JP3292211B2 - 採便棒及びヘモグロビンあるいはトランスフェリン検出用検査具 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、糞便を採取するための
採便棒及び潜血検査を行うのに使用する検査具を提供す
るものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、糞便の潜血検査は、被検者が採便
した便を用いて、検査担当者が便中のヘモグロビンやト
ランスフェリンの検出を行うという手順で行われてい
る。このような採便に用いられる器具としては、採便す
るための採便棒と、便中のヘモグロビン等を抽出するた
めの緩衝液を保持する容器と、この容器の蓋部の裏側に
取り付けられた採便棒からなる採便容器等が用いられて
いる。このような容器を用いて採便された後に、検査担
当者は、容器から緩衝液を取り出し、マイクロタイター
プレート等を用いた抗原抗体反応によりヘモグロビン等
の検出が行われる。

【０００３】上記の方法が分析に人手を要し、大量処理
が困難であるなどの問題を有することから、抗ヒトヘモ
グロビン抗体と抗ヒトトランスフェリン抗体が均一にコ
ーティングされた球状の先端部を有するスティックと溶
菌酵素含有溶液を収容したケースからなる検査具が開示
されている（実開平２−５９４６６号）。この検査具
は、検体中のヘモグロビンと抗体との反応を行った後
に、前記球状部を切断することにより、ビーズ法の自動
分析器に適用できるようにしたものである。

【０００４】ところで、従来妊娠検査薬は医家向けのみ
であったが、近年、自己検査が可能な妊娠検査キットが
多種市販されている。これらは、尿を吸収する採尿棒
と、採尿棒から吸収された尿のクロマトグラフィーを行
う濾紙等を有するものであり、尿中のＨＣＧ抗原を濾紙
に塗布されたモノクローナル抗体により検知するという
ものである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上述したように、潜血
検査用の器具は種々提案されており、分析効率を向上さ
せる努力はなされているが、いずれを用いた場合でも、
被検者自身がヘモグロビン等の検出を行うことはでき
ず、医師あるいは検査機関に依頼せずに潜血検査を行う
ことはできないのが現状である。

【０００６】また、被検者が便を採取してから検査を行
うまである程度時間が経過すると、特に気温の高い夏期
等にはヘモグロビン等が変性しやすく、正確な検査が期
待できない。したがって、便を採取後速やかに検査を行
うことが好ましいが、従来の方法では速やかな対応が困
難である。

【０００７】本発明は、かかる観点からなされたもので
あり、熟練を要することなく被検者自身が潜血検査等を
簡易に行うことができるように、採便するとともにその
後のヘモグロビン等の速やかな検出を行うことが可能な
検査具を提供するとともに、このような検査具に用いる
採便棒を提供することを課題とする。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
解決するために、検査具を以下の構成とした。すなわち
本発明の検査具は、糞便中のヘモグロビンあるいはトラ
ンスフェリンを抗ヘモグロビン抗体あるいは抗トランス
フェリン抗体を用いた免疫クロマトグラフィーにより検
出するための検査具において、前記検査具は、採便棒
と、採便棒の一方の端部に接するクロマトグラフィー片
と、検査具の採便棒側に設けられる蓋部とを有し、前記
採便棒は、糞便を採取することが可能な硬度を有すると
ともに水溶液を吸収する材質からなり、さらに、クロマ
トグラフィー片に接する端部の逆端部をヘモグロビンを
含有する水溶液に浸漬させたときクロマトグラフィー片
に水溶液とともにヘモグロビンを移動できる材質により
形成され、前記クロマトグラフィー片は、免疫クロマト
グラフィーによりヘモグロビンあるいはトランスフェリ
ンを検出でき、前記蓋部は、検査時に蓋部内に、採便棒
を覆った状態で緩衝液を収容させることができることを
特徴とする。

【０００９】すなわち本発明の採便棒は、糞便中のヘモ
グロビンあるいはトランスフェリンを検出するために糞
便を採取するための採便棒において、前記採便棒は、糞
便を採取することが可能な硬度を有するとともに水溶液
を吸収する材質からなり、さらに、採便棒の方端部をヘ
モグロビンあるいはトランスフェリンを含有する水溶液
に浸漬させたとき他端部に水溶液とともにヘモグロビン
あるいはトランスフェリンを移動できる材質により形成
されたことを特徴とする。

