JP3257970B2 - 二特異的抗体を用いた幹細胞移植における汚染腫瘍細胞の除去 - Google Patents
二特異的抗体を用いた幹細胞移植における汚染腫瘍細胞の除去Info
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Description
の幹細胞移植における、無傷の二特異的抗体を用いた腫
瘍細胞汚染の除去に関する。
イツ国の女性のガン統計の首位を占めている。診断時に
リンパ腺侵襲に罹患している女性の3分の1未満は、再
発無しに10年間生存する。このような背景に抗して、
ここ数年の間、重篤なリンパ腺侵襲及び遠隔転移に罹患
した女性患者の、高投与量化学治療を伴う自家骨髄及び
幹細胞移植による生存期間の延長または治療のための努
力がなされてきた。高投与量化学治療に対する応答速度
は速いが、転移状態の永久的回復は殆ど起こらなかっ
た。
が待機療法(palliative therapy)であった。臨床相1の
研究により、高投与量化学治療(HD−CT)に続く自
家骨髄または幹細胞移植(aPBSZT)が化学治療感
受性の転移した乳ガンを持つ女性患者の完全な緩解を達
成できることを示した。しかし、この緩解は、時間的に
限られており、殆どの場合再発が起こる。再発は、移植
によって再浸出した及び/または患者のHD−CTで生
き残ったクローン原性腫瘍細胞から生ずると思われる。
ミクロ転移は、化学治療後の骨髄において、C215と
いったCK19またはepcamに対する感受性RT−
PCRを用い、免疫細胞学によって検出される。これら
は、HD−CT及び自家幹細胞移植の後でさえも好まし
くない予後を伴う。従って、最小残存疾患(MRD)の
除去及び移植片の腫瘍細胞汚染からの精製のための新た
な概念を開発する必要がある。おそらく緩解達成時に
は、MRDは殆ど、休止状態にあることにより(速度論
的耐性)、または多重薬物耐性といった生物化学的機構
を創出することにより、抗増殖化学治療に対して耐性と
なっている腫瘍細胞からなる。
る本質的な問題は、移植片の腫瘍細胞による汚染であ
り、後者は患者における再発の発生に寄与する。今日ま
で、幹細胞移植片の腫瘍細胞汚染からの精製には、免疫
原性ビーズによる「パージング(追放)」が用いられて
いた。この技術によると、腫瘍細胞は、抗体を保持した
鉄に結合することにより磁石上に捕捉されることによ
り、移植片から除去される。しかし、要する時間及び高
コスト(約20,000DM/患者)を伴う高い技術的
努力は、欠点となっていた。さらに、これに従って残存
腫瘍細胞の数を低減させると、遅延後であっても再発が
発生することがある。この理由は、この方法を幹細胞移
植に限定すること、及び、腫瘍細胞が例えば「正常細胞
との凝集」によってこの機械的漏れることであると思わ
れる。
特異的F(ab’)2フラグメントを組み合わせた活性
化T細胞の in vitro での腫瘍細胞への添加ような幹細
胞移植片を精製する他の免疫学的方法が試験された。こ
のようなパージング造血幹細胞は、増殖アッセイで測定
したところ、それらの機能に影響しないが、これらの実
験における腫瘍細胞を殺傷する能力は比較的限られたも
のである(1−2log腫瘍低減)ことがわかった。ま
た、2週間培養して予め活性化したT細胞は、この方法
にとっては好ましくなく、努力を増大させ臨床応用を妨
げる。本発明の目的は、従来技術から知られている欠点
を解消するとともに、幹細胞製剤の汚染腫瘍細胞の数を
低減する新規な方法を提供することにある。
的は請求項1で特徴づけられる方法によって達成され
る。好ましい実施態様は、従属請求項及び以下の実施例
を伴う説明から明らかである。
