JP3597863B2 - Protein: substituted di- and tripeptide inhibitors of farnesyltransferase - Google Patents

Description

発明の分野
本発明はヒト組織の制御されないまたは異常な増殖を予防的にまたは他の目的で処置する医療分野で使用されうる幾つかの化合物に関する。さらに詳しくは、本発明は細胞***を活性化し、ガンおよび再狭窄症と関係があるラスタンパク質を活性化することが明らかにされているファルネシルトランスフェラーゼ酵素を阻害するよう作用する幾つかの化合物に関する。
発明の背景
ラスタンパク質（またはp21）はその突然変異体がヒトの殆どのタイプのガンの20％に、また結腸および膵臓ガンの50％以上に存在するため幅広く研究されている（Gibbs J.B.のCell,65:1（1991年）;Cartwright T.らのChimica Ogg,10:26（1992年））。これらの突然変異のラスタンパク質は本来のラスに存在するフィードバック調節の能力に欠けており、そしてこの欠陥は正常な内因的調節因子が正常な細胞***を刺激する能力を制御できないためそれらの発ガン作用と関係がある。突然変異のラスの形質転換活性は翻訳後修飾に決定的に依存するという最近の発見（Gibbs J.らのMicrobiol.Rev.,53:171（1989年））はラスの機能の重要な面を明らかにし、ガン治療に新しい可能性をもたらした。
ガンの他に、天然のラスタンパク質の過剰発現および／または機能と関係がある制御されない細胞増殖の症状がある。手術後の血管性再狭窄症はこのような症状の１つである。伏在静脈バイパス移植、動脈内膜切除および経内腔冠状血管形成のような様々な外科的血管再形成術の使用は大抵、再狭窄症として知られている新生内膜組織の制御されない成長による合併症を伴う。再狭窄症の生化学的原因は十分に解明されておらず、数多くの成長因子およびガン原遺伝子が関係している（Naftilan A.J.らのHypertension,13:706（1989年）およびJ.Clin.Invest.,83:1419;Gibbsons G.H.らのHypertension,14:358（1989年）;Satoh T.らのMollec.Cell.Biol.,13:3706（1993年））。ラスタンパク質が細胞***プロセスに関与することが知られていることからラスタンパク質は細胞***が制御されない多くの状況にみられる一因である。突然変異のラスが関与するガンの阻害と同様に、ラスに依存するプロセスの遮断は特に正常なラスの発現および／または機能が成長刺激因子により拡大される場合、再狭窄症と関係がある不適当な組織増殖を減少または排除する潜在能力を有する。
ラスの機能は血漿膜の内面と結合するために、タンパク質の修飾に依存する。他の膜結合タンパク質と異なって、ラスタンパク質は通常のトランスメンブランまたは疎水性配列を欠いており、最初に細胞質ゾル可溶性形態で合成される。ラスタンパク質と膜の結合はタンパク質：ファルネシルトランスフェラーゼにより認識されるカルボキシル末端のアミノ酸コンセンサス配列により示される一連の翻訳後プロセシング工程によって開始される。
このコンセンサス配列はカルボキシル末端、次に２個の親油性アミノ酸およびＣ−末端残基の４個のアミノ酸があるシステイン残基からなる。システイン残基のスルフヒドリル基はタンパク質：ファルネシルトランスフェラーゼが触媒する反応においてファルネシルピロホスフェートによりアルキル化される。プレニル化後、Ｃ−末端の３個のアミノ酸はエンドプロテアーゼにより開裂され、そしてプレニル化システインの新しく露出したα−カルボキシル基はメチルトランスフェラーゼによりメチル化される。ファルネシル化で開始するラスタンパク質の酵素的プロセシングはタンパク質と細胞膜の結合を可能にする。発ガン性ラスタンパク質の突然変異分析はこれらの翻訳後修飾が形質転換活性に不可欠であることを示唆している。コンセンサス配列のシステイン残基と他のアミノ酸との置換によりもはやファルネシル化されないラスタンパク質が得られ、それは細胞膜に移動せず、細胞増殖を刺激する能力に欠けている（Hancock J.F.らのCell,57:1617（1989年）:Schafer W.R.らのScience,245:379（1989年）;Casey P.J.のProc.Natl.Acad.Sci.USA,86:8323（1989年））。
最近、タンパク質：ファルネシルトランスフェラーゼ（PFTs、ファルネシル：タンパク質トランスフェラーゼとも呼ぶ）が確認され、ラットの脳から特定のPFTが精製により、均質にされた（Reiss Y.らのBioch.Soc.Trans.,20:487〜88（1992年））。酵素は１個のα−サブユニット（49kDa）および１個のβ−サブユニット（46kDa）（これらは共に触媒活性に必要である）からなるヘテロダイマーとして特性付けられた。バクロウイルス系における哺乳動物PFTの高度の発現および活性形態の組換え酵素の精製もまた達成された（Chen W.−J.らのJ.Biol.Chem.,268:9675（1993年））。
上記に鑑みて、発ガン性ラスタンパク質の機能がそれらの翻訳後プロセシングに決定的に依存するという発見はプロセシング酵素の阻害によるガンの化学療法の手段をもたらす。ラスタンパク質へのファルネシル基の付加を触媒するタンパク質：ファルネシルトランスフェラーゼの確認および単離はこのような介在の有望なターゲットを提供する。最近、プロトタイプのPFT阻害剤がラスのプロセシングを阻害し、腫瘍細胞モデルにおいてガン性形態を変えることができるということが確認された（Kohl N.E.らのScience,260:1934（1993年）;James G.L.らのScience,260:1937（1993年）;Garcia A.M.らのJ.Biol.Chem.,268:18415（1993年））。したがって、PFTを遮断することにより突然変異のラスタンパク質を示すガンの細胞増殖の開始を防ぐ、または遅らせることができる。同様の原理により、PFTの阻害により特に天然のラスの発現および／または機能が過剰に刺激される場合に、再狭窄症と関係がある細胞増殖を抑制するための潜在的な手段が得られる。
PCT出願WO 91/16340は式CAAXのPFTのシステイン含有テトラペプチド阻害剤を開示している。
欧州特許出願0461869は式Cys−Aaa¹−Aaa²−XaaのPFTのシステイン含有テトラペプチド阻害剤を開示している。
欧州特許出願0520823は式Cys−Xaa¹−dXaa²−Xaa³のPFTのシステイン含有テトラペプチド阻害剤を開示している。
欧州特許出願0523873は式Cys−Xaa¹−Xaa²−Xaa³のPFTのシステイン含有テトラペプチド阻害剤を開示している。
欧州特許出願0528486は式Cys−Xaa¹−Xaa²−Xaa³−NRR¹のPFTのシステイン含有テトラペプチドアミド阻害剤を開示している。
欧州特許出願0535730は次の２つの式

のPFTのプソイドテトラペプチド阻害剤を開示している。
欧州特許出願0535731（US 5,238,922）は式

のPFTのプソイドテトラペプチドエステル阻害剤を開示している。
欧州特許出願0482539は式

のタキキニンアンタゴニストを開示している。
欧州特許出願0457195は式

のエンドテリンアンタゴニストを開示している。
US 4,022,759は式Ａ−R₁−Tyr（ベンジル）−Ser（ベンジル）−R₂（式中、R₁の定義の１つはHis（ベンジル）である）の黄体形成ホルモン放出因子のトリペプチドアンタゴニストを開示している。
上記の参考文献に開示されている化合物は後記の本発明に見い出される新規な組合せの構造変形を開示または示唆していない。すべての引用文献を参考文献として本明細書に組み込む。
発明の概要
したがって、本発明は式Ｉ

〔式中、ｎは１または２であり、
ＡはCOR³、CO₂R³、CONHR³、CSR³、Ｃ（Ｓ）OR³、Ｃ（Ｓ）NHR³、CF₃SO₂、アリール−SO₂またはアルキル−SO₂であり、ここでR³はアルキル、（CH₂）_ｍ−シクロアルキル、（CH₂）_ｍ−アリール、（CH₂）_ｍ−ヘテロアリールまたは（CH₂）_mO−アルキルであり、そしてｍは０、１、２または３であり；
Ｒは独立してＨまたはMeであり；
Ｙは独立してＨまたはMeであり；
Ｚは独立してＨまたはMeであり；
R¹はＨ、CO−アリール、（CH₂）_ｍ−アリール、Ｏ（CH₂）_ｍ−シクロアルキル、Ｏ（CH₂）_ｍ−アリールまたはＯ（CH₂）_ｍ−ヘテロアリールであり、ここでｍは上記で定義された通りであり、そしてR¹はメタまたはパラ位にあり；
ＸはＨ、アルキル、CF₃、Ｆ、Cl、Br、Ｉ、HO、MeO、NO₂、NH₂、Ｎ（Me）_２、OPO₃H₂またはCH₂PO₃H₂などの１〜４個の置換基であり；
R²はNR（CH₂）_nCO₂R³、NR（CH₂）_nCONHR³、NR（CH₂）_nR³、NR（CH₂）_n+1OR⁴、NR（CH₂）_n+1SR⁴、NRCH（COR⁵）（CH₂）_ｎ−ヘテロアリール、NRCH（COR⁵）（CH₂）_nOR³、NRCH（COR⁵）（CH₂）_nSR³または

であり、ここでＲ、R³およびｎは上記で定義された通りであり、R⁴はＨまたはR³であり、そしてR⁵はOH、NH₂、OR³またはNHR₃である〕の置換されたジまたはトリペプチド化合物、その光学異性体、ジアステレオマーまたは製薬上許容しうる塩である。
本発明はまた、組織増殖性疾患の治療法としてのタンパク質：ファルネシルトランスフェラーゼ酵素の活性を阻害する式Ｉの化合物またはその製薬上許容しうる塩の使用に関する。
本発明の別の態様はガンの治療法としての、有効量の式Ｉの化合物を含有する医薬組成物の使用である。
本発明のさらに別の態様は再狭窄症の治療法としての、有効量の式Ｉの化合物を含有する医薬組成物の使用である。
本発明のさらに別の態様は上記の治療法において単位投与形態の式Ｉの化合物を有効量投与するための医薬組成物である。
本発明の最後の態様は固相合成、液相合成および同時多重合成装置を使用する同時多重合成による式Ｉの化合物の製造法に関する。
好ましい態様の詳述
式Ｉの化合物において、「アルキル」なる用語は１〜６個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の炭化水素基を意味し、例えばメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルなどである。
「シクロアルキル」なる用語は３〜10固の炭素原子を有する未置換の、またはアルキルもしくはアリール基により置換された飽和炭化水素環を意味し、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、アダマンチルなどである。
「アリール」なる用語は未置換の、またはアルキル、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、Ｏ−アリール、OH、SH、Ｆ、Cl、Br、Ｉ、CF₃、NO₂、NH₂、NHCH₃、Ｎ（CH₃）_２、NHCO−アルキル、（CH₂）_mCO₂H、（CH₂）_mCO₂−アルキル、（CH₂）_mSO₃H、（CH₂）_mPO₃H₂、（CH₂）_mPO₃（アルキル）_２、（CH₂）_mSO₂NH₂および（CH₂）_mSO₂NH−アルキル（ここで、アルキルは上記で定義された通りであり、そしてｍは０、１、２または３である）から選択される１〜３個の置換基により置換されたフェニル、５−フルオレニル、１−ナフチルまたは２−ナフチル基である芳香環を意味する。
「ヘテロアリール」なる用語は未置換の、または上記のアリールについての置換基群から選択される１または２個の置換基により置換された２−または３−チエニル、２−または３−フラニル、２−または３−ピロリル、２−、３−または４−ピリジル、２−、３−、４−、５−、６−または７−インドリル基であるヘテロ芳香環を意味する。
次の表に、本発明において使用される略語およびその定義を示す。

〔式中、Ａ′はCO₂R³、CONHR³、Ｃ（Ｓ）NHR³またはアリール−SO₂であり、R³はアルキル、（CH₂）_ｍ−シクロアルキル、（CH₂）_ｍ−アリール、（CH₂）_ｍ−ヘテロアリールであり、そしてｍは０、１、２または３であり；
Ｒは独立してＨまたはMeであり；
Ｙは独立してＨまたはMeであり；
Ｚは独立してＨまたはMeであり；
R¹′は（CH₂）_ｍ−アリール、Ｏ（CH₂）_ｍ−アリール、OPO₃H₂またはCH₂PO₃H₂であり、そしてｍは上記で定義された通りであり；
R²′はNR（CH₂）₂OR⁴、NR（CH₂）₂SR⁴、NRCH（COR⁵）CH₂OR³、NRCH（COR⁵）CH₂SR³または

であり、ここでＲ、R³およびｎは上記で定義された通りであり、R⁴はＨまたはR³であり、そしてR⁵はOH、NH₂、OR³またはNHR³である〕の化合物、その光学異性体、ジアステレオマーまたは薬学的に許容しうる塩である。
他の好ましい本発明の化合物はＡがCO₂R³またはCONHR³である；またはＹおよびＺの少なくとも一方がMeである；またはR²が（CH₂）₂OR⁴またはCH（COR⁵）CH₂OR³である；またはＡがCONHR³であり、R²が（CH₂）₂OR⁴であり、そしてＹおよびＺの少なくとも一方がMeである上記で定義された式Ｉの化合物である。
最も好ましい式Ｉの化合物には次の化合物が含まれる：

式Ｉの化合物の一般的製造法、評価および使用
式Ｉの化合物は適宜にカルボキシル末端への液相修飾を伴って、PAM、MBHAまたはNH₂−リンク樹脂においてBocまたはFmoc保護アミノ酸の活性エステルまたは無水物、酸塩化物、イソシアネート、イソチオシアネートなどを使用してペプチド合成器、例えば応用バイオシステム431Aペプチド合成器での固相ペプチド合成により製造することができる。ペプチドの固相合成法は当業者に広く知られている（例えばJ.M.StewartおよびJ.D.Youngの「固相ペプチド合成」、Pierce Chemical Co.,Rockford,IL（1984年）;Fields G.B.およびNoble R.L.のInt.J.Peptide Protein Res.,35:161〜214（1990年）を参照）。
さらに、式Ｉの化合物は適宜にアミノ酸誘導体の代わりにアミン、酸塩化物、イソシアネートなどを使用して慣用の液相ペプチド合成により製造することもできる。ペプチドの液相合成法は当業者に広く知られている（例えばM.Bodanszkyの「ペプチド合成の原理」、Springer−Verlag（1984年））。
最後に、式Ｉの化合物はS.H.DewittらのProc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6909（1993年）に記載されている、Diversomer^TMという商標の装置（商標および装置の所有権は共にすべてワーナー・ランバート社にある）を使用して、同時多重固相合成により製造することができる。多重固相合成装置は現在、放棄された1992年10月８日出願の米国特許出願番号07/958,383および1993年２月２日に出願した未決の一部継続米国特許出願番号08/012,557の主題である。
例えば（下記のスキームＩ）、DIEAのような立体障害アミンをHClスカベンジャーとして使用して、Fmoc−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CO₂−CH₂CH₂Si（CH₃）_３を２−Cl−Tr樹脂に結合し、Fmoc保護基をピペリジンで除去し、得られる遊離アミノ末端基を一連のイソシアネート、イソチオシアネート、活性エステル、酸塩化物などでアシル化し、TMS−エチルエステルをTBAFで開裂し、得られる遊離カルボキシ末端基をEDAC、DCCまたはDICのようなカルボジイミド試薬で活性化し、活性カルボキシル基をHOBT、NHOSまたはペンタクロロフェノールと反応させて活性エステルとし、この活性エステルを一連のアミンと反応させ、得られる式Ｉの化合物の配列を熱HOAcで、または室温においてTFAで処理することにより樹脂から分離する。
上記の３つの合成法のすべてにおいて、反応性官能基の保護と脱保護、および合成工程の順序が適宜考慮される。通常の保護基の使用に関する知識および複合有機分子の構成の仕方は有機化学分野の当業者の専門的技術の一般的な範囲内にある（例えばT.W.GreeneおよびP.G.M.Wutsの「Protective Groups in Organic Chemistry」、John Wiley ＆ Sons（1991年）;E.J.CoreyおよびX.−M.Chengの「The Logic of Chemical Synthesis」、John Wiley ＆ Sons（1989年）参照）。
得られる化合物の均質性および組成は逆相高速液体クロマトグラフィー（RP−HPLC）、細管電気泳動、薄層クロマトグラフィー（TLC）、プロトン核磁気共鳴スペクトロメトリー（NMR）、アミノ酸分析、高速原子衝撃質量スペクトロメトリー（FAB−MS）およびエレクトロスプレー質量スペクトロメトリー（ES−MS）により確認される。

