JP3459523B2 - 生理活性物質の製造方法 - Google Patents
生理活性物質の製造方法Info
- Publication number
- JP3459523B2 JP3459523B2 JP28142196A JP28142196A JP3459523B2 JP 3459523 B2 JP3459523 B2 JP 3459523B2 JP 28142196 A JP28142196 A JP 28142196A JP 28142196 A JP28142196 A JP 28142196A JP 3459523 B2 JP3459523 B2 JP 3459523B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- receptor
- substance
- physiologically active
- present
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/72—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for hormones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/72—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants for hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規な各種生理活
性物質の探索方法及び製造方法に関する。
性物質の探索方法及び製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、未知の生理活性物質の探索は、体
液や組織中に存在する成分を分析し、新規な物質を同定
及び単離し、発見された新規な物質の生理活性を調べる
ことにより行なわれている。
液や組織中に存在する成分を分析し、新規な物質を同定
及び単離し、発見された新規な物質の生理活性を調べる
ことにより行なわれている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上記した従来の方法
は、何の予測もなくただ生体中の成分を分析し、新たな
物質を見つけ出してその生理活性を調べるだけである。
しかしながら、生体中には極めて多くの成分が存在する
し、生理活性物質はしばしば低濃度でしか存在しないか
ら新規な物質を見つけることは困難な仕事である。しか
も、生体は非常に多くの生理反応を行なっているので、
新たに見つかった物質がどのような生理活性を有してい
るかを見つけることも困難である。このように、従来の
方法では、新規な生理活性物質を見つけだすのは困難な
作業である。
は、何の予測もなくただ生体中の成分を分析し、新たな
物質を見つけ出してその生理活性を調べるだけである。
しかしながら、生体中には極めて多くの成分が存在する
し、生理活性物質はしばしば低濃度でしか存在しないか
ら新規な物質を見つけることは困難な仕事である。しか
も、生体は非常に多くの生理反応を行なっているので、
新たに見つかった物質がどのような生理活性を有してい
るかを見つけることも困難である。このように、従来の
方法では、新規な生理活性物質を見つけだすのは困難な
作業である。
【０００４】従って、本発明の目的は、一定の予測性を
もってより効率的に新規な生理活性物質を探索する方法
を提供することである。
もってより効率的に新規な生理活性物質を探索する方法
を提供することである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本願発明者は、ある物質
Ａが作用する細胞に対して拮抗作用を有する細胞若しく
は物質が生体中に存在する該物質Ａのレセプターであっ
て、同一のレセプターにつき２種類以上のサイズのもの
が存在する場合があり、その欠失部分、つまりスプライ
スされた部分のアミノ酸配列が生理的意義を持つことを
見出した。例えば、カルシトニンは破骨細胞上のカルシ
トニンレセプターと結合して破骨細胞による骨吸収を抑
制し、一方、破骨細胞の作用と拮抗作用を有する骨芽細
胞が存在する。カルシトニンレセプターは既にアミノ酸
配列が報告されているが、サイズの異なる２種類以上の
ものが報告されている。本願発明者は、この２種類以上
のサイズのカルシトニンレセプターのうち、より長い方
のレセプターの１領域が切断されてより短い方のレセプ
ターになること、及びこの切断された領域が、カルシト
ニンが作用する破骨細胞の作用と拮抗する作用を有する
骨芽細胞に対して作用するであろうことを洞察した。そ
して、この切断領域を化学合成して調べたところ、この
新規なペプチドは骨芽細胞上のレセプターに結合して骨
形成を促進することが確認された。これにより、本願発
明者の上記の洞察が正しかったことが明らかになり、本
発明が完成された。
Ａが作用する細胞に対して拮抗作用を有する細胞若しく
は物質が生体中に存在する該物質Ａのレセプターであっ
て、同一のレセプターにつき２種類以上のサイズのもの
が存在する場合があり、その欠失部分、つまりスプライ
スされた部分のアミノ酸配列が生理的意義を持つことを
見出した。例えば、カルシトニンは破骨細胞上のカルシ
トニンレセプターと結合して破骨細胞による骨吸収を抑
制し、一方、破骨細胞の作用と拮抗作用を有する骨芽細
