JP3435181B2 - メラニン生成抑制外用剤 - Google Patents
メラニン生成抑制外用剤Info
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Description
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、酵母培養液の外用剤へ
の応用に関するものであって、より詳しくは、特定の糖
化液に特定の菌種を接種した酵母培養液または培養エキ
スのメラニン生成抑制効果及び保湿効果を有効に利用し
たメラニン生成抑制外用剤に関する。 【０００２】 【従来の技術】酵母の利用分野は広く、古くから酵母の
発酵生産物の利用が食品分野、医薬品分野でなされてい
る。特に酵母の菌体抽出エキスの利用が主流であり、酵
母の菌体抽出エキスの保湿効果ならびに皮膚美容効果を
利用し、化粧料等に配合することは公知である。例え
ば、酵母菌体そのものをパックに用いた特公昭３９−４
８９９号公報、胎盤組成の酵素分解物と酵母エキスを混
合したメラニン生成抑制剤を開示する特公昭５６−４４
０４６号公報、ＲＮＡを５０ないし５０００ＰＰＭ含有
する酵母抽出液を開示する特公昭６１−２６０００９号
公報、ならびにビール酵母菌体の有機溶媒抽出液を含有
する化粧料を開示する特公昭６１−１７１４０５号公報
などが知られている。 【０００３】酵母菌体抽出液の利用目的の多くのもの
は、その保湿性に注目したものであり、一部、他のもの
との相乗効果でメラニン生成を抑制することを目的とし
たものがある。従来の酵母の菌体から有用性物質を抽出
する方法では、菌体という少量しか得られないものを利
用しているため量産化が難しかった。一方、酵母の培養
液を利用した例としては、酵母培養液ないしは酵母エキ
スを有効成分とする貧血改善組成物を開示する特公昭６
１−１１８３２２号公報、コールドウェーブ用糖発酵液
を開示する特公昭６４−１１６１２号公報が見られるだ
けで、皮膚外用剤としての利用は知られていない。 【０００４】 【本発明が解決しようとする課題】そこで本発明の目的
は、保湿性を高める物質ばかりでなく、化粧品類に求め
られるメラニン生成抑制効果を示す物質にも注目し、培
養液中に両者を生産させ、また、その濃度を高めること
により、メラニン生成抑制効果及び保湿効果を有した外
用剤を提供することにある。 【０００５】 【課題を解決するための手段】本発明は、前記目的を達
成するために提案されたものであり、特定の糖化液に特
定の菌種を接種した酵母培養液または培養エキスにメラ
ニン生成抑制効果および保湿効果があるという本発明者
によって得られた知見に基づいて完成されたものであ
る。すなわち、本発明によれば、麦類に、糖化酵素とし
て、α−アミラーゼとグルコアミラーゼを同時添加して
得られた糖化液に、菌種としてサッカロミセスセレビシ
エまたはサッカロミセスカールスベルゲンシスを接種し
た酵母培養液または培養エキスを含有することを特徴と
するメラニン生成抑制外用剤が提供される。 【０００６】 【発明の具体的説明】本発明者は、サッカロミセス属の
酵母を用い、培養液中にメラニン生成抑制物質および保
湿性成分を生産すべく鋭意研究を行い、培養細胞（Ｂ１
６細胞）を使った実験において、糖液、特に麦類を用い
た培地でサッカロミセス属の酵母を培養した液が色素細
胞のメラニン生成を強く抑えることを見出し、同時に強
い保湿性を有することを確認して本発明を完成した。 【０００７】本発明における酵母培養液とは、培養液自
体または培養液をメンブランフィルター等でろ過または
遠心分離機等で除菌したもの、ないしはメラニン生成抑
制物質濃度を高める処理をした溶液を言い、培養エキス
とはこの培養液を減圧濃縮機等で濃縮したものを言う。
本発明におけるサッカロミセス属の酵母としては、サッ
カロミセスセレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ま
たはサッカロミセスカールスベルゲンシス（Saccharomy
ces carlsbergensis）が用いられ、中でもサッカロミセ
スセレビシエがより有効である。 【０００８】本発明における糖液すなわち炭素源として
は、麦類（例えば、大麦、小麦、ライ麦、エン麦等）ま
たは麦類に水を加え加熱膨潤後、糖化酵素として、αー
アミラーゼとグルコアミラーゼとを同時に添加したもの
を培地に使用するものであり、これによって酵母による
メラニン生成抑制物質の生産が高くなる。 【０００９】また、糖液中に窒素源が充分に含まれない
場合には、ペプトン、大豆蛋白加水分解物、アンモニウ
ム塩、アミノ酸等を適量添加するのが好ましい。本発明
における酵母培養液のメラニン生成抑制効果は、培養液
またはその濃縮液でも充分であるが、さらにアルコール
類などの、有機溶媒添加、塩析、吸着剤、カラムクロマ
トによる分画によって効果を高めることも可能である。
以上の様にして得られた本発明の酵母培養液ないしは培
養エキスは、メラニン生成抑制効果および保湿効果に優
れており、皮膚に対し何ら傷害などのトラブルを与える
ものでなく安全性にも優れている。 【００１０】本発明のメラニン生成抑制外用剤は、前述
の有効成分を皮膚施用上許容し得る公知の剤型に配合し
て製造するものであり、その配合量は培養方法や配合す
る製剤の形態によって異なるが、通常、培養液または培
養エキスを製剤中に０．０５ないし５０重量％、好まし
くは０．１ないし１０重量％程度配合すると良い。 【００１１】さらに、本発明の有効成分の他に通常に用
いられる種々の公知の有効成分、例えば、ビタミンＥ、
ビタミンＥニコチネート、ニコチン酸、ニコチン酸アミ
ド、ニコチン酸ベンジル等のビタミン剤、セファランチ
ン、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキなどの末梢
血管拡張剤、カンフル、メントールなどの清涼剤、ヒノ
キチオール、塩化ベンザルコニウム、ウンデシレン酸な
どの抗菌剤、塩化リゾチーム、グリチルリチン、アラン
トインなどの消炎剤、コウジ酸及びその誘導体、アスコ
