JP3257970B2 - 二特異的抗体を用いた幹細胞移植における汚染腫瘍細胞の除去 - Google Patents
二特異的抗体を用いた幹細胞移植における汚染腫瘍細胞の除去Info
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、生体外(ex vivo)
の幹細胞移植における、無傷の二特異的抗体を用いた腫
瘍細胞汚染の除去に関する。
の幹細胞移植における、無傷の二特異的抗体を用いた腫
瘍細胞汚染の除去に関する。
【０００２】
【従来の技術】年間４３，０００件という肺ガンは、ド
イツ国の女性のガン統計の首位を占めている。診断時に
リンパ腺侵襲に罹患している女性の３分の１未満は、再
発無しに１０年間生存する。このような背景に抗して、
ここ数年の間、重篤なリンパ腺侵襲及び遠隔転移に罹患
した女性患者の、高投与量化学治療を伴う自家骨髄及び
幹細胞移植による生存期間の延長または治療のための努
力がなされてきた。高投与量化学治療に対する応答速度
は速いが、転移状態の永久的回復は殆ど起こらなかっ
た。
イツ国の女性のガン統計の首位を占めている。診断時に
リンパ腺侵襲に罹患している女性の３分の１未満は、再
発無しに１０年間生存する。このような背景に抗して、
ここ数年の間、重篤なリンパ腺侵襲及び遠隔転移に罹患
した女性患者の、高投与量化学治療を伴う自家骨髄及び
幹細胞移植による生存期間の延長または治療のための努
力がなされてきた。高投与量化学治療に対する応答速度
は速いが、転移状態の永久的回復は殆ど起こらなかっ
た。
【０００３】今日、転移した乳ガンの治療は、殆ど全て
が待機療法(palliative therapy)であった。臨床相１の
研究により、高投与量化学治療（ＨＤ−ＣＴ）に続く自
家骨髄または幹細胞移植（ａＰＢＳＺＴ）が化学治療感
受性の転移した乳ガンを持つ女性患者の完全な緩解を達
成できることを示した。しかし、この緩解は、時間的に
限られており、殆どの場合再発が起こる。再発は、移植
によって再浸出した及び／または患者のＨＤ−ＣＴで生
き残ったクローン原性腫瘍細胞から生ずると思われる。
ミクロ転移は、化学治療後の骨髄において、Ｃ２１５と
いったＣＫ１９またはｅｐｃａｍに対する感受性ＲＴ−
ＰＣＲを用い、免疫細胞学によって検出される。これら
は、ＨＤ−ＣＴ及び自家幹細胞移植の後でさえも好まし
くない予後を伴う。従って、最小残存疾患（ＭＲＤ）の
除去及び移植片の腫瘍細胞汚染からの精製のための新た
な概念を開発する必要がある。おそらく緩解達成時に
は、ＭＲＤは殆ど、休止状態にあることにより（速度論
的耐性）、または多重薬物耐性といった生物化学的機構
を創出することにより、抗増殖化学治療に対して耐性と
なっている腫瘍細胞からなる。
が待機療法(palliative therapy)であった。臨床相１の
研究により、高投与量化学治療（ＨＤ−ＣＴ）に続く自
家骨髄または幹細胞移植（ａＰＢＳＺＴ）が化学治療感
受性の転移した乳ガンを持つ女性患者の完全な緩解を達
成できることを示した。しかし、この緩解は、時間的に
限られており、殆どの場合再発が起こる。再発は、移植
によって再浸出した及び／または患者のＨＤ−ＣＴで生
き残ったクローン原性腫瘍細胞から生ずると思われる。
ミクロ転移は、化学治療後の骨髄において、Ｃ２１５と
いったＣＫ１９またはｅｐｃａｍに対する感受性ＲＴ−
ＰＣＲを用い、免疫細胞学によって検出される。これら
は、ＨＤ−ＣＴ及び自家幹細胞移植の後でさえも好まし
くない予後を伴う。従って、最小残存疾患（ＭＲＤ）の
除去及び移植片の腫瘍細胞汚染からの精製のための新た
な概念を開発する必要がある。おそらく緩解達成時に
は、ＭＲＤは殆ど、休止状態にあることにより（速度論
的耐性）、または多重薬物耐性といった生物化学的機構
を創出することにより、抗増殖化学治療に対して耐性と
なっている腫瘍細胞からなる。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】自家幹細胞移植におけ
