JP3266079B2 - アルブミンの測定方法及び試薬 - Google Patents
アルブミンの測定方法及び試薬Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血清、血漿などの
生体試料中のアルブミンを測定する方法、及び試薬に関
するものであり、更に詳しくは、ブロムクレゾールパー
プル法の改良に関するものである。
生体試料中のアルブミンを測定する方法、及び試薬に関
するものであり、更に詳しくは、ブロムクレゾールパー
プル法の改良に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血清アルブミンの測定法としては、例え
ば抗アルブミン血清を用い、試料中に存在するアルブミ
ンとの反応により生じる抗原抗体複合物に由来する光散
乱強度の変化を測定する、いわゆる免疫学的測定法があ
るが、操作が煩雑なため、日常検査法としては、従来よ
りブロムクレゾールグリーン（ＢＣＧ）法、及びブロム
クレゾールパープル（ＢＣＰ）法に代表される色素結合
法（pＨ誤差法）が広く普及している。この両色素は、
共にスルホフタレイン系に属するトリフェニルメタン型
のpＨ指示薬であるが、特異性が異なり、ＢＣＧはアル
ブミンのみならずグロブリン存在下でも発色するため、
アルブミンに対する特異性が低いという欠点を有してい
る。即ち、アルブミンとの反応による発色を100％とす
ると、同重量のα2-グロブリンによる発色は、その約49
％、以下、同様にβ-グロブリンでは23％、γ-グロブリ
ンでは３％程度の発色を示すので、ＢＣＧ法により血清
試料中のアルブミンを測定した場合には、試料及び標準
品中に共存するグロブリンにより測定値が安定しないと
いう欠点を有している。
ば抗アルブミン血清を用い、試料中に存在するアルブミ
ンとの反応により生じる抗原抗体複合物に由来する光散
乱強度の変化を測定する、いわゆる免疫学的測定法があ
るが、操作が煩雑なため、日常検査法としては、従来よ
りブロムクレゾールグリーン（ＢＣＧ）法、及びブロム
クレゾールパープル（ＢＣＰ）法に代表される色素結合
法（pＨ誤差法）が広く普及している。この両色素は、
共にスルホフタレイン系に属するトリフェニルメタン型
のpＨ指示薬であるが、特異性が異なり、ＢＣＧはアル
ブミンのみならずグロブリン存在下でも発色するため、
アルブミンに対する特異性が低いという欠点を有してい
る。即ち、アルブミンとの反応による発色を100％とす
ると、同重量のα2-グロブリンによる発色は、その約49
％、以下、同様にβ-グロブリンでは23％、γ-グロブリ
ンでは３％程度の発色を示すので、ＢＣＧ法により血清
試料中のアルブミンを測定した場合には、試料及び標準
品中に共存するグロブリンにより測定値が安定しないと
いう欠点を有している。
【０００３】一方、ＢＣＰはグロブリンによっては発色
せず、ＢＣＧよりもアルブミンに対する特異性が高い。
しかしながら、ＢＣＰは他の共存物質の影響を受け易
く、また試料や標準品の中に存在するＳＨ化合物の影響
を受けるため、ＢＣＰ法は、例えば保存血清の測定値に
経日的上昇が見られる等、測定値が安定しないという欠
点を有している（村本良三ほか,臨床化学,20:13,199
1）。従って、ＢＣＧ法、ＢＣＰ法何れの測定方法も、
免疫学的測定法よりは手軽ではあるが精度的に必ずしも
十分とはいえず、アルブミンを正確に測定するために
は、夫々大きな問題点を有していた。
せず、ＢＣＧよりもアルブミンに対する特異性が高い。
しかしながら、ＢＣＰは他の共存物質の影響を受け易
く、また試料や標準品の中に存在するＳＨ化合物の影響
を受けるため、ＢＣＰ法は、例えば保存血清の測定値に
経日的上昇が見られる等、測定値が安定しないという欠
点を有している（村本良三ほか,臨床化学,20:13,199
1）。従って、ＢＣＧ法、ＢＣＰ法何れの測定方法も、
免疫学的測定法よりは手軽ではあるが精度的に必ずしも
十分とはいえず、アルブミンを正確に測定するために
は、夫々大きな問題点を有していた。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記した如
き状況に鑑みなされたもので、アルブミンに対する特異
性の高いＢＣＰを使用し、試料や標準品中の共存物質の
影響を受けず、再現性や希釈直線性も良好で、また、免
疫学的測定法と測定値が一致する、安定なアルブミンの
測定方法及び試薬を提供することを目的とする。
き状況に鑑みなされたもので、アルブミンに対する特異
性の高いＢＣＰを使用し、試料や標準品中の共存物質の