ルビン酸及びその誘導体、アルブチン リキリチン及び
その誘導体等の色白剤、センブリエキス、ニンニクエキ
ス、ニンジンエキス、オウゴンエキス、ローズマリーエ
キス、アロエエキス、ヘチマ抽出物、イチョウ抽出物、
ニワトコ抽出物、胎盤抽出液、肝臓抽出物、乳酸菌培養
抽出物などの動物、植物、微生物由来の各種抽出物など
を自由に添加して使用することができる。 【００１２】本発明の外用剤の公知の剤型とは、外用可
能なあらゆる剤型を意味し、例えばパップ剤、プラスタ
ー剤、ペースト剤、クリーム、軟膏、エアゾール剤、乳
剤、ローション、乳液、エッセンス、パック、ゲル剤、
パウダー、ファンデーション、サンケア、バスソルト、
石鹸類などの皮膚適用剤が例示できる。また、前述の外
用剤には、メラニン生成抑制外用剤としての効果を損な
わない限り、公知の有効成分の他に、界面活性剤、油脂
類などの基剤成分や、必要に応じて公知の保湿剤、増粘
剤、防腐剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、散乱剤、キレ
ート剤、ｐＨ調整剤、香料、着色剤など種々の添加剤を
併用できる。 【００１３】保湿剤としては、例えば、グリセリン、プ
ロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソ
ルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、
ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、アミノ
酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム
等のＮＭＦ成分、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチ
ン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、フィブロネ
クチン、セラミド類、ヘパリン類似様物質、キトサン等
の水溶性高分子物質などを例示することができる。 【００１４】増粘剤としては、例えば、アルギン酸ナト
リウム、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウム、マルメ
ロ種子抽出物、トラガントゴム、デンプン等の天然高分
子物質、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロー
ス、カルボキシメチルセルロース、可溶性デンプン、カ
チオン化セルロース等の半合成高分子物質、カルボキシ
ビニルポリマー、ポリビニルアルコール等の合成高分子
物質等を例示することができる。 【００１５】防腐剤としては、例えば安息香酸塩、サリ
チル酸塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ
安息香酸エステル、２，４，４’ートリクロロー２’ー
ヒドロキシジフェニルエーテル、３，４，４’ートリク
ロロカルバニリド、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオ
ール、レゾルシン、エタノール等を例示することができ
る。 【００１６】酸化防止剤としては、例えば、ジブチルヒ
ドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食
子酸プロピル、アスコルビン酸等を例示することができ
る。 【００１７】紫外線吸収剤としては、例えば、４−メト
キシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベン
ゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメート、
酸化チタン、カオリン、タルク等を例示することができ
る。 【００１８】さらに、キレート剤としては、例えば、エ
チレンジアミン四酢酸塩、ピロリン酸塩、ヘキサメタリ
ン酸塩、クエン酸塩、酒石酸、グルコン酸等を例示する
ことができ、ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、
リン酸水素カリウム等をそれぞれ例示することができ
る。 【００１９】 【実施例】以下に、本発明の製造例、その効果を説明す
るための試験例ならびに処方例を挙げるが、これらは本
発明を何ら限定するものではない。 【００２０】＜製造例１＞押し麦（大麦）１ｋｇ、グル
コース４００ｇ、大豆蛋白加水分解物８０ｇに精製水１
８．５２リットルを加え、ｐＨを５に調整後、１２０℃
で１５分間加熱殺菌し３０℃に冷却後、α−アミラーゼ
及びグルコアミラーゼを等量ずつ少量無菌的に加え、酵
母（Saccharomyces cerevisiae）の種菌をこれに接種
し、３０℃で培養液中のグルコース残量が０．１ないし
０．５％になるまで約６日間培養した。培養液をメンブ
ランフィルター（０．２５μ）で除菌後、５倍濃縮して
本発明品約４ｋｇを得た。 【００２１】＜製造例２＞小麦１．４ｋｇに精製水１２
リットルを加え、煮沸膨潤後４０℃まで冷却しα−アミ
ラーゼ及びグルコアミラーゼを等量ずつ少量加え約２時
間糖化する。この糖化液にペプトン１００ｇ、精製水
６．５リットルを加え、ｐＨを５に調整後、１２０℃で
１５分間加熱殺菌し冷却後、酵母（Saccharomyces cere
visiae）の種菌をこれに接種し、３０℃で培養液中のグ
ルコース残量が０．１ないし０．５％になるまで約６日
間培養した。培養液を遠心分離により除菌後、１０倍濃
縮して本発明品約２ｋｇを得た。 【００２２】＜製造例３＞蒸した大麦１ｋｇ、ペプトン
４０ｇに精製水１８．９６リットルを加え、１２０℃で
１５分間加熱殺菌し冷却後、酵母（Saccharomyces cere
visiae）の種菌をこれに接種し、３０℃で７日間培養し
た。培養液を遠心分離して除菌後、５倍濃縮し本発明品
約４ｋｇを得た。 【００２３】＜製造例４＞大麦１ｋｇ、グルコース４０