胞が存在する。カルシトニンレセプターは既にアミノ酸
配列が報告されているが、サイズの異なる２種類以上の
ものが報告されている。本願発明者は、この２種類以上
のサイズのカルシトニンレセプターのうち、より長い方
のレセプターの１領域が切断されてより短い方のレセプ
ターになること、及びこの切断された領域が、カルシト
ニンが作用する破骨細胞の作用と拮抗する作用を有する
骨芽細胞に対して作用するであろうことを洞察した。そ
して、この切断領域を化学合成して調べたところ、この
新規なペプチドは骨芽細胞上のレセプターに結合して骨
形成を促進することが確認された。これにより、本願発
明者の上記の洞察が正しかったことが明らかになり、本
発明が完成された。
【０００６】すなわち、本発明は、物質が作用する細胞
に対して拮抗作用を有する細胞若しくは物質が生体中に
存在する物質のレセプターであって、同一のレセプター
につき２種類以上のサイズのものが存在するレセプター
のアミノ酸配列を調べ、長いレセプターのどの領域が短
いレセプターにおいて欠失しているかを調べることを含
む生理活性物質の探索方法により判明した欠失領域又は
その誘導体を作製することから成る、生理活性ペプチド
の製造方法を提供する。
に対して拮抗作用を有する細胞若しくは物質が生体中に
存在する物質のレセプターであって、同一のレセプター
につき２種類以上のサイズのものが存在するレセプター
のアミノ酸配列を調べ、長いレセプターのどの領域が短
いレセプターにおいて欠失しているかを調べることを含
む生理活性物質の探索方法により判明した欠失領域又は
その誘導体を作製することから成る、生理活性ペプチド
の製造方法を提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明の方法では、ある物質Ａが
作用する細胞に対して拮抗作用を有する細胞若しくは物
質が生体中に存在する該物質Ａのレセプターに着目す
る。拮抗作用は生体の恒常性を保つ上で基本的なもので
あり、生体内には互いに拮抗作用を有する物質又は細胞
が非常に多く存在する。ある物質Ａが作用する細胞に対
して拮抗作用を有する細胞若しくは物質が生体中に存在
する該物質Ａのレセプターの例としては、カルシトニン
（これが作用する破骨細胞が骨芽細胞と拮抗）レセプタ
ー、グルカゴン（インシュリンと拮抗）レセプター、ソ
マトスタチン（成長ホルモンと拮抗）レセプター、副甲
状腺ホルモン（カルシトニン等と拮抗）レセプター等多
数のレセプターがある。レセプターとしては、カルシト
ニンレセプターのような７回膜貫通型のレセプターが挙
げられるが、これに限定されるものではない。
作用する細胞に対して拮抗作用を有する細胞若しくは物
質が生体中に存在する該物質Ａのレセプターに着目す
る。拮抗作用は生体の恒常性を保つ上で基本的なもので
あり、生体内には互いに拮抗作用を有する物質又は細胞
が非常に多く存在する。ある物質Ａが作用する細胞に対
して拮抗作用を有する細胞若しくは物質が生体中に存在
する該物質Ａのレセプターの例としては、カルシトニン
（これが作用する破骨細胞が骨芽細胞と拮抗）レセプタ
ー、グルカゴン（インシュリンと拮抗）レセプター、ソ
マトスタチン（成長ホルモンと拮抗）レセプター、副甲
状腺ホルモン（カルシトニン等と拮抗）レセプター等多
数のレセプターがある。レセプターとしては、カルシト
ニンレセプターのような７回膜貫通型のレセプターが挙
げられるが、これに限定されるものではない。
【０００８】本発明の方法では、これらのレセプターの
アミノ酸配列又はサイズを調べ、同じレセプターであり
ながら、サイズが異なるものを見つけ出す。この作業
は、当該レセプターのアミノ酸配列又はサイズを複数回
決定することにより行なってもよいし、文献に報告され
ている場合にはその報告を利用してもよい。同一のレセ
プターでありながらサイズの異なる２種類以上のものが
存在するレセプターの例として、カルシトニンレセプタ
ー、グルカゴンレセプター、ソマトスタチンレセプター
等を挙げることができる。
アミノ酸配列又はサイズを調べ、同じレセプターであり
ながら、サイズが異なるものを見つけ出す。この作業
は、当該レセプターのアミノ酸配列又はサイズを複数回
決定することにより行なってもよいし、文献に報告され
ている場合にはその報告を利用してもよい。同一のレセ
プターでありながらサイズの異なる２種類以上のものが
存在するレセプターの例として、カルシトニンレセプタ
ー、グルカゴンレセプター、ソマトスタチンレセプター
等を挙げることができる。
【０００９】同一のレセプターについてサイズの異なる
２種類以上のレセプターが存在することを見つけ出した
後、それら２種類以上のレセプターのアミノ酸配列を比
較し、長いレセプターのどの領域が欠失して短いレセプ
ターとなっているかを調べる。短いレセプターにおいて
欠失している領域が、当該拮抗作用に対して何らかの作
用を有する生理活性物質である。つまり、スプライスさ
れた構造のうちあるものが生理活性物質である。すなわ
ち、生理活性物質がレセプターに結合することにより、
そのレセプターの一部が切断され、この切断されたレセ
プター断片が当該拮抗作用に対して調節的な作用等の生
理活性を示すものと考えられる。例えば、下記実施例に
具体的に示されるように、カルシトニンレセプターにお
けるこの欠失領域が骨芽細胞上のレセプターに結合し、
骨形成を促進することが確かめられた。
２種類以上のレセプターが存在することを見つけ出した