る本質的な問題は、移植片の腫瘍細胞による汚染であ
り、後者は患者における再発の発生に寄与する。今日ま
で、幹細胞移植片の腫瘍細胞汚染からの精製には、免疫
原性ビーズによる「パージング（追放）」が用いられて
いた。この技術によると、腫瘍細胞は、抗体を保持した
鉄に結合することにより磁石上に捕捉されることによ
り、移植片から除去される。しかし、要する時間及び高
コスト（約２０，０００ＤＭ／患者）を伴う高い技術的
努力は、欠点となっていた。さらに、これに従って残存
腫瘍細胞の数を低減させると、遅延後であっても再発が
発生することがある。この理由は、この方法を幹細胞移
植に限定すること、及び、腫瘍細胞が例えば「正常細胞
との凝集」によってこの機械的漏れることであると思わ
れる。
る本質的な問題は、移植片の腫瘍細胞による汚染であ
り、後者は患者における再発の発生に寄与する。今日ま
で、幹細胞移植片の腫瘍細胞汚染からの精製には、免疫
原性ビーズによる「パージング（追放）」が用いられて
いた。この技術によると、腫瘍細胞は、抗体を保持した
鉄に結合することにより磁石上に捕捉されることによ
り、移植片から除去される。しかし、要する時間及び高
コスト（約２０，０００ＤＭ／患者）を伴う高い技術的
努力は、欠点となっていた。さらに、これに従って残存
腫瘍細胞の数を低減させると、遅延後であっても再発が
発生することがある。この理由は、この方法を幹細胞移
植に限定すること、及び、腫瘍細胞が例えば「正常細胞
との凝集」によってこの機械的漏れることであると思わ
れる。
【０００５】これらの理由により、Ｔ細胞に向け直す二
特異的Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを組み合わせた活性
化Ｔ細胞の in vitro での腫瘍細胞への添加ような幹細
胞移植片を精製する他の免疫学的方法が試験された。こ
のようなパージング造血幹細胞は、増殖アッセイで測定
したところ、それらの機能に影響しないが、これらの実
験における腫瘍細胞を殺傷する能力は比較的限られたも
のである（１−２ｌｏｇ腫瘍低減）ことがわかった。ま
た、２週間培養して予め活性化したＴ細胞は、この方法
にとっては好ましくなく、努力を増大させ臨床応用を妨
げる。本発明の目的は、従来技術から知られている欠点
を解消するとともに、幹細胞製剤の汚染腫瘍細胞の数を
低減する新規な方法を提供することにある。
特異的Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを組み合わせた活性
化Ｔ細胞の in vitro での腫瘍細胞への添加ような幹細
胞移植片を精製する他の免疫学的方法が試験された。こ
のようなパージング造血幹細胞は、増殖アッセイで測定
したところ、それらの機能に影響しないが、これらの実
験における腫瘍細胞を殺傷する能力は比較的限られたも
のである（１−２ｌｏｇ腫瘍低減）ことがわかった。ま
た、２週間培養して予め活性化したＴ細胞は、この方法
にとっては好ましくなく、努力を増大させ臨床応用を妨
げる。本発明の目的は、従来技術から知られている欠点
を解消するとともに、幹細胞製剤の汚染腫瘍細胞の数を
低減する新規な方法を提供することにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明によれば、この目
的は請求項１で特徴づけられる方法によって達成され
る。好ましい実施態様は、従属請求項及び以下の実施例
を伴う説明から明らかである。
的は請求項１で特徴づけられる方法によって達成され
る。好ましい実施態様は、従属請求項及び以下の実施例
を伴う説明から明らかである。
【０００７】
【発明の実施の形態】添付した図面は、本発明のさらな
る例示を提供する。図１は、二特異的抗体による腫瘍の
免疫治療における補助細胞の役割を示す（ＡＤＣＣ＝抗
体依存性細胞障害性細胞）。二特異的抗体は、一方の結