る例示を提供する。図1は、二特異的抗体による腫瘍の
免疫治療における補助細胞の役割を示す(ADCC=抗
体依存性細胞障害性細胞)。二特異的抗体は、一方の結
合腕でT細胞のT細胞レセプター複合体に結合でき、他
方の結合腕で腫瘍細胞の腫瘍関連抗原と結合できる。そ
れにより、それらはT細胞を活性化し、活性化されたT
細胞はサイトカインを放出して細胞を殺傷する。さら
に、T細胞が、二特異的抗体による活性化の間に、それ
らのレセプターを介して腫瘍特異的抗原を認識し、それ
により長期に渡る免疫化が開始される可能性がある。こ
の点で特に重要なのは、二特異的抗体の無傷のFc部分
であり、それは、単球/マクロファージ/樹状細胞とい
った補助細胞への結合を媒介し、これらの細胞自身を細
胞毒性とし、及び/または同時にT細胞に重要な共刺激
シグナルをトランスデュースする(図1参照)。
特異的抗体が用いられる。無傷の二特異的抗体は、2つ
の抗体半分子(semi-molecules)(一方はH−、他方はL
−イムノグロブリン鎖)を具備し、各々が特異性を示
し、さらに、通常の抗体のように、周知のエフェクター
機能を発揮するFc部分を有する。これらは、好ましく
はクアドローマ(quadroma)技術を用いて調製する。この
調製方法は、ドイツ国特許出願公開4419399号公
報に例示されている。この公報の開示全体を参考文献と
して取り入れる。他の調製方法も、本発明で要求される
上記の様な無傷の二特異的抗体が導かれるならば使用で
きる。
ォレーシス(leucophoresis)産物)の汚染腫瘍細胞が、
(抗−CD3×抗−c−erbB−2、抗−CD3×抗
−LewisY、及び抗−CD3×抗−ep−cam、
例えば、抗−CD3×抗−C215のような)二特異的
抗体によってin vitro で除去される。二特異的抗体と
幹細胞の汚染腫瘍細胞との接触は、二特異的抗体を腫瘍
細胞とT細胞に結合させ、なおかつ幹細胞の生存力を維
持するような条件下で行われる。これらのパラメータを
維持することは、幹細胞及びリンパ球の生き残り及び生
存力のために必要である。例えば、幹細胞移植片(ロイ
コフォレーシス産物)は、二特異的抗体と、約4−72
時間、好ましくは24−48時間、室温かつ30,00
0−75,000細胞/μl、好ましくは30,000
−50,000細胞/μlの細胞密度で、緩く振とうし
ながらインキュベートする。約10×109細胞/(幹
細胞移植片)という全細胞数では、100−500μg
の二特異的抗体(bsAb)の量は、腫瘍細胞を殺傷す
るのに十分である。本発明の方法で更に重要な点は、い
わゆる無傷の二特異的抗体を用いることである。これら
の抗体は、(ここで用いられる特異性により)T細胞を
腫瘍細胞に向けることができるだけでなく、Fc部分の
エフェクター機能により、補体−媒介溶菌によって、あ
るいは、マクロファージ、単球または活性化ニューロフ
ィル顆粒球等のFcレセプター陽性細胞の結合によって
腫瘍細胞を殺傷するのに適している。すなわち、無傷の
bsAbにより、腫瘍細胞破壊の複数の機構が同時に活
性化される。
能的なFc部分を具備している。機能的Fc部分を含ま
ない二特異的F(ab)2フラグメントとは異なり、本
発明の無傷の二特異的抗体は、T細胞のみならず、Fc
レセプター陽性細胞としても知られる補助細胞(例え
ば、単球、マクロファージ、樹状細胞)にも結合でき
る。細胞の結合は効率的な腫瘍破壊において本質的な役
割を果たし、その効率は、Kaneko 等によって用いられ
た方法に比較して10−1000倍高い。本発明の無傷
の二特異的抗体は、補助細胞によって抗体に向けられた
T細胞の最適な共刺激を可能にする。特に、この最適共
刺激煮たいする応答は、表面抗原様CD40、Bー7.