後、それら２種類以上のレセプターのアミノ酸配列を比
較し、長いレセプターのどの領域が欠失して短いレセプ
ターとなっているかを調べる。短いレセプターにおいて
欠失している領域が、当該拮抗作用に対して何らかの作
用を有する生理活性物質である。つまり、スプライスさ
れた構造のうちあるものが生理活性物質である。すなわ
ち、生理活性物質がレセプターに結合することにより、
そのレセプターの一部が切断され、この切断されたレセ
プター断片が当該拮抗作用に対して調節的な作用等の生
理活性を示すものと考えられる。例えば、下記実施例に
具体的に示されるように、カルシトニンレセプターにお
けるこの欠失領域が骨芽細胞上のレセプターに結合し、
骨形成を促進することが確かめられた。
【００１０】上記方法により見出される欠失領域は生理
活性を有するから、これを製造することにより生理活性
物質が得られる。多くの場合、欠失領域は比較的短いペ
プチドから成るので、このような場合には市販のペプチ
ド合成機を用いて、化学合成により容易に当該生理活性
物質を作製することができる。あるいは、常法により遺
伝子工学的手法を用いて作製することもできる。
活性を有するから、これを製造することにより生理活性
物質が得られる。多くの場合、欠失領域は比較的短いペ
プチドから成るので、このような場合には市販のペプチ
ド合成機を用いて、化学合成により容易に当該生理活性
物質を作製することができる。あるいは、常法により遺
伝子工学的手法を用いて作製することもできる。
【００１１】得られた生理活性物質の生理活性は、上記
拮抗作用に関与するものであるから、それぞれの拮抗作
用に応じた適宜の方法により容易に確認することができ
る。
拮抗作用に関与するものであるから、それぞれの拮抗作
用に応じた適宜の方法により容易に確認することができ
る。
【００１２】なお、一般に生理活性を有するペプチドに
おいて、その少数のアミノ酸が他のアミノ酸に置換し、
少数のアミノ酸が付加され、又は少数のアミノ酸が欠失
した場合でも、その生理活性が維持される場合があるこ
とは当業者に周知の事実である。従って、上記の欠失領
域を構成するアミノ酸のうち、少数のアミノ酸が他のア
ミノ酸に置換し、少数のアミノ酸が付加され、又は少数
のアミノ酸が欠失したものであって、上記欠失領域から
成る生理活性物質が持つ生理活性を有する物質（本願発
明においてこのような物質を上記欠失領域の「誘導体」
という）を製造することも本発明の範囲に含まれる。こ
のような誘導体は上記欠失領域に対し、７０％以上、さ
らに好ましくは９０％以上の相同性を有することが好ま
しい。
おいて、その少数のアミノ酸が他のアミノ酸に置換し、
少数のアミノ酸が付加され、又は少数のアミノ酸が欠失
した場合でも、その生理活性が維持される場合があるこ
とは当業者に周知の事実である。従って、上記の欠失領
域を構成するアミノ酸のうち、少数のアミノ酸が他のア
ミノ酸に置換し、少数のアミノ酸が付加され、又は少数
のアミノ酸が欠失したものであって、上記欠失領域から
成る生理活性物質が持つ生理活性を有する物質（本願発
明においてこのような物質を上記欠失領域の「誘導体」
という）を製造することも本発明の範囲に含まれる。こ
のような誘導体は上記欠失領域に対し、７０％以上、さ
らに好ましくは９０％以上の相同性を有することが好ま
しい。
【００１３】
【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるも
のではない。
明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるも
のではない。
【００１４】実施例１ カルシトニンレセプターの欠失
領域の決定 カルシトニンレセプターのアミノ酸配列はJournal of C
linical Investigation,第９０巻、第５号(1992)に記載
されている。ここに記載されたカルシトニンレセプター
のアミノ酸配列を比較すると、短い方のアミノ酸配列で
は、長い方のアミノ酸配列の第１７５番目〜第１９０番
目のアミノ酸配列が欠失している。この欠失領域のアミ
ノ酸配列を配列番号１に示す。
領域の決定 カルシトニンレセプターのアミノ酸配列はJournal of C
linical Investigation,第９０巻、第５号(1992)に記載
されている。ここに記載されたカルシトニンレセプター
のアミノ酸配列を比較すると、短い方のアミノ酸配列で
は、長い方のアミノ酸配列の第１７５番目〜第１９０番
目のアミノ酸配列が欠失している。この欠失領域のアミ
ノ酸配列を配列番号１に示す。
【００１５】実施例２ ペプチドの製造
市販のペプチド合成機を用い、配列番号１に示されるア
ミノ酸配列を有するペプチドを合成した。
ミノ酸配列を有するペプチドを合成した。
【００１６】実施例３ 骨芽細胞増殖促進作用
骨芽細胞であるラット由来ＲＯＳ細胞（入手先：ＡＴＣ
Ｃ）を１０％牛胎児血清を含むＦ１０培地（入手先：大
日本製薬）にて培養し、５％炭酸ガス加湿３７℃恒温器
内にて育成した。トリプシン処理により２４穴培養プレ
ートに１ｘ１０5 個／穴（well）蒔種し、コンフルーエ
ントになったところで培地を１％牛胎児血清Ｆ１０培地
に交換し、２４時間培養した。その後、実施例２で製造
した本発明のペプチドを１％牛胎児血清Ｆ１０培地に溶
解し、容量を変化させながらｗｅｌｌに加えてさらに２
４時間培養を継続した。培養後、本ペプチドによる細胞
の増殖促進効果をＭＴＴアッセイにより測定し、非処理