式Ｉの化合物はさらに、製薬上許容しうる酸付加塩および／または塩基塩とすることができる。これらの形態はすべて本発明の範囲内である。
式Ｉの化合物の製薬上許容しうる酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、沃化水素酸、フッ化水素酸、亜リン酸などのような非毒性の無機酸から誘導された塩、並びに脂肪族のモノおよびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカンジオン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族のスルホン酸などのような非毒性の有機酸から誘導された塩が含まれる。したがって、このような塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、一水素リン酸塩、二水素リン酸塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、沃化物、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などが含まれる。アルギネートなどのようなアミノ酸の塩、グルコン酸塩、ガラクツロン酸塩、ｎ−メチルグルカミンもまた包含される（例えばBerge S.M.らの「Pharmaceutical Salts」、Journal of Pharmaceutical Science,66:1〜19（1977年）参照）。
前記塩基性化合物の酸付加塩は慣用の方法で遊離塩基形態を十分な量の所望の酸と接触させてその塩を生成することにより製造される。好ましくは、式Ｉの化合物は得られるpHが４未満である所望の酸の水溶液で処理することにより酸性塩に変換することができる。溶液をC18カートリッジを通過させて化合物を吸収させ、多量の水で洗浄し、化合物を例えばメタノール、アセトニトリルなどのような極性遊離溶媒で溶離し、そして減圧下で濃縮し、凍結乾燥することにより単離することができる。遊離塩基形態は慣用の方法で、または上記のようにしてその塩形態を塩基と接触させ、遊離塩基を単離することにより再生することができる。遊離塩基形態はそれらのそれぞれの塩形態とは極性溶媒に対する溶解度のようないくつかの物理的性質が幾らか異なるが、本発明の目的に関してこれらの塩はそれぞれの遊離塩基と同等である。
製薬上許容しうる塩基付加塩は金属またはアミン、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属または有機アミンを用いて製造される。カチオンとして使用される金属の例はナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどである。適当なアミンの例はN,N′−ジベンジルエチレンジアミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、エチレンジアミン、Ｎ−メチルグルカミンおよびプロカインである（例えばBerge S.M.らの「Pharmaceutical Salts」、Journal of Pharmaceutical Science,66:1〜19（1977年）参照）。
前記酸性化合物の塩基付加塩は慣用の方法で遊離酸形態を十分な量の所望の塩基と接触させてその塩を生成することにより製造される。好ましくは、式Ｉの化合物は得られるpHが９以上である所望の塩基の水溶液で処理することにより塩基塩に変換することができる。溶液をC18カートリッジを通過させて化合物を吸収させ、多量の水で洗浄し、化合物を例えばメタノール、アセトニトリルなどのような極性有機溶媒で溶離し、そして減圧下で濃縮し、凍結乾燥することにより単離することができる。遊離酸形態は慣用の方法で、または上記のようにしてその塩形態を酸と接触させ、遊離酸を単離することにより再生することができる。遊離酸形態はそれらのそれぞれの塩形態とは極性溶媒に対する溶解度のようないくつかの物理的性質が幾らか異なるが、本発明の目的に関してこれらの塩はそれぞれの遊離酸と同等である。
本発明のいくつかの化合物は非溶媒和形態および溶媒和形態、例えば水和形態で存在する。一般に、溶媒和形態、例えば水和形態は非溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明のいくつかの化合物は１個以上のキラル中心を有し、それぞれの中心はＲ（Ｄ）またはＳ（Ｌ）配置で存在する。本発明はすべてのエナンチオマーおよびエピマー形態、並びに適当なこれらの混合物を包含する。
式Ｉの化合物のPFT阻害活性は7mMのDTT、1.2mMのMgCl₂、0.1mMのロイペプチン、0.1mMのペプスタチンおよび0.2mMのフッ化フェニルメチルスルホニルを含有する30mMのリン酸カリウム緩衝液（pH7.4）で試験した。試験は96穴プレート（Wallec）で行ない、100％DMSO中における式Ｉの化合物からなる様々な濃度の溶液を使用した。両方の基質、放射性標識ファルネシルピロホスフェート（〔１−³H〕、比活性15〜30Ci/ミリモル、最終濃度0.12μＭ）および（ビオチニル）−Ahe−Tyr−Lys−Cys−Val−Ile−Metペプチド（最終濃度0.1μＭ）を加えた後、40倍の精製したラットの脳のファルネシルタンパク質トランスフェラーゼを加えて酵素反応を開始した。37℃で30分間インキュベートした後、1.5Mの酢酸マグネシウム、0.2MのH₃PO₄、0.5％のBSAおよびストレプトアビジンビーズ（Amersham）を含有する1.3mg/mlの濃度の停止緩衝液を用いて2.5倍に希釈することにより反応を終了させた。プレートを室温で30分間放置した後、放射能の量をマイクロベータカウンター（1450型、Wallec）で測定した。式Ｉの化合物はこの試験で0.5nM〜80μＭのIC₅₀値（データ表を参照）を示し、そのためガンおよび再狭窄症を含む組織増殖性疾患の治療において使用されうる有用なタンパク質：ファルネシルトランスフェラーゼ酵素阻害剤である。
選択された式Ｉの化合物のPFTに対するIC₅₀値
実施例番号 IC ₅₀ （μＭ）
1 4.4
4 1.0
5（３） 2.1
5（４） 7.3
5（23） 0.64
5（27） 30
5（28） 0.73
5（30） 73
5（31） 0.76
5（35） 66
5（36） 1.9
5（46） 1.0
5（49） 2.9
5（40） 0.75
5（52） 1.6
5（56） 1.1
5（59） 20
実施例番号 IC ₅₀ （μＭ）
5（60） 1.4
5（61） 7.2
5（62） 1.5
5（63） 1.0
5（64） 1.7
5（69） 0.48
5（79） 3.0
5（80） 1.6
6 0.42
7 0.26
8 0.074
9 0.27
10 0.10
11 0.17
12 0.028
13 0.083
15 30
16 0.60
17 0.039
18 0.82
19 0.31
21 0.31
22 0.37
23 1.9
24 1.0
25 3.7
28 11
29 3.0
本発明の化合物は多種多様の経口的、経腸的および非経口的投与形態で製造し、投与することができる。したがって、本発明の化合物は注射により、すなわち静脈内的に、筋肉内的に、皮内的に、皮下的に、十二指腸内的に、または腹腔内的に投与することができる。また、本発明の化合物は吸入により、例えば鼻内的に投与することができる。さらに、本発明の化合物は経皮的に投与することができる。下記の投与形態が活性成分として式Ｉの化合物または対応する式Ｉの化合物の製薬上許容しうる塩を含有することは、当業者には明らかであろう。
本発明の化合物から医薬組成物を製造する場合、製薬上許容しうる担体は固体または液体である。固体状の製剤には、散剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、カシエ剤、座剤および分散性顆粒剤が含まれる。固体状担体は希釈剤、芳香剤、結合剤、保存剤、錠剤崩壊剤または封入剤としても作用する１種以上の物質であってよい。
散剤において、担体は微細な活性成分と混合される微細な固体である。
錠剤において、活性成分は必要な結合性を有する担体と適当な割合で混合され、所望の形と大きさに圧縮される。
散剤および錠剤は好ましくは５または10〜約70％の活性化合物を含有する。適当な担体は炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖、ラクトース、ペクチン、デキストリン、スターチ、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、低融点ろう、カカオ脂などである。「製剤」なる用語は活性成分が他の担体と共に、または他の担体を含まずにある担体により取り囲まれ、すなわち担体と一体となっているカプセル剤を提供する、担体として封入剤を用いた活性化合物の配合物を包含する。同様に、カシエ剤およびトローチ剤もまた包含される。錠剤、散剤、カプセル剤、丸剤、カシエ剤およびトローチ剤は経口投与に適した固体投与形態として使用することができる。
座剤の製造において、脂肪酸グリセリドの混合物またはカカオ脂のような低融点ろうが最初に溶融され、その中に活性成分が撹拌により均一に分散される。次に溶融均質混合物は都合のよい大きさの型に注ぎ込まれ、冷却され、それにより固化される。
液状製剤には、液剤、懸濁剤および乳剤、例えば水またはプロピレングリコール水溶液が含まれる。注射剤では、液状製剤はポリエチレングリコール水溶液を用いて溶液として製剤化されうる。
経口的に使用するのに適した水性液剤は活性成分を水に溶解し、所望により適当な着色剤、芳香剤、安定剤および濃稠化剤を加えることにより製造することができる。
経口的に使用するのに適した水性懸濁剤は天然または合成ゴム、樹脂、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロースおよび他のよく知られている懸濁化剤のような粘稠な物質と共に微細な活性成分を水に分散させることにより製造することができる。
経口的に投与するために使用直前に液状製剤に変える固体状製剤もまた包含される。このような液状形態には、溶液、懸濁液および乳濁液が含まれる。これらの製剤は活性成分の他に、着色剤、芳香剤、安定剤、緩衝剤、人工および天然の甘味剤、分散剤、濃稠化剤、可溶化剤などを含有してもよい。
医薬製剤は好ましくは単位投与形態である。このような形態では、製剤は適当な量の活性成分を含有する単位投与量に小分けされる。単位投与形態は、パッケージが個別の量の製剤を含有するようなパッケージ製剤であり、例えば分包錠剤、カプセル剤およびバイアルまたはアンプル中の散剤であってよい。また、単位投与形態はカプセル剤、錠剤、カシエ剤またはトローチ剤そのもの、あるいはこれらの何れかが適当な数封入されたパッケージ形態であってよい。
単位投与製剤中の活性成分の量は特定の用途および活性成分の効力に応じて0.1mg〜100mg、好ましくは0.5mg〜100mgの範囲内で変化し、またはその範囲内に調整することができる。所望により、本組成物はさらに他の相溶性治療剤を含有してもよい。
PFT阻害剤として治療的に使用する場合、本発明の治療法において使用される化合物は１日あたり約0.01mg/kg〜約20mg/kgの初期投与量で投与される。１日の投与量範囲は約0.01mg/kg〜約10mg/kgが好ましい。しかしながら、投与量は患者における必要性、治療する症状の程度および使用する化合物に応じて変化する。特定の状況における適当な投与量の決定は当業者に委ねられる。一般に、治療は化合物の最適投与量よりも少ない投与量で開始される。その後、投与量はその環境下で最適な効果が達成されるまで少しずつ増加される。好都合には、１日の全投与量は分割され、所望により１日の間に何回かに分けて投与される。
次の実施例で本発明の化合物の好ましい製造法を説明するが、本発明はこれらに限定されない。さらに明瞭にするため、式Ｉの化合物を表わす複雑な化学名の後に省略構造を中括弧内に示す。構造の構成要素は上記の略語表で定義された通りである。
実施例１
Ｎ_α−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンアミド｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CONH₂｝
ABI 431A型固相ペプチド合成器を使用して、Fmoc−NH₂−リンク樹脂（0.25ミリモルスケール）をNMP中の20％ピペリジンで処理してNH₂−リンク樹脂を得た。カップリング工程で４倍過剰の試薬を使用して、Fmoc−保護Ser（OBn）およびTyr（OBn）の逐次カップリング（NMP中のDCCおよびHOBT）およびFmocの脱保護（NMP中の20％ピペリジン）反応を行ない、そして慣用の樹脂洗浄サイクルに付してTyr（OBn）−Ser（OBn）−CONH₂−リンク樹脂を得た。このジペプチド樹脂を器具が取り付けられていない反応容器に移し、４倍過剰のCbz−His、DCCおよびDMF中のHOBTで処理し、室温で一晩振とうした。過剰の試薬を除去した後、得られる置換トリペプチドを室温においてDCM中の50％TFAで2.5時間処理することにより樹脂から分離した。溶媒を蒸発させ、逆相クロマトグラフィー（C₁₈−カラム、20〜70％勾配のMeCN水溶液（両方の溶媒を0.1％TFAで酸性にした）で溶離した）により精製し、凍結乾燥してCbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CONH₂をそのTFA塩として得た。ES−MS:719（ｍ＋１）。
同様の方法を使用して、Ｃ−末端にカルボキサミドを有する下記の最も好ましい式Ｉの化合物を製造することができる：

実施例２
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリン｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）｝
PAM樹脂またはHMP樹脂で開始し、実施例１に記載の脱保護およびカップリング条件を使用してFmoc−Ser（OBn）、Fmoc−Tyr（OBn）およびCbz−Hisを逐次カップリングした。樹脂からの分離はPAMで支持されたトリペプチドについてはCF₃SO₂Hを用いて、またはHMPで支持されたトリペプチドについてはDCM中の50％TFAを用いて処理することにより行なった。実施例１のようにしてクロマトグラフィーを行ない、凍結乾燥してCbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）をそのTFA塩として得た。液相法については実施例７を参照。
同様の方法を使用して、遊離カルボキシル末端基を有する下記の最も好ましい式Ｉの化合物を製造することができる：

実施例３
固相で支持されたＮ−〔Ｎ−〔（9H−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシン２−トリメチルシリルエチルエステル｛Fmoc−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS｝
工程1.Boc−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS
２−トリメチルシリルエタノール（2.6g、22.6ミリモル）を乾燥THF（25ml）中におけるEDAC（4.3g、22.6ミリモル）、DMAP（0.5g）およびBoc−Tyr（OBn）−OH（7.0g、18.8ミリモル）の予備混合溶液に加えた。得られる混合物を室温で18時間撹拌した。溶液を1:1のEtOAc:Et₂O（40ml）で希釈し、飽和NaHCO₃水溶液（２×10ml）および飽和NaCl水溶液（２×10ml）で洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、濾過し、そして真空濃縮して油状物を得、それをさらにフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、EtOAc:ヘキサン溶離剤）により精製して純粋なTMS−エチルエステルを油状物として得た。
¹H NMR（HCDCl₃）：δ0.04（s,9H）,1.43（s,9H）,3.03（m,2H）,4.22（m,2H）,4.51（m,1H）,4.95（m,1H）,5.05（s,2H）,6.85−7.48（m,9H）
工程2.Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS
CH₂Cl₂（20ml、v/v）中の80％TFAをCH₂Cl₂（40ml）中におけるBoc−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS（14.8g、31.4ミリモル）の氷***液に加えた。得られる混合物を1.0分間撹拌し、真空濃縮した。その操作をもう１度繰り返し、得られる残留物をCH₂Cl₂および飽和NaHCO₃水溶液で希釈した。得られる混合物をセライトを通して濾過した。次に、有機層を分離し、飽和NaCl水溶液で洗浄し、そして乾燥（MgSO₄）した。濾過および真空濃縮により油状物を得、それをさらにフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して所望の生成物を得た。
¹H NMR（HCDCl₃）：δ0.06（s,9H）,1.68（br s,2H）,2.85−3.03（m,2H）,3.67（m,1H）,4.22（m,2H）,5.05（s,2H）,6.91−7.45（m,9H）
工程3.Fmoc−His（Tr）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS
DMF（10ml）中におけるHOBT（2.6g、19.3ミリモル）の溶液に、Fmoc−His（Tr）（10.0g、16.1ミリモル）、次にEDAC（3.7g、19.3ミリモル）を加えた。混合物を室温で20分間撹拌し、DMF（10ml）中におけるTyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS（上記の工程２から、5.8g、16.1ミリモル）の溶液を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、水および1:1のEt₂O:EtOAc（50ml）の混合物に分配した。層を分離し、有機相を飽和NaCl水溶液（４×20ml）で洗浄し、そして乾燥（MgSO₄）した。濾過および真空濃縮により油状物を得、それをさらにフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して保護His−Tyrジペプチドを得た;FAB−MS 974（ｍ＋１）。
工程4.Fmoc−His−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS
Fmoc−His（Tr）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS（上記の工程３から、5.0g、5.1ミリモル）をMeOH（20ml）中のピリジン・HCl（1.0g）で処理した。混合物を65℃で８時間撹拌した。溶液を真空濃縮し、残留物をCH₂Cl₂に溶解し、水（１回）、飽和NaHCO₃水溶液（２回）で洗浄し、そして乾燥（MgSO₄）した。濾過および真空濃縮により油状物を得、それをさらにフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製してFmoc−His−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂STMSを白色の固体として得た;FAB−MS 731（ｍ＋１）。
工程5.Fmoc−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS
CHCl₃（20ml）中におけるFmoc−His−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS（上記の工程４から、5.3g、7.3ミリモル）の懸濁液に、２−クロロトリチルクロライド樹脂（Novabiochem）（7.1g）、水にDIEA（0.96g、7.4ミリモル）を加えた。得られる混合物を簡単な音波処理に付して樹脂を分散させ、振とう機で2.0時間撹拌した。変性樹脂を濾過により集め、DMF（２回）、MeOH（２回）、CHCl₂（２回）で洗浄し、そして18時間真空乾燥して10.5g（約１ミリモル/gの樹脂に相当する量）を得た。
実施例４
Ｎ−〔３−フェノキシプロピル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｎ_α−〔Ｎ−〔〔（フェニルメチル）アミノ〕カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｌ−チロシンアミド｛BnNHCO−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh｝
Fmoc−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMS（上記の実施例３から、2.0g）をDMF中の20％ピペリジンに懸濁した。得られる懸濁液を音波処理に10分間付し、30分間振とうすることにより撹拌した。樹脂を濾過し、DMF（３回）で洗浄した。樹脂を再び同じ反応条件に20分間付した。樹脂を濾過し、DMF（４回）およびCHCl₃（３回）で洗浄してHis（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMSを得、それをDCM（10ml）に懸濁し、30分間振とうすることにより撹拌し、ベンジルイソシアネート（1.1g、8.0ミリモル）で処理し、そしてさらに30分間撹拌した。樹脂を濾過し、DCM（３回）で洗浄し、DCMに再懸濁し、そしてベンジルイソシアネート処理を繰り返した。樹脂を濾過し、DMF（２回）およびCHCl₃（５回）で洗浄してBnNHCO−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CO₂CH₂CH₂TMSを得、それを4:3のジオキサン:MeOHの混合物（14ml）に懸濁し、THF中の1.0M TBAF（2.0ml、2.0ミリモル）で処理した。懸濁液を18時間振とうすることにより撹拌し、濾過し、そしてジオキサンおよび10％クエン酸の2:1混合物（３×10ml）、ジオキサン:MeOH（３×10ml）、ジオキサン（３×10ml）およびCHCl₃（３×10ml）で連続的に洗浄してBnNHCO−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）を得た。BnNHCO−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）をDMF（10ml）に懸濁し、DIC（0.2g、1.6ミリモル）およびHOBT（0.22g、1.6ミリモル）のようなカルボジイミドカップリング試薬で処理した。得られる混合物を30分間撹拌し、３−フェノキシプロピルアミン（0.24g、1.6ミリモル）を加えた。得られる混合物を18時間振とうし、樹脂を濾過し、そしてDMF（３回）およびCHCl₃（３回）で洗浄した。樹脂をDMF（10ml）に懸濁し、カルボジイミド/HOBT/3−フェノキシプロピルアミンカップリング反応を繰り返した。18時間後、樹脂を濾過し、それぞれ10mlのMeOH（２回）、DCM（３回）、DMF（２回）、MeOH（２回）およびCHCl₃（２回）で洗浄してBnNHCO−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhを得た。高度に置換されたジペプチドをDCM中の40％TFAで処理し、室温で１時間振とうすることにより樹脂から分離した。遊離ジペプチドを含有する上澄みを濾過して樹脂を取り除き、樹脂をDCM（６回）で洗浄した。合一した上澄みおよび洗浄液を真空濃縮してBnNHCO−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh・TFAを得た。生成物を水およびDCMに分配し、両方の層に飽和NaHCO₃水溶液を滴加して処理し、水層を塩基性にした。層を分離し、有機相を飽和NaCl水溶液で洗浄し、そして乾燥（MgSO₄）した。濾過および濃縮により、BnNHCO−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhを得た。ES−MS 675（ｍ＋１）。
実施例５
同時多重固相合成
実施例４に記載の方法はS.H.DeWittらのProc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6909（1993年）に記載されているDiversomer装置を使用する同時多重合成において採用することができる。実施例３の工程３でFmoc−His（Tr）の代わりにFmoc−Ｄ−His（Tr）を使用して製造したFmoc−Ｄ−His（２−Cl−Tr樹脂）−Tyr（OBn）−CO₂iPr（100〜200mg）を40個の気体分散管のそれぞれに入れ、そしてこれらの管をDiversomer装置に置いた。その後、次のアシル化剤およびアミンを様々に組合わせて使用して、実施例４に記載の脱保護およびカップリング反応を逐次行なった。
アミン化剤
１） ベンジルイソシアネート
２） ｐ−トルエンスルホニルクロライド
３） シクロヘキシルイソシアネート
４） フェニルイソシアネート
５） ｉ−プロピルイソシアネート
６） ｎ−ブチルイソシアネート
７） ４−クロロフェニルイソシアネート
８） １−ナプチルイソシアネート
９） ３−メトキシプロピルイソシアネート
10） ４−エトキシフェニルイソシアネート
11） ２−フェネチルイソシアネート
12） ３−フェニルプロピオニルクロライド
14） フェニルアセチルクロライド
15） ４−フェノキシフェニルイソシアネート
16） ベンジルクロロホルメート
17） （トランス）−２−フェニルシクロプロピルイソシアネート
18） １−アダマンチルクロロホルメート
アミン
１） ３−フェノキシプロピルアミン
２） ２−（フェニルメトキシ）エチルアミン
３） ２−〔（フェニルメチル）チオ〕エチルアミン
４） ４−フェニルブチルアミン
５） ３−（２−メトキシフェニル）プロピルアミン
６） １−ベンジルピペラジン
７） ｏ−ベンジル−ヒドロキシルアミン
８） メチオニンメチルエステル
９） ベンジルアミン
10） ２−フェニルエチルアミン
配列1.実施例４に記載のようにして樹脂から分離し、後処理した後、次の式Ｉの置換ジペプチド（１〜40）を製造した：