影響を受けず、再現性や希釈直線性も良好で、また、免
疫学的測定法と測定値が一致する、安定なアルブミンの
測定方法及び試薬を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明は、尿素、グアニ
ジン塩類、チオシアン酸塩類又は陰イオン性界面活性剤
から選択される蛋白質変性剤又は／ＳＨ試薬の存在下、
ブロムクレゾールパープルの吸光度変化に基づいて測定
を行うことを特徴とする、アルブミンの測定方法の発明
である。また、本発明は、尿素、グアニジン塩類、チオ
シアン酸塩類又は陰イオン性界面活性剤から選択される
蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬とブロムクレゾールパ
ープルとを含んで成る、アルブミン測定用試薬の発明で
ある。
ジン塩類、チオシアン酸塩類又は陰イオン性界面活性剤
から選択される蛋白質変性剤又は／ＳＨ試薬の存在下、
ブロムクレゾールパープルの吸光度変化に基づいて測定
を行うことを特徴とする、アルブミンの測定方法の発明
である。また、本発明は、尿素、グアニジン塩類、チオ
シアン酸塩類又は陰イオン性界面活性剤から選択される
蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬とブロムクレゾールパ
ープルとを含んで成る、アルブミン測定用試薬の発明で
ある。
【０００６】即ち、本発明者等は、ＢＣＰを用いたアル
ブミンの測定方法を改良すべく鋭意研究の結果、該測定
系に尿素、グアニジン塩類、チオシアン酸塩類又は陰イ
オン性界面活性剤から選択される蛋白質変性剤（本発明
に係る蛋白質変性剤）及び／又はＳＨ試薬を存在させる
ことにより、試料や標準品中の共存物質が測定値に与え
る影響を防止し、かつアルブミンに特異性の高い測定法
を確立できることを見出し、本発明を完成するに到っ
た。
ブミンの測定方法を改良すべく鋭意研究の結果、該測定
系に尿素、グアニジン塩類、チオシアン酸塩類又は陰イ
オン性界面活性剤から選択される蛋白質変性剤（本発明
に係る蛋白質変性剤）及び／又はＳＨ試薬を存在させる
ことにより、試料や標準品中の共存物質が測定値に与え
る影響を防止し、かつアルブミンに特異性の高い測定法
を確立できることを見出し、本発明を完成するに到っ
た。
【０００７】本発明に係る蛋白質変性剤としては、蛋白
質変性作用を有するものであって、アルブミンの測定値
に影響を与えないものであれば特に限定されないが、例
えば尿素、例えばグアニジン塩酸塩，グアニジン硫酸塩
等のグアニジン塩類、例えばチオシアン酸アンモニウ
ム，チオシアン酸カリウム，チオシアン酸ナトリウム等
のチオシアン酸塩等の塩類、陰イオン界面活性剤等が挙
げられ、中でも陰イオン界面活性剤が好ましく用いられ
る。また、これらは単独で用いても、適宜組み合わせて
用いても何れにても良い。
質変性作用を有するものであって、アルブミンの測定値
に影響を与えないものであれば特に限定されないが、例
えば尿素、例えばグアニジン塩酸塩，グアニジン硫酸塩
等のグアニジン塩類、例えばチオシアン酸アンモニウ
ム，チオシアン酸カリウム，チオシアン酸ナトリウム等
のチオシアン酸塩等の塩類、陰イオン界面活性剤等が挙
げられ、中でも陰イオン界面活性剤が好ましく用いられ
る。また、これらは単独で用いても、適宜組み合わせて
用いても何れにても良い。
【０００８】また、陰イオン界面活性剤としては、例え
ばラウリル硫酸ナトリウム（SDS），セチル硫酸ナトリ
ウム等のアルキル硫酸エステル系界面活性剤、例えばポ
リオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸ナトリ
ウム等のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
硫酸エステル塩、例えばポリオキシエチレンアルキルエ
ーテル硫酸ナトリウム，ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテル硫酸トリエタノールアミン塩等のポリオキシエチ
レンアルキルエーテル硫酸エステル塩、例えばラウリル
ベンゼンスルホン酸ナトリウム，セチルベンゼンスルホ
ン酸ナトリウム等のアルキルベンゼンスルホン酸塩等が
好ましく挙げられる。中でもラウリル硫酸ナトリウム
（SDS），ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム等が
好ましく用いられる。これらは単独で用いても、適宜組
み合わせて用いても何れにてもよい。 また、これら蛋
白質変性剤の使用濃度としては、蛋白質変性剤の種類や