1、B−7.2、LFA−3、特に分泌されたサイトカ
イン(IL−2、IL−6、IL−12、TNF−α
様)である。
り、T細胞による腫瘍細胞の効率的な直接破壊が得ら
れ、さらに、腫瘍に対する免疫反応が開始される。本発
明の二特異的抗体に結合した補助細胞は、取り込まれ、
処理され、腫瘍の一部を表現するように刺激される。本
発明の二特異的抗体を用いることによって開始されるこ
れらの段階は、体液性及び細胞性免疫反応の誘発に本質
的に必要である。
を用いることにより、量的効果が得られるだけでなく、
腫瘍に対する免疫反応の誘発という新たな質的効果も得
られる。
により、T細胞の前処理のためにIL−2のようなサイ
トカインを追加することも、少なくとも2週間というこ
れらの細胞の長期間培養することも必要でなくなる。こ
のT細胞の培養は、極めて高コストの特別な条件下(G
MP条件)で行う必要があり、Paul Ehrlich Institute
またはFDAの認可の下に行う必要があった。本発明
の方法では、GMP条件下でのT細胞培養は必要ない。
現在のところ、幹細胞移植片中の腫瘍細胞の有効な破壊
を得ることにできる他の方法は見出されていない。
性を定量化するために、1人の正常ドナー(表1、ドナ
ー2参照)及び2人の白血病患者のリオコフェレーシス
産物(108細胞)を、所定量(0.1%)の腫瘍細胞
(乳ガン細胞ラインMCF−7)と混合した。各細胞混
合物を4μgのbsAbとともに(または、抗体無しあ
るいは等モル量の旁抗体とともに)、室温で48時間、
50,000細胞/μlの細胞密度で緩く振とうしなが
らインキュベートし、細胞を異なる細胞密度で、96ウ
ェル(105細胞/ウェル)及び24ウェル(各々3×
106または106細胞/ウェル)のNUNC(登録商標)細
胞培養平底プレートにプレートした。2週間の培養期間
の後、プレーとした細胞当たりの腫瘍細胞コロニーの数
に基づいて、bsAbが、腫瘍細胞の成長を1,000
−10,000倍(log3−4)低減できることが観
察された。腫瘍コロニー成長アッセイ(colonog
enicA)の結果を、表1にまとめて示す。表1中、
MNCは、モノ−ヌクレーテド細胞(mono-nucleated ce
ll)を表し、a)は、各々6または12サンプルウェル中
の、14日培養後の陽性ウェル(腫瘍成長)の数であ
る。
発明の方法は、乳ガン患者の幹細胞製剤における汚染腫
瘍細胞の低減のみならず、卵巣ガン患者または急性また
は慢性白血病、リンパ腫、精巣ガンまたは化学治療感受
性の他のガンの幹細胞製剤における汚染腫瘍細胞の低減
にも有用である。各々の用いるべき抗体または抗体の組
み合わせは当業者には周知であり、当業者には過度の実
験無しに日常的に選択及び決定することができる。
細胞移植によって、乳ガン、特に進行した乳ガン患者の
治癒または疾患無しの生存期間の延長である。例えば、
本発明の好ましい実施態様においては、乳ガンの診断の
後、この主題は以下の過程によって達成される。 1.転移腫瘍細胞が得られるとの診断の後はいつでも可
能である。フローサイトメトリーによる、c−erb−
B2及びep−cam(上皮細胞接着分子)抗原の抗原
または抗原密度の検出。腫瘍細胞のクリオコンサベーシ
ョン(cryoconservation)。 2.化学治療に先立つロイコフォレーシスによる末梢血
液からの自家Tリンパ球の調製。免疫組織学及びRT−
PCRによるロイコフォレーシス産物の腫瘍細胞汚染可
能性の試験。免疫磁石ビーズによる腫瘍細胞汚染からの
T細胞濃縮物の精製。 3.ECスケジュール(エピルビシン60mg/m2に
+シクロホスファミド600mg/m2、次いで、G−
CSF(5−10μg/kg/日))に従う2サイクル
の化学治療、サイクル後の造血及びCD34+細胞動員
の回復の監視。
胞/kgが得られるようなエピルビシン(epirubicine)
/シクロホスファミド化学治療及びG−CSFでの動員
後のロイコフォレーシスによる血液からの造血幹細胞の
調製。 5.二特異的抗体(抗−CD3×抗−c−erbB−2
及び高CD3×抗−ep−cam、500μg/患者)
を用いた、30,000−50,000細胞/μlの細
胞密度における室温での24ー48時間のインキュベー
ションによる自家幹細胞製剤中の汚染腫瘍細胞の破壊。
−180℃でのクリオコンサベーション。 6.ETスケジュール(エピルビシン60mg/m2+
タクソール(taxole)175mg/m2、次いで、CSF
(5−10μg/kg/日))に従う2サイクルの化学
治療、造血及びCD34+細胞動員の回復の監視。任意
に、バックアップ調製のためのロイコフォレーシスの実
施。 7.最後の誘発性化学治療の3週間後、チオテパ(thiot
epa)(600mg/kg、静脈)及びメルファラン(mel
phalane)(160mg/kg、静脈)によるミエロアブ
ラチブ(myeloablative)高投与量化学治療の実施。 8.引き続く自家幹細胞の再感染。
含まれる活性化T細胞の再刺激のための1mgのbsA
bの投与並びに過敏症反応の予防及び治療のための手段
による抗腫瘍活性の維持。Haagen 等は、in vitro 実験
において、3日以内のbsAbの連続投与が腫瘍細胞の
