JP3333526B2 - Magnetic generator and immunoassay - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、磁性粒子担体を用いた
免疫学的測定法において、磁性粒子担体に磁力を作用さ
せる磁気発生装置及びこれを用いた免疫学的測定法に関
する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an immunoassay using a magnetic particle carrier, and more particularly to a magnetic generator for applying a magnetic force to a magnetic particle carrier and an immunoassay using the same.

【０００２】[0002]

【従来の技術】免疫学的反応を利用した粒子凝集反応に
おいて、マイクロタイター法等の間接凝集反応法は、安
価で、簡便なことから免疫学的検査法の分野において、
広く用いられている測定法である。この方法は赤血球、
高分子粒子、もしくはゼラチン粒子などの表面に、物理
的あるいは化学的に結合した抗原又は抗体と、検体試料
中の抗体又は抗原との免疫学的反応により起こる粒子間
凝集反応を、マイクロプレートなどの測定容器底面での
粒子の凝集状態に基づいて測定するものである。これ
は、粒子が凝集していると測定容器内壁面上での転がり
易さ（又は、滑り易さ）が減少することを利用してい
る。あるいは、さらに積極的に、特開昭６４−６９９５
４号公報に開示されるているように、予め測定容器内壁
面上に抗原や抗体等を結合しておき、粒子と測定容器内
壁面の反応を利用しているものもある。これらの方法
は、微量の試料で測定できるばかりでなく、同時に多く
の検体を処理し得る点で優れた方法と言える。2. Description of the Related Art In a particle agglutination reaction using an immunological reaction, an indirect agglutination reaction method such as a microtiter method is inexpensive and simple, and therefore, in the field of immunological test methods,
This is a widely used measurement method. This method uses red blood cells,
An antigen or antibody physically or chemically bonded to the surface of a polymer particle or a gelatin particle, and an interparticle agglutination reaction caused by an immunological reaction of the antibody or antigen in the specimen sample with a microplate or the like. The measurement is performed based on the aggregation state of the particles on the bottom surface of the measurement container. This utilizes the fact that if the particles are agglomerated, the ease of rolling (or the ease of sliding) on the inner wall surface of the measurement container is reduced. Alternatively, more positively, Japanese Patent Application Laid-Open No. 64-6995
As disclosed in Japanese Patent Publication No. 4 (1999) -A, there is a method in which an antigen, an antibody, or the like is previously bound to the inner wall surface of the measurement container and the reaction between the particles and the inner wall surface of the measurement container is utilized. These methods can be said to be excellent methods in that not only a small amount of sample can be measured but also many samples can be processed at the same time.

【０００３】しかしながら、前述の間接凝集反応法は、
抗原抗体反応によるシグナルを測定容器底部における粒
子の凝集像の差に基ずいて測定するため、測定時間が粒
子の沈降速度及び測定容器内底部での転がり速度に大き
く依存する。通常この凝集像を形成させるのに必要な時
間は、１時間前後もしくはそれ以上である。そこで、粒
子を磁性化させた磁性粒子担体を用い、単に重力で沈降
させていた操作を、磁石を作用させることにより促進す
る方法が考えられた（特開平２−１０７９６８号公報，
特開平２−１２４４６４号公報，特開平２−２１０２６
２号公報）。[0003] However, the indirect agglutination reaction method described above
Since the signal due to the antigen-antibody reaction is measured based on the difference in the aggregation image of the particles at the bottom of the measurement container, the measurement time largely depends on the sedimentation speed of the particles and the rolling speed at the bottom inside the measurement container. Usually, the time required to form this aggregated image is about one hour or more. In view of this, a method has been conceived of using a magnetic particle carrier in which particles are magnetized and promoting the operation of simply sedimentation by gravity by applying a magnet (Japanese Patent Laid-Open No. 2-107968,
JP-A-2-124664, JP-A-2-21026
No. 2).

【０００４】しかし、これらによって開示された磁気発
生装置及びこれを用いた免疫学的測定法は、後述するよ
うな問題があり実用上充分なものとは言えない。磁性粒
子担体を用いた免疫学的測定法における磁気発生装置及
びこれを用いた免疫学的測定法としては、特開平２−１
０７９６８号公報及び特開平２−１２４４６４号公報に
開示されている方法があるが、ここに開示されている内
容によれば、Ｕ型またはＶ型の底面を持つ測定容器の下
方に磁石を配し、その磁力により磁性粒子担体を集める
装置及び測定法である。しかし、開示された内容に従っ
て、まず測定容器１つと針状または柱状磁石を１つ用い
て実際に測定を行なってみると、陰性像（測定容器底面
中央に収束した像）は得られるが、自然沈降に比べて測
定感度が優れたものとは言えない。これは、磁力線が放
射状あるいは楕円状であるために、磁石からの距離に従
って、磁束密度が急激に変化すると考えられる。[0004] However, the magnetic generators disclosed by these and the immunological assay using the same have problems as described below and cannot be said to be practically sufficient. A magnetic generator in an immunoassay using a magnetic particle carrier and an immunoassay using the same are disclosed in
There is a method disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open No. 07968/1990 and Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-124664. According to the contents disclosed therein, a magnet is disposed below a measurement container having a U-shaped or V-shaped bottom surface. And a measuring method for collecting magnetic particle carriers by the magnetic force. However, according to the disclosed contents, when a measurement is first actually performed using one measurement container and one needle-like or columnar magnet, a negative image (an image converged at the center of the bottom surface of the measurement container) is obtained. It cannot be said that the measurement sensitivity is superior to that of sedimentation. This is thought to be because the magnetic flux density changes abruptly according to the distance from the magnet because the lines of magnetic force are radial or elliptical.

【０００５】磁力線のベクトル方向を比較的一定にさせ
るには、特開平２−２１０２６２号公報に開示さている
ように、ピップエレキバン（ピップフジモト社製）のご
ときＳまたはＮの少なくとも一方の磁極が部分球面状で
あるような磁石を用いマイクロプレートのウェルのさら
に１列外側まで磁石を等間隔に、しかもこの部分球面状
でＳまたはＮのどちらか一方の磁極が上方にくるように
並べ、各ウェルが磁極の真上にくるように配することに
より多少の改善がみられたが、充分ではなかった。 測
定感度をある程度犠牲にして、１つのウェルに対して基
本的には１つの磁石を、作用させる形での磁気発生装置
を製作したとしても、マイクロプレートの各ウェルと各
磁石間の上下方向あるいは水平方向へのずれがウェル底
面に集められた分布パターンに影響を及ぼし、ウェル間
差を起こし易い。即ち磁気発生装置あるいはマイクロプ
レートのちょっとした歪みや、磁気発生装置へのマイク
ロプレートの置き方の良悪が、各ウェルと各磁石間の位
置関係を変化させ、ウェル間差や再現性の問題を起こし
易い。In order to make the vector direction of the lines of magnetic force relatively constant, as disclosed in Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 2-210262, at least one of the magnetic poles S or N such as a pip electric van (manufactured by pip fujimoto) is used. Using a magnet having a spherical shape, magnets are arranged at equal intervals to a further row outside of the wells of the microplate, and one of the S and N magnetic poles is arranged upward in this partial spherical shape. Although some improvement was seen by arranging it just above the magnetic pole, it was not sufficient. Even if a magnetic generator is manufactured in which one magnet is basically applied to one well at the expense of measurement sensitivity to some extent, the vertical direction between each well of the microplate and each magnet, or The shift in the horizontal direction affects the distribution pattern collected on the bottom of the well, and the difference between the wells is easily caused. In other words, slight distortion of the magnetic generator or microplate, and the quality of the placement of the microplate on the magnetic generator change the positional relationship between each well and each magnet, causing differences between wells and problems of reproducibility. easy.

【０００６】また、例えば一言で試験管あるいはマイク
ロプレートといっても、大きさや、形、厚みなど製造メ
ーカーや製品によって様々である。そしてこれら測定容
器の形状あるいは大きさの変化などに対しても、磁力の
働く方向が変化し易いため、その対応できる範囲が狭
い。当然、測定容器内の反応液の増量等の変化に対して
も、対応できる範囲が狭い。[0006] For example, a test tube or a microplate may vary in size, shape, thickness and the like depending on the manufacturer and product. Also, the direction in which the magnetic force acts is easily changed with respect to the change in the shape or size of the measurement container, and the range in which the magnetic force can be applied is narrow. As a matter of course, the range that can respond to a change such as an increase in the amount of the reaction solution in the measurement container is narrow.

【０００７】従って、必要に応じてマイクロプレートな
どの測定容器を幾つも横に並べたり、縦に積み重ねたり
して測定することや、形やウェル数の異なるマイクロプ
レートなどの測定容器を、１台の磁気発生装置を用いて
測定することは困難となる。実際に磁気発生装置を製造
することを考えてみても、例えば９６穴マイクロプレー
トを測定容器として用いる場合、１４０個もの小さい磁
石を使用することになってしまう。ところが製造上ある
いは製品管理上でも、百個以上もの小さな磁石を精度良
く管理することは簡単ではない。しかも永久磁石を用い
て磁気発生装置を製作すると、同一方向を向いた磁石を
多数並べることになり、それによって各磁石の磁極同士
が反発しあい、各磁石の残留磁束の急速な減少を招き、
磁気発生装置の寿命を非常に短いものにする。Accordingly, measurement containers such as microplates may be arranged side by side or stacked vertically as required, or one measurement container such as a microplate having a different shape or number of wells may be used. It is difficult to measure using the magnetic generator of the above. Considering actually manufacturing a magnetic generator, when a 96-well microplate is used as a measurement container, for example, 140 small magnets are used. However, it is not easy to accurately manage more than a hundred small magnets even in manufacturing or product management. Moreover, when a magnetic generator is manufactured using permanent magnets, a large number of magnets oriented in the same direction will be arranged, whereby the magnetic poles of each magnet will repel each other, causing a rapid decrease in the residual magnetic flux of each magnet,
The life of the magnetic generator is made very short.

【０００８】その上、測定容器を上下あるいは水平方向
へずれないように固定する装置あるいは位置を調製する
装置を装備しなくてはならず、そのことが設計上の制約
あるいは製造コストの上昇にもつながる。それでは、自
由磁極の広い面を持つ磁石を用いれば良いかというと、
これも難しい。広い自由磁極を持つ例えば角形の永久磁
石を使用することを考えてみると、永久磁石の自由磁極
の磁力は周辺部が強く中央部が弱い形となっている（例
えば、ある１００ｘ１００ｘ１０ｍｍの大きさを持つ角
形フェライト磁石の中央部は約２５０ガウスで四隅は約
１１００ガウスであった）。そして、磁極中央部の磁気
ベクトルの方向は磁極面に対して垂直だが、周辺部に近
づくに従って、傾きを持つこととなる。この様な磁石を
そのままマイクロプレートの下方に配しても、当然各ウ
ェルごとに磁力ベクトルすなわち磁力線の強さ及び働く
方向がばらばらで、一定の凝集像はえられない。 ま
た、通常強磁性体を磁力によって吸引しようという場
合、その磁力には空間的に磁力分布の偏りが存在し、こ
の偏りによって強磁性体は磁束密度の低い方から高い方
へと吸引される力が働くことになる。従って磁力により
磁性粒子担体を或方向へ吸引しようとする場合、当然磁
束密度の空間的な偏りが必要になり、このことが磁力を
発生する装置の設計及び製作を難しくし、実際に測定す
る際にも検出感度あるいは再現性の低下を招き、なおか
つ、磁力を発生する装置の使用上あるいは測定上での自
由度を低下させることとなる。In addition, it is necessary to equip a device for fixing the measuring container so as not to be displaced in the vertical or horizontal direction or a device for adjusting the position thereof, which is a constraint on design or an increase in manufacturing cost. Connect. Then, should we use a magnet with a wide free magnetic pole?
This is also difficult. Considering the use of, for example, a rectangular permanent magnet having a wide free magnetic pole, the magnetic force of the free magnetic pole of the permanent magnet is such that the peripheral portion is strong and the central portion is weak (for example, a size of 100 × 100 × 10 mm is considered to be a certain size). The square ferrite magnet had a center of about 250 Gauss and four corners of about 1100 Gauss). The direction of the magnetic vector at the center of the magnetic pole is perpendicular to the magnetic pole surface, but has a gradient as approaching the peripheral part. Even if such a magnet is directly disposed below the microplate, the magnetic force vector, that is, the intensity of the magnetic field lines and the working direction are different for each well, and a fixed aggregate image cannot be obtained. In general, when a ferromagnetic material is to be attracted by magnetic force, the magnetic force has a spatially biased magnetic force distribution, and the bias causes the ferromagnetic material to be attracted from a lower magnetic flux density to a higher magnetic flux density. Will work. Therefore, when magnetic particles are to be attracted in a certain direction by magnetic force, spatial deviation of magnetic flux density is naturally necessary, which makes it difficult to design and manufacture a device for generating magnetic force, and it is difficult to actually measure the magnetic force. In addition, the detection sensitivity or reproducibility is reduced, and the degree of freedom in using or measuring the device for generating magnetic force is reduced.

【０００９】従来の装置あるいは測定法では、磁力によ
る吸引効果のみを重視してきたため、均一な磁場空間に
よって意外にも粒子凝集像の形成を促進することなど、
未だ誰も考えられなかったことである。即ち、磁気ベク
トルの均一な磁場空間中に磁性粒子担体を配置すること
により、短時間で高感度な測定ができることを見い出し
本発明を完成するに至った。In the conventional apparatus or measuring method, since only the attraction effect by magnetic force has been emphasized, the formation of a particle aggregation image is unexpectedly promoted by a uniform magnetic field space.
It was something that no one had yet thought of. That is, it has been found that a highly sensitive measurement can be performed in a short time by arranging the magnetic particle carrier in a magnetic field space having a uniform magnetic vector, and the present invention has been completed.

【００１０】[0010]

【発明が解決しようとする課題】上記のような現状に鑑
みて本発明者らは、磁性粒子担体を用いた免疫学的測定
法において下記のような課題を解決することを目的とし
た。その第１の課題は、磁力を用いることによる測定感
度の低下を最小限に止め、かつ短時間に粒子凝集像を形
成させることである。DISCLOSURE OF THE INVENTION In view of the above situation, the present inventors have aimed to solve the following problems in an immunoassay using a magnetic particle carrier. The first problem is to minimize a decrease in measurement sensitivity due to the use of a magnetic force and to form a particle aggregation image in a short time.

【００１１】第２に、測定容器の歪みや製造誤差による
再現性の低下、あるいは測定容器の磁気発生装置内での
配置の仕方による再現性の低下、多検体を同時に測定可
能な測定容器でのウェル間差といった磁力源と測定容器
の位置関係から生じ易い問題を解決することである。ま
た、磁気発生装置内で例えば測定容器を横に適当に並べ
て配置し凝集像を形成させるとか、縦に積み上げて凝集
像を形成させるとかいった使用者の要求によって、さら
に自由度の高い測定を可能にすることである。Second, the reproducibility is reduced due to the distortion of the measuring container or the manufacturing error, or the reproducibility is reduced depending on the arrangement of the measuring container in the magnetic generator. An object of the present invention is to solve a problem, such as a difference between wells, which is likely to occur from a positional relationship between a magnetic force source and a measurement container. Also, in the magnetic generator, for example, the measurement containers can be arranged side by side appropriately to form an agglutination image, or stacked vertically to form an agglomeration image. Is to make it possible.

【００１２】第３に、測定容器が例えば試験管であると
か、９６穴あるいは１２０穴マイクロプレートであると
か、凝集像を形成させる容器内壁面の形状がＵ型である
とかＶ型であるとか、測定容器が大きいとか小さいとか
いった測定容器の形状、種類、大きさにとらわれない方
法と装置を開発することであり、このことによって使用
者の便宜をはかることである。Third, the measuring container is, for example, a test tube, a 96-well or 120-well microplate, or the shape of the inner wall surface of the container for forming an aggregate image is U-shaped or V-shaped. The purpose is to develop a method and an apparatus that are not limited to the shape, type, and size of the measurement container, such as whether the measurement container is large or small, and thereby to provide convenience for the user.

【００１３】第４に、安価でかつ設計も製造法も製造管
理も比較的簡単な磁気発生装置を、製作することであ
る。Fourth, there is a need to produce a magnetic generator which is inexpensive and relatively simple in design, manufacturing method and manufacturing management.

【００１４】[0014]

【課題を解決するための手段】本発明は上記課題を解決
するために、磁気ベクトルの均一な磁場空間を発生させ
る手段、及び当該磁場空間の磁力に磁性粒子担体を作用
させるための手段とを有することを特徴とする磁性粒子
担体を用いた免疫学的測定用磁気発生装置を開示し、提
供する。磁気ベクトルの均一な磁場空間は、強磁性体に
直接又は間接に磁石を作用させることにより、当該強磁
性体表面より一時的に放出される磁力線により構成され
る磁場空間であることが望ましい。In order to solve the above-mentioned problems, the present invention comprises means for generating a magnetic field space having a uniform magnetic vector, and means for causing a magnetic particle carrier to act on magnetic force in the magnetic field space. The present invention discloses and provides a magnetic generator for immunological measurement using a magnetic particle carrier characterized by having a magnetic particle carrier. The magnetic field space having a uniform magnetic vector is desirably a magnetic field space formed by lines of magnetic force temporarily emitted from the surface of the ferromagnetic material by directly or indirectly applying a magnet to the ferromagnetic material.

【００１５】さらに、本発明は、磁性粒子担体を用いた
免疫学的測定法において、磁気ベクトルの均一な磁場空
間を発生させ、当該磁場空間の磁力を磁性粒子担体に作
用させることを特徴とする免疫学的測定法をも開示し、
提供する。そこにおいても磁気ベクトルの均一な磁場空
間は、強磁性体に直接又は間接に磁石を作用させること
により、当該強磁性体表面より一時的に放出される磁力
線により構成される磁場空間であることが望ましく、ま
た、磁性粒子担体に磁力を作用させるとき又はその後
に、磁性担体相互の磁気的結合を解除することは望まし
い態様である。Further, the present invention is characterized in that, in an immunoassay using a magnetic particle carrier, a magnetic field space having a uniform magnetic vector is generated, and the magnetic force in the magnetic field space acts on the magnetic particle carrier. Also discloses immunoassays,
provide. Even there, a magnetic field space having a uniform magnetic vector may be a magnetic field space constituted by magnetic field lines temporarily emitted from the surface of the ferromagnetic material by directly or indirectly applying a magnet to the ferromagnetic material. It is desirable that the magnetic coupling between the magnetic carriers is released when or after applying a magnetic force to the magnetic particle carriers.

【００１６】即ち、本発明によれば、マイクロプレート
や試験管等の測定容器が充分に納まる空間を有し、かつ
当該測定容器の反応液の部分に対して、すべての場所で
均一な磁気ベクトル（磁力の強さと磁力の働く方向が均
一な磁力線）を作用させることにより、磁性粒子担体に
短時間で高感度な凝集像を形成させることが可能とな
る。That is, according to the present invention, there is provided a space in which a measuring vessel such as a microplate or a test tube can be sufficiently accommodated, and a uniform magnetic vector is provided at all places with respect to a reaction solution portion of the measuring vessel. By applying a magnetic field line in which the strength of the magnetic force and the direction in which the magnetic force acts are uniform, it becomes possible to form a highly sensitive aggregation image on the magnetic particle carrier in a short time.

【００１７】本発明の最大の特徴は、磁性粒子担体を用
いた免疫学的測定法の磁性粒子担体に磁力を作用させる
装置あるいは工程において、均一な磁気ベクトルを有す
る空間を発生させる点にある。 本発明の磁気ベクトル
の均一な磁場空間とは、磁力の強さ（磁束密度）と磁力
の働く方向が、両方とも均一な空間という意味である
が、完全に均一で無くても、ほぼ均一であればよい。
本発明の磁性粒子担体への磁力の作用は、この磁力が直
接磁性粒子担体を吸引している必要は無い。即ち、均一
な磁気ベクトルを有する空間中で磁性粒子担体は、測定
容器中で収束速度が増加すればよい。測定容器中で磁性
粒子担体が収束速度を増すのは、磁性粒子担体の幾つか
同士が磁気的結合を介して結合し、それによって溶液中
に分散する力あるいは測定容器内壁面にとどまる力が弱
まり、重力の作用をより強く受けるようになることによ
る。従って、磁性粒子担体に作用させる磁力は非常に弱
いものでも測定が可能となり、磁気ベクトルの不均一な
磁力を作用させる方法に比べて高い検出感度が実現でき
る。即ち本法に於いては、磁性粒子担体の磁気的結合を
介しての凝集を積極的に起こすことにより、凝集像の形
成を促進する方法であるが、磁力によって吸引しようと
する場合よりは弱い磁力で促進されるため（必要以上の
磁気的凝集を起こさないため）、高い検出感度が実現で
きる。The greatest feature of the present invention is that a space having a uniform magnetic vector is generated in an apparatus or a process for applying a magnetic force to a magnetic particle carrier in an immunoassay using a magnetic particle carrier. The uniform magnetic field space of the magnetic vector according to the present invention means that both the strength of magnetic force (magnetic flux density) and the direction in which the magnetic force acts are uniform spaces. I just need.
The action of the magnetic force on the magnetic particle carrier of the present invention does not require that the magnetic force directly attracts the magnetic particle carrier. That is, the convergence speed of the magnetic particle carrier in a space having a uniform magnetic vector may be increased in the measurement container. The increase in the convergence speed of the magnetic particle carrier in the measurement vessel is due to the fact that some of the magnetic particle carriers are connected via magnetic coupling, thereby weakening the force of dispersion in the solution or the force remaining on the inner wall surface of the measurement container. By being more strongly affected by gravity. Therefore, even if the magnetic force acting on the magnetic particle carrier is very weak, measurement can be performed, and higher detection sensitivity can be realized as compared with a method in which a magnetic force having a non-uniform magnetic vector is applied. That is, in the present method, the formation of the aggregated image is promoted by positively causing the aggregation through the magnetic coupling of the magnetic particle carrier, but is weaker than the case where the magnetic force is used to attract the magnetic particles. Since it is promoted by magnetic force (because unnecessary magnetic aggregation does not occur), high detection sensitivity can be realized.

【００１８】本発明の磁気ベクトルの均一な磁場空間を
発生させる方法としては、磁石を用いる方法と、磁石と
強磁性体を用いる方法の２つが考えられる。磁石を用い
る方法とは、通常は放射状あるいは楕円状に放出されよ
うとする磁力線を、相対する磁極を向い合わせに配する
ことによって一方の磁極からもう１方の磁極に向かって
ほぼ平行な磁力線が生じる現象を利用する。この方法
は、磁極が相対するように成型した１つの磁石を用いて
も可能であるし、この様に成型した磁石を複数装備して
も良い。また、２つの磁石を用いて、一方の磁石のＮ極
ともう一方の磁石のＳ極を相対するように配することに
よっても、また複数の磁石を用いて一方にいくつかの磁
石をＮ極が一定の方向に向くように並べ、それと反対側
にいくつかの磁石をＳ極が相対するように並べることに
よっても達成される。As a method of generating a magnetic field having a uniform magnetic vector according to the present invention, there are two methods, a method using a magnet and a method using a magnet and a ferromagnetic material. The method of using a magnet means that magnetic lines of force that are usually emitted radially or elliptically are arranged with their magnetic poles facing each other, so that magnetic lines of force that are almost parallel from one magnetic pole toward the other magnetic pole. Utilize the phenomenon that occurs. This method can be performed using a single magnet molded so that the magnetic poles face each other, or a plurality of magnets molded in this way can be provided. Alternatively, by using two magnets and arranging the N pole of one magnet and the S pole of the other magnet so as to face each other, or using a plurality of magnets, one magnet may have one N pole. Can be achieved by arranging the magnets so that they face in a certain direction, and arranging some magnets on the opposite side so that the south poles face each other.

【００１９】磁石と強磁性体を用いる方法とは、強磁性
体に磁石を直接又は間接に作用させることにより当該強
磁性体より、一時的に放出される磁力線を用いることで
ある。強磁性体より放出される磁力と強磁性体に流入す
る磁力は、磁気回路的には等価なのでこれらは特に区別
して表現する必要はない。即ち、強磁性体に直接又は間
接に磁石を作用させることにより生じる均一な磁気ベク
トルを有する空間を利用すればよい。さらに別の強磁性
体を用いて、磁気ベクトルが充分に均一な磁場空間の大
きさや、磁気ベクトルの強さや方向をコントロールする
事も、比較的簡単に行なわれる。この方法を利用すれ
ば、本発明の磁気発生装置の設計上の自由度が非常に大
きくなる。The method of using a magnet and a ferromagnetic material is to use magnetic lines of force which are temporarily emitted from the ferromagnetic material by directly or indirectly acting the magnet on the ferromagnetic material. Since the magnetic force emitted from the ferromagnetic material and the magnetic force flowing into the ferromagnetic material are equivalent in terms of a magnetic circuit, they need not be particularly distinguished. That is, a space having a uniform magnetic vector generated by directly or indirectly applying a magnet to the ferromagnetic material may be used. It is relatively easy to control the size of the magnetic field space in which the magnetic vectors are sufficiently uniform and the strength and direction of the magnetic vectors using another ferromagnetic material. If this method is used, the degree of freedom in designing the magnetic generator of the present invention becomes very large.

【００２０】強磁性体に磁石を直接に作用させるとは、
当該強磁性体に磁石のＳまたはＮの磁極を直接接触させ
ることを意味する。また、強磁性体に磁石を間接に作用
させるとは、当該強磁性体と磁石の間に、空間または非
磁性体あるいは別の強磁性体をはさんで間接に当該強磁
性体に磁石を作用させることを意味する。強磁性体より
一時的に放出される磁力線とは、磁石を直接または間接
に作用させることにより初めて当該強磁性体より放出さ
れる磁力線を指す。The fact that a magnet acts directly on a ferromagnetic material is as follows.
This means that the S or N magnetic pole of the magnet is brought into direct contact with the ferromagnetic material. In addition, indirectly applying a magnet to a ferromagnetic material means that a magnet is applied to the ferromagnetic material indirectly with a space or a non-magnetic material or another ferromagnetic material interposed between the ferromagnetic material and the magnet. Means to let. The line of magnetic force temporarily emitted from the ferromagnetic material refers to the line of magnetic force emitted from the ferromagnetic material only when the magnet acts directly or indirectly.

【００２１】強磁性体に磁石を直接又は間接に作用させ
ることにより当該強磁性体より一時的に放出される磁力
線を用いる方法をさらに説明すると、磁石の近くに強磁
性体を配すると、磁石から通常放射状あるいは楕円状に
放出される磁力線が、強磁性体の存在により強磁性体方
向に向くように曲げられる現象、あるいは、強磁性体に
磁石を直接接するように配するかあるいは磁石を空間、
非磁性体あるいは別の強磁性体を挟んで配することによ
り、磁石から生じた磁力線が、強磁性体内を通って空間
に放出される際、均一化される現象を利用する方法であ
る。いずれの場合も測定するにあたって、充分に均一な
磁気ベクトルを有する空間を用いればよい。また、さら
に別の強磁性体を配して、磁気ベクトルの均一さ及び使
用可能な空間の大きさ等を、調節することもできる。The method of using the magnetic field lines temporarily emitted from the ferromagnetic material by directly or indirectly applying the magnet to the ferromagnetic material will be further described. A phenomenon in which magnetic lines of force that are normally emitted radially or elliptically are bent so as to face the ferromagnetic substance due to the presence of the ferromagnetic substance, or a magnet is placed directly in contact with the ferromagnetic substance, or a magnet is placed in space,
This method uses a phenomenon in which a magnetic field line generated from a magnet is uniformized when the magnetic field lines generated from a magnet are discharged into a space through a ferromagnetic material by arranging a non-magnetic material or another ferromagnetic material. In any case, a space having a sufficiently uniform magnetic vector may be used for measurement. Further, by disposing another ferromagnetic material, the uniformity of the magnetic vector and the size of the usable space can be adjusted.

【００２２】この様にして発生される磁気ベクトルの均
一な磁場空間中の磁束密度は特に限定はされないが、１
〜１０００ガウス、望ましくは５〜１００ガウスであ
り、測定系により、適時選択できる。磁気ベクトルの方
向は、重力とほぼ平行に上又は下の方向であることが望
ましい。但し、磁気ベクトルの方向が重力に対して垂直
もしくは傾きを持たせても陰性像及び陽性像の判別は可
能なので、必ずしも重力と平行である必要はない。The magnetic flux density of the magnetic vector thus generated in a uniform magnetic field space is not particularly limited.
１０００1000 gauss, desirably 5 to 100 gauss, which can be selected as appropriate depending on the measurement system. Desirably, the direction of the magnetic vector is an upward or downward direction substantially parallel to gravity. However, even if the direction of the magnetic vector is perpendicular or inclined with respect to gravity, a negative image and a positive image can be distinguished, so that it is not necessarily required to be parallel to gravity.

【００２３】この磁気ベクトルの均一な磁場空間の磁界
は、時間的に変化させてもよい。即ち、静磁界でも動磁
界でもよい。ここで強磁性体とは、鉄、ニッケル、コバ
ルト等の強磁性金属またはこれらを含む合金（強磁性合
金）、もしくは非磁性体中に前記強磁性金属あるいは強
磁性合金を充分に含有しているもの、または強磁性金属
中あるいは強磁性合金中に非磁性体を含有しているもの
も含む。強磁性体の形状は測定容器を配する部品である
場合には、少なくともその一部に平面を持つか平面と見
なせる面を持つ形状であることが望ましい。The magnetic field in the magnetic field space having a uniform magnetic vector may be changed with time. That is, it may be a static magnetic field or a dynamic magnetic field. Here, the ferromagnetic material is a ferromagnetic metal such as iron, nickel, or cobalt, or an alloy (ferromagnetic alloy) containing these, or a nonmagnetic material sufficiently containing the ferromagnetic metal or ferromagnetic alloy. And those containing a non-magnetic material in a ferromagnetic metal or a ferromagnetic alloy. When the ferromagnetic material is a component on which the measurement container is provided, it is desirable that the ferromagnetic material has a shape having a flat surface or a surface that can be regarded as a flat surface at least in a part thereof.

【００２４】ここで磁石とは、永久磁石または電磁石の
いずれを用いても構わない。永久磁石とは、強磁性体を
着磁させたものでそれ自身が充分な磁力を保持している
ものを言う。ここで強磁性体の磁場配向処理の有無は関
係なく、即ち異方性磁石、等方性磁石の何れも用いるこ
とができる。電磁石とは、強磁性体あるいは非磁性体
（空間を含む）の周りにエナメル線等の電導線を巻き付
けて当該電導線に直流電流または交流電流を流す装置を
保有するものを指す。即ち磁石とは、そのもの単独で充
分な起磁力を有するものをさし、その点で強磁性体と区
別される。Here, a permanent magnet or an electromagnet may be used as the magnet. A permanent magnet is a magnetized ferromagnetic material which itself has a sufficient magnetic force. Here, the presence or absence of the magnetic field orientation treatment of the ferromagnetic material is irrelevant, that is, either an anisotropic magnet or an isotropic magnet can be used. The electromagnet refers to a device having a device in which a conductive wire such as an enamel wire is wound around a ferromagnetic or non-magnetic material (including a space) and a direct current or an alternating current flows through the conductive wire. That is, the magnet itself has a sufficient magnetomotive force by itself and is distinguished from a ferromagnetic material in that respect.

【００２５】本発明の磁気発生装置における磁石と強磁
性体とは、一体成型することができる。本発明の磁気発
生装置は、測定容器内の磁性粒子担体に作用する磁力を
遮断するかあるいは充分に弱める装置がついていること
が望ましい。例えば磁石が永久磁石である場合、磁石ま
たは測定容器を移動させて磁石の影響を除くか、また
は、別の強磁性体により磁気回路のバイパスを作り、測
定容器中の磁性粒子担体に作用する磁力を減少させるこ
とによっても達成される。また、複数の磁石を用いてい
る場合、その内いくつかの磁石の磁極を反転することに
よっても達成される。磁石が電磁石である場合、永久磁
石の場合と同様な方法のほかに、電磁石の電流の供給を
止めるか充分に減少させること、あるいは逆向きの弱い
電流を供給することによっても達成される。この装置に
より、磁性粒子担体に対する磁力の作用を中断もしくは
終了させることができる他、磁力を作用させることによ
り生じた磁性粒子担体同士の磁気的結合を、解離させる
ことが可能となる。The magnet and the ferromagnetic material in the magnetic generator of the present invention can be integrally molded. The magnetic generator of the present invention is preferably provided with a device for interrupting or sufficiently reducing the magnetic force acting on the magnetic particle carrier in the measurement container. For example, if the magnet is a permanent magnet, remove the effect of the magnet by moving the magnet or the measuring container, or create a magnetic circuit bypass by another ferromagnetic material, and the magnetic force acting on the magnetic particle carrier in the measuring container Is also achieved by reducing In the case where a plurality of magnets are used, it is also achieved by reversing the magnetic poles of some of the magnets. When the magnet is an electromagnet, it can be achieved by stopping or sufficiently reducing the current supplied to the electromagnet or supplying a weak current in the opposite direction, in addition to the same method as the case of the permanent magnet. With this device, the action of the magnetic force on the magnetic particle carrier can be interrupted or terminated, and the magnetic coupling between the magnetic particle carriers caused by the action of the magnetic force can be dissociated.

【００２６】本発明の磁気発生装置は、連続的にあるい
は断続的に、磁力の強さを変化させる装置を内蔵するこ
とができる。磁力の強さを連続的にあるいは断続的に変
化させる方法としては、磁石が永久磁石である場合、磁
石を連続的にあるいは断続的に移動させることによって
達成される。磁石が電磁石である場合、前記永久磁石の
場合と同様な方法の他に、電磁石に供給する電流量を連
続的にあるいは断続的に変化させることによっても達成
される。The magnetic generator according to the present invention can incorporate a device for changing the strength of the magnetic force continuously or intermittently. The method of changing the strength of the magnetic force continuously or intermittently is achieved by moving the magnet continuously or intermittently when the magnet is a permanent magnet. When the magnet is an electromagnet, it can be achieved by changing the amount of current supplied to the electromagnet continuously or intermittently, in addition to the same method as in the case of the permanent magnet.

【００２７】本発明の磁気発生装置は、磁力のＳとＮを
反転させる（磁気ベクトルの方向を反転させる）装置を
内蔵することができる。磁力のＳとＮを反転させる方法
としては、例えば磁石が永久磁石である場合、当該磁石
のＳＮを反転させて装備すること、当該磁石を装置内部
で反転させる装置を内蔵すること、あるいは別に磁力の
反転した装置を用意し測定容器をその装置内に移動させ
ることにより達成される。また磁石が電磁石の場合、前
記永久磁石の場合と同様な方法のほかに、電磁石に供給
する電流の＋−を入れ換えることによっても達成され
る。この装置により、磁力を作用させることにより生じ
た磁性粒子担体同士の磁気的結合を解離させる効果、陰
性像をより収束させる効果があり、本発明の免疫学的測
定法の測定感度を調節することも可能になる。The magnetic generator of the present invention can incorporate a device for reversing the S and N of the magnetic force (reversing the direction of the magnetic vector). As a method of reversing the S and N of the magnetic force, for example, when the magnet is a permanent magnet, the SN of the magnet is reversed and equipped, a device for reversing the magnet inside the device is built in, or another magnetic force is used. This is achieved by preparing an inverted device and moving the measuring container into the device. When the magnet is an electromagnet, it can be achieved by exchanging + and-of the current supplied to the electromagnet, in addition to the same method as the case of the permanent magnet. This device has an effect of dissociating magnetic coupling between magnetic particle carriers generated by applying a magnetic force, an effect of converging a negative image more, and adjusting the measurement sensitivity of the immunological measurement method of the present invention. Also becomes possible.

【００２８】本発明の磁気発生装置は、交番磁界を用い
ることができる。交番磁界を用いる方法としては、磁石
が永久磁石の場合、磁石を連続的に回転させることによ
り達成される。磁石が電磁石の場合、電磁石に供給する
電流を交流電流にすることによって達成される。交番磁
界を用いることにより、陰性像をより収束させる効果が
ある。The magnetic generator of the present invention can use an alternating magnetic field. The method using an alternating magnetic field is achieved by rotating the magnet continuously when the magnet is a permanent magnet. When the magnet is an electromagnet, this is achieved by making the current supplied to the electromagnet an alternating current. The use of the alternating magnetic field has the effect of converging the negative image more.

【００２９】本発明の磁気発生装置は、磁気ベクトルの
方向を時間的に変化させることができる。磁気ベクトル
の方向を時間的に変化させる方法としては、均一な磁気
ベクトルを発生する部品を回転させるか、測定容器を回
転させることによって達成される。また、均一な磁気ベ
クトルを発生する部品を複数用意し、これらより順に均
一な磁気ベクトルを発生させることによっても達成され
る。 本発明の磁気発生装置は、静磁界を発生する装置
と動磁界を発生する装置を双方共、内蔵することができ
る。The magnetic generator of the present invention can change the direction of the magnetic vector with time. The method of changing the direction of the magnetic vector over time is achieved by rotating a component that generates a uniform magnetic vector or by rotating a measurement container. It is also achieved by preparing a plurality of components that generate a uniform magnetic vector and sequentially generating a uniform magnetic vector from these components. The magnetic generator of the present invention can incorporate both a device that generates a static magnetic field and a device that generates a dynamic magnetic field.

【００３０】本発明の磁気発生装置は、測定容器内の磁
性粒子担体に作用させる磁力の強さを調整する機能を、
内蔵させることができる。磁力の強さを調整する方法と
しては、例えば磁石が永久磁石の場合、磁石と強磁性体
との距離を変化させたり、強磁性体間の距離を変化させ
たり、さらに別の強磁性体により磁力線のバイパスを作
りこれによって磁力を変化させたりすることにより達成
される。磁石が電磁石の場合、前記方法の他、電磁石に
供給する電流量を変化させることによっても達成され
る。この装置により、本発明の免疫学的測定法の測定感
度及び測定時間の調節も可能となる。またこの装置によ
り、様々な種類の測定容器への対応、様々な種類の磁性
粒子担体への対応が可能となる。The magnetic generator of the present invention has a function of adjusting the strength of the magnetic force acting on the magnetic particle carrier in the measurement container.
Can be built-in. As a method of adjusting the strength of the magnetic force, for example, when the magnet is a permanent magnet, the distance between the magnet and the ferromagnetic material is changed, the distance between the ferromagnetic materials is changed, or another ferromagnetic material is used. This is achieved by creating a magnetic field line bypass and thereby changing the magnetic force. When the magnet is an electromagnet, this can be achieved by changing the amount of current supplied to the electromagnet in addition to the above method. With this device, it is also possible to adjust the measurement sensitivity and the measurement time of the immunological measurement method of the present invention. In addition, this device can support various types of measurement containers and various types of magnetic particle carriers.

【００３１】本発明の磁気発生装置は、ＰＨＡあるいは
ＲＰＨＡ等の間接凝集反応用の自動分析装置に、組み込
むことができる。自動分析装置に組み込むことによっ
て、従来の間接凝集反応法と本発明の免疫学的測定法
を、同一の装置であるいは同時に、測定可能な自動分析
装置となる。また、本発明の磁気発生装置は、設計上の
自由度も大きく、装置内で測定容器の位置を厳密に制御
する必要が無いため、設計上それほど大きな変更点及び
問題点もなく、従来使用されている自動分析装置に組み
込むことが可能である。The magnetic generator of the present invention can be incorporated in an automatic analyzer for an indirect agglutination reaction such as PHA or RPHA. By incorporating it into an automatic analyzer, the conventional indirect agglutination reaction method and the immunological measurement method of the present invention can be used as an automatic analyzer that can be measured by the same device or simultaneously. Further, the magnetic generator of the present invention has a large degree of freedom in design, and it is not necessary to strictly control the position of the measurement container in the apparatus. It can be incorporated into some automatic analyzers.

【００３２】本発明の磁性粒子担体を用いた免疫学的測
定法は、 1)試料溶液中の被検物質と、これに親和性を有する物質
を固定化した粒子担体との反応を、測定容器底面での粒
子担体の凝集像として判定する間接凝集反応において、
前記粒子担体として磁性粒子担体を用い、被検物質を磁
性粒子担体に反応させ、同時に又は次いで、当該磁性粒
子担体に、磁気ベクトルの均一な磁場空間で磁力を作用
させる工程を具備した免疫学的測定法． 2)試料溶液と、試料溶液中の被検物質に親和性を有する
物質、及び試料溶液中の被検物質に対して競合する物質
を固定化した磁性粒子担体とを混合し、両者の反応溶液
を形成する工程と、測定容器内に収容された前記反応溶
液に対し、前記測定容器中の磁性粒子担体に対して、磁
気ベクトルの均一な磁場空間で磁力を作用させる工程
と、磁性粒子担体の前記測定容器壁面領域での分布状態
に基づいて、前記試料溶液中に含まれる前記被検物質を
測定する工程とを具備した免疫学的測定法． 3)赤血球内部に強磁性体を封入した磁性粒子担体を用意
し、これと試料溶液とを反応させ、同時にまたは次い
で、当該磁性粒子担体に磁気ベクトルの均一な磁場空間
で磁力を作用させ形成された凝集像あるいは凝集価によ
り、当該試料溶液中の被検物質（例えば、ＡＢＯ式血液
型あるいは不規則抗体等の赤血球表面抗原と反応する物
質）を測定する免疫学的測定法． 4)前記1)、2)、3)の磁性粒子担体に、磁力を作用させる
工程の後にあるいは工程中に、磁力を作用させることに
より生じた磁性粒子担体相互の磁気的結合を解離させる
工程を具備した免疫学的測定法．である。The immunoassay using the magnetic particle carrier of the present invention includes the following steps: 1) The reaction between a test substance in a sample solution and a particle carrier on which a substance having affinity for the test substance is immobilized is measured by a measuring container In the indirect agglutination reaction, which is determined as an agglutination image of the particle carrier at the bottom,
Using a magnetic particle carrier as the particle carrier, reacting a test substance with the magnetic particle carrier, and simultaneously or subsequently, the magnetic particle carrier is provided with a step of applying a magnetic force in a uniform magnetic field space of a magnetic vector. Measurement method. 2) Has an affinity for the sample solution and the test substance in the sample solution
Material, and for the analyte in the sample solution by mixing the magnetic particle carrier with immobilized competing substance, forming both the reaction solution, to said reaction solution contained in the measurement vessel A step of applying a magnetic force to a magnetic particle carrier in the measurement container in a uniform magnetic field space of a magnetic vector, based on a distribution state of the magnetic particle carrier in the measurement container wall region, into the sample solution. Measuring the contained test substance. 3) Prepare a magnetic particle carrier enclosing a ferromagnetic substance inside the red blood cells, react this with a sample solution, and simultaneously or subsequently, apply a magnetic force to the magnetic particle carrier in a uniform magnetic field space of a magnetic vector to form a magnetic particle carrier. Immunoassay method for measuring a test substance (for example, a substance that reacts with an erythrocyte surface antigen such as an ABO blood group or an irregular antibody) in the sample solution based on the agglutination image or agglutination value. 4) After or during the step of applying a magnetic force to the magnetic particle carriers of the above 1), 2) and 3), a step of dissociating the magnetic coupling between the magnetic particle carriers generated by applying the magnetic force. Immunological assay provided. It is.

【００３３】いずれの場合も、被検物質に親和性を有す
る物質もしくは被検物質に対して競合する物質を測定容
器内壁面に、予め固定化させた測定容器を用いることが
できる。また測定容器内壁面に被検物質に親和性を有す
る物質を予め固定化させた場合、試料溶液を当該測定容
器に添加後、試料溶液中の被検物質を予め測定容器と反
応させる工程の後、洗浄する工程は行ってもよく、又は
行わなくてもよい。 In any case, it is possible to use a measurement container in which a substance having an affinity for the test substance or a substance that competes with the test substance is immobilized on the inner wall surface of the measurement container in advance. When a substance having an affinity for the test substance is previously immobilized on the inner wall surface of the measurement vessel, after the sample solution is added to the measurement vessel, after the step of reacting the test substance in the sample solution with the measurement vessel in advance. , A washing step may be performed, or
It does not need to be performed.

【００３４】上記4)に於ける磁力を作用させることによ
り生じた磁性粒子担体同士の磁気的結合を解離させる工
程とは、磁性粒子担体に作用させている磁力を遮断もし
くは充分に弱めること、あるいは磁性粒子担体に作用さ
せている磁力のＳＮの方向を反転させることによっても
達成される。尚、この工程は１回もしくは複数回行なっ
てもよい。The step of dissociating the magnetic coupling between the magnetic particle carriers caused by the application of the magnetic force in the above 4) is to interrupt or sufficiently weaken the magnetic force acting on the magnetic particle carriers, or This can also be achieved by reversing the direction of the SN of the magnetic force acting on the magnetic particle carrier. This step may be performed once or plural times.

【００３５】ここで磁性粒子担体とは、強磁性体（鉄、
コバルト、ニッケル等の強磁性金属あるいはこれらを含
む合金、もしくは非磁性体中に前記強磁性金属あるいは
強磁性合金を充分に含有しているもの、または強磁性金
属中あるいは強磁性合金中に非磁性体を含有しているも
のも含む）単独で粒子状に成型した磁性粒子担体、もし
くは強磁性体を核としてその表面をポリスチレン、シリ
カゲル、ゼラチン、ポリアクリルアミド等で被覆した磁
性粒子担体、ポリスチレン、シリカゲル、ゼラチン、ポ
リアクリルアミド等に微粉末状の強磁性体を分散させて
粒子状に成型した磁性粒子担体、あるいはポリスチレ
ン、シリカゲル、ゼラチン、ポリアクリルアミド等の粒
子を核として強磁性体を被覆した磁性粒子担体、あるい
は赤血球あるいはマイクロカプセルに強磁性体を封入し
て調製した磁性粒子担体を用いることができる。磁性粒
子担体は、色素を被覆もしくは粒子中に分散、封入さ
せ、着色してもよい。磁性粒子担体は、外部から磁力を
作用させている間は磁化し、外部からの磁力の遮断によ
り速やかに減磁する性質を持つものであることが望まし
い。磁性粒子担体の粒子径は、０．０１〜１００μｍ
で、好ましくは０．５〜１０μｍである。磁性粒子担体
の比重は、１〜１０で、好ましくは１〜２である。この
様な磁性粒子担体としては、例えば当分野ですでに免疫
磁気分離用担体としてエンザイムイムノアッセイ、フル
オロイムノアッセイ、ケミルミネッセンスイムノアッセ
イ、ラジオイムノアッセイ等で用いられている固相担体
あるいは細胞分離用の担体として用いられているものな
ど何等制限なく採用することができる。Here, the magnetic particle carrier is a ferromagnetic substance (iron,
Ferromagnetic metals such as cobalt and nickel or alloys containing these, or those containing a sufficient amount of the ferromagnetic metal or ferromagnetic alloy in a non-magnetic material, or non-magnetic in a ferromagnetic metal or ferromagnetic alloy Magnetic particles, which are formed into particles by themselves, or magnetic particles whose core is a ferromagnetic material and whose surface is coated with polystyrene, silica gel, gelatin, polyacrylamide, etc., polystyrene, silica gel , Gelatin, po
A magnetic particle carrier formed by dispersing a ferromagnetic material in the form of fine powder in acrylamide or the like to form a particle, or a magnetic particle carrier coated with a ferromagnetic material using polystyrene, silica gel, gelatin, polyacrylamide or the like as a core, or A magnetic particle carrier prepared by enclosing a ferromagnetic substance in red blood cells or microcapsules can be used. The magnetic particle carrier may be colored by coating or dispersing and enclosing a dye in the particles. The magnetic particle carrier desirably has a property of being magnetized while a magnetic force is being applied from the outside, and having a property of being rapidly demagnetized by shutting off the magnetic force from the outside. The particle size of the magnetic particle carrier is 0.01 to 100 μm
And preferably 0.5 to 10 μm. The specific gravity of the magnetic particle carrier is 1 to 10, preferably 1 to 2. Such magnetic particle carriers include, for example, solid carriers or carriers for cell separation which are already used in the art as immunomagnetic separation carriers such as enzyme immunoassay, fluoroimmunoassay, chemiluminescence immunoassay, and radioimmunoassay. It can be adopted without any restrictions such as those that are used.

【００３６】試料溶液とは、ヒトあるいは動物の血液、
血清、血漿、尿、髄液、唾液、汗、腹水、羊水、ヒトあ
るいは動物の細胞あるいは臓器の抽出液、ヒトあるいは
動物の糞便の抽出液、細胞あるいは菌体の培養液、抽出
液、植物の抽出液、または、これらの希釈液など液状の
ものであればどのようなものでも対象となる。被検物質
とは、従来免疫学的測定法により測定されているもの、
あるいは測定可能であるものであればいかなるものも対
象となる。例えばＣＲＰ（Ｃ反応性蛋白）、α−フェト
プロテイン、ＣＥＡ、ＲＦ（リューマチ因子）、マイコ
プラスマ抗体、各種ホルモン、アレルゲン、レアギン、
ＩｇＥ、アルブミン、ヘモグロビン、ウイルス関連抗原
抗体、その他感染症関連抗原抗体、各種血液型抗原抗体
などが挙げられる。特に臨床検査の場に於て緊急を要す
ることのある測定項目、例えばＡＢＯ式血液型抗体、不
規則抗体、Ｂ型肝炎ウイルス関連抗原抗体（ＨＢｓ抗
原、ＨＢｓ抗体、ＨＢｃ抗体、ＨＢｅ抗原、ＨＢｅ抗
体、Ｐｒｅ−Ｓ１抗原、Ｐｒｅ−Ｓ１抗体、Ｐｒｅ−Ｓ
２抗原、Ｐｒｅ−Ｓ２抗体等）、Ｃ型肝炎ウイルス（Ｈ
ＣＶ）関連抗原抗体、エイズウイルス（ＨＩＶ）関連抗
原抗体、梅毒トレポネーマ関連抗体、成人Ｔ細胞白血病
ウイルス（ＨＴＬＶ−Ｉ）関連抗原抗体等は特に好適で
ある。The sample solution includes human or animal blood,
Serum, plasma, urine, cerebrospinal fluid, saliva, sweat, ascites, amniotic fluid, human or animal cell or organ extract, human or animal fecal extract, cell or bacterial culture, extract, plant Any liquid, such as an extract or a diluent thereof, is a target. Test substances are those conventionally measured by immunoassay,
Alternatively, anything that can be measured is a target. For example, CRP (C-reactive protein), α-fetoprotein, CEA, RF (rheumatoid factor), mycoplasma antibody, various hormones, allergen, reagin,
Examples include IgE, albumin, hemoglobin, virus-related antigen antibodies, other infectious disease-related antigen antibodies, and various blood group antigen antibodies. Particularly in the case of a clinical test, measurement items that may be urgent, such as ABO blood group antibody, irregular antibody, hepatitis B virus-related antigen antibody (HBs antigen, HBs antibody, HBc antibody, HBe antigen, HBe antibody) , Pre-S1 antigen, Pre-S1 antibody, Pre-S
2 antigen, Pre-S2 antibody, etc.), hepatitis C virus (H
CV) related antigen antibodies, AIDS virus (HIV) related antigen antibodies, syphilis treponemal related antibodies, adult T cell leukemia virus (HTLV-I) related antigen antibodies and the like are particularly suitable.

【００３７】被検物質に親和性を有する物質とは、例え
ば被検物質を抗原として測定する場合には、被検物質に
対する抗体であり、被検物質が或抗原に対する抗体であ
る場合には、被検物質である抗体に反応する抗原であっ
てもよい。また、被検物質が糖鎖である場合には、その
糖鎖と反応するレクチンを用いたり、逆に被検物質がレ
クチンである場合には、そのレクチンと反応する糖鎖を
用いることもできる。即ち、被検物質に親和性を有する
物質とは被検物質と反応する物質を指す。The substance having an affinity for the test substance is, for example, an antibody to the test substance when the test substance is measured as an antigen, and an antibody to the test substance when the test substance is an antibody to a certain antigen. there antigen which reacts to an antibody which is the test substance
You may . In addition, when the test substance is a sugar chain, a lectin that reacts with the sugar chain can be used, and when the test substance is a lectin, a sugar chain that reacts with the lectin can be used. . That is, the substance having an affinity for the test substance refers to a substance that reacts with the test substance.

【００３８】被検物質に対して競合する物質とは、被検
物質と被検物質に親和性を有する物質との反応を競合的
に阻害する物質を指す。即ち、被検物質そのものあるい
は被検物質と免疫学的に類似な物質である。例えば、被
検物質が抗原で、被検物質に親和性を有する物質がその
抗原に対する抗体であるような場合、被検物質に対して
競合する物質とはその抗原そのもの、あるいはその物質
のエピトープまたはエピトープの類似体を持つ物質であ
る。被検物質が抗体で被検物質に親和性を有する物質が
その抗体に対する抗原である場合、被検物質に対して競
合する物質とはその抗体そのもの、その抗体の認識する
抗原上の同一のエピトープもしくはその近傍のエピトー
プを認識する抗体、あるいはこれらの抗体の抗原認識部
位を持つフラグメントである。A substance that competes with a test substance refers to a substance that competitively inhibits the reaction between the test substance and a substance having an affinity for the test substance. That is, the test substance itself or a substance immunologically similar to the test substance. For example, when the test substance is an antigen and the substance having an affinity for the test substance is an antibody against the antigen, the substance competing for the test substance is the antigen itself, or an epitope or a substance of the substance. A substance that has an analog of an epitope. When the test substance is an antibody and the substance having an affinity for the test substance is an antigen against the antibody, the substance competing for the test substance is the antibody itself or the same epitope on the antigen recognized by the antibody. or a fragment having an antibody, or an antigen recognition site of these antibodies recognizes an epitope near the.

【００３９】測定容器は、間接凝集反応において一般的
に用いられている容器であれば、その種類、材質、形状
は何ら制限されない。例えば、ガラス、ポリスチレン、
ポリ塩化ビニル、ポリメタクリレート等からなる試験管
あるいはマイクロプレート、トレイ等である。測定容器
の試料を収容する領域（ウェル）の底面は、Ｕ型、Ｖ型
もしくはＵＶ型など底面中央から周辺にかけて傾斜をも
つ形状であることが望ましい。測定容器の試料を収容す
る部分は、試験管のように１つの容器に対して１つしか
ないものもあるが、便宜上総てウェルと呼ぶことにす
る。The type, material, and shape of the measuring container are not particularly limited as long as it is a container generally used in the indirect agglutination reaction. For example, glass, polystyrene,
Test tubes, microplates, trays, etc., made of polyvinyl chloride, polymethacrylate, etc. It is desirable that the bottom surface of the region (well) of the measurement container for accommodating the sample has a shape such as U-shaped, V-shaped or UV-shaped, which has a slope from the center to the periphery of the bottom surface. Although there is only one portion of a measurement container for accommodating a sample such as a test tube for one container, it is referred to as a well for convenience.

【００４０】被検物質に親和性を有する物質あるいは被
検物質に対して競合する物質を、磁性粒子担体あるいは
測定容器内壁面に固定化させる方法は、特に限定された
ものではなく、公知の方法が好適に採用される。例え
ば、疎水結合、親水吸着、共有結合等の物理化学的方法
を用いればよい。さらに、必要があればＢＳＡ、カゼイ
ン、ゼラチン、卵白アルブミン、各種界面活性剤等のマ
スキング剤で処理してもよい。The method of immobilizing a substance having an affinity for the test substance or a substance competing with the test substance on the magnetic particle carrier or the inner wall surface of the measurement container is not particularly limited, and a known method can be used. Is preferably adopted. For example, a physicochemical method such as a hydrophobic bond, a hydrophilic adsorption, and a covalent bond may be used. Further, if necessary, it may be treated with a masking agent such as BSA, casein, gelatin, ovalbumin, and various surfactants.

【００４１】本発明の免疫学的測定法に用いる磁性粒子
担体の分散液もしくは試料溶液の希釈液については、各
種水系溶液を用いることができる。例えば精製水、生理
食塩水、各種緩衝液等の水系溶媒で、各種タンパク質、
各種糖類、各種動物血清、各種界面活性剤、各種合成高
分子化合物、各種天然高分子化合物、各種合成低分子化
合物、各種塩類等を添加することができる。測定容器内
壁面に被検物質と親和性を有する物質もしくは被検物質
に対して競合する物質を固定化させて測定する場合に
は、特にカゼインを添加した溶液を用いることが好適で
ある。Various aqueous solutions can be used as the dispersion of the magnetic particle carrier or the diluent of the sample solution used in the immunoassay of the present invention. For example, purified water, physiological saline, aqueous solvents such as various buffers, various proteins,
Various sugars, various animal sera, various surfactants, various synthetic high molecular compounds, various natural high molecular compounds, various synthetic low molecular compounds , various salts, and the like can be added. When the measurement is performed by immobilizing a substance having an affinity for the test substance or a substance that competes with the test substance on the inner wall surface of the measurement container, it is particularly preferable to use a solution to which casein is added.

【００４２】本発明の免疫学的測定法は、測定容器内あ
るいは別の容器内にて、試料溶液を希釈液にて希釈して
測定することができる。また、試料溶液を希釈液にて連
続希釈することにより凝集価として被検物質の濃度を判
定することも可能である。連続希釈には、従来受身赤血
球凝集反応等でよく使用されるダイリュータを用いるこ
ともできる。The immunoassay of the present invention can be carried out by diluting a sample solution with a diluent in a measuring container or another container. It is also possible to determine the concentration of a test substance as an agglutination value by serially diluting a sample solution with a diluent. For the serial dilution, a diluter which is conventionally often used in a passive hemagglutination reaction or the like can also be used.

【００４３】[0043]

【作用】均一な磁気ベクトルを有する磁場空間を発生さ
せるため、測定容器内の各点に於ける磁力の強さが均一
で、容器底面に必要以上に強い磁力を作用させることが
無く、磁性粒子担体と測定容器内壁面との反応を阻害す
ることが少ない。従って、高感度で短時間の測定が可能
となった。[Function] In order to generate a magnetic field space having a uniform magnetic vector, the strength of magnetic force at each point in the measurement container is uniform, and no unnecessarily strong magnetic force acts on the bottom surface of the container. There is little hindrance to the reaction between the carrier and the inner wall surface of the measurement container. Therefore, high-sensitivity and short-time measurement became possible.

【００４４】また、均一な磁気ベクトルを有する磁場空
間を発生させるので、この空間内のどこに測定容器があ
っても測定可能となった。すなわち、この空間内であれ
ば測定容器を横に幾つ並べても、縦に幾つ積み重ねても
測定可能となった。さらに、測定容器が例えば９６穴マ
イクロプレートであっても１２０穴マイクロプレートで
あってもあるいはさらに特殊な配列のウェルを持つマイ
クロプレートであっても、この空間内に収容できる容器
であれば、同一の装置で測定が可能となった。In addition, since a magnetic field space having a uniform magnetic vector is generated, measurement can be performed wherever the measurement container is located in this space. In other words, within this space, measurement can be performed regardless of how many measurement containers are arranged horizontally or stacked vertically. Further, whether the measurement container is, for example, a 96-well microplate, a 120-well microplate, or a microplate having wells of a special arrangement, the same container can be used as long as it can be accommodated in this space. Measurement became possible with this device.

【００４５】磁石より直接空間に放出される磁力を用い
る必要が無いため、即ち測定容器のウェル分の磁石を用
意する必要もなく、また測定容器が充分納まる磁極面積
を有する磁石を用意する必要もないため、磁気発生装置
の大きさや形状などを自由に設計可能となった。マイク
ロプレート等の多検体を同時に測定する容器に於いても
試料溶液の入るウェル１つに対して磁石１つという形を
とる必要が無いために、１つ１つの磁石の磁力の相違に
よるウェル間差を心配する必要もなくなった。本発明の
磁気発生装置と免疫学的測定法は、自動分析装置への組
み込み及び測定法の自動化に好適である。Since there is no need to use the magnetic force emitted directly from the magnet into the space, that is, there is no need to prepare a magnet for the well of the measuring container, and it is also necessary to prepare a magnet having a magnetic pole area enough to accommodate the measuring container. Therefore, the size and shape of the magnetic generator can be freely designed. Even in a container such as a microplate for simultaneously measuring multiple specimens, there is no need to take the form of one magnet for each well in which a sample solution enters , so the well-to-well difference due to the difference in magnetic force of each magnet. You no longer need to worry about the difference. The magnetic generator and immunoassay of the present invention are suitable for incorporation into an automatic analyzer and automation of the assay.

【００４６】[0046]

【実施例】以下、実施例にしたがって本発明を説明する
が、本発明はこれら実施例によって何等限定されるもの
ではない。 実施例１ 磁気発生装置とＨＢｓ抗原測定 (1) 磁気発生装置の製作装置１：図１に示すように、水
平な板（実験台）の上に100x100x10mmの大きさの角型フ
ェライト磁石１をＮ極が上を向くように置き、発砲スチ
ロール製支持柱３の５０ｍｍの高さの溝４に180x150x2m
m の鉄板２を差し込んで水平に配した。測定容器は、こ
の鉄板２上のほぼ中央に置く。この角形フェライト磁石
１の磁極は100x100mm の面にあり、その磁極表面の磁束
密度は中央が約２５０ガウスで４隅は約１１００ガウス
であった。EXAMPLES The present invention will be described below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples. Example 1 Magnetic Generator and HBs Antigen Measurement (1) Magnetic Generator Manufacturing Apparatus 1: As shown in FIG. 1, a square ferrite magnet 1 having a size of 100 × 100 × 10 mm was placed on a horizontal plate (an experimental bench). Place it with the poles facing upward, 180x150x2m in the 50mm high groove 4 of the Styrofoam support post 3
m of iron plate 2 was inserted and arranged horizontally. The measuring container is placed almost at the center on the iron plate 2. The magnetic poles of this square ferrite magnet 1 were on a surface of 100 × 100 mm, and the magnetic flux density on the surface of the magnetic pole was about 250 gauss at the center and about 1100 gauss at the four corners.

【００４７】装置２：前記装置１の180x150x2mm の鉄板
２を180x150x0.3mm の鉄板に換えた装置を製作した。測
定容器は、この鉄板上のほぼ中央に置く。 装置３：図２に示すように、水平な板（実験台）の上に
180x150x 2mmの鉄板２を水平に置き、この鉄板２の端に
円形フェライト磁石７（30mmφx 10mm）５個をＮ極がす
べて上を向くように縦に積み上げて置いた。測定容器
は、この鉄板２上のほぼ中央に置く。この円形フェライ
ト磁石７の磁極は30mmφの面にあり、その強さは約９５
０ガウスであった。Apparatus 2: An apparatus was prepared in which the iron plate 2 of 180 × 150 × 2 mm of the above-mentioned apparatus 1 was replaced with an iron plate of 180 × 150 × 0.3 mm. The measuring container is placed almost at the center on this iron plate. Apparatus 3: As shown in FIG. 2, on a horizontal plate (lab bench)
An iron plate 2 of 180 × 150 × 2 mm was placed horizontally, and five circular ferrite magnets 7 (30 mm × 10 mm) were vertically stacked on the end of the iron plate 2 such that all N poles faced upward. The measuring container is placed almost at the center on the iron plate 2. The magnetic pole of this circular ferrite magnet 7 is on a surface of 30 mmφ, and its strength is about 95 mm.
It was 0 Gauss.

【００４８】装置４：図３に示すように、水平な板（実
験台）の上に180x150x2mm の鉄板２を水平に置き、この
上に円形フェライト磁石７(30mm φx 10mm) ２個をそれ
ぞれ鉄板の４隅の内２カ所にＮ極が両方とも上を向くよ
うに置いた。測定容器は、この鉄板２上のほぼ中央に置
く。 装置５：図４に示すように、水平な板（実験台）の上に
100x100x10mmの大きさの角型フェライト磁石１をＮ極が
上を向くように置き、発砲スチロール製支持柱３の７０
ｍｍの高さの溝５と１１０ｍｍの高さの溝６に180x150x
2mm の鉄板２、２’を差し込んで水平に配した。磁石１
の磁極と鉄板２、２’との距離は、それぞれ６０ｍｍ、
１００ｍｍとなる。測定容器は、この下の鉄板２上のほ
ぼ中央に置く。Apparatus 4: As shown in FIG. 3, an iron plate 2 of 180 × 150 × 2 mm is placed horizontally on a horizontal plate (test bench), and two circular ferrite magnets 7 (30 mm φ × 10 mm) are placed on each of the iron plates. Two N poles were placed in two of the four corners so that both faced upward. The measuring container is placed almost at the center on the iron plate 2. Apparatus 5: As shown in FIG. 4, on a horizontal plate (lab bench)
A square ferrite magnet 1 having a size of 100 × 100 × 10 mm is placed so that the N pole faces upward.
180x150x in groove 5 of height 5mm and groove 6 of height 110mm
The 2 mm iron plates 2, 2 'were inserted and arranged horizontally. Magnet 1
The distance between the magnetic pole and the iron plates 2, 2 'is 60 mm, respectively.
100 mm. The measuring container is placed substantially at the center on the iron plate 2 below.

【００４９】装置６：図５に示すように、発泡スチロー
ル製支持台８の溝９に180x150x 2mmの鉄板２を水平に差
込み、この鉄板の端に円形フェライト磁石７（30mmφx
10mm）５個をＮ極がすべて上を向くように縦に積み上げ
て置いて、支持台８の上にもう１枚の鉄板２’（180x15
0x 2mm）を乗せた。測定容器は、鉄板２上のほぼ中央に
置く。Apparatus 6: As shown in FIG. 5, an iron plate 2 of 180 × 150 × 2 mm is inserted horizontally into a groove 9 of a support 8 made of styrene foam, and a circular ferrite magnet 7 (30 mmφx) is inserted into an end of the iron plate.
10mm) 5 pieces are piled up vertically with all N poles facing up, and another iron plate 2 '(180x15
0x 2mm). The measuring container is placed almost at the center on the iron plate 2.

【００５０】装置７：図６に示すように、水平な板（実
験台）の上に180x150x 2mmの鉄板２を水平に置き、この
上に電磁石１０を乗せ、さらにその上にもう１枚の鉄板
２’を紙製の支柱１２をかませて水平に乗せた。尚、こ
こで用いた電磁石１０は、20mmφx100mmの円柱状の鉄芯
に、0.26mmφのエナメル線１１を約３千回巻き付けて製
作したソレノイドで、エナメル線１１に直流１２Ｖ、１
５０ｍＡの電流を流した。この時、電磁石１０の両端の
磁力は約３００ガウス前後で、測定容器を配する装置内
は約２０ガウス前後であった。測定容器は、下の鉄板２
上のほぼ中央に置く。Apparatus 7: As shown in FIG. 6, an iron plate 2 of 180 × 150 × 2 mm is placed horizontally on a horizontal plate (an experimental bench), an electromagnet 10 is placed thereon, and another iron plate is further placed thereon. 2 ′ was placed horizontally with a paper column 12 held in place. The electromagnet 10 used here is a solenoid manufactured by winding a 0.26 mmφ enamel wire 11 about 3,000 times around a cylindrical iron core of 20 mmφ × 100 mm.
A current of 50 mA was passed. At this time, the magnetic force at both ends of the electromagnet 10 was about 300 Gauss, and the inside of the apparatus in which the measurement container was arranged was about 20 Gauss. The measuring container is the iron plate 2 below.
Place it almost in the center above.

【００５１】装置８：図７に示すように鉄製の試験管立
て１３の中央の格子１４上に円形フェライト磁石７（30
mmφx 10mm）をＮ極が総て上を向くように２個と３個積
み上げて置き、中央の格子１４上の中央に高さ約１０ｍ
ｍの紙製の台１５を置いた。ここで用いた鉄製の試験管
立て１３は、エンザイモシェイカー（シノテスト社製）
に付属しているもので、大きさは106x210x105mm で格子
の１辺の長さは19mmである。この試験管立ては、鉄の骨
組みの上に樹脂製の被膜を施してある。測定容器は、紙
製の台１５の上に置く。Apparatus 8: As shown in FIG. 7, a circular ferrite magnet 7 (30
mmφx 10mm) are stacked and placed so that all N poles face upward, and a height of about 10m is set at the center on the center grid 14.
m of paper stand 15 was placed. The iron test tube stand 13 used here was an Enzymo Shaker (manufactured by Sinotest).
The size is 106x210x105mm and the length of one side of the grid is 19mm. In this test tube stand, a resin coating is applied on an iron frame. The measuring container is placed on a paper table 15.

【００５２】装置９：図８に示すように、水平な板（実
験台）の上に４個の円形フェライト磁石７（30mmφx 10
mm）をＮ極が総て上を向くように配し、発泡スチロール
製支持柱３の７０ｍｍの高さの溝５にプラスチック板１
６（180x150x 1mm）を、１１０ｍｍの高さの溝６に鉄板
２（180x150x 2mm）をそれぞれ水平に配した。この４個
の磁石７の中心間距離は約６０ｍｍである。測定容器
は、このプラスチック板１６上のほぼ中央に置く。 (2) 希釈液Ａの調製 カゼインナトリウム（和光純薬社製）１５グラムを０．
０５％ＮａＮ ₃ −１００ｍＭＮａＣｌ−５０ｍＭトリス
塩酸緩衝液（ｐＨ８）３リットルに加えて溶解した。以
下、希釈液Ａとは上記組成のものをさす。 (3) 抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子担体の調製 磁性粒子担体（Dynabeads M-450 uncoated, ダイナル社
製）と抗ＨＢｓモノクローナル抗体（シノテスト社製）
を混合し、３７℃で３０分間反応させた。ここに希釈液
Ａを約２０倍量加えて反応させた後、希釈液Ａにて洗浄
後、磁性粒子担体が約０．１％となるように希釈液Ａに
て再分散させて、抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子担体懸濁液
を、調製した。 (4) 抗ＨＢｓ抗体結合マイクロプレートの調製 抗ＨＢｓモノクローナル抗体（シノテスト社製）を、
０．０５％ＮａＮ ₃ を含む等張化燐酸緩衝液（ＰＢＳ）
にて希釈し、９６穴Ｕ型マイクロプレート（ヌンク社
製）の各穴に５０μｌづつ分注した。室温または３７℃
にて反応させた後、各穴の液を吸引除去し希釈液Ａ１０
０〜２００μｌを各穴に加え、再度室温または３７℃に
て反応させた。しかる後に、各穴を精製水にて洗浄し、
抗ＨＢｓ抗体結合マイクロプレートとした。 (5) ＨＢｓ抗原の測定 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を希釈液Ａにて１ng/m
l に希釈した後、前記(4) の抗ＨＢｓ抗体結合マイクロ
プレートのＡ，Ｃ，Ｅ，Ｇの各レーン４８穴に２５μｌ
づつ加えた。さらに、残りのＢ，Ｄ，Ｆ，Ｈの各レーン
４８穴には、対照として希釈液Ａを２５μｌづつ加え
た。この様なマイクロプレートを９枚用意し、前記(3)
の抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子担体懸濁液２５μｌを各穴
に加え、マイクロプレートミキサーにて約１分間攪拌の
後、上記(1) の装置１〜９にて各々１枚ずつ５分間磁力
を作用させ、装置より降ろして約１〜２分後に各ウェル
の凝集像を観察した。 各マイクロプレートの各ウェル
に加えたＨＢｓ抗原濃度を、表１に示した。Apparatus 9: As shown in FIG. 8, four circular ferrite magnets 7 (30 mmφ × 10
mm) are arranged so that all N poles face upward, and a plastic plate 1 is inserted into a groove 5 having a height of 70 mm of a support column 3 made of polystyrene.
6 (180 × 150 × 1 mm) and the iron plate 2 (180 × 150 × 2 mm) were arranged horizontally in the groove 6 having a height of 110 mm. The center distance between the four magnets 7 is about 60 mm. The measuring container is placed substantially at the center on the plastic plate 16. (2) Preparation of Diluent A 15 g of sodium caseinate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added to 0.
The solution was added to 3 liters of 05% NaN ₃ -100 mM NaCl-50 mM Tris-HCl buffer (pH 8) and dissolved. Hereinafter, the diluent A refers to one having the above composition. (3) Preparation of anti-HBs antibody-bound magnetic particle carrier Magnetic particle carrier (Dynabeads M-450 uncoated, manufactured by Dynal) and anti-HBs monoclonal antibody (manufactured by Sinotest)
And reacted at 37 ° C. for 30 minutes. After reaction by adding about 20-fold amount of diluent A here, washed with diluted solution A, redispersed by diluting solution A as magnetic particle carrier is about 0.1%, anti-HBs An antibody-bound magnetic particle carrier suspension was prepared. (4) Preparation of anti-HBs antibody binding microplate Anti-HBs monoclonal antibody (manufactured by Sinotest) was
Isotonic phosphate buffer (PBS) containing 0.05% NaN ₃
And 50 μl was dispensed into each well of a 96-well U-type microplate (manufactured by Nunc). Room temperature or 37 ° C
After the reaction, the liquid in each hole is removed by suction, and the diluent A10
0 to 200 µl was added to each well, and the reaction was performed again at room temperature or at 37 ° C. After that, wash each hole with purified water,
An anti-HBs antibody binding microplate was used. (5) Measurement of HBs antigen Purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairies Co., Ltd.) was diluted to 1 ng / m with diluent A.
Then, 25 μl was added to 48 wells of each of the A, C, E and G lanes of the anti-HBs antibody-bound microplate described in (4) above.
Added one by one. Further, 25 μl of the diluent A was added as a control to each of the remaining 48 wells of B, D, F, and H lanes. Nine such microplates are prepared, and (3)
25 μl of the suspension of the magnetic particle carrier binding to the anti-HBs antibody was added to each well, and the mixture was stirred for about 1 minute with a microplate mixer, and magnetic force was applied to each of the apparatuses 1 to 9 in the above (1) for 5 minutes. Then, after about 1 to 2 minutes from the removal from the apparatus, the aggregation image of each well was observed. Table 1 shows the concentration of HBs antigen added to each well of each microplate.

【００５３】[0053]

【表１】 [Table 1]

【００５４】図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃに示すよう
に、ウェル底面に一様に広がった像を示した場合を陽性
（＋）、ウェル底面に広がりきれずに僅かに収束した像
を示した場合を弱陽性（±）、ウェル底面中央に磁性粒
子担体が収束した像を示した場合を陰性（−）と判定し
た。装置１の結果を表２に示した。装置２以下も全く同
様であった。As shown in FIGS. 10A, 10B, and 10C, a case where an image uniformly spread on the bottom of the well was shown as positive (+), and an image which was slightly converged without being fully spread on the bottom of the well was shown. The case was judged as weakly positive (±), and the case where an image in which the magnetic particle carrier was converged at the center of the bottom of the well was judged as negative (−). Table 2 shows the results of the apparatus 1. The same was true for the devices 2 and below.

【００５５】[0055]

【表２】 [Table 2]

【００５６】ＨＢｓ抗原陽性のウェル（Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｇ
の各レーン）と陰性のウェル（Ｂ，Ｄ，Ｆ，Ｈの各レー
ン）は、装置１〜９のいずれに於いても明確に判別され
た。また、装置１と装置３に於いて、Ｎ極とＳ極を入れ
替える実験を行なったが、表２と同様な結果が得られ
た。本実施例により、前記(1) の装置１〜９のいずれを
用いても本発明の免疫学的測定が可能であることが示さ
れた。HBs antigen-positive wells (A, C, E, G
Lanes) and negative wells (B, D, F, H lanes) were clearly discriminated in any of the apparatuses 1 to 9. Further, an experiment was performed in which the N pole and the S pole were exchanged in the apparatus 1 and the apparatus 3, and the same result as in Table 2 was obtained. According to this example, it was shown that the immunological measurement of the present invention can be performed using any of the devices 1 to 9 of the above (1).

【００５７】実施例２ マイクロプレート２枚同時測定と測定感度 (1) ＨＢｓ抗原の測定 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を実施例１の(2) に示
した希釈液Ａにて2.0ng/ml,1.0ng/ml,0.5ng/ml,0.25ng/
ml,0.13ng/ml,0.063ng/ml,0.031ng/mlとなる様に希釈し
た各溶液を調製し、実施例１の(4) の抗ＨＢｓ抗体結合
マイクロプレートのレーン１，２，５，６，９，１０の
Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇの各ウェルに２５μｌづ
つ、レーン３，４，７，８，１１，１２のＨ，Ｇ，Ｆ，
Ｅ，Ｄ，Ｃ，Ｂに２５μｌづつそれぞれ順に各溶液を加
えた。また、レーン１，２，５，６，９，１０のＨ及び
レーン３，４，７，８，１１，１２のＡの各ウェルに
は、実施例１の(2) に示した希釈液Ａを２５μｌづつ加
えた。この様にして調製したマイクロプレートを２枚用
意し、実施例１の(3) の抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子担体
懸濁液２５μｌを各穴に加え、マイクロプレートミキサ
ーにて約１分間攪拌の後、この２枚のマイクロプレート
を上下に重ねて、実施例１の(1) で示した装置５に乗
せ、同時に５分間磁力を作用させた。そして、装置より
降ろし約２分後に各ウェルの凝集像を観察した。Example 2 Simultaneous measurement of two microplates and measurement sensitivity (1) Measurement of HBs antigen Purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairy Co., Ltd.) was diluted to 2.0 ng / H with the diluent A shown in (2) of Example 1. ml, 1.0ng / ml, 0.5ng / ml, 0.25ng /
ml, 0.13 ng / ml, 0.063 ng / ml, and 0.031 ng / ml, respectively, were prepared, and the lanes 1, 2, 5, and 5 of the anti-HBs antibody-bound microplate of Example 1 (4) were prepared. In each of the wells of A, B, C, D, E, F, and G of 6, 9, and 10, 25 μl of each of the H, G, F, and Lanes of lanes 3, 4, 7, 8, 11, 12
Each solution was added to E, D, C, and B in order of 25 μl. The wells of H in lanes 1, 2, 5, 6, 9, and 10 and the wells of A in lanes 3, 4, 7, 8, 11, and 12 are shown in (2) of Example 1. Diluent A was added in 25 μl portions. Two microplates prepared in this manner were prepared, and 25 μl of the suspension of the anti-HBs antibody-bound magnetic particle carrier of Example 1 (3) was added to each well, and the mixture was stirred for about 1 minute with a microplate mixer. The two microplates were placed one on top of the other and placed on the device 5 shown in (1) of Example 1, and a magnetic force was simultaneously applied for 5 minutes. Then, about 2 minutes after the sample was taken down from the apparatus, an aggregation image of each well was observed.

【００５８】各ウェルに加えたＨＢｓ抗原濃度を、表３
に示した。Table 3 shows the concentration of HBs antigen added to each well.
It was shown to.

【００５９】[0059]

【表３】 [Table 3]

【００６０】図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃに示すよう
に、ウェル底面に一様に広がった像を示した場合を陽性
（＋）、ウェル底面に広がりきれずに僅かに収束した像
を示した場合を弱陽性（±）、ウェル底面中央に磁性粒
子担体が収束した像を示した場合を陰性（−）と判定し
た。結果を表４と表５に示した。表４は上に置いたプレ
ートの結果で、表５は下に置いたプレートの結果であ
る。As shown in FIG. 10A, FIG. 10B and FIG. 10C, a case where an image uniformly spread on the bottom of the well was shown as positive (+), and an image which was slightly converged without being fully spread on the bottom of the well was shown. The case was judged as weakly positive (±), and the case where an image in which the magnetic particle carrier was converged at the center of the bottom of the well was judged as negative (−). The results are shown in Tables 4 and 5. Table 4 shows the results for the plate placed above, and Table 5 shows the results for the plate placed below.

【００６１】[0061]

【表４】 [Table 4]

【００６２】[0062]

【表５】 [Table 5]

【００６３】表４、５に示すように上下２枚の両プレー
トとも、プレートの差によるあるいは同一プレート内の
ウェル間差による凝集感度の相違は少なく、良好な結果
が得られた。本法により、ＨＢｓ抗原が高感度に測定可
能となることが示された。また、本実施例により、磁気
ベクトルの均一な磁場空間を用いれば測定容器を縦に積
み重ねても測定感度に問題の無いことが示された。As shown in Tables 4 and 5, in both the upper and lower plates, there was little difference in the aggregation sensitivity due to the difference between the plates or the difference between the wells in the same plate, and good results were obtained. It was shown that this method makes it possible to measure HBs antigen with high sensitivity. Further, according to the present example, it was shown that there is no problem in the measurement sensitivity even when the measurement containers are stacked vertically if a magnetic field space having a uniform magnetic vector is used.

【００６４】実施例３ 間欠磁力の効果 (1) ＨＢｓ抗原の測定 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を実施例１の(2) に示
した希釈液Ａにて2.0ng/ml,1.0ng/ml,0.5ng/ml,0.25ng/
ml,0.13ng/ml,0.063ng/ml,0.031ng/mlとなる様に希釈し
た各溶液を調製し、実施例１の(4) の抗ＨＢｓ抗体結合
マイクロプレートを用いて、実施例２の(1) と同様に各
穴に加えた。また、レーン１，２，５，６，９，１０の
Ｈ及びレーン３，４，７，８，１１，１２のＡの各ウェ
ルには、実施例１の(2) に示した希釈液Ａを２５μｌづ
つ加えた。実施例１の(3) の抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子
担体懸濁液２５μｌを各穴に加え、マイクロプレートミ
キサーにて約１分間攪拌の後、実施例１の(1) で示した
装置５に乗せ５分間磁力を作用させた。但し、装置５の
角形フェライト磁石１を３０秒間に１０秒間引き抜い
て、磁力を作用させる時間を２／３にした。そして、装
置より降ろし各ウェルの凝集像を観察した。Example 3 Effect of Intermittent Magnetic Force (1) Measurement of HBs Antigen Purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairies Co., Ltd.) was diluted to 2.0 ng / ml and 1.0 ng / ml with the diluent A shown in (2) of Example 1. ml, 0.5ng / ml, 0.25ng /
ml, 0.13 ng / ml, 0.063 ng / ml, and 0.031 ng / ml were prepared, and the anti-HBs antibody-bound microplate of Example 1 (4) was used. A hole was added to each hole as in (1). Further, the diluent A shown in (2) of Example 1 was added to each well of lanes 1, 2, 5, 6, 9, and 10 and H of lanes 3, 4, 7, 8, 11, and 12. Was added in 25 μl portions. 25 μl of the anti-HBs antibody-bound magnetic particle carrier suspension of Example 1 (3) was added to each well, and the mixture was stirred for about 1 minute with a microplate mixer, and then added to the device 5 shown in (1) of Example 1. A magnetic force was applied for 5 minutes. However, the square ferrite magnet 1 of the device 5 was pulled out for 10 seconds in 30 seconds, and the time for applying the magnetic force was reduced to 2/3. Then, the sample was taken down from the apparatus and an aggregation image of each well was observed.

【００６５】各ウェルに加えたＨＢｓ抗原濃度は、表３
と同様である。図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃに示すよ
うに、ウェル底面に一様に広がった像を示した場合を陽
性（＋）、ウェル底面に広がりきれずに僅かに収束した
像を示した場合を弱陽性（±）、ウェル底面中央に磁性
粒子担体が収束した像を示した場合を陰性（−）と判定
した。結果を表６に示した。Table 3 shows the concentration of HBs antigen added to each well.
Is the same as As shown in FIG. 10A, FIG. 10B, and FIG. 10C, a case where an image uniformly spread on the bottom of the well is shown as positive (+), and a case where an image which is not fully spread on the bottom of the well and slightly converged is shown is weak. Positive (±) and the case where the magnetic particle carrier showed an image converged at the center of the bottom of the well were judged as negative (−). The results are shown in Table 6.

【００６６】[0066]

【表６】 [Table 6]

【００６７】実施例２の(1) に比べ測定感度の若干の上
昇が確認された。また、データは示さないが装置５にて
同様な操作を５分間の２／３即ち３分２０秒間連続して
行なった場合の凝集像は本実施例ほど明確なものではな
かった。本実施例により、磁性粒子担体に間欠的に磁力
を作用させることにより、より高感度な測定が可能とな
ることが示された。It was confirmed that the measurement sensitivity was slightly increased as compared with (1) of Example 2. Although no data is shown, the aggregated image obtained when the same operation was continuously performed on the apparatus 5 for 2/3 of 5 minutes, that is, for 3 minutes and 20 seconds, was not as clear as in this example. According to the present example, it was shown that more sensitive measurement can be performed by intermittently applying a magnetic force to the magnetic particle carrier.

【００６８】実施例４ ＳＮ反転の効果 (1) ＨＢｓ抗原の測定 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を実施例１の(2) に示
した希釈液Ａにて2.0ng/ml,1.0ng/ml,0.5ng/ml,0.25ng/
ml,0.13ng/ml,0.063ng/ml,0.031ng/mlとなる様に希釈し
た各溶液を調製し、実施例１の(4) の抗ＨＢｓ抗体結合
マイクロプレートを用いて、実施例２の(1) と同様に各
穴に加えた。また、レーン１，２，５，６，９，１０の
Ｈ及びレーン３，４，７，８，１１，１２のＡの各ウェ
ルには、実施例１の(2) に示した希釈液Ａを２５μｌづ
つ加えた。実施例１の(3) の抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子
担体懸濁液２５μｌを各穴に加え、マイクロプレートミ
キサーにて約１分間攪拌の後、実施例１の(1) で示した
装置５に乗せ５分間磁力を作用させた。但し、装置５の
角形フェライト磁石１を１５秒毎に装置より引き出し
て、ＳとＮを裏返した。尚、磁石を引出しＳとＮを反転
させ再度配置するのに、１回毎約５秒間を要したため、
実際に磁力を作用させた時間は、３分３０秒程度であっ
た。Example 4 Effect of SN reversal (1) Measurement of HBs antigen Purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairies Co., Ltd.) was diluted to 2.0 ng / ml and 1.0 ng / ml with the diluent A shown in (2) of Example 1. ml, 0.5ng / ml, 0.25ng /
ml, 0.13 ng / ml, 0.063 ng / ml, and 0.031 ng / ml were prepared, and the anti-HBs antibody-bound microplate of Example 1 (4) was used. A hole was added to each hole as in (1). Further, the diluent A shown in (2) of Example 1 was added to each well of lanes 1, 2, 5, 6, 9, and 10 and H of lanes 3, 4, 7, 8, 11, and 12. Was added in 25 μl portions. 25 μl of the anti-HBs antibody-bound magnetic particle carrier suspension of Example 1 (3) was added to each well, and the mixture was stirred for about 1 minute with a microplate mixer, and then added to the device 5 shown in (1) of Example 1. A magnetic force was applied for 5 minutes. However, the square ferrite magnet 1 of the device 5 was pulled out of the device every 15 seconds, and S and N were turned over. In addition, since it took about 5 seconds each time to draw out the magnets, reverse the S and N, and arrange them again,
The time when the magnetic force was actually applied was about 3 minutes and 30 seconds.

【００６９】各ウェルに加えたＨＢｓ抗原濃度は、表３
と同様である。図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃに示すよ
うに、ウェル底面に一様に広がった像を示した場合を陽
性（＋）、ウェル底面に広がりきれずに僅かに収束した
像を示した場合を弱陽性（±）、ウェル底面中央に磁性
粒子担体が収束した像を示した場合を陰性（−）と判定
した。結果を表７に示した。Table 3 shows the concentration of HBs antigen added to each well.
Is the same as As shown in FIG. 10A, FIG. 10B, and FIG. 10C, a case where an image uniformly spread on the bottom of the well is shown as positive (+), and a case where an image which is not fully spread on the bottom of the well and slightly converged is shown is weak. Positive (±) and the case where the magnetic particle carrier showed an image converged at the center of the bottom of the well were judged as negative (−). The results are shown in Table 7.

【００７０】[0070]

【表７】 [Table 7]

【００７１】実施例２の(1) に比べ測定感度の低下が確
認されたが、陰性像が非常に良く収束し明確であった。
本実施例により、磁性粒子担体に作用させる磁力のＳＮ
を反転させる操作を行なうことにより、陰性像がより小
さく収束し、凝集像の判定がより明確になることが示さ
れた。Although a decrease in the measurement sensitivity was confirmed as compared with (1) of Example 2, the negative image was very well converged and clear.
According to this embodiment, the SN of the magnetic force acting on the magnetic particle carrier
It was shown that by performing the operation of reversing, the negative image converged to a smaller extent, and the judgment of the aggregated image became clearer.

【００７２】実施例５ 交番磁界装置 (1) 磁気発生装置の製作 装置１０：実施例１の(1) の装置７に於いて、電磁石１
０のエナメル線１１の両端に交流５０Ｈｚ、８０Ｖの電
圧をかけた。この時、電磁石１０の両端の磁力は約２２
０ガウス（ＡＣ）前後で、測定容器を配する装置内は約
９ガウス（ＡＣ）前後であった。測定容器は、下の鉄板
２上のほぼ中央に置く。 (2) ＨＢｓ抗原の測定 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を実施例１の(2) に示
した希釈液Ａにて2.0ng/ml,1.0ng/ml,0.5ng/ml,0.25ng/
ml,0.13ng/ml,0.063ng/ml,0.031ng/mlとなる様に希釈し
た各溶液を調製し、実施例１の(4) の抗ＨＢｓ抗体結合
マイクロプレートを用いて、実施例２の(1) と同様に各
穴に加えた。また、レーン１，２，５，６，９，１０の
Ｈ及びレーン３，４，７，８，１１，１２のＡの各ウェ
ルには、実施例１の(2) に示した希釈液Ａを２５μｌづ
つ加えた。実施例１の(3) の抗ＨＢｓ抗体結合磁性粒子
担体懸濁液２５μｌを各穴に加え、マイクロプレートミ
キサーにて約１分間攪拌の後、前記(1) で示した装置１
０に乗せ１０分間磁力を作用させた。そして、装置より
降ろし各ウェルの凝集像を観察した。Example 5 Alternating Magnetic Field Apparatus (1) Production of Magnetic Generator Apparatus 10: In the apparatus 7 of (1) of Example 1, the electromagnet 1
A voltage of AC 50 Hz and 80 V was applied to both ends of the enamel wire 11 of zero. At this time, the magnetic force at both ends of the electromagnet 10 is about 22
It was around 0 Gauss (AC), and the inside of the apparatus in which the measurement container was arranged was around 9 Gauss (AC). The measuring container is placed almost at the center on the lower iron plate 2. (2) Measurement of HBs antigen Purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairy Co., Ltd.) was diluted with the diluent A shown in (2) of Example 1 to 2.0 ng / ml, 1.0 ng / ml, 0.5 ng / ml, 0.25 ng / ml.
ml, 0.13 ng / ml, 0.063 ng / ml, and 0.031 ng / ml were prepared, and the anti-HBs antibody-bound microplate of Example 1 (4) was used. A hole was added to each hole as in (1). Further, the diluent A shown in (2) of Example 1 was added to each well of lanes 1, 2, 5, 6, 9, and 10 and H of lanes 3, 4, 7, 8, 11, and 12. Was added in 25 μl portions. 25 μl of the anti-HBs antibody-bound magnetic particle carrier suspension of Example 1 (3) was added to each well, and the mixture was stirred for about 1 minute with a microplate mixer.
0 and a magnetic force was applied for 10 minutes. Then, the sample was taken down from the apparatus and an aggregation image of each well was observed.

【００７３】各ウェルに加えたＨＢｓ抗原濃度は、表３
と同様である。図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃに示すよ
うに、ウェル底面に一様に広がった像を示した場合を陽
性（＋）、ウェル底面に広がりきれずに僅かに収束した
像を示した場合を弱陽性（±）、ウェル底面中央に磁性
粒子担体が収束した像を示した場合を陰性（−）と判定
した。結果を表８に示した。Table 3 shows the concentration of HBs antigen added to each well.
Is the same as As shown in FIG. 10A, FIG. 10B, and FIG. 10C, a case where an image uniformly spread on the bottom of the well is shown as positive (+), and a case where an image which is not fully spread on the bottom of the well and slightly converged is shown is weak. Positive (±) and the case where the magnetic particle carrier showed an image converged at the center of the bottom of the well were judged as negative (−). The results are shown in Table 8.

【００７４】[0074]

【表８】 [Table 8]

【００７５】実施例１から実施例３の何れの結果より
も、陰性像が鮮明に観察された。本実施例により、磁性
粒子担体に作用させる磁力は交番磁界の磁力を用いても
測定可能であることが示され、かつ交番磁界を用いれば
陰性像がより明確になることも示された。 実施例６ マイクロプレート７枚同時測定 (1) ＨＢｓ抗原の測定 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を実施例１の(2) にて
示した希釈液Ａにて１ng/ml に希釈した後、実施例１の
(4) の抗ＨＢｓ抗体結合マイクロプレートのＡ，Ｃ，
Ｅ，Ｇの各レーン４８穴に２５μｌづつ加えた。さら
に、残りのＢ，Ｄ，Ｆ，Ｈの各レーン４８穴には、対照
として希釈液Ａを２５μｌづつ加えた。この様なマイク
ロプレートを７枚用意し、実施例１の(3) の抗ＨＢｓ抗
体結合磁性粒子担体懸濁液２５μｌを各穴に加え、マイ
クロプレートミキサーにて約１分間攪拌の後、７枚のマ
イクロプレートを縦に積み重ねて、実施例１の(1) の装
置７にて、同時に５分間磁力を作用させた後、装置より
降ろし、約１〜２分後に各ウェルの凝集像を観察した。From any of the results of Examples 1 to 3,
Also , a negative image was clearly observed. According to the present example, it was shown that the magnetic force acting on the magnetic particle carrier can be measured even by using the magnetic force of the alternating magnetic field, and that the use of the alternating magnetic field makes the negative image clearer. Example 6 Simultaneous measurement of seven microplates (1) Measurement of HBs antigen After diluting purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairy Co., Ltd.) with diluent A shown in (2) of Example 1 to 1 ng / ml, Example 1
(4) A, C, of the anti-HBs antibody binding microplate
25 μl was added to 48 wells of each of E and G lanes. Further, 25 μl of the diluent A was added as a control to each of the remaining 48 wells of B, D, F, and H lanes. Seven such microplates were prepared, and 25 μl of the anti-HBs antibody-bound magnetic particle carrier suspension of Example 1 (3) was added to each well. After stirring for about 1 minute with a microplate mixer, seven microplates were prepared. The microplates were vertically stacked, and a magnetic force was simultaneously applied for 5 minutes in the device 7 of (1) of Example 1 and then lowered from the device. After about 1 to 2 minutes, an aggregation image of each well was observed. .

【００７６】各ウェルに加えたＨＢｓ抗原濃度は表１と
同様である。結果は７枚とも同様で、表９に７枚の結果
を代表して１つ示した。The concentration of HBs antigen added to each well is the same as in Table 1. The results were the same for the seven sheets, and Table 9 shows one of the seven results.

【００７７】[0077]

【表９】 [Table 9]

【００７８】各プレートの各ウェルとも陽性像及び陰性
像は明確に判別され、装置７にて７枚同時に測定可能な
ことが確認された。本実施例により、磁気ベクトルの均
一な磁場空間を用いれば、測定容器が縦に幾つ積み重な
っていても測定可能であることが示された。 実施例７ 水平磁界による測定 (1) 磁気発生装置の製作 装置１１：図９の様に実施例１の(1) の装置７を横にし
た装置を製作した。鉄板２、２’の１５０ｍｍの辺が縦
になるようにした。この中に90x48x90mmのプラスチック
台１７を置いた。測定容器は、このプラスチック台１７
の上に置く。その他は実施例１の(1) の装置７と同様で
ある。(2) ＨＢｓ抗原の測定 ＨＢｓ抗原の測定を 前記装置１１を用いて、実施例１の
(5) と同様な操作を行なった。A positive image and a negative image were clearly discriminated in each well of each plate, and it was confirmed that the measurement could be performed simultaneously on seven plates by the apparatus 7. According to the present example, it was shown that the measurement can be performed even if the measurement containers are vertically stacked by using a magnetic field space having a uniform magnetic vector. Example 7 Measurement by Horizontal Magnetic Field (1) Production of Magnetic Generator Apparatus 11: An apparatus in which the apparatus 7 of Example 1 (1) was laid down as shown in FIG. 9 was produced. The 150 mm sides of the iron plates 2 and 2 ′ were set to be vertical. A plastic stand 17 of 90 × 48 × 90 mm was placed in this. The measurement container is a plastic table 17
Put on. Others are the same as the device 7 of (1) of the first embodiment. (2) Measurement of HBs antigen
The same operation as (5) was performed.

【００７９】各ウェルに加えたＨＢｓ抗原濃度は、表１
と同様である。この測定の判定基準は、図１１Ａ、図１
１Ｂに示すように、ウェル底面に一様に広がった像を示
した場合を陽性（＋）、ウェル底面に広がりきれずに”
こ”の字形に収束した像を示した場合を陰性（−）とし
た。結果を表１０に示した。Table 1 shows the concentration of HBs antigen added to each well.
Is the same as The criterion for this measurement is shown in FIGS.
As shown in FIG. 1B, a case where an image spread uniformly on the bottom of the well was shown as positive (+), and the image was not completely spread on the bottom of the well.
A case where an image converged to this character shape was indicated as negative (-). The results are shown in Table 10.

【００８０】[0080]

【表１０】 [Table 10]

【００８１】表１０に示したように、ＨＢｓ抗原陽性の
ウェル（Ａ，Ｃ，Ｅ，Ｇの各レーン）と陰性のウェル
（Ｂ，Ｄ，Ｆ，Ｈの各レーン）は、明確に判別された。
また、さらに磁力を作用させる時間を長くすると、陽性
像が陰性像とは９０゜角度の異なる”い”の字型にウェ
ル底面で収束した。この”い”の字型は陰性像の”こ”
の字型に比べ大きいが、適当な条件を選べばこれによっ
ても陰性像と陽性像を判別可能であると思われる。As shown in Table 10, HBs antigen positive wells (A, C, E, G lanes) and negative wells (B, D, F, H lanes) were clearly discriminated. Was.
Further, when the time for applying the magnetic force was further extended, the positive image converged at the bottom of the well into an “I” shape having an angle of 90 ° different from that of the negative image. The shape of this “I” is a negative image “Ko”
Although it is larger than the character shape, it seems that a negative image and a positive image can also be distinguished by selecting appropriate conditions.

【００８２】本実施例により、測定容器に対して水平方
向（重力に対して垂直方向）に磁力を作用させても測定
可能であることが示された。これは、本法の磁性粒子担
体に対する凝集像形成促進作用が、直接磁力の吸引作用
を用いた方法でないことを示している。 実施例８ 抗ＨＢｓ抗体測定 (1) 希釈液Ｂの調製 カゼイン（メルク社製）５グラムを、０．１％ＮａＮ ₃
−２５０ｍＭトリス塩酸緩衝液（ｐＨ８）１リットルを
加えて溶解した。以下希釈液Ｂとは、以下の組成のもの
を指す。 (2) ＨＢｓ抗原結合磁性粒子担体の調製 磁性粒子担体（Dynabeads M-450 uncoated, ダイナル社
製）と精製ＨＢｓ抗原を混合し、３７℃にて３０分間反
応させた。ここに希釈液Ｂを加え、希釈液Ｂにて洗浄
後、磁性粒子担体が０．１％となるように希釈液Ｂにて
再分散させて、ＨＢｓ抗原結合磁性粒子担体懸濁液とし
た。 (3) ＨＢｓ抗原結合８穴モジュラープレートの調製 精製ＨＢｓ抗原（明治乳業社製）を、０．０５％ＮａＮ
₃ を含む等張化燐酸緩衝液（ＰＢＳ）にて希釈し、８穴
Ｕ型モジュラープレート（シノテスト社製、専用フレー
ムに装着したもの）の各穴に５０μｌづつ分注した。３
７℃にて反応させた後、各穴中の液を吸引除去し実施例
１の(2) の希釈液Ａ２００μｌを各穴に加え、４℃にて
反応させた。しかる後に、各穴を精製水にて洗浄し、Ｈ
Ｂｓ抗原結合８穴モジュラープレートとした。尚、８穴
Ｕ型モジュラープレートは、ポリスチレン製でウェルの
大きさ及び形状は９６穴Ｕ型マイクロプレート（ヌンク
社製）とほぼ同様である。 (4) 抗ＨＢｓ抗体の測定 抗ＨＢｓモノクローナル抗体（シノテスト社製）を、希
釈液Ｂにて3.0ng/ml,1.5ng/ml,0.75ng/ml,0.38ng/ml,0.
19ng/ml,0.094ng/ml,0.047ng/ml となるように希釈した
溶液を調製し、前記(3) のＨＢｓ抗原結合８穴モジュラ
ープレートの７穴に、順に２５μｌづつ加えた。残りの
１穴には、希釈液Ｂを２５μｌ加えた。前記(2) のＨＢ
ｓ抗原結合磁性粒子担体懸濁液２５μｌを各穴に加え、
マイクロプレートミキサーにて約１分間攪拌の後、実施
例１の(1) に示した装置６にて７分間磁力を作用させた
後、装置より降ろし約３分後に凝集像を観察した。[0082] According to this embodiment, also measured by the action of magnetic force (the direction perpendicular to gravity) horizontally with respect to the measurement reservoir
It has been shown that this is possible. This indicates that the action of promoting the formation of an aggregated image on the magnetic particle carrier in the present method is not a method using a direct magnetic attraction action. Example 8 Measurement of Anti-HBs Antibody (1) Preparation of Diluent B 5 g of casein (manufactured by Merck) was added to 0.1% NaN _3.
One liter of -250 mM Tris-HCl buffer (pH 8) was added for dissolution. Hereinafter, the diluent B refers to one having the following composition. (2) Preparation of HBs Antigen-Binding Magnetic Particle Carrier A magnetic particle carrier (Dynabeads M-450 uncoated, manufactured by Dynal) and purified HBs antigen were mixed and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. Diluent B was added thereto, washed with diluent B, and then redispersed with diluent B so that the magnetic particle carrier became 0.1%, to obtain an HBs antigen-bound magnetic particle carrier suspension. (3) Preparation of HBs antigen-binding 8-well modular plate Purified HBs antigen (manufactured by Meiji Dairies) was added to 0.05% NaN
_The mixture was diluted with an isotonic phosphate buffer solution (PBS) containing ₃ and 50 μl was dispensed into each hole of an 8-well U-shaped modular plate (manufactured by Shinotest Corporation, mounted on a dedicated frame). 3
After the reaction at 7 ° C., the liquid in each well was removed by suction, and 200 μl of the diluent A of Example 1 (2) was added to each well and reacted at 4 ° C. Thereafter, each well was washed with purified water,
A Bs antigen-binding 8-well modular plate was used. The 8-well U-shaped modular plate is made of polystyrene, and the size and shape of the well are almost the same as those of a 96-well U-shaped microplate (manufactured by Nunc). (4) Measurement of anti-HBs antibody Anti-HBs monoclonal antibody (manufactured by Sinotest) was diluted with diluent B at 3.0 ng / ml, 1.5 ng / ml, 0.75 ng / ml, 0.38 ng / ml, 0.38 ng / ml.
Solutions diluted to 19 ng / ml, 0.094 ng / ml, and 0.047 ng / ml were prepared, and 25 μl of the solution was sequentially added to the 7 wells of the HBs antigen-binding 8-well modular plate described in (3) above. Diluent B (25 μl) was added to the remaining one well. HB of (2) above
Add 25 μl of s antigen-bound magnetic particle carrier suspension to each well,
After stirring for about 1 minute with a microplate mixer, a magnetic force was applied for 7 minutes with the device 6 shown in (1) of Example 1, and then the device was taken down from the device and observed about 3 minutes after aggregation.

【００８３】図１０Ａ、図１０Ｂ、図１０Ｃに示すよう
に、ウェル底面に一様に広がった像を示した場合を陽性
（＋）、ウェル底面に広がりきれずに僅かに収束した像
を示した場合を弱陽性（±）、ウェル底面中央に磁性粒
子担体が収束した像を示した場合を陰性（−）と判定し
た。結果を表１１に示した。As shown in FIG. 10A, FIG. 10B, and FIG. 10C, a case where an image uniformly spread on the bottom of the well was shown as positive (+), and an image which was slightly converged without being fully spread on the bottom of the well was shown. The case was judged as weakly positive (±), and the case where an image in which the magnetic particle carrier was converged at the center of the bottom of the well was judged as negative (−). The results are shown in Table 11.

【００８４】[0084]

【表１１】 [Table 11]

【００８５】表１１に示すように、本法により抗ＨＢｓ
抗体も、高感度に測定可能であることが示された。As shown in Table 11, the anti-HBs
It was shown that antibodies can also be measured with high sensitivity.

【００８６】[0086]

【発明の効果】以上のように、本発明により測定感度を
犠牲にすることなく、短時間での測定が可能となった。
測定に用いる磁気発生装置も簡便に多種類の測定容器に
対応可能な装置が実現でき、その設計も製作も簡単にな
った。また、磁気発生装置内での測定容器の置き方等の
制約も少なく、誰でも簡単に再現性良く測定することが
可能となった。As described above, according to the present invention, measurement can be performed in a short time without sacrificing measurement sensitivity.
As a magnetic generator used for measurement, a device capable of easily supporting various types of measurement containers can be realized, and the design and manufacture thereof have been simplified. In addition, there are few restrictions such as how to place the measurement container in the magnetic generator, and anyone can easily measure with good reproducibility.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 1 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図２】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 2 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図３】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 3 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図４】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 4 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図５】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 5 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図６】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 6 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図７】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 7 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図８】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 8 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図９】本発明により製作された磁気発生装置を示した
説明図である。FIG. 9 is an explanatory view showing a magnetic generator manufactured according to the present invention.

【図１０】磁性粒子担体に作用させる磁気ベクトルの方
向が重力に対して平行である場合のウェルの真上から観
察した場合の像を示した説明図である。FIG. 10 is an explanatory diagram showing an image observed from directly above a well when the direction of a magnetic vector acting on a magnetic particle carrier is parallel to gravity.

【図１１】磁性粒子担体に作用させる磁気ベクトルの方
向が重力に対して垂直である場合のウェルの真上から観
察した場合の像を示した説明図である。FIG. 11 is an explanatory diagram showing an image observed from directly above a well when the direction of a magnetic vector applied to a magnetic particle carrier is perpendicular to gravity.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

１ 角型フェライト磁石 ２ 鉄板 ２’鉄板 ３ 発泡スチロール製支持柱 ４ ５０ｍｍの高さの溝 ５ ７０ｍｍの高さの溝 ６ １１０ｍｍの高さの溝 ７ 円形フェライト磁石 ８ 発泡スチロール製支持台 ９ 発泡スチロール製支持台の溝 １０ 電磁石 １１ エナメル線 １２ 紙製の支柱 １３ 鉄製の試験管立て １４ 中央の格子 １５ 紙製の台 １６ プラスチック板 １７ プラスチック台1 corner type ferrite magnets 2 iron 2 'iron plate 3 Styrofoam support column 4 50 mm groove 7 circular ferrite magnet 8 Styrofoam support 9 Styrofoam support height of the groove 5 70 mm height grooves 6 110 mm height Table groove 10 Electromagnet 11 Enamel wire 12 Paper column 13 Iron test tube stand 14 Central grid 15 Paper table 16 Plastic plate 17 Plastic table

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 宮本 憲人 東京都三鷹市下連雀８丁目10番16号 日 鉄鉱業株式会社内 審査官 竹中 靖典 (56)参考文献 特開 昭60−67858（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−287159（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−6785（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/543 501 G01N 33/553 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuing on the front page (72) Inventor Norihito Miyamoto 8-10-16 Shimorenjaku, Mitaka-shi, Tokyo Japan Inspector in Iron Mining Co., Ltd. Yasunori Takenaka (56) References JP-A-60-67858 (JP, A JP-A-62-287159 (JP, A) JP-A-60-6785 (JP, A) (58) Fields investigated (Int. Cl. ⁷ , DB name) G01N 33/543 501 G01N 33/553

Claims (5)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 磁気ベクトルの均一な磁場空間を発生さ
せる手段、及び当該磁場空間の磁力に磁性粒子担体を作
用させるための手段を有することを特徴とする磁性粒子
担体を用いた間接凝集反応法用磁気発生装置。An indirect agglutination reaction method using a magnetic particle carrier, comprising: means for generating a magnetic field space having a uniform magnetic vector, and means for causing the magnetic particle carrier to act on the magnetic force of the magnetic field space. For magnetic generator. 【請求項２】 強磁性体に直接又は間接に磁石を作用さ
せることにより、当該強磁性体表面より一時的に放出さ
れる磁力線により構成される磁気ベクトルの均一な磁場
空間を発生させる手段、及び当該磁場空間の磁力に磁性
粒子担体を作用させるための手段を有することを特徴と
する磁性粒子担体を用いた間接凝集反応法用磁気発生装
置。2. A means for generating a uniform magnetic field space of a magnetic vector constituted by magnetic field lines temporarily emitted from the surface of the ferromagnetic material by directly or indirectly applying a magnet to the ferromagnetic material; A magnetic generator for an indirect agglutination reaction method using a magnetic particle carrier, comprising means for causing the magnetic particle carrier to act on the magnetic force in the magnetic field space. 【請求項３】 磁性粒子担体を用いた間接凝集反応法に
おいて、磁気ベクトルの均一な磁場空間を発生させ、当
該磁場空間の磁力を磁性粒子担体に作用させることを特
徴とする間接凝集反応法。3. An indirect agglutination reaction method using a magnetic particle carrier, wherein a magnetic field space having a uniform magnetic vector is generated, and a magnetic force in the magnetic field space acts on the magnetic particle carrier. 【請求項４】 磁性粒子担体を用いた間接凝集反応法に
おいて、強磁性体に直接又は間接に磁石を作用させるこ
とにより、当該強磁性体表面より一時的に放出される磁
力線により構成される磁気ベクトルの均一な磁場空間を
発生させ、当該磁場空間の磁力を磁性粒子担体に作用さ
せることを特徴とする間接凝集反応法。4. An indirect agglutination reaction method using a magnetic particle carrier, wherein a magnet is directly or indirectly acted on a ferromagnetic material to thereby form a magnetic field constituted by magnetic field lines temporarily released from the surface of the ferromagnetic material. An indirect agglutination reaction method characterized in that a magnetic field space having a uniform vector is generated, and a magnetic force in the magnetic field space acts on a magnetic particle carrier. 【請求項５】 磁性粒子担体に磁力を作用させるとき又
はその後に、磁性担体相互の磁気的結合を解除すること
を特徴とする請求項３または請求項４記載の間接凝集反
応法。5. The indirect aggregation reaction method according to claim 3, wherein the magnetic coupling between the magnetic carriers is released when or after applying a magnetic force to the magnetic particle carriers.