処理する試料により異なるが、試料及び標準品中に含ま
れる共存物質の影響を防止し、かつアルブミンの測定値
に影響を与えない濃度であれば特に限定されることなく
選択することができ、アルブミン測定時の濃度として通
常0.001〜10w/w％、好ましくは0.01〜１w/w％、より好
ましくは0.02〜0.3w/w％となるように適宜選択し て用
いられる。
ばラウリル硫酸ナトリウム（SDS），セチル硫酸ナトリ
ウム等のアルキル硫酸エステル系界面活性剤、例えばポ
リオキシエチレンアルキルフェニルエーテル硫酸ナトリ
ウム等のポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル
硫酸エステル塩、例えばポリオキシエチレンアルキルエ
ーテル硫酸ナトリウム，ポリオキシエチレンアルキルエ
ーテル硫酸トリエタノールアミン塩等のポリオキシエチ
レンアルキルエーテル硫酸エステル塩、例えばラウリル
ベンゼンスルホン酸ナトリウム，セチルベンゼンスルホ
ン酸ナトリウム等のアルキルベンゼンスルホン酸塩等が
好ましく挙げられる。中でもラウリル硫酸ナトリウム
（SDS），ラウリルベンゼンスルホン酸ナトリウム等が
好ましく用いられる。これらは単独で用いても、適宜組
み合わせて用いても何れにてもよい。 また、これら蛋
白質変性剤の使用濃度としては、蛋白質変性剤の種類や
処理する試料により異なるが、試料及び標準品中に含ま
れる共存物質の影響を防止し、かつアルブミンの測定値
に影響を与えない濃度であれば特に限定されることなく
選択することができ、アルブミン測定時の濃度として通
常0.001〜10w/w％、好ましくは0.01〜１w/w％、より好
ましくは0.02〜0.3w/w％となるように適宜選択し て用
いられる。
【０００９】本発明に係るＳＨ試薬としては、例えば5,
5'-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)（DTNB），2,2'-ジチ
オビス(5-ニトロピリジン)(NPDS)，2,2'-ジチオジピリ
ジン（2-PDS），4,4'-ジチオジピリジン（4-PDS），4,
4'-ジチオビス(1-アジドベンゼン)(DTBPA)，酸化型グル
タチオン等のジスルフィド体、例えばヨウ素，フェリシ
アン化物，ヨードソ安息香酸，ヨウ素酸塩，亜塩素酸塩
類，水銀，亜鉛等の酸化剤、例えばヨード酢酸，クロロ
酢酸，ヨードアセトアミド，クロロアセトフェノン等の
アルキル化剤、マレイミド、例えばN-メチルマレイミ
ド，N-エチルマレイミド，N,N'-p-フェニレンジマレイ
ミド等のマレイミド誘導体、チオフタルイミド等が挙げ
られる。これらの中でも特に例えばDTNB,2-PDS,4-PDS等
のジスルフィド体、マレイミド、N-エチルマレイミド等
のマレイミド誘導体等が好ましく用いられる。また、こ
れらは単独で用いても、適宜組み合わせて用いても何れ
にても良い。これらの使用濃度としては、ＳＨ試薬の種
類や処理する試料により異なり、試料及び標準品中に含
まれる共存物質の影響を防止し、且つアルブミンの測定
値に影響を与えない濃度であれば特に限定されることな
く設定できるが、アルブミン測定時の濃度として通常0.
001〜１mM、好ましくは0.01〜0.5mMとなるように適宜選
択して用いられる。
5'-ジチオビス(2-ニトロ安息香酸)（DTNB），2,2'-ジチ
オビス(5-ニトロピリジン)(NPDS)，2,2'-ジチオジピリ
ジン（2-PDS），4,4'-ジチオジピリジン（4-PDS），4,
4'-ジチオビス(1-アジドベンゼン)(DTBPA)，酸化型グル
タチオン等のジスルフィド体、例えばヨウ素，フェリシ
アン化物，ヨードソ安息香酸，ヨウ素酸塩，亜塩素酸塩
類，水銀，亜鉛等の酸化剤、例えばヨード酢酸，クロロ
酢酸，ヨードアセトアミド，クロロアセトフェノン等の
アルキル化剤、マレイミド、例えばN-メチルマレイミ
ド，N-エチルマレイミド，N,N'-p-フェニレンジマレイ
ミド等のマレイミド誘導体、チオフタルイミド等が挙げ
られる。これらの中でも特に例えばDTNB,2-PDS,4-PDS等
のジスルフィド体、マレイミド、N-エチルマレイミド等
のマレイミド誘導体等が好ましく用いられる。また、こ
れらは単独で用いても、適宜組み合わせて用いても何れ
にても良い。これらの使用濃度としては、ＳＨ試薬の種
類や処理する試料により異なり、試料及び標準品中に含
まれる共存物質の影響を防止し、且つアルブミンの測定
値に影響を与えない濃度であれば特に限定されることな
く設定できるが、アルブミン測定時の濃度として通常0.