【００１０】また、本発明の検査具は、糞便中のヘモグ
ロビンあるいはトランスフェリンを抗ヘモグロビン抗体
あるいは抗トランスフェリン抗体を用いた免疫クロマト
グラフィーにより検出するための検査具において、前記
検査具は、採便棒と、採便棒の方端に接するクロマトグ
ラフィー片を有し、前記採便棒は、糞便を採取すること
が可能な硬度を有するとともに水溶液を吸収する材質か
らなり、さらに、クロマトグラフィー片に接する端部の
逆端部をヘモグロビンを含有する水溶液に浸漬させたと
きクロマトグラフィー片に水溶液とともにヘモグロビン
を移動できる材質により形成され、前記クロマトグラフ
ィー片は、免疫クロマトグラフィーによりヘモグロビン
あるいはトランスフェリンを検出できることを特徴とす
る。

【００１１】以下、本発明を説明する。

【００１２】＜１＞採便棒 本発明の採便棒は、糞便を採取することが可能な硬度を
有するとともに、水溶液を吸収する材質からなり、さら
に、採便棒の片端部をヘモグロビンあるいはトランスフ
ェリン（以下、「ヘモグロビン等」という。）を含有す
る水溶液に浸漬させたとき他端部に水溶液とともにこれ
らの物質を移動できる材質により形成される。これは、
十分な硬度を有しないと便を採取しにくいためであり、
また、糞便中のヘモグロビン等を含有する水溶液を、後
述するクロマトグラフィー片に導くためである。

【００１３】このような材質としては、前記要件を充す
ものであれば特に制限はないが、羊毛、紙等の天然繊
維、ニトロセルロース、セルロースアセテート等の半合
成繊維、ナイロン、ポリエステル等の合成繊維の他、ガ
ラス繊維のような無機質繊維等が挙げられ、形態として
は、硬質フェルト、繊維束、織布、不織布等のように毛
管現象を起こしやすいものが好ましい。

【００１４】本発明の採便棒の形状は、棒状であればよ
く、横断面は長方形、円形、楕円形等いずれの形状も可
能であるが、薄い直方体が好ましい。また、この採便棒
の一方の端部は、糞便を採取できる形状に成形されるこ
とが好ましい。例えば、先端部がスプーン状、螺子状、
あるいは先端部の縦断面がジクザグ形状、先端部が溝状
の切れ込みを有しているもの等が例示できる。

【００１５】通常、採便棒の使用法としては、糞便中に
数回突き刺す方法が行われている。しかし、ヘモグロビ
ン等は、排便された糞便の表面部に主として局在すると
いわれているので、突き刺す方法よりも表面をかき取る
方法が望ましい。したがって、採便棒の先端部は、糞便
をかき取りやすい形状であることが望ましい。この観点
から前記形状のうちでは、スプーン状、縦断面がジクザ
グ形状、先端部が溝状の切れ込みを有しているもの等が
特に好ましい。

【００１６】＜２＞本発明の検査具 本発明の検査具は、前記採便棒と、採便棒の片端に接す
るクロマトグラフィー片を有する。

【００１７】クロマトグラフィー片は、免疫学的方法に
よりヘモグロビン等の有無を表示するものである。これ
は、既に妊娠検査キットに市販されているものと同様な
構成のものを用いることができる。但し、妊娠検査キッ
トではＨＣＧ抗原に対するモノクローナル抗体を用いる
のに対し、本発明ではヘモグロビン等に対するモノクロ
ーナル抗体を用いる。以下に、ヘモグロビン検出用の検
査具を説明するが、ヘモグロビンをトランスフェリンに
置き換えればトランスフェリン検出用の検査具が得られ
る。

【００１８】例えば、薄片状のクロマトグラフィー基剤
の片方の側に、標識された第１の抗ヘモグロビンモノク
ローナル抗体（以下、「第１抗体」という。）を塗布
し、他の側には前記モノクローナル抗体と抗原決定基の
異なる第２の抗ヘモグロビンモノクローナル抗体あるい
はポリクローナル抗体（以下、「第２抗体」という。）
を固定し、この固定した第２抗体がある領域を挟んで前
記採便棒と接する側の反対側に、前記抗体を作製するの
に使用した動物のイムノグロブリンに対する抗イムノグ
ロブリン抗体を固定した領域を設ける。尚、抗イムノグ
ロブリン抗体を固定した領域は必ずしもなくてもよい
が、検査を正確にするためには設ける方が好ましい。

【００１９】前記クロマトグラフィー基剤としては、ニ
トロセルロース、セルロースアセテート等のメンブレン
フィルター素材、ナイロンメンブレン、濾紙、シリカゲ
ルを焼結したもの、ガラス繊維等が挙げられるが、水溶
液とともにヘモグロビン、ヘモグロビンと抗体との結合
物を移動できる素材であれば構わない。また、上記採便
棒と同一の素材を用い、採便棒とクロマトグラフィー片
とを一体に成形してもよい。