群に対する増殖促進効果を求めた。なお、ＭＴＴアッセ
イ及び増殖促進率の算出は具体的には次のように行っ
た。フナコシ（株）より市販されているＭＴＦ−Ｃｅｌ
ｌ−Ｇｒｏｗｔｈ Ａｓｓａｙ ｋｉｔの手順に従い、
本物質を用量を変化させながらウェルに加え一昼夜放置
後、生細胞のミトコンドリア中に存在する酵素によりＭ
ＴＴ（3-4,5Dimethylthiazol-2YL)-2,5Diphenyl Tetraz
olium bromide が暗青色のホルマザンに開裂する現象を
利用し比色法にて生細胞を計数した。本物質を加えない
対照群を１００％とし用量を変化させて加えた群の比色
度を求めると次のようになった。結果を下記表１に示
す。
Ｃ）を１０％牛胎児血清を含むＦ１０培地（入手先：大
日本製薬）にて培養し、５％炭酸ガス加湿３７℃恒温器
内にて育成した。トリプシン処理により２４穴培養プレ
ートに１ｘ１０5 個／穴（well）蒔種し、コンフルーエ
ントになったところで培地を１％牛胎児血清Ｆ１０培地
に交換し、２４時間培養した。その後、実施例２で製造
した本発明のペプチドを１％牛胎児血清Ｆ１０培地に溶
解し、容量を変化させながらｗｅｌｌに加えてさらに２
４時間培養を継続した。培養後、本ペプチドによる細胞
の増殖促進効果をＭＴＴアッセイにより測定し、非処理
群に対する増殖促進効果を求めた。なお、ＭＴＴアッセ
イ及び増殖促進率の算出は具体的には次のように行っ
た。フナコシ（株）より市販されているＭＴＦ−Ｃｅｌ
ｌ−Ｇｒｏｗｔｈ Ａｓｓａｙ ｋｉｔの手順に従い、
本物質を用量を変化させながらウェルに加え一昼夜放置
後、生細胞のミトコンドリア中に存在する酵素によりＭ
ＴＴ（3-4,5Dimethylthiazol-2YL)-2,5Diphenyl Tetraz
olium bromide が暗青色のホルマザンに開裂する現象を
利用し比色法にて生細胞を計数した。本物質を加えない
対照群を１００％とし用量を変化させて加えた群の比色
度を求めると次のようになった。結果を下記表１に示
す。
【００１７】
【表１】
【００１８】表１から明らかなように、本発明の方法に
より探索された上記ペプチドは、骨芽細胞に対し増殖促
進的に作用することが確認された。従って、本ペプチド
は骨量の増加に結びつくものと考えられ、骨粗鬆症等の
骨疾患の治療に対し有用である。
より探索された上記ペプチドは、骨芽細胞に対し増殖促
進的に作用することが確認された。従って、本ペプチド
は骨量の増加に結びつくものと考えられ、骨粗鬆症等の
骨疾患の治療に対し有用である。
【００１９】実施例３ 本ペプチドに対する骨芽細胞上
の受容体の存在 本ペプチドが骨芽細胞に対し増殖促進作用があることが
判明したことにより、骨芽細胞が本ペプチドに対する受
容体を持っていることが推察される。もし受容体が存在
するならば本ペプチドは生命にとり根源的な物質である
ことが考えられ、次に骨芽細胞に受容体が存在するか否
かを調査した。
の受容体の存在 本ペプチドが骨芽細胞に対し増殖促進作用があることが
判明したことにより、骨芽細胞が本ペプチドに対する受
容体を持っていることが推察される。もし受容体が存在
するならば本ペプチドは生命にとり根源的な物質である
ことが考えられ、次に骨芽細胞に受容体が存在するか否
かを調査した。
【００２０】実施例２で得られたペプチドをビオチンで
標識し、実施例３と同様に培養したＲＯＳ細胞に一定量
に標識した本ペプチドを加え、さらに競合反応をさせる
ために非標識の本ペプチドを１０％牛胎児血清Ｆ１０培
地に溶解し、容量を変化させながら加えて競合反応を見
た。この実験操作は具体的には次のように行った。ＳＵ
ＭＩＬＯＮ社製の蛋白ビオチン化標識キットの手順に従
い本ペプチドをビオチン化し、ウェルに播種された一定
数の細胞に対し一定量のビオチン化ペプチドを加え非標
識ペプチド０〜０．５１２μｇ／wellを各々加え競合反
応を６時間行い、その後、細胞をＰＢＳにて洗浄しスト
レプトアビジンで標識したペルオキシダーゼで細胞表面
にある受容体に結合したビオチン化ペプチドに反応して
発色反応を見る。細胞表面に本ペプチドの受容体が存在
すれば非標識のペプチドと競合反応が起こり発色強度は
低下する。結果を下記表２に示す。
標識し、実施例３と同様に培養したＲＯＳ細胞に一定量
に標識した本ペプチドを加え、さらに競合反応をさせる
ために非標識の本ペプチドを１０％牛胎児血清Ｆ１０培
地に溶解し、容量を変化させながら加えて競合反応を見
た。この実験操作は具体的には次のように行った。ＳＵ
ＭＩＬＯＮ社製の蛋白ビオチン化標識キットの手順に従
い本ペプチドをビオチン化し、ウェルに播種された一定
数の細胞に対し一定量のビオチン化ペプチドを加え非標
識ペプチド０〜０．５１２μｇ／wellを各々加え競合反
応を６時間行い、その後、細胞をＰＢＳにて洗浄しスト
レプトアビジンで標識したペルオキシダーゼで細胞表面
にある受容体に結合したビオチン化ペプチドに反応して
発色反応を見る。細胞表面に本ペプチドの受容体が存在
すれば非標識のペプチドと競合反応が起こり発色強度は
低下する。結果を下記表２に示す。
【００２１】
【表２】
【００２２】表２に示されるように、非標識体の添加量
に依存して加えた標識体に対する割合が変化しているの
で、骨芽細胞が本ペプチドに対する受容体を持っている
ことは明らかであり、本物質が根源的な役割を担ってい
ることが推察される。
に依存して加えた標識体に対する割合が変化しているの