死滅をかなり促進することを示した。 10.自家幹細胞移植後の造血再構成の後(約14−2
1日目)の自家T細胞の再感染。特にTヘルパー細胞の
CD45RA/CD45RO比を考慮したフローサイト
メトリーによる末梢血液中のT細胞再構成の監視。 11.過敏生反応の予防及び治療のための手段を伴う投
与量を増加させながらの3日の in vivo 二特異的抗体
(200μg/1mg/2mg)の投与。 12.追跡調査:緩解の程度、マウス及びラットイムノ
グロブリンに対する抗−抗体反応の見積もり;造血及び
末梢血液におけるT細胞サブポピュレーションの再構成
の回復の監視;達成された緩解持続時間の評価のための
通常の後療法。末梢血液からの腫瘍特異的T細胞検出の
ための実験。
例えば乳ガン細胞のような汚染腫瘍細胞の数を、幹細胞
製剤中でそれらを破壊することにより低減するために用
いられる。この方法では、抗体は、T細胞をガン細胞の
方向に再び向かせるように機能し、腫瘍壊死因子αのよ
うなサイトカインを分泌させて腫瘍細胞の溶解を導くよ
うにT細胞を活性化する。二特異的抗体のFc部位に位
置するFcレセプターを介してマクロファージを活性化
することにより、このサイトカイン効果が促進され;重
要な共刺激シグナルが同時にFcγRI+細胞(単球/
マクロファージ/樹状細胞)からT細胞に伝達され、T
細胞のアネルギー化が阻害される。
た投与量で感染され、自家T細胞で再感染される。T細
胞の活性化及び残存乳ガン細胞の溶解は、in vivo で達
成される。この場合、腫瘍特異的T細胞も膨張し(1で
述べた幹細胞製剤以外)、それは、に共刺激無しのT細
胞レセプターを介する腫瘍部位における部分的刺激によ
って、または腫瘍によるIL−10分泌によって既にア
ネルギー性となっている。今日の知識によれば、免疫治
療は、僅かに残った疾患の段階においてのみ自家腫瘍に
対する完全な有効性を発揮することができ;免疫治療と
高投与量化学治療及び自家幹細胞移植の組み合わせが最
も有望であると思われる。従って、T細胞は、化学治療
または放射線治療の終了後は注入すべきではない。
く知られている。例えば、無傷の二特異的抗体は新たに
開発された調製方法(2)を用いて十分な量を製造する
ことができる。乳ガン細胞上の2つの異なる腫瘍を伴う
抗原(例えば、GA−733−2=C215のような、
c−erb−B2、ep−cam)に対して向けられた
2つの二特異的抗体の組み合わせは、抗原の一方のみを
発現する腫瘍細胞を同定せずに残すという危険性を低減
させる。細菌腫瘍細胞をT細胞濃縮物とともに再注入す
る危険は、抗体及び免疫磁石ビーズによる精製によって
大部分回避できる。少量の残存腫瘍細胞は、免疫組織化
学的に、並びに、C215またはCK19抗原に対する
RT−PCRにより検出できる。
で、二特異的抗体は、最初は低投与量かつ厳格な制御下
で投与される。文献での報告によれば、類似の二特異的
抗体は、13mgまでの量で全身投与しても実質的に副
作用はない(1)。従って、患者当たり4mgの投与量
では副作用はないものと考えられる。以下に、移植及び
患者における残存乳ガン細胞のの破壊のための化学治療
及び免疫治療の組み合わせにおける二特異的抗体の役割
を説明する。
れるG−CSF治療によって、Fcγ−RI−陽性細胞
の数も増加する(3)。これらは、殆どが、好中球顆粒
球でのG−CSF−誘発Fcγ−RI発現によるもので
ある。高親和性Fcγ−レセプターIは、ラットIgG
2b及びマウスIgG2aのアイソタイプの組み合わせ
という異種ラット/マウスbsAbにも結合できる
(4)。このアイソタイプの組み合わせは、ここで用い
るbsAbに対して、極めて豊富な低親和性Fcγ−レ
セプタータイプI及びタイプIIに対する結合を阻害す
るために選択され(12)、従って、サイトカインの未
調節放出の危険を最小にする。同様の挙動を示すアイソ
タイプの組み合わせラットIgG2b及びマウスIgG
1を有するbsAbの13mgという投与量は、既に患
者の第1相試験でテストされている。僅かな毒性の副作
用(WHO分類階級における grade I)があるので(1
3)、患者当たり4mgという見積もられた投与量は許
容されるべきであろう。
最適な抗−腫瘍効果について2つの本質的な利点を示
す: 1.Fcγ−RI−陽性細胞は、ADCCによる腫瘍細
胞除去の能力を有しており(3)、よって、bsAbに
よって腫瘍に向けられた細胞毒性T細胞の抗−腫瘍効果
に対して相乗的に寄与する。 2.(単球/マクロファージ/樹状細胞のような)Fc
γRI−陽性細胞は、T細胞への抗原提示に類似した重
要な共刺激シグナルを提供することができ、それによっ
て、T細胞のアネルギー化を防止できる。さらに、図1
に示したように、(腫瘍細胞上のMHC抗原を介して表
現される)腫瘍特異的ペプチドを認識するT細胞レセプ
ターを有するT細胞でさえも、無傷のbsAbによって
媒介されたT細胞の補助細胞及び腫瘍細胞との相互作用
による所望の副産物として刺激される可能性がある。こ
の型において、T細胞の正しい活性化に必要な共刺激
は、(単球などの)補助細胞によって提供される。即
ち、直接的T細胞レセプター非依存性bsAb媒介腫瘍