０ｇ、ペプトン２００ｇに０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５）１８．６ｋｇを加え、１２０℃で１５分間加熱殺
菌し冷却後、酵母（Saccharomyces carlsbergensis）の
種菌をこれに接種し、３２℃で約８日間培養した。培養
液を遠心分離して除菌後、減圧濃縮機にて１０倍濃縮
し、本発明品約２ｋｇを得た。 【００２４】＜製造例５＞蒸した大麦１．２ｋｇ、肉汁
２００ｇに精製水１８．６リットルを加え、ｐＨを５に
調整後、１２０℃で１０分間加熱殺菌し冷却後、マルタ
ーゼを少量無菌的に加え糖化する。これに酵母（Saccha
romyces cerevisiae）の種菌を接種し、３０℃で８日間
培養した。培養液をメンブランフィルターで除菌後、減
圧濃縮機で１０倍濃縮し本発明品約２ｋｇを得た。 【００２５】＜製造例６＞小麦８００ｇ、トウモロコシ
澱粉４００ｇ、水１８．８リットルを煮沸膨潤後、４０
℃に保持しながらα−アミラーゼ及びグルコアミラーゼ
を等量ずつ少量加え、約２時間糖化した。この糖化液を
ｐＨ５に調整後、１２０℃で１５分間加熱殺菌し冷却
後、酵母（Saccharomyces cerevisiae）の種菌を接種
し、３０℃で培養液中のグルコース量が０．５％以下に
なるまで約８日間培養した。培養液を遠心分離により除
菌後、合成樹脂セパビーズＳＰ−２０５（三菱化成工業
株式会社製）を６％添加後１時間撹拌し、合成樹脂をろ
別した。ろ液を減圧濃縮器で１０分の１量まで濃縮し本
発明品約２ｋｇを得た。 【００２６】＜実験例１＞ マウスメラノーマＢ１６細
胞による白色化試験方法 試料をＭＥＭ（Eagle's Minimum Essential Medium）に
最終濃度が表１に示す濃度になるように調製、溶解し、
孔径０．４５μｍの除菌フィルターでろ過した。ＭＥＭ
に不溶性の試料は、１００μｌのエタノールに溶解後、
ＭＥＭに添加した。２枚のプラスチックシャーレ（Falc
on製、内径９ｃｍ）にそれぞれ、試料を溶解、ろ過除菌
したＭＥＭを８ｍｌ、ＦＢＳ（ウシ胎児血清）１ｍｌお
よびＭＥＭ１ｍｌに懸濁した１×１０5 ／ｍｌのＢ１６
細胞を添加し、培養開始３日後に培地交換を行い、計５
日間、５％ＣＯ2 、９５％空気条件下、３７℃で培養し
た。培養終了後、シャーレの底に増殖した細胞を集め、
Phosphate buffered saline（ＰＢＳ）に懸濁させ、２
０００ｒｐｍで３分間遠心分離を行い、得られた細胞ペ
レットの黒化度を肉眼的に評価した。 【００２７】表１において、肉眼的色調における＋−
は、下記の評価を示す。 ±：無添加区と同程度の黒化度を示す。 ＋：無添加区よりやや少ない黒化度を示す。 ＋＋：無添加区より明らかに少ない黒化度を示す。 ＋＋＋：僅かに認められる黒化度を示す。 ＋＋＋＋：白色ないし灰色で黒色と認められない。 ＋＋＋＋＋：白色 【００２８】 【００２９】＜実験例２＞ モルモット紫外線色素沈着
抑制効果 黄褐色モルモットを用い、色素沈着の改善効果を調べ
た。この結果を表２に示す。 ［試験方法］黄褐色モルモット１０匹の背部皮膚を用
い、該モルモットの背部毛をバリカンにて刈毛し、更に
電気カミソリにて剃毛した。このモルモットの背部を、
４ヶ所９正方形（２．０×２．０ｃｍ）の穴の開いたア
ルミ箔で覆い、ＵＶ−Ｂ（ＳＥランプ３本、１４０ｍＪ
／ｃｍ2 ）で１日１回９０秒、３日毎に４回照射した。
照射開始日から、「麦発酵液」（製造例１ないし３）
を、１日３回２０日間連続して塗布した。塗布開始後１
３日目から２０日目の間に判定を行った。皮膚色の黒化
度は以下に示した判定基準にて肉眼判定した。 【００３０】判定基準 著効：色素沈着を全く認めない。 有効：わずかな色素沈着を認める。 やや有効：中程度の色素沈着を認める。 無効：コントロール部位と変わらない。 逆転：コントロールよりも強い色素沈着を認める。 【００３１】【００３２】＜実験例３＞ インピーダンスメーターに
よる保湿性試験 ［試験方法］高周波インピーダンスメーター（ＩＢＳ社
製：MODEL IB-335）を用い、精製水をコントロールとし
て５％の酵母培養液（製造例１）の保湿性を調べた。他
の保湿剤と比較するために、保湿性が高いヒアルロン酸
ナトリウムの０．５％溶液を対照として同様に調べた。 ［測定方法］ヒト前腕屈側部に試料を塗布（２ｃｍ×２
ｃｍ）し、３０秒後すばやくガーゼで軽くふき取り、３
０秒毎に皮膚の電導度（コンダクタンス）を経時的に１
０分まで測定した（測定条件：測定室内温度２０℃、湿
度６０％、測定回数ｎ＝１０）。 ［試験結果］結果を図１に示した。図１の結果は、電導
度が高いほど保湿性が高いことを示しており、本発明の
酵母培養液は、保湿剤として優れていることが確認され
た。 【００３３】以下に処方例を示す。なお、処方例中、
「適量」とは、処方全量が１００重量％になる量を意味
する。 【００３４】 ＜処方例１＞ クリーム （重量％） １．モノステアリン酸ポリエチレングリコール（40E.0.） 2.00 ２．自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 5.00 ３．ステアリン酸 5.00 ４．ベヘニルアルコール 1.00 ５．流動パラフィン 10.00 ６．トリオクタン酸グリセリル 10.00 ７．酵母発酵液（製造例１で得られたもの） 4.00 ８．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 ９．１，３ーブチレングリコール 5.00 １０．エデト酸二ナトリウム 0.01 １１．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし７を加温、溶解する。 Ｂ．８ないし１２を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３５】 ＜処方例２＞ 乳液 （重量％） １．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0.） 2.00 ２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット（60E.0.） 