で、骨芽細胞が本ペプチドに対する受容体を持っている
ことは明らかであり、本物質が根源的な役割を担ってい
ることが推察される。
【００２３】急性毒性試験
実施例２で作製したペプチドについて、ｄｄｙ雄性マウ
ス（体重４０〜４５ｇ）を用い、その急性毒性を試験し
た。本ペプチドを生理食塩水（ｐＨ６．０）に溶解し、
これをマウスの尾静脈より投与し、１４日間観察した。
投与量は１、１０、１００μｇ／ｋｇとした。この結果
を下記表３に示す。
ス（体重４０〜４５ｇ）を用い、その急性毒性を試験し
た。本ペプチドを生理食塩水（ｐＨ６．０）に溶解し、
これをマウスの尾静脈より投与し、１４日間観察した。
投与量は１、１０、１００μｇ／ｋｇとした。この結果
を下記表３に示す。
【００２４】
【表３】
【００２５】実施例４ グルカゴンレセプターの欠失領
域の決定 実施例１と同じ方法により、FEBS Letters 351 (1994)
271-275 に記載されたグルカゴンレセプターのアミノ酸
配列を比較することにより、長い方のレセプターに存在
するが短い方のレセプターにおいて欠失している領域の
アミノ酸配列を決定した。決定された欠失領域のアミノ
酸配列を配列番号２に示す。
域の決定 実施例１と同じ方法により、FEBS Letters 351 (1994)
271-275 に記載されたグルカゴンレセプターのアミノ酸
配列を比較することにより、長い方のレセプターに存在
するが短い方のレセプターにおいて欠失している領域の
アミノ酸配列を決定した。決定された欠失領域のアミノ
酸配列を配列番号２に示す。
【００２６】実施例５ ソマトスタチンレセプターの欠
失領域の決定 実施例１と同じ方法により、Molecular Pharmacology 4
4:1008-1015(1993) に記載されたソマトスタチンレセプ
ターのアミノ酸配列を比較することにより、長い方のレ
セプターに存在するが短い方のレセプターにおいて欠失
している領域のアミノ酸配列を決定した。決定された欠
失領域のアミノ酸配列を配列番号３に示す。
失領域の決定 実施例１と同じ方法により、Molecular Pharmacology 4
4:1008-1015(1993) に記載されたソマトスタチンレセプ
ターのアミノ酸配列を比較することにより、長い方のレ
セプターに存在するが短い方のレセプターにおいて欠失
している領域のアミノ酸配列を決定した。決定された欠
失領域のアミノ酸配列を配列番号３に示す。
【００２７】
【発明の効果】本発明により、一定の予測性をもって効
率的に新規な生理活性物質を探索する方法が初めて提供
された。本発明の方法では、拮抗作用に関与する物質の
レセプターを調べることにより新規な生理活性物質を見
つけることができるので、従来のように極めて多様な成
分を含む生体試料中に微量含まれる生理活性物質を単離
する必要がない。また、探索された生理活性物質の生理
活性は、上記拮抗作用に関与するものであるから、その
生理活性を探索することも従来に比べてはるかに容易で
ある。よって、本発明の方法によれば、従来よりもはる
かに高効率に新規な生理活性物質を探索することができ
る。
率的に新規な生理活性物質を探索する方法が初めて提供
された。本発明の方法では、拮抗作用に関与する物質の
レセプターを調べることにより新規な生理活性物質を見
つけることができるので、従来のように極めて多様な成
分を含む生体試料中に微量含まれる生理活性物質を単離
する必要がない。また、探索された生理活性物質の生理
活性は、上記拮抗作用に関与するものであるから、その
生理活性を探索することも従来に比べてはるかに容易で
ある。よって、本発明の方法によれば、従来よりもはる
かに高効率に新規な生理活性物質を探索することができ
る。
【００２８】
配列番号：１
配列の長さ：
配列の型：アミノ酸
配列
Lys Leu Thr Thr Ile Phe Pro Leu Asn Trp Lys Tyr Arg Lys Ala Leu
1 5 10 15
【００２９】配列番号：２
配列の長さ：２７
配列の型：アミノ酸
配列
Gly Asn Gly Val Val Ser Ala Trp Glu Ala Glu Gly Ala Lys Ser Gly
1 5 10 15
Ser Gly Leu Thr Arg Ala Tyr Thr His Val Pro
20 25
【００３０】配列番号：３
配列の長さ：１２
配列の型：アミノ酸
Claims (4)
- 【請求項１】 物質が作用する細胞に対して拮抗作用を
有する細胞若しくは物質が生体中に存在する物質のレセ
プターであって、同一のレセプターにつき２種類以上の
サイズのものが存在するレセプターのアミノ酸配列を調
べ、長いレセプターのどの領域が短いレセプターにおい
て欠失しているかを調べることを含む生理活性物質の探
索方法により判明した欠失領域又はその誘導体を又はそ
の誘導体を作製することから成る、生理活性ペプチドの
製造方法。 - 【請求項２】 前記レセプターは７回膜貫通型のレセプ
ターである請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 上記欠失領域を作製することから成る、
請求項１又は２記載の方法。 - 【請求項４】 前記欠失領域を化学合成により合成する
請求項３記載の方法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28142196A JP3459523B2 (ja) | 1996-10-02 | 1996-10-02 | 生理活性物質の製造方法 |