001〜１mM、好ましくは0.01〜0.5mMとなるように適宜選
択して用いられる。
【００１０】本発明に係るＢＣＰとしては、通常市販さ
れているものを用いれば足り、その使用濃度としては、
アルブミン測定時の濃度として、通常0.02〜0.20mM、好
ましくは0.03〜0.10mMとなるように適宜選択して用いら
れる。
れているものを用いれば足り、その使用濃度としては、
アルブミン測定時の濃度として、通常0.02〜0.20mM、好
ましくは0.03〜0.10mMとなるように適宜選択して用いら
れる。
【００１１】本発明の方法により、例えば血清、血漿等
の生体試料中のアルブミンを測定するに当っては、測定
時の溶液中には、ＢＣＰ，本発明に係る蛋白質変性剤又
は／及びＳＨ試薬以外に、この分野で通常用いられる試
薬類、例えば緩衝剤、防腐剤、蛋白質変性作用を有さな
い界面活性剤等が含まれていても良く、これらの使用濃
度としては、通常この分野で用いられる濃度範囲から適
宜選択すれば足りる。
の生体試料中のアルブミンを測定するに当っては、測定
時の溶液中には、ＢＣＰ，本発明に係る蛋白質変性剤又
は／及びＳＨ試薬以外に、この分野で通常用いられる試
薬類、例えば緩衝剤、防腐剤、蛋白質変性作用を有さな
い界面活性剤等が含まれていても良く、これらの使用濃
度としては、通常この分野で用いられる濃度範囲から適
宜選択すれば足りる。
【００１２】本発明に係る蛋白質変性剤及び／又はＳＨ
試薬を含む溶液に使用可能な緩衝剤としては、例えば酢
酸塩、グリシン、クエン酸塩、リン酸塩、ベロナール、
ホウ酸塩、コハク酸塩、トリス(ヒドロキシメチル)アミ
ノメタン（Tris）、例えば3-(N-モルホリノ)エタンスル
ホン酸（MES），3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸
（MOPS）等のグッド緩衝剤等、通常この分野で用いられ
る緩衝剤は何れも制限なく使用可能である。また、該溶
液のpＨとしては、本発明に係る蛋白質変性剤及び／又
はＳＨ試薬をＢＣＰと共存させる場合には通常4.5〜5.7
の範囲から、またＢＣＰと共存させない場合には、通常
３〜９の範囲から適宜選択される。また、本発明に適用
される試料としては、血清、血漿等の生体試料が挙げら
れる。
試薬を含む溶液に使用可能な緩衝剤としては、例えば酢
酸塩、グリシン、クエン酸塩、リン酸塩、ベロナール、
ホウ酸塩、コハク酸塩、トリス(ヒドロキシメチル)アミ
ノメタン（Tris）、例えば3-(N-モルホリノ)エタンスル
ホン酸（MES），3-(N-モルホリノ)プロパンスルホン酸
（MOPS）等のグッド緩衝剤等、通常この分野で用いられ
る緩衝剤は何れも制限なく使用可能である。また、該溶
液のpＨとしては、本発明に係る蛋白質変性剤及び／又
はＳＨ試薬をＢＣＰと共存させる場合には通常4.5〜5.7
の範囲から、またＢＣＰと共存させない場合には、通常
３〜９の範囲から適宜選択される。また、本発明に適用
される試料としては、血清、血漿等の生体試料が挙げら
れる。
【００１３】本発明の方法によりアルブミンの測定を行
うには、一液法により行っても、二液法により行っても
何れにても良いが、一液法により行う場合には、例えば
以下の如く行えばよい。即ち、試料と、ＢＣＰ、本発明
に係る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬、要すれば緩衝
剤、防腐剤、蛋白質変性作用を有さない界面活性剤、安
定化剤等を上記した如き濃度で含有するｐＨ4.5〜5.7、
好ましくはｐＨ5.0〜5.5の試液（測定用試液）とを混合
して発色させ、適当な時間経過後に570〜660nmの範囲か
ら適宜選択された波長に於ける吸光度を測定する。得ら
れた吸光度を、予め濃度既知のアルブミン溶液を試料と
し、上記と同じ測定用試薬を用いて同様の操作により得
られたアルブミン濃度と吸光度との関係を表す検量線に
あてはめることにより、試料中のアルブミン濃度を求め
ることが出来る。尚、測定操作時の温度は、通常15〜37
℃、好ましくは37℃である。
うには、一液法により行っても、二液法により行っても
何れにても良いが、一液法により行う場合には、例えば
以下の如く行えばよい。即ち、試料と、ＢＣＰ、本発明
に係る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬、要すれば緩衝
剤、防腐剤、蛋白質変性作用を有さない界面活性剤、安
定化剤等を上記した如き濃度で含有するｐＨ4.5〜5.7、
好ましくはｐＨ5.0〜5.5の試液（測定用試液）とを混合
して発色させ、適当な時間経過後に570〜660nmの範囲か