【００２０】上記クロマトグラフィー片の原理は以下の
通りである。クロマトグラフィー片の、第１抗体を塗布
した側の端部に、ヘモグロビンを含有する水溶液が接す
ると、この水溶液はクロマトグラフィー片に吸収、展開
され、逆端に向かって浸透する。第１抗体を塗布した領
域に達すると、ヘモグロビンは、第１抗体に結合し、さ
らにクロマトグラフィー片上を移動する。そして、この
ヘモグロビンと第１抗体との結合物が、第２抗体を固定
した領域に達すると、ヘモグロビンは、この第２抗体に
結合し、トラップされる。その結果、第１抗体はヘモグ
ロビンと共にこの領域で停止し、これ以上移動しない。

【００２１】一方、ヘモグロビンが含有していない場合
には、第１抗体は、第２抗体を固定した領域を通過し、
さらに移動を続ける。この際、抗イムノグロブリン抗体
を固定した領域を設けておくと、第２抗体はこの領域で
トラップされる。尚、抗イムノグロブリン抗体の代わり
に、スタフィロコッカス由来のプロテインＡを用いても
よい。

【００２２】上記いずれの領域でトラップされるかは、
例えば、金コロイド等の金属コロイド、着色ラテック
ス、あるいはβ−ガラクトシダーゼ、ホースラディッシ
ュパーオキシダーゼ等の酵素で第１抗体を標識しておく
ことにより、視覚で判定することができる。但し、酵素
を用いた場合には、この酵素で発色する色素を用いた酵
素免疫法により、発色させる必要がある。

【００２３】抗体の作製法、上記標識物質を第１抗体に
標識する方法、抗体をクロマトグラフィー片に固定する
方法は特に問わず、常法で行えばよい。例えば、金コロ
イドで抗体を標識する方法としては、特開平５５−１５
１００号公報、特表平１−５０３１７４号公報に記載の
方法が挙げられる。また、抗体をクロマトグラフィー片
に固定する方法としては、特表平１−５０３１７４号公
報等に記載されている方法が挙げられる。

【００２４】モノクローナル抗体は、ヘモグロビン等で
免疫したマウスの脾細胞とミエローマ細胞との融合細胞
（ハイブリドーマ）を培養することにより得られるが、
各種の抗体が市販されているので、それを使用してもよ
い。

【００２５】金属コロイドでの標識法は、特開平２−１
４１６６５号公報に詳しい。第２抗体及び抗イムノグロ
ブリン抗体をクロマトグラフィー片に固定するには、ニ
トロセルロース膜やナイロン膜を使用する場合は、あら
かじめクロマトグラフィー片の素材をシアノジェンブロ
マイドで活性化しておき、固定しようとする部位に抗体
溶液を滴下し、抗体を共有結合させる。この後、膜に対
する第１抗体やヘモグロビンの非特異的吸着を防ぐため
に、カゼインやウシ血清アルブミン等の溶液に浸漬して
マスクしておくとよい。

【００２６】本発明の検査具の形態としては、例えば、
クロマトグラフフィー片を容器で覆い、クロマトグラフ
ィー片の片側に採便棒を接設し、採便棒を容器から突出
させたものが挙げられる（図３）。

【００２７】

【作用】本発明の検査具及び採便棒の作用を、使用法と
併せて説明する。検査具の採便棒の先端で糞便をかき取
り、採便棒を緩衝液等に浸す。例えば、検査具容器の採
便棒を突出させた側に蓋部を設け、検査時に蓋部内に緩
衝液を収容させ、この中に採便棒を浸漬させると、検査
を簡便に行うことができる。また、蓋部に緩衝液を含有
するゲルを予め充填しておいてもよい。

【００２８】採便棒を、緩衝液あるいはゲルに浸漬させ
て撹拌すると、ヘモグロビン等は緩衝液とともに採便棒
に吸収され、クロマトグラフィー片に導かれる。その
後、上述したクロマトグラフィー片の原理に従い、ヘモ
グロビン等の有無が判定される。

【００２９】本発明の検査具を用いると、潜血検査を速
やか、かつ、簡便に行うことができる。

【００３０】

【実施例】以下に本発明の実施例を、図面に基づいて説
明する。

【００３１】

【実施例１】先ず、本発明の採便棒の実施例を説明す
る。図１に採便棒の１例を示す。これは、薄い長方形形
状に成形した硬質フェルトの先端を、断面がジグザグ状
になるように加工する。