| DE69735374T DE69735374T2 (de) | 1996-10-02 | 1997-10-01 | Methode zur auffindung physiologisch aktiver substanzen und verfahren zu deren herstellung |
| AU44707/97A AU4470797A (en) | 1996-10-02 | 1997-10-01 | Method of searching for physiologically active substances and process for producing the same |
| AT97943131T ATE318840T1 (de) | 1996-10-02 | 1997-10-01 | Methode zur auffindung physiologisch aktiver substanzen und verfahren zu deren herstellung |
| PCT/JP1997/003499 WO1998014479A1 (fr) | 1996-10-02 | 1997-10-01 | Procede de recherche de substances physiologiquement actives et procede de production de telles substances |
| US09/269,703 US6787317B1 (en) | 1996-10-02 | 1997-10-01 | Method of identifying missing domains in receptors |
| EP97943131A EP0933380B1 (en) | 1996-10-02 | 1997-10-01 | Method of searching for physiologically active substances and process for producing the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP28142196A JP3459523B2 (ja) | 1996-10-02 | 1996-10-02 | 生理活性物質の製造方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2003148206A Division JP3590045B2 (ja) | 2003-05-26 | 2003-05-26 | 生理活性物質の探索方法及び製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10109997A JPH10109997A (ja) | 1998-04-28 |
| JP3459523B2 true JP3459523B2 (ja) | 2003-10-20 |
Family
ID=17638934
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP28142196A Expired - Fee Related JP3459523B2 (ja) | 1996-10-02 | 1996-10-02 | 生理活性物質の製造方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6787317B1 (ja) |
| EP (1) | EP0933380B1 (ja) |
| JP (1) | JP3459523B2 (ja) |
| AT (1) | ATE318840T1 (ja) |
| AU (1) | AU4470797A (ja) |
| DE (1) | DE69735374T2 (ja) |
| WO (1) | WO1998014479A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1295577A (zh) * | 1998-04-04 | 2001-05-16 | 坂本贤二 | 生理活性物质的搜寻方法、生产该物质的方法以及用搜寻方法找到的药物 |
| WO2003066672A1 (fr) * | 2002-02-08 | 2003-08-14 | Nakoshi, Hideo | Peptides |
| WO2006024253A1 (de) | 2004-09-03 | 2006-03-09 | Weinmann Geräte für Medizin GmbH & Co. KG | Kunststoffe für medizintechnische geräte |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE287898T1 (de) * | 1991-04-05 | 2005-02-15 | Gen Hospital Corp | Parathyroid-hormon-rezeptor und seine kodierende dna |
| US5516651A (en) * | 1991-11-15 | 1996-05-14 | The General Hospital Corporation | Nucleic acids encoding calcitonin receptor and uses thereof |