殺傷(図1A)以外に、ここで提供されるアプローチ
は、腫瘍特異的T細胞の活性化及び生成も可能であり
(図1B)、それはbsAbの劣化の後、患者の中で巡
回を続ける。即ち、(例えば、腫瘍細胞中のB−7のよ
うな共刺激抗原の組込による)遺伝子治療的方法と同様
に、無傷のbsAbにより、患者の腫瘍耐性を反転する
ことができる。実施例1に示した相乗的動物モデルで実
施した実験結果は、この仮説を支持している。
の発現がG−CSF処理後に上方調節(up-regulate)さ
れ、Fc部分を持つbsAbのサーキュレーション時間
が、例えばbsF(ab’)2またはbs(scFv)
抗体フラグメントより十分長く、匹敵する抗腫瘍効果を
達成するためにかなり少量の無傷のab分子しか必要と
されないのがさらに有利である。ここで提示した治療方
法は、残存腫瘍細胞/微小転移の殺傷を目的としてい
る。固体腫瘍またはより大きな転移の治療においては、
上記の抗体フラグメントはサイズが小さいので主要に浸
透しやすく有利であるが、それらの知られたFc部分依
存性エフェクター機構を持つ無傷のbsAbは、微小転
移の場合に好ましい。
μgのbsAbとともに自家PBSZの2日までの in
vitro inキュベーション)は、治療を阻害する可能性
のある抗原は考えられない。自家幹細胞移植の後に患者
は免疫−抑制状態にあるので、移植2週間後に自家T細
胞とともに投与されたbsAbに対する抗体はまだ存在
しないと思われる。抗体特異性が選択されているので、
bsAbを用いた免疫治療の自家幹細胞の成長に対する
悪影響は予想されない。さらに、無傷のbsAbは、ラ
ットとマウスのハイブリドーマの融合、それに続く一段
階生成によって臨床的に必要な量が越すと効率の高い方
法で製造れる。
ノクローナル抗体治療(Bispecific monoclonal antibod
y therepy of B-cell malignancy)」,Leukaemia and Ly
mphoma, 1995, 16: 199. 2.Linghofer 等, 「ラット−マウス・クアドローマに
おける好ましい種−制限重−軽鎖ペアリング:二特異的
抗体の一段階精製のための連座(Preferentialspecies-r
estricted heavy-light chain pairing in rat-mouse q
uadromas:Implications for a single step purificati
on of bispecific antibodies)」,J. Immunology, 199
5, 155: 219. 3.Valerius 等, 「顆粒球コロニー刺激因子治療中の
神経細胞の進行した腫瘍細胞細胞毒性におけるIgG
(FcgRI、CD64)に対する高親和性レセプター
の連座(Involvement of the high-affinity receptor f
or IgG (FcgRI; CD64) in enhanced turmor cell cytot
oxicity of neurophils during granulocytecolony-sti
mulating factor therapy)」, Blood, 1993, 82:931-93
9. 4.Haagen 等, 「ラットIgG2bを持つヒト単球F
cgレセプターの相互作用(Interaction of human mono
cyte Fcg receptors with rat IgG2b」,J. Immunology,
1995, 154: 1852-1860. 5.Weiner 等, 「抗−CD3×抗腫瘍に特異的抗体治
療におけるT細胞活性化の役割(The role of T cell ac
tivation in anti-CD3 x antiturmor bispecificantibo
dy therapy)」, J. Immunology, 1994, 152: 2385. 6.Kaneko 等, 「白血球細胞を有効に溶菌するII−
2刺激されたリンパ球及び二特異的抗体の組み合わせは
in nitro の骨髄CD34−陽性幹細胞機能に影響しな
い(Combination of Il-2 stimulated lymphocytes and
bispecificantibodies that efficiently lyse leukemi
c cells does not affect bonemarrow CD34-positive s
tem cell function in vitro)」,Bone Marrow Transp
l., 1994, 14:213. 7.Gale 等, 「白血病における自家移植(Autotranspla
nts in leukaemia)」,Lancet, 1989, ii:315. 8.Gribben 等, 「B細胞リンパ腫にための自家BNT
に先立つPCRで評価した骨髄の免疫学的パージング(I
mmunologic purging of marrow assessed byPCR before
autologous BNT for B cell lymphoma)」, New Engl.
