒸留水投与群では、ランニング群のチロシン濃度は、非ランニング群のそれより高い。
ランニング終了時、ＶＡＡＭ投与群のバリン、ロイシン、セリン、スレオニン、チロシン及びリジン濃度は、ランニング４５分後の値と比較して殆ど低下していない（図１１（ｄ））。ＶＡＡＭ投与群のスレオニン、チロシン、リジン及びプロリン濃度は、蒸留水投与群のランニング９０分後の値と比較して有意に高い。非ランニング群では、ＶＡＡＭ投与群において、スレオニン及びプロリンの濃度は、蒸留水投与１２０分後のランニング群のそれより高い。
以上の結果は、ＶＡＡＭを投与することによって運動に伴うアミノ酸の消耗が抑制されることを意味し、ＶＡＡＭが、運動に伴う疲労の誘発等を抑制できることを示すものである。
【００３１】
【発明の効果】
本発明の組成物は、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有する。また、本発明の組成物を投与することによって、運動に伴うアミノ酸の消耗を抑制し、運動に伴う疲労の誘発等を抑制できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＶＡＡＭのアミノ酸組成（モル％）（Ａ）と運動疲労時の血中アミノ酸の減少量（μモル／Ｌ）（Ｂ）の関係を示す図面である。
【図２】図１に示した運動疲労に伴う血中アミノ酸の減少率（％）とＶＡＡＭ中のアミノ酸含有量（モル％）との相関関係を示す。図中の番号は、ＶＡＡＭ中のアミノ酸含有量の高いものから順に付してある。＊は、減少量に有意差を示したアミノ酸を示している。
【図３】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ又はＶＡＡＭ）を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中乳酸値（平均値）を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図４】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ又はＶＡＡＭ）を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血糖（グルコース）値（平均値）を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図５】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ又はＶＡＡＭ）を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中遊離脂肪酸値（平均値）を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図６】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、グルコース、又は蒸留水を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中全アミノ酸濃度の減少を示すグラフである。
【図７】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、グルコース、又は蒸留水を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中の各アミノ酸濃度の変動を示すグラフである。
【図８】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、又は蒸留水を、ラットに投与し、所定時間、運動させた群（ａ）と運動させなかった群（ｂ）について測定したラットの血中グルコース濃度（平均値）の経時変化を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図９】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、又は蒸留水を、ラットに投与し、所定時間、運動させた群（ａ）と運動させなかった群（ｂ）について測定したラットの血中乳酸濃度（平均値）の経時変化を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図１０】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、又は蒸留水を、ラットに投与し、所定時間、運動させた群（ａ）と運動させなかった群（ｂ）について測定したラットの血中非エステル化脂肪酸濃度（平均値）の経時変化を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図１１】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ又は蒸留水をラットに投与し、所定時間、運動させた群について測定したラットの血中アミノ酸濃度の変化を示すグラフである。黒バーはＶＡＡＭ投与群、斜線バーはＣＡＡＭ投与群、白バーは蒸留水投与群ラットの血中各アミノ酸濃度を示す。（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後（ランニング０分）、（ｃ）は、４５分ランニング後、及び（ｄ）は、９０分ランニング後の血中アミノ酸組成を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
【図１２】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ又は蒸留水をラットに投与し、所定時間、運動させなかった群について測定したラットの血中アミノ酸濃度の変化を示すグラフである。黒バーはＶＡＡＭ投与群、斜線バーはＣＡＡＭ投与群、白バーは蒸留水投与群ラットの血中各アミノ酸濃度を示す。（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後、（ｃ）は、投与７５分後、及び（ｄ）は、投与１２０分後の血中アミノ酸組成を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
【０００１】
本発明は、スズメバチ（Vespa 属）の幼虫が分泌するだ液中に含まれるアミノ酸類で構成される組成物の知見から得られたアミノ酸組成物に関し、さらに詳しくは、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物及びそれを含有する補液に関する。
【０００２】
【従来の技術】
従来、スズメバチの幼虫に関する報告、特に幼虫が分泌するだ液に関する報告はほとんどなく、その組成は全く解明されていなかった。またスズメバチの驚異的な筋持続力はどの様な栄養に由来するのかも全く不明であった。
本発明者らは、種々のスズメバチの幼虫が分泌するだ液について研究し、その組成を明らかにするとともに、その組成物が極めて有効な脂質、糖質代謝調節作用を有することを見出し、その有効成分を解明してきた。スズメバチの幼虫が分泌するアミノ酸栄養液は、経口投与により運動時の脂質及び糖質代謝を調節することが明らかになっている（例えば、特開平３−１２８３１８号公報、特開平４−９５０２６号公報、特開平４−１１２８２５号公報、特開平４−１２００２０号公報参照）。
【０００３】
本発明者は既に、スズメバチ栄養液が運動時に疲労物質の生成を抑制し、血糖値の低下を防ぎ、さらに運動能力の向上をもたらすことを明らかにしている。その作用機作は運動時のエネルギーとして脂肪の利用を促進する働きであることを示した。この栄養液の主成分であるＶＡＡＭ（Vespa Amino Acid Mixture) は、上記の作用の他にも運動を伴う疲労の回復など様々な効果が示唆されている。一方、運動による疲労で血液中のアミノ酸バランスが大きく崩れることが知られている。これは運動に伴うストレスによる体組織の磨耗、破壊の結果もたらされるものと考えられる。しかしながら、今日に至るまで、その生理的な意味と重大性に付いて全く注意が向けられていない。
【０００４】
本発明者はさらに運動後の血中アミノ酸濃度とＶＡＡＭのアミノ酸組成について検討した結果、ＶＡＡＭのアミノ酸組成は運動による疲労で減少する血中アミノ酸と極めて高い相関を示していることを見出した。つまり、疲労により、減少の激しいアミノ酸ほどＶＡＡＭ中に多く含まれることが明らかになった。
従って、これらのアミノ酸の補填は運動機能の向上と疲労の改善に不可欠であると考えられる。本発明は、上記のとおり、ヒトにおいて運動による疲労で減少する血中アミノ酸がＶＡＡＭのアミノ酸組成と極めて高い相関を示しているという発見に基づいて完成されたものである。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物、特に補液を提供することである。
本発明の他の目的は、激しい運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制しその保持を高める方法及びそれに使用するアミノ酸組成物、特に補液を提供することである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】
本発明は、下記のアミノ酸を下記のモル比で含むアミノ酸組成物（以下「ＨＶＡＡＭ」ということもある。）である。
プロリン １２．６〜２３．４ モル
アラニン ８．４〜１５．６ モル
グリシン １３．３〜２４．９ モル
バリン ８．２〜１５．４ モル
スレオニン ５．０〜 ９．４ モル
ロイシン ４．３〜 ８．１ モル
ヒスチジン １．８〜１１．９ モル
セリン １．７〜 ３．３ モル
リジン ６．０〜１１．２ モル
イソロイシン ３．１〜 ５．９ モル
グルタミン酸 ２．２〜１０．４ モル
アルギニン ２．４〜 ４．６ モル
フェニルアラニン ２．６〜 ５．０ モル
チロシン ４．２〜 ７．８ モル
トリプトファン １．５〜 ２．９ モル
【０００７】
本発明はまた、ＨＶＡＡＭを哺乳動物に投与することを特徴とする運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制する方法を提供するものである。
本発明はさらに、ＶＡＡＭのアミノ酸組成、又はその各構成アミノ酸のモル比の±３０％（好ましくは±２０％、さらに好ましくは±１０％）の範囲内の割合でアミノ酸を含む組成物、すなわち、下記のアミノ酸を下記のモル比で含む、運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制するためのアミノ酸組成物（以下これらのアミノ酸組成物を総称して「ＶＡＡＭ」ということもある。）、及びこのアミノ酸組成物を哺乳動物に投与することを特徴とする運動に伴う血中アミノ酸濃度の変動を抑制する方法を提供するものである。
プロリン １２．６〜２３．４ モル
アラニン ４．２〜 ７．８ モル
グリシン １３．３〜２４．９ モル
バリン ４．１〜 ７．７ モル
スレオニン ５．０〜 ９．４ モル
ロイシン ４．３〜 ８．１ モル
ヒスチジン １．８〜 ３．８ モル
セリン １．７〜 ３．３ モル
リジン ６．０〜１１．２ モル
イソロイシン ３．１〜 ５．９ モル
グルタミン酸 ２．２〜 ４．２ モル
アルギニン ２．４〜 ４．６ モル
フェニルアラニン ２．６〜 ５．０ モル
チロシン ４．２〜 ７．８ モル
トリプトファン １．５〜 ２．９ モル
【０００８】
本発明はさらに、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物を製造するためのＨＶＡＡＭの使用；激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有するアミノ酸組成物を製造するためのＶＡＡＭの使用；血中アミノ酸濃度の変動を抑制しその保持を高めるためのアミノ酸組成物を製造するためのＨＶＡＡＭの使用；血中アミノ酸濃度の変動を抑制しその保持を高めるためのアミノ酸組成物を製造するためのＶＡＡＭの使用に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明の好ましいアミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）は、下記のアミノ酸を下記のモル比で含む。
プロリン １４．４〜２１．６ モル
アラニン ９．６〜１４．４ モル
グリシン １５．２〜２３．０ モル
バリン ９．４〜１４．２ モル
スレオニン ５．８〜 ８．７ モル
ロイシン ５．０〜 ７．５ モル
ヒスチジン ２．０〜１１．０ モル
セリン ２．０〜 ３．０ モル
リジン ６．８〜１０．４ モル
イソロイシン ３．６〜 ５．４ モル
グルタミン酸 ２．５〜 ９．６ モル
アルギニン ２．８〜 ４．２ モル
フェニルアラニン ３．０〜 ４．６ モル
チロシン ４．８〜 ７．２ モル
トリプトファン １．７〜 ２．７ モル
【００１０】
本発明の更に好ましいアミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）は、下記のアミノ酸を下記のモル比で含む。
プロリン １６．２〜１９．８ モル
アラニン １０．８〜１３．２ モル
グリシン １７．１〜２１．１ モル
バリン １０．６〜１３．０ モル
スレオニン ６．４〜 ８．０ モル
ロイシン ５．５〜 ６．８ モル
ヒスチジン ２．３〜１０．１ モル
セリン ２．２〜 ２．８ モル
リジン ７．７〜 ９．５ モル
イソロイシン ４．０〜 ５．０ モル
グルタミン酸 ２．８〜 ８．８ モル
アルギニン ３．１〜 ３．９ モル
フェニルアラニン ３．４〜 ４．２ モル
チロシン ５．４〜 ６．６ モル
トリプトファン １．９〜 ２．５ モル
【００１１】
本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）において、ヒスチジンのモル比は、好ましくは６．４〜１１．９モル、更に好ましくは７．２〜１１．０モル、最も好ましくは８．１〜１０．１モルである。また、グルタミン酸のモル比は、好ましくは５．６〜１０．４モル、更に好ましくは６．４〜９．６モル、最も好ましくは７．２〜８．８モルである。
【００１２】
本発明のアミノ酸組成物に使用するアミノ酸は、特にＬ−アミノ酸であることが好ましい。本発明のアミノ酸組成物は上記アミノ酸の他に、メチオニン（好ましくは０．３〜０．７モル％、更に好ましくは０．４〜０．６モル％）、アスパラギン酸（好ましくは０．１〜０．３モル％）、タウリン（Tau)（好ましくは３モル％以下）、リン酸エタノールアミン（P-EtAm）（好ましくは２モル％以下）、シスチン（Cys)（好ましくは0.５モル％以下）、β−アラニン（β−Ala)（好ましくは１モル％以下）、γ−アミノ酪酸（GABA) （好ましくは0.５モル％以下）、オルニチン（Orn)又はエタノールアミン（EtAm) （好ましくは３モル％以下）、アンモニア（NH3)（好ましくは２モル％以下）、１−メチルヒスチジン（1-MeHis)（好ましくは３モル％以下）、３−メチルヒスチジン（3-MeHis)（好ましくは１モル％以下）を含んでいてもよい。
【００１３】
本発明のアミノ酸組成物を製造するにあたっては、市販の上記アミノ酸を上記の所定割合で混合すれば良い。また補液として使用する場合にはこれを、蒸留水に溶解すれば良い。通常は粉末状で均一に混合して組成物としておき、用事蒸留水に溶解すれば良い。本発明の組成物を製造、保存する温度は特に限定されないが、室温以下で製造、保存することが好ましい。本発明の組成物は微弱な苦味を呈し、マウスに経口投与した場合２０g/kgでも全く毒性を発現せず、ＬＤ50は２０g/kgを遥かに上まわる。
【００１４】
本発明の組成物は、医薬又は飲料等の食品として有用である。医薬として用いる場合の投与形態は特に限定されないが、経口投与、直腸投与、注射、輸液による投与等の一般的投与経路を経ることができる。経口投与の場合には、上記組成を有する組成物として、あるいは医薬上許容される担体、賦形剤とともに錠剤、カプセル剤、散剤、トローチ剤、シロップ剤等の製剤として用いてもよい。ただし、錠剤や散剤等の固形製剤では吸収に時間がかかる場合もあるので、液剤等による経口投与が好ましい。その場合には、適当な添加物、例えば塩化ナトリウム等の塩類、緩衝剤、キレート剤等とともに水溶液として投与することが好ましい。また、注射剤としては、適当な緩衝剤、等張剤等を添加し、滅菌蒸留水に溶解したものを用いて、例えば静脈内に点滴静注すればよい。
食品として用いる場合には、適当な風味を加えてドリンク剤、例えば清涼飲料や粉末飲料、例えば、スプレードライ法、凍結乾燥法、ミクロファインパウダー法等により作成した粉末をカプセル化したもの、あるいは錠剤の形態とすることができる。
【００１５】
本発明の組成物は極めて低毒性であり、投与量は非常に広範に設定できる。投与量は、投与方法、使用目的により異なるが、組成物の固形分として通常、１回１〜１２ｇ、一日の投与量として３〜１８ｇ、好ましくは１回に２〜４ｇ、１日投与量として６〜１２ｇである。
本発明の組成物を、運動開始前、運動中、または運動後の補液として使用する場合、０．８〜１．５重量％溶液として、１日当たり２００〜５００mlを１〜３回投与すればよい。注射剤としては０．８〜１．５重量％溶液として１回あたり１００〜４００ml、好ましくは１５０〜３００mlを投与すればよい。
【００１６】
【実施例】
以下に本発明を試験例及び実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されることはない。
【００１７】
試験例１（人による運動実験）
この試験は、人の運動前と運動後の血中アミノ酸組成の変化を調べるためのものである。
（１）血中アミノ酸の定量
検体として血液0.１ｍｌを採り、同量の１Ｎ過塩素酸を加え、蛋白の変性を行った後、遠心により上清を５０μｌ採り、アミノ酸分析用サンプルダイリューターを１ｍｌ加えて分析サンプルとした。アミノ酸は日立アミノ酸分析機８３５を用いてニンヒドリン法で分析した。
（２）人体テスト
被検者は室温（２４℃）において９０分間トレッドミル上で７０％ＶＯ2 ｍａｘ（最大酸素摂取量の７０％）の負荷のもとで走り、その後、自転車エルゴメーターで９０分間疲労するまで運動し、運動開始時と運動後に採血した血液中のアミノ酸組成を分析した。結果を表１に示す。
【００１８】
【表１】
アミノ酸 アミノ酸の濃度（μモル／Ｌ） 減少率
の種類 運動前 (A) 運動後 (B) 減少量 (A-B) [(A-B)/A] x 100
Pro 160.70
Ala ** 309.50 222.50 87.00 28.11
Gly ** 206.20 140.20 66.00 32.01
Val ** 214.50 150.00 64.50 30.07
Thr ** 130.70 106.10 24.60 18.82
Leu ** 114.00 92.40 21.60 18.95
His ** 62.40 42.00 20.40 32.70
Ser ** 113.40 101.10 12.30 10.85
Lys 147.90 135.90 12.00 8.11
Ile ** 67.00 55.30 11.70 17.46
Glu ** 22.40 16.10 6.30 28.13
Arg 63.80 57.80 6.00 9.40
Met 24.90 23.40 1.50 6.02
Cys 43.70 43.10 0.60 1.37
Asp 2.80 4.30 -1.50 -53.57
Phe 45.60 48.60 -3.00 -6.58
Tyr 53.90 59.90 -6.00 -11.13
Trp 36.80
【００１９】
運動に伴う血中アミノ酸組成の変動とＶＡＡＭのアミノ酸組成との比較
疲労するまでの激しい運動によって血中アミノ酸は著しく減少するものとあまり変動しないもの、そして僅かに増えるものの三つのグループに分かれた。有意差（0.０５＜ｐ）をもって減少したアミノ酸（＊＊を付した）は、アラニン、グリシン、バリン、スレオニン、ロイシン、ヒスチジン、セリン、イソロイシン、グルタミン酸等であった。また、有意差を示し増加したアミノ酸はチロシンであった。有意差を示さず増加したアミノ酸はフェニルアラニンとアスパラギン酸であった。同様に有意差を示さず減少したアミノ酸はリジン、アルギニン、メチオニン、シスチン及びトリプトファンであった。これらのうち有意に減少するアミノ酸はＶＡＡＭの成分として高い含有量を示していた（図１）。図１において、ＡはＶＡＡＭのアミノ酸組成（モル％）を示し、Ｂは表１に示した運動後の血中アミノ酸の減少量（μモル／Ｌ）を示している。
このことはＶＡＡＭの運動に対するアミノ酸組成物としての有用性を示している。
【００２０】
実施例１
ＶＡＡＭのアミノ酸組成と運動に伴う血中アミノ酸の減少率の間の相関性とその結果に基づくヒト・アミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）の作製とその効果
図１から示唆されるようにアラニンとバリンのＶＡＡＭ中の含有量（Ａ）は、ヒトにおける運動後の減少量（Ｂ）に比べて少ない。また、ヒスチジンやグルタミン酸は既に明らかにしたように脂質誘導効果を示さない。これらの点を考慮して、運動後の血中に含まれる各アミノ酸の減少率（％）を、ＶＡＡＭに含まれるアミノ酸の含有モル比に対してプロットしたものが図２である。図２から、運動後の血中アミノ酸の減少率（％）は、ＶＡＡＭに含まれるアミノ酸の含有モル比にほぼ相関していることがわかる（ｒ＝0.８４）。この結果は、ＶＡＡＭの運動時における有用性を強く示唆するものである。しかしながら、図２から明らかなように、アラニン、バリン、ヒスチジン及びグルタミン酸はこの相関回帰直線から著しく外れて減少している。このためこの相関性に合わせてこれらのアミノ酸の量を増大させたアミノ酸組成物は、ＶＡＡＭよりも更に優れたヒトに対する運動機能増進、疲労回復効果に優れていることが期待される。
【００２１】
図２に示した相関関係を示す直線から期待される減少率に比べて、ヒスチジンは3.５倍、グルタミン酸は2.５倍、バリンとアラニンはそれぞれ２倍高い減少率を示している。従って、ＶＡＡＭと同一組成のアミノ酸組成物においてこの４種のアミノ酸の量をそれぞれ増大させたものが本発明のアミノ酸組成物である。
これらのアミノ酸を補填することによって、ヒトの運動機能増進や疲労回復に対してより適切なアミノ酸組成物とすることができる。そのアミノ酸組成物（ＨＶＡＡＭ）の一例を表２に示す（ＨＶＡＡＭＡ）。
更に、比較的、含有量も低く、脂肪誘導効果の少ないヒスチジンとグルタミン酸は補填しなくても、目的とする効果の低下は見られない。その一例を表２に合わせて示す（ＨＶＡＡＭＢ）。実際、表２のＡ及びＢに示したアミノ酸組成物の1. ５重量％水溶液を、運動後、３００ｍｌ経口投与することにより、運動後の疲労感や筋肉痛が著しく改善された。
【表２】
アミノ酸 アミノ酸の濃度（モル比）
の種類 ＶＡＡＭ ＨＶＡＡＭＡ ＨＶＡＡＭＢ ＣＡＡＭ
Pro 18.00 18.00 18.00 8.50
Ala 6.00 12.00 12.00 4.50
Gly 19.10 19.10 19.10 4.50
Val 5.90 11.80 11.80 5.50
Thr 7.20 7.20 7.20 2.50
Leu 6.20 6.20 6.20 8.50
His 2.60 9.10 2.60 2.50
Ser 2.50 2.50 2.50 8.00
Lys 8.60 8.60 8.60 7.00
Ile 4.50 4.50 4.50 5.50
Glu 3.20 8.00 3.20 19.60
Arg 3.50 3.50 3.50 3.00
Met 0.50 0.50 0.50 2.50
Asp 0.20 0.20 0.20 7.50
Phe 3.80 3.80 3.80 4.00
Tyr 6.00 6.00 6.00 5.00
Trp 2.20 2.20 2.20 1.00
Cys − − − 0.40
【００２２】
本発明の組成物において各アミノ酸のモル比は、表２に示したＨＶＡＡＭＡ及びＢの各アミノ酸のモル比の±３０％、好ましくは±２０％、さらに好ましくは±１０％程度であれば好適に使用できる。
【００２３】
試験例２（持久運動時の運動負荷を軽減する効果）
この試験は、本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）を運動前に投与することにより、持久運動時の運動負荷が軽減することを、マウスを用いた実験により確認したものである。
実験は、Jpn. J. Phys. Fitness Sports Med. 1995, 44:225-238記載の方法により行った。すなわち、マウス（雄；ddY)（５週齢）（各群10匹）を室温で16時間絶食させた後、表２に記載の組成物ＶＡＡＭ及び組成物ＨＶＡＡＭＢを、1.８重量％水溶液として、37.5μl/ｇ体重、経口投与し、次いで室温で30分間休ませた。これを、流水プール（直径３２cm、深さ３０cmの円筒型の水槽に水を入れ、３５℃に保持し、循環装置で８m/分の速度の水流を作ったもの）の中で、３０分間遊泳させた。遊泳後のマウスの血中乳酸値、血糖（グルコース）値、及び血中遊離脂肪酸値を測定した。結果を図３、図４及び図５に示す。
ＶＡＡＭ投与群と比較して、ＨＶＡＡＭＢ投与群は、３０分間の負荷遊泳後、血中乳酸値が低く（図３）、これとは逆に、血糖値（図４）及び血中遊離脂肪酸値（図５）は、ＨＶＡＡＭＢ投与群の方が有意に高い値を示した。これらの結果は、ＨＶＡＡＭが、運動に伴う運動負荷を、ＶＡＡＭより更に軽減することを示している。
【００２４】
試験例３（血中アミノ酸組成の変動を抑制しその保持を高める効果）
この試験は、運動前のＨＶＡＡＭ投与が、運動時の血中アミノ酸濃度の低下を抑制することを、マウスを用いた実験により確認したものである。
実験は、Jpn. J. Phys. Fitness Sports Med. 1995, 44:225-238記載の方法により行った。すなわち、マウス（雄；ddY)（５週齢）（各群10匹）を室温で16時間絶食させた後、表２に記載のＨＶＡＡＭＢ、ＣＡＡＭ（カゼインアミノ酸混合物）又はグルコースの1.8 重量％水溶液又は蒸留水を、37.5μl/ｇ体重、経口投与した後、室温で30分間休ませた。これを、流水プール中で、３０分間遊泳させた。遊泳後のマウスの血中全アミノ酸濃度の減少を図６に、無投与群（蒸留水投与群）に対する各栄養液投与群の血中各アミノ酸濃度の変動を図７に示す。
図６に示すように、ＨＶＡＡＭＢを投与した場合には、運動による血中アミノ酸（全アミノ酸）の濃度低下が、ＣＡＡＭ投与の場合と比較して１／２、グルコース投与の場合と比較して１／２．３７、水投与の場合と比較して１／２．１に減少することがわかる。ＨＶＡＡＭＢを投与した場合に濃度が低下するアミノ酸についてみると、図７に示すように、アルギニン、ヒスチジン、メチオニン、アスパラギン酸が僅かに減少しているが、他のアミノ酸、特にグリシン、リジン、バリン、グルタミン酸、及びスレオニンは、ＣＡＡＭやグルコース投与の場合と比較して濃度低下が少ないことがわかる。これは、血中非エステル化脂肪酸濃度の上昇に伴う脂肪酸の酸化促進により、ＴＣＡサイクルにおいて、これらのアミノ酸の利用が抑制されていることを示唆するものである。
【００２５】
試験例４（血中アミノ酸組成の変動を抑制しその保持を高める効果）
この試験は、運動前のＶＡＡＭ投与が、運動時の血中アミノ酸濃度の低下を抑制することを、ラットを用いた実験により確認したものである。
ラット（Sprague Dawley rats;雄)(６週齢）（各群８匹；平均体重１９０ｇ）を一夜絶食させた後、表２に記載のＶＡＡＭ、ＣＡＡＭ（カゼインアミノ酸混合物）の3.8 重量％水溶液又は蒸留水0.4 mlを経口投与し、次いで室温で30分間休ませた。次に、７°に傾斜したモーター駆動ローデントトレッドミル（23m/分) で90分間ランニングさせた。血液サンプルを試験液の投与前(-30分) 、ランニングスタート時(0分) 、中間点 (45分) 及び最後 (90分) に採取し、乳酸、グルコース及び非エステル化脂肪酸（NEFA) の濃度を測定した。ランニングをさせない他は全く同様に処理したラットについても同様の測定を行った。結果を図８〜図１２に示す。
【００２６】
図８〜図１０は、ＶＡＡＭ、ＣＡＡＭ又は蒸留水の投与が、ラットの血中グルコース濃度、血中乳酸濃度及び血中非エステル化脂肪酸濃度に及ぼす効果を示すものである。図８〜図１０において、（ａ）は、ランニング群、（ｂ）は非ランニング群を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
図８（ａ）に示すように、血中グルコース濃度は、ＣＡＡＭ又は蒸留水投与群では、僅かに高くなるが、４５分及び９０分のランニングにより、有意に低下する。これに対してＶＡＡＭ投与群では、４５分のランニングでは低下せず、９０分のランニングでも他の２群と比較して、有意（ｐ＜０．０５）に高い。非ランニング群（図８（ｂ））では、血中グルコース濃度の有意（ｐ＜０．０５）な変化は認められない。
【００２７】
また、図９（ａ）に示すように、血中乳酸濃度は、ＣＡＡＭ又は蒸留水投与群では、４５分のランニングにより、有意（ｐ＜０．０５）に高くなり、９０分後には低くなる。これに対してＶＡＡＭ投与群では、有意（ｐ＜０．０５）な変化は認められない。非ランニング群（図９（ｂ））では、血中乳酸濃度の有意な変化は認められない。
さらに、図１０に示すように、血中非エステル化脂肪酸濃度は、いずれも、投与前（０時間）において（絶食のため）低下するが、ランニングにより、ＣＡＡＭ及びＶＡＡＭ投与群では有意に高くなり、４５分後の値では、ＶＡＡＭ投与群が、ＣＡＡＭ投与群と比較して有意に高い。非ランニング群では、血中非エステル化脂肪酸濃度の有意な変化は認められない（図１０（ｂ））。
【００２８】
図１１及び図１２は、ＶＡＡＭ、ＣＡＡＭ又は蒸留水の投与が、ラットの血中アミノ酸濃度に及ぼす効果を示すものである。図１１及び図１２において、黒バーはＶＡＡＭ投与群、斜線バーはＣＡＡＭ投与群、白バーは蒸留水投与群ラットの血中各アミノ酸濃度を示す。
図１１（ランニング群）において、（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後（ランニング０分）、（ｃ）は、４５分ランニング後、及び（ｄ）は、９０分ランニング後の血中アミノ酸組成を示す。図１２（非ランニング群）において、（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後、（ｃ）は、投与７５分後、及び（ｄ）は、投与１２０分後の血中アミノ酸組成を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
図１１（ａ）及び図１２（ａ）に示すように、試験液投与前において、３群の血中アミノ酸濃度に有意差は認められなかった。
【００２９】
投与３０分後、ランニング群ラットの血中アミノ酸濃度は、有意に上昇した。但し、ＶＡＡＭ投与群では、グルタミン、メチオニン及びシスチンが、ＣＡＡＭ投与群では、シスチン及びグリシンが上昇しなかった（図１１（ｂ））。
ＶＡＡＭ又はＣＡＡＭ投与３０分後の、非ランニング群ラットの血中アミノ酸濃度の上昇は、投与３０分後の、ランニング群ラットの場合と同様であった（図１２（ｂ））。
４５分ランニング後の、各アミノ酸濃度は、ＶＡＡＭ投与群のチロシンを除いて、すべての群において低下した（図１１（ｃ））。ＶＡＡＭ投与群のグリシン、アラニン、バリン、スレオニン、チロシン、リジン、及びプロリンの濃度は、蒸留水投与群と比較して有意に高い。また、ＶＡＡＭ投与群のグリシン、スレオニン、チロシン、及びプロリンの濃度は、ＣＡＡＭ投与群と比較して有意に高い。ＣＡＡＭ投与群のバリンとリジンの濃度は、対照群（蒸留水）と比較して有意に高いが、ＶＡＡＭ投与群と比較して高いものはない。
【００３０】
非ランニング群では、ＶＡＡＭ投与群において、アラニン及びリジンの濃度上昇はない（図１２（ｃ））。ＶＡＡＭ投与群において、非ランニング群のチロシンの濃度は、ランニング群のそれより低いが、ＣＡＡＭ又は蒸留水投与群では、ランニング群のチロシン濃度は、非ランニング群のそれより高い。
ランニング終了時、ＶＡＡＭ投与群のバリン、ロイシン、セリン、スレオニン、チロシン及びリジン濃度は、ランニング４５分後の値と比較して殆ど低下していない（図１１（ｄ））。ＶＡＡＭ投与群のスレオニン、チロシン、リジン及びプロリン濃度は、蒸留水投与群のランニング９０分後の値と比較して有意に高い。非ランニング群では、ＶＡＡＭ投与群において、スレオニン及びプロリンの濃度は、蒸留水投与１２０分後のランニング群のそれより高い。
以上の結果は、ＶＡＡＭを投与することによって運動に伴うアミノ酸の消耗が抑制されることを意味し、ＶＡＡＭが、運動に伴う疲労の誘発等を抑制できることを示すものである。
【００３１】
【発明の効果】
本発明の組成物は、激しい運動に伴う血中アミノ酸の減少を補い、運動機能の向上と運動後の疲労軽減及び疲労回復効果を有する。また、本発明の組成物を投与することによって、運動に伴うアミノ酸の消耗を抑制し、運動に伴う疲労の誘発等を抑制できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】ＶＡＡＭのアミノ酸組成（モル％）（Ａ）と運動疲労時の血中アミノ酸の減少量（μモル／Ｌ）（Ｂ）の関係を示す図面である。
【図２】図１に示した運動疲労に伴う血中アミノ酸の減少率（％）とＶＡＡＭ中のアミノ酸含有量（モル％）との相関関係を示す。図中の番号は、ＶＡＡＭ中のアミノ酸含有量の高いものから順に付してある。＊は、減少量に有意差を示したアミノ酸を示している。
【図３】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ又はＶＡＡＭ）を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中乳酸値（平均値）を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図４】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ又はＶＡＡＭ）を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血糖（グルコース）値（平均値）を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図５】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ又はＶＡＡＭ）を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中遊離脂肪酸値（平均値）を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図６】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、グルコース、又は蒸留水を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中全アミノ酸濃度の減少を示すグラフである。
【図７】本発明の組成物（ＨＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、グルコース、又は蒸留水を、遊泳前にマウスに投与し、遊泳後に測定したマウスの血中の各アミノ酸濃度の変動を示すグラフである。
【図８】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、又は蒸留水を、ラットに投与し、所定時間、運動させた群（ａ）と運動させなかった群（ｂ）について測定したラットの血中グルコース濃度（平均値）の経時変化を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図９】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、又は蒸留水を、ラットに投与し、所定時間、運動させた群（ａ）と運動させなかった群（ｂ）について測定したラットの血中乳酸濃度（平均値）の経時変化を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図１０】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ、又は蒸留水を、ラットに投与し、所定時間、運動させた群（ａ）と運動させなかった群（ｂ）について測定したラットの血中非エステル化脂肪酸濃度（平均値）の経時変化を示すグラフである。垂直のバーは標準誤差を示す。
【図１１】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ又は蒸留水をラットに投与し、所定時間、運動させた群について測定したラットの血中アミノ酸濃度の変化を示すグラフである。黒バーはＶＡＡＭ投与群、斜線バーはＣＡＡＭ投与群、白バーは蒸留水投与群ラットの血中各アミノ酸濃度を示す。（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後（ランニング０分）、（ｃ）は、４５分ランニング後、及び（ｄ）は、９０分ランニング後の血中アミノ酸組成を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
【図１２】本発明の組成物（ＶＡＡＭ）、ＣＡＡＭ又は蒸留水をラットに投与し、所定時間、運動させなかった群について測定したラットの血中アミノ酸濃度の変化を示すグラフである。黒バーはＶＡＡＭ投与群、斜線バーはＣＡＡＭ投与群、白バーは蒸留水投与群ラットの血中各アミノ酸濃度を示す。（ａ）は、投与前、（ｂ）は、投与３０分後、（ｃ）は、投与７５分後、及び（ｄ）は、投与１２０分後の血中アミノ酸組成を示す。＊は、ＶＡＡＭ投与群と比較して有意差（ｐ＜０．０５）があることを示す。
Claims (3)
- 下記のアミノ酸を下記のモル比で含むアミノ酸組成物。
プロリン １２．６〜２３．４ モル
アラニン ８．４〜１５．６ モル
グリシン １３．３〜２４．９ モル
バリン ８．２〜１５．４ モル
スレオニン ５．０〜 ９．４ モル
ロイシン ４．３〜 ８．１ モル
ヒスチジン １．８〜１１．９ モル
セリン １．７〜 ３．３ モル
リジン ６．０〜１１．２ モル
イソロイシン ３．１〜 ５．９ モル
グルタミン酸 ２．２〜１０．４ モル
アルギニン ２．４〜 ４．６ モル
フェニルアラニン ２．６〜 ５．０ モル
チロシン ４．２〜 ７．８ モル
トリプトファン １．５〜 ２．９ モル - ヒスチジンのモル比が６．４〜１１．９モル、グルタミン酸のモル比が５．６〜１０．４モルである請求項１記載のアミノ酸組成物。
- 請求項１又は２記載のアミノ酸組成物を含有する補液。
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