ら適宜選択された波長に於ける吸光度を測定する。得ら
れた吸光度を、予め濃度既知のアルブミン溶液を試料と
し、上記と同じ測定用試薬を用いて同様の操作により得
られたアルブミン濃度と吸光度との関係を表す検量線に
あてはめることにより、試料中のアルブミン濃度を求め
ることが出来る。尚、測定操作時の温度は、通常15〜37
℃、好ましくは37℃である。
【００１４】また、二液法により行う場合には、例えば
以下の如く行えばよい。即ち、先ず試料と、本発明に係
る蛋白質変性剤、ＳＨ試薬、緩衝剤、防腐剤、蛋白質変
性作用を有さない界面活性剤、安定化剤等を含んでいて
も良い試液（第一試液）とを混合し、570〜660nmの範囲
から適宜選択された波長に於ける吸光度（吸光度１）を
測定する。次いで、この混合液と、ＢＣＰ、要すれば本
発明に係る蛋白質変性剤，ＳＨ試薬、緩衝剤、防腐剤、
蛋白質変性作用を有さない界面活性剤、安定化剤等を含
んでいても良い試液（第二試液）とを混合して発色さ
せ、適当な時間経過後、先に選択した波長に於ける吸光
度（吸光度２）を測定する。但し、本発明に係る蛋白質
変性剤又は／及びＳＨ試薬は、第一試液と第二試液の少
なくとも一方には含まれていなければならない。次い
で、吸光度２と吸光度１とから求めた吸光度差を、予め
濃度既知のアルブミン濃度を試料とし、上記と同じ第
１、第２試液を用いて同様の操作により得られた、アル
ブミン濃度と吸光度差との関係を表す検量線にあてはめ
ることにより、試料中のアルブミン濃度を求めることが
出来る。
以下の如く行えばよい。即ち、先ず試料と、本発明に係
る蛋白質変性剤、ＳＨ試薬、緩衝剤、防腐剤、蛋白質変
性作用を有さない界面活性剤、安定化剤等を含んでいて
も良い試液（第一試液）とを混合し、570〜660nmの範囲
から適宜選択された波長に於ける吸光度（吸光度１）を
測定する。次いで、この混合液と、ＢＣＰ、要すれば本
発明に係る蛋白質変性剤，ＳＨ試薬、緩衝剤、防腐剤、
蛋白質変性作用を有さない界面活性剤、安定化剤等を含
んでいても良い試液（第二試液）とを混合して発色さ
せ、適当な時間経過後、先に選択した波長に於ける吸光
度（吸光度２）を測定する。但し、本発明に係る蛋白質
変性剤又は／及びＳＨ試薬は、第一試液と第二試液の少
なくとも一方には含まれていなければならない。次い
で、吸光度２と吸光度１とから求めた吸光度差を、予め
濃度既知のアルブミン濃度を試料とし、上記と同じ第
１、第２試液を用いて同様の操作により得られた、アル
ブミン濃度と吸光度差との関係を表す検量線にあてはめ
ることにより、試料中のアルブミン濃度を求めることが
出来る。
【００１５】尚、本発明の方法により試料中のアルブミ
ンを測定する場合、測定精度向上等の効果を考慮する
と、本発明に係る蛋白質変性剤とＳＨ試薬とを併用する
ことが望ましい。また、ＢＣＰを用いる本発明のアルブ
ミン測定は、通常は自動分析機等を用いて行われる。
ンを測定する場合、測定精度向上等の効果を考慮する
と、本発明に係る蛋白質変性剤とＳＨ試薬とを併用する
ことが望ましい。また、ＢＣＰを用いる本発明のアルブ
ミン測定は、通常は自動分析機等を用いて行われる。
【００１６】本発明のアルブミン測定用試薬は、ＢＣＰ
と、本発明に係る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬を含
んで成るものである。より具体的には、ＢＣＰと、本
発明に係る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬とを含んで
成る一液法用試薬、ＢＣＰを含まない第一試薬とＢＣ
Ｐを含む第二試薬とから成り、本発明に係る蛋白質変性
剤とＳＨ試薬の少なくとも一方が、第一試薬と第二試薬
の少なくとも一方に含まれている、二液法用試薬、等が
挙げられる。また、その構成要素の好ましい態様と具体
例は上記一液法、二液法の説明で述べた通りである。ま
た、該アルブミン測定用試薬には、ＢＣＰ、本発明に係
る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬以外にもその他の試
薬類、例えば安定化剤、緩衝剤、蛋白質変性作用を有さ
ない界面活性剤、防腐剤等の通常この分野で使用される
試薬類を含有していてもよく、その濃度は通常この分野
で用いられる濃度範囲から適宜選択すれば足りる。以下
に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。
と、本発明に係る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬を含
んで成るものである。より具体的には、ＢＣＰと、本
