JP3302535B2 - 上皮細胞増殖促進剤 - Google Patents
上皮細胞増殖促進剤Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はマロニルイソフラボン配
糖体を上皮細胞増殖因子として含有させた、新規な上皮
細胞増殖促進剤ないし皮膚用剤に関するものである。
糖体を上皮細胞増殖因子として含有させた、新規な上皮
細胞増殖促進剤ないし皮膚用剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術及び課題】最近皮膚の細胞成長因子、例え
ば上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧ
Ｆ）等が発見され、これらの成長因子を利用して、皮膚
の老化防止を目的とする皮膚化粧料や、皮膚の創傷治癒
期間の短縮を目的とする皮膚外用剤が開発されている。
例えばグルコサミノグリカンと線維芽細胞成長因子とを
配合した皮膚化粧料（特開平４−１８７６１３）、α−
ヒドロキシ酢酸を配合した皮膚化粧料及び皮膚外用剤
（特開平５−１１２４２２）、カバノキ科植物の抽出エ
キスを含有させた皮膚老化防止化粧料（特開平６−２６
３６２７）等を挙げることができる。
ば上皮成長因子（ＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧ
Ｆ）等が発見され、これらの成長因子を利用して、皮膚
の老化防止を目的とする皮膚化粧料や、皮膚の創傷治癒
期間の短縮を目的とする皮膚外用剤が開発されている。
例えばグルコサミノグリカンと線維芽細胞成長因子とを
配合した皮膚化粧料（特開平４−１８７６１３）、α−
ヒドロキシ酢酸を配合した皮膚化粧料及び皮膚外用剤
（特開平５−１１２４２２）、カバノキ科植物の抽出エ
キスを含有させた皮膚老化防止化粧料（特開平６−２６
３６２７）等を挙げることができる。
【０００３】一方大豆のイソフラボン化合物は、エステ
ロゲン作用、抗酸化作用、抗溶血作用、抗コレステロー
ル作用、抗脂血作用、抗菌作用等、種々の生理作用を有
することが知られており、これらの生理作用を利用した
皮膚化粧料等に関する特許出願もなされており、例えば
大豆イソフラボン化合物含有美白化粧料（特公昭６０−
１９８８５）、大豆サポニン含有化粧料組成物（特開昭
５９−１０６４１９）、大豆胚軸の水抽出物を有効成分
とする保湿剤（特開昭６３−２４３０１３）等が知られ
ている。また最近になって、大豆中にはマロニルダイジ
ン及びマロニルゲニスチン等のマロニルイソフラボン配
糖体の存在が確認され、これらが大豆中のイソフラボン
化合物の主成分であることが判ってきた。このマロニル
イソフラボン配糖体は水に溶け易く、またそれ自身抗酸
化作用があり、またその構造の類似性から上記したよう
な薬理効果が期待されている。
ロゲン作用、抗酸化作用、抗溶血作用、抗コレステロー
ル作用、抗脂血作用、抗菌作用等、種々の生理作用を有
することが知られており、これらの生理作用を利用した
皮膚化粧料等に関する特許出願もなされており、例えば
大豆イソフラボン化合物含有美白化粧料（特公昭６０−
１９８８５）、大豆サポニン含有化粧料組成物（特開昭
５９−１０６４１９）、大豆胚軸の水抽出物を有効成分
とする保湿剤（特開昭６３−２４３０１３）等が知られ
ている。また最近になって、大豆中にはマロニルダイジ
ン及びマロニルゲニスチン等のマロニルイソフラボン配
糖体の存在が確認され、これらが大豆中のイソフラボン
化合物の主成分であることが判ってきた。このマロニル
イソフラボン配糖体は水に溶け易く、またそれ自身抗酸
化作用があり、またその構造の類似性から上記したよう
な薬理効果が期待されている。
【０００４】本発明者等は先に、大豆の水抽出液そのも
のが皮膚外用剤として効果のあることを見い出し特許出
願した（特願平６−３０５６９７）が、さらに検討を進
めた結果、大豆の水抽出液中にはマロニルイソフラボン
配糖体が含有されており、抽出液を吸着剤に接触さ
せ、、次いでアルコール水溶液で溶出させることにより
マロニルイソフラボン配糖体が簡単に取得できるという