【００３２】採便棒の他の例を図２に示す。これは、円
筒状に束ねたポリエチレンファイバー束の先端を、スプ
ーン状に加工したものである。尚、使用に際し、採便棒
を緩衝液に浸すので、先端の加工部分は必ずしも吸水性
を有していなくてもよい。したがって、先端部をプラス
チック等でコーティングすることにより強度を持たせて
もよい。

【００３３】採便棒の形状の別の例を図３に示す。これ
は、先端部に溝状の切れ込みを有しているものである。

【００３４】

【実施例２】次に、本発明の検査具の実施例を説明する
（図４、５）。これは、ヘモグロビン検出用であるが、
ヘモグロビン抗体をトランスフェリン抗体に置き換えれ
ば、トランスフェリン検出用として使用できる。

【００３５】プラスチック容器本体３１の内部に、クロ
マトグラフィー片２０を収容し、採便棒１０を、このク
ロマトグラフィー片２０の端部に接するように容器本体
３１に設置する。容器本体３１は、採便棒を設置した側
に蓋部３２が嵌合する。

【００３６】容器本体３１は、前記クロマトグラフィー
片２０と採便棒１０の一部を被覆し、後述する抗イムノ
グロブリンポリクローナル抗体を固定した領域２２及び
抗イムノグロブリン抗体を固定した領域２３が外部から
見えるように、透明プラスチックを貼った窓部３３を設
けてある。

【００３７】クロマトグラフィー片２０は、ニトロセル
ロースの薄片であり、採便棒と接する側に金コロイドで
標識した抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体（マウ
ス）を塗布した領域２１、反対側に抗ヒトヘモグロビン
ポリクローナル抗体（ウサギ）を固定した領域、さらに
その外側に抗マウスイムノグロブリン抗体（ウサギ）を
固定した領域２３を設けてある。

【００３８】抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体
（マウス）、抗ヒトヘモグロビンポリクローナル抗体
（ウサギ）、及び抗マウスイムノグロブリン抗体（ウサ
ギ）は、各々市販のもの（各々、ＳＵ−１０４：日本バ
イオテスト社製、Ａ１１８、Ｚ４５６：ダコ・ジャパン
株式会社製）を使用した。

【００３９】抗ヒトヘモグロビンモノクローナル抗体へ
の金コロイドの標識は、特表平１−５０３１７４号に記
載の方法により行った。コロイド金を０．２２μｍのフ
ィルターを通した０．１ＭのＫ₂ＣＯ₃でｐＨ７に調整
し、２０ｍｌを清浄なビーカーに入れた。これに、０．
２２μｍのフィルターを通した抗ヒトヘモグロビンモノ
クローナル抗体溶液（１ｍｇ／ｍｌ、ｐＨ９）を添加
し、２分間撹拌した。０．１ＭのＫ₂ＣＯ₃を用いて抗体
と金ゾルの混合物のｐＨを９に調整し、２ｍｌの１０％
（Ｖ／Ｖ）ＢＳＡを添加した。これを４℃で３０分間、
１２０００×ｇで遠心分離を行い、沈澱を再懸濁するこ
とを３回繰り返して精製した。さらに、２０ｍＭトリス
緩衝液（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ８．２、１％ＢＳ
Ａ）に懸濁し、金コロイド標識抗体を得た。

【００４０】抗ヒトヘモグロビンポリクローナル抗体
（ウサギ）、抗マウスイムノグロブリン抗体（ウサギ）
は、日本ポール社のイムノダインを用いて固定した。ま
た、１（Ｗ／Ｗ）％ＢＳＡ溶液（５０ｍＭトリス、ｐＨ
７．５）を用いて、抗体を固定した以外の部分をマスク
した。

【００４１】採便棒１０は、円筒形状に成形した一方向
に毛管現象により水が移動するガラス繊維であり、先端
部を溝状の切れ込みに加工してある。蓋部３２の内側に
は、別体の容器に収容された緩衝液を注入する際の目安
となる目盛りが刻示してある。検査を行う際には、採便
棒１０の先端で糞便表面をかき取り、蓋部３２の内部に
緩衝液を目盛りまで注入し、これに採便棒を浸漬させて
放置する。容器本体３１の蓋部３２の逆端に別の蓋部３
４を設け、この中にプラスチックフィルム３５等で密閉
した緩衝液あるいは緩衝液含有ゲル３６を収容しておく
と、使用時に蓋部を取り替えるだけで検査をすることが
できる。すなわち、容器本体を立てたままで容器本体の
採便棒側に蓋部３４をかぶせると、採便棒１０がフィル
ム３５に突き刺さり、容器全体を軽く振盪するだけで免
疫クロマトグラフィーを行うことができる。