発明に係る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬とを含んで
成る一液法用試薬、ＢＣＰを含まない第一試薬とＢＣ
Ｐを含む第二試薬とから成り、本発明に係る蛋白質変性
剤とＳＨ試薬の少なくとも一方が、第一試薬と第二試薬
の少なくとも一方に含まれている、二液法用試薬、等が
挙げられる。また、その構成要素の好ましい態様と具体
例は上記一液法、二液法の説明で述べた通りである。ま
た、該アルブミン測定用試薬には、ＢＣＰ、本発明に係
る蛋白質変性剤又は／及びＳＨ試薬以外にもその他の試
薬類、例えば安定化剤、緩衝剤、蛋白質変性作用を有さ
ない界面活性剤、防腐剤等の通常この分野で使用される
試薬類を含有していてもよく、その濃度は通常この分野
で用いられる濃度範囲から適宜選択すれば足りる。以下
に実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明するが、本
発明はこれら実施例により何ら限定されるものではな
い。
【００１７】
実施例１ 日立7070形自動分析装置（(株)日立製作所製）を使用し
て、表１に記載された、蛋白質変性剤、ＳＨ試薬を含む
試液を調製し（Ｒ−１）、アルブミン測定時の負誤差の
程度を測定した。 〔試料〕ヒトプール血清１及び２を試料とした。 〔アルブミン標準液〕ヒト蛋白標準血清（和光純薬工業
(株)製、表示値43g/l）を規定量の精製水で溶解し、標
準液とした。 〔試薬〕試液１（Ｒ−１）：Tris-HCl緩衝液（ｐＨ8.0） 25mM 所定の蛋白質変性剤 0.03％ 所定のＳＨ試薬 0.1mM 試液２（Ｒ−２）：コハク酸緩衝液（ｐＨ5.5） 250mM ＢＣＰ 0.15mM トリトンX-100(ホ゜リオキシエチレン(10)オクチルフェニル エーテル) 0.3％ 〔測定パラメータ（測定条件）〕 測定方法：２ポイントエンド法[１５]−[３１] 試料量： 4μｌ Ｒ−１：240μｌ Ｒ−２：240μｌ 測定波長：700／600nm 測定温度：37℃ 本発明の方法により得られた試料中のアルブミン測定値
と、N-抗血清アルブミン（ヘキストジャパン社製）を用
いた免疫学的測定法により得られた測定値を100％とし
たときの本発明方法により得られた測定値の相対値
（％）を併せて表１，２に示す。
て、表１に記載された、蛋白質変性剤、ＳＨ試薬を含む
試液を調製し（Ｒ−１）、アルブミン測定時の負誤差の
程度を測定した。 〔試料〕ヒトプール血清１及び２を試料とした。 〔アルブミン標準液〕ヒト蛋白標準血清（和光純薬工業
(株)製、表示値43g/l）を規定量の精製水で溶解し、標
準液とした。 〔試薬〕試液１（Ｒ−１）：Tris-HCl緩衝液（ｐＨ8.0） 25mM 所定の蛋白質変性剤 0.03％ 所定のＳＨ試薬 0.1mM 試液２（Ｒ−２）：コハク酸緩衝液（ｐＨ5.5） 250mM ＢＣＰ 0.15mM トリトンX-100(ホ゜リオキシエチレン(10)オクチルフェニル エーテル) 0.3％ 〔測定パラメータ（測定条件）〕 測定方法：２ポイントエンド法[１５]−[３１] 試料量： 4μｌ Ｒ−１：240μｌ Ｒ−２：240μｌ 測定波長：700／600nm 測定温度：37℃ 本発明の方法により得られた試料中のアルブミン測定値
と、N-抗血清アルブミン（ヘキストジャパン社製）を用
いた免疫学的測定法により得られた測定値を100％とし
たときの本発明方法により得られた測定値の相対値
（％）を併せて表１，２に示す。
【００１８】
【表１】
【００１９】
【表２】
【００２０】表１及び表２の結果から、本発明に係る蛋
白質変性剤、及びＳＨ試薬の何れをも添加しないでＢＣ
Ｐ測定を行うと、免疫学的測定法と比較して測定値が低
くなる（負誤差が生じる）のに対し、本発明に係る蛋白
質変性剤、及び／又はＳＨ試薬を共存させると、免疫学
的測定法とも測定値が一致し、測定値の負誤差が改善さ
れることが判る。
白質変性剤、及びＳＨ試薬の何れをも添加しないでＢＣ
Ｐ測定を行うと、免疫学的測定法と比較して測定値が低
くなる（負誤差が生じる）のに対し、本発明に係る蛋白
質変性剤、及び／又はＳＨ試薬を共存させると、免疫学
的測定法とも測定値が一致し、測定値の負誤差が改善さ
れることが判る。
【００２１】実施例２ 患者血清69例を試料として、日立7070形自動分析装置
（(株)日立製作所製）を使用し、蛋白変性剤としてラウ
リル硫酸ナトリウム並びにＳＨ試薬としてＤＴＮＢを用
いた本発明の方法によりアルブミンの測定を行った。ま
た、比較のため同じ検体について、免疫学的測定法〔Ｎ
−抗血清アルブミン（ヘキストジャパン社製）を用いる
方法。測定機器：ベーリングネフェロメーターBN100