J. Med.,1991, 325:1525.
胞の役割を示す模式図である。
Claims (10)
- 【請求項1】 生体外の幹細胞移植における汚染腫瘍細
胞の数を低減する方法であって、T細胞のT細胞レセプ
ター複合体、Fcレセプター陽性細胞のFcレセプタ
ー、並びに、腫瘍細胞上の腫瘍関連抗原に結合できる無
傷の二特異的抗体を、前記腫瘍細胞、T細胞およびFcレセプター陽性細胞へ
の前記二特異的抗体の結合、 前記抗体結合による前記T細胞の活性化、 前記二特異的抗体のFc部分への前記Fcレセプター陽
性細胞の結合、 前記腫瘍細胞に対する前記T細胞とFcレセプター陽性
細胞の向け直し、 前記活性化したT細胞による前記腫瘍細胞の破壊、及び
前記Fcレセプター陽性細胞による前記腫瘍細胞の殺
傷、を許す条件下で、 幹細胞移植片に接触させることを
特徴とする方法。 - 【請求項2】 前記幹細胞移植片が、乳ガン、卵巣ガ
ン、及び白血病からなる群から選択されるガンに罹患し
た患者からのものであることを特徴とする請求項1記載
の方法。 - 【請求項3】 前記二特異的抗体が、抗−CD3×抗−
c−erbB−2抗体、抗−CD3×抗−ep−cam
抗体、及び抗−CD3×抗−Lewis Y抗体からな
る群から選択される一員であることを特徴とする請求項
1記載の方法。 - 【請求項4】 前記幹細胞移植片を、4−72時間、二
特異的抗体に接触させることを特徴とする請求項1記載
の方法。 - 【請求項5】 前記幹細胞移植片を、20−25℃の温
度で前記二特異的抗体に接触させることを特徴とする請
求項4記載の方法。 - 【請求項6】 幹細胞移植片中の細胞が、1μl当たり
30,000から75,000細胞の密度で存在するこ
とを特徴とする請求項1記載の方法。 - 【請求項7】 Fcレセプター陽性細胞が、単球、マク
ロファージ、および樹状細胞からなる群から選択される
一員であることを特徴とする請求項1記載の方法。 - 【請求項8】 前記幹細胞移植片が、乳ガン及び/また
は卵巣ガンに罹患した女性患者、急性または慢性白血病
に罹患した患者、リンパ腫に罹患した患者、卵巣ガンに
罹患した患者、及び化学治療感受性の他のガンに罹患し
た患者からなる群から選択される患者から得られること
を特徴とする請求項1記載の方法。 - 【請求項9】 前記幹細胞移植片を、24−48時間、
二特異的抗体に接触させることを特徴とする請求項1記
載の方法。 - 【請求項10】 前記幹細胞移植片を、室温で前記二特
異的抗体に接触させることを特徴とする請求項4記載の
方法。
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US7208152B2 (en) * | 1999-11-24 | 2007-04-24 | Millennium Pharmaceuticals, Inc. | Antibodies for “Bonzo” chemokine receptor and therapeutic uses thereof |
US20020103345A1 (en) * | 2000-05-24 | 2002-08-01 | Zhenping Zhu | Bispecific immunoglobulin-like antigen binding proteins and method of production |
US6902734B2 (en) | 2000-08-07 | 2005-06-07 | Centocor, Inc. | Anti-IL-12 antibodies and compositions thereof |
UA81743C2 (uk) | 2000-08-07 | 2008-02-11 | Центокор, Инк. | МОНОКЛОНАЛЬНЕ АНТИТІЛО ЛЮДИНИ, ЩО СПЕЦИФІЧНО ЗВ'ЯЗУЄТЬСЯ З ФАКТОРОМ НЕКРОЗУ ПУХЛИН АЛЬФА (ФНПα), ФАРМАЦЕВТИЧНА КОМПОЗИЦІЯ, ЩО ЙОГО МІСТИТЬ, ТА СПОСІБ ЛІКУВАННЯ РЕВМАТОЇДНОГО АРТРИТУ |
US7288390B2 (en) | 2000-08-07 | 2007-10-30 | Centocor, Inc. | Anti-dual integrin antibodies, compositions, methods and uses |
DE10043437A1 (de) * | 2000-09-04 | 2002-03-28 | Horst Lindhofer | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen Antikörpern zur Behandlung von malignem Aszites |
US20050175998A1 (en) * | 2001-07-30 | 2005-08-11 | Jin Nakahara | Medicinal compositions containing fc receptor gamma-chain activator |
WO2004039826A1 (en) | 2001-11-14 | 2004-05-13 | Centocor, Inc. | Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses |
US7332585B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The California University | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US7332580B2 (en) * | 2002-04-05 | 2008-02-19 | The Regents Of The University Of California | Bispecific single chain Fv antibody molecules and methods of use thereof |
US9708410B2 (en) | 2003-05-30 | 2017-07-18 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tissue factor antibodies and compositions |
WO2005077065A2 (en) * | 2004-02-09 | 2005-08-25 | The Regents Of The University Of California | Selective high-affinity polydentate ligands and methods of making such |