配列2.実施例４に記載のようにして樹脂から分離し、後処理した後、次の式Ｉの置換ジペプチド（41〜80）を製造した：

実施例６
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
工程1.Boc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
EtOAc（30ml）中におけるBoc−Tyr（OBn）（1.88g、6.50ミリモル）の溶液に０℃で、HOBT水和物（1.19g、7.80ミリモル）、次にDCC（1.61g,7.80ミリモル）を加えた。EtOAc（20ml）中におけるSer（OBn）−CO₂Me・TFA（2.1g、6.50ミリモル）の溶液、次にEt₃M（1.09ml、7.80ミリモル）を加えた。混合物を室温まで加温し、一晩撹拌した。混合物を濾過し、EtOAcで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液、ブラインで２回洗浄し、MgSO₄で乾燥し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（40％EtOAc/ヘキサン）により、2.67g（73％）の表題化合物を白色の固体として得た。融点81〜84℃
工程2.Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・TFA
Boc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の工程１から、2.64g、4.69ミリモル）をCH₂Cl₂（15ml）に溶解し、０℃まで冷却し、そしてTFA（5ml）を加えた。溶液を室温まで加温し、４時間撹拌した。溶液を濃縮し、CH₂Cl₂に取り、そして２回濃縮した。得られる油状物をエーテルで摩砕して2.7gの表題化合物を白色の固体として得た。
工程3.Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
DMF（15ml）中におけるCbz−His（1.00g、3.47ミリモル）の溶液に０℃で、HOBT（0.64g、4.16ミリモル）およびDCC（0.86g、4.16ミリモル）を加えた。Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・TFA（上記の工程２から、2.0g、3.47ミリモル）の溶液、次にEt₃N（0.58ml、4.16ミリモル）を加えた。混合物を室温まで加温し、一晩撹拌した。混合物を濾過し、濾液をCHCl₃で希釈し、飽和NaHCO₃水溶液、ブラインで２回洗浄し、MgSO₄で乾燥し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２〜５％MeOH/CHCl₃）により、2.14gの表題化合物を白色の固体として得た。融点175〜176℃;FAB−MS 734（ｍ＋１）。
元素分析値（C₄₁H₄₃N₅O₈として）：
理論値:C 67.11％ H 5.91％ N 9.54％
実測値:C 66.96％ H 6.01％ N 9.41％
実施例７
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリン｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）｝
THF（50ml）およびMeOH（15ml）中におけるCbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の実施例６から、2.02g、2.75ミリモル）の溶液に０℃で、0.1N LiOH（30.3ml、3.03ミリモル）を加えた。溶液を０℃で６時間撹拌し、濃縮した。水を加え、pHを1N HClで４〜５に調整した。混合物を濾過し、固体を集め、乾燥して1.55g（78％）の表題化合物を白色の固体として得た。融点187〜192℃;ES−MS 720（ｍ＋１）。
元素分析値（C₄₀H₄₁N₅O₈・1.5H₂Oとして）：
理論値:C 64.33％ H 5.94％ N 9.38％
実測値:C 64.29％ H 5.73％ N 9.15％
実施例８
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−Ｄ−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
工程1.Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・HCl
EtOAc中におけるBoc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の実施例６、工程１から、9.90g、17.6ミリモル）の溶液を０℃まで冷却した。無水HCl気体を***液中で５分間泡立たせた。溶液を室温まで加温し、一晩撹拌した。溶液を濃縮し、EtOAcに取り、そして再濃縮して8.75gの表題化合物を泡状物として得た。CI−MS 463（ｍ＋１）。
工程2.Cbz−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
実施例６、工程３に従って、Cbz−Hisの代わりにCbz−Ｄ−His（Tr）を、そしてTyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・THFの代わりにTyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・HClを使用して表題化合物を白色の固体として得た。融点78〜88℃;FAB−MS 976（ｍ＋１）。
工程3.Cbz−Ｄ−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
HOAc:水（4:1、2ml）中におけるCbz−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の工程２から、0.27g、0.28ミリモル）の溶液を80℃で５分間撹拌し、室温まで冷却した。溶液をEtOAcおよび飽和NaHCO₃水溶液に分配した。有機相をブラインで洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２〜５％MeOH:CHCl₃）により、0.10gの表題化合物を泡状物として得た。FAB−MS 734（ｍ＋１）。
実施例９
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｄ−セリンメチルエステル｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ｄ−Ser（OBn）−CO₂Me｝
実施例６に従って、工程１でSer（OBn）−CO₂Me・TFAの代わりにＤ−Ser（OBn）−CO₂Me・TFAを使用して表題化合物を得た。融点168〜170℃;FAB−MS 734（ｍ＋１）。
実施例10
Ｎ−〔α−メチル−Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−DL−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−His−DL−（α−Me）Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
実施例６に従って、工程１でBoc−Tyr（OBn）の代わりにBoc−DL−（α−Me）Tyr（OBn）を使用して表題化合物を得た。FAB−MS 748（ｍ＋１）。
実施例11
Ｎ−エチル−Ｎ_α−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンアミド｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CONHEt｝
実施例６に従って、工程２でBoc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meの代わりにBoc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CONHEtを使用して表題化合物を得た。融点182〜188℃;FAB−MS 747（ｍ＋１）。
実施例12
Ｎ−エチル−Ｎ_α−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンアミド｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CONHEt｝
実施例６に従って、工程２でBoc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meの代わりにBoc−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CONHEtを、そして工程３でCbz−Hisの代わりにCbz−Ｄ−Hisを使用して表題化合物を得た。融点193〜196℃;ES−MS 747（ｍ＋１）。
実施例13
Ｎ−〔Ｎ−〔１−メチル−Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−His（１−Me）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
工程1.Cbz−His（１−Me）
ベンジルクロロホルメート（0.24ml、1.7ミリモル）をTHF（5ml）およびNaHCO₃水溶液（5ml）中における１−メチル−Ｌ−ヒスチジン（0.25g、1.5ミリモル）のスラリーに０℃で滴加した。混合物を室温まで加温し、一晩撹拌した。混合物を濃縮し、水で希釈し、エーテルで洗浄し、そしてpHを1N HClで６〜７に調整した。混合物を濃縮し、CHCl₃（150ml）およびMeOH（15ml）で希釈し、そして１時間撹拌した。混合物を乾燥（MgSO₄）し、濃縮して0.48gの表題化合物を得、それをさらに精製することなく使用した。
工程2.Cbz−His（１−Me）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
CH₂Cl₂中におけるCbz−His（１−Me）（上記の工程１から、0.36g、1.2ミリモル）、Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・HCl（上記の実施例８、工程１から、0.60g、1.2ミリモル）、DCC（0.30g、1.4ミリモル）およびHOBT（0.19g、1.4ミリモル）のスラリーに、Et₃N（0.17ml、1.2ミリモル）を加え、混合物を室温で一晩撹拌した。混合物をCHCl₃で希釈し、飽和NaHCO₃水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１％MeOH:CHCl₃）により、表題化合物を白色の固体として得た。融点161.5〜163.5℃;FAB−MS 748（ｍ＋１）。
実施例14
Ｎ−〔Ｎ−〔１−メチル−Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−Ｄ−His（１−Me）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
実施例13に従って、１−メチル−Ｌ−ヒスチジンの代わりに１−メチル−Ｄ−ヒスチジンを使用して表題化合物を得た。FAB−MS 748（ｍ＋１）。
実施例15
Ｎ−〔Ｌ−２−アミノ−Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕−４−〔４−（フェニルメトキシ）フェニル〕ブタノイル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−Ｄ−His−ホモTyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
実施例６に従って、工程１でBoc−Tyr（OBn）の代わりにBoc−ホモTyr（OBn）を使用し、そして工程３でCbz−Hisの代わりにCbz−Ｄ−Hisを使用して表題化合物を得た。FAB−MS 748（ｍ＋１）。
実施例16
Ｎ−〔４−フェニル−Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｌ−フェニルアラニル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛Cbz−His−Phe（４−Ph）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
実施例６に従って、工程１でBoc−Tyr（OBn）の代わりにBoc−Phe（４−Ph）を使用して表題化合物を得た。融点184〜187℃。FAB−MS 704（ｍ＋１）。
実施例17
Ｎ−〔Ｏ−（フェニルメチル）−Ｎ−〔Ｎ−〔〔（フェニルメチル）アミノ〕カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−セリンメチルエステル｛BnNHCO−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
工程1.Fmoc−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
実施例13、工程２に従ってCbz−His（１−Me）の代わりにFmoc−His（Tr）を使用して表題化合物を得た。融点82〜92℃。
工程2.His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
ピペリジン（4.0ml）をCH₂Cl₂（20ml）中におけるFmoc−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の工程１から、1.85g、1.74ミリモル）のスラリーに加えた。溶液を室温で２時間撹拌し、濃縮した。残留物をEtOAc（150ml）に取り、水（３×50ml）で洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、そして濃縮した。得られる油状物をEt₂O/ヘキサンで摩砕した。残留物のフラッシュクロマトグラフィー（２％MeOH/CHCl₃）により、1.03gの表題化合物を泡状物として得た。融点61.5〜70℃;ES−MS 843（ｍ＋１）。
工程3.BnNHCO−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
ベンジルイソシアネート（0.053ml、0.43ミリモル）をEtOAc（5ml）中におけるHis（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の工程２から、0.33g、0.39ミリモル）の溶液に一度で加えた。得られるスラリーを室温で３時間撹拌し、濃縮して表題化合物（0.4g）を得、それをさらに精製することなく使用した。
工程4.BnNHCO−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
実施例８に従って、Cbz−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meの代わりにBnNHCO−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meを使用して表題化合物を得た。融点196.5〜199℃;ES−MS 733（ｍ＋１）。
実施例18
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（１−オキソ−３−フェニルプロピル）−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−セリンメチルエステル｛PhCH₂CH₂CO−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me｝
工程1.PhCH₂CH₂CO−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
THF（5ml）中におけるHis（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me（上記の実施例17、工程２から、0.33g、0.39ミリモル）の冷却（０℃）溶液に、Et₃N（0.06ml、0.43ミリモル）、次にフェニルプロピオニルクロライド（0.064ml、0.43ミリモル）を加えた。得られるスラリーを室温まで戻し、一晩撹拌した。混合物をEtOAcおよび飽和NaHCO₃水溶液に分配した。有機層をブラインで洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、そして濃縮して表題化合物を固体として得、それをさらに精製することなく使用した。
工程2.PhCH₂CH₂CO−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me
実施例８、工程３に従って、Cbz−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meの代わりにPhCH₂CH₂CO−His（Tr）−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meを使用して表題化合物を得た。融点193〜196.5℃;ES−MS 732（ｍ＋１）。
実施例19
Ｎ_α−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｎ−〔２−（フェニルメトキシ）エチル〕−Ｌ−チロシンアミド｛Cbz−His−Tyr（OBn）−CONHCH₂CH₂OBn｝
工程1.Cbz−His−Tyr（OBn）−CO₂Me
実施例６、工程３に従って、Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Me・TFAの代わりにTyr（OBn）−CO₂Me・TFAを使用して表題化合物を白色の粉末として得た。融点145〜148℃;CI−MS 557（ｍ＋１）。
工程2.Cbz−His−Tyr（OBn）
実施例７に従って、Cbz−His−Tyr（OBn）−Ser（OBn）−CO₂Meの代わりにCbz−His−Tyr（OBn）−CO₂Meを使用して表題化合物を白色の粉末として得た。融点79〜92℃;CI−MS 543（ｍ＋１）。
工程3.Cbz−His−Tyr（OBn）−CONHCH₂CH₂OBn
DMF（4ml）中におけるCbz−His−Tyr（OBn）（上記の工程２から、0.43g、0.79ミリモル）の溶液に０℃で、HOBT（0.15g、0.95ミリモル）およびDCC（0.20g、0.95ミリモル）を加えた。DMF（1ml）中における２−（フェニルメトキシ）エチルアミン（0.12g、0.79ミリモル）の溶液を加えた。混合物を室温まで加温し、一晩撹拌した。混合物を濾過し、CHCl₃で希釈し、飽和NaHCO₃水溶液で２回洗浄し、ブラインで洗浄し、MgSO₄で乾燥し、そして濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（３〜５％MeOH/CHCl₃）により、0.34g（63％）の表題化合物を白色の固体として得た。融点136〜150℃;FAB−MS 676（ｍ＋１）。
元素分析値（C₃₉H₄₁N₅O₆として）：
理論値:C 69.32％ H 6.12％ N 10.36％
実測値:C 69.43％ H 6.24％ N 10.45％
実施例20
Ｎ_α−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕Ｎ−〔２−（フェニルメトキシ）エチル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシンアミド｛Cbz−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONHCH₂CH₂OBn｝
実施例６に従って、工程１でSer（OBn）・TFAの代わりに２−（フェニルメトキシ）エチルアミンを使用し、Et₃Nを省略し、そして工程３でCbz−Hisの代わりにCbz−Ｄ−His−を使用して表題化合物を製造した。融点161〜165℃;FAB−MS 676（ｍ＋１）。
実施例21
Ｎ_α−〔Ｎ−メチル−Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕−Ｎ−〔２−（フェニルメトキシ）エチル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシンアミド｛Cbz−Ｄ−His−（Ｎ−Me）Tyr（OBn）−CONHCH₂CH₂OBn｝
実施例20に従って、Boc−Tyr（OBn）の代わりにBoc−（Ｎ−Me）Tyr（OBn）を使用して表題化合物を得た。融点64〜78℃;ES−MS 690（ｍ＋１）。
実施例22
Ｎ_α−〔α−メチル−Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｄ−ヒスチジル〕−Ｎ−〔２−（フェニルメトキシ）エチル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシンアミド｛Cbz−Ｄ−His−（α−Me）Tyr（OBn）−CONHCH₂CH₂OBn｝
実施例20に従って、Boc−Tyr（OBn）の代わりにBoc−（α−Me）Tyr（OBn）を使用して表題化合物を得た。融点66〜78℃;ES−MS 690（ｍ＋１）。
実施例23
Ｎ−（２−フェニルエチル）−Ｎ_α−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシンアミド｛Cbz−His−Tyr（OBn）−CONHCH₂CH₂Ph｝
実施例19、工程３に従って、２−（フェニルメトキシ）エチルアミンの代わりに２−フェニルエチルアミンを使用して表題化合物を白色の固体として得た。融点188〜189.5℃;FAB−MS 646（ｍ＋１）。
実施例24
Ｎ−〔Ｎ−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｌ−チロシル〕−３−（３−ピラジニル）−Ｌ−アラニンメチルエステル｛Cbz−His−Tyr（OBn）−Pyr−CO₂Me｝
実施例19、工程３に従って、２−（フェニルメトキシ）エチルアミンの代わりにPyr−CO₂Meを使用して表題化合物を白色の固体として得た。融点180〜182.5℃（分解）;FAB−MS 705（ｍ＋１）。
実施例25
（S,R）−Ｎ−〔２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−１−（３−フェノキシ−プロピルカルバモイル）−エチル〕−２−〔３−（４−エトキシ−フェニル）−ウレイド〕−３−（3H−イミダゾール−４−イル）−プロピオンアミド｛（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh｝
工程1.Boc−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh
２−（フェニルメトキシ）エチルアミン（0.81g、5.4ミリモル）を乾燥DMF（15ml）中におけるEDAC（1.2g、6.5ミリモル）、HOBT（0.87g、6.5ミリモル）およびBoc−Tyr（OBn）−OH（2.0g、5.4ミリモル）の予備混合溶液に加えた。得られる混合物を室温で18時間撹拌した。溶液を1:1のEtOAc:Et₂O（40ml）で希釈し、飽和NaCl水溶液（４×10ml）で洗浄し、乾燥（MgSO₄）し、濾過し、そして真空濃縮して固体を得、それをヘキサンで摩砕することによりさらに精製して純粋な生成物を得た。融点145〜146℃。
工程2.Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh
乾燥HCl気体をMeOH（15ml）中におけるBoc−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh（上記の工程１から、2.0g、3.9ミリモル）の氷***液中で４分間泡立たせた。得られる混合物を０℃で１時間撹拌し、室温まで加温し、そして１時間撹拌した。溶液を真空濃縮して固体を得、それをエーテルで摩砕してTyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh・HClを得た;CI−MS 405（ｍ＋１）。表題化合物をCHCl₃に懸濁し、氷浴中で冷却し、そしてNH₃気体を混合物中で２分間泡立たせた。NH₄Clを濾去し、上澄みを真空濃縮して表題化合物の遊離塩基を得、それをさらに精製することなく次の工程で使用した。
工程3.Fomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh
DMF（10ml）中におけるHOBT（0.48g、3.5ミリモル）の溶液にFomc−Ｄ−His（Tr）−CO₂H（2.0g、3.2ミリモル）、次にEDAC（0.67g、3.5ミリモル）を加えた。混合物を室温で20分間撹拌し、DMF（10ml）中におけるTyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh（上記の工程２から、1.4g、3.2ミリモル）の溶液を加えた。混合物を室温で一晩撹拌し、水（20ml）および1:1のEt₂O:EtOAc（50ml）の混合物に分配した。層を分離し、有機相を飽和NaCl水溶液（４×20ml）で洗浄し、乾燥（MgSO₄）した。濾過し、真空濃縮して油状物を得、それをさらにフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して保護His−Tyrジペプチドを得た;FAB−MS 1006（ｍ）。
工程4.D−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh
CH₂Cl₂（5ml）中のFomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh（上記の工程３から、1.0g、0.99ミリモル）をピペリジン（0.18g、2.1ミリモル）で処理した。得られる混合物を２時間撹拌し、真空濃縮し、得られる油状物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhを得た;ES−MS 784（ｍ＋１）。
工程5.（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh
CH₂Cl₂（5ml）中のＤ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh（上記の工程４から、0.55g、0.7ミリモル）を４−エトキシフェニルイソシアネート（0.1g、0.7ミリモル）で処理した。得られる混合物を室温で１時間撹拌した。真空濃縮した。得られる油状物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhを得た;ES−MS 947（ｍ＋１）。
工程6.（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh
MeOH（5ml）中の（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh（上記の工程５から、0.5g、0.52ミリモル）をピリジン・HCl（触媒量）で処理した。得られる混合物を65℃で６時間撹拌した。真空濃縮して油状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して（４−EtO−Ph）NHCO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhを得た。融点185〜187℃;ES−MS 705（ｍ＋１）。
実施例26
（S,R）−Ｎ−｛２−（４−ベンジルオキシ−フェニル）−１−〔３−（２−メトキシ−フェニル）−プロピルカルバモイル〕−エチル｝−３−（3H−イミダゾール−４−イル）−２−フェニルアセチルアミノ−プロピオンアミド｛PhCH₂CO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）｝
工程1.Boc−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）
実施例25、工程１に従って、２−（フェニルメトキシ）エチルアミンの代わりに３−（２−メトキシフェニル）プロピルアミンを使用して表題化合物を白色の固体として得た。融点125〜126.5℃。
工程2.Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）
実施例25、工程２に従って、Boc−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにBoc−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）を使用して表題化合物を白色の固体として得た;CI−MS 419（ｍ＋１）。
工程3.Fomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）
実施例25、工程３に従って、Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにTyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）を使用して表題化合物を泡状物として得た;ES−MS 1020（ｍ）。
工程4.D−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）
実施例25、工程４に従って、Fomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにFomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）を使用して表題化合物を白色の泡状物として得た;ES−MS 798（ｍ＋１）。
工程5.PhCH₂CO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）
CH₂Cl₂（5ml）中におけるＤ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）（0.4g、0.5ミリモル）の溶液に、Ｎ−メチルモルホリン（0.05g、0.5ミリモル）、次にフェニルアセチルクロライド（0.08g、0.5ミリモル）を加えた。得られる混合物を室温で２時間撹拌した。DCMで希釈し、飽和NaHCO₃水溶液、飽和NaCl水溶液で洗浄し、そして乾燥（MgSO₄）した。フラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製した。表題化合物を泡状物として得た;FAB−MS 916（ｍ）。
工程6.PhCH₂CO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）
実施例25、工程６に従って、（４−EtOPh）NHCO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにPhCH₂CO−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）_３（２−MeOPh）を使用して表題化合物を白色の泡状物として得た;ES−MS 674（ｍ＋１）。
実施例27
（S,R）−Ｎ−〔２−（４−ベンジルオキシフェニル）−１−フェネチルカルバモイル−エチル〕−３−（3H−イミダゾール−４−イル）−２−〔３−（４−フェノキシ−フェニル）−ウレイド〕−プロピオンアミド｛（４−PhOPh）NHCO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph｝
工程1.Boc−Tyr（OBn）CONH（CH₂）₂Ph
実施例25、工程１に従って、２−（フェニルメトキシ）エチルアミンの代わりにフェネチルアミンを使用して表題化合物を白色の固体として得た;CI−MS 475（ｍ＋１）。
工程2.Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph
実施例25、工程２に従って、BocTyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにBocTyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Phを使用して表題化合物を白色の固体として得た;CI−MS 375（ｍ＋１）。
工程3.Fomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph
実施例25、工程３に従って、Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにTyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Phを使用して表題化合物を泡状物として得た;ES−MS 977（ｍ＋１）。
工程4.Fomc−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph
MeOH（5ml）中のFomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph（1.2g、1.6ミリモル）をピリジン・HCl（触媒量）で処理した。得られる混合物を65℃で一晩撹拌し、真空濃縮して油状物を得、それをフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製して白色の固体を得た;ES−MS 734（ｍ＋１）。
工程5.（４−PhOPh）NHCO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph
CH₂Cl₂（5ml）中のFomc−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Ph（0.6g、0.8ミリモル）をピペリジン（0.14g、1.6ミリモル）で処理した。得られる混合物を２時間撹拌し、真空濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製してＤ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Phを得た。泡状物をCH₂Cl₂（5ml）に溶解し、４−フェノキシフェニルイソシアネート（0.05g、0.23ミリモル）で処理した。得られる混合物を室温で１時間撹拌し、真空濃縮し、そして得られる油状物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃;MeOH溶離剤）により精製して（４−PhOPh）NHCO−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Phを泡状物として得た;ES−MS 723（ｍ＋１）。
実施例28
（S,R）−Ｎ−〔１−（４−ベンジルオキシ−ベンジル）−２−（４−ベンジル−ピペラジン−１−イル）−２−オキソ−エチル〕−３−（3H−イミダゾール−４−イル）−２−（トルエン−４−スルホニルアミノ）−プロピオンアミド｛（４−MePh）SO₂−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）・HCl｝
工程1.Boc−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）
実施例25、工程１に従って、２−（フェニルメトキシ）エチルアミンの代わりに１−ベンジルピペリジンを使用して表題化合物を白色の固体として得た;CI−MS 530（ｍ＋１）。
工程2.Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）
実施例25、工程２に従って、Boc−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにBoc−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）を使用して表題化合物を白色の固体として得た;CI−MS 430（ｍ＋１）。
工程3.Fomc−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）
実施例25、工程３に従って、Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPhの代わりにTyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）を使用して表題化合物を泡状物として得た;ES−MS 1032（ｍ＋１）。
工程4.（４−MePh）SO₂−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）
CH₂Cl₂（5ml）中のFomc−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₃OPh（0.7g、0.69ミリモル）をピペリジン（0.14g、1.6ミリモル）で処理した。得られる混合物を２時間撹拌し、真空濃縮し、そして得られる油状物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶離剤）により精製してＤ−His−Tyr（OBn）−CONH（CH₂）₂Phを得た。泡状物をCH₂Cl₂（5ml）に溶解し、ピリジン（0.05g、0.63ミリモル）、次に４−トルエンスルホニルクロライド（0.12g、0.63ミリモル）で処理した。得られる混合物を室温で３時間撹拌し、真空濃縮し、そして得られる油状物をフラッシュクロマトグラフィー（SiO₂、CHCl₃:MeOH溶解剤）により精製して（４−MePh）SO₂−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）を得た;ES−MS 963（ｍ＋１）。
工程5.（４−MePh）SO₂−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）・HCl
（４−MePh）SO₂−Ｄ−His（Tr）−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）（0.21g、0.22ミリモル）を80％HCl水溶液（3ml）で処理し、５分間80℃まで加熱した。混合物を冷却し、水（5ml）で希釈した。固体を濾去し、上澄みを真空濃縮して油状物を得た。油状物を水（15ml）に溶解し、凍結し、そして凍結乾燥して（４−MePh）SO₂−Ｄ−His−Tyr（OBn）−CO（４−Bn−ピペラジン−１−イル）・HClを得た;ES−MS 720（ｍ）。
実施例29
Ｎ_α−〔Ｎ−〔（フェニルメトキシ）カルボニル〕−Ｌ−ヒスチジル〕−Ｏ−（フェニルメチル）−Ｎ−メチル−Ｎ−〔２−（フェニルメトキシ）エチル〕−Ｌ−チロシンアミド｛Cbz−His−Tyr（OBn）−CON（Me）CH₂CH₂OBn｝
実施例19、工程３に従って、２−（フェニルメトキシ）エチルアミンの代わりにＮ−メチル−Ｎ−〔２−（フェニルメトキシ）エチル〕アミンを使用して表題化合物を製造した;FAB−MS 690（ｍ＋１）。
本発明はその精神または本質的特徴から逸脱することなく他の特定の形態で具体化することができる。記載した実施態様はすべて単なる例示であり、本発明を制限するものではない。従って、本発明の範囲は上記の記載よりもむしろ添付した請求の範囲により示される。請求の範囲に記載の発明と同等の意味および範囲の中に入る変形はすべて本発明の範囲内に包含される。Field of the invention
The present invention relates to some compounds that can be used in the medical field to treat uncontrolled or abnormal growth of human tissue prophylactically or for other purposes. More specifically, the present invention relates to certain compounds that act to inhibit cell growth and to inhibit the farnesyltransferase enzyme that has been shown to activate ras proteins associated with cancer and restenosis.
Background of the Invention
Ras protein (or p21) has been extensively studied because its mutants are present in 20% of most types of cancer in humans and in more than 50% of colon and pancreatic cancers (Gibbs JB Cell, 65: 1 (1991); Cartwright T. et al., Chimica Ogg, 10:26 (1992)). The ras proteins of these mutations lack the ability of the native ras to provide feedback regulation, and this defect is responsible for their oncogenic potential because normal endogenous regulators cannot control the ability to stimulate normal cell division. It has something to do with action. A recent finding that the transforming activity of mutant ras is critically dependent on post-translational modifications (Gibbs J. et al., Microbiol. Rev., 53: 171 (1989)) highlights an important aspect of ras function. Reveals new possibilities for cancer treatment.
In addition to cancer, there are conditions of uncontrolled cell proliferation associated with overexpression and / or function of the native ras protein. Postoperative vascular restenosis is one such condition. The use of various surgical revascularization procedures, such as saphenous vein bypass graft, endarterectomy and transluminal coronary angioplasty, is often due to uncontrolled growth of neointimal tissue known as restenosis. With complications. The biochemical cause of restenosis is poorly understood and numerous growth factors and protooncogenes are involved (Naftilan AJ et al., Hypertension, 13: 706 (1989) and J. Clin. Invest. ., 83: 1419; Gibbsons GH et al., Hypertension, 14: 358 (1989); Satoh T. et al., Mollec. Cell. Biol., 13: 3706 (1993)). Because ras proteins are known to be involved in the cell division process, ras proteins play a role in many situations in which cell division is not controlled. As with the inhibition of mutant ras-related cancers, blockade of ras-dependent processes may be associated with restenosis, especially when normal ras expression and / or function is expanded by growth stimulating factors. Has the potential to reduce or eliminate proper tissue growth.
Lass function relies on protein modification to bind to the inner surface of the plasma membrane. Unlike other membrane-bound proteins, ras proteins lack normal transmembrane or hydrophobic sequences and are first synthesized in a cytosolic soluble form. The association of the ras protein with the membrane is initiated by a series of post-translational processing steps indicated by the amino acid consensus sequence at the carboxyl terminus recognized by protein: farnesyltransferase.
This consensus sequence consists of a cysteine residue with the carboxyl terminus followed by two lipophilic amino acids and four amino acids at the C-terminal residue. The sulfhydryl group of a cysteine residue is alkylated by farnesyl pyrophosphate in a reaction catalyzed by protein: farnesyltransferase. After prenylation, the three amino acids at the C-terminus are cleaved by an endoprotease and the newly exposed α-carboxyl group of prenylated cysteine is methylated by methyltransferase. Enzymatic processing of the ras protein, initiated by farnesylation, allows binding of the protein to the cell membrane. Mutational analysis of the oncogenic ras proteins suggests that these post-translational modifications are essential for transforming activity. Substitution of cysteine residues in the consensus sequence with other amino acids results in a ras protein that is no longer farnesylated, which does not translocate to the cell membrane and lacks the ability to stimulate cell proliferation (Hancock JF et al., Cell, 57: 1617 (1989): Schafer WR et al., Science, 245: 379 (1989); Casey PJ Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 86: 8323 (1989)).
Recently, protein: farnesyltransferases (PFTs, also referred to as farnesyl: protein transferases) have been identified, and specific PFTs have been homogenized by purification from rat brain (Reiss Y. et al., Bioch. Soc. Trans., 20: 487-88 (1992)). The enzyme was characterized as a heterodimer consisting of one α-subunit (49 kDa) and one β-subunit (46 kDa), both of which are required for catalytic activity. High expression of mammalian PFTs in the baculovirus system and purification of the recombinant form of the active form was also achieved (Chen W.-J. et al., J. Biol. Chem., 268: 9675 (1993)).
In view of the above, the discovery that the function of oncogenic ras proteins is critically dependent on their post-translational processing provides a means of cancer chemotherapy by inhibition of processing enzymes. Identification and isolation of a protein: farnesyltransferase that catalyzes the addition of a farnesyl group to a ras protein provides a potential target for such intervention. Recently, it was identified that a prototype PFT inhibitor could inhibit ras processing and alter the cancerous morphology in a tumor cell model (Kohl NE et al., Science, 260: 1934 (1993); James GL Science, 260: 1937 (1993); Garcia AM et al., J. Biol. Chem., 268: 18415 (1993)). Thus, blocking the PFT can prevent or delay the onset of cell growth in cancers that exhibit mutant ras proteins. Similar principles provide a potential means to suppress cell proliferation associated with restenosis, particularly when inhibition of PFTs over-stimulates the expression and / or function of native ras.
PCT application WO 91/16340 discloses cysteine-containing tetrapeptide inhibitors of PFTs of the formula CAAX.
European Patent Application 0461869 has the formula Cys-Aaa¹−Aaa^Two-Discloses a cysteine-containing tetrapeptide inhibitor of the XFT PFT.
European Patent Application 0520823 has the formula Cys-Xaa¹−dXaa^Two−Xaa^ThreeDiscloses cysteine-containing tetrapeptide inhibitors of PFT.
European Patent Application 0523873 has the formula Cys-Xaa¹−Xaa^Two−Xaa^ThreeDiscloses cysteine-containing tetrapeptide inhibitors of PFT.
European Patent Application 0528486 has the formula Cys-Xaa¹−Xaa^Two−Xaa^Three−NRR¹Discloses a cysteine-containing tetrapeptide amide inhibitor of PFT.
European Patent Application 0535730 has two formulas:

Discloses a pseudotetrapeptide inhibitor of PFT.
European Patent Application 0535731 (US 5,238,922) uses the formula

Discloses a pseudotetrapeptide ester inhibitor of PFT.
European Patent Application 0482539 uses the formula

Discloses tachykinin antagonists.
European Patent Application 0457195 formula

Are disclosed.
US 4,022,759 is the formula AR₁-Tyr (benzyl) -Ser (benzyl) -R_Two(Where R₁One of the definitions is a tripeptide antagonist of luteinizing hormone-releasing factor of His (benzyl).
The compounds disclosed in the above references do not disclose or suggest the novel combination of structural variations found in the present invention described below. All references are incorporated herein by reference.
Summary of the Invention
Therefore, the present invention provides a compound of formula I

Wherein n is 1 or 2,
A is COR^Three, CO_TwoR^Three, CONHR^Three, CSR^Three, C (S) OR^Three, C (S) NHR^Three, CF_ThreeSO_Two, Aryl-SO_TwoOr alkyl-SO_TwoAnd where R^ThreeIs alkyl, (CH_Two)_m-Cycloalkyl, (CH_Two)_m-Aryl, (CH_Two)_m-Heteroaryl or (CH_Two)_mO-alkyl and m is 0, 1, 2 or 3;
R is independently H or Me;
Y is independently H or Me;
Z is independently H or Me;
R¹Is H, CO-aryl, (CH_Two)_m-Aryl, O (CH_Two)_m-Cycloalkyl, O (CH_Two)_m-Aryl or O (CH_Two)_m-Heteroaryl, wherein m is as defined above, and R¹Is in the meta or para position;
X is H, alkyl, CF_Three, F, Cl, Br, I, HO, MeO, NO_Two, NH_Two, N (Me)₂, OPO_ThreeH_TwoOr CH_TwoPO_ThreeH_Two1-4 substituents such as;
R^TwoIs NR (CH_Two)_nCO_TwoR^Three, NR (CH_Two)_nCONHR^Three, NR (CH_Two)_nR^Three, NR (CH_Two)_{n + 1}OR^Four, NR (CH_Two)_{n + 1}SR^Four, NRCH (COR^Five) (CH_Two)_n-Heteroaryl, NRCH (COR^Five) (CH_Two)_nOR^Three, NRCH (COR^Five) (CH_Two)_nSR^ThreeOr

Where R, R^ThreeAnd n are as defined above, and R^FourIs H or R^ThreeAnd R^FiveIs OH, NH_Two, OR^ThreeOr NHR_ThreeWhich is a substituted di- or tri-peptide compound, an optical isomer, diastereomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.
The present invention also relates to the use of a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof that inhibits the activity of the protein: farnesyltransferase enzyme as a treatment for tissue proliferative disorders.
Another aspect of the invention is the use of a pharmaceutical composition containing an effective amount of a compound of formula I as a treatment for cancer.
Yet another aspect of the present invention is the use of a pharmaceutical composition containing an effective amount of a compound of formula I as a treatment for restenosis.
Yet another aspect of the present invention is a pharmaceutical composition for administering an effective amount of a compound of formula I in unit dosage form in the above-described method of treatment.
A final aspect of the invention relates to a method for the preparation of a compound of formula I by solid phase synthesis, liquid phase synthesis and simultaneous multiple synthesis using a simultaneous multiple synthesizer.
Detailed description of the preferred embodiment
In the compounds of the formula I, the term "alkyl" means a straight-chain or branched hydrocarbon radical having 1 to 6 carbon atoms, for example methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl. , Sec-butyl, isobutyl, t-butyl, n-pentyl, n-hexyl and the like.
The term "cycloalkyl" refers to an unsubstituted or substituted saturated hydrocarbon ring having 3 to 10 carbon atoms and substituted with an alkyl or aryl group, e.g., cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, adamantyl, and the like. is there.
The term "aryl" is unsubstituted or alkyl, O-alkyl, S-alkyl, O-aryl, OH, SH, F, Cl, Br, I, CF_Three, NO_Two, NH_Two, NHCH_Three, N (CH_Three)₂, NHCO-alkyl, (CH_Two)_mCO_TwoH, (CH_Two)_mCO_Two-Alkyl, (CH_Two)_mSO_ThreeH, (CH_Two)_mPO_ThreeH_Two, (CH_Two)_mPO_Three(Alkyl)₂, (CH_Two)_mSO_TwoNH_TwoAnd (CH_Two)_mSO_TwoPhenyl substituted with 1 to 3 substituents selected from NH-alkyl, wherein alkyl is as defined above and m is 0, 1, 2, or 3, 5- It means an aromatic ring that is a fluorenyl, 1-naphthyl or 2-naphthyl group.
The term "heteroaryl" is 2- or 3-thienyl, 2- or 3-furanyl, unsubstituted or substituted by one or two substituents selected from the substituents for aryl described above. -Means a heteroaromatic ring which is a 3- or 3-pyrrolyl, 2-, 3- or 4-pyridyl, 2-, 3-, 4-, 5-, 6- or 7-indolyl group.
The following table shows the abbreviations used in the present invention and their definitions.

[Where A 'is CO_TwoR^Three, CONHR^Three, C (S) NHR^ThreeOr aryl-SO_TwoAnd R^ThreeIs alkyl, (CH_Two)_m-Cycloalkyl, (CH_Two)_m-Aryl, (CH_Two)_m-Heteroaryl and m is 0, 1, 2 or 3;
R is independently H or Me;
Y is independently H or Me;
Z is independently H or Me;
R¹′ Is (CH_Two)_m-Aryl, O (CH_Two)_m-Aryl, OPO_ThreeH_TwoOr CH_TwoPO_ThreeH_TwoAnd m is as defined above;
R^Two′ Is NR (CH_Two)_TwoOR^Four, NR (CH_Two)_TwoSR^Four, NRCH (COR^Five) CH_TwoOR^Three, NRCH (COR^Five) CH_TwoSR^ThreeOr

Where R, R^ThreeAnd n are as defined above, and R^FourIs H or R^ThreeAnd R^FiveIs OH, NH_Two, OR^ThreeOr NHR^ThreeOr an optical isomer, diastereomer or pharmaceutically acceptable salt thereof.
Other preferred compounds of the invention are those wherein A is CO_TwoR^ThreeOr CONHR^ThreeOr at least one of Y and Z is Me; or R^TwoIs (CH_Two)_TwoOR^FourOr CH (COR^Five) CH_TwoOR^ThreeOr A is CONHR^ThreeAnd R^TwoIs (CH_Two)_TwoOR^FourAnd a compound of formula I as defined above, wherein at least one of Y and Z is Me.
Most preferred compounds of formula I include the following compounds:

General Preparation, Evaluation and Use of Compounds of Formula I
Compounds of formula I may be modified with PAM, MBHA or NH, optionally with liquid phase modification to the carboxyl terminus._TwoProduced by solid phase peptide synthesis on a peptide synthesizer, for example the Applied Biosystems 431A peptide synthesizer, using an active ester or anhydride, an acid chloride, an isocyanate, an isothiocyanate or the like of a Boc or Fmoc protected amino acid in a link resin. be able to. Methods for solid phase synthesis of peptides are widely known to those skilled in the art (eg, “Solid Phase Peptide Synthesis” by JMStewart and JD Young, Pierce Chemical Co., Rockford, IL (1984); Int of Fields GB and Noble RL). .J. Peptide Protein Res., 35: 161-214 (1990)).
In addition, compounds of formula I may be prepared by conventional liquid phase peptide synthesis using amines, acid chlorides, isocyanates and the like, where appropriate, instead of amino acid derivatives. Liquid phase synthesis of peptides is widely known to those skilled in the art (eg, M. Bodanszky, “Principles of Peptide Synthesis”, Springer-Verlag (1984)).
Finally, compounds of formula I are described in Diversomer, described by S. H. Dewitt et al. In Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6909 (1993).^TMCan be produced by simultaneous multiple solid-phase synthesis using a device under the trade name (both the trademark and the device are all owned by Warner Lambert). Multiple solid phase synthesizers are currently the subject of abandoned U.S. patent application Ser. No. 07 / 958,383, filed Oct. 8, 1992, and pending pending US patent application Ser. No. 08 / 012,557, filed Feb. 2, 1993. It is.
For example (Scheme I below), using a sterically hindered amine such as DIEA as an HCl scavenger, the Fmoc-D-His-Tyr (OBn) -CO_Two−CH_TwoCH_TwoSi (CH_Three)₃To the 2-Cl-Tr resin, the Fmoc protecting group is removed with piperidine, and the resulting free amino end group is acylated with a series of isocyanates, isothiocyanates, active esters, acid chlorides and the like to give TMS-ethyl ester. Cleavage with TBAF, the resulting free carboxy terminal group is activated with a carbodiimide reagent such as EDAC, DCC or DIC, and the active carboxyl group is reacted with HOBT, NHOS or pentachlorophenol to form an active ester. And the resulting sequence of compounds of formula I is separated from the resin by treatment with hot HOAc or with TFA at room temperature.
In all of the above three synthesis methods, protection and deprotection of the reactive functional group and the order of the synthesis steps are appropriately considered. Knowledge of the use of common protecting groups and how to construct complex organic molecules is within the general scope of the expertise of one of ordinary skill in the art of organic chemistry (eg, “Protective Groups in Organic Chemistry” by TWGreene and PGMWuts). , John Wiley & Sons (1991); EJ Corey and X.-M. Cheng, "The Logic of Chemical Synthesis", John Wiley & Sons (1989)).
The homogeneity and composition of the compound obtained are determined by reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC), capillary electrophoresis, thin-layer chromatography (TLC), proton nuclear magnetic resonance spectrometry (NMR), amino acid analysis, fast atom bombardment mass Confirmed by spectrometry (FAB-MS) and electrospray mass spectrometry (ES-MS).