（ベーリングベルケ社製）〕によるアルブミンの測定を
行った。 １．本発明の測定法 〔アルブミン標準液〕ヒト蛋白標準血清（和光純薬工業
(株)製、表示値43g/l）を規定量の精製水で溶解し、標
準液とした。 〔試薬〕 試液１（Ｒ−１）：Tris-HCl緩衝液（ｐＨ8.0） 25mM ＳＤＳ 0.03％ ＤＴＮＢ 0.1mM 試液２（Ｒ−２）：コハク酸緩衝液（ｐＨ5.5） 250mM ＢＣＰ 0.15mM トリトンＸ−100 0.3% 〔測定パラメータ（測定条件）〕 測定方法：２ポイントエンド法[１５]−[３１] 試料量： 4μｌ Ｒ−１：240μｌ Ｒ−２：240μｌ 測定波長：700／600nm 測定温度：37℃ ２．免疫学的測定方法 〔試薬〕［Ｎ−抗血清アルブミン（ヘキストジャパン社
製）］ 〔測定パラメータ（測定条件）〕 試料量：15μｌ（患者血清を生理食塩水で400倍に希釈
したもの） 抗血清：30μｌ 緩衝液(1)：100μｌ 緩衝液(2)：130μｌ 測定温度：室温（25℃） 測定方法：10秒及び６分10秒後の散乱強度を測定し、そ
の差を求め、濃度既知のアルブミン溶液（標準）を用い
て得られた散乱強度と対比して試料中のアルブミン濃度
を算出した。 本発明の測定法により得られた測定値と、免疫学的測定
法により得られた測定値との相関図を図１に示す。
（(株)日立製作所製）を使用し、蛋白変性剤としてラウ
リル硫酸ナトリウム並びにＳＨ試薬としてＤＴＮＢを用
いた本発明の方法によりアルブミンの測定を行った。ま
た、比較のため同じ検体について、免疫学的測定法〔Ｎ
−抗血清アルブミン（ヘキストジャパン社製）を用いる
方法。測定機器：ベーリングネフェロメーターBN100
（ベーリングベルケ社製）〕によるアルブミンの測定を
行った。 １．本発明の測定法 〔アルブミン標準液〕ヒト蛋白標準血清（和光純薬工業
(株)製、表示値43g/l）を規定量の精製水で溶解し、標
準液とした。 〔試薬〕 試液１（Ｒ−１）：Tris-HCl緩衝液（ｐＨ8.0） 25mM ＳＤＳ 0.03％ ＤＴＮＢ 0.1mM 試液２（Ｒ−２）：コハク酸緩衝液（ｐＨ5.5） 250mM ＢＣＰ 0.15mM トリトンＸ−100 0.3% 〔測定パラメータ（測定条件）〕 測定方法：２ポイントエンド法[１５]−[３１] 試料量： 4μｌ Ｒ−１：240μｌ Ｒ−２：240μｌ 測定波長：700／600nm 測定温度：37℃ ２．免疫学的測定方法 〔試薬〕［Ｎ−抗血清アルブミン（ヘキストジャパン社
製）］ 〔測定パラメータ（測定条件）〕 試料量：15μｌ（患者血清を生理食塩水で400倍に希釈
したもの） 抗血清：30μｌ 緩衝液(1)：100μｌ 緩衝液(2)：130μｌ 測定温度：室温（25℃） 測定方法：10秒及び６分10秒後の散乱強度を測定し、そ
の差を求め、濃度既知のアルブミン溶液（標準）を用い
て得られた散乱強度と対比して試料中のアルブミン濃度
を算出した。 本発明の測定法により得られた測定値と、免疫学的測定
法により得られた測定値との相関図を図１に示す。
【００２２】
【図１】
【００２３】（r=0.982、y=0.978x＋1.8、x(免疫学的測
定法)の平均値＝36.0(g/l)、y(本発明の測定法)の平均
値＝36.9(g/l)、n=69） 図１より、本発明の測定法は従来の免疫学的測定法と高
い相関性があることが判る。
定法)の平均値＝36.0(g/l)、y(本発明の測定法)の平均
値＝36.9(g/l)、n=69） 図１より、本発明の測定法は従来の免疫学的測定法と高
い相関性があることが判る。
【００２４】
【発明の効果】上記した如く、本発明は、ＢＣＰを用い
て例えば血清、血漿などの生体試料中のアルブミンを測
定する方法、及び試薬の改良技術に関するものであり、
本発明の測定法によれば、試料や標準品中の共存物質の
影響を受けず、再現性良くアルブミンの測定を行うこと
ができ、また免疫学的測定法との相関も良好であり、斯
業に貢献するところ極めて大なる発明である。
て例えば血清、血漿などの生体試料中のアルブミンを測
定する方法、及び試薬の改良技術に関するものであり、
本発明の測定法によれば、試料や標準品中の共存物質の
影響を受けず、再現性良くアルブミンの測定を行うこと
ができ、また免疫学的測定法との相関も良好であり、斯
業に貢献するところ極めて大なる発明である。
【００２５】
【図１】実施例２で得られた、本発明のアルブミン測定
方法により得られた測定値と、従来法である免疫学的測
定法により得られた測定値との相関図である。
方法により得られた測定値と、従来法である免疫学的測