US8066989B2 (en) * | 2004-11-30 | 2011-11-29 | Trion Pharma Gmbh | Method of treating tumor growth and metastasis by using trifunctional antibodies to reduce the risk for GvHD in allogeneic antitumor cell therapy |
DK1874821T3 (da) | 2005-04-26 | 2013-07-08 | Trion Pharma Gmbh | Kombination af antistoffer med glykokortikoider til behandling af kræft |
PE20061324A1 (es) | 2005-04-29 | 2007-01-15 | Centocor Inc | Anticuerpos anti-il-6, composiciones, metodos y usos |
AU2006265002B2 (en) | 2005-06-30 | 2012-09-20 | Centocor, Inc. | Anti-IL-23 antibodies, compositions, methods and uses |
JP5102772B2 (ja) | 2005-11-29 | 2012-12-19 | ザ・ユニバーシティ・オブ・シドニー | デミボディ:二量体化活性化治療剤 |
HUE034269T2 (en) | 2005-12-29 | 2018-02-28 | Janssen Biotech Inc | Human anti-IL-23 antibodies, preparations, methods and applications |
EP1820513A1 (en) | 2006-02-15 | 2007-08-22 | Trion Pharma Gmbh | Destruction of tumor cells expressing low to medium levels of tumor associated target antigens by trifunctional bispecific antibodies |
WO2007134274A2 (en) * | 2006-05-12 | 2007-11-22 | Attenuon, Llc | Antibodies to urokinase- type plasminogen activator receptor(upar)bind cancer stem cells: use in diagnosis and therapy |
EP2091975A4 (en) * | 2006-11-21 | 2013-05-22 | Univ California | ANTIBODIES TO THE EGFR FAMILY, BICE-SPECIFIC ANTIBODIES TO THE EGFR FAMILY AND METHOD FOR THEIR USE |
EP2268654B1 (en) | 2008-04-21 | 2017-01-25 | The Regents Of The University Of California | Selective high-affinity polydentate ligands and methods of making such |
KR20120027055A (ko) * | 2009-06-26 | 2012-03-20 | 리제네론 파라마큐티칼스 인코포레이티드 | 천연 면역글로불린 포맷을 가지는 용이하게 분리된 이중특이성 항체 |
AR080154A1 (es) | 2010-02-10 | 2012-03-14 | Immunogen Inc | Anticuerpos cd20 y su utilizacion |
PE20130192A1 (es) | 2010-03-30 | 2013-02-27 | Centocor Ortho Biotech Inc | Anticuerpos il-25 humanizados |
EP3323830B1 (en) | 2010-06-19 | 2023-08-23 | Memorial Sloan-Kettering Cancer Center | Anti-gd2 antibodies |
EP2647707B1 (en) * | 2010-11-30 | 2018-09-12 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
EP2578230A1 (en) | 2011-10-04 | 2013-04-10 | Trion Pharma Gmbh | Removal of Tumor Cells from Intraoperative Autologous Blood Salvage |
RU2680267C2 (ru) | 2013-03-15 | 2019-02-19 | Мемориал Слоан Кеттеринг Кэнсер Сентер | Высокоаффинные антитела к gd2 |
JP6590810B2 (ja) | 2013-12-24 | 2019-10-16 | ヤンセン ファーマシューティカ エヌブイ | 抗vista抗体および断片 |
AR101262A1 (es) | 2014-07-26 | 2016-12-07 | Regeneron Pharma | Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos |
WO2016187068A1 (en) | 2015-05-15 | 2016-11-24 | The General Hospital Corporation | Antagonistic anti-tumor necrosis factor receptor superfamily antibodies |
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TW202216201A (zh) | 2016-02-12 | 2022-05-01 | 比利時商楊森製藥公司 | 抗vista抗體及片段、其用途及鑑定其之方法 |
BR112018069776A2 (pt) | 2016-03-29 | 2019-02-05 | Janssen Biotech Inc | tratamento de psoríase com intervalo de dosagem aumentado de anticorpos anti-il-12 e/ou anti-il-23 |
WO2017175058A1 (en) | 2016-04-07 | 2017-10-12 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anti-vista antibodies and fragments, uses thereof, and methods of identifying same |