合腕でＴ細胞のＴ細胞レセプター複合体に結合でき、他
方の結合腕で腫瘍細胞の腫瘍関連抗原と結合できる。そ
れにより、それらはＴ細胞を活性化し、活性化されたＴ
細胞はサイトカインを放出して細胞を殺傷する。さら
に、Ｔ細胞が、二特異的抗体による活性化の間に、それ
らのレセプターを介して腫瘍特異的抗原を認識し、それ
により長期に渡る免疫化が開始される可能性がある。こ
の点で特に重要なのは、二特異的抗体の無傷のＦｃ部分
であり、それは、単球／マクロファージ／樹状細胞とい
った補助細胞への結合を媒介し、これらの細胞自身を細
胞毒性とし、及び／または同時にＴ細胞に重要な共刺激
シグナルをトランスデュースする（図１参照）。
る例示を提供する。図１は、二特異的抗体による腫瘍の
免疫治療における補助細胞の役割を示す（ＡＤＣＣ＝抗
体依存性細胞障害性細胞）。二特異的抗体は、一方の結
合腕でＴ細胞のＴ細胞レセプター複合体に結合でき、他
方の結合腕で腫瘍細胞の腫瘍関連抗原と結合できる。そ
れにより、それらはＴ細胞を活性化し、活性化されたＴ
細胞はサイトカインを放出して細胞を殺傷する。さら
に、Ｔ細胞が、二特異的抗体による活性化の間に、それ
らのレセプターを介して腫瘍特異的抗原を認識し、それ
により長期に渡る免疫化が開始される可能性がある。こ
の点で特に重要なのは、二特異的抗体の無傷のＦｃ部分
であり、それは、単球／マクロファージ／樹状細胞とい
った補助細胞への結合を媒介し、これらの細胞自身を細
胞毒性とし、及び／または同時にＴ細胞に重要な共刺激
シグナルをトランスデュースする（図１参照）。
【０００８】従来技術とは異なり、本発明では無傷の二
特異的抗体が用いられる。無傷の二特異的抗体は、２つ
の抗体半分子(semi-molecules)（一方はＨ−、他方はＬ
−イムノグロブリン鎖）を具備し、各々が特異性を示
し、さらに、通常の抗体のように、周知のエフェクター
機能を発揮するＦｃ部分を有する。これらは、好ましく
はクアドローマ(quadroma)技術を用いて調製する。この
調製方法は、ドイツ国特許出願公開４４１９３９９号公
報に例示されている。この公報の開示全体を参考文献と
して取り入れる。他の調製方法も、本発明で要求される
上記の様な無傷の二特異的抗体が導かれるならば使用で
きる。
特異的抗体が用いられる。無傷の二特異的抗体は、２つ
の抗体半分子(semi-molecules)（一方はＨ−、他方はＬ
−イムノグロブリン鎖）を具備し、各々が特異性を示
し、さらに、通常の抗体のように、周知のエフェクター
機能を発揮するＦｃ部分を有する。これらは、好ましく
はクアドローマ(quadroma)技術を用いて調製する。この
調製方法は、ドイツ国特許出願公開４４１９３９９号公
報に例示されている。この公報の開示全体を参考文献と
して取り入れる。他の調製方法も、本発明で要求される
上記の様な無傷の二特異的抗体が導かれるならば使用で
きる。
【０００９】本発明の方法では、肝細胞製剤（ロイコフ
ォレーシス(leucophoresis)産物）の汚染腫瘍細胞が、
（抗−ＣＤ３×抗−ｃ−ｅｒｂＢ−２、抗−ＣＤ３×抗
−ＬｅｗｉｓＹ、及び抗−ＣＤ３×抗−ｅｐ−ｃａｍ、
例えば、抗−ＣＤ３×抗−Ｃ２１５のような）二特異的
抗体によってin vitro で除去される。二特異的抗体と
幹細胞の汚染腫瘍細胞との接触は、二特異的抗体を腫瘍
細胞とＴ細胞に結合させ、なおかつ幹細胞の生存力を維
持するような条件下で行われる。これらのパラメータを
維持することは、幹細胞及びリンパ球の生き残り及び生
存力のために必要である。例えば、幹細胞移植片（ロイ
コフォレーシス産物）は、二特異的抗体と、約４−７２
時間、好ましくは２４−４８時間、室温かつ３０，００
０−７５，０００細胞／μｌ、好ましくは３０，０００
−５０，０００細胞／μｌの細胞密度で、緩く振とうし
ながらインキュベートする。約１０×１０9細胞／（幹
細胞移植片）という全細胞数では、１００−５００μｇ
の二特異的抗体（ｂｓＡｂ）の量は、腫瘍細胞を殺傷す