  The compounds of the formula I can furthermore be pharmaceutically acceptable acid addition and / or base salts. All of these forms are within the scope of the present invention.
Pharmaceutically acceptable acid addition salts of compounds of formula I include non-toxic salts such as hydrochloric, nitric, phosphoric, sulfuric, hydrobromic, hydroiodic, hydrofluoric, phosphorous and the like. Salts derived from inorganic acids, and non-toxic organics such as aliphatic mono- and dicarboxylic acids, phenyl-substituted alkanoic acids, hydroxyalkanoic acids, alkandioic acids, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids, and the like. Includes salts derived from acids. Thus, such salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate Acid, chloride, bromide, iodide, acetate, trifluoroacetate, propionate, caprylate, isobutyrate, oxalate, malonate, succinate, suberate, sebacate , Fumarate, maleate, mandelate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, phthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, phenylacetate, Includes citrate, lactate, maleate, tartrate, methanesulfonate and the like. Also included are salts of amino acids such as alginate, gluconate, galacturonate, n-methylglucamine (eg, "Pharmaceutical Salts" of Berge SM et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66: 1-19 (1977). Year)).
The acid addition salts of basic compounds are prepared by contacting the free base form with a sufficient amount of the desired acid to produce the salt in the conventional manner. Preferably, the compound of formula I can be converted to an acid salt by treating with an aqueous solution of the desired acid whose pH is less than 4. The solution is passed through a C18 cartridge to absorb the compound, washed with copious amounts of water, the compound eluted with a polar free solvent such as methanol, acetonitrile, etc., and concentrated under reduced pressure and lyophilized by lyophilization. Can be released. The free base form can be regenerated in a conventional manner or by contacting the salt form with a base and isolating the free base as described above. The free base forms differ somewhat from their respective salt forms in some physical properties, such as solubility in polar solvents, but for the purposes of the present invention, these salts are equivalent to the respective free bases.
Pharmaceutically acceptable base addition salts are prepared with metals or amines, such as alkali and alkaline earth metals or organic amines. Examples of metals used as cations are sodium, potassium, magnesium, calcium and the like. Examples of suitable amines are N, N'-dibenzylethylenediamine, chloroprocaine, choline, diethanolamine, dicyclohexylamine, ethylenediamine, N-methylglucamine and procaine (eg "Pharmaceutical Salts" from Berge SM et al., Journal of Pharmaceutical Science, 66: 1-19 (1977)).
The base addition salts of said acidic compounds are prepared by contacting the free acid form with a sufficient amount of the desired base to produce the salt in the conventional manner. Preferably, the compound of formula I can be converted to a base salt by treatment with an aqueous solution of the desired base having a pH of 9 or higher. The solution is passed through a C18 cartridge to absorb the compound, washed with copious amounts of water, the compound eluted with a polar organic solvent such as methanol, acetonitrile, etc., and concentrated under reduced pressure and lyophilized. Can be released. The free acid form can be regenerated in a conventional manner or by contacting the salt form with an acid and isolating the free acid as described above. The free acid forms differ somewhat from their respective salt forms in some physical properties, such as solubility in polar solvents, but for the purposes of the present invention, these salts are equivalent to the respective free acids.
Certain compounds of the present invention exist in unsolvated and solvated forms, for example, hydrated forms. Generally, solvated forms, eg, hydrated forms, are equivalent to unsolvated forms and are included within the scope of the invention. Some compounds of the present invention have one or more chiral centers, each center being in the R (D) or S (L) configuration. The present invention includes all enantiomeric and epimeric forms, and suitable mixtures thereof.
The compound of formula I has a PFT inhibitory activity of 7 mM DTT, 1.2 mM MgCl 2_Two, 30 mM potassium phosphate buffer (pH 7.4) containing 0.1 mM leupeptin, 0.1 mM pepstatin and 0.2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride. The tests were carried out in 96-well plates (Wallec), using solutions of various concentrations consisting of the compound of formula I in 100% DMSO. Both substrates, radiolabeled farnesyl pyrophosphate ([1-^ThreeH], specific activity 15-30 Ci / mmol, final concentration 0.12 μM) and (biotinyl) -Ahe-Tyr-Lys-Cys-Val-Ile-Met peptide (final concentration 0.1 μM) followed by a 40-fold purification. The enzymatic reaction was initiated by the addition of farnesyl protein transferase from the isolated rat brain. After incubation at 37 ° C for 30 minutes, 1.5M magnesium acetate, 0.2M H_ThreePO_FourThe reaction was terminated by diluting 2.5-fold with a 1.3 mg / ml stop buffer containing 0.5% BSA and streptavidin beads (Amersham). After the plate was left at room temperature for 30 minutes, the amount of radioactivity was measured with a micro beta counter (Type 1450, Wallec). Compounds of formula I have an IC of 0.5 nM to 80 μM in this test.₅₀A useful protein: a farnesyltransferase enzyme inhibitor that exhibits values (see data tables) and can therefore be used in the treatment of tissue proliferative diseases, including cancer and restenosis.
IC for PFT of selected compounds of formula I₅₀value
Example number  I c ₅₀ (ΜM)
1 4.4
4 1.0
5 (3) 2.1
5 (4) 7.3
5 (23) 0.64
5 (27) 30
5 (28) 0.73
5 (30) 73
5 (31) 0.76
5 (35) 66
5 (36) 1.9
5 (46) 1.0
5 (49) 2.9
5 (40) 0.75
5 (52) 1.6
5 (56) 1.1
5 (59) 20
Example number  I c ₅₀ (ΜM)
5 (60) 1.4
5 (61) 7.2
5 (62) 1.5
5 (63) 1.0
5 (64) 1.7
5 (69) 0.48
5 (79) 3.0
5 (80) 1.6
6 0.42
7 0.26
8 0.074
9 0.27
10 0.10
11 0.17
12 0.028
13 0.083
15 30
16 0.60
17 0.039
18 0.82
19 0.31
21 0.31
22 0.37
23 1.9
24 1.0
25 3.7
28 11
29 3.0
The compounds of the present invention can be manufactured and administered in a wide variety of oral, enteral and parenteral dosage forms. Thus, the compounds of the present invention can be administered by injection, ie, intravenously, intramuscularly, intradermally, subcutaneously, intraduodenally, or intraperitoneally. Also, the compounds of the present invention can be administered by inhalation, for example, intranasally. Further, the compounds of the present invention can be administered transdermally. It will be apparent to those skilled in the art that the following dosage forms contain a compound of Formula I or a corresponding pharmaceutically acceptable salt of a compound of Formula I as the active ingredient.
For preparing pharmaceutical compositions from the compounds of the present invention, pharmaceutically acceptable carriers can be either solid or liquid. Solid dosage forms include powders, tablets, pills, capsules, cachets, suppositories, and dispersible granules. The solid carrier may be one or more substances that also act as diluents, fragrances, binders, preservatives, tablet disintegrants or encapsulants.
In powders, the carrier is a finely divided solid which is in a mixture with the finely divided active component.
In tablets, the active component is mixed with the carrier having the necessary binding properties in suitable proportions and compacted in the shape and size desired.
The powders and tablets preferably contain from five or ten to about seventy percent of the active compound. Suitable carriers are magnesium carbonate, magnesium stearate, talc, sugar, lactose, pectin, dextrin, starch, gelatin, tragacanth, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, low melting wax, cocoa butter and the like. The term "formulation" refers to an activity using an encapsulant as a carrier, wherein the active ingredient is surrounded by one carrier, with or without another carrier, i.e., provided with the carrier. Includes blends of compounds. Similarly, cachets and lozenges are included. Tablets, powders, capsules, pills, cachets, and lozenges can be used as solid dosage forms suitable for oral administration.
In the manufacture of suppositories, a low melting wax, such as a mixture of fatty acid glycerides or cocoa butter, is first melted and the active ingredient is dispersed homogeneously therein, as by stirring. The molten homogeneous mixture is then poured into convenient sized molds, allowed to cool, and thereby to solidify.
Liquid preparations include solutions, suspensions, and emulsions, for example, water or aqueous propylene glycol solutions. For injections, liquid preparations can be formulated as solutions using aqueous polyethylene glycol solution.
Aqueous solutions suitable for oral use can be prepared by dissolving the active component in water and adding suitable colorants, flavors, stabilizers, and thickening agents as desired.
Aqueous suspensions suitable for oral use include fine active ingredients with viscous substances such as natural or synthetic gums, resins, methylcellulose, sodium carboxymethylcellulose and other well-known suspending agents. Can be produced by dispersing in water.
Also included are solid dosage forms which are converted into liquid forms immediately before use for oral administration. Such liquid forms include solutions, suspensions, and emulsions. These preparations may contain, in addition to the active component, colorants, flavors, stabilizers, buffers, artificial and natural sweetening agents, dispersing agents, thickening agents, solubilizing agents, and the like.
The pharmaceutical preparation is preferably in unit dosage form. In such form, the preparation is subdivided into unit doses containing appropriate quantities of the active component. The unit dosage form is a packaged preparation, the package containing discrete quantities of preparation, such as packeted tablets, capsules, and powders in vials or ampoules. The unit dosage form may be a capsule, tablet, cachet, or lozenge itself, or it may be the appropriate number of any of these in package form.
The amount of active ingredient in a unit dose preparation may be varied or adjusted within the range of 0.1 mg to 100 mg, preferably 0.5 mg to 100 mg, depending on the particular use and the potency of the active ingredient. If desired, the composition may further comprise other compatible therapeutic agents.
When used therapeutically as a PFT inhibitor, the compounds used in the treatment methods of the invention will be administered at an initial dosage of from about 0.01 mg / kg to about 20 mg / kg per day. A daily dose range of about 0.01 mg / kg to about 10 mg / kg is preferred. However, the dosage will vary depending on the needs of the patient, the severity of the condition to be treated and the compound used. Determination of the proper dosage for a particular situation is left to those skilled in the art. Generally, treatment is initiated with smaller dosages which are less than the optimum dose of the compound. Thereafter, the dosage is increased by small increments until the optimum effect under the circumstances is reached. Conveniently, the total daily dose may be divided and administered in portions during the day if desired.
The following examples illustrate preferred methods of making the compounds of the present invention, but the invention is not limited thereto. For further clarity, the abbreviated structures are shown in braces after the complex chemical name representing the compound of Formula I. The components of the structure are as defined in the abbreviation table above.
Example 1
N_α-[N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serinamide {Cbz-His-Tyr (OBn ) -Ser (OBn) -CONH_Two｝
Using an ABI 431A solid phase peptide synthesizer, Fmoc-NH_Two-Treatment of link resin (0.25 mmol scale) with 20% piperidine in NMP to NH_Two-A link resin was obtained. Sequential coupling of Fmoc-protected Ser (OBn) and Tyr (OBn) (DCC and HOBT in NMP) and deprotection of Fmoc (20% piperidine in NMP) using a 4-fold excess of reagents in the coupling step ) Perform the reaction and subject to a conventional resin wash cycle to Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CONH_Two-A link resin was obtained. The dipeptide resin was transferred to an unattached reaction vessel, treated with a 4-fold excess of Cbz-His, DCC and HOBT in DMF and shaken overnight at room temperature. After removal of excess reagent, the resulting substituted tripeptide was separated from the resin by treatment with 50% TFA in DCM at room temperature for 2.5 hours. The solvent is evaporated and reversed phase chromatography (C₁₈-Purified by column, eluted with a 20-70% gradient aqueous MeCN solution (both solvents acidified with 0.1% TFA), lyophilized and Cbz-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn)- CONH_TwoWas obtained as its TFA salt. ES-MS: 719 (m + 1).
A similar method can be used to prepare the following most preferred compounds of formula I having a carboxamide at the C-terminus:

Example 2
N- [N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine {Cbz-His-Tyr ( OBn) -Ser (OBn)｝
Starting with PAM or HMP resin, Fmoc-Ser (OBn), Fmoc-Tyr (OBn) and Cbz-His were coupled sequentially using the deprotection and coupling conditions described in Example 1. Separation from the resin is CF for the PAM-supported tripeptide._ThreeSO_TwoThis was done by treatment with H or for HMP supported tripeptides with 50% TFA in DCM. Chromatography was performed as in Example 1 and lyophilized to give Cbz-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) as its TFA salt. See Example 7 for the liquid phase method.
Using a similar method, the following most preferred compounds of formula I having free carboxyl end groups can be prepared:

Example 3
N- [N-[(9H-fluoren-9-ylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosine 2-trimethylsilylethyl ester {Fmoc-His (2 -Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS｝
Step 1. Boc-Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS
2-Trimethylsilylethanol (2.6 g, 22.6 mmol) was prepared from EDAC (4.3 g, 22.6 mmol), DMAP (0.5 g) and Boc-Tyr (OBn) -OH (7.0 g, 18.8 mmol) in dry THF (25 ml). Added to the premix solution. The resulting mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The solution was diluted 1: 1 with EtOAc: Et_TwoDiluted with O (40 ml) and saturated NaHCO_ThreeWash with aqueous (2 × 10 ml) and saturated aqueous NaCl (2 × 10 ml) and dry (MgSO 4)_Four), Filtered and concentrated in vacuo to give an oil which was further flash chromatographed (SiO_Two, EtOAc: hexane eluent) to give pure TMS-ethyl ester as an oil.
¹H NMR (HCDCl_Three): Δ0.04 (s, 9H), 1.43 (s, 9H), 3.03 (m, 2H), 4.22 (m, 2H), 4.51 (m, 1H), 4.95 (m, 1H), 5.05 (s, 2H), 6.85-7.48 (m, 9H)
Step 2. Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS
CH_TwoCl_Two80% TFA in CH (20ml, v / v)_TwoCl_TwoBoc-Tyr (OBn) -CO in (40 ml)_TwoCH_TwoCH_TwoTMS (14.8 g, 31.4 mmol) was added to an ice-cold solution. The resulting mixture was stirred for 1.0 minute and concentrated in vacuo. This operation was repeated once, and the obtained residue was washed with CH._TwoCl_TwoAnd saturated NaHCO_ThreeDiluted with aqueous solution. The resulting mixture was filtered through celite. Then the organic layer is separated, washed with saturated aqueous NaCl and dried (MgSO 4)._Four)did. Filtration and concentration in vacuo gave an oil which was further purified by flash chromatography (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) to give the desired product.
¹H NMR (HCDCl_Three): Δ0.06 (s, 9H), 1.68 (br s, 2H), 2.85-3.03 (m, 2H), 3.67 (m, 1H), 4.22 (m, 2H), 5.05 (s, 2H), 6.91 −7.45 (m, 9H)
Step 3. Fmoc-His (Tr) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS
To a solution of HOBT (2.6 g, 19.3 mmol) in DMF (10 ml) was added Fmoc-His (Tr) (10.0 g, 16.1 mmol) followed by EDAC (3.7 g, 19.3 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 20 minutes and Tyr (OBn) -CO in DMF (10 ml)_TwoCH_TwoCH_TwoA solution of TMS (5.8 g, 16.1 mmol from step 2 above) was added. The mixture was stirred at room temperature overnight, water and 1: 1 Et_TwoPartitioned into a mixture of O: EtOAc (50 ml). The layers were separated, the organic phase was washed with saturated aqueous NaCl (4 × 20 ml) and dried (MgSO 4)._Four)did. Filtration and concentration in vacuo gave an oil which was further purified by flash chromatography (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) to give the protected His-Tyr dipeptide; FAB-MS 974 (m + 1).
Step 4. Fmoc-His-Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS
Fmoc-His (Tr) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS (from step 3 above, 5.0 g, 5.1 mmol) was treated with pyridine.HCl (1.0 g) in MeOH (20 ml). The mixture was stirred at 65 ° C. for 8 hours. The solution is concentrated in vacuo and the residue is CH_TwoCl_TwoDissolved in water (1 time), saturated NaHCO_ThreeWash with aqueous solution (2 times) and dry (MgSO_Four)did. Filtration and concentration in vacuo gave an oil which was further purified by flash chromatography (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) and purified by Fmoc-His-Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoSTMS was obtained as a white solid; FAB-MS 731 (m + 1).
Step 5. Fmoc-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS
CHCl_Three(20 ml) Fmoc-His-Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTo a suspension of TMS (5.3 g, 7.3 mmol from step 4 above) was added 2-chlorotrityl chloride resin (Novabiochem) (7.1 g) and DIEA (0.96 g, 7.4 mmol) in water. The resulting mixture was subjected to simple sonication to disperse the resin and stirred for 2.0 hours on a shaker. The denatured resin was collected by filtration, DMF (2 times), MeOH (2 times), CHCl_Two(2 times) and dried under vacuum for 18 hours to give 10.5 g (equivalent to about 1 mmol / g resin).
Example 4
N- [3-phenoxypropyl] -O- (phenylmethyl) -N_α-[N-[[(phenylmethyl) amino] carbonyl] -L-histidyl] -L-tyrosinamide {BnNHCO-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh｝
Fmoc-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS (from Example 3 above, 2.0 g) was suspended in 20% piperidine in DMF. The resulting suspension was subjected to sonication for 10 minutes and stirred by shaking for 30 minutes. The resin was filtered and washed with DMF (3 times). The resin was again subjected to the same reaction conditions for 20 minutes. Filter the resin, DMF (4 times) and CHCl_Three(3 times) and washed with His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS was obtained, which was suspended in DCM (10 ml), stirred by shaking for 30 minutes, treated with benzyl isocyanate (1.1 g, 8.0 mmol) and stirred for another 30 minutes. The resin was filtered, washed with DCM (3 times), resuspended in DCM, and the benzyl isocyanate treatment was repeated. Filter the resin, DMF (2 times) and CHCl_Three(5 times) and washed with BnNHCO-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CO_TwoCH_TwoCH_TwoTMS was obtained, which was suspended in a mixture of 4: 3 dioxane: MeOH (14 ml) and treated with 1.0 M TBAF in THF (2.0 ml, 2.0 mmol). The suspension was stirred by shaking for 18 hours, filtered and a 2: 1 mixture of dioxane and 10% citric acid (3 × 10 ml), dioxane: MeOH (3 × 10 ml), dioxane (3 × 10 ml) And CHCl_Three(3 × 10 ml) to obtain BnNHCO-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn). BnNHCO-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) is suspended in DMF (10 ml) and carbodiimide coupling reagent such as DIC (0.2 g, 1.6 mmol) and HOBT (0.22 g, 1.6 mmol). Processed. The resulting mixture was stirred for 30 minutes and 3-phenoxypropylamine (0.24 g, 1.6 mmol) was added. The resulting mixture was shaken for 18 hours, the resin was filtered and DMF (3 times) and CHCl_Three(3 times). The resin was suspended in DMF (10 ml) and the carbodiimide / HOBT / 3-phenoxypropylamine coupling reaction was repeated. After 18 hours, the resin was filtered and 10 ml each of MeOH (2 times), DCM (3 times), DMF (2 times), MeOH (2 times) and CHCl3_Three(2 times) and washed with BnNHCO-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh was obtained. The highly substituted dipeptide was treated with 40% TFA in DCM and separated from the resin by shaking at room temperature for 1 hour. The supernatant containing the free dipeptide was filtered to remove the resin and the resin was washed with DCM (6 times). The combined supernatant and washings were concentrated in vacuo and BnNHCO-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh ・ TFA was obtained. The product was partitioned between water and DCM, and saturated NaHCO3 was added to both layers._ThreeThe aqueous solution was treated dropwise and the aqueous layer made basic. The layers were separated, the organic phase was washed with saturated aqueous NaCl and dried (MgSO_Four)did. By filtration and concentration, BnNHCO-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh was obtained. ES-MS 675 (m + 1).
Example 5
Simultaneous multiple solid-phase synthesis
The method described in Example 4 can be employed in a simultaneous multiplex synthesis using a Diversomer apparatus described in S.H. DeWitt et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 6909 (1993). Fmoc-D-His (2-Cl-Tr resin) -Tyr (OBn) -CO produced in step 3 of Example 3 using Fmoc-D-His (Tr) instead of Fmoc-His (Tr)_TwoiPr (100-200 mg) was placed in each of the 40 gas dispersion tubes, and these tubes were placed in the Diversomer apparatus. The deprotection and coupling reactions described in Example 4 were then performed sequentially using various combinations of the following acylating agents and amines.
Aminating agent
1) Benzyl isocyanate
2) p-toluenesulfonyl chloride
3) Cyclohexyl isocyanate
4) Phenyl isocyanate
5) i-propyl isocyanate
6) n-butyl isocyanate
7) 4-chlorophenyl isocyanate
8) 1-naptyl isocyanate
9) 3-methoxypropyl isocyanate
10) 4-ethoxyphenyl isocyanate
11) 2-phenethyl isocyanate
12) 3-phenylpropionyl chloride
14) Phenylacetyl chloride
15) 4-phenoxyphenyl isocyanate
16) Benzyl chloroformate
17) (Trans) -2-phenylcyclopropyl isocyanate
18) 1-adamantyl chloroformate
Amine
1) 3-phenoxypropylamine
2) 2- (phenylmethoxy) ethylamine
3) 2-[(phenylmethyl) thio] ethylamine
4) 4-phenylbutylamine
5) 3- (2-methoxyphenyl) propylamine
6) 1-benzylpiperazine
7) o-benzyl-hydroxylamine
8) Methionine methyl ester
9) Benzylamine
10) 2-phenylethylamine
Sequence 1. Following separation from the resin and work-up as described in Example 4, the following substituted dipeptides of formula I (1-40) were prepared:

Sequence 2. Following separation from the resin and work-up as described in Example 4, the following substituted dipeptides of Formula I (41-80) were prepared:

Example 6
N- [N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester {Cbz-His- Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
Step 1. Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
To a solution of Boc-Tyr (OBn) (1.88 g, 6.50 mmol) in EtOAc (30 ml) at 0 ° C. was added HOBT hydrate (1.19 g, 7.80 mmol) followed by DCC (1.61 g, 7.80 mmol). Was. Ser (OBn) -CO in EtOAc (20 ml)_TwoA solution of Me · TFA (2.1 g, 6.50 mmol), then Et_ThreeM (1.09 ml, 7.80 mmol) was added. The mixture was warmed to room temperature and stirred overnight. The mixture was filtered, diluted with EtOAc and saturated NaHCO_ThreeAqueous, washed twice with brine, dried over MgSO_FourAnd concentrated. Flash chromatography (40% EtOAc / hexane) provided 2.67 g (73%) of the title compound as a white solid. 81-84 ° C
Step 2. Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe ・ TFA
Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe (from step 1 above, 2.64 g, 4.69 mmol) was added to CH_TwoCl_Two(15 ml), cooled to 0 ° C. and TFA (5 ml) was added. The solution was warmed to room temperature and stirred for 4 hours. Concentrate the solution and add CH_TwoCl_TwoAnd concentrated twice. The resulting oil was triturated with ether to give 2.7 g of the title compound as a white solid.
Step 3. Cbz-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
To a solution of Cbz-His (1.00 g, 3.47 mmol) in DMF (15 ml) at 0 ° C. was added HOBT (0.64 g, 4.16 mmol) and DCC (0.86 g, 4.16 mmol). Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoA solution of Me.TFA (from step 2 above, 2.0 g, 3.47 mmol), then Et_ThreeN (0.58 ml, 4.16 mmol) was added. The mixture was warmed to room temperature and stirred overnight. The mixture was filtered and the filtrate was washed with CHCl_ThreeDiluted with saturated NaHCO_ThreeAqueous, washed twice with brine, dried over MgSO_FourAnd concentrated. Flash chromatography (2-5% MeOH / CHCl_Three) Gave 2.14 g of the title compound as a white solid. 175-176 ° C; FAB-MS 734 (m + 1).
Elemental analysis value (C₄₁H₄₃N_FiveO₈As):
Theoretical value: C 67.11% H 5.91% N 9.54%
Measured value: C 66.96% H 6.01% N 9.41%
Example 7
N- [N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine {Cbz-His-Tyr ( OBn) -Ser (OBn)｝
Cbz-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO in THF (50 ml) and MeOH (15 ml)_TwoTo a solution of Me (from Example 6, above, 2.02 g, 2.75 mmol) at 0 ° C. was added 0.1 N LiOH (30.3 ml, 3.03 mmol). The solution was stirred at 0 ° C. for 6 hours and concentrated. Water was added and the pH was adjusted to 4-5 with 1N HCl. The mixture was filtered, the solid collected and dried to give 1.55 g (78%) of the title compound as a white solid. 187-192 [deg.] C; ES-MS 720 (m + l).
Elemental analysis value (C₄₀H₄₁N_FiveO₈・ 1.5H_TwoO):
Theoretical value: C 64.33% H 5.94% N 9.38%
Measured value: C 64.29% H 5.73% N 9.15%
Example 8
N- [N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester {Cbz-D- His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
Step 1. Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe ・ HCl
Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO in EtOAc_TwoA solution of Me (9.90 g, 17.6 mmol, from Example 6, Step 1 above) was cooled to 0 ° C. Anhydrous HCl gas was bubbled through the cold solution for 5 minutes. The solution was warmed to room temperature and stirred overnight. The solution was concentrated, taken up in EtOAc and re-concentrated to give 8.75 g of the title compound as a foam. CI-MS 463 (m + l).
Step 2. Cbz-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
According to Example 6, step 3, Cbz-D-His (Tr) instead of Cbz-His, and Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoTyr (OBn) -Ser (OBn) -CO instead of Me • THF_TwoThe title compound was obtained as a white solid using Me.HCl. Melting point 78-88 [deg.] C; FAB-MS 976 (m + l).
Step 3. Cbz-D-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
HOAc: Cbz-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO in water (4: 1, 2 ml)_TwoA solution of Me (from step 2 above, 0.27 g, 0.28 mmol) was stirred at 80 ° C. for 5 minutes and cooled to room temperature. The solution was extracted with EtOAc and saturated NaHCO_ThreePartitioned into an aqueous solution. The organic phase is washed with brine and dried (MgSO_Four) And concentrated. Flash chromatography (2-5% MeOH: CHCl_Three) Gave 0.10 g of the title compound as a foam. FAB-MS 734 (m + 1).
Example 9
N- [N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -D-serine methyl ester {Cbz-His- Tyr (OBn) -D-Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
According to Example 6, in step 1 Ser (OBn) -CO_TwoD-Ser (OBn) -CO instead of Me ・ TFA_TwoThe title compound was obtained using Me.TFA. 168-170 ° C; FAB-MS 734 (m + 1).
Example 10
N- [α-methyl-N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -DL-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester Cbz-His-DL- (α-Me) Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
According to Example 6, the title compound was obtained in step 1 using Boc-DL- (α-Me) Tyr (OBn) instead of Boc-Tyr (OBn). FAB-MS 748 (m + 1).
Example 11
N-ethyl-N_α-[N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serinamide {Cbz-His-Tyr (OBn ) −Ser (OBn) −CONHEt｝
According to Example 6, in step 2, Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoThe title compound was obtained using Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CONHEt instead of Me. Melting point 182-188 [deg.] C; FAB-MS 747 (m + l).
Example 12
N-ethyl-N_α-[N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serinamide {Cbz-His-Tyr (OBn ) −Ser (OBn) −CONHEt｝
According to Example 6, in step 2, Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoThe title compound was obtained using Boc-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CONHEt instead of Me and Cbz-D-His in step 3 instead of Cbz-His. 193-196 ° C; ES-MS 747 (m + l).
Example 13
N- [N- [1-methyl-N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester Cbz-His (1-Me) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
Step 1. Cbz-His (1-Me)
Benzyl chloroformate (0.24 ml, 1.7 mmol) was added to THF (5 ml) and NaHCO_ThreeTo a slurry of 1-methyl-L-histidine (0.25 g, 1.5 mmol) in an aqueous solution (5 ml) was added dropwise at 0 ° C. The mixture was warmed to room temperature and stirred overnight. The mixture was concentrated, diluted with water, washed with ether, and the pH was adjusted to 6-7 with 1N HCl. Concentrate the mixture and add CHCl_Three(150 ml) and MeOH (15 ml) and stirred for 1 hour. Dry the mixture (MgSO_Four) And concentrated to give 0.48 g of the title compound, which was used without further purification.
Step 2. Cbz-His (1-Me) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
CH_TwoCl_TwoCbz-His (1-Me) (0.36 g, 1.2 mmol from step 1 above), Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoFrom a slurry of Me.HCl (from Example 8, Step 1 above, 0.60 g, 1.2 mmol), DCC (0.30 g, 1.4 mmol) and HOBT (0.19 g, 1.4 mmol), Et._ThreeN (0.17 ml, 1.2 mmol) was added and the mixture was stirred at room temperature overnight. CHCl mixture_ThreeDiluted with saturated NaHCO_ThreeAqueous solution, washed with brine and dried (MgSO_Four) And concentrated. Flash chromatography (1% MeOH: CHCl_Three) Gave the title compound as a white solid. 161.5-163.5 [deg.] C; FAB-MS 748 (m + l).
Example 14
N- [N- [1-methyl-N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester Cbz-D-His (1-Me) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
According to Example 13, the title compound was obtained using 1-methyl-D-histidine instead of 1-methyl-L-histidine. FAB-MS 748 (m + 1).
Example 15
N- [L-2-amino-N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] -4- [4- (phenylmethoxy) phenyl] butanoyl] -O- (phenylmethyl) -L- Serine methyl ester {Cbz-D-His-homo Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
According to Example 6, the title compound was obtained using Boc-homo Tyr (OBn) instead of Boc-Tyr (OBn) in step 1 and using Cbz-D-His instead of Cbz-His in step 3. Obtained. FAB-MS 748 (m + 1).
Example 16
N- [4-phenyl-N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -L-phenylalanyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester {Cbz-His-Phe (4-Ph) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
According to Example 6, the title compound was obtained in step 1 using Boc-Phe (4-Ph) instead of Boc-Tyr (OBn). 184-187 ° C. FAB-MS 704 (m + 1).
Example 17
N- [O- (phenylmethyl) -N- [N-[[(phenylmethyl) amino] carbonyl] -L-histidyl] -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -serine methyl ester {BnNHCO-His -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
Step 1. Fmoc-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
The title compound was obtained according to Example 13, Step 2 using Fmoc-His (Tr) instead of Cbz-His (1-Me). 82-92 ° C.
Step 2. His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
Piperidine (4.0ml) CH_TwoCl_TwoFmoc-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO in (20 ml)_TwoMe (from step 1 above, 1.85 g, 1.74 mmol) was added to the slurry. The solution was stirred at room temperature for 2 hours and concentrated. The residue was taken up in EtOAc (150 ml), washed with water (3 × 50 ml) and dried (MgSO_Four) And concentrated. Etch the resulting oil_TwoTriturated with O / hexane. Flash chromatography of the residue (2% MeOH / CHCl_Three) Gave 1.03 g of the title compound as a foam. 61.5-70 ° C; ES-MS 843 (m + 1).
Step 3. BnNHCO-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
Benzyl isocyanate (0.053 ml, 0.43 mmol) was added to His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO in EtOAc (5 ml)._TwoMe (0.33 g, 0.39 mmol from step 2 above) was added in one portion. The resulting slurry was stirred at room temperature for 3 hours and concentrated to give the title compound (0.4g), which was used without further purification.
Step 4. BnNHCO-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
According to Example 8, Cbz-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoBnNHCO-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO instead of Me_TwoThe title compound was obtained using Me. 196.5-199 [deg.] C; ES-MS 733 (m + l).
Example 18
N- [N- [N-[(1-oxo-3-phenylpropyl) -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -O- (phenylmethyl) -L-serine methyl ester PhCH_TwoCH_TwoCO-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe｝
Process 1.PhCH_TwoCH_TwoCO-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO in THF (5 ml)_TwoTo a cooled (0 ° C.) solution of Me (from Example 17, Step 2 above, 0.33 g, 0.39 mmol) was added Et._ThreeN (0.06 ml, 0.43 mmol) was added followed by phenylpropionyl chloride (0.064 ml, 0.43 mmol). The resulting slurry was returned to room temperature and stirred overnight. Mix the mixture with EtOAc and saturated NaHCO_ThreePartitioned into an aqueous solution. The organic layer is washed with brine and dried (MgSO_Four) And concentrated to give the title compound as a solid, which was used without further purification.
Process 2.PhCH_TwoCH_TwoCO-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoMe
According to Example 8, Step 3, Cbz-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoPhCH instead of Me_TwoCH_TwoCO-His (Tr) -Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoThe title compound was obtained using Me. MP 193-16.5C; ES-MS 732 (m + l).
Example 19
N_α-[N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -N- [2- (phenylmethoxy) ethyl] -L-tyrosinamide {Cbz-His-Tyr (OBn)- CONHCH_TwoCH_TwoOBn｝
Step 1. Cbz-His-Tyr (OBn) -CO_TwoMe
According to Example 6, step 3, Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoTyr (OBn) -CO instead of Me ・ TFA_TwoThe title compound was obtained as a white powder using Me.TFA. 145-148 ° C; CI-MS 557 (m + l).
Step 2. Cbz-His-Tyr (OBn)
According to Example 7, Cbz-His-Tyr (OBn) -Ser (OBn) -CO_TwoCbz-His-Tyr (OBn) -CO instead of Me_TwoThe title compound was obtained as a white powder using Me. 79-92 [deg.] C; CI-MS 543 (m + l).
Step 3. Cbz-His-Tyr (OBn) -CONHCH_TwoCH_TwoOBn
To a solution of Cbz-His-Tyr (OBn) (from step 2 above, 0.43 g, 0.79 mmol) in DMF (4 ml) at 0 ° C. was added HOBT (0.15 g, 0.95 mmol) and DCC (0.20 g, 0.95 mmol). ) Was added. A solution of 2- (phenylmethoxy) ethylamine (0.12 g, 0.79 mmol) in DMF (1 ml) was added. The mixture was warmed to room temperature and stirred overnight. The mixture was filtered and CHCl_ThreeDiluted with saturated NaHCO_ThreeWash twice with aqueous solution, wash with brine, MgSO_FourAnd concentrated. Flash chromatography (3-5% MeOH / CHCl_Three) Gave 0.34 g (63%) of the title compound as a white solid. 136-150 ° C; FAB-MS 676 (m + l).
Elemental analysis value (C₃₉H₄₁N_FiveO₆As):
Theoretical value: C 69.32% H 6.12% N 10.36%
Measured value: C 69.43% H 6.24% N 10.45%
Example 20
N_α-[N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] N- [2- (phenylmethoxy) ethyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosinamide {Cbz-D-His-Tyr (OBn) −CONHCH_TwoCH_TwoOBn｝
According to Example 6, 2- (phenylmethoxy) ethylamine was used in step 1 instead of Ser (OBn) .TFA, and Et_ThreeN was omitted and the title compound was prepared in step 3 using Cbz-D-His- instead of Cbz-His. Melting point 161-165 [deg.] C; FAB-MS 676 (m + l).
Example 21
N_α-[N-methyl-N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] -N- [2- (phenylmethoxy) ethyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosinamide {Cbz-D-His -(N-Me) Tyr (OBn) -CONHCH_TwoCH_TwoOBn｝
The title compound was obtained according to Example 20 using Boc- (N-Me) Tyr (OBn) instead of Boc-Tyr (OBn). 64-78 ° C; ES-MS 690 (m + l).
Example 22
N_α-[Α-methyl-N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -D-histidyl] -N- [2- (phenylmethoxy) ethyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosinamide {Cbz- D-His- (α-Me) Tyr (OBn) -CONHCH_TwoCH_TwoOBn｝
The title compound was obtained according to Example 20 using Boc- (α-Me) Tyr (OBn) instead of Boc-Tyr (OBn). 66-78 [deg.] C; ES-MS 690 (m + l).
Example 23
N- (2-phenylethyl) -N_α-[N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosinamide {Cbz-His-Tyr (OBn) -CONHCH_TwoCH_TwoPh｝
The title compound was obtained as a white solid according to Example 19, Step 3, using 2-phenylethylamine instead of 2- (phenylmethoxy) ethylamine. Melting point 188-189.5 [deg.] C; FAB-MS 646 (m + l).
Example 24
N- [N- [N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -L-tyrosyl] -3- (3-pyrazinyl) -L-alanine methyl ester {Cbz-His -Tyr (OBn) -Pyr-CO_TwoMe｝
According to Example 19, Step 3, Pyr-CO is used instead of 2- (phenylmethoxy) ethylamine._TwoThe title compound was obtained as a white solid using Me. 180-182.5 [deg.] C (decomposition); FAB-MS 705 (m + l).
Example 25
(S, R) -N- [2- (4-benzyloxy-phenyl) -1- (3-phenoxy-propylcarbamoyl) -ethyl] -2- [3- (4-ethoxy-phenyl) -ureido]- 3- (3H-Imidazol-4-yl) -propionamide {(4-EtOPh) NHCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh｝
Step 1. Boc-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh
2- (phenylmethoxy) ethylamine (0.81 g, 5.4 mmol) was combined with EDAC (1.2 g, 6.5 mmol), HOBT (0.87 g, 6.5 mmol) and Boc-Tyr (OBn) -OH (2.0 ml) in dry DMF (15 ml). g, 5.4 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The solution was diluted 1: 1 with EtOAc: Et_TwoDiluted with O (40 ml), washed with saturated aqueous NaCl (4 × 10 ml) and dried (MgSO_Four), Filtered and concentrated in vacuo to give a solid, which was further purified by trituration with hexane to give the pure product. 145-146 ° C.
Step 2. Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh
Dry HCl gas was added to Boc-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeBubbled in an ice-cold solution of OPh (from Step 1 above, 2.0 g, 3.9 mmol) for 4 minutes. The resulting mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour, warmed to room temperature and stirred for 1 hour. The solution was concentrated in vacuo to give a solid, which was triturated with ether to give Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh.HCl was obtained; CI-MS 405 (m + 1). CHCl_ThreeAnd cooled in an ice bath and NH_ThreeA gas was bubbled through the mixture for 2 minutes. NH_FourThe Cl was filtered off and the supernatant concentrated in vacuo to give the free base of the title compound, which was used in the next step without further purification.
Step 3. Fomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh
Fomc-D-His (Tr) -CO was added to a solution of HOBT (0.48 g, 3.5 mmol) in DMF (10 ml)._TwoH (2.0 g, 3.2 mmol) was added followed by EDAC (0.67 g, 3.5 mmol). The mixture was stirred at room temperature for 20 minutes, and Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeA solution of OPh (1.4 g, 3.2 mmol from step 2 above) was added. The mixture was stirred at room temperature overnight, water (20 ml) and 1: 1 Et_TwoPartitioned into a mixture of O: EtOAc (50 ml). The layers were separated and the organic phase was washed with saturated aqueous NaCl (4 × 20 ml) and dried (MgSO 4)._Four)did. Filtration and concentration in vacuo gave an oil which was further flash chromatographed (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) to give the protected His-Tyr dipeptide; FAB-MS 1006 (m).
Step 4. D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh
CH_TwoCl_TwoFomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh (from Step 3 above, 1.0 g, 0.99 mmol) was treated with piperidine (0.18 g, 2.1 mmol). The resulting mixture was stirred for 2 hours, concentrated in vacuo and the resulting oil was flash chromatographed (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) and purified by (4-EtOPh) NHCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh was obtained; ES-MS 784 (m + 1).
Step 5. (4-EtOPh) NHCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh
CH_TwoCl_TwoD-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh (from Step 4 above, 0.55 g, 0.7 mmol) was treated with 4-ethoxyphenyl isocyanate (0.1 g, 0.7 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour. Concentrated in vacuo. The resulting oil is purified by flash chromatography (SiO_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) and purified by (4-EtOPh) NHCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh was obtained; ES-MS 947 (m + 1).
Step 6. (4-EtOPh) NHCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh
(4-EtOPh) NHCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh (from Step 5 above, 0.5 g, 0.52 mmol) was treated with pyridine.HCl (catalytic amount). The resulting mixture was stirred at 65 ° C. for 6 hours. Concentration in vacuo gave an oil which was flash chromatographed (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) and purified by (4-EtO-Ph) NHCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh was obtained. 185-187 ° C; ES-MS 705 (m + l).
Example 26
(S, R) -N- {2- (4-benzyloxy-phenyl) -1- [3- (2-methoxy-phenyl) -propylcarbamoyl] -ethyl} -3- (3H-imidazol-4-yl ) -2-Phenylacetylamino-propionamide @ PhCH_TwoCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)｝
Step 1. Boc-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)
The title compound was obtained as a white solid according to Example 25, Step 1, using 3- (2-methoxyphenyl) propylamine in place of 2- (phenylmethoxy) ethylamine. 125-126.5 ° C.
Step 2. Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)
According to Example 25, Step 2, Boc-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeBoc-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃The title compound was obtained as a white solid using (2-MeOPh); CI-MS 419 (m + 1).
Step 3. Fomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)
According to Example 25, Step 3, Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeTyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃The title compound was obtained as a foam using (2-MeOPh); ES-MS 1020 (m).
Step 4. D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)
According to Example 25, Step 4, Fomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeFomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃The title compound was obtained as a white foam using (2-MeOPh); ES-MS 798 (m + 1).
Process 5.PhCH_TwoCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)
CH_TwoCl_TwoD-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃To a solution of (2-MeOPh) (0.4 g, 0.5 mmol) was added N-methylmorpholine (0.05 g, 0.5 mmol) followed by phenylacetyl chloride (0.08 g, 0.5 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 2 hours. Dilute with DCM and add saturated NaHCO_ThreeAqueous solution, washed with saturated aqueous NaCl and dried (MgSO_Four)did. Flash chromatography (SiO_Two, CHCl_Three: MeOH eluent). The title compound was obtained as a foam; FAB-MS 916 (m).
Process 6.PhCH_TwoCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃(2-MeOPh)
According to Example 25, Step 6, (4-EtOPh) NHCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreePhCH instead of OPh_TwoCO-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)₃The title compound was obtained as a white foam using (2-MeOPh); ES-MS 674 (m + 1).
Example 27
(S, R) -N- [2- (4-benzyloxyphenyl) -1-phenethylcarbamoyl-ethyl] -3- (3H-imidazol-4-yl) -2- [3- (4-phenoxy-phenyl ) -Ureido] -propionamide {(4-PhOPh) NHCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh｝
Step 1. Boc-Tyr (OBn) CONH (CH_Two)_TwoPh
The title compound was obtained as a white solid according to Example 25, Step 1, using phenethylamine instead of 2- (phenylmethoxy) ethylamine; CI-MS 475 (m + 1).
Step 2. Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh
According to Example 25, Step 2, BocTyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeBocTyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoThe title compound was obtained as a white solid using Ph; CI-MS 375 (m + 1).
Step 3. Fomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh
According to Example 25, Step 3, Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeTyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoThe title compound was obtained as a foam using Ph; ES-MS 977 (m + 1).
Step 4. Fomc-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh
Fomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh (1.2 g, 1.6 mmol) was treated with pyridine.HCl (catalytic amount). The resulting mixture was stirred at 65 ° C. overnight and concentrated in vacuo to give an oil that was flash chromatographed (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) to give a white solid; ES-MS 734 (m + 1).
Step 5. (4-PhOPh) NHCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh
CH_TwoCl_TwoFomc-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh (0.6 g, 0.8 mmol) was treated with piperidine (0.14 g, 1.6 mmol). The resulting mixture is stirred for 2 hours, concentrated in vacuo and flash chromatography (SiO_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) and purified by D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoGot Ph. CH foam_TwoCl_Two(5 ml) and treated with 4-phenoxyphenyl isocyanate (0.05 g, 0.23 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 1 hour, concentrated in vacuo, and the resulting oil was purified by flash chromatography (SiO 2_Two, CHCl_Three; MeOH eluent) and purified by (4-PhOPh) NHCO-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoPh was obtained as a foam; ES-MS 723 (m + 1).
Example 28
(S, R) -N- [1- (4-benzyloxy-benzyl) -2- (4-benzyl-piperazin-1-yl) -2-oxo-ethyl] -3- (3H-imidazole-4- Yl) -2- (toluene-4-sulfonylamino) -propionamide {(4-MePh) SO_Two-D-His-Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) .HCl}
Step 1. Boc-Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl)
The title compound was obtained as a white solid according to Example 25, Step 1, using 1-benzylpiperidine instead of 2- (phenylmethoxy) ethylamine; CI-MS 530 (m + 1).
Step 2. Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl)
According to Example 25, Step 2, Boc-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeThe title compound was obtained as a white solid using Boc-Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) instead of OPh; CI-MS 430 (m + 1).
Step 3. Fomc-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl)
According to Example 25, Step 3, Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeThe title compound was obtained as a foam using Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) instead of OPh; ES-MS 1032 (m + 1).
Step 4. (4-MePh) SO_Two-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl)
CH_TwoCl_TwoFomc-D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_ThreeOPh (0.7 g, 0.69 mmol) was treated with piperidine (0.14 g, 1.6 mmol). The resulting mixture was stirred for 2 hours, concentrated in vacuo, and the resulting oil was purified by flash chromatography (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH eluent) and purified by D-His-Tyr (OBn) -CONH (CH_Two)_TwoGot Ph. CH foam_TwoCl_Two(5 ml) and treated with pyridine (0.05 g, 0.63 mmol) followed by 4-toluenesulfonyl chloride (0.12 g, 0.63 mmol). The resulting mixture was stirred at room temperature for 3 hours, concentrated in vacuo, and the resulting oil was purified by flash chromatography (SiO 2_Two, CHCl_Three: MeOH dissolving agent) and purified by (4-MePh) SO_Two-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) was obtained; ES-MS 963 (m + 1).
Step 5. (4-MePh) SO_Two-D-His-Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) .HCl
(4-MePh) SO_Two-D-His (Tr) -Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) (0.21 g, 0.22 mmol) is treated with 80% aqueous HCl (3 ml) and heated to 80 ° C. for 5 minutes did. The mixture was cooled and diluted with water (5ml). The solid was filtered off and the supernatant was concentrated in vacuo to give an oil. The oil was dissolved in water (15 ml), frozen and lyophilized (4-MePh) SO_Two-D-His-Tyr (OBn) -CO (4-Bn-piperazin-1-yl) .HCl was obtained; ES-MS 720 (m).
Example 29
N_α-[N-[(phenylmethoxy) carbonyl] -L-histidyl] -O- (phenylmethyl) -N-methyl-N- [2- (phenylmethoxy) ethyl] -L-tyrosinamide {Cbz-His-Tyr (OBn) -CON (Me) CH_TwoCH_TwoOBn｝
The title compound was prepared according to Example 19, Step 3, using N-methyl-N- [2- (phenylmethoxy) ethyl] amine instead of 2- (phenylmethoxy) ethylamine; FAB-MS 690 (m + 1) ).
The present invention may be embodied in other specific forms without departing from its spirit or essential characteristics. All of the described embodiments are merely examples and do not limit the invention. The scope of the invention is, therefore, indicated by the appended claims rather than by the foregoing description. All modifications that come within the meaning and range equivalent to the claimed invention are included in the scope of the present invention.

Claims (19)

式Ｉ

〔式中、ｎは１または２であり、
ＡはCOR³、CO₂R³、CONHR³、CSR³、Ｃ（Ｓ）OR³、Ｃ（Ｓ）NHR³、CF₃SO₂、アリール−SO₂またはアルキル−SO₂であり、ここでR³はアルキル、（CH₂）_ｍ−シクロアルキル、（CH₂）_ｍ−アリール、（CH₂）_ｍ−ヘテロアリールまたは（CH₂）_mO−アルキルであり、そしてｍは０、１、２または３であり；
Ｒは独立してＨまたはMeであり；
Ｙは独立してＨまたはMeであり；
Ｚは独立してＨまたはMeであり；
R¹はＨ、CO−アリール、（CH₂）_ｍ−アリール、Ｏ（CH₂）_ｍ−シクロアルキル、Ｏ（CH₂）_ｍ−アリールまたはＯ（CH₂）_ｍ−ヘテロアリールであり、ここでｍは上記で定義された通りであり、そしてR¹はメタまたはパラ位にあり；
ＸはＨ、アルキル、CF₃、Ｆ、Cl、Br、Ｉ、HO、MeO、NO₂、NH₂、Ｎ（Me）_２、OPO₃H₂またはCH₂PO₃H₂などの１〜４個の置換基であり；
R²はNR（CH₂）_nCO₂R³、NR（CH₂）_nCONHR³、NR（CH₂）_nR³、NR（CH₂）_n+1OR⁴、NR（CH₂）_n+1SR⁴、NRCH（COR⁵）（CH₂）_ｎ−ヘテロアリール、NRCH（COR⁵）（CH₂）_nOR³、NRCH（COR⁵）（CH₂）_nSR³または

であり、Ｒ、R³およびｎは上記で定義された通りであり、R⁴はＨまたはR³であり、そしてR⁵はOH、NH₂、OR³またはNHR₃である〕の化合物、その光学異性体、ジアステレオマーまたは製薬上許容しうる塩、ただしCbz−His−Phe−Gly−OmeおよびCbz−His−Phe（NO₂）−Gly−Omeを除く。Formula I

Wherein n is 1 or 2,
A is COR ³ , CO ₂ R ³ , CONHR ³ , CSR ³ , C (S) OR ³ , C (S) NHR ³ , CF ₃ SO ₂ , aryl-SO ₂ or alkyl-SO ₂ , where R ³ alkyl, (CH _{2) m} - cycloalkyl, (CH _{2) m} - aryl, (CH _{2) m} - heteroaryl or (CH _{2) m} O-alkyl, and m is 0, 1, 2 or 3;
R is independently H or Me;
Y is independently H or Me;
Z is independently H or Me;
R ¹ is H, CO- aryl, (CH _{2) m} - aryl, O (CH _{2) m} - cycloalkyl, O (CH _{2) m} - aryl or O (CH _{2) m} - heteroaryl, wherein m is as defined above, and R ¹ is in the meta or para position;
1-4 X is H, _{alkyl, CF 3, F, Cl,} Br, I, HO, MeO, such as _{NO 2, NH 2, N (} Me) 2, OPO 3 H 2 or CH ₂ PO ₃ H ₂ Is a substituent of
R ² is _{NR (CH 2) n CO 2} R 3, NR (CH 2) n CONHR 3, NR (CH 2) n R 3, NR (CH 2) n + 1 OR 4, NR (CH 2) n + _{^{1 SR 4, nRCH (COR 5}} ) (CH 2) n - ^{heteroaryl, nRCH (COR 5) (CH} 2) n oR 3, nRCH (COR 5) (CH 2) n SR 3 or

R, R ³ and n are as defined above, R ⁴ is H or R ³ , and R ⁵ is OH, NH ₂ , OR ³ or NHR ₃ ], wherein excluding enantiomers, salts acceptable diastereomers or pharmaceutically, except that Cbz-His-Phe-Gly- Ome and _{Cbz-His-Phe (NO 2} ) -Gly-Ome. 式II

〔式中、Ａ′はCO₂R³、CONHR³C（Ｓ）NHR³またはアリール−SO₂であり、R³はアルキル、（CH₂）_ｍ−シクロアルキル、（CH₂）_ｍ−アリール、（CH₂）_ｍ−ヘテロアリールであり、そしてｍは０、１、２または３であり；
Ｒは独立してＨまたはMeであり；
Ｙは独立してＨまたはMeであり；
Ｚは独立してＨまたはMeであり；
R¹′は（CH₂）_ｍ−アリール、Ｏ（CH₂）_ｍ−アリール、OPO₃H₂またはCH₂PO₃H₂であり、ここでｍは上記で定義された通りであり；
R²′はNR（CH₂）₂OR⁴、NR（CH₂）₂SR⁴、NRCH（COR⁵）CH₂OR³またはNRCH（COR⁵）CH₂SR³であり、ここでR³およびｎは上記で定義された通りであり、R⁴はＨまたはR³であり、そしてR⁵はOH、NH₂、OR³またはNHR³である〕の化合物、その光学異性体、ジアステレオマーまたは製薬上許容しうる塩である請求項１記載の化合物。Formula II

Wherein A ′ is CO ₂ R ³ , CONHR ³ C (S) NHR ³ or aryl-SO ₂ , wherein R ³ is alkyl, (CH ₂ ) _m -cycloalkyl, (CH ₂ ) _m -aryl, (CH ₂ ) _m -heteroaryl, and m is 0, 1, 2, or 3;
R is independently H or Me;
Y is independently H or Me;
Z is independently H or Me;
R ¹ 'is (CH _{2) m} - aryl, O (CH _{2) m} - aryl, OPO ₃ H ₂ or CH ₂ PO ₃ H _2, where m is as defined above;
R ² ′ is NR (CH ₂ ) ₂ OR ⁴ , NR (CH ₂ ) ₂ SR ⁴ , NRCH (COR ⁵ ) CH ₂ OR ³ or NRCH (COR ⁵ ) CH ₂ SR ³ , where R ³ and n Is as defined above, R ⁴ is H or R ³ , and R ⁵ is OH, NH ₂ , OR ³ or NHR ³ ], an optical isomer, diastereomer or pharmaceutical thereof 2. A compound according to claim 1 which is a pharmaceutically acceptable salt. ＡがCO₂R³またはCONHR³である請求項１記載の化合物。A is CO ₂ R ³ or CONHR ³ in which a compound according to claim 1.

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of:

からなる群より選択される請求項１記載の化合物。

The compound according to claim 1, which is selected from the group consisting of: 治療的に有効な量の請求項１記載の化合物を製薬上許容しうる賦形剤、希釈剤または担体と混合して含有する、増殖抑制剤用医薬組成物。A pharmaceutical composition for a growth inhibitor comprising a therapeutically effective amount of the compound of claim 1 in admixture with a pharmaceutically acceptable excipient, diluent or carrier. 治療的に有効な量の請求項１記載の化合物を製薬上許容しうる賦形剤、希釈剤または担体と混合して含有する、抗ガン剤用医薬組成物。A pharmaceutical composition for an anticancer drug, comprising a therapeutically effective amount of the compound of claim 1 in admixture with a pharmaceutically acceptable excipient, diluent or carrier. 治療的に有効な量の請求項１記載の化合物を製薬上許容しうる賦形剤、希釈剤または担体と混合して含有する、再狭窄症抑制剤用医薬組成物。A pharmaceutical composition for an anti-restenosis agent comprising a therapeutically effective amount of the compound of claim 1 in admixture with a pharmaceutically acceptable excipient, diluent or carrier. 固相支持体法を使用し、固相ペプチド合成器により構成単位を逐次カップリングし、有機化合物を固相支持体から分離し、その後場合により有機化合物のＣ−末端を液相で修飾して式Ｉの化合物またはその製薬上許容しうる塩を得る工程を包含する請求項１記載の有機化合物またはその製薬上許容しうる塩の製造法。Using the solid phase support method, the constituent units are sequentially coupled by a solid phase peptide synthesizer, the organic compound is separated from the solid phase support, and optionally the C-terminus of the organic compound is modified with a liquid phase. The method for producing an organic compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to claim 1, comprising a step of obtaining a compound of the formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof. 液相法を使用し、構成単位を逐次カップリングして式Ｉの化合物またはその製薬上許容しうる塩を得る工程を包含する、請求項１記載の化合物またはその製薬上許容しうる塩の製造法。2. Preparation of a compound of claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, comprising the step of sequentially coupling constituent units using a liquid phase method to obtain a compound of formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof. Law. ２−クロロトリチル樹脂で支持されたＤ−またはＬ−ヒスチジン含有ジペプチド誘導体を使用して多数の同時合成装置で式Ｉの化合物を同時に合成し、逐次Ｎ−末端基の脱保護およびアシル化を行ない、その後逐次カルボキシ末端基の脱保護、カルボキシルの活性化および一連のアミンとの縮合を行ない、その後固体支持体から分離することを包含する、請求項１記載の化合物またはその製薬上許容しうる塩の製造法。The compound of formula I is simultaneously synthesized in a number of simultaneous synthesizers using a D- or L-histidine-containing dipeptide derivative supported on a 2-chlorotrityl resin to sequentially deprotect and acylate the N-terminal group. 2. The compound of claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which comprises sequentially deprotecting the carboxy end group, activating the carboxyl and condensing with a series of amines, and then separating from the solid support. Manufacturing method.