| US5436155A (en) * | 1991-12-31 | 1995-07-25 | Arch Development Corporation | Isolated DNA encoding a somatostatin receptor |
| JP3398255B2 (ja) * | 1995-04-03 | 2003-04-21 | 賢二 坂本 | 新規ペプチド及びそれを有効成分とする骨疾患治療薬 |
-
1996
- 1996-10-02 JP JP28142196A patent/JP3459523B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-10-01 AU AU44707/97A patent/AU4470797A/en not_active Abandoned
- 1997-10-01 DE DE69735374T patent/DE69735374T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-01 WO PCT/JP1997/003499 patent/WO1998014479A1/ja active IP Right Grant
- 1997-10-01 US US09/269,703 patent/US6787317B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-10-01 EP EP97943131A patent/EP0933380B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-10-01 AT AT97943131T patent/ATE318840T1/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10109997A (ja) | 1998-04-28 |
| US6787317B1 (en) | 2004-09-07 |
| EP0933380A4 (en) | 2001-12-12 |
| EP0933380B1 (en) | 2006-03-01 |
| AU4470797A (en) | 1998-04-24 |
| DE69735374D1 (de) | 2006-04-27 |
| EP0933380A1 (en) | 1999-08-04 |
| WO1998014479A1 (fr) | 1998-04-09 |
| ATE318840T1 (de) | 2006-03-15 |
| DE69735374T2 (de) | 2006-10-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE60119714T2 (de) | Peptidderivat | |
| Potts et al. | Progress, paradox, and potential: parathyroid hormone research over five decades | |
| Naider et al. | The α-factor mating pheromone of Saccharomyces cerevisiae: a model for studying the interaction of peptide hormones and G protein-coupled receptors | |
| Cupp et al. | Parathyroid hormone (PTH) and PTH-related peptide domains contributing to activation of different PTH receptor–mediated signaling pathways | |
| EP0917537B1 (en) | Novel parathyroid hormone-related peptide analogs | |
| Civitelli et al. | Parathyroid hormone-related peptide transiently increases cytosolic calcium in osteoblast-like cells: comparison with parathyroid hormone | |
| Rajeswaran et al. | Highly potent and subtype selective ligands derived by N-methyl scan of a somatostatin antagonist | |
| Nissenson et al. | Covalent labeling of a high-affinity, guanyl nucleotide sensitive parathyroid hormone receptor in canine renal cortex | |
| Lang et al. | Identification of the key residue of calcitonin gene related peptide (CGRP) 27− 37 to obtain antagonists with picomolar affinity at the CGRP receptor | |