WO2018045379A1 (en) | 2016-09-02 | 2018-03-08 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Composition and methods of treating b cell disorders |
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EP3541422A4 (en) | 2016-11-16 | 2020-05-06 | Janssen Biotech, Inc. | METHOD FOR TREATING PSORIASIS WITH A SPECIFIC ANTI-IL-23 ANTIBODY |
US20180230218A1 (en) | 2017-01-04 | 2018-08-16 | Immunogen, Inc. | Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof |
MA47362A (fr) | 2017-01-30 | 2019-12-04 | Janssen Biotech Inc | Anticorps anti-tnf, compositions et méthodes pour le traitement du rhumatisme psoriasique actif |
MA47442A (fr) | 2017-02-07 | 2019-12-18 | Janssen Biotech Inc | Anticorps anti-tnf, compositions et méthodes pour le traitement de la spondylarthrite ankylosante active |
EP3762015A4 (en) | 2018-03-05 | 2022-04-27 | Janssen Biotech, Inc. | METHODS OF TREATING CROHN'S DISEASE WITH SPECIFIC ANTI-IL23 ANTIBODY |
EP3790587A4 (en) | 2018-05-11 | 2022-01-26 | Janssen Biotech, Inc. | METHOD OF TREATMENT OF DEPRESSION USING IL-23 ANTIBODIES |
EA202190092A1 (ru) | 2018-06-21 | 2021-05-18 | Юманити Терапьютикс, Инк. | Композиции и способы лечения и профилактики неврологических расстройств |
WO2020014306A1 (en) | 2018-07-10 | 2020-01-16 | Immunogen, Inc. | Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof |
EP3824295A4 (en) | 2018-07-18 | 2022-04-27 | Janssen Biotech, Inc. | PREDICTORS OF PROLONGED RESPONSE AFTER TREATMENT WITH AN ANTI-IL23 SPECIFIC ANTIBODY |
KR20210093973A (ko) | 2018-11-20 | 2021-07-28 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 항-il23 특이적 항체로 건선을 치료하는 안전하고 효과적인 방법 |
BR112021023295A2 (pt) | 2019-05-23 | 2022-02-08 | Janssen Biotech Inc | Método de tratamento de doença inflamatória intestinal com uma terapia de combinação de anticorpos para il-23 e tnf-alfa |
US20220324959A1 (en) | 2019-06-03 | 2022-10-13 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tnf antibodies, compositions, and methods for the treatment of active ankylosing spondylitis |
WO2021028752A1 (en) | 2019-08-15 | 2021-02-18 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-tfn antibodies for treating type i diabetes |
KR20230156387A (ko) | 2021-03-12 | 2023-11-14 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 항-il23 특이적 항체에 의해 건선성 관절염을 치료하는 안전하고 효과적인 방법 |
WO2022190034A1 (en) | 2021-03-12 | 2022-09-15 | Janssen Biotech, Inc. | Method of treating psoriatic arthritis patients with inadequate response to tnf therapy with anti-il23 specific antibody |
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GB8626412D0 (en) | 1986-11-05 | 1986-12-03 | Clark M R | Antibodies |
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UA40577C2 (uk) | 1993-08-02 | 2001-08-15 | Мерк Патент Гмбх | Біспецифічна молекула, що використовується для лізису пухлинних клітин, спосіб її одержання, моноклональне антитіло (варіанти), фармацевтичний препарат, фармацевтичний набір (варіанти), спосіб видалення пухлинних клітин |
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