知見を得、特許出願した（特願平７−１１２７０５）。
そして更に、このマロニルイソフラボン配糖体が上皮細
胞の増殖に効果のあることを見い出した。
のが皮膚外用剤として効果のあることを見い出し特許出
願した（特願平６−３０５６９７）が、さらに検討を進
めた結果、大豆の水抽出液中にはマロニルイソフラボン
配糖体が含有されており、抽出液を吸着剤に接触さ
せ、、次いでアルコール水溶液で溶出させることにより
マロニルイソフラボン配糖体が簡単に取得できるという
知見を得、特許出願した（特願平７−１１２７０５）。
そして更に、このマロニルイソフラボン配糖体が上皮細
胞の増殖に効果のあることを見い出した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明はこのような知見
に基づきなされたものであって、上皮細胞増殖因子とし
てマロニルイソフラボン配糖体を含有させた皮膚用剤で
ある。以下本発明を具体的に説明する。
に基づきなされたものであって、上皮細胞増殖因子とし
てマロニルイソフラボン配糖体を含有させた皮膚用剤で
ある。以下本発明を具体的に説明する。
【０００６】＜マロニルイソフラボン配糖体の取得＞大
豆中のマロニルダイジン
豆中のマロニルダイジン
【化１】 マロニルゲニスチン
【化２】 等のマロニルイソフラボン配糖体の含量は、大豆の種
類、収穫時期等によってことなるが、文献｛J.Agric.Fo
od Chem.,42,1674(1994)｝によれば表１の通りである。
なお含量は大豆１ｇあたりのマイクログラムである。 表１ 大豆（年度） マロニルダイジン マロニルゲニスチン アメリカ種 Vinton81(1989) 410 958 Vinton81(1990) 300 743 Vinton81(1991) 237 545 Pioneer9111(1989) 690 1756 Pioneer9202(1989) 630 1705 Prize(1989) 709 1342 HP204(1989) 345 915 LS301(1989) 752 1558 KL72(1989) 198 1042 Strayer2233(1989) 385 883 日本種 Keburi(1991) 562 1232 Keburi(1992) 322 670 Kuro daizu(1991) 375 1187 Kuro daizu(1992) 222 717 Raiden(1991) 407 1191 Raiden(1992) 242 723
類、収穫時期等によってことなるが、文献｛J.Agric.Fo
od Chem.,42,1674(1994)｝によれば表１の通りである。
なお含量は大豆１ｇあたりのマイクログラムである。 表１ 大豆（年度） マロニルダイジン マロニルゲニスチン アメリカ種 Vinton81(1989) 410 958 Vinton81(1990) 300 743 Vinton81(1991) 237 545 Pioneer9111(1989) 690 1756 Pioneer9202(1989) 630 1705 Prize(1989) 709 1342 HP204(1989) 345 915 LS301(1989) 752 1558 KL72(1989) 198 1042 Strayer2233(1989) 385 883 日本種 Keburi(1991) 562 1232 Keburi(1992) 322 670 Kuro daizu(1991) 375 1187 Kuro daizu(1992) 222 717 Raiden(1991) 407 1191 Raiden(1992) 242 723
【０００７】大豆からマロニルイソフラボン配糖体を製
造する方法としては特開平3-170495号に記載されている
ように、粉砕大豆をアルコール抽出したのち、その抽出
物を数段の水不混和性有機溶媒で抽出処理して製造する
方法が知られているが製造方法の容易性、収率の点から
以下に記載の如く、大豆の水抽出液から取得する方法が
好ましい。
造する方法としては特開平3-170495号に記載されている
ように、粉砕大豆をアルコール抽出したのち、その抽出
物を数段の水不混和性有機溶媒で抽出処理して製造する
方法が知られているが製造方法の容易性、収率の点から
以下に記載の如く、大豆の水抽出液から取得する方法が
好ましい。
【０００８】すなわちマロニルイソフラボン配糖体を得
るための原料は、丸大豆、脱皮大豆、脱脂大豆等であ
り、これらの水抽出液が好適に用いられる。例えば丸大
豆、脱皮大豆あるいは脱脂大豆を２０〜８０℃の水に１
〜３０時間浸漬して得られる抽出液であるが、中でも脱
皮大豆や脱脂大豆が好適である。もちろん、醤油、味
噌、豆腐、納豆、豆乳、或いはもやしの製造に際して生
ずる大豆の浸漬廃液も有効に利用できる。また大豆煮汁
や木綿豆腐製造において生じるホエーも利用可能であ
る。そして大豆の水抽出液を得るのに好ましい態様とし
ては、脱皮大豆を、カセイソーダ等によりpH１０．０以
下、好ましくは７．５〜９．０に調整した４５〜６５℃
の水に２〜４時間浸漬し、浸漬大豆を除いて得られる浸
漬水を水抽出液とする。
るための原料は、丸大豆、脱皮大豆、脱脂大豆等であ
り、これらの水抽出液が好適に用いられる。例えば丸大
豆、脱皮大豆あるいは脱脂大豆を２０〜８０℃の水に１
〜３０時間浸漬して得られる抽出液であるが、中でも脱
皮大豆や脱脂大豆が好適である。もちろん、醤油、味
噌、豆腐、納豆、豆乳、或いはもやしの製造に際して生
ずる大豆の浸漬廃液も有効に利用できる。また大豆煮汁
や木綿豆腐製造において生じるホエーも利用可能であ
る。そして大豆の水抽出液を得るのに好ましい態様とし
ては、脱皮大豆を、カセイソーダ等によりpH１０．０以
下、好ましくは７．５〜９．０に調整した４５〜６５℃
の水に２〜４時間浸漬し、浸漬大豆を除いて得られる浸
漬水を水抽出液とする。
【０００９】この場合、浸漬水のpHを１０．０以上にす
るとマロニルイソフラボン配糖体の収率が低下する。こ
れはマロニルイソフラボン配糖体が分解し、イソフラボ
ン配糖体となるためである。また大豆成分の抽出率を上
げるためには、浸漬温度は高いほうが有利であるが、７
０℃以上にするとマロニルイソフラボン配糖体が分解し
はじめる。したがって抽出率と分解率とを考慮すると４
５〜６５℃が適当である。
るとマロニルイソフラボン配糖体の収率が低下する。こ
れはマロニルイソフラボン配糖体が分解し、イソフラボ
ン配糖体となるためである。また大豆成分の抽出率を上
げるためには、浸漬温度は高いほうが有利であるが、７
０℃以上にするとマロニルイソフラボン配糖体が分解し
はじめる。したがって抽出率と分解率とを考慮すると４
５〜６５℃が適当である。
【００１０】また脱脂大豆を使用する場合の脱脂大豆は
低変性脱脂大豆が好適であり、これを直接水に浸漬し、
抽出するか、低変性脱脂大豆の粉砕物を水又はアルカリ
水で抽出し、不溶残渣を除去したのち抽出液を塩酸でpH
４．３付近で酸沈して得られる分離大豆蛋白を除いた
液、すなわち大豆ホエーでもよい。
低変性脱脂大豆が好適であり、これを直接水に浸漬し、
抽出するか、低変性脱脂大豆の粉砕物を水又はアルカリ
水で抽出し、不溶残渣を除去したのち抽出液を塩酸でpH
４．３付近で酸沈して得られる分離大豆蛋白を除いた
液、すなわち大豆ホエーでもよい。
【００１１】このような大豆の抽出液を必要により限外
濾過膜を用いて蛋白質を除去した濾液、あるいは上記大
豆ホエーのように塩酸でpH４．３程度に調整し、抽出液
中に溶解している蛋白質を沈澱させ、その上澄液を吸着
剤に接触させる。上記濾液あるいは上澄液は、そのまま
吸着剤と接触させる方法と、濾液あるいは上澄液をカセ
イソーダでpH８．０程度に調整した後接触させる方法と
がある。
濾過膜を用いて蛋白質を除去した濾液、あるいは上記大
豆ホエーのように塩酸でpH４．３程度に調整し、抽出液
中に溶解している蛋白質を沈澱させ、その上澄液を吸着
剤に接触させる。上記濾液あるいは上澄液は、そのまま
吸着剤と接触させる方法と、濾液あるいは上澄液をカセ
イソーダでpH８．０程度に調整した後接触させる方法と
がある。
【００１２】前者の場合は吸着剤に対する吸着量が増大
し、後者の場合はマロニルイソフラボン配糖体とイソフ
ラボン配糖体及びアグリコンの分離が容易であるという
利点がある。いずれの場合でも、使用する吸着剤は、例
えば合成吸着剤、活性炭、アルミナ等であり、具体的に
はダイヤイオンHP-20（三菱化学製）、精製白鷺活性炭
（武田薬品工業製）、活性アルミナ（和光純薬製）等を
挙げることができる。接触はバッチ法、カラム法等一般
的方法でよく、例えば、吸着剤を充填したカラムに抽出
液を通過させることにより行うことができ、こうするこ
とにより抽出液中のマロニルイソフラボン配糖体の殆ど
が吸着剤に吸着される。
し、後者の場合はマロニルイソフラボン配糖体とイソフ
ラボン配糖体及びアグリコンの分離が容易であるという
利点がある。いずれの場合でも、使用する吸着剤は、例
えば合成吸着剤、活性炭、アルミナ等であり、具体的に
はダイヤイオンHP-20（三菱化学製）、精製白鷺活性炭
（武田薬品工業製）、活性アルミナ（和光純薬製）等を
挙げることができる。接触はバッチ法、カラム法等一般
的方法でよく、例えば、吸着剤を充填したカラムに抽出
液を通過させることにより行うことができ、こうするこ
とにより抽出液中のマロニルイソフラボン配糖体の殆ど
が吸着剤に吸着される。
【００１３】次いで吸着剤に吸着したマロニルイソフラ
ボン配糖体をアルコール水溶液又はアルカリ性アルコー
ル水溶液を用いて、マロニルイソフラボン配糖体を溶出
させる。得られた溶液は減圧濃縮し、あるいは減圧濃縮
後、凍結乾燥してマロニルイソフラボン配糖体の乾燥粉
末を得る。
ボン配糖体をアルコール水溶液又はアルカリ性アルコー
ル水溶液を用いて、マロニルイソフラボン配糖体を溶出
させる。得られた溶液は減圧濃縮し、あるいは減圧濃縮
後、凍結乾燥してマロニルイソフラボン配糖体の乾燥粉
末を得る。
【００１４】上記濃縮液あるいは乾燥粉末はマロニルダ
イジン及びマロニルゲニスチンの混合物であり、これを
分別して取得する場合には、逆相クロマトグラフィーに
より分取することができる。例えばＯＤＳ樹脂（山村化
学製）を充填したカラムに濃縮液を通液し、マロニルイ
ソフラボン配糖体を吸着させ、アルコール水溶液で溶出
してマロニルダイジン、マロニルゲニスチンを分画し、
これらの画分を減圧濃縮後、凍結乾燥してマロニルダイ
ジン及びマロニルゲニスチンの乾燥粉末を得る。
イジン及びマロニルゲニスチンの混合物であり、これを
分別して取得する場合には、逆相クロマトグラフィーに
より分取することができる。例えばＯＤＳ樹脂（山村化
学製）を充填したカラムに濃縮液を通液し、マロニルイ
ソフラボン配糖体を吸着させ、アルコール水溶液で溶出
してマロニルダイジン、マロニルゲニスチンを分画し、
これらの画分を減圧濃縮後、凍結乾燥してマロニルダイ
ジン及びマロニルゲニスチンの乾燥粉末を得る。
【００１５】なお、マロニルダイジン及びマロニルゲニ
スチンを効率よく得るためには以下の方法によることが
好ましい。すなわち大豆の抽出液を吸着剤と接触させる
までは上記と同様であるが、溶出をアルコール水溶液の
濃度を変えて順次行い、大まかにマロニルダイジンとマ
ロニルゲニスチンを分別しこれらの溶出液をＯＤＳカラ
ムで精製するのである。このようにして大豆の抽出液よ
り簡単にマロニルイソフラボン配糖体、あるいはマロニ
ルダイジン及びマロニルゲニスチンを分別して得ること
ができる。
スチンを効率よく得るためには以下の方法によることが
好ましい。すなわち大豆の抽出液を吸着剤と接触させる
までは上記と同様であるが、溶出をアルコール水溶液の
濃度を変えて順次行い、大まかにマロニルダイジンとマ
ロニルゲニスチンを分別しこれらの溶出液をＯＤＳカラ
ムで精製するのである。このようにして大豆の抽出液よ
り簡単にマロニルイソフラボン配糖体、あるいはマロニ
ルダイジン及びマロニルゲニスチンを分別して得ること
ができる。
【００１６】このようにして得られたマロニルイソフラ
ボン配糖体は、上皮細胞を増殖させる効果を有し、これ
を通常用いられる各種基剤、例えば油分、界面活性剤、
保湿剤、アルコール、増粘剤、香料、酸化防止剤、キレ
ート剤、色素、防腐剤等に配合することにより、上皮細
胞増殖促進剤、皮膚化粧剤、育毛剤、皮膚外用剤、抗炎
症剤等の皮膚用剤とすることができる。マロニルダイジ
ン、マロニルゲニスチンの配合量は、皮膚外用剤、皮膚
化粧剤、抗炎症剤いずれの場合でも０．００１〜１００
０ｐｐｍである。また他の上皮細胞増殖因子との併用も
できる。
ボン配糖体は、上皮細胞を増殖させる効果を有し、これ
を通常用いられる各種基剤、例えば油分、界面活性剤、
保湿剤、アルコール、増粘剤、香料、酸化防止剤、キレ
ート剤、色素、防腐剤等に配合することにより、上皮細
胞増殖促進剤、皮膚化粧剤、育毛剤、皮膚外用剤、抗炎
症剤等の皮膚用剤とすることができる。マロニルダイジ
ン、マロニルゲニスチンの配合量は、皮膚外用剤、皮膚
化粧剤、抗炎症剤いずれの場合でも０．００１〜１００
０ｐｐｍである。また他の上皮細胞増殖因子との併用も
できる。
【００１７】次にマロニルイソフラボン配糖体の上皮細
胞増殖効果について検討した結果を示す。なお使用した
細胞は、米国白人皮膚由来の正常ヒト皮膚上皮細胞（No
rmal human epidermal keratinocyte:NHEK）（倉敷紡績
株式会社扱い）である。
胞増殖効果について検討した結果を示す。なお使用した
細胞は、米国白人皮膚由来の正常ヒト皮膚上皮細胞（No
rmal human epidermal keratinocyte:NHEK）（倉敷紡績
株式会社扱い）である。
【００１８】使用培地：改変ＭＣＤＢ１５３培地（倉敷
紡績製）にヒト組み換え型上皮成長因子（ｈＥＧＦ）を
Ｏ．１ｎｇ／ｍｌ、インスリンを５μｇ／ｍｌ、ハイド
ロコーチゾンを０．５μｇ／ｍｌ、抗菌剤としてゲンタ
マイシンを５０μｇ／ｍｌ、アンフォテンシンを０．０
５μｇ／ｍｌを添加し、表皮角化細胞増殖用培地（Ｋ−
ＤＭ）とした。
紡績製）にヒト組み換え型上皮成長因子（ｈＥＧＦ）を
Ｏ．１ｎｇ／ｍｌ、インスリンを５μｇ／ｍｌ、ハイド
ロコーチゾンを０．５μｇ／ｍｌ、抗菌剤としてゲンタ
マイシンを５０μｇ／ｍｌ、アンフォテンシンを０．０
５μｇ／ｍｌを添加し、表皮角化細胞増殖用培地（Ｋ−
ＤＭ）とした。
【００１９】培養方法：正常ヒト皮膚上皮細胞（NHEK）
を上記Ｋ−ＤＭ培地に５０００cells/ｍｌとなるように
懸濁し、４８ｗｅｌｌプレート（住友ベークライト製）
に０．３ｍｌ／ｗｅｌｌとなるように接種し、これを５
％ＣＯ2と９５％空気の雰囲気下、３７℃、湿度１００
％の培養機内で４時間培養する。培養後、表２に示す試
料液を１０μｌ添加し、更に７２時間培養後、Ｋ−ＤＭ
培地を除去し、新たに新鮮なＫ−ＤＭ培地を０．３ｍｌ
／ｗｅｌｌと試料を再添加し、７２時間培養し、細胞の
増殖を測定した。
を上記Ｋ−ＤＭ培地に５０００cells/ｍｌとなるように
懸濁し、４８ｗｅｌｌプレート（住友ベークライト製）
に０．３ｍｌ／ｗｅｌｌとなるように接種し、これを５
％ＣＯ2と９５％空気の雰囲気下、３７℃、湿度１００
％の培養機内で４時間培養する。培養後、表２に示す試
料液を１０μｌ添加し、更に７２時間培養後、Ｋ−ＤＭ
培地を除去し、新たに新鮮なＫ−ＤＭ培地を０．３ｍｌ
／ｗｅｌｌと試料を再添加し、７２時間培養し、細胞の
増殖を測定した。
【００２０】細胞増殖の測定：和光純薬工業製のＣｅｌ
ｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ｛（ＷＳＴ−１：2-(4-I
odophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl-
2H-tetrazolium,monosodium salt｝を使用し、発色反応
させ、分光光度計で波長＊＊＊での吸光度（ＯＤ）を測
定した。本測定方法は吸光度と細胞数は直線的な比例関
係にある。なお比較２〜４は水に難溶性であるので溶解
限度の濃度で実験を行なった。
ｌ Ｃｏｕｎｔｉｎｇ Ｋｉｔ｛（ＷＳＴ−１：2-(4-I
odophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl-
2H-tetrazolium,monosodium salt｝を使用し、発色反応
させ、分光光度計で波長＊＊＊での吸光度（ＯＤ）を測
定した。本測定方法は吸光度と細胞数は直線的な比例関
係にある。なお比較２〜４は水に難溶性であるので溶解
限度の濃度で実験を行なった。
【００２１】以上の結果を表２に示す。 表２ 試料 濃度（ｐｐｍ） ＯＤ値 有意差検定 マロニルダイジン ３×１０-5 ０．３７１ ＊ （本発明） ３×１０-4 ０．３５８ ＊ ３×１０-3 ０．３７７ ＊ ３×１０-2 ０．３９７ ＊ ３×１０-1 ０．３６７ ３ ０．３２１ ３×１０ ０．３１２ マロニルゲニスチン ３×１０-5 ０．４１４ ＊ （本発明） ３×１０-4 ０．４１８ ＊＊ ３×１０-3 ０．４０８ ＊ ３×１０-2 ０．３４７ ３×１０-1 ０．３３４ ３ ０．３１４ ３×１０ ０．３２８ ダイジン ３×１０-5 ０．３００ （比較１） ３×１０-4 ０．３１３ ３×１０-3 ０．２９３ ３×１０-2 ０．２９８ ３×１０-1 ０．３１５ ３ ０．３０６ ３×１０ ０．３１２ ゲニスチン ３×１０-5 ０．３５０ （比較２） ３×１０-4 ０．３３０ ３×１０-3 ０．３４１ ３×１０-2 ０．３２７ ３×１０-1 ０．３２８ ３ ０．３２０ ダイゼイン ３×１０-5 ０．３１２ （比較３） ３×１０-4 ０．３０６ ３×１０-3 ０．２９３ １×１０-2 ０．２８４ ２×１０-2 ０．２４６ ３×１０-2 ０．２０９ ゲニステイン ３×１０-5 ０．３４３ （比較４） ３×１０-4 ０．３０２ ３×１０-3 ０．３２９ １×１０-2 ０．３１８ ２×１０-2 ０．１９８ ３×１０-2 ０．０７１ 水（対照） ０．３１５ 濃度（ｐｐｍ）：細胞培養液中濃度を示す ＯＤ値：５回の繰り返し試験の平均値である。 有意差検定 ＊：５％危険率で有意差有り ＊＊：１％危険率で有意差有り また水を用いたとき（対照）の増殖活性を１とし、それ
ぞれの試料の増殖活性を図１に示した。
ぞれの試料の増殖活性を図１に示した。
【００２２】表２及び図１から明らかなように、マロニ
ルイソフラボン配糖体であるマロニルダイジン、マロニ
ルゲニスチンを３×１０-5〜３×１０-1ｐｐｍ添加した
試料はヒト上皮細胞増殖効果を示し、特にマロニルダイ
ジンは添加量３×１０-5〜３×１０-2ｐｐｍ、マロニル
ゲニスチンは３×１０-5〜３×１０-3ｐｐｍの範囲で、
有意に効果のあることが認められた。
ルイソフラボン配糖体であるマロニルダイジン、マロニ
ルゲニスチンを３×１０-5〜３×１０-1ｐｐｍ添加した
試料はヒト上皮細胞増殖効果を示し、特にマロニルダイ
ジンは添加量３×１０-5〜３×１０-2ｐｐｍ、マロニル
ゲニスチンは３×１０-5〜３×１０-3ｐｐｍの範囲で、
有意に効果のあることが認められた。
【００２３】また生理活性作用があるとされるダイジ
ン、ゲニスチン、ダイゼイン、ゲニステイン（比較１〜
４）においては、ダイジン、ゲニスチンは効果が認めら
れたが有意な効果でなく、またダイゼイン、ゲニステイ
ンではほとんど効果が認められず、高い濃度では阻害が
認められた。
ン、ゲニスチン、ダイゼイン、ゲニステイン（比較１〜
４）においては、ダイジン、ゲニスチンは効果が認めら
れたが有意な効果でなく、またダイゼイン、ゲニステイ
ンではほとんど効果が認められず、高い濃度では阻害が
認められた。
【００２４】
【実施例】以下に実施例を示す。 実施例１ 脱皮大豆の温水抽出液２０Lを、塩酸でpH４．０に調整
し２時間放置後、濾過助剤（ラジオライト＃５００、昭
和化学製）を添加し、ブフナーロートで吸引濾過した。
この濾液を活性炭（精製白鷺クロマト用、武田薬品工業
製）を充填したカラム（５×２２cm、４３０ml）に１．
５L/hrの流速で通液させてマロニルイソフラボン配糖体
を吸着させた後、１％アンモニア水３Lでカラムを洗浄
した。次いで１％アンモニア含有５０％エタノール水溶
液５Lで溶出し、得られた溶出液を減圧下、５０℃で濃
縮し、マロニルダイジン１．２３g、マロニルゲニスチ
ン１．０５gを含有する濃縮液５００mlを得た。この濃
縮液を２ＮのカセイソーダでpH８．０としＯＤＳ樹脂充
填カラム（４×２４cm、３００ml）に流速３０ml／min.
で通液し、蒸留水０．５Lで洗浄後、２％、５％及び１
０ ％エタノール水溶液各２Lで溶出を行い、５％エタノ
ール水溶液の溶出区分よりマロニルダイジン画分を、１
０％エタノール水溶液の溶出区分よりマロニルゲニスチ
ン画分を得、それぞれを減圧下、５０℃で減圧濃縮した
後、凍結乾燥し、マロニルダイジンをナトリウム塩とし
て６５２mg、マロニルゲニスチンをナトリウム塩として
４１２mg得た。こうして得られたマロニルダイジンナト
リウム塩又はマロニルゲニスチンナトリウム塩を上皮細
胞増殖因子として以下の皮膚用剤を調整した。
し２時間放置後、濾過助剤（ラジオライト＃５００、昭
和化学製）を添加し、ブフナーロートで吸引濾過した。
この濾液を活性炭（精製白鷺クロマト用、武田薬品工業
製）を充填したカラム（５×２２cm、４３０ml）に１．
５L/hrの流速で通液させてマロニルイソフラボン配糖体
を吸着させた後、１％アンモニア水３Lでカラムを洗浄
した。次いで１％アンモニア含有５０％エタノール水溶
液５Lで溶出し、得られた溶出液を減圧下、５０℃で濃
縮し、マロニルダイジン１．２３g、マロニルゲニスチ
ン１．０５gを含有する濃縮液５００mlを得た。この濃
縮液を２ＮのカセイソーダでpH８．０としＯＤＳ樹脂充
填カラム（４×２４cm、３００ml）に流速３０ml／min.
で通液し、蒸留水０．５Lで洗浄後、２％、５％及び１
０ ％エタノール水溶液各２Lで溶出を行い、５％エタノ
ール水溶液の溶出区分よりマロニルダイジン画分を、１
０％エタノール水溶液の溶出区分よりマロニルゲニスチ
ン画分を得、それぞれを減圧下、５０℃で減圧濃縮した
後、凍結乾燥し、マロニルダイジンをナトリウム塩とし
て６５２mg、マロニルゲニスチンをナトリウム塩として
４１２mg得た。こうして得られたマロニルダイジンナト
リウム塩又はマロニルゲニスチンナトリウム塩を上皮細
胞増殖因子として以下の皮膚用剤を調整した。
【００２５】＜皮膚化粧剤＞ マロニルダイジン−Ｎａ １ マロニルゲニスチン−Ｎａ １ エタノール ８０ グリセリン ４５ ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油 ５ 香料 １ 精製水 ８６７ これらを混合し皮膚化粧剤とした。
【００２６】＜皮膚外用剤＞親水軟膏基剤（小堺製薬
製）１ｋｇにマロニルダイジン−Ｎａ及びマロニルゲニ
スチン−Ｎａを各２００ｍｇずつ精製水２００ｍｌに溶
解後混和して皮膚外用剤とした。
製）１ｋｇにマロニルダイジン−Ｎａ及びマロニルゲニ
スチン−Ｎａを各２００ｍｇずつ精製水２００ｍｌに溶
解後混和して皮膚外用剤とした。
【００２７】＜育毛剤＞８％エタノール溶液１ｌにマロ
ニルダイジン−Ｎａ及びマロニルゲニスチン−Ｎａを各
２ｍｇ溶解して育毛剤とした。
ニルダイジン−Ｎａ及びマロニルゲニスチン−Ｎａを各
２ｍｇ溶解して育毛剤とした。
【００２８】＜使用例１＞上記した＜皮膚化粧剤＞を５
０代の女性２０名に１ヵ月間使用させ、アンケート調査
したところ、１５名のパネルから皮膚のはりに効果があ
り、内１０名はしわの防止に効果があるという回答を得
た。また残りの５名も肌がしっとりとしたとの回答があ
った。
０代の女性２０名に１ヵ月間使用させ、アンケート調査
したところ、１５名のパネルから皮膚のはりに効果があ
り、内１０名はしわの防止に効果があるという回答を得
た。また残りの５名も肌がしっとりとしたとの回答があ
った。
【００２９】＜使用例２＞肌あれ症（乾燥肌）の２０〜
４０代の女性１０名に１ヵ月間、右手に上記、〈皮膚外
用剤＞を、左手にはコントロールとしてマロニル配糖体
無添加の軟膏を、毎日就寝前に塗布してもらい、その後
左右の手の肌あれ症状の状態を観察してもらったとこ
ろ、１０名とも右手の方がしっとりと滑らかとなり、肌
あれの治癒効果を認めた。
４０代の女性１０名に１ヵ月間、右手に上記、〈皮膚外
用剤＞を、左手にはコントロールとしてマロニル配糖体
無添加の軟膏を、毎日就寝前に塗布してもらい、その後
左右の手の肌あれ症状の状態を観察してもらったとこ
ろ、１０名とも右手の方がしっとりと滑らかとなり、肌
あれの治癒効果を認めた。
【００３０】＜使用例３＞上記〈育毛剤〉を５０代の男
性１０名に１ヵ月間、洗髪後頭皮に使用してもらったと
ころ６名が髪に艶が出、抜け毛が減ったとの効果を認め
た。
性１０名に１ヵ月間、洗髪後頭皮に使用してもらったと
ころ６名が髪に艶が出、抜け毛が減ったとの効果を認め
た。
【００３１】
【発明の効果】本発明はマロニルイソフラボン配糖体が
上皮細胞増殖因子として作用し、上皮細胞増殖促進に効
果があるという知見に基づくものであり、これにより皮
膚の老化防止、肌あれ改善等の皮膚化粧剤、抗炎症剤、
創傷治療剤等として有用な皮膚外用剤等を提供すること
ができる。
上皮細胞増殖因子として作用し、上皮細胞増殖促進に効
果があるという知見に基づくものであり、これにより皮
膚の老化防止、肌あれ改善等の皮膚化粧剤、抗炎症剤、
創傷治療剤等として有用な皮膚外用剤等を提供すること
ができる。
【図１】正常ヒト皮膚上皮細胞に対する、各試料の増殖
活性を示す。
活性を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 山次 信幸 千葉県野田市野田339番地 キッコーマ ン株式会社内 (72)発明者 戸辺 光一朗 千葉県野田市野田339番地 キッコーマ ン株式会社内 審査官 鶴見 秀紀 (56)参考文献 特開 平３−170495（ＪＰ，Ａ) ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒ ｉｅｓ，1992，Ｎｏ．507，ｐｐ．98− 113 ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒ ｉｅｓ，1994，Ｎｏ．546，ｐｐ．330− 339 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 35/78 A61K 7/00 A61K 31/70 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 マロニルイソフラボン配糖体を有効成分
とする上皮細胞増殖促進剤。
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|---|---|---|---|
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Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP23068295A JP3302535B2 (ja) | 1995-08-17 | 1995-08-17 | 上皮細胞増殖促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0959166A JPH0959166A (ja) | 1997-03-04 |
| JP3302535B2 true JP3302535B2 (ja) | 2002-07-15 |
Family
ID=16911665
Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP23068295A Expired - Fee Related JP3302535B2 (ja) | 1995-08-17 | 1995-08-17 | 上皮細胞増殖促進剤 |
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| Country | Link |
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| JP (1) | JP3302535B2 (ja) |
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| US8093293B2 (en) | 1998-07-06 | 2012-01-10 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Methods for treating skin conditions |
| US8106094B2 (en) | 1998-07-06 | 2012-01-31 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Compositions and methods for treating skin conditions |
| JP2000095792A (ja) | 1998-09-21 | 2000-04-04 | Showa Sangyo Co Ltd | ゲニスチンから成るイソフラボン組成物の取得方法 |
| JP2000302667A (ja) * | 1999-04-23 | 2000-10-31 | Kobe Tennenbutsu Kagaku Kk | 豊胸促進剤 |
| AU4885500A (en) * | 1999-07-27 | 2001-02-01 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Reducing hair growth, hair follicle and hair shaft size and hair pigmentation |
| US7985404B1 (en) * | 1999-07-27 | 2011-07-26 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Reducing hair growth, hair follicle and hair shaft size and hair pigmentation |
| US8431550B2 (en) | 2000-10-27 | 2013-04-30 | Johnson & Johnson Consumer Companies, Inc. | Topical anti-cancer compositions and methods of use thereof |
| US7192615B2 (en) | 2001-02-28 | 2007-03-20 | J&J Consumer Companies, Inc. | Compositions containing legume products |
| WO2003000674A1 (en) * | 2001-06-21 | 2003-01-03 | Fuji Oil Company,Limited | Process for producing soluble isoflavone-containing composition |
| US7282226B2 (en) | 2003-08-11 | 2007-10-16 | I-Hung Chu | Vapor fraction from seeds of Glycine max (L.) Merr. and composition thereof |
| CA2437321C (en) | 2003-08-11 | 2012-06-12 | I-Hung Chu | Vapor fraction from seeds of glycine max (l.) merr. and composition thereof |
| JP5080728B2 (ja) * | 2005-07-04 | 2012-11-21 | 孝仁 徳山 | 米を除く穀類又は豆類を原料とする、細胞増殖促進剤及び細胞修復剤 |
| JP5635226B2 (ja) * | 2006-01-24 | 2014-12-03 | 株式会社林原 | 毛乳頭細胞増殖促進剤 |
| JP5201723B2 (ja) * | 2008-03-31 | 2013-06-05 | 株式会社ナリス化粧品 | ケラチノサイト増殖促進剤 |
| JP5363800B2 (ja) * | 2008-12-25 | 2013-12-11 | ライオン株式会社 | 育毛剤組成物 |
-
1995
- 1995-08-17 JP JP23068295A patent/JP3302535B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，１９９２，Ｎｏ．５０７，ｐｐ．９８−１１３ |
| ＡＣＳ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ Ｓｅｒｉｅｓ，１９９４，Ｎｏ．５４６，ｐｐ．３３０−３３９ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0959166A (ja) | 1997-03-04 |
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