【００４２】容器内、例えばクロマトグラフィー片の採
便棒に接する逆側に、乾燥剤を収容しておくと、抗体の
失活を防止することができる。

【００４３】

【実施例３】本発明の検査具の使用例を説明する。実施
例２（図４）の検査具（採便棒の先端部は、溝状の切れ
込みを有する）を用いて、ヘモグロビンの検出を行っ
た。

【００４４】ビーグル犬の糞便に各種濃度でヒトヘモグ
ロビンを混ぜ、これから本発明の検査具を用いて糞便を
かきとり、前記の手順で検出を行った。尚、ヒトヘモグ
ロビンの濃度は、０、０．２５、０．７５ｍｇ／（ｇ糞
便）とした。また、対照として、イアトロヘムチェック
（株式会社ヤトロン製）を使用した。下記の基準による
判定結果を表１に示す。

【００４５】＋＋： 非常に良く検出される ＋ ： 検出される ± ： 判定が困難 − ： 検出されない

【００４６】

【表１】

【００４７】この結果から明らかなように、本発明の検
査具は、ヒトヘモグロビンを高感度で、しかも簡便に測
定することができる。

【００４８】

【発明の効果】本発明の検査具は、採便するとともにそ
の後のヘモグロビンあるいはトランスフェリンの検出
を、被検者が自ら行うことを可能とする。その結果、鮮
血検査を迅速、かつ、簡便に行うことができる。本発明
の採便棒は、糞便の採取と免疫クロマトグラフィーを可
能にするものである。

【図面の簡単な説明】

【図１】 本発明の採便棒の一例を示す斜視図。

【図２】 本発明の採便棒の他の例を示す側面図。

【図３】 本発明の採便棒の別の例を示す側面図。

【図４】 本発明の検査具の一例を示す一部破断正面
図。

【図５】 本発明の検査具の他の例を示す一部破断正面
図。

【符号の説明】

１０・・・採便棒 １１・・・先端部 ２０・・・クロマトグラフィー片 ２１・・・第１の抗ヘモグロビン抗体を塗布した領域 ２２・・・第２の抗ヘモグロビン抗体を固定した領域 ２３・・・抗ＩｇＧ抗体を固定した領域 ３０・・・容器 ３１・・・容器本体 ３２・・・蓋部 ３３・・・窓部 ３４・・・蓋部 ３５・・・プラスチックフィルム ３６・・・緩衝液あるいは緩衝液含有ゲル

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 33/48 G01N 33/50 G01N 33/543 G01N 33/72

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 糞便中のヘモグロビンあるいはトランス
   フェリンを抗ヘモグロビン抗体あるいは抗トランスフェ
   リン抗体を用いた免疫クロマトグラフィーにより検出す
   るための検査具において、 前記検査具は、採便棒と、採便棒の一方の端部に接する
   クロマトグラフィー片と、検査具の採便棒側に設けられ
   る蓋部とを有し、 前記採便棒は、糞便を採取することが可能な硬度を有す
   るとともに水溶液を吸収する材質からなり、さらに、ク
   ロマトグラフィー片に接する端部の逆端部をヘモグロビ
   ンを含有する水溶液に浸漬させたときクロマトグラフィ
   ー片に水溶液とともにヘモグロビンを移動できる材質に
   より形成され、 前記クロマトグラフィー片は、免疫クロマトグラフィー
   によりヘモグロビンあるいはトランスフェリンを検出で
   き、 前記蓋部は、検査時に蓋部内に、採便棒を覆った状態で
   緩衝液を収容させることができ ることを特徴とする検査
   具。
2. 【請求項２】 請求項１の検査具において、前記クロマ
   トグラフィー片は、前記採便部と接する端部側に第１の
   抗ヘモグロビンモノクローナル抗体あるいは抗トランス
   フェリンモノクローナル抗体を塗布した領域を有し、他
   の端部側には前記モノクローナル抗体と抗原決定基の異
   なる第２の抗ヘモグロビン抗体あるいは抗トランスフェ
   リン抗体を固定した領域を有し、この領域を挟んで前記
   採便棒と接する側の反対側に抗イムノグロブリン抗体を
   固定した領域を有することを特徴とする検査具。
3. 【請求項３】 請求項２の検査具において、第１のモノ
   クローナル抗体は、金属コロイド、着色ラテックス及び
   酵素からなる群から選ばれる一種で標識されたことを特
   徴とする検査具。