0.50 ３．親油型モノステアリン型グリセリン 1.00 ４．ステアリン酸 0.50 ５．ベヘニルアルコール 0.50 ６．アボガド油 4.00 ７．トリオキタン酸グリセリル 4.00 ８．酵母発酵液（製造例３で得られたもの） 3.00 ９．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 １０．１，３ーブチレングリコール 5.00 １１．キサンタンガム 0.14 １２．エデト酸二ナトリウム 0.01 １３．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし８を加温、溶解する。 Ｂ．９ないし１４を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３６】 ＜処方例３＞ ローション剤 （重量％） １．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（60E.0.） 8.00 ２．エタノール 15.00 ３．酵母発酵液（製造例６で得られたもの） 5.00 ４．パラオキシ安息香酸エステル 0.10 ５．クエン酸 0.10 ６．クエン酸ナトリウム 0.30 ７．１，３ーブチレングリコール 4.00 ８．エデト酸二ナトリウム 0.01 ９．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし１０を均一に撹拌、溶解する。 Ｂ．Ａを容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３７】 ＜処方例４＞ クリームパック （重量％） １．モノステアリン酸ポリエチレングリコール（40 E.0. ） 2.00 ２．自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 5.00 ３．ステアリン酸 5.00 ４．ベヘニルアルコール 0.50 ５．スクワラン 15.00 ６．オクタン酸セチル 5.00 ７．酵母発酵液（製造例２で得られたもの） 5.00 ８．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 ９．１，３−ブチレングリコール 5.00 １０．エデト酸二ナトリウム 0.01 １１．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし７を加温、溶解する。 Ｂ．８ないし１２を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３８】 ＜処方例５＞ 軟膏剤 （重量％） １．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0.） 1.00 ２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット（60E.0.） 1.50 ３．自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 1.50 ４．サラシミツロウ 2.00 ５．パラフィン 2.00 ６．ステアリン酸 3.00 ７．ベヘニルアルコール 3.00 ８．流動パラフィン 5.00 ９．アボガド油 12.00 １０．ビタミンＥ 12.00 １１．酵母発酵液（製造例４で得られたもの） 10.00 １２．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 １３．１，３ーブチレングリコール 5.00 １４．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし１１を加温、溶解する。 Ｂ．１２ないし１５を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３９】 ＜処方例６＞ 乳剤 （重量％） １．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0.） 1.00 ２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット（60E.0.） 0.50 ３．親油型モノステアリン酸グリセリン 1.00 ４．ステアリン酸 0.50 ５．ベヘニルアルコール 0.50 ６．アボガド油 4.00 ７．トリオクタン酸グリセリル 4.00 ８．酵母発酵液（製造例５で得られたもの） 3.00 ９．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 １０．１，３ーブチレングリコール 5.00 １１．キサンタンガム 0.14 １２．エデト酸二ナトリウム 0.01 １３．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし８を加温、溶解する。 Ｂ．９ないし１４を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００４０】 【発明の効果】本発明によれば、麦類に特定の糖化酵素
を同時に添加して得られた糖化液に、特定の菌種を接種
した酵母培養液または酵母エキスからなるメラニン生成
抑制効果に著しく優れた外用剤が提供され、この外用剤
は、保湿効果にも優れているために、しっとり感が求め
られる色白化粧料の有効成分として好適に使用される。
の応用に関するものであって、より詳しくは、特定の糖
化液に特定の菌種を接種した酵母培養液または培養エキ
スのメラニン生成抑制効果及び保湿効果を有効に利用し
たメラニン生成抑制外用剤に関する。 【０００２】 【従来の技術】酵母の利用分野は広く、古くから酵母の
発酵生産物の利用が食品分野、医薬品分野でなされてい
る。特に酵母の菌体抽出エキスの利用が主流であり、酵
母の菌体抽出エキスの保湿効果ならびに皮膚美容効果を
利用し、化粧料等に配合することは公知である。例え
ば、酵母菌体そのものをパックに用いた特公昭３９−４
８９９号公報、胎盤組成の酵素分解物と酵母エキスを混
合したメラニン生成抑制剤を開示する特公昭５６−４４
０４６号公報、ＲＮＡを５０ないし５０００ＰＰＭ含有
する酵母抽出液を開示する特公昭６１−２６０００９号
公報、ならびにビール酵母菌体の有機溶媒抽出液を含有
する化粧料を開示する特公昭６１−１７１４０５号公報
などが知られている。 【０００３】酵母菌体抽出液の利用目的の多くのもの
は、その保湿性に注目したものであり、一部、他のもの
との相乗効果でメラニン生成を抑制することを目的とし
たものがある。従来の酵母の菌体から有用性物質を抽出
する方法では、菌体という少量しか得られないものを利
用しているため量産化が難しかった。一方、酵母の培養
液を利用した例としては、酵母培養液ないしは酵母エキ
スを有効成分とする貧血改善組成物を開示する特公昭６
１−１１８３２２号公報、コールドウェーブ用糖発酵液
を開示する特公昭６４−１１６１２号公報が見られるだ
けで、皮膚外用剤としての利用は知られていない。 【０００４】 【本発明が解決しようとする課題】そこで本発明の目的
は、保湿性を高める物質ばかりでなく、化粧品類に求め
られるメラニン生成抑制効果を示す物質にも注目し、培
養液中に両者を生産させ、また、その濃度を高めること
により、メラニン生成抑制効果及び保湿効果を有した外
用剤を提供することにある。 【０００５】 【課題を解決するための手段】本発明は、前記目的を達
成するために提案されたものであり、特定の糖化液に特
定の菌種を接種した酵母培養液または培養エキスにメラ
ニン生成抑制効果および保湿効果があるという本発明者
によって得られた知見に基づいて完成されたものであ
る。すなわち、本発明によれば、麦類に、糖化酵素とし
て、α−アミラーゼとグルコアミラーゼを同時添加して
得られた糖化液に、菌種としてサッカロミセスセレビシ
エまたはサッカロミセスカールスベルゲンシスを接種し
た酵母培養液または培養エキスを含有することを特徴と
するメラニン生成抑制外用剤が提供される。 【０００６】 【発明の具体的説明】本発明者は、サッカロミセス属の
酵母を用い、培養液中にメラニン生成抑制物質および保
湿性成分を生産すべく鋭意研究を行い、培養細胞（Ｂ１
６細胞）を使った実験において、糖液、特に麦類を用い
た培地でサッカロミセス属の酵母を培養した液が色素細
胞のメラニン生成を強く抑えることを見出し、同時に強
い保湿性を有することを確認して本発明を完成した。 【０００７】本発明における酵母培養液とは、培養液自
体または培養液をメンブランフィルター等でろ過または
遠心分離機等で除菌したもの、ないしはメラニン生成抑
制物質濃度を高める処理をした溶液を言い、培養エキス
とはこの培養液を減圧濃縮機等で濃縮したものを言う。
本発明におけるサッカロミセス属の酵母としては、サッ
カロミセスセレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）ま
たはサッカロミセスカールスベルゲンシス（Saccharomy
ces carlsbergensis）が用いられ、中でもサッカロミセ
スセレビシエがより有効である。 【０００８】本発明における糖液すなわち炭素源として
は、麦類（例えば、大麦、小麦、ライ麦、エン麦等）ま
たは麦類に水を加え加熱膨潤後、糖化酵素として、αー
アミラーゼとグルコアミラーゼとを同時に添加したもの
を培地に使用するものであり、これによって酵母による
メラニン生成抑制物質の生産が高くなる。 【０００９】また、糖液中に窒素源が充分に含まれない
場合には、ペプトン、大豆蛋白加水分解物、アンモニウ
ム塩、アミノ酸等を適量添加するのが好ましい。本発明
における酵母培養液のメラニン生成抑制効果は、培養液
またはその濃縮液でも充分であるが、さらにアルコール
類などの、有機溶媒添加、塩析、吸着剤、カラムクロマ
トによる分画によって効果を高めることも可能である。
以上の様にして得られた本発明の酵母培養液ないしは培
養エキスは、メラニン生成抑制効果および保湿効果に優
れており、皮膚に対し何ら傷害などのトラブルを与える
ものでなく安全性にも優れている。 【００１０】本発明のメラニン生成抑制外用剤は、前述
の有効成分を皮膚施用上許容し得る公知の剤型に配合し
て製造するものであり、その配合量は培養方法や配合す
る製剤の形態によって異なるが、通常、培養液または培
養エキスを製剤中に０．０５ないし５０重量％、好まし
くは０．１ないし１０重量％程度配合すると良い。 【００１１】さらに、本発明の有効成分の他に通常に用
いられる種々の公知の有効成分、例えば、ビタミンＥ、
ビタミンＥニコチネート、ニコチン酸、ニコチン酸アミ
ド、ニコチン酸ベンジル等のビタミン剤、セファランチ
ン、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキなどの末梢
血管拡張剤、カンフル、メントールなどの清涼剤、ヒノ
キチオール、塩化ベンザルコニウム、ウンデシレン酸な
どの抗菌剤、塩化リゾチーム、グリチルリチン、アラン
トインなどの消炎剤、コウジ酸及びその誘導体、アスコ
ルビン酸及びその誘導体、アルブチン リキリチン及び
その誘導体等の色白剤、センブリエキス、ニンニクエキ
ス、ニンジンエキス、オウゴンエキス、ローズマリーエ
キス、アロエエキス、ヘチマ抽出物、イチョウ抽出物、
ニワトコ抽出物、胎盤抽出液、肝臓抽出物、乳酸菌培養
抽出物などの動物、植物、微生物由来の各種抽出物など
を自由に添加して使用することができる。 【００１２】本発明の外用剤の公知の剤型とは、外用可
能なあらゆる剤型を意味し、例えばパップ剤、プラスタ
ー剤、ペースト剤、クリーム、軟膏、エアゾール剤、乳
剤、ローション、乳液、エッセンス、パック、ゲル剤、
パウダー、ファンデーション、サンケア、バスソルト、
石鹸類などの皮膚適用剤が例示できる。また、前述の外
用剤には、メラニン生成抑制外用剤としての効果を損な
わない限り、公知の有効成分の他に、界面活性剤、油脂
類などの基剤成分や、必要に応じて公知の保湿剤、増粘
剤、防腐剤、酸化防止剤、紫外線吸収剤、散乱剤、キレ
ート剤、ｐＨ調整剤、香料、着色剤など種々の添加剤を
併用できる。 【００１３】保湿剤としては、例えば、グリセリン、プ
ロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール、ソ
ルビトール、マンニトール、ポリエチレングリコール、
ジプロピレングリコール等の多価アルコール類、アミノ
酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム
等のＮＭＦ成分、ヒアルロン酸、コラーゲン、エラスチ
ン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、フィブロネ
クチン、セラミド類、ヘパリン類似様物質、キトサン等
の水溶性高分子物質などを例示することができる。 【００１４】増粘剤としては、例えば、アルギン酸ナト
リウム、キサンタンガム、ケイ酸アルミニウム、マルメ
ロ種子抽出物、トラガントゴム、デンプン等の天然高分
子物質、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロー
ス、カルボキシメチルセルロース、可溶性デンプン、カ
チオン化セルロース等の半合成高分子物質、カルボキシ
ビニルポリマー、ポリビニルアルコール等の合成高分子
物質等を例示することができる。 【００１５】防腐剤としては、例えば安息香酸塩、サリ
チル酸塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ
安息香酸エステル、２，４，４’ートリクロロー２’ー
ヒドロキシジフェニルエーテル、３，４，４’ートリク
ロロカルバニリド、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオ
ール、レゾルシン、エタノール等を例示することができ
る。 【００１６】酸化防止剤としては、例えば、ジブチルヒ
ドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食
子酸プロピル、アスコルビン酸等を例示することができ
る。 【００１７】紫外線吸収剤としては、例えば、４−メト
キシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベン
ゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメート、
酸化チタン、カオリン、タルク等を例示することができ
る。 【００１８】さらに、キレート剤としては、例えば、エ
チレンジアミン四酢酸塩、ピロリン酸塩、ヘキサメタリ
ン酸塩、クエン酸塩、酒石酸、グルコン酸等を例示する
ことができ、ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、
リン酸水素カリウム等をそれぞれ例示することができ
る。 【００１９】 【実施例】以下に、本発明の製造例、その効果を説明す
るための試験例ならびに処方例を挙げるが、これらは本
発明を何ら限定するものではない。 【００２０】＜製造例１＞押し麦（大麦）１ｋｇ、グル
コース４００ｇ、大豆蛋白加水分解物８０ｇに精製水１
８．５２リットルを加え、ｐＨを５に調整後、１２０℃
で１５分間加熱殺菌し３０℃に冷却後、α−アミラーゼ
及びグルコアミラーゼを等量ずつ少量無菌的に加え、酵
母（Saccharomyces cerevisiae）の種菌をこれに接種
し、３０℃で培養液中のグルコース残量が０．１ないし
０．５％になるまで約６日間培養した。培養液をメンブ
ランフィルター（０．２５μ）で除菌後、５倍濃縮して
本発明品約４ｋｇを得た。 【００２１】＜製造例２＞小麦１．４ｋｇに精製水１２
リットルを加え、煮沸膨潤後４０℃まで冷却しα−アミ
ラーゼ及びグルコアミラーゼを等量ずつ少量加え約２時
間糖化する。この糖化液にペプトン１００ｇ、精製水
６．５リットルを加え、ｐＨを５に調整後、１２０℃で
１５分間加熱殺菌し冷却後、酵母（Saccharomyces cere
visiae）の種菌をこれに接種し、３０℃で培養液中のグ
ルコース残量が０．１ないし０．５％になるまで約６日
間培養した。培養液を遠心分離により除菌後、１０倍濃
縮して本発明品約２ｋｇを得た。 【００２２】＜製造例３＞蒸した大麦１ｋｇ、ペプトン
４０ｇに精製水１８．９６リットルを加え、１２０℃で
１５分間加熱殺菌し冷却後、酵母（Saccharomyces cere
visiae）の種菌をこれに接種し、３０℃で７日間培養し
た。培養液を遠心分離して除菌後、５倍濃縮し本発明品
約４ｋｇを得た。 【００２３】＜製造例４＞大麦１ｋｇ、グルコース４０
０ｇ、ペプトン２００ｇに０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ５）１８．６ｋｇを加え、１２０℃で１５分間加熱殺
菌し冷却後、酵母（Saccharomyces carlsbergensis）の
種菌をこれに接種し、３２℃で約８日間培養した。培養
液を遠心分離して除菌後、減圧濃縮機にて１０倍濃縮
し、本発明品約２ｋｇを得た。 【００２４】＜製造例５＞蒸した大麦１．２ｋｇ、肉汁
２００ｇに精製水１８．６リットルを加え、ｐＨを５に
調整後、１２０℃で１０分間加熱殺菌し冷却後、マルタ
ーゼを少量無菌的に加え糖化する。これに酵母（Saccha
romyces cerevisiae）の種菌を接種し、３０℃で８日間
培養した。培養液をメンブランフィルターで除菌後、減
圧濃縮機で１０倍濃縮し本発明品約２ｋｇを得た。 【００２５】＜製造例６＞小麦８００ｇ、トウモロコシ
澱粉４００ｇ、水１８．８リットルを煮沸膨潤後、４０
℃に保持しながらα−アミラーゼ及びグルコアミラーゼ
を等量ずつ少量加え、約２時間糖化した。この糖化液を
ｐＨ５に調整後、１２０℃で１５分間加熱殺菌し冷却
後、酵母（Saccharomyces cerevisiae）の種菌を接種
し、３０℃で培養液中のグルコース量が０．５％以下に
なるまで約８日間培養した。培養液を遠心分離により除
菌後、合成樹脂セパビーズＳＰ−２０５（三菱化成工業
株式会社製）を６％添加後１時間撹拌し、合成樹脂をろ
別した。ろ液を減圧濃縮器で１０分の１量まで濃縮し本
発明品約２ｋｇを得た。 【００２６】＜実験例１＞ マウスメラノーマＢ１６細
胞による白色化試験方法 試料をＭＥＭ（Eagle's Minimum Essential Medium）に
最終濃度が表１に示す濃度になるように調製、溶解し、
孔径０．４５μｍの除菌フィルターでろ過した。ＭＥＭ
に不溶性の試料は、１００μｌのエタノールに溶解後、
ＭＥＭに添加した。２枚のプラスチックシャーレ（Falc
on製、内径９ｃｍ）にそれぞれ、試料を溶解、ろ過除菌
したＭＥＭを８ｍｌ、ＦＢＳ（ウシ胎児血清）１ｍｌお
よびＭＥＭ１ｍｌに懸濁した１×１０5 ／ｍｌのＢ１６
細胞を添加し、培養開始３日後に培地交換を行い、計５
日間、５％ＣＯ2 、９５％空気条件下、３７℃で培養し
た。培養終了後、シャーレの底に増殖した細胞を集め、
Phosphate buffered saline（ＰＢＳ）に懸濁させ、２
０００ｒｐｍで３分間遠心分離を行い、得られた細胞ペ
レットの黒化度を肉眼的に評価した。 【００２７】表１において、肉眼的色調における＋−
は、下記の評価を示す。 ±：無添加区と同程度の黒化度を示す。 ＋：無添加区よりやや少ない黒化度を示す。 ＋＋：無添加区より明らかに少ない黒化度を示す。 ＋＋＋：僅かに認められる黒化度を示す。 ＋＋＋＋：白色ないし灰色で黒色と認められない。 ＋＋＋＋＋：白色 【００２８】 【００２９】＜実験例２＞ モルモット紫外線色素沈着
抑制効果 黄褐色モルモットを用い、色素沈着の改善効果を調べ
た。この結果を表２に示す。 ［試験方法］黄褐色モルモット１０匹の背部皮膚を用
い、該モルモットの背部毛をバリカンにて刈毛し、更に
電気カミソリにて剃毛した。このモルモットの背部を、
４ヶ所９正方形（２．０×２．０ｃｍ）の穴の開いたア
ルミ箔で覆い、ＵＶ−Ｂ（ＳＥランプ３本、１４０ｍＪ
／ｃｍ2 ）で１日１回９０秒、３日毎に４回照射した。
照射開始日から、「麦発酵液」（製造例１ないし３）
を、１日３回２０日間連続して塗布した。塗布開始後１
３日目から２０日目の間に判定を行った。皮膚色の黒化
度は以下に示した判定基準にて肉眼判定した。 【００３０】判定基準 著効：色素沈着を全く認めない。 有効：わずかな色素沈着を認める。 やや有効：中程度の色素沈着を認める。 無効：コントロール部位と変わらない。 逆転：コントロールよりも強い色素沈着を認める。 【００３１】【００３２】＜実験例３＞ インピーダンスメーターに
よる保湿性試験 ［試験方法］高周波インピーダンスメーター（ＩＢＳ社
製：MODEL IB-335）を用い、精製水をコントロールとし
て５％の酵母培養液（製造例１）の保湿性を調べた。他
の保湿剤と比較するために、保湿性が高いヒアルロン酸
ナトリウムの０．５％溶液を対照として同様に調べた。 ［測定方法］ヒト前腕屈側部に試料を塗布（２ｃｍ×２
ｃｍ）し、３０秒後すばやくガーゼで軽くふき取り、３
０秒毎に皮膚の電導度（コンダクタンス）を経時的に１
０分まで測定した（測定条件：測定室内温度２０℃、湿
度６０％、測定回数ｎ＝１０）。 ［試験結果］結果を図１に示した。図１の結果は、電導
度が高いほど保湿性が高いことを示しており、本発明の
酵母培養液は、保湿剤として優れていることが確認され
た。 【００３３】以下に処方例を示す。なお、処方例中、
「適量」とは、処方全量が１００重量％になる量を意味
する。 【００３４】 ＜処方例１＞ クリーム （重量％） １．モノステアリン酸ポリエチレングリコール（40E.0.） 2.00 ２．自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 5.00 ３．ステアリン酸 5.00 ４．ベヘニルアルコール 1.00 ５．流動パラフィン 10.00 ６．トリオクタン酸グリセリル 10.00 ７．酵母発酵液（製造例１で得られたもの） 4.00 ８．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 ９．１，３ーブチレングリコール 5.00 １０．エデト酸二ナトリウム 0.01 １１．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし７を加温、溶解する。 Ｂ．８ないし１２を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３５】 ＜処方例２＞ 乳液 （重量％） １．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0.） 2.00 ２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット（60E.0.） 0.50 ３．親油型モノステアリン型グリセリン 1.00 ４．ステアリン酸 0.50 ５．ベヘニルアルコール 0.50 ６．アボガド油 4.00 ７．トリオキタン酸グリセリル 4.00 ８．酵母発酵液（製造例３で得られたもの） 3.00 ９．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 １０．１，３ーブチレングリコール 5.00 １１．キサンタンガム 0.14 １２．エデト酸二ナトリウム 0.01 １３．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし８を加温、溶解する。 Ｂ．９ないし１４を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３６】 ＜処方例３＞ ローション剤 （重量％） １．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（60E.0.） 8.00 ２．エタノール 15.00 ３．酵母発酵液（製造例６で得られたもの） 5.00 ４．パラオキシ安息香酸エステル 0.10 ５．クエン酸 0.10 ６．クエン酸ナトリウム 0.30 ７．１，３ーブチレングリコール 4.00 ８．エデト酸二ナトリウム 0.01 ９．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし１０を均一に撹拌、溶解する。 Ｂ．Ａを容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３７】 ＜処方例４＞ クリームパック （重量％） １．モノステアリン酸ポリエチレングリコール（40 E.0. ） 2.00 ２．自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 5.00 ３．ステアリン酸 5.00 ４．ベヘニルアルコール 0.50 ５．スクワラン 15.00 ６．オクタン酸セチル 5.00 ７．酵母発酵液（製造例２で得られたもの） 5.00 ８．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 ９．１，３−ブチレングリコール 5.00 １０．エデト酸二ナトリウム 0.01 １１．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし７を加温、溶解する。 Ｂ．８ないし１２を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３８】 ＜処方例５＞ 軟膏剤 （重量％） １．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0.） 1.00 ２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット（60E.0.） 1.50 ３．自己乳化型モノステアリン酸グリセリン 1.50 ４．サラシミツロウ 2.00 ５．パラフィン 2.00 ６．ステアリン酸 3.00 ７．ベヘニルアルコール 3.00 ８．流動パラフィン 5.00 ９．アボガド油 12.00 １０．ビタミンＥ 12.00 １１．酵母発酵液（製造例４で得られたもの） 10.00 １２．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 １３．１，３ーブチレングリコール 5.00 １４．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし１１を加温、溶解する。 Ｂ．１２ないし１５を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌し、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００３９】 ＜処方例６＞ 乳剤 （重量％） １．モノステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.0.） 1.00 ２．テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビット（60E.0.） 0.50 ３．親油型モノステアリン酸グリセリン 1.00 ４．ステアリン酸 0.50 ５．ベヘニルアルコール 0.50 ６．アボガド油 4.00 ７．トリオクタン酸グリセリル 4.00 ８．酵母発酵液（製造例５で得られたもの） 3.00 ９．パラオキシ安息香酸エステル 0.20 １０．１，３ーブチレングリコール 5.00 １１．キサンタンガム 0.14 １２．エデト酸二ナトリウム 0.01 １３．精製水 適量 製造方法 Ａ．１ないし８を加温、溶解する。 Ｂ．９ないし１４を加温、溶解する。 Ｃ．ＡにＢを加え乳化、撹拌、冷却する Ｄ．Ｃを冷却後、容器に充填し、検査後製品とする。 用法及び用量 適量を顔面に塗擦する。 【００４０】 【発明の効果】本発明によれば、麦類に特定の糖化酵素
を同時に添加して得られた糖化液に、特定の菌種を接種
した酵母培養液または酵母エキスからなるメラニン生成
抑制効果に著しく優れた外用剤が提供され、この外用剤
は、保湿効果にも優れているために、しっとり感が求め
られる色白化粧料の有効成分として好適に使用される。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の糖液の酵母培養液の電動度を、ヒアル
ロン酸ナトリウムの電動度と対比して示すグラフであ
る。
ロン酸ナトリウムの電動度と対比して示すグラフであ
る。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ
Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｐ 17/00
Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｋ 37/02
(58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名)
A61K 7/00 - 7/50
C12N 1/16 - 1/19
ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)
Claims (1)
- (57)【特許請求の範囲】 【請求項１】 麦類に、糖化酵素として、α−アミラー
ゼとグルコアミラーゼを同時添加して得られた糖化液
に、菌種としてサッカロミセスセレビシエまたはサッカ
ロミセスカールスベルゲンシスを接種した酵母培養液ま
たは培養エキスを含有することを特徴とするメラニン生
成抑制外用剤。
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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| JP00634393A JP3435181B2 (ja) | 1993-01-19 | 1993-01-19 | メラニン生成抑制外用剤 |
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Family Applications (1)
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