| JP3459523B2 (ja) | 生理活性物質の製造方法 | |
| Miranda et al. | Identification of potent, selective, and metabolically stable peptide antagonists to the calcitonin gene-related peptide (CGRP) receptor | |
| JP4723144B2 (ja) | 副甲状腺ホルモン（ｐｔｈ）のポリペプチド誘導体 | |
| Zhang et al. | Novel cyclic analogs of angiotensin II with cyclization between positions 5 and 7: conformational and biological implications | |
| DE60031422T2 (de) | Peptidanaloga als selektive Inhibitoren der Thrombinaktivierung des proteaseaktivierten Rezeptors 1 | |
| Bisello et al. | Mono-and bicyclic analogs of parathyroid hormone-related protein. 1. Synthesis and biological studies | |
| Nishimura et al. | Development of a novel human Parathyroid Hormone Receptor 1 (hPTHR1) agonist (CH5447240), a potent and orally available small molecule for treatment of hypoparathyroidism | |
| JP3590045B2 (ja) | 生理活性物質の探索方法及び製造方法 | |
| Orloff et al. | A pharmacological comparison of parathyroid hormone receptors in human bone and kidney | |
| Wisskirchen et al. | Conformational restraints revealing bioactive β‐bend structures for hα CGRP8–37 at the CGRP2 receptor of the rat prostatic vas deferens | |
| Govitrapong et al. | Studies on high-affinity [3H] substance P binding sites in bovine pineal gland | |
| JPH08269091A (ja) | 新規ペプチド及びそれを有効成分とする骨疾患治療薬 | |
| CAULFIELD et al. | Avian (chicken) parathyroid hormone: synthesis and comparative biological evaluation of the 1-34 fragment | |
| Lundergan et al. | Angiotensin‐II increases cytoplasmic calcium, cell number and total DNA for human periodontal ligamental cells in vitro | |
| Merritt et al. | Dissociation between parathyroid hormone‐stimulated cAMP and calcium increase in UMR‐106‐01 cells | |
| Rosenblatt et al. | Analogues of an in vitro parathyroid hormone inhibitor: modifications at the amino terminus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070808 Year of fee payment: 4 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080808 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080808 Year of fee payment: 5 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090808 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100808 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100808 Year of fee payment: 7 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110808 Year of fee payment: 8 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |