JP3367581B2

JP3367581B2 - 新規なポリペプチド、その製造方法、そのポリペプチドをコードするｄｎａ、そのｄｎａからなるベクター、そのベクターで形質転換された宿主細胞

Info

Publication number: JP3367581B2
Application number: JP27288994A
Authority: JP
Inventors: 佑本庶; 倫生白水; 秀明多田
Original assignee: Ono Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Ono Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1993-10-14
Filing date: 1994-10-12
Publication date: 2003-01-14
Anticipated expiration: 2018-01-14
Also published as: PT657468E; DE69434428D1; ATE299891T1; DE69434428T2; EP1557428A1; JP2007291132A; CA2117953A1; JP3705732B2; ES2244955T3; TW302369B; CN1110323A; JP2001017191A; KR950011618A; JPH07188294A; US5563048A; KR100210308B1; US5756084A; CN1062908C; EP0657468B1; DK0657468T3

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規なポリペプチドおよ
びそれをコードするＤＮＡに関する。より詳細に述べる
と、本発明はヒトのプロＢ細胞株が産生する新規なポリ
ペプチド、その製造方法、そのポリペプチドをコードす
るＤＮＡ、そのＤＮＡからなるベクター、そのベクター
で形質転換された宿主細胞に関する。

【０００２】

【発明の目的】本発明は、造血系細胞から得られた新規
なポリペプチドおよびそれをコードするＤＮＡに関する
ものである。造血系細胞からは、インターロイキン（Ｉ
Ｌ）をはじめ種々の増殖、分化因子が分泌されているこ
とが知られている。このことはこれまでに見出された分
泌因子以外にも同様の作用、または新たな作用を有する
因子が分泌されている可能性を示唆している。

【０００３】本発明者らは、この点に注目し、造血系細
胞が産生している新規な因子（ポリペプチド）を見出す
ことを目的として、先にマウスのストローマ細胞より得
られたＳＤＦ−１（Stromal Derived Factor 1；ストロ
ーマ由来因子；特願平5-22098 号に記載）をプローブと
して、クロスハイブリダイゼーションの手法を用い、ヒ
トのプロＢ細胞が産生しているＳＤＦ−１（αおよびβ
の２種類）をクローニングすることに成功し、本発明を
完成した。本発明のポリペプチドおよびそれをコードす
るＤＮＡと同一あるいは相同性の高い配列を有している
ものをコンピューターで検索したが皆無であった。従っ
て、本発明のポリペプチドおよびそれをコードするＤＮ
Ａは、新規なものであることが確認された。

【０００４】

【発明の構成】本発明の主題は、クロスハイブリダイゼ
ーションによって見出された新規なポリペプチドＳＤＦ
−１αおよびそれをコードするＤＮＡに関する。すなわ
ち、（１）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるポ
リペプチド、（２）前記（１）に記載したポリペプチドをコードす
るＤＮＡ、（３）配列番号２で示される塩基配列を有するｃＤＮ
Ａ、および（４）配列番号３で示される塩基配列を有するｃＤＮ
Ａに関するものである。

【０００５】本発明は、実質的に純粋な形である配列番
号１で示されるアミノ酸配列からなるポリペプチド、そ
のホモローグ、その配列のフラグメントおよびそのホモ
ローグに関する。本発明はさらにそれらのポリペプチド
をコードするＤＮＡに関する。より具体的には、配列番
号２または３で示される塩基配列を有するＤＮＡ、およ
び配列番号２または３で示される塩基配列に選択的にハ
イブリダイズするフラグメントを有するＤＮＡに関す
る。

【０００６】実質的に純粋な形である配列番号１で示さ
れるアミノ酸配列を有するポリペプチドとは、一般に、
生産時のポリペプチドの９０％以上、例えば、９５、９
８または９９％が配列番号１で示されるアミノ酸配列を
有するポリペプチドであることを意味する。

【０００７】配列番号１で示されるアミノ酸配列からな
るポリペプチドのホモローグとは、一般に少なくとも２
０個、好ましくは少なくとも３０個、例えば４０、６０
または８０個の連続したアミノ酸領域で、少なくとも７
０％、好ましくは少なくとも８０または９０％、より好
ましくは９５％以上相同性であるものであり、そのよう
なホモローグは、以後本発明のポリペプチドとして記載
される。

【０００８】さらに、配列番号１で示されるアミノ酸配
列からなるポリペプチドのフラグメント、またはそれら
のホモローグのフラグメントとは、少なくとも１０アミ
ノ酸、好ましくは少なくとも１５アミノ酸、例えば２
０、２５、３０、４０、５０または６０アミノ酸部分を
意味する。

【０００９】配列番号２または３で示される塩基配列を
有するＤＮＡに選択的にハイブリダイズするＤＮＡと
は、一般に、少なくとも２０個、好ましくは少なくとも
３０個、例えば４０、６０または１００個の連続した塩
基配列領域で、少なくとも７０％、好ましくは少なくと
も８０または９０％、より好ましくは９５％以上相同性
であるものであり、そのようなＤＮＡは、以後本発明の
ＤＮＡとして記載される。

【００１０】配列番号２または３で示される塩基配列を
有するＤＮＡのフラグメントとは、少なくとも１０塩
基、好ましくは少なくとも１５塩基、例えば２０、２
５、３０または４０塩基部分を意味し、そのようなフラ
グメントも本発明のＤＮＡに含まれる。

【００１１】さらに、本発明には、本発明のＤＮＡから
なる複製または発現ベクターが含まれる。ベクターとし
ては、例えば、ｏｒｉ領域と、必要により上記ＤＮＡの
発現のためのプロモーター、プロモーターの制御因子な
どからなるプラスミド、ウィルスまたはファージベクタ
ーが挙げられる。ベクターはひとつまたはそれ以上の選
択的マーカー遺伝子、例えばアンピシリン耐性遺伝子を
含んでいてもよい。ベクターは、イン・ビトロ（in vit
ro）において、例えばＤＮＡに対応するＲＮＡの製造、
宿主細胞の形質転換に用いることができる。

【００１２】さらに、本発明には、配列番号２または３
で示される塩基配列、またはそれらのオープンリーディ
ングフレームを有するＤＮＡを含む本発明のＤＮＡを複
製または発現させるためのベクターで形質転換された宿
主細胞も含まれる。細胞としては、例えば細菌、酵母、
昆虫細胞または哺乳動物細胞が挙げられる。

【００１３】さらに、本発明には、本発明のポリペプチ
ドを発現させるための条件下で、本発明の宿主細胞を培
養することからなる本発明のポリペプチドの製造方法も
含まれる。加えて、本発明のポリペプチドが発現し、宿
主細胞より製造される条件下で行われることが好まし
い。

【００１４】本発明のＤＮＡは、上記のようなベクター
のアンチセンス領域に挿入することでアンチセンスＲＮ
Ａを製造することもできる。このようなアンチセンスＲ
ＮＡは、細胞中の本発明のポリペプチドのレベルを制御
することに用いることもできる。

【００１５】モノクローナル抗体は、本発明のペプチド
または、その断片を抗原として用い、通常のハイブリド
ーマの技術により製造することができる。ポリクローナ
ル抗体は、宿主動物（例えば、ラットやウサギ等）に本
発明のポリペプチドを接種し、免疫血清を回収する、通
常の方法により製造することができる。

【００１６】

【００１７】本発明のポリペプチドとしては、配列番号
１で示されたアミノ酸配列を有するもの以外に、その一
部が欠損したもの（例えば、配列番号１で示されるアミ
ノ酸配列、生物活性の発現に必須な部分だけから成るポ
リペプチド）、その一部が他のアミノ酸と置換したもの
（例えば、物性の類似したアミノ酸に置換したもの）、
およびその一部に他のアミノ酸が付加または挿入された
ものも含まれる。よく知られているように、ひとつのア
ミノ酸をコードするコドンは１〜６種類（例えば、メチ
オニン（Ｍｅｔ）は１種類、ロイシン（Ｌｅｕ）は６種
類）知られている。従って、ポリペプチドのアミノ酸配
列を変えることなくＤＮＡの塩基配列を変えることがで
きる。

【００１８】（２）で特定される本発明のＤＮＡには、
（１）の配列番号１で示されるポリペプチドをコードす
るすべての塩基配列群が含まれる。塩基配列を変えるこ
とによって、ポリペプチドの生産性が向上することがあ
る。（３）で特定されるｃＤＮＡは、（２）で示されるＤＮ
Ａの一態様であり、天然型配列を表わす。（４）に示されるｃＤＮＡは、（３）で特定されるｃＤ
ＮＡに天然の非翻訳部分を加えた配列を示す。シグナルペプチドは、翻訳開始Ｍｅｔのすぐ後ろの疎水
性に富んだ領域である。本ポリペプチドの場合、配列番
号１で示されるアミノ酸配列中、１番目のＭｅｔから２
１番目のグリシン（Ｇｌｙ）までと推定される。生物活
性を発現する本質は配列番号１で示されるアミノ酸配列
中、シグナルペプチドを除いた部分（成熟タン白部分）
にあり、シグナルペプチドは活性に関与しない。

【００１９】配列番号３で示される塩基配列を有するｃ
ＤＮＡの作製は、以下の方法に従って行なわれる。すな
わち、 (i) 本発明のポリペプチドを産生する細胞、例えば、
ヒトプロＢ細胞株からｍＲＮＡを分離し、 (ii) 該ｍＲＮＡからファーストストランド（１本鎖ｃ
ＤＮＡ）、次いでセカンドストランド（２本鎖ｃＤＮ
Ａ）を合成し（ｃＤＮＡの合成）、 (iii) 該ｃＤＮＡを適当なファージベクターに組込み、 (iv) 得られた組み換えファージを宿主細胞に感染させ
（ｃＤＮＡライブラリーの作製）、 (v) 得られたｃＤＮＡライブラリーをマウスＳＤＦ−
１ｃＤＮＡをプローブに用いてプラークハイブリダイ
ゼーションによりスクリーニングし、 (vi) 得られたポジティブクローンよりファージＤＮＡ
を調製し、切り出したｃＤＮＡをプラスミドベクターに
サブクローニングし、制限酵素地図を作成し、 (vii) 各制限酵素断片の塩基配列を決定し、連結させる
ことで全長をシークエンスすることによって作成するこ
とができる。

【００２０】より詳細に説明すると、工程(i) は、ヒト
Ｂ細胞株を適当な刺激剤（例えば、ＩＬ−１等）で刺激
するかまたは、無刺激のままで、オカヤマ（Okayama,
H.）等の方法（Method in Enzymology, 154, 3 (1987)
参照）に従って行なわれる。本ポリペプチドを産生する
細胞としては、好ましくはヒトＢ細胞株ＦＬＥＢ１４が
挙げられる。該ヒトＢ細胞株ＦＬＥＢ１４は、京都大学
医学部医化学教室第一講座において分譲を受けることが
できる。工程(ii)、(iii) および(iv)は、ｃＤＮＡライ
ブラリー作製の工程であり、改変したガブラー・アンド
・ホフマン（ Gubler ＆ Hoffman）法（Gene, 25, 263
(1983)参照）に準じて行なわれる。

【００２１】工程(iii) で用いられるベクターとして
は、プラスミドベクター（例えば、ｐＢＲ３２２、pBlu
escript、pBluescript II等）やファージベクター（例
えば、λｇｔ１０、λＤＡＳＨ II 等）が多数知られて
いるが、好適にはファージベクターλｇｔ１０（43.3 k
bp Stratagene 社より販売）が用いられる。工程(iv)で
用いられる細胞宿主としては、好ましくは、大腸菌ＮＭ
５１４（Stratagene社より販売）が用いられる。工程
(v) および(vi)は、Molecular Cloning （Sambrook,
J., Fritsh, E. F.,および Maniatis, T, Cold Spring
Harbor Laboratory Press (1989)）に記載の方法に準じ
て行なわれる。工程(vii) のシークエンシングは、マキ
サム−ギルバート (Maxam-Gilbert)法やジデオキシター
ミネーター法により行なわれる。

【００２２】この様にして得られたｃＤＮＡは、該ｃＤ
ＮＡが全長またはほぼ全長であることを確認する必要が
ある。この確認は、該ｃＤＮＡをプローブとして、ノー
ザン(Northern)解析により行なわれる（前記Molecular
Cloning参照）。ハイブリダイズしたバンドから得られ
るｍＲＮＡのサイズと該ｃＤＮＡのサイズを比較し、ほ
ぼ同じであれば該ｃＤＮＡはほぼ全長であると考えられ
る。配列番号２、３で示される塩基配列が一旦確定され
ると、その後は、化学合成によって、あるいは該塩基配
列の断片を化学合成し、これをプローブとしてハイブリ
ダイズさせることにより、本発明のＤＮＡを得ることが
できる。さらに、本ｃＤＮＡを含有するベクターｃＤＮ
Ａを適当な宿主に導入し、これを増殖させることによっ
て、目的とするｃＤＮＡを必要量得ることができる。

【００２３】配列番号２、３で示される塩基配列が一旦
確定されると、その後は、化学合成によって、またはＰ
ＣＲ（Polymerase chain reaction）法によって、ある
いは該塩基配列の断片をプローブとしてハイブリダイズ
させることにより、本発明のＤＮＡを得ることができ
る。さらに、本ＤＮＡを含有するベクターＤＮＡを適当
な宿主に導入し、これを増殖させることによって、目的
とする本発明ＤＮＡを必要量得ることができる。

【００２４】本発明のポリペプチドを取得する方法とし
ては、（１）生体または培養細胞から精製単離する方
法、（２）ペプチド合成する方法、または（３）遺
伝子組換え技術を用いて生産する方法、などが挙げられ
るが、工業的には（３）に記載した方法が好ましい。遺
伝子組換え技術を用いてポリペプチドを生産するための
発現系（宿主−ベクター系）としては、例えば、細菌、
酵母、昆虫細胞および哺乳動物細胞の発現系が挙げられ
る。

【００２５】例えば、大腸菌で発現させる場合には、成
熟タン白部分をコードするＤＮＡの５′末端に開始コド
ン（ＡＴＧ）を付加し、得られたＤＮＡを、適当なプロ
モーター（例えば、ｔｒｐプロモーター、ｌａｃプロモ
ーター、λＰＬプロモーター、Ｔ７プロモーター等）の
下流に接続し、大腸菌内で機能するベクター（例えば、
ｐＢＲ３２２、pBluescript、pBluescript II、ｐＵＣ
１８、ｐＵＣ１９等）に挿入して発現ベクターを作製す
る。次に、この発現ベクターで形質転換した大腸菌（例
えば、Ｅ．ＣｏｌｉＤＨ１、Ｅ．ＣｏｌｉＪＭ１０
９、Ｅ．ＣｏｌｉＨＢ１０１株等）を適当な培地で培
養して、その菌体より目的とするポリペプチドを得るこ
とができる。

【００２６】また、バクテリアのシグナルペプチド（例
えば、ｐｅｌＢのシグナルペプチド）を利用すれば、ペ
リプラズム中に目的とするポリペプチドを分泌すること
もできる。さらに、他のポリペプチドとのフュージョン
・プロテイン（fusion protein）を生産することもでき
る。また、哺乳動物細胞で発現させる場合には、例え
ば、配列番号３で示される塩基配列をコードするｃＤＮ
Ａを適当なベクター（例えば、レトロウイルスベクタ
ー、パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイルス
ベクター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロモー
ター（例えば、ＳＶ４０プロモーター、ＬＴＲプロモー
ター、メタロチオネインプロモーター等）の下流に挿入
して発現ベクターを作製する。次に、得られた発現ベク
ターで適当な哺乳動物細胞（例えば，サルＣＯＳ−７細
胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、マウスＬ細胞
等）を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養する
ことによって、その培養液中に目的とするポリペプチド
が分泌される。以上のようにして得られたポリペプチド
は、一般的な生化学的方法によって単離精製することが
できる。

【００２７】

【発明の効果】本発明の新規なポリペプチドは、プロＢ
細胞株が生産、分泌するものであるので、造血幹細胞の
生存、増殖、およびＢ細胞系やミエロイド細胞系の増
殖、分化に関連した生物活性を有していると予測され
る。これらの活性の内、精製されたマウスＳＤＦ−１α
のミエロイド前駆細胞株ＤＡ１Ｇに対する増殖刺激作用
が実験的に認められており、この事実からヒトＳＤＦ−
αも同様の活性を有していることが示唆される。従っ
て、本発明のポリペプチドは、造血系細胞の発育不全、
異常増殖、神経系機能の亢進や低下、免疫機能の亢進や
低下に関する疾患、例えば、炎症性疾患（リウマチ、潰
瘍性大腸炎等）、骨髄移植後の造血幹細胞の減少症、放
射線治療後または化学療法剤投与後の白血球、血小板、
Ｂ細胞またはＴ細胞の減少症、貧血、感染症、ガン、白
血病、ＡＩＤＳ、各種神経変性疾患（アルツハイマー
病、多発性硬化症等）、または神経損傷の予防または治
療、骨代謝異常（骨粗しょう症等）の予防または治療
薬、あるいは組織修復等のために用いることができる。

【００２８】これらの活性の内、精製されたマウスＳＤ
Ｆ−１αのミエロイド前駆細胞株ＤＡ１Ｇに対する増殖
刺激作用が実験的に認められており、この事実からヒト
ＳＤＦ−αも同様の活性を有していることが示唆され
る。また、該ポリペプチドのポリクローナル抗体または
モノクローナル抗体を用いて、生体における該ポリペプ
チドの定量が行なえ、これによって該ポリペプチドと疾
患との関係の研究あるいは疾患の診断等に利用すること
ができる。ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗
体は、該ポリペプチドあるいはその断片を抗原として用
いて常法により作製することができる。

【００２９】本発明のＤＮＡは、多大な有用性が期待さ
れる本発明のポリペプチドを生産する際の重要かつ必須
の鋳型となるだけでなく、遺伝病の診断や治療（遺伝子
欠損症の治療またはアンチセンスＤＮＡ（ＲＮＡ）によ
って、ポリペプチドの発現を停止させることによる治療
等）に利用できる。また、本発明のｃＤＮＡをプローブ
としてジェノミック（genomic）ＤＮＡを分離できる。
同様にして、本発明ＤＮＡと相同性の高いヒトの関連ポ
リペプチドの遺伝子、またヒト以外の生物における本発
明ポリペプチドと相同性の高いポリペプチドの遺伝子を
分離することも可能である。

【００３０】

【医薬品への適用】本発明の目的、または造血系細胞の
発育不全、異常増殖、神経系機能の亢進や低下、免疫機
能の亢進や低下に関する疾患、例えば、炎症性疾患（リ
ウマチ、潰瘍性大腸炎等）、骨髄移植後の造血幹細胞の
減少症、放射線治療後または化学療法剤投与後の白血
球、血小板、Ｂ細胞またはＴ細胞の減少症、貧血、感染
症、ガン、白血病、ＡＩＤＳ、各種神経変性疾患（アル
ツハイマー病、多発性硬化症等）、または神経損傷の予
防または治療、骨代謝異常（骨粗しょう症等）の予防ま
たは治療薬、あるいは組織修復等のために本発明のポリ
ペプチドは、通常全身的にまたは局所的に、一般的には
経口または非経口の形で投与される。好ましくは、経口
投与、静脈内投与および脳室内投与である。

【００３１】本発明のポリペプチドは、通常全身的にま
たは局所的に、一般的には経口または非経口の形で投与
される。好ましくは、経口投与、静脈内投与および脳室
内投与である。投与量は、年齢、体重、症状、治療効
果、投与方法、処理時間等により異なるが、通常、成人
一人あたり、一回につき、１００μｇから１００ｍｇの
範囲で、一日一回から数回経口投与されるかまたは、成
人一人当り、一回につき、１０μｇから１００ｍｇの範
囲で、一日一回から数回非経口投与される。もちろん前
記したように、投与量は、種々の条件により変動するの
で、上記投与量より少ない量で十分な場合もあるし、ま
た範囲を越えて必要な場合もある。

【００３２】本発明化合物を投与する際には、経口投与
のための固体組成物、液体組成物およびその他の組成
物、非経口投与のための注射剤、外用剤、坐剤等として
用いられる。経口投与のための固体組成物には、錠剤、
丸剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤等が含まれる。カプセ
ルには、ソフトカプセルおよびハードカプセルが含まれ
る。このような個体組成物においては、一つまたはそれ
以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性な希釈剤
（例えば、ラクトース、マンニトール、グルコース、ヒ
ドロキシプロピルセルロース、微結晶セルロース、デン
プン、ポリビニルピロリドン、メタケイ酸アルミン酸マ
グネシウム等）と混合される。組成物は、常法に従っ
て、不活性な希釈剤以外の添加物、例えば、潤滑剤（ス
テアリン酸マグネシウム等）、崩壊剤（繊維素グリコー
ル酸カルシウム等）、安定化剤（ヒト血清アルブミン、
ラクトース等）、溶解補助剤（アルギニン、アスパラギ
ン酸等）を含有していてもよい。

【００３３】錠剤または丸剤は、必要により白糖、ゼラ
チン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロ
ピルメチルセルロースフタレート等の胃溶性あるいは腸
溶性のフィルムで皮膜してもよいし、また２以上の層で
皮膜してもよい。さらにゼラチンのような吸収されうる
物質のカプセルも包含される。経口投与のための液体組
成物は、薬学的に許容される乳濁剤、溶液剤、懸濁剤、
シロップ剤、エリキシル剤等を含み、一般に用いられる
不活性な希釈剤（例えば、精製水、エタノール等）を含
んでいてもよい。この様な組成物は、不活性な希釈剤以
外に湿潤剤、懸濁剤のような補助剤、甘味剤、風味剤、
芳香剤、防腐剤を含有していてもよい。経口投与のため
のその他の組成物としては、ひとつまたはそれ以上の活
性物質を含み、それ自体公知の方法により処方されるス
プレー剤が含まれる。この組成物は不活性な希釈剤以外
に亜硫酸水素ナトリウムのような安定剤と等張性を与え
るような安定化剤、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウ
ムあるいはクエン酸のような等張剤を含有していてもよ
い。スプレー剤の製造方法は、例えば米国特許第2,868,
691 号および同第3,095,355 号明細書に詳しく記載され
ている。

【００３４】非経口投与のための注射剤としては、無菌
の水性または非水性の溶液剤、懸濁剤、乳濁剤を包含す
る。水性または非水性の溶液剤、懸濁剤としては、一つ
またはそれ以上の活性物質が、少なくとも一つの不活性
な希釈剤と混合される。水性の希釈剤としては、例えば
注射用蒸留水および生理食塩水が挙げられる。非水性の
希釈剤としては、例えばプロピレングリコール、ポリエ
チレングリコール、オリーブ油のような植物油、エタノ
ールのようなアルコール類、ポリソルベート８０（登録
商標）等が挙げられる。このような組成物は、さらに防
腐剤、湿潤剤、乳化剤、分散剤、安定化剤（例えば、ヒ
ト血清アルブミン、ラクトース等）、溶解補助剤（例え
ば、アルギニン、アスパラギン酸等）のような補助剤を
含んでいてもよい。これらはバクテリア保留フィルター
を通すろ過、殺菌剤の配合または照射によって無菌化さ
れる。これらはまた無菌の固体組成物を製造し（例え
ば、凍結乾燥法等により）、使用前に無菌の注射用蒸留
水または他の溶媒に溶解して使用することもできる。非
経口投与のためのその他の組成物としては、ひとつまた
はそれ以上の活性物質を含み、常法により処方される外
用液剤、軟コウ、塗布剤、直腸内投与のための坐剤およ
びペッサリー等が含まれる。

【００３５】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明するが、これらは本発明の範囲を制限するものでは
ない。

【００３６】実施例１：ヒト細胞株ＦＬＥＢ１４のノ
ーザン（Northern）解析ヒトプロＢ細胞株ＦＬＥＢ１４（Katamine, S.,et.al.
Nature, 309, 369 (1984) 参照）をホモジナイズし、オ
リゴｄＴ−セルロースとインキュベートした。不要物を
洗浄した後にポリＡ−ＲＮＡを溶出させ回収した（Venn
storm,B.et.al.Cell,28, 135(1982) 参照）。このＲＮ
Ａ１μｇを 1.0％アガロース電気泳動後、ニトロセル
ロースメンブレンにブロッティングし、３２Ｐ標識した
マウスＳＤＦ−１ｃＤＮＡ（1797bp、特願平 5-22098号
明細書中に配列番号３として記載されている、配列番号
９で示されているものをラベルした。後に、マウスには
もう一種ＳＤＦ−１があることが判明し、現在はＳＤＦ
−１αと呼ばれている。）をプローブとして、５０％
ホルムアミド，５×ＳＳＣ， 0.1％ＳＤＳ，５×Ｄｅｎ
ｈａｌｄｔ´ｓ， 0.1ｍｇ／ｍｌ Salmon sperm ＤＮ
Ａ，３９℃でハイブリダイズさせ、0.3 ＭＮａＣｌ，
３０ｍＭクエン酸ナトリウム, 0.1 ％ＳＤＳ，５０℃
で洗浄し、オートラジオグラフィーを行なった。その結
果、3.5 ｋｂと1.9 ｋｂのｍＲＮＡの発現が認められ
た。

【００３７】実施例２：ヒトプロＢ細胞株のｍＲＮＡよ
りｃＤＮＡの調製ヒトプロＢ細胞株ＦＬＥＢ１４より常法により、ｃＤＮ
Ａライブラリーを作製した（Molecular Cloning ; Samb
rook, J., Fritsh, E. F.,および Maniatis, T, Cold S
pring Harbor Laboratory Press (1989)参照）。ｃＤＮ
Ａの合成はタイム・セイヴァーｃＤＮＡ合成キット（Ti
me Saver ｃＤＮＡ synthesis kit）（Pharmacia 社）
を用い、そのプロトコールにしたがった。すなわち、Ｆ
ＬＥＢ１４のポリＡ−ＲＮＡ５μｇよりオリゴｄＴプ
ライマーを用いて逆転写酵素により一本鎖ｃＤＮＡを合
成した後、ＤＮＡポリメラーゼＩによって二本鎖ｃＤＮ
Ａを合成した。

【００３８】

【化１】

【００３９】を連結、リン酸化した後、 0.9％アガロー
ス電気泳動を行なって、８００ｂｐ以上のｃＤＮＡを切
り出し、グラスパウダー（GENECLEAN II BIO101社）を
用いて回収した。

【００４０】実施例３：ｃＤＮＡライブラリーの作成と
クロスハイブリダイゼーションこのｃＤＮＡをホスファ
ターゼ処理済みのＥｃｏＲＩアームをもつλｇｔ１０
（Stratagene社）と連結した。インビトロ・パッキング
（in vitro packaging）はインビトロ・パッキング・キ
ットLAMDA INN（in vitro packaging kit LAMDA INN）
（日本ジーン）のプロトコールにしたがって行ない、そ
の組換えファージを宿主大腸菌ＮＭ５１４（Stratagene
社）に感染させた。その結果、１００万のプラークから
なるｃＤＮＡライブラリーが得られた。ＬＢプレート上
に得られた１００万のプラークをニトロセルロースメン
ブレンにブロッティングし、３２Ｐ標識したマウスＳＤ
Ｆ−１αｃＤＮＡ（実施例１で使用したのと同じ配列番
号９で示されるもの）をプローブとして、５０％formam
ide, ５×ＳＳＤ，0.1％ＳＤＳ，５×Denhaldt´s 0.1m
g/mlSalmon sperm ＤＮＡ，３９℃でハイブリダイズさ
せ、0.3ＭＮａＣｌ，３０ｍＭクエン酸ナトリウム,0.
1％ＳＤＳ，５０℃で洗浄し、オートラジオグラフィー
を行なったところ、４０個のポジティブクローンが得ら
れた。

【００４１】実施例４：ポジティブクローンのクローン
の単離その中の９クローンについて、常法（細胞工学実験プロ
トコール、秀潤社、８ページ参照）により、ファージＤ
ＮＡを調製し、ＮｏｔＩで消化して、アガロース電気泳
動でインサートｃＤＮＡの長さを調べたところ、８クロ
ーンが 1.9ｋｂ、１クローンが 3.5ｋｂであった。ノー
ザン（Northern）解析の結果からこの２種類のクローン
はそれぞれヒトＳＤＦ−１のｃＤＮＡのほぼ全長である
と考えられた。そこで、1.9 ｋｂの８クローンより１ク
ローンと、3.5 ｋｂの１クローンについて、ＮｏｔＩで
消化したｃＤＮＡをアガロース電気泳動後、切り出し
て、プラスミド pBluescript のＮｏｔＩサイトにサブ
クローニングした。

【００４２】実施例５：制限酵素地図の作成とシークエ
ンシング続いて、ヒトＳＤＦ−１（1.9 ｋｂのもの）のｃＤＮＡ
の制限酵素地図を作成し（図１に示す。）、各制限酵素
断片を、pBluescript にサブクローニングした後、各イ
ンサート断片の両端約３００ｂｐの塩基配列を決定し、
それらを連結させることによって、最終的に全長の塩基
配列を決定した（配列番号３に示す。）。この全長ｃＤ
ＮＡシークエンスデータから、オープンリーディングフ
レーム（配列番号２に示す。）を決定し、さらにアミノ
酸配列に翻訳して配列番号１に示す配列を得た。また、
得られたアミノ酸配列のＮ末端側３０〜４０アミノ酸に
ついて、既知のシグナルペプチドと比較することによ
り、本ポリペプチドにおけるシグナルペプチド部分を推
定し（Von Heuane, G. Nucleic Acids Res. 14 ,4683(1
986) 参照）、配列番号４に示す配列を得た。

【００４３】もう一方の3.5 ｋｂのクローンについても
同様の操作を行ない、それぞれ、制限酵素地図（図２に
示す。）、全長の塩基配列（配列番号７に示す。）、オ
ープンリーディングフレーム（配列番号６で示す。）、
アミノ酸配列（配列番号５で示す。）およびシグナルペ
プチドを示した配列（配列番号８に示す。）を得た。3.
5 ｋｂのクローンのアミノ酸配列は、1.9 ｋｂのクロー
ンのアミノ酸配列と非常に類似しており、1.9 ｋｂのも
のをＳＤＦ−１α、3.5 ｋｂのものをＳＤＦ−１βとそ
れぞれ命名した。ＤＮＡの塩基配列決定はＡＢＩ（Appl
ied Biosystem Inc.）の蛍光ダイターミネーターを用い
たサイクルシークエンス法により行なった。また塩基配
列の読み取りには、ＡＢＩ社のＤＮＡシークエンサー
（Model 373A）を用いた。得られたヒトＳＤＦ−１αお
よび１βのｃＤＮＡの塩基配列ならびに予想されるアミ
ノ酸配列について、データベース（ＤＮＡについてはGE
NBANK と EMBL 、アミノ酸についてはNBRFとSWISSPROT
を使用）とのホモロジー検索を行ない、本ｃＤＮＡは新
規のタンパク質をコードしていることが確認された。

【００４４】実施例６：発現ベクター作製用プラスミド
ベクターの構築発現用のベクターとして、ｐＵＣＳＲαＭＬ１（特開平
6-56895 号にその製造方法とともに開示してある。）
の誘導体を用いた。この誘導体は、下に示される２種類
のインサート断片（フラグメントＴ７およびフラグメン
トＳＰ６）を用いて構築した。

【００４５】

【化２】

【００４６】

【化３】

【００４７】ｐＵＣＳＲαＭＬ１ベクターをＰｓｔＩと
ＳａｃＩで消化し、アガロースゲル電気泳動にかけ、約
4.1kbp 断片を回収し、５′末端のリン酸をＢＡＰ（バ
クテリアアルカリホスファターゼ）処理した。リン酸化
されたＤＮＡ断片Ｔ７をｐＵＣＳＲαＭＬ１から得られ
た約 4.1kbp 断片とライゲートし、環状化させた。ｐＵ
ＣＳＲαＭＬ１ベクターをＰｓｔＩおよびＳａｃＩで消
化し、得られたものをアガロースゲル電気泳動にかけ、
約 4.1kbp の断片を回収し、５′末端のリン酸基をＢＡ
Ｐ（バクテリアアルカリホスファターゼ）処理により取
り除いた。リン酸化されたＤＮＡ断片Ｔ７をｐＵＣＳＲ
αＭＬ１から得た約 4.1kbp 断片とライゲートし、環状
化させた。得られたベクターは、さらにＳｐｅＩとＫｐ
ｎＩで消化し、アガロースゲル電気泳動にかけ、約 4.1
kbp の断片を回収し、５′末端のリン酸基をＢＡＰ（バ
クテリアアルカリホスファターゼ）処理により取り除い
た。リン酸化されたＤＮＡ断片ＳＰ６ｐＵＣＳＲαＭＬ
１から得た約 4.1kbp 断片とライゲートし、環状化させ
た。このようにして構築したベクターをｐＵＣＳＲαＭ
Ｌ２（図３参照）と命名した。

【００４８】実施例７：発現ベクターの構築ヒトＳＤＦ−１α、プライマーＸ、ＹおよびＹＨを合成
した。プライマーＸ、ＹおよびＹＨの配列をそれぞれ以
下に示す（配列番号１０、配列番号１１、および配列番
号１２）。

【００４９】プライマーＸ：５′−AATATAGTCGACCACCATGAACGCCAAGGTCGTGGTCGTGCTGG
−３′

【００５０】プライマーＹ：５′−CGGCGGACTAGTTTACTTGTTTAAAGCTTTCTCCAGG −３′

【００５１】プライマーＹＨ：５′−GCCGCCACTAGTTTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCTTGTTTAAAG
CTTTCTCCAGG −３′

【００５２】ヒトＳＤＦ−１αプラスミドをプライマー
として上記合成のオリゴヌクレオチドＸ、Ｙを用いたＰ
ＣＲにかけた。得られたＰＣＲ断片は、開始コドンの
５′末端に隣接した、当業者にはコザック配列として知
られている配列およびヒトＳＤＦ−１α蛋白を構成する
蛋白分子をコードしているｃＤＮＡを含んでいる。ＰＣ
Ｒ断片はＳａｌＩおよびＳｐｅＩで消化され、得られた
ものを分離精製して実施例６で調製したｐＵＣＳＲαＭ
Ｌ２のＳａｌＩおよびＳｐｅＩサイトに挿入され、発現
ベクターであるｐＵＣＳＲαＭＬ２−ヒトＳＤＦ−１α
Ａを得た。さらにヒトＳＤＦ−１αプラスミドをプライ
マーとして上記合成したオリゴヌクレオチドＸ、ＹＨを
用いたＰＣＲにかけた。得られたＰＣＲ断片は、開始コ
ドンの５′末端に隣接した、当業者にはコザック配列と
して知られている配列、ヒトＳＤＦ−１α蛋白を構成す
る蛋白分子をコードしているｃＤＮＡおよびＣ末端に存
在する６個のヒスチジン残基を含んでいる。ＰＣＲ断片
はＳａｌＩおよびＳｐｅＩで消化され、得られたものを
分離精製して実施例６で調製したｐＵＣＳＲαＭＬ２の
ＳａｌＩおよびＳｐｅＩサイトに挿入され、発現ベクタ
ーであるｐＵＣＳＲαＭＬ２−ヒトＳＤＦ−１αＢを得
た。ヒトＳＤＦ−１βについて、プライマーＺおよびＺ
Ｈを合成した。プライマーＺおよびＹＨの配列を以下に
示す（配列番号１３および配列番号１４）。

【００５３】プライマーＺ：５′−CGGCGGACTAGTTCACATCTTGAACCTCTTGTTTAAAGC−
３′

【００５４】プライマーＺＨ：５′−GCCGCCACTAGTTCAGTGGTGGTGGTGGTGGTGCATCTTGAACC
TCTTGTTTAAAGC −３′

【００５５】ヒトＳＤＦ−１βプラスミドをプライマー
として上記合成したオリゴヌクレオチドＸ、Ｚを用いた
ＰＣＲにかけた。得られたＰＣＲ断片は、開始コドンの
５’末端に隣接した、当業者にはコザック配列として知
られている配列およびヒトＳＤＦ−１β蛋白を構成する
蛋白分子をコードしているｃＤＮＡを含んでいる。ＰＣ
Ｒ断片はＳａｌＩおよびＳｐｅＩで消化され、得られた
ものを分離精製して実施例６で調製したｐＵＣＳＲαＭ
Ｌ２のＳａｌＩおよびＳｐｅＩサイトに挿入され、発現
ベクターであるｐＵＣＳＲαＭＬ２−ヒトＳＤＦ−１β
Ａを得た。

【００５６】さらにヒトＳＤＦ−１βプラスミドをプラ
イマーとして上記合成したオリゴヌクレオチドＸ、ＺＨ
を用いたＰＣＲにかけた。得られたＰＣＲ断片は、開始
コドンの５’末端に隣接した、当業者にはコザック配列
として知られている配列、ヒトＳＤＦ−１β蛋白を構成
する蛋白分子をコードしているｃＤＮＡおよびＣ末端に
存在する６個のヒスチジン残基を含んでいる。ＰＣＲ断
片はＳａｌＩおよびＳｐｅＩで消化され、得られたもの
を分離精製して実施例６で調製したｐＵＣＳＲαＭＬ２
のＳａｌＩおよびＳｐｅＩサイトに挿入され、発現ベク
ターであるｐＵＣＳＲαＭＬ２−ヒトＳＤＦ−１βＢを
得た。ｐＵＣＳＲαＭＬ２−ｈＳＤＦ−１αＡおよびｐ
ＵＣＳＲαＭＬ２−ｈＳＤＦ−１βＢそれぞれ大腸菌Ｄ
Ｈ５を形質転換し、形質転換菌の培養液（１００ｍｌ）
よりプラスミドを分離し、ＣｓＣｌ密度勾配法を２回繰
り返して精製した。

【００５７】実施例８：ＣＯＳ細胞での発現ＣＯＳ−７細胞 [Cell, 23, 175(1981) に記載] にプラ
スミドＤＮＡ、ｐＵＣＳＲαＭＬ２、ｐＵＣＳＲαＭＬ
２−ｈＳＤＦ−１αＡ、ｐＵＣＳＲαＭＬ２−ｈＳＤＦ
−１αＢ、ｐＵＣＳＲαＭＬ２−ｈＳＤＦ−１βＡおよ
びｐＵＣＳＲαＭＬ２−ｈＳＤＦ−１βＢをそれぞれジ
エチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）デキストラン法［J. I
mmunology, 136, 4291 (1986) に記載］により導入し
た。すなわち、約 1.8×１０⁶個のＣＯＳ−７細胞を５
０ｍｌの増殖培養液（１０％非働化牛胎児血清を含むダ
ルベッコ変法ＭＥＭ培養液）とともに、２２５ｃｍ²フ
ラスコ（コーニング社製）に植え込み、炭酸ガスインキ
ュベーター（３７℃、５％ＣＯ₂）中で一晩培養した。
翌日、培養液を除去した後、フラスコ当り１２ｍｌのＤ
ＮＡカクテル（それぞれのプラスミドＤＮＡ１５μｇ、
５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ 7.4）、４００μｇ／
ｍｌＤＥＡＥ−デキストランを含むダルベッコ変法Ｍ
ＥＭ培養液）を加えて、３７℃、５％ＣＯ₂中で３時間
反応させた。次にＤＮＡカクテルを除去し、クロロキン
液（１５０μＭクロロキン、７％非働化牛胎児血清を含
むダルベッコ変法ＭＥＭ培養液）１５ｍｌを加えてさら
に３時間反応させた。

【００５８】クロロキン液を除去した後、増殖培養液
（５０ｍｌ）を加えて、３７℃、５％ＣＯ₂のインキュ
ベーター中で７２時間培養し、細胞がほぼ単層になるま
で増殖させた。次に、培養液を除去し、無血清培養液
（商品名：ＳＦＭ−１０１、日水製薬社製）で一度洗浄
した後、新たに無血清培養液（７５ｍｌ）を加えて、さ
らに７２時間培養した。培養液を回収し、除菌フィルタ
ー（商品名：ＳＴＥＲＩＶＥＸ−ＧＳ、ミリポア社製）
を通じてろ過した。これらの培養液は４℃に保存し、以
後の実験に供した。得られた培養液のうち、ｈＳＤＦ−
１αおよびβのｃＤＮＡインサートを含むプラスミドで
形質導入されたＣＯＳ細胞の培養液には、ｈＳＤＦ−１
αおよびβに相当するポリペプチドの成熟蛋白部分が分
泌されているはずである。

【００５９】実施例９：発現の確認形質導入を行なったＣＯＳ細胞培養上清（実施例８で得
られた。）をそれぞれ２ｍｌずつ取り、これを遠心濃縮
フィルター（商品名：セントリコン−１０、ミリポア社
製）を用いて１００μｌに濃縮した。それぞれ１μｌを
等量のＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ナトリウムドデシルサルフェ
ートポリアクリルアミドゲル電気泳動）用ローディング
バッファー［0.125 Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ 6.8）、
４％ナトリウムドデシルサルフェート、３０％グリセロ
ール］と混合し、９０℃で３分間処理した後、ＳＤＳ−
ＰＡＧＥに供した。さらに、Ｃ末端にＨｉｓヘキサマー
を導入したｈＳＤＦ−１αおよびβ蛋白質については、
ＣＯＳ細胞培養上清だけでなく、精製品についてもＳＤ
Ｓ−ＰＡＧＥによる解析を行なった。

【００６０】精製は、Ｈｉｓが様々な遷移金属イオンと
複合体を形成することを応用して、金属キレートアフィ
ニティークロマトグラフィーの手法 [Biotechnology,
9, 273 (1991)に記載] で精製した。すなわち、ＣＯＳ
細胞より得られた培養上清（３５０ｍｌ）に、最終濃度
１Ｍになるように塩化ナトリウム水溶液を加え、亜鉛を
結合させたキレーティングセファロースカラム [商品
名：キレーティングセファローズファストーフロー(Che
lating Sepharose Fast-Flow)、ファルマシア社製、４
ｍｌ]に吸着させた。１Ｍ塩化ナトリウム水溶液（４０
ｍｌ）を含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ7.0）でカラ
ムを洗浄後、１Ｍ塩化ナトリウム水溶液および0.4 Ｍイ
ミダゾールを含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ7.0）を
用いて溶出した。溶出液を１００μｌに濃縮し、そのう
ち１μｌをＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析した。ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥはＳＤＳ１０／２０グラディエント（gradient）を
用いて行ない、ｈＳＤＦ−１αおよびβの分子量に対応
する生成物がそれぞれ検出された。

【００６１】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：８９配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列 Met Asn Ala Lys Val Val Val Val Leu Val Leu Val Leu Thr Ala Leu 1 5 10 15 Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys 20 25 30 Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys 35 40 45 Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys 50 55 60 Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln 65 70 75 80 Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys 85

【００６２】配列番号：２配列の長さ：２６７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 ATGAACGCCA AGGTCGTGGT CGTGCTGGTC CTCGTGCTGA CCGCGCTCTG CCTCAGCGAC 60 GGGAAGCCCG TCAGCCTGAG CTACAGATGC CCATGCCGAT TCTTCGAAAG CCATGTTGCC 120 AGAGCCAACG TCAAGCATCT CAAAATTCTC AACACTCCAA ACTGTGCCCT TCAGATTGTA 180 GCCCGGCTGA AGAACAACAA CAGACAAGTG TGCATTGACC CGAAGCTAAA GTGGATTCAG 240 GAGTACCTGG AGAAAGCTTT AAACAAG 267

【００６３】配列番号：３配列の長さ：１８５６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 TCTCCGTCAG CCGCATTGCC CGCTCGGCGT CCGGCCCCCG ACCCGTGCTC GTCCGCCCGC 60 CCGCCCGCCCGCCCGCGCCAT GAACGCCAAG GTCGTGGTCG TGCTGGTCCT CGTGCTGACC 121 GCGCTCTGCC TCAGCGACGG GAAGCCCGTC AGCCTGAGCT ACAGATGCCC ATGCCGATTC 181 TTCGAAAGCC ATGTTGCCAG AGCCAACGTC AAGCATCTCA AAATTCTCAA CACTCCAAAC 241 TGTGCCCTTC AGATTGTAGC CCGGCTGAAG AACAACAACA GACAAGTGTG CATTGACCCG 301 AAGCTAAAGT GGATTCAGGA GTACCTGGAG AAAGCTTTAA ACAAGTAAGC ACAACAGCCA 361 AAAAGGACTT TCCGCTAGAC CCACTCGAGG AAAACTAAAA CCTTGTGAGA GATGAAAGGG 421 CAAAGACGTG GGGGAGGGGG CCTTAACCAT GAGGACCAGG TGTGTGTGTG GGGTGGGCAC 481 ATTGATCTGG GATCGGGCCT GAGGTTTGCA GCATTTAGAC CCTGCATTTA TAGCATACGG 541 TATGATATTG CAGCTTATAT TCATCCATGC CCTGTACCTG TGCACGTTGG AACTTTTATT 601 ACTGGGGTTT TTCTAAGAAA GAAATTGTAT TATCAACAGC ATTTTCAAGC AGTTAGTTCC 661 TTCATGATCA TCACAATCAT CATCATTCTC ATTCTCATTT TTTAAATCAA CGAGTACTTC 721 AAGATCTGAA TTTGGCTTGT TTGGAGCATC TCCTCTGCTC CCCTGGGGAG TCTGGGCACA 781 GTCAGGTGGT GGCTTAACAG GGAGCTGGAA AAAGTGTCCT TTCTTCAGAC ACTGAGGCTC 841 CCGCAGCAGC GCCCCTCCCA AGAGGAAGGC CTCTGTGGCA CTCAGATACC GACTGGGGCT 901 GGGGCGCCGC CACTGCCTTC ACCTCCTCTT TCAAACCTCA GTGATTGGCT CTGTGGGCTC 961 CATGTAGAAG CCACTATTAC TGGGACTGTC TCAGAGACCC CTCTCCCAGC TATTCCTACT 1021 CTCTCCCCGA CTCCGAGAGC ATGCTTAATC TTGCTTCTGC TTCTCATTTC TGTAGCCTGA 1081 TCAGCGCCGC ACCAGCCGGG AAGAGGGTGA TTGCTGGGGC TCGTGCCCTG CATCCCTCTC 1141 CTCCCAGGGC CTGCCCCACA GCTCGGGCCC TCTGTGAGAT CCGTCTTTGG CCTCCTCCAG 1201 AATGGAGCTG GCCCTCTCCT GGGGATGTGT AATGGTCCCC CTGCTTACCC GCAAAAGACA 1261 AGTCTTTACA GAATCAAATG CAATTTTAAA TCTGAGAGCT CGCTTGAGTG ACTGGGTTTG 1321 TGATTGCCTC TGAAGCCTAT GTATGCCATG GAGGCACTAA CAAACTCTGA GGTTTCCGAA 1381 ATCAGAAGCG AAAAAATCAG TGAATAAACC ATCATCTTGC CACTACCCCC TCCTGAAGCC 1441 ACAGCAGGGG TTCAGGTTCC AATCAGAACT GTTGGCAAGG TGACATTTCC ATGCATAGAT 1501 GCGATCCACA GAAGGTCCTG GTGGTATTTG TAACTTTTTG CAAGGCATTT TTTTATATAT 1561 ATTTTTGTGC ACATTTTTTT TTACGATTCT TTAGAAAACA AATGTATTTC AAAATATATT 1621 TATAGTCGAA CAAGTCATAT ATATGAATGA GAGCCATATG AATGTCAGTA GTTTATACTT 1681 CTCTATTATC TCAAACTACT GGCAATTTGT AAAGAAATAT ATATGATATA TAAATGTGAT 1741 TGCAGCTTTT CAATGTTAGC CACAGTGTAT TTTTTCACTT GTACTAAAAT TGTATCAAAT 1801 GTGACATTAT ATGCACTAGC AATAAAATGC TAATTGTTTC ATGGTAAAAA AAAAA 1856

【００６４】配列番号：４配列の長さ：１８５６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：Homo Sapiens セルライン名：FLEB14 配列の特徴特徴を表わす記号：CDS 存在位置：80..349 特徴を決定した方法：P 特徴を表わす記号：sig peptide 存在位置：80..142 特徴を決定した方法：S 特徴を表わす記号：mat peptide 存在位置：143..346 特徴を決定した方法：S 配列 TCTCCGTCAG CCGCATTGCC CGCTCGGCGT CCGGCCCCCG ACCCGTGCTC GTCCGCCCGC 60 CCGCCCGCCC GCCCGCGCC ATG AAC GCC AAG GTC GTG GTC GTG CTG GTC CTC 112 Met Asn Ala Lys Val Val Val Val Leu Val Leu -20 -15 GTG CTG ACC GCG CTC TGC CTC AGC GAC GGG AAG CCC GTC AGC CTG AGC 160 Val Leu Thr Ala Leu Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser -10 -5 1 5 TAC AGA TGC CCA TGC CGA TTC TTC GAA AGC CAT GTT GCC AGA GCC AAC 208 Tyr Arg Cys Pro Cys Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn 10 15 20 GTC AAG CAT CTC AAA ATT CTC AAC ACT CCA AAC TGT GCC CTT CAG ATT 256 Val Lys His Leu Lys Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile 25 30 35 GTA GCC CGG CTG AAG AAC AAC AAC AGA CAA GTG TGC ATT GAC CCG AAG 304 Val Ala Arg Leu Lys Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys 40 45 50 CTA AAG TGG ATT CAG GAG TAC CTG GAG AAA GCT TTA AAC AAG TAAGCACAA 355 Leu Lys Trp Ile Gln Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys 55 60 65 CAGCCAAAAA GGACTTTCCG CTAGACCCAC TCGAGGAAAA CTAAAACCTT GTGAGAGATG 415 AAAGGGCAAA GACGTGGGGG AGGGGGCCTT AACCATGAGG ACCAGGTGTG TGTGTGGGGT 475 GGGCACATTG ATCTGGGATC GGGCCTGAGG TTTGCAGCAT TTAGACCCTG CATTTATAGC 535 ATACGGTATG ATATTGCAGC TTATATTCAT CCATGCCCTG TACCTGTGCA CGTTGGAACT 595 TTTATTACTG GGGTTTTTCT AAGAAAGAAA TTGTATTATC AACAGCATTT TCAAGCAGTT 655 AGTTCCTTCA TGATCATCAC AATCATCATC ATTCTCATTC TCATTTTTTA AATCAACGAG 715 TACTTCAAGA TCTGAATTTG GCTTGTTTGG AGCATCTCCT CTGCTCCCCT GGGGAGTCTG 775 GGCACAGTCA GGTGGTGGCT TAACAGGGAG CTGGAAAAAG TGTCCTTTCT TCAGACACTG 835 AGGCTCCCGC AGCAGCGCCC CTCCCAAGAG GAAGGCCTCT GTGGCACTCA GATACCGACT 895 GGGGCTGGGG CGCCGCCACT GCCTTCACCT CCTCTTTCAA ACCTCAGTGA TTGGCTCTGT 955 GGGCTCCATG TAGAAGCCAC TATTACTGGG ACTGTCTCAG AGACCCCTCT CCCAGCTATT 1015 CCTACTCTCT CCCCGACTCC GAGAGCATGC TTAATCTTGC TTCTGCTTCT CATTTCTGTA 1075 GCCTGATCAG CGCCGCACCA GCCGGGAAGA GGGTGATTGC TGGGGCTCGT GCCCTGCATC 1135 CCTCTCCTCC CAGGGCCTGC CCCACAGCTC GGGCCCTCTG TGAGATCCGT CTTTGGCCTC 1195 CTCCAGAATG GAGCTGGCCC TCTCCTGGGG ATGTGTAATG GTCCCCCTGC TTACCCGCAA 1255 AAGACAAGTC TTTACAGAAT CAAATGCAAT TTTAAATCTG AGAGCTCGCT TGAGTGACTG 1315 GGTTTGTGAT TGCCTCTGAA GCCTATGTAT GCCATGGAGG CACTAACAAA CTCTGAGGTT 1375 TCCGAAATCA GAAGCGAAAA AATCAGTGAA TAAACCATCA TCTTGCCACT ACCCCCTCCT 1435 GAAGCCACAG CAGGGGTTCA GGTTCCAATC AGAACTGTTG GCAAGGTGAC ATTTCCATGC 1495 ATAGATGCGA TCCACAGAAG GTCCTGGTGG TATTTGTAAC TTTTTGCAAG GCATTTTTTT 1555 ATATATATTT TTGTGCACAT TTTTTTTTAC GATTCTTTAG AAAACAAATG TATTTCAAAA 1615 TATATTTATA GTCGAACAAG TCATATATAT GAATGAGAGC CATATGAATG TCAGTAGTTT 1675 ATACTTCTCT ATTATCTCAA ACTACTGGCA ATTTGTAAAG AAATATATAT GATATATAAA 1735 TGTGATTGCA GCTTTTCAAT GTTAGCCACA GTGTATTTTT TCACTTGTAC TAAAATTGTA 1795 TCAAATGTGA CATTATATGC ACTAGCAATA AAATGCTAAT TGTTTCATGG TAAAAAAAAA 1855 A 1856

【００６５】配列番号：５配列の長さ：９３配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列 Met Asn Ala Lys Val Val Val Val Leu Val Leu Val Leu Thr Ala Leu 1 5 10 15 Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser Tyr Arg Cys Pro Cys 20 25 30 Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn Val Lys His Leu Lys 35 40 45 Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile Val Ala Arg Leu Lys 50 55 60 Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys Leu Lys Trp Ile Gln 65 70 75 80 Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys Arg Phe Lys Met 85 90

【００６６】配列番号：６配列の長さ：２７９配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 ATGAACGCCA AGGTCGTGGT CGTGCTGGTC CTCGTGCTGA CCGCGCTCTG CCTCAGCGAC 60 GGGAAGCCCG TCAGCCTGAG CTACAGATGC CCATGCCGAT TCTTCGAAAG CCATGTTGCC 120 AGAGCCAACG TCAAGCATCT CAAAATTCTC AACACTCCAA ACTGTGCCCT TCAGATTGTA 180 GCCCGGCTGA AGAACAACAA CAGACAAGTG TGCATTGACC CGAAGCTAAA GTGGATTCAG 240 GAGTACCTGG AGAAAGCTTT AAACAAGAGG TTCAAGATG 279

【００６７】配列番号：７配列の長さ：３５２６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 TCTCCGTCAG CCGCATTGCC CGCTCGGCGT CCGGCCCCCG ACCCGTGCTC GTCCGCCCGC 60 CCGCCCGCCCGCCCGCGCCAT GAACGCCAAG GTCGTGGTCG TGCTGGTCCT CGTGCTGACC 121 GCGCTCTGCC TCAGCGACGG GAAGCCCGTC AGCCTGAGCT ACAGATGCCC ATGCCGATTC 181 TTCGAAAGCC ATGTTGCCAG AGCCAACGTC AAGCATCTCA AAATTCTCAA CACTCCAAAC 241 TGTGCCCTTC AGATTGTAGC CCGGCTGAAG AACAACAACA GACAAGTGTG CATTGACCCG 301 AAGCTAAAGT GGATTCAGGA GTACCTGGAG AAAGCTTTAA ACAAGAGGTT CAAGATGTGA 361 GAGGGTCAGA CGCCTGAGGA ACCCTTACAG TAGGAGCCCA GCTCTGAAAC CAGTGTTAGG 421 GAAGGGCCTG CCACAGCCTC CCCTGCCAGG GCAGGGCCCC AGGCATTGCC AAGGGCTTTG 481 TTTTGCACAC TTTGCCATAT TTTCACCATT TGATTATGTA GCAAAATACA TGACATTTAT 541 TTTTCATTTA GTTTGATTAT TCAGTGTCAC TGGCGACACG TAGCAGCTTA GACTAAGGCC 601 ATTATTGTAC TTGCCTTATT AGAGTGTCTT TCCACGGAGC CACTCCTCTG ACTCAGGGCT 661 CCTGGGTTTT GTATTCTCTG AGCTGTGCAG GTGGGGAGAC TGGGCTGAGG GAGCCTGGCC 721 CCATGGTCAG CCCTAGGGTG GAGAGCCACC AAGAGGGACG CCTGGGGGTG CCAGGACCAG 781 TCAACCTGGG CAAAGCCTAG TGAAGGCTTC TCTCTGTGGG ATGGGATGGT GGAGGGCCAC 841 ATGGGAGGCT CACCCCCTTC TCCATCCACA TGGGAGCCGG GTCTGCCTCT TCTGGGAGGG 901 CAGCAGGGCT ACCCTGAGCT GAGGCAGCAG TGTGAGGCCA GGGCAGAGTG AGACCCAGCC 961 CTCATCCCGA GCACCTCCAC ATCCTCCACG TTCTGCTCAT CATTCTCTGT CTCATCCATC 1021 ATCATGTGTG TCCACGACTG TCTCCATGGC CCCGCAAAAG GACTCTCAGG ACCAAAGCTT 1081 TCATGTAAAC TGTGCACCAA GCAGGAAATG AAAATGTCTT GTGTTACCTG AAAACACTGT 1141 GCACATCTGT GTCTTGTGTG GAATATTGTC CATTGTCCAA TCCTATGTTT TTGTTCAAAG 1201 CCAGCGTCCT CCTCTGTGAC CAATGTCTTG ATGCATGCAC TGTTCCCCCT GTGCAGCCGC 1261 TGAGCGAGGA GATGCTCCTT GGGCCCTTTG AGTGCAGTCC TGATCAGAGC CGTGGTCCTT 1321 TGGGGTGAAC TACCTTGGTT CCCCCACTGA TCACAAAAAC ATGGTGGGTC CATGGGCAGA 1381 GCCCAAGGGA ATTCGGTGTG CACCAGGGTT GACCCCAGAG GATTGCTGCC CCATCAGTGC 1441 TCCCTCACAT GTCAGTACCT TCAAACTAGG GCCAAGCCCA GCACTGCTTG AGGAAAACAA 1501 GCATTCACAA CTTGTTTTTG GTTTTTAAAA CCCAGTCCAC AAAATAACCA ATCCTGGACA 1561 TGAAGATTCT TTCCCAATTC ACATCTAACC TCATCTTCTT CACCATTTGG CAATGCCATC 1621 ATCTCCTGCC TTCCTCCTGG GCCCTCTCTG CTCTGCGTGT CACCTGTGCT TCGGGCCCTT 1681 CCCACAGGAC ATTTCTCTAA GAGAACAATG TGCTATGTGA AGAGTAAGTC AACCTGCCTG 1741 ACATTTGGAG TGTTCCCCTC CCACTGAGGG CAGTCGATAG AGCTGTATTA AGCCACTTAA 1801 AATGTTCACT TTTGACAAAG GCAAGCACTT GTGGGTTTTT GTTTTGTTTT TCATTCAGTC 1861 TTACGAATAC TTTTGCCCTT TGATTAAAGA CTCCAGTTAA AAAAAATTTT AATGAAGAAA 1921 GTGGAAAACA AGGAAGTCAA AGCAAGGAAA CTATGTAACA TGTAGGAAGT AGGAAGTAAA 1981 TTATAGTGAT GTAATCTTGA ATTGTAACTG TTCGTGAATT TAATAATCTG TAGGGTAATT 2041 AGTAACATGT GTTAAGTATT TTCATAAGTA TTTCAAATTG GAGCTTCATG GCAGAAGGCA 2101 AACCCATCAA CAAAAATTGT CCCTTAAACA AAAATTAAAA TCCTCAATCC AGCTATGTTA 2161 TATTGAAAAA ATAGAGCCTG AGGGATCTTT ACTAGTTATA AAGATACAGA ACTCTTTCAA 2221 AACCTTTTGA AATTAACCTC TCACTATACC AGTATAATTG AGTTTTCAGT GGGGCAGTCA 2281 TTATCCAGGT AATCCAAGAT ATTTTAAAAT CTGTCACGTA GAACTTGGAT GTACCTGCCC 2341 CCAATCCATG AACCAAGACC ATTGAATTCT TGGTTGAGGA AACAAACATG ACCCTAAATC 2401 TTGACTACAG TCAGGAAAGG AATCATTTCT ATTTCTCCTC CATGGGAGAA AATAGATAAG 2461 AGTAGAAACT GCAGGGAAAA TTATTTGCAT AACAATTCCT CTACTAACAA TCAGCTCCTT 2521 CCTGGAGACT GCCCAGCTAA AGCAATATGC ATTTAAATAC AGTCTTCCAT TTGCAAGGGA 2581 AAAGTCTCTT GTAATCCGAA TCTCTTTTTG CTTTCGAACT GCTAGTCAAG TGCGTCCACG 2641 AGCTGTTTAC TAGGGATCCC TCATCTGTCC CTCCGGGACC TGGTGCTGCC TCTACCTGAC 2701 ACTCCCTTGG GCTCCCTGTA ACCTCTTCAG AGGCCCTCGC TGCCAGCTCT GTATCAGGAC 2761 CCAGAGGAAG GGGCCAGAGG CTCGTTGACT GGCTGTGTGT TGGGATTGAG TCTGTGCCAC 2821 GTGTATGTGC TGTGGTGTGT CCCCCTCTGT CCAGGCACTG AGATACCAGC GAGGAGGCTC 2881 CAGAGGGCAC TCTGCTTGTT ATTAGAGATT ACCTCCTGAG AAAAAAGCTT CCGCTTGGAG 2941 CAGAGGGGCT GAATAGCAGA AGGTTGCACC TCCCCCAACC TTAGATGTTC TAAGTCTTTC 3001 CATTGGATCT CATTGGACCC TTCCATGGTG TGATCGTCTG ACTGGTGTTA TCACCGTGGG 3061 CTCCCTGACT GGGAGTTGAT CGCCTTTCCC AGGTGCTACA CCCTTTTCCA GCTGGATGAG 3121 AATTTGAGTG CTCTGATCCC TCTACAGAGC TTCCCTGACT CATTCTGAAG GAGCCCCATT 3181 CCTGGGAAAT ATTCCCTAGA AACTTCCAAA TCCCCTAAGC AGACCACTGA TAAAACCATG 3241 TAGAAAATTT GTTATTTTGC AACCTCGCTG GACTCTCAGT CTCTGAGCAG TGAATGATTC 3301 AGTGTTAAAT GTGATGAATA CTGTATTTTG TATTGTTTCA AGTGCATCTC CCAGATAATG 3361 TGAAAATGGT CCAGGAGAAG GCCAATTCCT ATACGCAGCG TGCTTTAAAA AATAAATAAG 3421 AAACAACTCT TTGAGAAACA ACAATTTCTA CTTTGAAGTC ATACCAATGA AAAAATGTAT 3481 ATGCACTTAT AATTTTCCTA ATAAAGTTCT GTACTCAAAT GTAAA 3526

【００６８】配列番号：８配列の長さ：３５２６配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 起源生物名：Homo Sapiens 株名：FLEB14 配列の特徴特徴を表わす記号：CDS 存在位置：80..361 特徴を決定した方法：P 特徴を表わす記号：sig peptide 存在位置：80..142 特徴を決定した方法：S 特徴を表わす記号：mat peptide 存在位置：143..358 特徴を決定した方法：S 配列 TCTCCGTCAG CCGCATTGCC CGCTCGGCGT CCGGCCCCCG ACCCGTGCTC GTCCGCCCGC 60 CCGCCCGCCC GCCCGCGCC ATG AAC GCC AAG GTC GTG GTC GTG CTG GTC CTC 112 Met Asn Ala Lys Val Val Val Val Leu Val Leu -20 -15 GTG CTG ACC GCG CTC TGC CTC AGC GAC GGG AAG CCC GTC AGC CTG AGC 160 Val Leu thr Ala Leu Cys Leu Ser Asp Gly Lys Pro Val Ser Leu Ser -10 -5 1 5 TAC AGA TGC CCA TGC CGA TTC TTC GAA AGC CAT GTT GCC AGA GCC AAC 208 Tyr Arg Cys Pro Cys Arg Phe Phe Glu Ser His Val Ala Arg Ala Asn 10 15 20 GTC AAG CAT CTC AAA ATT CTC AAC ACT CCA AAC TGT GCC CTT CAG ATT 256 Val Lys His Leu Lys Ile Leu Asn Thr Pro Asn Cys Ala Leu Gln Ile 25 30 35 GTA GCC CGG CTG AAG AAC AAC AAC AGA CAA GTG TGC ATT GAC CCG AAG 304 Val Ala Arg Leu Lys Asn Asn Asn Arg Gln Val Cys Ile Asp Pro Lys 40 45 50 CTA AAG TGG ATT CAG GAG TAC CTG GAG AAA GCT TTA AAC AAG AGG TTC 352 Leu Lys Trp Ile Gln Glu Tyr Leu Glu Lys Ala Leu Asn Lys Arg Phe 55 60 65 70 AAG ATG TG AGAGGGTCAG ACGCCTGAGG AACCCTTACA GTAGGAGCCC AGCTCTGAAA 410 Lys Met CCAGTGTTAG GGAAGGGCCT GCCACAGCCT CCCCTGCCAG GGCAGGGCCC CAGGCATTGC 470 CAAGGGCTTT GTTTTGCACA CTTTGCCATA TTTTCACCAT TTGATTATGT AGCAAAATAC 530 ATGACATTTA TTTTTCATTT AGTTTGATTA TTCAGTGTCA CTGGCGACAC GTAGCAGCTT 590 AGACTAAGGC CATTATTGTA CTTGCCTTAT TAGAGTGTCT TTCCACGGAG CCACTCCTCT 650 GACTCAGGGC TCCTGGGTTT TGTATTCTCT GAGCTGTGCA GGTGGGGAGA CTGGGCTGAG 710 GGAGCCTGGC CCCATGGTCA GCCCTAGGGT GGAGAGCCAC CAAGAGGGAC GCCTGGGGGT 770 GCCAGGACCA GTCAACCTGG GCAAAGCCTA GTGAAGGCTT CTCTCTGTGG GATGGGATGG 830 TGGAGGGCCA CATGGGAGGC TCACCCCCTT CTCCATCCAC ATGGGAGCCG GGTCTGCCTC 890 TTCTGGGAGG GCAGCAGGGC TACCCTGAGC TGAGGCAGCA GTGTGAGGCC AGGGCAGAGT 950 GAGACCCAGC CCTCATCCCG AGCACCTCCA CATCCTCCAC GTTCTGCTCA TCATTCTCTG 1010 TCTCATCCAT CATCATGTGT GTCCACGACT GTCTCCATGG CCCCGCAAAA GGACTCTCAG 1070 GACCAAAGCT TTCATGTAAA CTGTGCACCA AGCAGGAAAT GAAAATGTCT TGTGTTACCT 1130 GAAAACACTG TGCACATCTG TGTCTTGTGT GGAATATTGT CCATTGTCCA ATCCTATGTT 1190 TTTGTTCAAA GCCAGCGTCC TCCTCTGTGA CCAATGTCTT GATGCATGCA CTGTTCCCCC 1250 TGTGCAGCCG CTGAGCGAGG AGATGCTCCT TGGGCCCTTT GAGTGCAGTC CTGATCAGAG 1310 CCGTGGTCCT TTGGGGTGAA CTACCTTGGT TCCCCCACTG ATCACAAAAA CATGGTGGGT 1370 CCATGGGCAG AGCCCAAGGG AATTCGGTGT GCACCAGGGT TGACCCCAGA GGATTGCTGC 1430 CCCATCAGTG CTCCCTCACA TGTCAGTACC TTCAAACTAG GGCCAAGCCC AGCACTGCTT 1490 GAGGAAAACA AGCATTCACA ACTTGTTTTT GGTTTTTAAA ACCCAGTCCA CAAAATAACC 1550 AATCCTGGAC ATGAAGATTC TTTCCCAATT CACATCTAAC CTCATCTTCT TCACCATTTG 1610 GCAATGCCAT CATCTCCTGC CTTCCTCCTG GGCCCTCTCT GCTCTGCGTG TCACCTGTGC 1670 TTCGGGCCCT TCCCACAGGA CATTTCTCTA AGAGAACAAT GTGCTATGTG AAGAGTAAGT 1730 CAACCTGCCT GACATTTGGA GTGTTCCCCT CCCACTGAGG GCAGTCGATA GAGCTGTATT 1790 AAGCCACTTA AAATGTTCAC TTTTGACAAA GGCAAGCACT TGTGGGTTTT TGTTTTGTTT 1850 TTCATTCAGT CTTACGAATA CTTTTGCCCT TTGATTAAAG ACTCCAGTTA AAAAAAATTT 1910 TAATGAAGAA AGTGGAAAAC AAGGAAGTCA AAGCAAGGAA ACTATGTAAC ATGTAGGAAG 1970 TAGGAAGTAA ATTATAGTGA TGTAATCTTG AATTGTAACT GTTCGTGAAT TTAATAATCT 2030 GTAGGGTAAT TAGTAACATG TGTTAAGTAT TTTCATAAGT ATTTCAAATT GGAGCTTCAT 2090 GGCAGAAGGC AAACCCATCA ACAAAAATTG TCCCTTAAAC AAAAATTAAA ATCCTCAATC 2150 CAGCTATGTT ATATTGAAAA AATAGAGCCT GAGGGATCTT TACTAGTTAT AAAGATACAG 2210 AACTCTTTCA AAACCTTTTG AAATTAACCT CTCACTATAC CAGTATAATT GAGTTTTCAG 2270 TGGGGCAGTC ATTATCCAGG TAATCCAAGA TATTTTAAAA TCTGTCACGT AGAACTTGGA 2330 TGTACCTGCC CCCAATCCAT GAACCAAGAC CATTGAATTC TTGGTTGAGG AAACAAACAT 2390 GACCCTAAAT CTTGACTACA GTCAGGAAAG GAATCATTTC TATTTCTCCT CCATGGGAGA 2450 AAATAGATAA GAGTAGAAAC TGCAGGGAAA ATTATTTGCA TAACAATTCC TCTACTAACA 2510 ATCAGCTCCT TCCTGGAGAC TGCCCAGCTA AAGCAATATG CATTTAAATA CAGTCTTCCA 2570 TTTGCAAGGG AAAAGTCTCT TGTAATCCGA ATCTCTTTTT GCTTTCGAAC TGCTAGTCAA 2630 GTGCGTCCAC GAGCTGTTTA CTAGGGATCC CTCATCTGTC CCTCCGGGAC CTGGTGCTGC 2690 CTCTACCTGA CACTCCCTTG GGCTCCCTGT AACCTCTTCA GAGGCCCTCG CTGCCAGCTC 2750 TGTATCAGGA CCCAGAGGAA GGGGCCAGAG GCTCGTTGAC TGGCTGTGTG TTGGGATTGA 2810 GTCTGTGCCA CGTGTATGTG CTGTGGTGTG TCCCCCTCTG TCCAGGCACT GAGATACCAG 2870 CGAGGAGGCT CCAGAGGGCA CTCTGCTTGT TATTAGAGAT TACCTCCTGA GAAAAAAGCT 2930 TCCGCTTGGA GCAGAGGGGC TGAATAGCAG AAGGTTGCAC CTCCCCCAAC CTTAGATGTT 2990 CTAAGTCTTT CCATTGGATC TCATTGGACC CTTCCATGGT GTGATCGTCT GACTGGTGTT 3050 ATCACCGTGG GCTCCCTGAC TGGGAGTTGA TCGCCTTTCC CAGGTGCTAC ACCCTTTTCC 3110 AGCTGGATGA GAATTTGAGT GCTCTGATCC CTCTACAGAG CTTCCCTGAC TCATTCTGAA 3170 GGAGCCCCAT TCCTGGGAAA TATTCCCTAG AAACTTCCAA ATCCCCTAAG CAGACCACTG 3230 ATAAAACCAT GTAGAAAATT TGTTATTTTG CAACCTCGCT GGACTCTCAG TCTCTGAGCA 3290 GTGAATGATT CAGTGTTAAA TGTGATGAAT ACTGTATTTT GTATTGTTTC AAGTGCATCT 3350 CCCAGATAAT GTGAAAATGG TCCAGGAGAA GGCCAATTCC TATACGCAGC GTGCTTTAAA 3410 AAATAAATAA GAAACAACTC TTTGAGAAAC AACAATTTCT ACTTTGAAGT CATACCAATG 3470 AAAAAATGTA TATGCACTTA TAATTTTCCT AATAAAGTTC TGTACTCAAA TGTAAA 3526

【００６９】配列番号：９配列の長さ：１７９７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：cDNA to mRNA 配列 GACCACTTTC CCTCTCGGTC CACCTCGGTG TCCTCTTGCT GTCCAGCTCT GCAGCCTCCG 60 GCGCGCCCTC CCGCCCACGC CATGGACGCC AAGGTCGTCG CCGTGCTGGC CCTGGTGCTG 120 GCCGCGCTCT GCATCAGTGA CGGTAAACCA GTCAGCCTGA GCTACCGATG CCCCTGCCGG 180 TTCTTCGAGA GCCACATCGC CAGAGCCAAC GTCAAGCATC TGAAAATCCT CAACACTCCA 240 AACTGTGCCC TTCAGATTGT TGCACGGCTG AAGAACAACA ACAGACAAGT GTGCATTGAC 300 CCGAAATTAA AGTGGATCCA AGAGTACCTG GAGAAAGCTT TAAACAAGTA AGCACAACAG 360 CCCAAAGGAC TTTCCAGTAG ACCCCCGAGG AAGGCTGACA TCCGTGGGAG ATGCAAGGGC 420 AGTGGTGGGG AGGAGGGCCT GAACCCTGGC CAGGATGGCC GGCGGGACAG CACTGACTGG 480 GGTCATGCTA AGGTTTGCCA GCATAAAGAC ACTCCGCCAT AGCATATGGT ACGATATTGC 540 AGCTTATATT CATCCCTGCC CTCGCCCGTG CACAATGGAG CTTTTATAAC TGGGGTTTTT 600 CTAAGGAATT GTATTACCCT AACCAGTTAG CTTCATCCCC ATTCTCCTCA TCCTCATCTT 660 CATTTTAAAA AGCAGTGATT ACTTCAAGGG CTGTATTCAG TTTGCTTTGG AGCTTCTCTT 720 TGCCCTGGGG CCTCTGGGCA CAGTTATAGA CGGTGGCTTT GCAGGGAGCC CTAGAGAGAA 780 ACCTTCCACC AGAGCAGAGT CCGAGGAACG CTGCAGGGCT TGTCCTGCAG GGGGCGCTCC 840 TCGACAGATG CCTTGTCCTG AGTCAACACA AGATCCGGCA GAGGGAGGCT CCTTTATCCA 900 GTTCAGTGCC AGGGTCGGGA AGCTTCCTTT AGAAGTGATC CCTGAAGCTG TGCTCAGAGA 960 CCCTTTCCTA GCCGTTCCTG CTCTCTGCTT GCCTCCAAAC GCATGCTTCA TCTGACTTCC 1020 GCTTCTCACC TCTGTAGCCT GACGGACCAA TGCTGCAATG GAAGGGAGGA GAGTGATGTG 1080 GGGTGCCCCC TCCCTCTCTT CCCTTTGCTT TCCTCTCACT TGGGCCCTTT GTGAGATTTT 1140 TCTTTGGCCT CCTGTAGAAT GGAGCCAGAC CATCCTGGAT AATGTGAGAA CATGCCTAGA 1200 TTTACCCACA AAACACAAGT CTGAGAATTA ATCATAAACG GAAGTTTAAA TGAGGATTTG 1260 GACCTTGGTA ATTGTCCCTG AGTCCTATAT ATTTCAACAG TGGCTCTATG GGCTCTGATC 1320 GAATATCAGT GATGAAAATA ATAATAATAA TAATAATAAC GAATAAGCCA GAATCTTGCC 1380 ATGAAGCCAC AGTGGGGATT CTGGGTTCCA ATCAGAAATG GAGACAAGAT AAAACTTGCA 1440 TACATTCTTA TGATCACAGA CGGCCCTGGT GGTTTTTGGT AACTATTTAC AAGGCATTTT 1500 TTTACATATA TTTTTGTGCA CTTTTTATGT TTCTTTGGAA GACAAATGTA TTTCAGAATA 1560 TATTTGTAGT CAATTCATAT ATTTGAAGTG GAGCCATAGT AATGCCAGTA GATATCTCTA 1620 TGATCTTGAG CTACTGGCAA CTTGTAAAGA AATATATATG ACATATAAAT GTATTGTAGC 1680 TTTCCGGTGT CAGCCACGGT GTATTTTTCC ACTTGGAATG AAATTGTATC AACTGTGACA 1740 TTATATGCAC TAGCAATAAA ATGCTAATTG TTTCATGCTG TAAAAAAAAA AAAAAAA 1797

【００７０】配列番号：１０配列の長さ：４４配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列 AATATAGTCG ACCACCATGA ACGCCAAGGT CGTGGTCGTG CTGG

【００７１】配列番号：１１配列の長さ：３７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列 CGGCGGACTA GTTTACTTGT TTAAAGCTTT CTCCAGG

【００７２】配列番号：１２配列の長さ：５５配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列 GCCGCCACTA GTTTAGTGGT GGTGGTGGTG GTGCTTGTTT AAAGCTTTCT CCAGG

【００７３】配列番号：１３配列の長さ：３９配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列 CGGCGGACTA GTTCACATCT TGAACCTCTT GTTTAAAGC

【００７４】配列番号：１４配列の長さ：５７配列の型：核酸鎖の数：一本鎖トポロジー：直鎖状配列 GCCGCCACTA GTTCAGTGGT GGTGGTGGTG GTGCATCTTG AACCTCTTGT TTAAAGC

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒトのＳＤＦ−１α ｃＤＮＡの制限酵素地
図を示す。

【図２】ヒトのＳＤＦ−１β ｃＤＮＡの制限酵素地
図を示す。

【図３】プラスミドベクターｐＵＣＳＲαＭＬ２の構
築図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者多田秀明大阪府三島郡島本町桜井３−１−１小野薬品工業株式会社水無瀬研究所内 (56)参考文献ＳＣＩＥＮＣＥ，Ｖｏｌ．261，Ｎｏ. 5121（30 Ｊｕｌｙ．1993），ｐ．600 −603 Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．309，Ｎｏ. 5966（1984），ｐ．369〜372 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 C12N 1/00 - 5/28 C12P 21/00 - 21/08 C07K 14/00 - 16/46 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＧｅｎＢａｎｋ／ＤＤＢＪ／ＥＭＢＬ／ＧｅｎｅＳｅｑＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳｅｑ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】実質的に純粋な形である配列番号１で示
されるアミノ酸配列からなるポリペプチド。
【請求項２】配列番号１で示されるアミノ酸配列から
なる請求項１記載のポリペプチド。
【請求項３】請求項１に記載されたポリペプチドをコ
ードするＤＮＡ。
【請求項４】配列番号２で示される塩基配列を有する
請求項３記載のＤＮＡ。
【請求項５】配列番号３で示される塩基配列を有する
請求項３記載のＤＮＡ。
【請求項６】請求項３から５のいずれかの項に記載の
ＤＮＡからなる複製または発現ベクター。
【請求項７】請求項６記載の複製または発現ベクター
で形質転換された宿主細胞。
【請求項８】請求項１または２に記載されたポリペプ
チドを発現させるための条件下で請求項７記載の宿主細
胞を培養することからなる該ポリペプチドの製造方法。
【請求項９】配列番号４で示されるアミノ酸配列の配
列番号１〜６８で示されるポリペプチド。