定法により得られた測定値との相関図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/68 G01N 33/52
Claims (12)
- 【請求項１】尿素、グアニジン塩類、チオシアン酸塩類
又は陰イオン性界面活性剤から選択される蛋白質変性剤
又は／及びＳＨ試薬の存在下、ブロムクレゾールパープ
ルの吸光度変化に基づいて測定を行うことを特徴とす
る、アルブミンの測定方法。 - 【請求項２】蛋白質変性剤が陰イオン界面活性剤であ
る、請求項１に記載のアルブミンの測定方法。 - 【請求項３】ＳＨ試薬がジスルフィド体、酸化剤、アル
キル化剤、マレイミド、マレイミド誘導体又はチオフタ
ルイミドである、請求項１に記載のアルブミンの測定方
法。 - 【請求項４】ＳＨ試薬がジスルフィド体、マレイミド又
はマレイミド誘導体である、請求項１に記載のアルブミ
ンの測定方法。 - 【請求項５】蛋白質変性剤とＳＨ試薬の組合せが、陰イ
オン界面活性剤と、ジスルフィド体、マレイミド又はマ
レイミド誘導体である、請求項１に記載のアルブミンの
測定方法。 - 【請求項６】蛋白質変性剤が陰イオン界面活性剤で、Ｓ
Ｈ試薬がジスルフィド体である、請求項１に記載のアル
ブミンの測定方法。 - 【請求項７】尿素、グアニジン塩類、チオシアン酸塩類
又は陰イオン性界面活性剤から選択される蛋白質変性剤
又は／及びＳＨ試薬とブロムクレゾールパープルとを含
んで成る、アルブミン測定用試薬。 - 【請求項８】蛋白質変性剤が陰イオン界面活性剤である
請求項７に記載のアルブミン測定用試薬。 - 【請求項９】ＳＨ試薬がジスルフィド体、酸化剤、アル
キル化剤、マレイミド誘導体又はチオフタルイミドであ
る、請求項７に記載のアルブミン測定用試薬。 - 【請求項１０】ＳＨ試薬がジスルフィド体又はマレイミ
ド誘導体である、請求項７に記載のアルブミン測定用試
薬。 - 【請求項１１】蛋白質変性剤とＳＨ試薬の組合せが、陰
イオン界面活性剤と、ジスルフィド体、マレイミド又は
マレイミド誘導体である、請求項７に記載のアルブミン
測定用試薬。 - 【請求項１２】蛋白質変性剤が陰イオン界面活性剤で、
ＳＨ試薬がジスルフィド体である、請求項７に記載のア
ルブミン測定用試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP32383597A JP3266079B2 (ja) | 1996-12-20 | 1997-11-10 | アルブミンの測定方法及び試薬 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP35498396 | 1996-12-20 | ||
| JP8-354983 | 1996-12-20 | ||
| JP32383597A JP3266079B2 (ja) | 1996-12-20 | 1997-11-10 | アルブミンの測定方法及び試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10232233A JPH10232233A (ja) | 1998-09-02 |
| JP3266079B2 true JP3266079B2 (ja) | 2002-03-18 |
Family
ID=26571308
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP32383597A Expired - Lifetime JP3266079B2 (ja) | 1996-12-20 | 1997-11-10 | アルブミンの測定方法及び試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3266079B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2248909B1 (en) * | 2001-01-31 | 2016-09-28 | Asahi Kasei Pharma Corporation | Compositions for assaying glycoprotein |
| CN114563575A (zh) | 2020-11-27 | 2022-05-31 | 爱科来株式会社 | 白蛋白测定用试验片 |
-
1997
- 1997-11-10 JP JP32383597A patent/JP3266079B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10232233A (ja) | 1998-09-02 |
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