JP3681193B2 - α-Isomaltosyl α-isomaltoside, production method thereof and use - Google Patents

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、新規非還元性糖質とその製造方法並びに用途、更に詳細には、Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシドで示されるα−イソマルトシル α−イソマルトシドとその製造方法並びに用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
トレハロース（α，α−トレハロース）は、グルコースを構成糖とする非還元性二糖であり、少量ながら、カビ、酵母、細菌、きのこ、高等植物、昆虫など、広く天然界に存在している。トレハロースは、非還元性ゆえに、アミノ酸や蛋白質等のアミノ基を有する物質とメイラード反応（アミノカルボニル反応）を起こさず、アミノ酸含有物質を損なわないこと、しかも、それ自身安定な糖質であることから、褐変、劣化を懸念することなく、利用、加工でき、広範囲な用途が期待されてきた。その用途の一例として、特開昭６３−２４０７５８号公報では、トレハロースがビフィズス菌増殖糖質であり、低う蝕性糖質であることを開示している。その後の研究で、それらの作用は、蔗糖よりは優れているものの、比較的小さく、更に優れた糖質の開発が望まれる。
【０００３】
一方、イソマルトトリオース（別名デキストラントリオース）やイソマルトテトラオース（別名デキストランテトラオース）などのイソマルトオリゴ糖は、『ケミカル・アンド・ファーマシューティカル・ブリテン（Ｃｈｅｍｉｃａｌ ＆Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ）』、第２６巻、第３３０６乃至３３１１頁（１９７８年）に開示されているようにビフィズス菌増殖糖質として知られており、また、特公平５−３９５８４号公報、特公平５−５３４６５号公報などに開示されているように、難う蝕性糖質乃至抗う蝕性糖質としても知られている。
【０００４】
しかしながら、イソマルトオリゴ糖は還元性を有する糖質で、アミノ酸との褐変反応を起こし易く、食品加工上、変質、劣化を招き易い欠点を有しており、更に優れた糖質の開発が望まれる。
【０００５】
本発明者等は、トレハロースとイソマルトオリゴ糖のこれらの特性に着目し、トレハロース構造とイソマルトース構造を併せ持つオリゴ糖の中に、非還元性であって、しかもビフィズス菌の選択増殖性に優れ、抗う蝕性の糖質が存在するのではと強い期待を抱いて検討を開始した。トレハロース構造とイソマルトース構造とを併せ持つオリゴ糖については、例えば、鰺坂等が、『カーボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）』、第１９９巻、第２２７乃至２３４頁（１９９０年）で、サッカロマイセス・スピーシーズ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）のα−グルコシダーゼ、あるいは、リゾプス・ニベウス（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ ｎｉｖｅｕｓ）のグルコアミラーゼによるトレハロースとグルコースとからの縮合反応によりＯ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル α−Ｄ−グルコピラノシドで示されるα−イソマルトシル α−グルコシドを報告しており、また、金等が、『澱粉科学』、第４０巻、第３４９頁（１９９３年）で、アルスロバクター・グロビホルミス（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）Ｔ６のイソマルトデキストラナーゼの糖転移作用により、デキストランとトレハロースとからＯ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル α−Ｄ−グルコピラノシドで示されるα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを報告している。しかしながら、これら報告では、本発明者等が期待している糖質の特性については何ら開示しておらず、また、これら糖質以外には、トレハロース構造とイソマルトース構造とを併せ持つオリゴ糖は知られていないことが判明した。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、分子内にトレハロース構造とイソマルトース構造とを併せ持ち、かつ非還元性で、ビフィズス菌増殖促進性に優れ、抗う蝕性の新規糖質とその製造方法を確立し、その用途を提供しようとするものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者等は、上記課題を解決するため新規非還元性糖質とその製造方法について鋭意研究を続けた。
【０００８】
その結果、Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシドで示される新規糖質α−イソマルトシル α−イソマルトシドが非還元性オリゴ糖で、安定性に優れ、著しいビフィズス菌増殖促進作用、抗う蝕作用を有することを見いだし、本発明を完成した。
【０００９】
本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドは、化学的に合成することも可能であるが、工業的には、生化学反応、とりわけ、トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼ（ＥＣ３．２．１．２０）を作用させることにより生成させるのが有利である。
【００１０】
また、本発明に用いるトレハロースと澱粉質とを含有する水溶液としては、α−グルコシダーゼが作用してα−イソマルトシル α−イソマルトシドを生成するものであればよく、トレハロースと澱粉質とをそれぞれの化合物として含有する水溶液は勿論のこと、分子内にトレハロース構造とα−１，４グルコシド結合様式の澱粉質構造とを併せ持つ化合物を含有する水溶液も有利に利用できる。
【００１１】
トレハロースと澱粉質とをそれぞれの化合物として利用する場合には、トレハロースは市販品を利用してもよいし、必要ならば、公知の方法、例えば、酵母から抽出するか、トレハロース生成能を有する細菌の培養液から分離するか、又は後に述べる澱粉質に酵素作用させるかなどして調製して利用してもよい。澱粉質としては、例えば、糊化澱粉、液化澱粉、可溶性澱粉、マルトオリゴ糖などの澱粉又は澱粉部分分解物が適宜使用できる。澱粉部分分解物を使用する場合には、澱粉にα−アミラーゼなどの液化酵素やプルラナーゼ、イソアミラーゼなどの澱粉枝切酵素を作用させて分解することも有利に実施できる。
【００１２】
また、トレハロースと澱粉質とを同時に製造する方法としては、例えば、本出願人が、特願平５−１５６３３８号明細書、特願平６−７９２９１号明細書などに開示したように、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素とトレハロース遊離酵素とを作用させるか、又は、特願平５−１９９９７１号明細書、特願平６−１４４０９２号明細書などに開示したようにマルトースを含有する水溶液にマルトース・トレハロース変換酵素を作用させる方法などが有利に利用できる。
【００１３】
次に、分子内にトレハロース構造とα−１，４グルコシド結合様式の澱粉質構造とを併せ持つ化合物を利用する場合には、例えば、本出願人が、ヨーロッパ特許出願公開０６０６７５３Ａ２号公報に開示したように、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させて、α−１，４グルコシド結合様式の澱粉質構造を持つ分子の末端にトレハロース構造を有する化合物を製造するか、又は、特願平５−１７８６２３号明細書、特願平６−１６７４８６号明細書などに開示したように、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素とシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼとを作用させて分子の内部にトレハロース構造とα−１，４グルコシド結合様式の澱粉質構造とを併せ持つ化合物を製造して利用すればよい。
【００１４】
本発明に用いるα−グルコシダーゼとしては、澱粉質のα−１，４グルコシド結合をα−１，６グルコシド結合に変換できる酵素で有ればよく、例えば、アスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ）、アスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ａｗａｍｏｒｉ）、アスペルギルス・サイトイ（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｓａｉｔｏｉ）、ムコール・ヤバニカス（Ｍｕｃｏｒ ｊａｖａｎｉｃｕｓ）、ペニシリウム・クリソゲナム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｒｙｓｏｇｅｎｕｍ）、キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）など微生物由来のα−グルコシダーゼが有利に利用できる。
【００１５】
酵素反応の条件は、α−イソマルトシル α−イソマルトシドが生成する方法であればよく、通常、トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液に、α−グルコシダーゼを澱粉質グラム当たり０．１単位以上、望ましくは１乃至１００単位を、温度２０乃至８０℃、ｐＨ３乃至９から選ばれる条件で、０．１乃至１００時間、望ましくは、１乃至７０時間程度作用させればよい。本発明に用いるα−グルコシダーゼの活性１単位は、０．２ｗ／ｖ％マルトースを基質にして、４０℃、ｐＨ５．５の条件で、１分間に２μモルのグルコースを生成する酵素量と定義した。この酵素反応により、α−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド、α−イソマルトトリオシル α−グルコシド、更には、これらにα−グルコシル基がα−１，６結合で１乃至数個結合したオリゴ糖、例えば、α−イソマルトトリオシル α−イソマルトシド、α−イソマルトテトラオシル α−イソマルトシド、α−イソマルトトリオシル α−イソマルトトリオシドなどが生成される。この反応液には、通常、グルコース、マルトース、マルトトリオースなどの還元性糖質や未反応のトレハロース、澱粉質なども含まれる。これにグルコアミラーゼを作用させると、非還元性糖質として、主としてα−イソマルトシル α−イソマルトシド、α−イソマルトシル α−グルコシドが蓄積生成されることとなり、これからα−イソマルトシル α−イソマルトシドを採取すればよい。
【００１６】
以上述べたような酵素反応によって生成されるα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有溶液は、通常、固形物当たり、トレハロース構造とイソマルトース構造とを併せ持つ非還元性オリゴ糖を５乃至４０ｗ／ｗ％（以下、本明細書では、特にことわらない限り、ｗ／ｗ％を％と略称する。）程度含有し、α−イソマルトシル α−イソマルトシドを１乃至５％程度含有しており、これを濾過、精製して液状で使用することも、また、濃縮してシラップ状で利用することも、更に、乾燥して固状で利用することも随意である。
【００１７】
必要ならば、α−イソマルトシル α−イソマルトシドの特長を生かすために、α−イソマルトシル α−イソマルトシド生成溶液を、更に、分離、精製して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有物にして利用される。その方法としては、例えば、酵母発酵法、膜濾過法、分別沈澱法、アルカリ処理法、カラムクロマトグラフィーなどにより夾雑糖類を分離除去する方法が適宜採用できる。とりわけ、特公昭６２−５０４７７号公報、特公平４−５０３１９号公報などに開示されている塩型強酸性カチオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーにより、夾雑糖類を除去してα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有画分を採取する方法は有利に実施できる。この際、固定床方式、移動床方式、疑似移動床方式のいずれの方式を採用することも随意である。
【００１８】
また、必要ならば、α−イソマルトシル α−イソマルトシド含有糖質を、常法に従って、水素添加し、それに含まれるグルコース、マルトースなどの還元性糖質を糖アルコールにして還元力を消滅させ、実質的に還元性を示さないα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有糖質を製造することも有利に実施できる。
【００１９】
本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドは、上述の酵素反応で同時に生成されるα−イソマルトシル α−グルコシド、α−イソマルトトリオシルα−グルコシドなどと同様に、それ自身が非還元性で、極めて安定であり、低甘味ではあるが良質で温和な甘味を有し、また、経口摂取により、消化管で消化されにくく、その大部分は大腸に到達し、ビフィズス菌増殖促進剤として有利に利用できる。ビフィズス菌の選択的増殖は、酢酸、乳酸などの有機酸を生成して大腸内のｐＨを下げ、自発性感染症の原因となる細菌や腐敗細菌などの有害菌の生育を抑制する。また、腐敗細菌が産生するアンモニア、インドール、クレゾールなどの有害物質の発生をも抑制する。加えて腸を適度に刺激し、蠕動運動を適度に促進し整腸作用を示す。また、ビフィズス菌増殖促進糖質は、大腸内で有機酸を生成してｐＨを下げ、カルシウム、鉄、亜鉛など欠乏し易いミネラルの溶解性を高め、それらの吸収を促進することから、ミネラル吸収促進剤としても有利に利用できる。更に、う蝕誘発菌などによって発酵されにくく、う蝕誘発菌による蔗糖からの不溶性グルカン合成を阻害し、歯垢形成を抑えることより、虫歯を起こしにくい甘味料として、またう蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。また、化学的に安定であり、糖類と褐変反応を起こし易いアミノ酸、オリゴペプチド、更には、有効成分、活性の失われやすい生理活性物質などを安定化し得ると共に、浸透圧調節性、賦形性、照り付与性、保湿性、粘性、他糖の晶出防止性、難発酵性、澱粉老化防止性などの性質を具備している。
【００２０】
α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドの持つこれらの諸性質は、飲食物、嗜好物、飼料、餌料などの口中使用物、飲食物、更には、化粧品、医薬品などの各種組成物に有利に使用できる。とりわけ、これら非還元性オリゴ糖を、糖アルコール、ミネラル及び蔗糖から選ばれる１種以上の成分とともに含有せしめて各種組成物を製造することは有利に実施できる。
【００２１】
本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有糖質及びこれから分離し得られるα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有物は、そのまま甘味付けのための調味料として使用することができる。必要ならば、例えば、粉飴、ブドウ糖、マルトース、トレハロース、蔗糖、ラクトスクロース、異性化糖、蜂蜜、メイプルシュガー、ソルビトール、マルチトール、ラクチトール、ジヒドロカルコン、ステビオシド、α−グリコシルステビオシド、レバウディオシド、グリチルリチン、Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル、サッカリン、グリシン、アラニンなどのような他の甘味料の１種または２種以上の適量と混合して使用してもよく、また必要ならば、デキストリン、澱粉、乳糖などのような増量剤と混合して使用することもできる。
【００２２】
また、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有糖質及びこれから分離し得られるα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有物の粉末状製品は、そのままで、または必要に応じて、増量剤、賦形剤、結合剤などと混合して、顆粒、球状、短棒状、板状、立方体、錠剤など各種形状に成型して使用することも随意である。
【００２３】
また、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有糖質及びこれから分離し得られるα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有物の甘味は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの他の呈味を有する各種物質とよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、一般の飲食物の甘味付け、呈味改良に、また品質改良などに有利に利用できる。
【００２４】
例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、ふりかけ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャップ、たくあん漬の素、白菜漬の素、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなど各種調味料として有利に使用できる。
【００２５】
また、例えば、せんべい、あられ、おこし、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、パン、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリン、バタークリーム、カスタードクリーム、シュークリーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの洋菓子、アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペースト、スプレッドなどのペースト類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、糖果などの果実、野菜の加工食品類、福神漬、べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、ハム、ソーセージなどの畜肉製品類、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、天ぷらなどの魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、酢こんぶ、さきするめ、ふぐみりん干しなどの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、こんぶ巻などの惣菜食品、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜のビン詰、缶詰類、清酒、合成酒、リキュール、洋酒などの酒類、紅茶、コーヒー、ココア、ジュース、炭酸飲料、乳酸飲料、乳酸菌飲料などの清涼飲料水、プリンミックス、ホットケーキミックス、即席しるこ、即席スープなどの即席食品、更には、離乳食、治療食、ドリンク剤などの各種飲食物への甘味付に呈味改良に、また、品質改良などに有利に利用できる。
【００２６】
また、家畜、家禽、その他蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のために飼料、餌料などの嗜好性を向上させる目的で使用することもできる。その他、タバコ、練歯磨、口紅、リップクリーム、内服液、錠剤、トローチ、肝油ドロップ、口中清涼剤、口中香剤、うがい剤など各種固形物、ペースト状、液状などで嗜好物、化粧品、医薬品などの各種組成物への甘味剤として、または呈味改良剤、矯味剤として、更には、品質改良剤として有利に利用できる。
【００２７】
品質改良剤、安定剤としては、有効成分、活性などを失い易い各種生理活性物質またはこれを含む健康食品、医薬品などに有利に適応できる。例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γ、ツモア・ネクロシス・ファクター−α、ツモア・ネクロシス・ファクター−β、マクロファージ遊走阻止因子、コロニー刺激因子、トランスファーファクター、インターロイキン２などのリンホカイン含有液、インシュリン、成長ホルモン、プロラクチン、エリトロポエチン、卵細胞刺激ホルモン、胎盤ホルモンなどのホルモン含有液、ＢＣＧワクチン、日本脳炎ワクチン、はしかワクチン、ポリオ生ワクチン、痘苗、破傷風トキソイド、ハブ抗毒素、ヒト免疫グロブリンなどの生物製剤含有液、ペニシリン、エリスロマイシン、クロラムフェニコール、テトラサイクリン、ストレプトマイシン、硫酸カナマイシンなどの抗生物質含有液、チアミン、リボフラビン、Ｌ−アスコルビン酸、肝油、カロチノイド、エルゴステロール、トコフェロールなどのビタミン含有液、リパーゼ、エラスターゼ、ウロキナーゼ、プロテアーゼ、β−アミラーゼ、イソアミラーゼ、グルカナーゼ、ラクターゼなどの酵素含有液、薬用人参エキス、スッポンエキス、クロレラエキス、アロエエキス、プロポリスエキスなどのエキス類、ウイルス、乳酸菌、酵母などの生菌、ロイヤルゼリーなどの各種生理活性物質も、その有効成分、活性を失うことなく、安定で高品質の健康食品や医薬品などを容易に製造できる。
【００２８】
以上述べたような各種組成物にα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有糖質またはこれから分離し得られるα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有物を含有せしめる方法は、その製品が完成するまでの工程で含有せしめればよく、例えば、混和、溶解、融解、浸漬、浸透、散布、塗布、被覆、噴霧、注入、固化など公知の方法が適宜選ばれる。その量は、通常、０．１％以上、望ましくは、０．５％以上含有せしめるのが好適である。このようにして得られる組成物を利用する方法は、その種類、α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドの含量、利用頻度などにより適宜選択できる。例えば、ビフィズス増殖促進剤やミネラル吸収促進剤の場合、通常成人１日当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドの量にして約０．１乃至１００ｇ、望ましくは、約０．５乃至３０ｇを毎日摂取するのが好ましい。
【００２９】
本発明のビフィズス菌増殖促進剤の摂取は、腸内、とりわけ大腸内でビフィズス菌を優先的に増殖させ、酢酸、乳酸などの有機酸を産生し、ｐＨを低下させる。また、感染細菌や腐敗細菌の増殖を抑制し、アミノ酸、蛋白質などの代謝過程で発生し易い有害物質の産生を抑制する。更に、腸を適度に刺激し、蠕動運動を適度に促進するのみならず、糞便量をも増大して、整腸効果を著しく高め、便秘を予防する。また、本剤は、カルシウム、マグネシウム、鉄、銅、亜鉛、リンなどのミネラル吸収促進剤としても優れた効果を発揮する。
【００３０】
従って、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、老若男女を問わず、美容、健康の維持増進、成人病の予防、病中、病後の回復促進、高アンモニア血症、肝性脳症、骨粗しょう症などの治療、予防などに有利に利用できる。
【００３１】
また、本発明のビフィズス菌増殖促進剤は、ブタ、イヌ、ネコなどの家畜、カナリア、インコ、ニワトリなどの家禽、その他蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物においても、その効果を発揮し、感染予防、肥育促進、産卵助長、糞便の悪臭抑制、ミネラル吸収促進などの目的で有利に利用できる。
【００３２】
また、う蝕抑制剤の場合には、α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドは、それ自身低う蝕性甘味料として利用できるのみならず、これと蔗糖とを併用して、蔗糖の持つう蝕性を積極的に抑制させることも有利に実施できる。併用する場合には、本発明の有効成分を蔗糖に対して５％以上、望ましくは１０％以上使用するのが好適である。次に実験により本発明をさらに具体的に説明する。
【００３３】
【実験１ α−イソマルトシル α−イソマルトシドの調製】
トレハロース（株式会社林原生物化学研究所製）６０重量部及びマルトテトラオース（株式会社林原生物化学研究所製）４０重量部を水１５０重量部に加熱溶解し、この溶液を温度６０℃、ｐＨ５．５にして、アスペルギルス・ニガー由来のα−グルコシダーゼ（天野製薬株式会社製、商品名『トランスグルコシダーゼアマノ』）をマルトテトラオースグラム当たり５単位加えて２４時間反応させ、次いで１００℃に２０分加熱して、酵素を失活させた。本溶液には本発明の新規オリゴ糖、α−イソマルトシル α−イソマルトシドを約４％含み、さらにα−イソマルトシル α−グルコシドを約２２％、α−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約６％含有し、他に、グルコース、マルトース、マルトトリオースなどの還元性糖質や未反応のトレハロース、マルトテトラオースなどを含有していた。この溶液を活性炭で脱色し、イオン交換樹脂（Ｈ型及びＯＨ型）にて脱塩して精製し、濃度約５０％に濃縮し、次いで、塩型強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィーを行ない、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有画分を採取した。
【００３４】
分画用樹脂は、アルカリ金属型強酸性カチオン交換樹脂（東京有機化学工業株式会社製、商品名『ＸＴ−１０１６』、Ｎａ⁺ 型、架橋度４％）を使用し、内径５．４ｃｍのジャケット付ステンレス製カラムに水懸濁状で充填した。この際、樹脂層長５ｍのカラム４本を直列につないで、樹脂層長を約２０ｍになるようにした。カラム内温度を６０℃に維持しつつ、原料の糖溶液を５ｖ／ｖ％加え、これに６０℃の温水をＳＶ０．１５で流して分画し、α−イソマルトシル α−グルコシド高含有画分、α−イソマルトシル α−イソマルトシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシド高含有画分とをそれぞれ採取した。
【００３５】
α−イソマルトシル α−イソマルトシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシド高含有画分を濃度約２％、ｐＨ５．０にして、グルコアミラーゼを固形物グラム当たり５単位加えて、４０℃、２０時間作用させ、主として非還元末端にα−１，４グルコシド結合を有する夾雑糖質を分解した。次いで１００℃に２０分加熱して、酵素を失活させた後、これを冷却し、常法に従い、脱塩、精製し、濃度約４０％に濃縮して、オクタデシルシリカゲルを充填したカラム（株式会社ワイエムシー、商品名『ＹＭＣ−Ｐａｃｋ Ｒ−３５５−１５』）を用いたクロマトグラフィーを行ない、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有画分とα−イソマルトトリオシル α−グルコシド高含有画分とに分け、それぞれ採取した。この方法を繰り返して採取されたα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有液を脱塩、精製、濃縮、真空乾燥して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末約２重量部を得た。本粉末標品はα−イソマルトシル α−イソマルトシドを固形物当たり約９７％含んでいた。
【００３６】
また、同様の方法で、α−イソマルトシル α−グルコシド高含有粉末（固形物当たりα−イソマルトシル α−グルコシドを約９８％含有）を約１２重量部、及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシド高含有粉末（固形物当たりα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約９７％含有）を約３重量部得た。
【００３７】
【実験２ α−イソマルトシル α−イソマルトシドの理化学的性質】
実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末標品を用いて理化学的性質を調べた。
（１）元素分析
測定値 Ｃ＝４２．１％ Ｈ＝６．３％ Ｏ＝５１．６％
理論値 Ｃ＝４１．９８％ Ｈ＝６．１７％ Ｏ＝５１．８５％
（分子式：Ｃ₂₄Ｈ₄₂Ｏ₂₁）
（２）分子量
６６６．６ダルトン
（３）紫外線吸収
水溶液にして測定すると特徴ある吸収は示さない。
（４）呈味性
蔗糖の約５分の１の甘味度を示し、その味質は良好で、臭いはない。
（５）薬剤に対する溶解性
水、０．１Ｎ−ＮａＯＨ、０．１Ｎ−ＨＣｌに易溶。
メタノール、エタノールに難溶。
クロロホルム、酢酸エチルに不溶。
（６）呈色反応
アントロン−硫酸反応で緑色を呈する。
フェーリング氏液還元反応は陰性。
ヨウ素反応は陰性。
（７）構造
（ａ） １Ｎ−硫酸で加水分解すると、Ｄ−グルコースのみを生成する。
（ｂ） 本物質をメチル化した後、酸により加水分解し、続いて還元、アセチル化してグリシトールアセテートにし、得られたメチルヘキシトールアセテートをガスクロマトグラフィーで分析すると、１，５−ジ−Ｏ−アセチル−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−メチルグルシトール及び１，５，６−トリ−Ｏ−アセチル−２，３，４−トリ−Ｏ−メチルグルシトールが１対１のモル比で得られる。
（ｃ） グルコアミラーゼの作用により部分的に分解され、グルコース、トレハロース及びα−イソマルトシル α−グルコシドを生成する。イソマルトデキストラナーゼによっては分解を受けない。
（ｄ） 炭素核磁気共鳴分析（¹³Ｃ−ＮＭＲ）により、１２本の¹³Ｃシグナルが得られた。ゼイ・エイチ・ブラドバリー（Ｊ．Ｈ．Ｂｒａｄｂｕｒｙ）等が、『カーボハイドレート・リサーチ（Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ）』、第１２６巻、第１２５乃至１５６頁（１９８４年）で報告している標準物質、α−Ｄ−グルコピラノースの化学シフトより、各炭素を帰属し、本物質はＯ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシドで構成される糖質であると判断される。さらに、分子量、構成糖分析などの結果から、グルコースからなる四糖であり、２４個の炭素の半分の¹³Ｃシグナルを示したので、本物質は点対照的構造、すなわち、Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシドの構造を有しているものと判断される。
以上の結果から、本物質の化学構造は図１のようにも示すことができる。
【００３８】
この構造から、本物質をα−イソマルトシル α−イソマルトシドと命名する。
【００３９】
本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドと同様にして得られたα−イソマルトシル α−グルコシド、及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドは、その性質及び分析結果から、それぞれ、Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル α−Ｄ−グルコピラノシド、及びＯ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル α−Ｄ−グルコピラノシドであると判断される。これら物質の化学構造は図２及び図３のように示すことができる。
【００４０】
【実験３ メイラード反応】
実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシド１０％と、グリシン１％と、５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）とを含む溶液を１００℃で９０分間保ち、冷却後、この溶液の４８０ｎｍ、１ｃｍセルにおける吸光度を測定した。また、実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも同様に試験した。比較例として、トレハロース、イソマルトース、イソマルトトリオース、イソマルトテトラオースを用いて同様に試験した。結果を表１に示す。
【００４１】
【表１】

【００４２】
表１の結果から明らかなように、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドは、メイラード反応による着色度は極めて低く、同じ重合度の還元性糖質であるイソマルトテトラオースの着色度の３％程度であり、トレハロースと同様、メイラード反応を実質的に示さない糖質であることが判明した。同時に試験したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドもα−イソマルトシル α−イソマルトシドと同様、メイラード反応を示さない糖質であることが判明した。
【００４３】
【実験４ 消化試験】
実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシドを用いて、岡田等が『日本栄養・食糧学会誌』、第４３巻、第１号、第２３乃至２９頁（１９９０年）で報告している方法に準じて、生体外（インビトロ）での消化試験を行ない、そのα−イソマルトシル α−イソマルトシドの消化の程度を分解率（全糖に対するグルコースの割合）により調べた。また、実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも同様に試験した。比較例として、マルトース、トレハロース及びイソマルトースを用いて同様に試験した。結果を表２に示す。
【００４４】
【表２】

【００４５】
表２の結果から明らかなように、比較例のマルトース及びイソマルトースが主として小腸粘膜酵素でよく分解を受けるのに対し、本発明のα−イソマルトシルα−イソマルトシドは、主として小腸粘膜酵素によりわずかしか分解を受けないことから、経口摂取した場合、その大部分が大腸に到達するものと判断される。α−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも、小腸粘膜酵素による分解率に多少の差が見られるものの、実質的にはα−イソマルトシル α−イソマルトシドと同様、消化性の低い糖質、換言すれば、低カロリー糖質と判断される。
【００４６】
【実験５ 腸内細菌による資化性試験】
実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシドを用いて、光岡知足著、『腸内菌の世界（嫌気性菌の分離と同定）』、第３２５頁、叢文社（１９８４年）に記載されているＰＹＦ培地及びＰＹＦ培地に糖を０．５ｗ／ｖ％を添加した加糖ＰＹＦ培地で３７℃で９６時間嫌気培養を行ない、この培養液を５倍希釈し、その濁度（１ｃｍセルでの７５０ｎｍにおける吸光度）から腸内細菌の生育度を求め、その資化性の良否を判定した。また、実験１で調製したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも同様に試験した。また、比較例として、グルコース、トレハロース及びイソマルトースを用いて同様に試験した。判定基準は、表３に、結果は表４及び表５に示した。
【００４７】
【表３】

【００４８】
【表４】

【表５】

【００４９】
表４及び表５の結果から明らかなように、比較例のグルコース及びトレハロースとは違って、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドは、ビフィドバクテリウムによる選択的資化性が高く、同様にα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドもビフィドバクテリウムによる選択的資化性の高い糖質であることが判明した。実験４の結果と合わせ考えると、α−イソマルトシル α−イソマルトシドは、α−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドとともに、経口摂取により、その大部分は大腸に到達し、ビフィズス菌増殖促進剤として機能しうるものと判断される。
【００５０】
【実験６ 生体内でのビフィズス菌増殖促進作用に及ぼす影響】
被験者５名（男性、平均年齢４０．６才、平均体重６２．２ｋｇ）が、α−イソマルトシル α−イソマルトシド又はα−イソマルトシル α−グルコシドを毎日１回、昼食時に１０ｇを熱いスープに溶解して摂取し、これを１４日間続けた。実験順序は、α−イソマルトシル α−イソマルトシド摂取実験の後、１４日間のコントロール期間を設け、次いで、α−イソマルトシル α−グルコシドの摂取実験をした。摂取前と１４日間摂取後の１日当たりの糞便重量、糞便重量相対変化、糞便ｐＨ、糞便グラム当たりの総菌数、総菌数に占めるビフィズス菌の割合、並びに総ビフィズス菌数の相対変化を求め、被験者５名の平均値を算出した。この内、総菌数は、光岡知足著、『腸内菌の世界（嫌気性菌の分離と同定）』、第５３乃至６５頁、叢文社（１９８４年）に記載される方法に従って測定した。すなわちＭ１０培地を除く１３種の培地を使用して、出現したコロニーがいずれの菌群（属）に属するかの判定並びに菌数の測定を行った。各菌群の菌数は、最も高い菌数を与えた培地での菌数を真の菌数とした。このようにして得られた各菌群の菌数の総計を糞便の総菌数とした。総菌数に占めるビフィズス菌（ビフィドバクテリウム属）の割合（％）は、ビフィズス菌の菌数を総菌数で除した値に１００を乗じて求めた。総ビフィズス菌数の相対変化は、糞便グラム当たりのビフィズス菌の菌数に糞便重量を乗じた値を求め、摂取前の総ビフィズス菌の菌数を１００とし、１４日間摂取後の総ビフィズス菌の菌数を相対値で示した。糞便重量、糞便ｐＨと糞便中総ビフィズス菌数の変化を表６にまとめた。
【００５１】
【表６】

【００５２】
表６の結果から明らかなように、α−イソマルトシル α−イソマルトシド又はα−イソマルトシル α−グルコシドを摂取することによって、摂取前より１日当たりの糞便重量が増加し、糞便グラム当たりのビフィズス菌数が増加し、総菌数に占めるビフィズス菌数の割合が約２倍に高まり、総ビフィズス菌数においては、約２．３乃至２．５倍もの増加が見られ、糞便ｐＨにおいては約０．６乃至０．８の低下が見られることが判明した。α−イソマルトトリオシル α−グルコシドを、α−イソマルトシル α−イソマルトシド及びα−イソマルトシルα−グルコシドと同様に経口摂取試験したところ、消化管で消化されにくく、その大部分は大腸に到達し、同様にビフィズス菌増殖促進効果を発揮することが判明した。
【００５３】
【実験７】
う蝕誘発菌による酸生成
実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシドを用いて、竹内が『歯科基礎医学会雑誌』、第２６巻、第６９８乃至７１３頁（１９８４年）で報告している方法に準じて、う蝕誘発菌であるストレプトコッカス・ソブリヌス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｓｏｂｒｉｎｕｓ）ＡＴＣＣ２７３５１によって酸発酵を受けるかどうかを調べた。
【００５４】
ステファン緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した生菌５０％ｗ／ｖ懸濁液と、同緩衝液に溶解した０．０２Ｍ濃度の試験糖質溶液とを混合し、３７℃で振とうし、そのｐＨを経時的に測定した。また、実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも同様に試験した。比較例として、蔗糖、トレハロース及びイソマルトースを用いて同様に試験した。結果を表７に示した。
【００５５】
【表７】

【００５６】
表７の結果から明らかなように、蔗糖では、ｐＨが急激に低下し、トレハロースでは遅れて低下し、イソマルトースではわずかに低下したのに対し、α−イソマルトシル α−イソマルトシドは、ほとんどｐＨ低下を示さず、実質的に酸発酵を受けないことが判明した。α−イソマルトシル α−グルコシド、α−イソマルトトリオシル α−グルコシドも同様に実質的に酸発酵を受けないことが判った。
【００５７】
【実験８】
う蝕誘発菌のグルコシルトランスフェラーゼによる不溶性グルカン合成の阻害
実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシドを用いて、竹内が『歯科基礎医学会雑誌』、第２６巻、第６９８乃至７１３頁（１９８４年）で報告している方法に準じて、ストレプトコッカス・ソブリヌス ＡＴＣＣ２７３５１のグルコシルトランスフェラーゼによる蔗糖からの不溶性グルカン合成に対する影響を調べた。
【００５８】
濃度１％ｗ／ｖの蔗糖溶液１ｍｌ、濃度１％ｗ／ｖの試験糖質溶液１ｍｌ及び０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）１．５ｍｌからなる混液に、０．５ｍｌの粗グルコシルトランスフェラーゼ標品（総蛋白質量として１０ｍｇを含む）を加え、３０度の仰角で固定した小試験管内で、３７℃、１６時間反応させた。その反応液を他の試験管に静かに移した後、残存する管壁付着物を４ｍｌの水で温和に洗浄し、その洗液を反応液と合わせ、これを更に遠心分離して得られる沈澱物を非付着グルカンとした。また、反応試験管に残存する管壁付着物を付着グルカンとした。付着及び非付着グルカン生成量は、それぞれアンスロン硫酸法で定量し、両グルカン生成量の合計を不溶性グルカン生成量とした。試験糖質溶液の代わりに水を使用した反応系、換言すれば蔗糖のみの反応系を対照とし、不溶性グルカン生成阻害率は、対照の不溶性グルカン生成量に対する試験糖質反応系の不溶性グルカン生成量の百分率を１００から減じて求めた。実験１の方法で調製したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも同様に試験した。比較例として、トレハロース及びイソマルトースを用いて同様に試験した。結果を表８に示した。
【００５９】
【表８】

【００６０】
表８の結果から明らかなように、α−イソマルトシル α−イソマルトシドは、蔗糖のみ（対照）と比較すると、非付着グルカン、付着グルカンともにその生成量が顕著に少なく、また比較例のイソマルトースと同様、不溶性グルカン生成をトレハロースよりも強く阻害することが判明した。また、同時に試験したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドも、α−イソマルトシル α−イソマルトシドと同程度か、あるいはそれ以上の強い不溶性グルカン生成阻害を示すことが判明した。
【００６１】
以上の結果を実験７の結果とあわせて考えると、α−イソマルトシル α−イソマルトシドは、α−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドとともに、う蝕誘発菌により酸発酵を受けず、またう蝕誘発菌による蔗糖からの不溶性グルカン生成を阻害し、加えて平滑面への付着を強く防止するので、蔗糖と併用される場合、蔗糖の持つう蝕作用を積極的に阻害する効果を有する糖質であって、う蝕抑制剤として好適であると判断される。
【００６２】
【実験９ 急性毒性試験】
マウスを使用して、実験１において調製したα−イソマルトシル α−イソマルトシド標品を経口投与して急性毒性試験を行った。その結果、投与可能な最大投与量においても死亡例は認められなかった。従って、そのＬＤ₅₀値は、５０ｇ／ｋｇ以上であって、α−イソマルトシル α−イソマルトシドは極めて低毒性の物質である。また、実験１で調製したα−イソマルトシル α−グルコシド及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを同様に試験したところ、それらのＬＤ₅₀値は、５０ｇ／ｋｇ以上であって、いずれも極めて低毒性の物質である。
【００６３】
以下、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドの製造方法を実施例Ａで、α−イソマルトシル α−イソマルトシドを含有せしめた組成物を実施例Ｂで示す。
【００６４】
【実施例Ａ−１】
トレハロース１重量部及びデキストリン（ＤＥ１８、松谷化学工業株式会社製、商品名パインデックス＃４）１重量部を水２．５重量部に加熱溶解し、この溶液を温度６０℃、ｐＨ５．５にして、アスペルギルス・ニガー由来のα−グルコシダーゼを固形物グラム当たり５単位加えて２０時間反応させ、次いで、９５℃で３０分間保持して酵素を失活させた。本溶液を常法に従って、活性炭にて脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、濃縮して、濃度７５％のα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップを固形物当たり、約９２％の収率で得た。
【００６５】
本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約５％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約２１％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約７％含有しており、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００６６】
【実施例Ａ−２】
実施例Ａ−１の方法で得た反応液を精製し、濃度５０％に濃縮して原糖液とし、α−イソマルトシル α−イソマルトシドの含量を高めるため、実験１の方法に準じてナトリウム型強酸性カチオン交換樹脂『ＸＴ−１０１６』を用いたイオン交換カラムクロマトグラフィーを行った。樹脂を内径５．４ｃｍのジャケット付ステンレス製カラム４本に充填し、直列につなぎ、樹脂層全長２０ｍとした。
【００６７】
カラム内温度６０℃に維持しつつ、糖液を樹脂に対して、５ｖ／ｖ％加え、これに６０℃の温水をＳＶ０．１５で流して分画し、マルトース、グルコースなどの夾雑糖類を除去し、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有画分を採取した。更に、精製、濃縮し、真空乾燥し、粉砕して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末を固形物当たり、約２５％の収率で得た。
【００６８】
本品は、α−イソマルトシル α−イソマルトシドを約２０％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約３２％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約２８％含有しており、低い還元性、まろやかで上品な甘味を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００６９】
【実施例Ａ−３】
１０％馬鈴薯澱粉乳に最終濃度０．１％となるように炭酸カルシウムを加えた後、ｐＨ６．０に調整し、これにα−アミラーゼ（ナガセ生化学工業株式会社製、商品名『スピターゼＨＳ』）を澱粉グラム当たり０．１％加えて、攪拌下加熱し、糊化、液化させ、ただちにオートクレーブ（１２０℃）を２０分間行った後、温度４０℃、ｐＨ６．５に調整した。これにイソアミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を澱粉グラム当たり５００単位、本出願人が特願平６−７９２９１号明細書で開示したアルスロバクター・スピーシーズ（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｑ３６（寄託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−４３１６）由来の非還元性糖質生成酵素を３単位及び同菌株由来のトレハロース遊離酵素を１５単位加えて、１２時間反応させ、トレハロース約５５％を含む糖液を得た。次いで、９５℃に３０分間保持して酵素を失活させた後、固形物濃度４５％になるまで濃縮し、更に、温度６０℃、ｐＨ５．０にして、キャンディダ・トロピカリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ）ＩＦＯ０５８９由来のα−グルコシダーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を固形物当たり３単位加えて、２４時間反応させた。本反応液を９５℃で３０分間保持して酵素を失活させた後、常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して濃度約７５％のα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップを固形物当たり、約９５％の収率で得た。
【００７０】
本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約３％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約２０％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約５％含有しており、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００７１】
【実施例Ａ−４】
３０％とうもろこし澱粉乳に最終濃度０．１％となるように炭酸カルシウムを加えた後、ｐＨ６．５に調整し、これにα−アミラーゼ（ノボ社製、商品名『ターマミール６０Ｌ』）を澱粉グラム当たり０．２％加え、攪拌下加熱し、糊化、液化させ、ただちにオートクレーブ（１２０℃）を２０分間行った後、５５℃に冷却し、これにイソアミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を澱粉グラム当たり５００単位及びβ−アミラーゼ（ナガセ生化学工業株式会社製）を澱粉グラム当たり３０単位の割合になるように加え、４８時間反応させ、マルトース含量約８４％の糖液を得た。この反応液を９５℃で３０分間加熱した後、温度６０℃、ｐＨ７．０に調整し、これに本出願人が特願平６−１４４０９２号明細書で開示したサーマス・アクアティカス（Ｔｈｅｒｍｕｓ ａｑｕａｔｉｃｕｓ）ＡＴＣＣ３３９２３由来のマルトース・トレハロース変換酵素を澱粉グラム当たり１単位の割合になるよう加え、２４時間反応させ、トレハロースを約５０％含む糖液を得た。その反応液をｐＨ５．５に調整し、アスペルギルス・ニガー由来のα−グルコシダーゼを固形物グラム当たり３単位加えて６０℃、２４時間反応させた。次いで、９５℃で３０分間保持して酵素を失活させた後、常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮、真空乾燥、粉砕して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド含有粉末を固形物当たり、約９０％の収率で得た。
【００７２】
本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約４％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約２０％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約６％含有しており、低還元性、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００７３】
【実施例Ａ−５】
３０％馬鈴薯澱粉乳に最終濃度０．１％となるように炭酸カルシウムを加え、ｐＨ６．５に調整し、これにα−アミラーゼ（ナガセ生化学工業株式会社製、商品名『スピターゼＨＳ』）を澱粉グラム当たり０．０１％加え、攪拌下加熱し、糊化、液化させ、ただちにオートクレーブ（１２０℃）を５分間行った後、５５℃に冷却し、ＤＥ１未満の液化澱粉液を得、ｐＨ７．０に調整し、プルラナーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）及びマルトテトラオース生成アミラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）をそれぞれ澱粉グラム当たり１５０単位及び８単位の割合で加え、５０℃で３６時間反応させた。本反応液を９５℃で３０分間加熱し、次いで４５℃に冷却し、これに本出願人がヨーロッパ特許出願公開０６０６７５３Ａ２号公報で開示したリゾビウム・スピーシーズ（Ｒｈｉｚｏｂｉｕｍｓｐ．）Ｍ−１１（寄託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−４１３０）由来の非還元性糖質生成酵素を澱粉グラム当たり２単位加え６４時間反応させた後、温度６０℃、ｐＨ５．０に調整して、キャンディダ・トロピカリス ＩＦＯ０５８９由来のα−グルコシダーゼを澱粉グラム当たり３単位の割合になるように加え、２４時間反応させた。その反応液を、９５℃で３０分間保持して酵素を失活させた後、常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮、真空乾燥、粉砕して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド含有粉末を固形物当たり約９０％の収率で得た。
【００７４】
本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約４％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約１８％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約５％含有しており、低還元性、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００７５】
【実施例Ａ−６】
３０％とうもろこし澱粉乳に最終濃度０．１％となるように炭酸カルシウムを加えた後、ｐＨ６．５に調整し、これにα−アミラーゼ（ノボ社製、商品名『ターマミール６０Ｌ』）を澱粉グラム当たり０．３％加え、攪拌下加熱し、糊化、液化させ、ただちにオートクレーブ（１２０℃）を３０分間行った後、５５℃に冷却し、ＤＥ約４の液化澱粉液を得、これにアルスロバクター・スピーシーズＱ３６由来の非還元性糖質生成酵素を澱粉グラム当たり４単位、イソアミラーゼを澱粉グラム当たり３００単位及びシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（株式会社林原生物化学研究所製）を澱粉グラム当たり５単位の割合になるように加え、ｐＨ６．３、温度４５℃で４８時間反応させた。本反応液を、９５℃で３０分間加熱した後、温度５５℃、ｐＨ５．５に調整し、これにβ−アミラーゼを澱粉グラム当たり１０単位加えて、１６時間反応させ、９５℃で３０分間保持して酵素を失活させた後、６０℃に冷却し、アスペルギルス・ニガー由来のα−グルコシダーゼを固形物グラム当たり３単位加えて、２４時間反応させた。その反応液を、９５℃で３０分間保持して酵素を失活させた後、常法に従って活性炭で脱色、濾過し、Ｈ型及びＯＨ型イオン交換樹脂により脱塩して精製し、更に濃縮して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップを固形物当たり約９５％の収率で得た。
【００７６】
本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約２％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約１８％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約３％含有しており、低還元性、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００７７】
【実施例Ａ−７】
実施例Ａ−１の方法で得た反応液を、常法に従って、精製し、濃縮した濃度５０％のシラップをオートクレーブに入れ、ラネーニッケル１０％を添加し、撹拌しながら濃度を９０乃至１２０℃に上げ、水素圧を２０乃至１２０ｋｇ／ｃｍ²に上げて水素添加を完了させ、次いで、ラネーニッケルを除去し、脱色、脱塩して精製し、濃縮して、濃度７０％のシラップを固形物当たり８０％の収率で得た。本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約５％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約２１％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約７％とともに糖アルコールを含有しており、還元性を示さず、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用てきる。
【００７８】
【実施例Ａ−８】
実施例Ａ−２の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有画分を、常法に従って、精製し、濃縮した濃度５０％のシラップを実施例Ａ−７の方法に準じて、水素添加し、精製、濃縮、真空乾燥、粉砕して、α−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末を、固形物当たり約７０％の収率で得た。本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約２０％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約３２％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約２８％とともに糖アルコールを含有しており、還元性を示さず、まろやかで上品な甘味を有し、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００７９】
【実施例Ａ−９】
実施例Ａ−５の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド生成反応液を、常法に従って、精製し、濃縮した濃度５０％のシラップを、実施例Ａ−７の方法に準じて、水素添加し、精製、濃縮して、濃度約７０％のシラップを固形物当たり約８０％の収率で得た。本品は、固形物当たりα−イソマルトシル α−イソマルトシドを約４％、α−イソマルトシル α−グルコシドを約１８％及びα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを約５％とともに糖アルコールを含有しており、還元性を示さず、温和な甘味、適度の粘度、保湿性を有し、甘味料、呈味改良剤、安定剤、賦形剤などとして、各種飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用てきる。
【００８０】
【実施例Ｂ−１ 甘味料】
実施例Ａ−２の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末１重量部に、α−グリコシルステビオシド（東洋精糖株式会社製、商品名『αＧスイート』）０．０１重量部及びＬ−アスパルチル−Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル（商品名『アスパルテーム』）０．０１重量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて、顆粒状甘味料を得た。本品は、甘味の質が優れ、蔗糖の約２．５倍の甘味度を有し、甘味度当たりのカロリーは、蔗糖の約１／２．５に低下している。本甘味料は、それに配合した高甘味度甘味物の分解もなく、安定性に優れており、低カロリー甘味料として、カロリー摂取を制限している肥満者、糖尿病者などのための低カロリー飲食物などに対する甘味付けに好適である。また、本甘味料は、ビフィズス菌増殖促進作用、ミネラル吸収促進作用を有し、健康食品として好適であり、更には、う蝕誘発菌による酸の生成が少なく、不溶性グルカンの生成も少ないことより虫歯を抑制する飲食物などに対する甘味付けにも好適である。
【００８１】
【実施例Ｂ−２ ハードキャンディー】
濃度５５％蔗糖溶液１００重量部に実施例Ａ−１の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップ３０重量部を加熱混合し、次いで減圧下で水分２％未満になるまで加熱濃縮し、これにクエン酸１重量部及び適量のレモン香料と着色料とを混和し、常法に従って成型し、製品を得た。本品は、歯切れ、呈味良好で、蔗糖の晶出も起こらない高品質のハードキャンディーである。また、本品は低う蝕性のハードキャンディーである。
【００８２】
【実施例Ｂ−３ チューインガム】
ガムベース３重量部を柔らかくなる程度に加熱溶融し、これに結晶マルチトール粉末３重量部及び実施例Ａ−８の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末４重量部とを加え、更に適量の香料と着色料とを混合し、常法に従って、ロールにより練り合わせ、成形、包装して製品を得た。本品はテクスチャー、風味とも良好なチューインガムである。また、本品は、難う蝕性チューインガムとして好適である。
【００８３】
【実施例Ｂ−４ 野菜ジュース】
トマトジュースを主体とした野菜ジュース１，０００重量部に、実施例Ａ−９の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップ１０重量部及びプルラン（分子量約１０，０００）５重量部を溶解し、常法に従って加熱殺菌し、缶詰して製品を得た。本品は、野菜ジュース本来のビタミン、ミネラルに加えて、ビフィズス菌増殖促進糖質を含有していることから、ビフィズス菌増殖促進作用、ミネラル吸収促進作用を有し、健康飲料として好適である。
【００８４】
【実施例Ｂ−５ カスタードクリーム】
コーンスターチ１００重量部、実施例Ａ−３の方法で得たα−イソマルトシルα−イソマルトシド含有シラップ１００重量部、マルトース８０重量部、蔗糖２０重量部及び食塩１重量部を充分に混合し、鶏卵２８０重量部を加えて攪拌し、これに沸騰した牛乳１，０００重量部を徐々に加え、更に、これを火にかけて攪拌を続け、コーンスターチが完全に糊化して全体が半透明になった時に火を止め、これを冷却して適量のバニラ香料を加え、計量、充填、包装して製品を得た。本品は、なめらかな光沢を有し、温和な甘味で美味である。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進作用、ミネラル吸収促進作用を有し、健康食品として好適である。
【００８５】
【実施例Ｂ−６ ういろうの素】
米粉９０重量部に、コーンスターチ２０重量部、蔗糖４０重量部、実施例Ａ−４の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有粉末８０重量部及びプルラン４重量部を均一に混合してういろうの素を製造した。ういろうの素と適量の抹茶と水とを混練し、これを容器に入れて６０分間蒸し上げて抹茶ういろうを製造した。本品は、照り、口当たりも良好で、風味も良い。また、澱粉の老化も抑制され、日持ちも良い。
【００８６】
【実施例Ｂ−７ 加糖練乳】
原乳１００重量部に実施例Ａ−７の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップ３重量部及び蔗糖１重量部を溶解し、プレートヒーターで加熱殺菌し、次いで濃度７０％に濃縮し、無菌状態で缶詰して製品を得た。本品は、温和な甘味で、風味もよく、乳幼児食品、フルーツ、コーヒー、ココア、紅茶などの調味用に有利に利用できる。また、本品は、ビフィズス菌増殖促進作用、ミネラル吸収促進作用を有し、健康食品として好適である。
【００８７】
【実施例Ｂ−８ 化粧用クリーム】
モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２重量部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５重量部、実験１の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末２重量部、α−グリコシルルチン１重量部、流動パラフィン１重量部、トリオクタン酸グリセリン１０重量部及び防腐剤の適量を常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２重量部、１，３−ブチレングリコール５重量部及び精製水６６重量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合しクリームを製造した。本品は、安定性に優れ、高品質の日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして有利に利用できる。
【００８８】
【実施例Ｂ−９ 固体製剤】
天然型ヒトインターフェロン−α標品（株式会社林原生物化学研究所製）を、常法に従って、固定化抗ヒトインターフェロン−α抗体カラムにかけ、該標品に含まれる天然型ヒトインターフェロン−αを吸着させ、安定剤である牛血清アルブミンを素通りさせて除去し、次いで、ｐＨを変化させて、天然型ヒトインターフェロン−αを実験１の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末を５％含有する生理食塩水を用いて溶出した。本液を精密濾過し、約２０倍量の無水結晶マルトース粉末（株式会社林原製、商品名『ファイントース』）に加えて脱水、粉末化し、これを打錠機にて打錠し、１錠（約２００ｍｇ）当たり天然型ヒトインターフェロン−αを約１５０単位含有する錠剤を得た。本品は、舌下錠などとして、一日当たり、大人１乃至１０錠程度が経口的に投与され、ウイルス性疾患、アレルギー性疾患、リューマチ、糖尿病、悪性腫瘍などの治療に有利に利用できる。とりわけ、近年、患者数の急増しているエイズ、肝炎などの治療剤として有利に利用できる。本品は、α−イソマルトシル α−イソマルトシドと共にマルトースが安定剤として作用し、室温で放置してもその活性を長期間よく維持する。
【００８９】
【実施例Ｂ−１０ 錠剤】
実施例Ａ−２の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末２０重量部、含水結晶トレハロース３０重量部、乳酸カルシウム１重量部、シュガーエステル１重量部及び適量の粉末香料を均一に混合した後、常法に従って、１錠約３５０ｍｇになるように打錠機にて打錠し錠剤を得た。本品は、ひび割れもなく安定性良好な飲みやすい錠剤で、成人１日当たり、約１乃至４０錠、望ましくは、約２乃至２０錠摂取することによりビフィズス菌増殖促進作用を有し、また、大腸内で有機酸を生成してｐＨを下げ、カルシウムの吸収促進などに有利に利用できる。
【００９０】
【実施例Ｂ−１１ 錠剤】
実施例Ａ−４の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有粉末２０重量部、ラクトスクロース含有粉末（登録商標『乳果オリゴ』、株式会社林原商事販売）１０重量部、ラクトース２０重量部、第三リン酸カルシウム１重量部、乳酸カルシウム１重量部、シュガーエステル１重量部、粉末食用色素適量及び粉末香料適量を均一に混合した後、常法に従って、１錠約６８０ｍｇになるように打錠機にて打錠し製品を得た。本品は、錠剤タイプのビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤として有利に利用できる。本品を、成人１日当たり約１乃至４０錠、望ましくは、約２乃至２０錠摂取することにより、ビフィズス菌の増殖を促進し、カルシウムの吸収を促進する。
【００９１】
【実施例Ｂ−１２ 栄養剤】
無水結晶マルトース４８０重量部、乾燥卵黄１９０重量部、脱脂粉乳２０９重量部、実施例Ａ−２の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有粉末１１５重量部、塩化ナトリウム４．４重量部、塩化カリウム１．８５重量部、硫酸マグネシウム４重量部、チアミン０．０１重量部、アスコルビン酸ナトリウム０．１重量部、ビタミンＥアセテート０．６重量部及びニコチン酸アミド０．０４重量部からなる配合物を調製し、この２５ｇずつを、ラミネートアルミ製小袋に充填し、ヒートシールして、用時溶解タイプの栄養剤を得た。本品は、低温貯蔵の必要もなく、室温下で長期間安定であり、その上、溶解性、分散性に優れている。本品は、１袋分を約１５０乃至３００ｍｌの温水に溶解して、経口又は経管方法により、鼻腔、食堂、胃などから摂取することにより、栄養補給とともにビフィズス菌増殖促進作用、ミネラル吸収促進作用を発揮し、患者の回復を促進する。特に大腸内でビフィズス菌の増殖を促進し、ｐＨを低下し、腐敗物質などによる有害物質の産生を抑制する。また、糞便量を増大し、患者に起こりがちな便秘を予防することができる。なお、本品は、ヒトのみならず、家畜のための経口摂取又は経管摂取用ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤としても有利に利用できる。
【００９２】
【実施例Ｂ−１３ 栄養剤】
無水結晶トレハロース１４．５重量部、蔗糖４．０５重量部、粉末うんしゅう果汁３．２重量部、実施例Ａ−５の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有粉末３．０重量部、クエン酸０．１１重量部、アスコルビン酸０．０２重量部及び粉末オレンジ香料０．１重量部からなる配合物を調製し、この４００ｇずつをねじ蓋式缶に充填密封して、用時溶解タイプの栄養剤を製造した。本品は、実施例Ｂ−１２と同様に安定性、溶解性が良好である。本品は、約２５ｇを約１００乃至１５０ｍｌの温水に溶解して、実施例Ｂ−１２と同様に経口又は経管方法により摂取することにより、栄養補給とともにビフィズス菌増殖促進作用、ミネラル吸収促進を発揮し、患者の回復を促進する。また、蔗糖の持つう蝕性を低減させた栄養剤としても有利に利用できる。
【００９３】
【実施例Ｂ−１４ 配合飼料】
粉麩４０重量部、脱脂粉乳３８重量部、実施例Ａ−５の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有粉末１２重量部、ビタミン剤１０重量部、魚粉５重量部、第二リン酸カルシウム５重量部、液状油脂３重量部、炭酸カルシウム３重量部、食塩２重量部及びミネラル剤２重量部を混合して配合飼料を製造した。本品は、嗜好性の向上した家畜、家禽などの飼料であって、とりわけ、子豚用飼料として好適である。また、本品は、ビフィズス菌増殖作用、ミネラル吸収作用を有し、飼育動物の感染予防、下痢予防、食欲増進、糞便の悪臭抑制などに有利に利用できる。更に、本品は、必要に応じて、他の飼料材料、例えば、穀類、小麦粉、澱粉、油粕類、糠糖類などの濃厚飼料材料や、ワラ、乾草、バガス、コーンコブなどの粗飼料材料などを併用して、他の配合飼料にすることもできる。
【００９４】
【実施例Ｂ−１５ 練歯磨】
第二リン酸カルシウム４５重量部、プルラン２．９５重量部、ラウリル硫酸ナトリウム１．５重量部、グリセリン２０重量部、ポリオキシエチレンソルビタンラウレート０．５重量部、防腐剤０．０５重量部、実施例Ａ−６の方法で得たα−イソマルトシル α−イソマルトシド含有シラップ１５重量部、スクロース５重量部及び水１０重量部を常法に従って混合し、練歯磨を得た。本品は、適度の甘味を有しており、特に子供用練歯磨として好適である。
【００９５】
【発明の効果】
上記から明らかなように、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドは非還元性オリゴ糖で、極めて安定であり、また、良質で温和な甘味を有している。経口摂取により一部は消化吸収されカロリー源となるが、その大部分は大腸に到達し、ビフィズス菌を選択的に増殖させうる糖質である。また、本糖質はビフィズス菌により有機酸を生成して大腸内のｐＨを下げ、カルシウム、鉄などの欠乏し易いミネラルの溶解性を高め、吸収を促進する。更に、本糖質はう蝕誘発菌などによって発酵されにくく、う蝕誘発菌による蔗糖からの不溶性グルカンの合成を阻害し、歯垢形成を抑え、虫歯を抑制する。
【００９６】
また、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドは、化学的に安定であり、褐変反応を起こし易いアミノ酸、オリゴペプチド、更には、有効成分、活性の失われやすい生理活性物質などを安定化し得る性質を有している。加えて、浸透圧調節性、賦活性、照り付与性、保湿性、粘性、他糖の晶出防止、難発酵性、澱粉の老化防止性などの性質を有している。これら諸性質は、甘味料、呈味改良剤、品質改良剤、安定剤、賦形剤などとして、飲食物、化粧品、医薬品など各種組成物に有利に利用できる。更に本品は、ビフィズス菌増殖促進剤、ミネラル吸収促進剤、う蝕抑制剤などとしても有利に利用できる。
【００９７】
従って、本発明のα−イソマルトシル α−イソマルトシドとその製造方法並びに用途の確立は、食品、化粧品、医薬品分野における工業的意義が極めて大きい。
【図面の簡単な説明】
【図１】α−イソマルトシル α−イソマルトシドの構造を示す図である。
【図２】α−イソマルトシル α−グルコシドの構造を示す図である。
【図３】α−イソマルトトリオシル α−グルコシドの構造を示す図である。[0001]
[Industrial application fields]
The present invention relates to a novel non-reducing saccharide, its production method and use, more specifically, O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl O-α-D-glucopyranosyl- ( 1 → 6) α-Isomaltosyl represented by α-D-glucopyranoside, α-isomaltoside, a production method thereof, and use thereof.
[0002]
[Prior art]
Trehalose (α, α-trehalose) is a non-reducing disaccharide having glucose as a constituent sugar, and is present in a wide range of nature such as mold, yeast, bacteria, mushrooms, higher plants, insects and the like in small amounts. Because trehalose is non-reducing, it does not cause Maillard reaction (aminocarbonyl reaction) with substances having amino groups such as amino acids and proteins, and does not damage amino acid-containing substances, and is itself a stable carbohydrate. It can be used and processed without worrying about browning and deterioration, and a wide range of uses has been expected. As an example of its use, JP-A-63-240758 discloses that trehalose is a bifidobacteria proliferating saccharide and a low carious saccharide. In subsequent studies, although their actions are superior to sucrose, they are relatively small and the development of better carbohydrates is desired.
[0003]
On the other hand, isomaltoligosaccharides such as isomaltotriose (also known as dextrantriose) and isomalttetraose (also known as dextrantetraose) are “Chemical & Pharmaceutical Bulletin”, Vol. 26. 3306 to 3311 (1978), which is known as a bifidobacteria proliferating saccharide and disclosed in Japanese Patent Publication No. 5-39584, Japanese Patent Publication No. 5-53465, and the like. As is known, it is also known as difficult caries carbohydrate or anti-cariogenic carbohydrate.
[0004]
However, isomaltoligosaccharides are reducing saccharides, and are susceptible to browning reaction with amino acids, and have the disadvantage of easily causing deterioration and deterioration in food processing, and further development of superior saccharides is desired. .
[0005]
The present inventors pay attention to these characteristics of trehalose and isomaltoligosaccharide, and in the oligosaccharide having both trehalose structure and isomaltose structure, it is non-reducing and excellent in selective growth of bifidobacteria, The study was started with strong expectation that an anti-cariogenic carbohydrate exists. For oligosaccharides having both a trehalose structure and an isomaltose structure, see, for example, Sakasomyces Spices, in “Carbohydrate Research”, Volume 199, pp. 227-234 (1990). O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D- by a condensation reaction from trehalose and glucose with (Saccharomyces sp.) Α-glucosidase or Rhizopus niveus glucoamylase. Glucopyranosyl α-D-glucopyranoside, α-isomaltosyl α-glucoside, has been reported, and Gold et al., “Starch Science”, 40, 349 (1993), Arthrobacter O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) is obtained from dextran and trehalose by the transglycosylation effect of ismaltodextranase of Arthrobacter globiformis T6. -Α-D-glucopyranosyl α-isomaltriosyl α-glucoside represented by α-D-glucopyranoside is reported. However, these reports do not disclose any carbohydrate characteristics that the present inventors expect, and other oligosaccharides having both a trehalose structure and an isomaltose structure are known. Turned out not to have been.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention establishes a novel carbohydrate having a trehalose structure and an isomaltose structure in the molecule, is non-reducing, excellent in promoting bifidobacteria growth, and has an anti-cariogenic activity, and provides its use. It is something to try.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have continued intensive studies on novel non-reducing carbohydrates and production methods thereof.
[0008]
As a result, O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranoside, a novel carbohydrate α-isomaltosyl It was found that α-isomaltoside is a non-reducing oligosaccharide, excellent in stability, and has a remarkable bifidobacteria growth promoting action and an anti-cariogenic action, thereby completing the present invention.
[0009]
The α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention can be chemically synthesized, but industrially, an α-glucosidase (EC3) is added to an aqueous solution containing a biochemical reaction, particularly trehalose and starch. It is advantageous to generate it by acting 2.1.20).
[0010]
Moreover, as an aqueous solution containing trehalose and starch used in the present invention, any one can be used as long as α-glucosidase acts to produce α-isomaltosyl α-isomaltside, and trehalose and starch are used as respective compounds. An aqueous solution containing a compound having both a trehalose structure and an α-1,4 glucoside-bonded starchy structure in the molecule can be advantageously used as well as the aqueous solution contained therein.
[0011]
When trehalose and starch are used as the respective compounds, commercially available trehalose may be used, and if necessary, a known method such as a bacterium having the ability to produce trehalose or extract from yeast. It may be prepared and used by separating it from the culture broth or by subjecting it to an enzymatic action on the starch described later. As the starch, for example, starch such as gelatinized starch, liquefied starch, soluble starch, malto-oligosaccharide or a partially decomposed product of starch can be used as appropriate. In the case of using a partially decomposed starch, it can be advantageously decomposed by acting a liquefying enzyme such as α-amylase or a starch debranching enzyme such as pullulanase or isoamylase on the starch.
[0012]
Further, as a method for simultaneously producing trehalose and starch, for example, as disclosed in Japanese Patent Application No. 5-156338, Japanese Patent Application No. 6-79291, etc. A non-reducing saccharide-forming enzyme and trehalose-releasing enzyme in an aqueous solution containing a maltose, or maltose as disclosed in Japanese Patent Application Nos. 5-199971 and 6-144092 A method of allowing a maltose / trehalose converting enzyme to act on an aqueous solution containing sucrose can be advantageously used.
[0013]
Next, when using a compound having both a trehalose structure and an α-1,4 glucoside-linked starch structure in the molecule, for example, the present applicant disclosed in European Patent Application Publication No. 06067553A2. A compound having a trehalose structure at the end of a molecule having a starch structure of α-1,4 glucoside bond by allowing a non-reducing saccharide-forming enzyme to act on an aqueous solution containing starch, As disclosed in Japanese Patent Application No. 5-178623, Japanese Patent Application No. 6-167486, etc., a non-reducing saccharide-forming enzyme, cyclomaltodextrin glucanotransferase and an aqueous solution containing starch To produce a compound having both a trehalose structure and an α-1,4 glucoside-linked starch structure inside the molecule.
[0014]
The α-glucosidase used in the present invention may be an enzyme capable of converting starch α-1,4 glucoside bond to α-1,6 glucoside bond. For example, Aspergillus niger, Aspergillus niger Aspergillus awamori, Aspergillus saitoi, Mucor javanicus, Penicillium crisogenum and Penicillium crisogenum, etc. it can.
[0015]
The conditions for the enzyme reaction may be any method that produces α-isomaltosyl α-isomaltoside. Usually, α-glucosidase is added to an aqueous solution containing trehalose and starch in an amount of 0.1 unit or more per gram starch, preferably 1 to 100 units may be allowed to act for 0.1 to 100 hours, preferably 1 to 70 hours under conditions selected from a temperature of 20 to 80 ° C. and a pH of 3 to 9. One unit of activity of α-glucosidase used in the present invention is defined as the amount of enzyme that produces 2 μmol of glucose per minute under the conditions of 40 ° C. and pH 5.5 using 0.2 w / v% maltose as a substrate. . As a result of this enzymatic reaction, α-isomaltosyl α-isomaltoside and α-isomaltosyl α-glucoside, α-isomaltotriosyl α-glucoside, and one to several α-glucosyl groups with α-1,6 bonds. Bound oligosaccharides such as α-isomaltotriosyl α-isomaltoside, α-isomaltotetraosyl α-isomaltoside, α-isomaltotriosyl α-isomaltotrioside and the like are produced. This reaction solution usually contains reducing sugars such as glucose, maltose, maltotriose, unreacted trehalose, starch and the like. When glucoamylase is allowed to act on this, α-isomaltosyl α-isomaltoside and α-isomaltosyl α-glucoside are accumulated and produced as non-reducing carbohydrates. From this, α-isomaltosyl α-isomaltoside may be collected. .
[0016]
Α-Isomaltosyl α-isomaltoside-containing solution produced by the enzyme reaction as described above usually contains 5 to 40 w / w% (hereinafter referred to as non-reducing oligosaccharides) having both a trehalose structure and an isomaltose structure per solid. In the present specification, unless otherwise specified, w / w% is abbreviated as%.) And α-isomaltosyl is contained in an amount of 1 to 5%, which is filtered and purified. It is optional to use in a liquid state, to concentrate and use in a syrup form, or to dry and use in a solid state.
[0017]
If necessary, in order to take advantage of α-isomaltosyl α-isomaltoside, the α-isomaltosyl α-isomaltoside production solution is further separated and purified to be used as a high α-isomaltosyl α-isomaltoside content. As the method, for example, a method of separating and removing contaminating saccharides by a yeast fermentation method, a membrane filtration method, a fractional precipitation method, an alkali treatment method, column chromatography or the like can be appropriately employed. In particular, by column chromatography using a salt-type strongly acidic cation exchange resin disclosed in JP-B-62-50477, JP-B-4-50319, etc., α-isomaltosyl α-isomaltoside is obtained by removing contaminating saccharides. The method of collecting the contained fraction can be advantageously carried out. At this time, it is optional to adopt any of a fixed floor method, a moving floor method, and a simulated moving floor method.
[0018]
If necessary, α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing saccharide is hydrogenated according to a conventional method, and reducing saccharides such as glucose and maltose contained therein are converted into sugar alcohols, and the reducing power is substantially eliminated. It is also advantageous to produce α-isomaltosyl-containing carbohydrates that do not exhibit reducing properties.
[0019]
The α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention is itself non-reducing, like α-isomaltosyl α-glucoside, α-isomaltotriosyl α-glucoside, etc., which are simultaneously produced by the enzyme reaction described above. Stable, low sweetness but good quality, mild sweetness, difficult to digest in the digestive tract by oral ingestion, most of it reaches the large intestine, and can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter . The selective growth of bifidobacteria produces organic acids such as acetic acid and lactic acid to lower the pH in the large intestine and suppress the growth of harmful bacteria such as bacteria and spoilage bacteria that cause spontaneous infections. It also suppresses the generation of harmful substances such as ammonia, indole and cresol produced by spoilage bacteria. In addition, it moderately stimulates the intestines, moderately promotes peristaltic movement, and exhibits an intestinal action. Bifidobacteria growth-promoting carbohydrates generate organic acids in the large intestine to lower the pH, increase the solubility of minerals that are easily deficient, such as calcium, iron, and zinc, and promote their absorption. It can also be advantageously used as an accelerator. Furthermore, it is difficult to be fermented by caries-inducing bacteria, inhibits the synthesis of insoluble glucan from sucrose by caries-inducing bacteria, and suppresses plaque formation, making it a sweetener that does not cause caries and as a caries inhibitor. Can also be used advantageously. In addition, it can stabilize amino acids and oligopeptides that are chemically stable and easily undergo a browning reaction with saccharides, as well as active ingredients and bioactive substances that tend to lose activity. It has properties such as irradiability, moisture retention, viscosity, anti-crystallization of other sugars, difficult fermentation, and anti-starch resistance.
[0020]
α-Isomaltosyl α-Isomaltosid, or α-Isomaltosyl α-Isomaltosyl together with α-Isomaltosyl α-Glucoside and / or α-Isomaltotriosyl These properties of α-Glucoside are food, drink, favorite food, feed, feed It can be advantageously used in various compositions such as in-mouth products, food and drink, and cosmetics and pharmaceuticals. In particular, it is advantageous to produce various compositions by containing these non-reducing oligosaccharides together with one or more components selected from sugar alcohols, minerals and sucrose.
[0021]
The α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing saccharide of the present invention and the high α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing product obtained by separation from the same can be used as a seasoning for sweetening as it is. If necessary, for example, flour, glucose, maltose, trehalose, sucrose, lactosucrose, isomerized sugar, honey, maple sugar, sorbitol, maltitol, lactitol, dihydrochalcone, stevioside, α-glycosyl stevioside, rebaudioside, glycyrrhizin, L-aspartyl-L-phenylalanine methyl ester, saccharin, glycine, alanine etc. may be used in admixture with one or more suitable amounts of other sweeteners, and if necessary, dextrin, starch It can also be used by mixing with a bulking agent such as lactose.
[0022]
Further, the α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing saccharide of the present invention and the α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powdered product obtained from the same can be used as they are or as necessary. It is also optional to mix with a binder or the like and form it into various shapes such as granules, spheres, short bars, plates, cubes, tablets.
[0023]
The sweetness of the α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing saccharide of the present invention and the α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich product obtained therefrom can be expressed in other ways such as acidity, salt to taste, astringency, umami, and bitterness. It is well harmonized with various substances having taste, and has high acid resistance and heat resistance. Therefore, it can be advantageously used for sweetening and taste improvement of general foods and drinks, and quality improvement.
[0024]
For example, soy sauce, powdered soy sauce, miso, powdered miso, moromi, hashio, sprinkle, mayonnaise, dressing, vinegar, three cups of vinegar, powdered sushi vinegar, Chinese element, tentsuyu, noodle soup, sauce, ketchup, takuanzuke, Chinese cabbage It can be advantageously used as various seasonings such as nori, yakiniku sauce, curry roux, stew, soup, dashi, compound seasoning, mirin, new mirin, table sugar, coffee sugar.
[0025]
In addition, for example, Japanese rice cakes such as rice crackers, hail, rice cakes, rice cakes, manju, oirou, chanterelles, sheep mushrooms, water sheep rice cakes, brocade balls, jelly, castella, rice cakes, bread, biscuits, crackers, cookies, pie , Pudding, butter cream, custard cream, cream puff, waffle, sponge cake, donut, chocolate, chewing gum, caramel, candy and other Western confectionery, ice cream, sherbet and other ice confectionery, fruit syrup pickled, syrup such as ice honey, flower Pastes such as paste, peanut paste, fruit paste, spread, fruit such as jam, marmalade, syrup pickles, sugar cane, processed foods of vegetables, pickles such as Fukujin pickles, bedara pickles, thousand pieces pickles, pickled pickles, hams, sausages, etc. Livestock meat products, fish Manufactured with fish products such as ham, fish sausage, kamaboko, chikuwa, tempura, various delicacies such as sea urchin, squid salted salt, vinegared konbu, sakisume, fugurin dried, seaweed, wild vegetables, sea urchin, small fish, shellfish, etc. Stewed food such as rutsuda boiled food, boiled beans, potato salad, konbu roll, dairy products, fish meat, livestock meat, fruit, bottled vegetables, canned foods, sake, synthetic liquor, liqueur, Western liquor, tea, coffee, cocoa , Juices, carbonated beverages, lactic acid beverages, soft drinks such as lactic acid bacteria beverages, pudding mixes, hot cake mixes, instant foods such as instant soups, instant soups, and various foods such as baby foods, therapeutic foods, and drinks It can be advantageously used for improving taste and improving quality.
[0026]
Moreover, it can also be used for the purpose of improving the palatability of feed, feed, etc. for domestic animals, poultry, and other domestic animals such as bees, cormorants and fish. In addition, tobacco, toothpaste, lipstick, lip balm, oral solution, tablets, troches, liver oil drops, mouth fresheners, mouth fragrances, gargles, etc. It can be advantageously used as a sweetener for various compositions, as a taste improver, a taste corrector, and as a quality improver.
[0027]
As the quality improver and stabilizer, it can be advantageously applied to various physiologically active substances that easily lose their active ingredients and activities, health foods containing them, pharmaceuticals, and the like. For example, interferon-α, interferon-β, interferon-γ, tsumore necrosis factor-α, tsumoa necrosis factor-β, macrophage migration inhibitory factor, colony stimulating factor, transfer factor, interleukin-2 and other lymphokine-containing liquids Such as insulin, growth hormone, prolactin, erythropoietin, egg cell stimulating hormone, placental hormone, etc., BCG vaccine, Japanese encephalitis vaccine, measles vaccine, polio vaccine, seedling, tetanus toxoid, hub antitoxin, human immunoglobulin, etc. Liquid containing biologics, liquid containing antibiotics such as penicillin, erythromycin, chloramphenicol, tetracycline, streptomycin, kanamycin sulfate, thiamine, riboflavin , L-ascorbic acid, liver oil, carotenoid, ergosterol, tocopherol and other vitamin-containing liquids, lipase, elastase, urokinase, protease, β-amylase, isoamylase, glucanase, lactase and other enzyme-containing liquids, ginseng extract, suppon extract , Chlorella extract, Aloe extract, propolis extract, and other bioactive substances such as viruses, lactic acid bacteria, yeast, and other biologically active substances such as royal jelly are stable and high-quality health without losing their active ingredients and activities. Foods and pharmaceuticals can be easily manufactured.
[0028]
The above-described methods for incorporating α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing carbohydrates or α-isomaltosyl-rich α-isomaltoside-containing substances that can be separated therefrom into the various compositions described above are included in the process until the product is completed. For example, known methods such as mixing, dissolution, melting, dipping, infiltration, spraying, coating, coating, spraying, pouring, and solidification are appropriately selected. The amount is usually 0.1% or more, preferably 0.5% or more. The method using the composition thus obtained is the type, α-isomaltosyl α-isomaltoside, or α-isomaltosyl α-isomaltoside and α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α-glucoside. The content can be appropriately selected depending on the usage frequency and the like. For example, in the case of a bifido growth promoter or a mineral absorption promoter, α-isomaltosyl α-isomaltoside or α-isomaltosyl α-isomaltosid together with α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α- It is preferable to take about 0.1 to 100 g, preferably about 0.5 to 30 g, of glucoside daily.
[0029]
Ingestion of the bifidobacteria growth-promoting agent of the present invention causes the bifidobacteria to proliferate preferentially in the intestine, particularly in the large intestine, producing organic acids such as acetic acid and lactic acid, and lowering the pH. In addition, it suppresses the growth of infected bacteria and spoilage bacteria, and suppresses the production of harmful substances that are likely to occur during metabolic processes such as amino acids and proteins. Furthermore, it not only stimulates the intestine moderately and promotes peristaltic movement moderately, but also increases the amount of feces, remarkably enhances the bowel control effect and prevents constipation. Moreover, this agent exhibits an excellent effect as a mineral absorption promoter such as calcium, magnesium, iron, copper, zinc, and phosphorus.
[0030]
Therefore, the bifidobacteria growth promoter of the present invention is beauty, health maintenance, prevention of adult diseases, during and after the disease, promotion of recovery after the disease, hyperammonemia, hepatic encephalopathy, osteoporosis, regardless of gender It can be advantageously used for treatment, prevention, etc.
[0031]
In addition, the bifidobacteria growth promoter of the present invention exerts its effect on domestic animals such as pigs, dogs and cats, domestic fowls such as canaries, parakeets and chickens, and other domestic animals such as bees, cormorants and fish, and infection. It can be advantageously used for prevention, fattening promotion, spawning promotion, fecal malodor control, mineral absorption promotion, and the like.
[0032]
In the case of a caries inhibitor, α-isomaltosyl α-isomaltoside, or α-isomaltosyl α-isomaltoside and α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α-glucoside itself are low. Not only can it be used as a carnivorous sweetener, but it can also be advantageously implemented by using this in combination with sucrose to positively suppress the caries of sucrose. When used in combination, the active ingredient of the present invention is preferably used in an amount of 5% or more, preferably 10% or more based on sucrose. Next, the present invention will be described more specifically by experiments.
[0033]
[Experiment 1 Preparation of α-Isomaltosyl α-Isomaltoside]
60 parts by weight of trehalose (manufactured by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) and 40 parts by weight of maltotetraose (manufactured by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) are heated and dissolved in 150 parts by weight of water. 5, α-glucosidase derived from Aspergillus niger (manufactured by Amano Pharmaceutical Co., Ltd., trade name “Transglucosidase Amano”) was added for 5 units per maltotetraosegram, reacted for 24 hours, and then heated to 100 ° C. for 20 minutes. The enzyme was deactivated. This solution contains about 4% of the novel oligosaccharide of the present invention, α-isomaltosyl α-isomaltosid, further contains about 22% α-isomaltosyl α-glucoside and about 6% α-isomaltriosyl α-glucoside. In addition, it contained reducing sugars such as glucose, maltose, maltotriose, unreacted trehalose, maltotetraose and the like. This solution was decolorized with activated carbon, purified by desalting with an ion exchange resin (H type and OH type), concentrated to a concentration of about 50%, and then column chromatography packed with a salt type strongly acidic cation exchange resin. The α-isomaltosyl-rich α-isomaltoside-rich fraction was collected.
[0034]
The resin for fractionation is an alkali metal strong acid cation exchange resin (manufactured by Tokyo Organic Chemical Industry Co., Ltd., trade name “XT-1016”, Na⁺ And a stainless steel column with a jacket having an inner diameter of 5.4 cm was packed in water suspension. At this time, four columns with a resin layer length of 5 m were connected in series so that the resin layer length was about 20 m. While maintaining the temperature in the column at 60 ° C., 5 v / v% of the raw sugar solution was added, and 60 ° C. warm water was flowed at SV 0.15 for fractionation, and α-isomaltosyl α-glucoside-rich fraction, α-Isomaltosyl α-isomaltoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside-rich fractions were collected, respectively.
[0035]
α-Isomaltosyl α-Isomaltoside and α-Isomaltotriosyl The α-glucoside-rich fraction was adjusted to a concentration of about 2% and pH 5.0, and 5 units of glucoamylase was added per gram of solid matter, acting at 40 ° C. for 20 hours. Thus, a contaminating carbohydrate having an α-1,4 glucoside bond mainly at the non-reducing end was decomposed. Next, after heating to 100 ° C. for 20 minutes to inactivate the enzyme, this was cooled, desalted and purified according to a conventional method, concentrated to a concentration of about 40%, and packed with octadecyl silica gel (stock) Chromatography with the company YMC, trade name “YMC-Pack R-355-15”), α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich fraction and α-isomaltotriosyl α-glucoside-rich fraction Each was collected. The α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich solution collected by repeating this method was desalted, purified, concentrated, and vacuum-dried to obtain about 2 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powder. This powder preparation contained about 97% α-isomaltosyl α-isomaltoside per solid.
[0036]
In addition, in the same manner, about 12 parts by weight of α-isomaltosyl α-glucoside-rich powder (containing about 98% α-isomaltosyl α-glucoside per solid) and α-isomaltotriosyl α-glucoside high About 3 parts by weight of powder (containing about 97% α-isomaltriosyl α-glucoside per solid) was obtained.
[0037]
[Experiment 2 α-Isomaltosyl Physicochemical Properties of α-Isomaltside]
The physicochemical properties were examined using α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powder preparation prepared by the method of Experiment 1.
(1) Elemental analysis
Measured value C = 42.1% H = 6.3% O = 51.6%
Theoretical value C = 41.98% H = 6.17% O = 51.85%
(Molecular formula: C_{twenty four}H₄₂O_{twenty one})
(2) Molecular weight
666.6 Dalton
(3) UV absorption
No characteristic absorption is shown when measured in aqueous solution.
(4) Taste
The sweetness is about 1/5 that of sucrose, the taste is good, and there is no odor.
(5) Solubility in drugs
Easily soluble in water, 0.1N-NaOH, 0.1N-HCl.
Insoluble in methanol and ethanol.
Insoluble in chloroform and ethyl acetate.
(6) Color reaction
Shows green color by anthrone-sulfuric acid reaction.
Ferring's liquid reduction reaction is negative.
Iodine reaction is negative.
(7) Structure
(A) When hydrolyzed with 1N-sulfuric acid, only D-glucose is produced.
(B) This substance is methylated and then hydrolyzed with an acid, followed by reduction and acetylation to give glycitol acetate. The obtained methyl hexitol acetate is analyzed by gas chromatography. -O-acetyl-2,3,4,6-tetra-O-methylglucitol and 1,5,6-tri-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methylglucitol are 1 Obtained in a molar ratio of 1 to 1.
(C) It is partially decomposed by the action of glucoamylase to produce glucose, trehalose and α-isomaltosyl α-glucoside. Isomalt dextranase is not subject to degradation.
(D) Carbon nuclear magnetic resonance analysis (¹³C-NMR), 12¹³A C signal was obtained. Reference material, α-, reported by JH Bradbury et al. In “Carbohydrate Research”, Vol. 126, pages 125-156 (1984) From the chemical shift of D-glucopyranose, each carbon is assigned, and this substance is judged to be a carbohydrate composed of O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranoside. Furthermore, from the results of molecular weight and constituent sugar analysis, it is a tetrasaccharide consisting of glucose, which is half of 24 carbons.¹³Since it showed a C signal, the substance had a point contrast structure, namely O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6)- It is judged to have the structure of α-D-glucopyranoside.
From the above results, the chemical structure of this substance can also be shown as in FIG.
[0038]
From this structure, this substance is named α-isomaltosyl α-isomaltoside.
[0039]
Α-Isomaltosyl α-Isomaltosid α-Isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside obtained in the same manner as the α-isomaltosid of the present invention are O-α-D- Glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl α-D-glucopyranoside and O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α- It is judged that it is D-glucopyranosyl alpha-D-glucopyranoside. The chemical structures of these substances can be shown as in FIGS.
[0040]
[Experiment 3 Maillard reaction]
A solution containing 10% α-isomaltosyl α-isomaltoside, 1% glycine, and 50 mM phosphate buffer (pH 7.0) prepared by the method of Experiment 1 was kept at 100 ° C. for 90 minutes, and after cooling, Absorbance at 480 nm and 1 cm cell was measured. Further, α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside prepared by the method of Experiment 1 were similarly tested. As comparative examples, trehalose, isomaltose, isomalt triose, and isomalt tetraose were similarly tested. The results are shown in Table 1.
[0041]
[Table 1]

[0042]
As is apparent from the results in Table 1, the α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention has an extremely low coloration degree due to the Maillard reaction and is 3% of the coloration degree of isomalttetraose which is a reducing sugar having the same polymerization degree. As with trehalose, it was found to be a carbohydrate that does not substantially exhibit a Maillard reaction. The α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside, which were tested at the same time, were found to be carbohydrates that did not show a Maillard reaction in the same manner as α-isomaltosyl α-isomaltoside.
[0043]
[Experiment 4 Digestion Test]
Using α-isomaltosyl α-isomaltoside prepared by the method of Experiment 1, Okada et al. Reported in Journal of Japanese Society of Nutrition and Food, Vol. 43, No. 1, pp. 23-29 (1990). According to this method, an in vitro digestion test was conducted, and the degree of digestion of α-isomaltosyl α-isomaltoside was examined by the degradation rate (ratio of glucose to total sugars). Further, α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside prepared by the method of Experiment 1 were similarly tested. As comparative examples, maltose, trehalose and isomaltose were similarly tested. The results are shown in Table 2.
[0044]
[Table 2]

[0045]
As apparent from the results in Table 2, the maltose and isomaltose of the comparative example are well degraded mainly by the small intestinal mucosal enzyme, whereas the α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention is degraded only slightly by the small intestinal mucosal enzyme. Therefore, it is determined that most of them reach the large intestine when taken orally. α-Isomaltosyl α-Glucoside and α-Isomaltriosyl α-Glucoside is also less digestible in the same way as α-Isomaltosyl α-Isomaltside, although there are some differences in the degradation rate by small intestinal mucosal enzymes Carbohydrates, in other words, low-calorie carbohydrates.
[0046]
[Experiment 5: Utilization test by intestinal bacteria]
Using α-isomaltosyl α-isomaltoside prepared by the method of Experiment 1, it is described in Mitsuoka Chitoshi, “The World of Enterobacteria (Separation and Identification of Anaerobic Bacteria)”, p. 325, Sobunsha (1984). An anaerobic culture was performed at 37 ° C. for 96 hours in a PYF medium and a sugar-added PYF medium supplemented with 0.5% w / v sugar in the PYF medium, and this culture solution was diluted 5 times and its turbidity (in a 1 cm cell) The degree of intestinal bacterial growth was determined from the absorbance at 750 nm, and the quality of the assimilation was determined. In addition, α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside prepared in Experiment 1 were similarly tested. Moreover, it tested similarly using glucose, a trehalose, and isomaltose as a comparative example. The judgment criteria are shown in Table 3, and the results are shown in Tables 4 and 5.
[0047]
[Table 3]

[0048]
[Table 4]

[Table 5]

[0049]
As is apparent from the results of Tables 4 and 5, unlike glucose and trehalose of the comparative examples, the α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention has high selective assimilation by Bifidobacterium. α-Isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside were also found to be carbohydrates with high selective assimilation by Bifidobacterium. Considering together with the results of Experiment 4, α-isomaltosyl α-isomaltoside, together with α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside, reaches most of the large intestine by oral ingestion, and bifidobacteria It is judged that it can function as a growth promoter.
[0050]
[Experiment 6: Effect on Bifidobacteria Growth Promotion in vivo]
Five subjects (male, average age 40.6 years, average body weight 62.2 kg) ingested α-isomaltosyl α-isomaltoside or α-isomaltosyl α-glucoside once daily and 10 g dissolved in hot soup at lunch time. This was continued for 14 days. The experimental sequence was an α-isomaltosyl α-isomaltoside intake experiment followed by a 14-day control period, followed by an α-isomaltosyl α-glucoside intake experiment. Obtain the relative change in stool weight, stool weight relative change, stool pH, total number of bacteria per gram of stool, ratio of bifidobacteria in total number of bacteria, and total number of bifidobacteria before and after intake for 14 days The average value of 5 subjects was calculated. Among these, the total number of bacteria was measured according to the method described in Mitsuoka Chitoshi, “The World of Enterobacteria (Separation and Identification of Anaerobic Bacteria)”, pp. 53 to 65, Shubunsha (1984). That is, using 13 types of medium excluding the M10 medium, it was determined which bacterial group (genus) the appearing colony belongs to and the number of bacteria was measured. The number of bacteria in each group was defined as the true number of bacteria in the medium that gave the highest number of bacteria. The total number of bacteria in each bacterial group thus obtained was defined as the total number of fecal bacteria. The ratio (%) of bifidobacteria (Bifidobacterium) in the total number of bacteria was determined by multiplying the value obtained by dividing the number of bifidobacteria by the total number of bacteria by 100. The relative change in the total number of bifidobacteria is obtained by multiplying the number of bifidobacteria per gram of stool by the weight of stool, and the total number of bifidobacteria before ingestion is taken as 100. The number of bacteria was shown as a relative value. Changes in fecal weight, fecal pH, and total number of bifidobacteria in feces are summarized in Table 6.
[0051]
[Table 6]

[0052]
As is apparent from the results in Table 6, by ingesting α-isomaltosyl α-isomaltoside or α-isomaltosyl α-glucoside, the stool weight per day increased before the intake, and the number of bifidobacteria per gram of stool increased. However, the ratio of the number of bifidobacteria to the total number of bacteria has increased about twice, the total number of bifidobacteria has increased by about 2.3 to 2.5 times, and the fecal pH has about 0.6 to about It was found that a reduction of 0.8 was seen. α-Isomaltotriosyl α-Glucoside was tested for oral ingestion in the same manner as α-Isomaltosyl α-Isomaltosid and α-Isomaltosyl α-Glucoside. It has been found that it exhibits a bifidobacteria growth promoting effect.
[0053]
[Experiment 7]
Acid production by caries-inducing bacteria
Using the α-isomaltosyl α-isomaltoside prepared by the method of Experiment 1, Takeuchi wrote “Journal of Dental Society for Basic Medicine”, Volume 26,According to the method reported on pages 698 to 713 (1984), it was examined whether or not it was subjected to acid fermentation by Streptococcus sobrinus ATCC 27351, a caries-inducing bacterium.
[0054]
50% viable bacteria suspended in Stefan buffer (pH 7.0)w / vThe suspension was mixed with a 0.02M test carbohydrate solution dissolved in the same buffer, shaken at 37 ° C., and the pH was measured over time. Further, α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside prepared by the method of Experiment 1 were similarly tested. As comparative examples, sucrose, trehalose and isomaltose were similarly tested. The results are shown in Table 7.
[0055]
[Table 7]

[0056]
As is clear from the results in Table 7, sucrose showed a sharp drop in pH, trehalose with a delay, and a slight drop with isomaltose, whereas α-isomaltosyl α-isomaltoside showed almost no pH drop. Not shown and found to be substantially free of acid fermentation. It was also found that α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside were not substantially subjected to acid fermentation.
[0057]
[Experiment 8]
Inhibition of insoluble glucan synthesis by glucosyltransferase of caries-inducing bacteria
Using the α-isomaltosyl α-isomaltoside prepared by the method of Experiment 1, Takeuchi wrote “Journal of Dental Society for Basic Medicine”, Volume 26,According to the method reported on pages 698 to 713 (1984), the effect of Streptococcus sobrinus ATCC27351 on the synthesis of insoluble glucan from sucrose by glucosyltransferase was examined.
[0058]
0.5 ml of crude glucosyl in a mixture of 1 ml of 1% w / v sucrose solution, 1 ml of 1% w / v test carbohydrate solution and 1.5 ml of 0.1M phosphate buffer (pH 6.8) A transferase sample (containing 10 mg of total protein) was added, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 16 hours in a small test tube fixed at an elevation angle of 30 degrees. After the reaction solution is gently transferred to another test tube, the remaining tube wall deposits are gently washed with 4 ml of water, the wash solution is combined with the reaction solution, and the resulting precipitate is further centrifuged. The material was non-adherent glucan. Moreover, the tube wall deposits remaining in the reaction test tube were used as an attached glucan. The amount of attached and non-attached glucan was quantified by the anthrone sulfate method, and the total amount of both glucans produced was defined as the amount of insoluble glucan produced. The reaction system using water instead of the test carbohydrate solution, in other words, the reaction system using only sucrose, was used as a control, and the insoluble glucan production inhibition rate was the amount of insoluble glucan produced in the test carbohydrate reaction system relative to the amount of insoluble glucan produced in the control. The percentage was calculated by subtracting from 100. Α-Isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside prepared by the method of Experiment 1 were similarly tested. As a comparative example, the same test was performed using trehalose and isomaltose. The results are shown in Table 8.
[0059]
[Table 8]

[0060]
As is apparent from the results in Table 8, α-isomaltosyl α-isomaltoside produces significantly less non-adhered glucan and adhering glucan compared to sucrose alone (control), and is similar to isomaltose of the comparative example. It was found that insoluble glucan production was inhibited more strongly than trehalose. In addition, it was found that α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside tested at the same time exhibited strong insoluble glucan production inhibition comparable to or higher than α-isomaltosyl α-isomaltoside.
[0061]
Considering the above results together with the results of Experiment 7, α-isomaltosyl α-isomaltoside is not subjected to acid fermentation by caries-inducing bacteria, together with α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside. In addition, it inhibits the production of insoluble glucan from sucrose by caries-inducing bacteria and, in addition, strongly prevents adhesion to smooth surfaces, so when used together with sucrose, it effectively inhibits the caries action of sucrose It is judged that it is suitable as a caries inhibitor.
[0062]
[Experiment 9: Acute toxicity test]
Using mice, the α-isomaltosyl α-isomaltoside preparation prepared in Experiment 1 was orally administered to conduct an acute toxicity test. As a result, no death was observed even at the maximum dose that could be administered. Therefore, its LD₅₀The value is 50 g / kg or more, and α-isomaltosyl α-isomaltoside is an extremely low toxicity substance. Moreover, when α-isomaltosyl α-glucoside and α-isomaltotriosyl α-glucoside prepared in Experiment 1 were tested in the same manner, their LDs were tested.₅₀The value is 50 g / kg or more, both of which are extremely low toxicity substances.
[0063]
Hereinafter, the production method of α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention is shown in Example A, and the composition containing α-isomaltosyl α-isomaltoside is shown in Example B.
[0064]
Example A-1
1 part by weight of trehalose and 1 part by weight of dextrin (DE18, manufactured by Matsutani Chemical Industry Co., Ltd., trade name: Paindex # 4) are heated and dissolved in 2.5 parts by weight of water, and the solution is adjusted to a temperature of 60 ° C. and a pH of 5.5. The α-glucosidase derived from Aspergillus niger was added for 5 units per gram of the solid substance and reacted for 20 hours, and then kept at 95 ° C. for 30 minutes to inactivate the enzyme. This solution was decolorized and filtered with activated carbon according to a conventional method, purified by desalting with H-type and OH-type ion exchange resins, concentrated, and 75% α-isomaltosyl containing α-isomaltoside-containing syrup was solid. Per yield of about 92%.
[0065]
This product contains about 5% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 21% α-isomaltosyl α-glucoside and about 7% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid. It has moderate viscosity and moisturizing properties, and can be advantageously used as a sweetener, a taste improver, a stabilizer, an excipient and the like in various compositions such as foods, cosmetics, and pharmaceuticals. Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0066]
Example A-2
In order to purify the reaction solution obtained by the method of Example A-1 and concentrate it to a concentration of 50% to obtain a raw sugar solution, and to increase the content of α-isomaltosyl α-isomaltoside, a sodium-type strong acid was used according to the method of Experiment 1. Ion exchange column chromatography using a cationic cation exchange resin “XT-1016”. The resin was packed into four jacketed stainless steel columns with an inner diameter of 5.4 cm and connected in series to a total resin layer length of 20 m.
[0067]
While maintaining the internal temperature of the column at 60 ° C, the sugar solution is added to the resin at 5 v / v%, and hot water at 60 ° C is added to the solution at SV0.15 for fractionation to remove maltose such as maltose and glucose. Then, α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich fraction was collected. Further purification, concentration, vacuum drying, and pulverization yielded α-isomaltosyl-rich α-isomaltoside-rich powder in a yield of about 25% per solid.
[0068]
This product contains about 20% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 32% α-isomaltosyl α-glucoside and about 28% α-isomaltotriosyl α-glucoside. It has an elegant sweetness and can be advantageously used as a sweetener, a taste improver, a quality improver, a stabilizer, an excipient and the like in various compositions such as various foods, cosmetics, and pharmaceuticals. Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0069]
Example A-3
After adding calcium carbonate to 10% potato starch milk to a final concentration of 0.1%, the pH is adjusted to 6.0, and α-amylase (trade name “Spitase HS”, manufactured by Nagase Seikagaku Corporation) is added. ) Was added at 0.1% per gram of starch, heated with stirring, gelatinized and liquefied. Immediately after autoclaving (120 ° C.) for 20 minutes, the temperature was adjusted to 40 ° C. and pH 6.5. To this, 500 units of amylase (manufactured by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) per gram starch, Arthrobacter sp. Q36 (deposited) disclosed in Japanese Patent Application No. 6-79291 by the applicant of the present application. No. FERM BP-4316) -derived non-reducing saccharide-forming enzyme and 3 units of trehalose-free enzyme derived from the same strain were added and reacted for 12 hours to obtain a sugar solution containing about 55% trehalose. Next, the enzyme was inactivated by maintaining at 95 ° C. for 30 minutes, and then concentrated to a solid concentration of 45%. Further, the temperature was adjusted to 60 ° C. and pH 5.0, and Candida tropicalis. 3 units of α-glucosidase derived from IFO0589 (manufactured by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) was added per solid and reacted for 24 hours. This reaction solution is kept at 95 ° C. for 30 minutes to inactivate the enzyme, then decolorized and filtered with activated carbon according to a conventional method, purified by desalting with H-type and OH-type ion exchange resins, and further concentrated. A syrup containing α-isomaltosyl at a concentration of about 75% was obtained in a yield of about 95% per solid.
[0070]
This product contains about 3% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 20% α-isomaltosyl α-glucoside and about 5% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid. It has moderate viscosity and moisturizing properties, and can be advantageously used as a sweetener, a taste improver, a stabilizer, an excipient and the like in various compositions such as foods, cosmetics, and pharmaceuticals. Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0071]
Example A-4
Calcium carbonate is added to 30% corn starch milk to a final concentration of 0.1%, and then adjusted to pH 6.5, and α-amylase (trade name “Termameal 60L” manufactured by Novo) is added to the starch gram. 0.2% per unit, heated with stirring, gelatinized and liquefied, immediately autoclaved (120 ° C) for 20 minutes, then cooled to 55 ° C, and isoamylase (produced by Hayashibara Biochemical Laboratories, Inc.) ) Per 500 grams of starch and β-amylase (manufactured by Nagase Seikagaku Co., Ltd.) at a rate of 30 units per gram of starch and reacted for 48 hours to obtain a sugar solution having a maltose content of about 84%. . The reaction solution was heated at 95 ° C. for 30 minutes, and then adjusted to a temperature of 60 ° C. and a pH of 7.0. Thermus aquaticus disclosed by the present applicant in Japanese Patent Application No. 6-144092 was added thereto. A maltose / trehalose converting enzyme derived from ATCC 33923 was added at a rate of 1 unit per gram of starch and reacted for 24 hours to obtain a sugar solution containing about 50% trehalose. The reaction solution was adjusted to pH 5.5, and 3 units of α-glucosidase derived from Aspergillus niger was added per gram of solid matter and reacted at 60 ° C. for 24 hours. Next, after maintaining the temperature at 95 ° C. for 30 minutes to inactivate the enzyme, it was decolorized and filtered with activated carbon according to a conventional method, purified by desalting with H-type and OH-type ion exchange resins, further concentrated, vacuum dried, Grinding gave α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing powder in a yield of about 90% per solid.
[0072]
This product contains about 4% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 20% α-isomaltosyl α-glucoside and about 6% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid, and has low reducing properties. It has mild sweetness, moderate viscosity and moisturizing properties, and can be advantageously used as a sweetener, a taste improver, a stabilizer, an excipient and the like in various foods, cosmetics, pharmaceuticals and the like. Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0073]
Example A-5
Calcium carbonate is added to 30% potato starch milk to a final concentration of 0.1%, adjusted to pH 6.5, and α-amylase (trade name “Spitase HS”, manufactured by Nagase Seikagaku Corporation) is added thereto. Add 0.01% per gram starch, heat with stirring, gelatinize and liquefy, immediately autoclave (120 ° C) for 5 minutes, then cool to 55 ° C to obtain a liquefied starch solution of less than DE1, pH 7. Adjust to 0, and add pullulanase (produced by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) and maltotetraose-producing amylase (produced by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) at a rate of 150 units and 8 units per gram of starch, respectively. The reaction was performed for 36 hours. The reaction solution was heated at 95 ° C. for 30 minutes and then cooled to 45 ° C., to which Rhizobium species (Rhi) disclosed by the present applicant in European Patent Application Publication No. 06067553A2 was disclosed.zobium sp. ) After adding 2 units of non-reducing saccharide-forming enzyme derived from M-11 (deposit number FERM BP-4130) per gram of starch and reacting for 64 hours, the temperature was adjusted to 60 ° C. and pH 5.0. Α-Glucosidase derived from Tropicalis IFO0589 was added at a rate of 3 units per gram of starch and allowed to react for 24 hours. The reaction solution was kept at 95 ° C. for 30 minutes to inactivate the enzyme, then decolorized and filtered with activated carbon according to a conventional method, purified by desalting with H-type and OH-type ion exchange resins, further concentrated, Vacuum-dried and pulverized to obtain α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing powder in a yield of about 90% per solid.
[0074]
This product contains about 4% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 18% α-isomaltosyl α-glucoside and about 5% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid. It has mild sweetness, moderate viscosity and moisturizing properties, and can be advantageously used as a sweetener, a taste improver, a stabilizer, an excipient and the like in various foods, cosmetics, pharmaceuticals and the like. Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0075]
Example A-6
Calcium carbonate is added to 30% corn starch milk to a final concentration of 0.1%, and then adjusted to pH 6.5, and α-amylase (trade name “Termameal 60L” manufactured by Novo) is added to the starch gram. 0.3% per unit, heated with stirring, gelatinized and liquefied, immediately autoclaved (120 ° C) for 30 minutes, then cooled to 55 ° C to obtain a liquefied starch solution of DE about 4 Non-reducing saccharide-forming enzyme derived from Slobacter sp. Q36 is 4 units per gram starch, isoamylase is 300 units per gram starch, and cyclomaltodextrin glucanotransferase (produced by Hayashibara Biochemical Laboratories) is starch gram. The mixture was added at a rate of 5 units per hour and reacted at pH 6.3 and a temperature of 45 ° C. for 48 hours. This reaction solution is heated at 95 ° C. for 30 minutes, adjusted to a temperature of 55 ° C. and a pH of 5.5, added with 10 units of β-amylase per gram of starch, reacted for 16 hours, and held at 95 ° C. for 30 minutes. After inactivating the enzyme, the mixture was cooled to 60 ° C., 3 units of α-glucosidase derived from Aspergillus niger was added per gram of solid matter, and reacted for 24 hours. The reaction solution is kept at 95 ° C. for 30 minutes to inactivate the enzyme, then decolorized and filtered with activated carbon according to a conventional method, purified by desalting with H-type and OH-type ion exchange resins, and further concentrated. Α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing syrup was obtained in a yield of about 95% per solid.
[0076]
This product contains about 2% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 18% α-isomaltosyl α-glucoside and about 3% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid matter. It has mild sweetness, moderate viscosity and moisturizing properties, and can be advantageously used as a sweetener, a taste improver, a stabilizer, an excipient and the like in various foods, cosmetics, pharmaceuticals and the like. Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0077]
Example A-7
The reaction liquid obtained by the method of Example A-1 was purified according to a conventional method, and concentrated syrup having a concentration of 50% was put into an autoclave, 10% of Raney nickel was added, and the concentration was adjusted to 90 to 120 ° C. with stirring. Increase the hydrogen pressure to 20 to 120 kg / cm²To complete the hydrogenation, then Raney nickel was removed, decolorized, desalted and purified, and concentrated to give 70% concentration of syrup in 80% yield per solid. This product contains sugar alcohol together with about 5% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 21% α-isomaltosyl α-glucoside and about 7% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid. Does not exhibit reducing properties, has mild sweetness, moderate viscosity, and moisturizing properties, and is useful for various foods, cosmetics, pharmaceuticals and other compositions as sweeteners, taste improvers, stabilizers, excipients, etc. Available to: In addition, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0078]
[Example A-8]
Α-Isomaltosyl α-isomaltoside-rich fraction obtained by the method of Example A-2 was purified according to a conventional method, and the concentrated 50% syrup was hydrogenated according to the method of Example A-7. Then, purification, concentration, vacuum drying, and pulverization gave α-isomaltosyl-rich α-isomaltoside-rich powder in a yield of about 70% per solid. This product contains sugar alcohol together with about 20% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 32% α-isomaltosyl α-glucoside and about 28% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid matter. Does not exhibit reducing properties, has a mild and elegant sweetness, and is useful as a sweetener, taste improver, quality improver, stabilizer, excipient, etc., for various foods, cosmetics, pharmaceuticals, etc. Available to: Moreover, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0079]
Example A-9
Α-Isomaltosyl α-isomaltoside production reaction solution obtained by the method of Example A-5 was purified according to a conventional method, and concentrated syrup having a concentration of 50% was hydrogenated according to the method of Example A-7. And purified and concentrated to give a syrup concentration of about 70% in a yield of about 80% per solid. This product contains sugar alcohol together with about 4% α-isomaltosyl α-isomaltoside, about 18% α-isomaltosyl α-glucoside and about 5% α-isomaltotriosyl α-glucoside per solid. Does not show reducibility, has mild sweetness, moderate viscosity, and moisturizing properties, and is used as a sweetener, taste improver, stabilizer, excipient, etc., in various foods, cosmetics, pharmaceuticals and other compositions. It can be used advantageously. In addition, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0080]
Example B-1 Sweetener
To 1 part by weight of α-isomaltosyl high α-isomaltoside-containing powder obtained by the method of Example A-2, 0.01 part by weight of α-glycosyl stevioside (trade name “αG Sweet” manufactured by Toyo Seika Co., Ltd.) and L- 0.01 parts by weight of aspartyl-L-phenylalanine methyl ester (trade name “Aspartame”) were uniformly mixed and subjected to a granulating machine to obtain a granular sweetener. This product has excellent sweetness quality and has a sweetness level about 2.5 times that of sucrose, and the calorie per sweetness level is reduced to about 1 / 2.5 of sucrose. This sweetener has no degradation of high-intensity sweetener blended in it, has excellent stability, and as a low-calorie sweetener, low-calorie food and drink for obese people, diabetics, etc. who restrict caloric intake Suitable for sweetening products. In addition, this sweetener has a bifidobacteria growth-promoting action and a mineral absorption-promoting action and is suitable as a health food. Furthermore, it produces less acid by caries-inducing bacteria and less insoluble glucan. It is also suitable for sweetening foods and foods that suppress dental caries.
[0081]
[Example B-2 Hard Candy]
30 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing syrup obtained by the method of Example A-1 was heated and mixed with 100 parts by weight of a 55% sucrose solution, and then heated and concentrated under reduced pressure until the water content was less than 2%. This was mixed with 1 part by weight of citric acid and an appropriate amount of lemon flavor and coloring, and molded according to a conventional method to obtain a product. This product is a high quality hard candy that is crisp, tastes good and does not cause sucrose crystallization. This product is a low caries hard candy.
[0082]
Example B-3 Chewing gum
3 parts by weight of the gum base was melted by heating to a degree of softening, and 3 parts by weight of crystalline maltitol powder and 4 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powder obtained by the method of Example A-8 were added thereto. Appropriate amounts of fragrance and colorant were mixed, and kneaded by a roll, molded and packaged according to a conventional method to obtain a product. This product is a chewing gum with good texture and flavor. Moreover, this product is suitable as a difficult carious chewing gum.
[0083]
[Example B-4 vegetable juice]
In 1,000 parts by weight of vegetable juice mainly composed of tomato juice, 10 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing syrup obtained by the method of Example A-9 and 5 parts by weight of pullulan (molecular weight of about 10,000) are dissolved. The product was sterilized by heat according to a conventional method and canned to obtain a product. Since this product contains bifidobacteria growth-promoting saccharides in addition to the original vitamins and minerals of vegetable juice, it has a bifidobacteria growth-promoting action and a mineral absorption-promoting action and is suitable as a health drink.
[0084]
[Example B-5 Custard cream]
100 parts by weight of corn starch, 100 parts by weight of syrup containing α-isomaltosyl α-isomaltoside obtained by the method of Example A-3, 80 parts by weight of maltose, 20 parts by weight of sucrose and 1 part by weight of sodium chloride were thoroughly mixed, and 280 weights of chicken egg Add 1,000 parts by weight of the boiled milk, and continue to stir it over fire. When the corn starch is completely gelatinized and the whole becomes translucent, stop the fire. Then, this was cooled, an appropriate amount of vanilla flavoring was added, and weighed, filled and packaged to obtain a product. This product has a smooth luster, mild sweetness and deliciousness. Moreover, this product has a bifidobacteria growth promotion effect and a mineral absorption promotion effect, and is suitable as a health food.
[0085]
Example B-6 Uiro Element
90 parts by weight of rice flour, 20 parts by weight of corn starch, 40 parts by weight of sucrose, 80 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing powder obtained by the method of Example A-4 and 4 parts by weight of pullulan were mixed uniformly. The element was manufactured. Ui-no-Moto, an appropriate amount of Matcha and water were kneaded, and the mixture was placed in a container and steamed for 60 minutes to produce Matcha Uiro. This product has good shine, mouthfeel, and good flavor. Moreover, the aging of starch is suppressed and the shelf life is good.
[0086]
[Example B-7 Sweetened condensed milk]
In 100 parts by weight of raw milk, 3 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing syrup and 1 part by weight of sucrose obtained by the method of Example A-7 were dissolved, sterilized by heating with a plate heater, and then concentrated to a concentration of 70%. The product was obtained by canning under aseptic conditions. This product has a mild sweet taste and good flavor, and can be advantageously used for seasoning infant foods, fruits, coffee, cocoa, tea and the like. Moreover, this product has a bifidobacteria growth promotion effect and a mineral absorption promotion effect, and is suitable as a health food.
[0087]
[Example B-8 cosmetic cream]
2 parts by weight of polyoxyethylene glycol monostearate, 5 parts by weight of glyceryl monostearate self-emulsifying, 2 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powder obtained by the method of Experiment 1, 1 part by weight of α-glycosyl rutin, 1 part by weight of liquid paraffin, 10 parts by weight of glyceryl trioctanoate and an appropriate amount of preservative were dissolved by heating in accordance with a conventional method. To this, 2 parts by weight of L-lactic acid, 5 parts by weight of 1,3-butylene glycol and 66 parts by weight of purified water were added. In addition, the mixture was emulsified with a homogenizer, and an appropriate amount of a fragrance was added, followed by stirring and mixing to produce a cream. This product is excellent in stability and can be advantageously used as a high-quality sunscreen, skin beautifier, whitening agent and the like.
[0088]
[Example B-9 Solid formulation]
A natural human interferon-α preparation (produced by Hayashibara Biochemical Laboratories Co., Ltd.) is applied to an immobilized anti-human interferon-α antibody column according to a conventional method to adsorb the natural human interferon-α contained in the preparation. The bovine serum albumin, which is a stabilizer, is removed by passage, then the pH is changed, and natural human interferon-α is obtained by the method of Experiment 1 and contains 5% of α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powder. Elute using normal saline. This solution is microfiltered, added to about 20 times the amount of anhydrous crystalline maltose powder (trade name “Finetose” manufactured by Hayashibara Co., Ltd.), dehydrated and powdered, and tableted with a tableting machine. Tablets containing about 150 units of natural human interferon-α per (about 200 mg) were obtained. This product can be used advantageously as a sublingual tablet for the treatment of viral diseases, allergic diseases, rheumatism, diabetes, malignant tumors, etc. In particular, it can be advantageously used as a therapeutic agent for AIDS, hepatitis, etc., whose number of patients is rapidly increasing in recent years. In this product, maltose acts as a stabilizer together with α-isomaltosyl α-isomaltoside and maintains its activity well for a long time even when left at room temperature.
[0089]
[Example B-10 Tablet]
Α-Isomaltosyl obtained by the method of Example A-2 20 parts by weight of high α-isomaltoside-containing powder, 30 parts by weight of hydrous crystal trehalose, 1 part by weight of calcium lactate, 1 part by weight of sugar ester, and an appropriate amount of powdered fragrance are uniformly mixed. After that, according to a conventional method, tablets were tableted with a tableting machine so that one tablet was about 350 mg to obtain tablets. This product is an easy-to-drink tablet that does not crack and has good stability. It takes about 1 to 40 tablets, preferably about 2 to 20 tablets per day for adults, and has a bifidobacteria growth-promoting effect. It can be advantageously used to promote absorption of calcium by generating an organic acid in the inside to lower the pH.
[0090]
[Example B-11 Tablet]
20 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing powder obtained by the method of Example A-4, 10 parts by weight of lactosucrose-containing powder (registered trademark “milk fruit oligo”, sold by Hayashibara Corporation), 20 parts by weight of lactose, After uniformly mixing 1 part by weight of tribasic calcium phosphate, 1 part by weight of calcium lactate, 1 part by weight of sugar ester, an appropriate amount of powdered food coloring and an appropriate amount of powdered fragrance, the tableting machine is adjusted to about 680 mg per tablet according to a conventional method. And tableted to obtain the product. This product can be advantageously used as a tablet-type bifidobacteria growth promoter and mineral absorption promoter. By taking about 1 to 40 tablets, preferably about 2 to 20 tablets per day for an adult, this product promotes the growth of bifidobacteria and promotes calcium absorption.
[0091]
[Example B-12 Nutrient]
480 parts by weight of anhydrous crystalline maltose, 190 parts by weight of dried egg yolk, 209 parts by weight of skim milk powder, 115 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-rich powder obtained by the method of Example A-2, 4.4 parts by weight of sodium chloride, Formulation consisting of 1.85 parts by weight of potassium chloride, 4 parts by weight of magnesium sulfate, 0.01 part by weight of thiamine, 0.1 part by weight of sodium ascorbate, 0.6 part by weight of vitamin E acetate and 0.04 part by weight of nicotinamide A 25g portion of each was filled into a laminated aluminum sachet and heat-sealed to obtain a dissolving type nutrient. This product does not require low-temperature storage, is stable for a long time at room temperature, and has excellent solubility and dispersibility. This product is dissolved in about 150 to 300 ml of warm water for 1 bag and taken from the nasal cavity, canteen, stomach, etc. by oral or tube method, so that it can be supplemented with nutrients and promotes the growth of bifidobacteria and minerals. It works and promotes patient recovery. In particular, it promotes the growth of bifidobacteria in the large intestine, lowers the pH, and suppresses the production of harmful substances such as spoilage substances. Moreover, the amount of feces can be increased and constipation that tends to occur in patients can be prevented. In addition, this product can be advantageously used not only as a human but also as a bifidobacteria growth promoter and mineral absorption promoter for oral or tube feeding for domestic animals.
[0092]
[Example B-13 Nutrient]
14.5 parts by weight of anhydrous crystalline trehalose, 4.05 parts by weight of sucrose, 3.2 parts by weight of powdered persimmon juice, 3.0 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing powder obtained by the method of Example A-5, A compound consisting of 0.11 part by weight of citric acid, 0.02 part by weight of ascorbic acid and 0.1 part by weight of powdered orange fragrance is prepared, and 400 g of each is filled and sealed in a screw-cap can, Manufactured nourishment. This product has good stability and solubility as in Example B-12. This product dissolves about 25 g in about 100 to 150 ml of warm water, and ingests by oral or tube method in the same manner as in Example B-12, thereby promoting bifidobacteria growth promotion and mineral absorption promotion along with nutritional supplementation. Demonstrate and promote patient recovery. Moreover, it can be advantageously used as a nutrient that reduces the caries of sucrose.
[0093]
[Example B-14 Formula feed]
40 parts by weight of powdered meal, 38 parts by weight of skim milk powder, 12 parts by weight of α-isomaltosyl α-isomaltoside-containing powder obtained by the method of Example A-5, 10 parts by weight of vitamin preparation, 5 parts by weight of fish meal, 5 parts by weight of dibasic calcium phosphate Participants, 3 parts by weight of liquid oil and fat, 3 parts by weight of calcium carbonate, 2 parts by weight of sodium chloride and 2 parts by weight of mineral agent were mixed to produce a mixed feed. This product is feed for livestock, poultry and the like with improved palatability, and is particularly suitable as feed for piglets. In addition, this product has a bifidobacteria growth action and a mineral absorption action, and can be advantageously used for preventing infection of domestic animals, preventing diarrhea, increasing appetite, and suppressing stool malodor. Furthermore, this product is used in combination with other feed materials, such as cereals, wheat flour, starch, oil cakes, sucrose, and other rough feed materials, if necessary, such as straw, hay, bagasse, corn cob, etc. Thus, other mixed feeds can be used.
[0094]
[Example B-15 toothpaste]
Dicalcium phosphate 45 parts by weight, pullulan 2.95 parts by weight, sodium lauryl sulfate 1.5 parts by weight, glycerin 20 parts by weight, polyoxyethylene sorbitan laurate 0.5 parts by weight, preservative 0.05 parts by weight, Examples Α-Isomaltosyl obtained by the method of A-6 15 parts by weight of syrup containing α-isomaltoside, 5 parts by weight of sucrose and 10 parts by weight of water were mixed according to a conventional method to obtain a toothpaste. This product has moderate sweetness and is particularly suitable as a toothpaste for children.
[0095]
【The invention's effect】
As is apparent from the above, α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention is a non-reducing oligosaccharide, is extremely stable, and has good quality and mild sweetness. Part of it is digested and absorbed by ingestion and becomes a calorie source, but most of it reaches the large intestine and is a carbohydrate that can selectively grow Bifidobacteria. In addition, this carbohydrate produces an organic acid by Bifidobacteria, lowers the pH in the large intestine, increases the solubility of easily deficient minerals such as calcium and iron, and promotes absorption. Furthermore, this carbohydrate is difficult to be fermented by caries-inducing bacteria and the like, inhibits synthesis of insoluble glucan from sucrose by caries-inducing bacteria, suppresses plaque formation, and suppresses caries.
[0096]
In addition, α-isomaltosyl α-isomaltoside of the present invention is chemically stable and can stabilize amino acids and oligopeptides that are prone to browning reaction, as well as active ingredients and physiologically active substances that easily lose their activity. have. In addition, it has properties such as osmotic pressure controllability, activation, irradiability, moisture retention, viscosity, prevention of crystallization of other sugars, difficulty of fermentation, and starch aging prevention. These various properties can be advantageously used in various compositions such as foods and drinks, cosmetics, and pharmaceuticals as sweeteners, taste improvers, quality improvers, stabilizers, excipients, and the like. Furthermore, this product can be advantageously used as a bifidobacteria growth promoter, mineral absorption promoter, caries inhibitor and the like.
[0097]
Therefore, the establishment of α-isomaltosyl α-isomaltosid, its production method and use according to the present invention has an extremely great industrial significance in the fields of food, cosmetics and pharmaceuticals.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a diagram showing the structure of α-isomaltosyl α-isomaltoside.
FIG. 2 is a diagram showing the structure of α-isomaltosyl α-glucoside.
FIG. 3 is a diagram showing the structure of α-isomaltotriosyl α-glucoside.

Claims (17)

Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシル Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−α−Ｄ−グルコピラノシドで示されるα−イソマルトシル α−イソマルトシド。  O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranosyl α-isomaltosyl α-isomaltoside represented by O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 6) -α-D-glucopyranoside. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼを作用させてα−イソマルトシル α−イソマルトシドを生成せしめることを特徴とするα−イソマルトシル α−イソマルトシドの生成方法。  A method for producing α-isomaltosyl α-isomaltoside, wherein α-glucosidase is allowed to act on an aqueous solution containing trehalose and starch to produce α-isomaltosyl α-isomaltoside. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼを作用させてα−イソマルトシル α−イソマルトシドを生成せしめ、これを採取することを特徴とするα−イソマルトシル α−イソマルトシドの製造方法。  A method for producing α-isomaltosyl α-isomaltoside, characterized in that α-glucosidase is allowed to act on an aqueous solution containing trehalose and starch to produce α-isomaltosyl α-isomaltoside and collected. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼ又はα−グルコシダーゼとグルコアミラーゼとを作用させて、α−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを生成せしめ、これを採取することを特徴とするα−イソマルトシル α−イソマルトシドの製造方法。  Α-Glucosidase or α-glucosidase and glucoamylase are allowed to act on an aqueous solution containing trehalose and starch, and α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α- together with α-isomaltosyl α-isomaltoside A process for producing α-isomaltosyl α-isomaltoside, which comprises producing glucoside and collecting it. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液が、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素とトレハロース遊離酵素とを作用させるか若しくはマルトースを含有する水溶液にマルトース・トレハロース変換酵素を作用させて得られるトレハロースと澱粉質とをそれぞれの化合物として含有する水溶液であるか、又は、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させるか若しくは澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素とシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼとを作用させて得られる分子内にトレハロース構造とα−１，４グルコシド結合様式の澱粉質構造とを併せ持つ化合物を含有する水溶液である請求項４記載のα−イソマルトシル α−イソマルトシドの製造方法。  When an aqueous solution containing trehalose and starch is reacted with a non-reducing saccharide-forming enzyme and trehalose-releasing enzyme in an aqueous solution containing starch or maltose / trehalose converting enzyme is allowed to act on an aqueous solution containing maltose. It is an aqueous solution containing the resulting trehalose and starch as compounds, or a non-reducing saccharide-forming enzyme is allowed to act on an aqueous solution containing starch or non-reducing to an aqueous solution containing starch 5. An aqueous solution containing a compound having both a trehalose structure and an α-1,4 glucoside-linked starch structure in a molecule obtained by the action of a saccharide-forming enzyme and cyclomaltodextrin / glucanotransferase. The manufacturing method of (alpha) -isomaltosyl of description. 採取する方法が、塩型強酸性カチオン交換樹脂を充填したカラムクロマトグラフィーを用いてα−イソマルトシル α−イソマルトシド高含有物を採取する工程を含む方法である請求項４又は５記載のα−イソマルトシル α−イソマルトシドの製造方法。  The α-isomaltosyl α according to claim 4 or 5, wherein the collecting method includes a step of collecting α-isomaltosyl α-isomaltoside high content using column chromatography packed with a salt type strongly acidic cation exchange resin. -Method for producing isomaltside. α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを含有せしめた組成物。  α-Isomaltosyl α-Isomaltosid, or α-Isomaltosyl A composition containing α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α-glucoside together with α-isomaltoside. α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドが、トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼ又はα−グルコシダーゼとグルコアミラーゼとを作用させて得られたものである請求項７記載の組成物。  α-Isomaltosyl α-Isomaltosid, or α-Isomaltosyl α-Isomaltosyl and α-Isomaltosyl α-Glucoside and / or α-Isomaltriosyl α-Glucosidase or α-glucosidase in an aqueous solution containing trehalose and starch The composition according to claim 7, which is obtained by reacting glucosidase and glucoamylase. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液が、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素とトレハロース遊離酵素とを作用させるか若しくはマルトースを含有する水溶液にマルトース・トレハロース変換酵素を作用させて得られるトレハロースと澱粉質とをそれぞれの化合物として含有する水溶液であるか、又は、澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素を作用させるか若しくは澱粉質を含有する水溶液に非還元性糖質生成酵素とシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼとを作用させて得られる分子内にトレハロース構造とα−１，４グルコシド結合様式の澱粉質構造とを併せ持つ化合物を含有する水溶液である請求項８記載の組成物。  When an aqueous solution containing trehalose and starch is reacted with a non-reducing saccharide-forming enzyme and trehalose-releasing enzyme in an aqueous solution containing starch or maltose / trehalose converting enzyme is allowed to act on an aqueous solution containing maltose. It is an aqueous solution containing the resulting trehalose and starch as compounds, or a non-reducing saccharide-forming enzyme is allowed to act on an aqueous solution containing starch or non-reducing to an aqueous solution containing starch 9. An aqueous solution containing a compound having both a trehalose structure and an α-1,4 glucoside-linked starch structure in a molecule obtained by the action of a saccharide-forming enzyme and cyclomaltodextrin / glucanotransferase. The composition as described. α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを、糖アルコール、ミネラル及び蔗糖から選ばれる１種以上の成分とともに含有せしめた請求項７乃至９のいずれかに記載の組成物。α-Isomaltosyl α-Isomaltosid, or α-Isomaltosyl α-Isomaltosid together with α-Isomaltosyl α-glucoside and / or α-Isomaltriosyl α-glucoside together with one or more components selected from sugar alcohol, mineral and sucrose The composition according to any one of claims 7 to 9, which is contained. 口中使用物、飲食物又は化粧品である請求項７乃至１０のいずれかに記載の組成物。 Mouth during use thereof, food or composition according to any one of claims 7 to 10 which is a cosmetic. α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを、甘味剤、呈味改良剤、矯味剤、品質改良剤又は安定剤として含有する医薬品である請求項７乃至１０のいずれかに記載の組成物。  α-Isomaltosyl α-Isomaltosid, or α-Isomaltosyl α-Isomaltosyl and α-Isomaltosyl α-Glucoside and / or α-Isomaltriosyl The composition according to any one of claims 7 to 10, which is a pharmaceutical agent contained as a stabilizer. α−イソマルトシル α−イソマルトシドを有効成分とするビフィズス菌増殖促進剤。  α-Isomaltosyl A bifidobacteria growth promoter comprising α-isomaltosid as an active ingredient. α−イソマルトシル α−イソマルトシドを有効成分とするミネラル吸収促進剤。  α-Isomaltosyl A mineral absorption promoter containing α-isomaltoside as an active ingredient. α−イソマルトシル α−イソマルトシドを有効成分とするう蝕抑制剤。  α-Isomaltosyl A caries inhibitor containing α-isomaltoside as an active ingredient. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼ又はα−グルコシダーゼとグルコアミラーゼを作用させて、α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを生成せしめることを特徴とする、α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを含有し、さらにトレハロースを含有する溶液の製造方法。  Α-Glucosidase or α-Glucosidase and Glucoamylase are allowed to act on an aqueous solution containing trehalose and starch, and α-Isomaltosyl or α-Isomaltosyl or α-Isomaltosyl and α-Isomaltosyl α-glucoside and / or α -Isomaltosyl α-glucoside, α-isomaltosyl α-isomaltosid, or α-isomaltosyl α-isomaltosid together with α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α-glucoside And a method for producing a solution containing trehalose. トレハロースと澱粉質とを含有する水溶液にα−グルコシダーゼ又はα−グルコシダーゼとグルコアミラーゼを作用させて、α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを生成せしめて得ることができる、α−イソマルトシル α−イソマルトシド、又はα−イソマルトシル α−イソマルトシドとともにα−イソマルトシル α−グルコシド及び／又はα−イソマルトトリオシル α−グルコシドを含有し、さらにトレハロースを含有する溶液。  Α-Glucosidase or α-Glucosidase and Glucoamylase are allowed to act on an aqueous solution containing trehalose and starch, and α-Isomaltosyl or α-Isomaltosyl or α-Isomaltosyl and α-Isomaltosyl α-glucoside and / or α -Isomaltosyl α-glucoside, α-isomaltosyl α-isomaltoside, or α-isomaltosyl α-isomaltosyl α-glucoside and / or α-isomaltotriosyl α-glucoside that can be obtained by producing α-glucoside And a solution containing trehalose.

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