るのに十分である。本発明の方法で更に重要な点は、い
わゆる無傷の二特異的抗体を用いることである。これら
の抗体は、（ここで用いられる特異性により）Ｔ細胞を
腫瘍細胞に向けることができるだけでなく、Ｆｃ部分の
エフェクター機能により、補体−媒介溶菌によって、あ
るいは、マクロファージ、単球または活性化ニューロフ
ィル顆粒球等のＦｃレセプター陽性細胞の結合によって
腫瘍細胞を殺傷するのに適している。すなわち、無傷の
ｂｓＡｂにより、腫瘍細胞破壊の複数の機構が同時に活
性化される。
ォレーシス(leucophoresis)産物）の汚染腫瘍細胞が、
（抗−ＣＤ３×抗−ｃ−ｅｒｂＢ−２、抗−ＣＤ３×抗
−ＬｅｗｉｓＹ、及び抗−ＣＤ３×抗−ｅｐ−ｃａｍ、
例えば、抗−ＣＤ３×抗−Ｃ２１５のような）二特異的
抗体によってin vitro で除去される。二特異的抗体と
幹細胞の汚染腫瘍細胞との接触は、二特異的抗体を腫瘍
細胞とＴ細胞に結合させ、なおかつ幹細胞の生存力を維
持するような条件下で行われる。これらのパラメータを
維持することは、幹細胞及びリンパ球の生き残り及び生
存力のために必要である。例えば、幹細胞移植片（ロイ
コフォレーシス産物）は、二特異的抗体と、約４−７２
時間、好ましくは２４−４８時間、室温かつ３０，００
０−７５，０００細胞／μｌ、好ましくは３０，０００
−５０，０００細胞／μｌの細胞密度で、緩く振とうし
ながらインキュベートする。約１０×１０9細胞／（幹
細胞移植片）という全細胞数では、１００−５００μｇ
の二特異的抗体（ｂｓＡｂ）の量は、腫瘍細胞を殺傷す
るのに十分である。本発明の方法で更に重要な点は、い
わゆる無傷の二特異的抗体を用いることである。これら
の抗体は、（ここで用いられる特異性により）Ｔ細胞を
腫瘍細胞に向けることができるだけでなく、Ｆｃ部分の
エフェクター機能により、補体−媒介溶菌によって、あ
るいは、マクロファージ、単球または活性化ニューロフ
ィル顆粒球等のＦｃレセプター陽性細胞の結合によって
腫瘍細胞を殺傷するのに適している。すなわち、無傷の
ｂｓＡｂにより、腫瘍細胞破壊の複数の機構が同時に活
性化される。
【００１０】本発明で用いる無傷の二特異的抗体は、機
能的なＦｃ部分を具備している。機能的Ｆｃ部分を含ま
ない二特異的Ｆ（ａｂ）２フラグメントとは異なり、本
発明の無傷の二特異的抗体は、Ｔ細胞のみならず、Ｆｃ
レセプター陽性細胞としても知られる補助細胞（例え
ば、単球、マクロファージ、樹状細胞）にも結合でき
る。細胞の結合は効率的な腫瘍破壊において本質的な役
割を果たし、その効率は、Kaneko 等によって用いられ
た方法に比較して１０−１０００倍高い。本発明の無傷
の二特異的抗体は、補助細胞によって抗体に向けられた
Ｔ細胞の最適な共刺激を可能にする。特に、この最適共
刺激煮たいする応答は、表面抗原様ＣＤ４０、Ｂー７．
１、Ｂ−７．２、ＬＦＡ−３、特に分泌されたサイトカ
イン（ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α
様）である。
能的なＦｃ部分を具備している。機能的Ｆｃ部分を含ま
ない二特異的Ｆ（ａｂ）２フラグメントとは異なり、本
発明の無傷の二特異的抗体は、Ｔ細胞のみならず、Ｆｃ
レセプター陽性細胞としても知られる補助細胞（例え
ば、単球、マクロファージ、樹状細胞）にも結合でき
る。細胞の結合は効率的な腫瘍破壊において本質的な役
割を果たし、その効率は、Kaneko 等によって用いられ
た方法に比較して１０−１０００倍高い。本発明の無傷
の二特異的抗体は、補助細胞によって抗体に向けられた
Ｔ細胞の最適な共刺激を可能にする。特に、この最適共
刺激煮たいする応答は、表面抗原様ＣＤ４０、Ｂー７．
１、Ｂ−７．２、ＬＦＡ−３、特に分泌されたサイトカ
イン（ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−１２、ＴＮＦ−α
様）である。
【００１１】本発明の二特異的抗体を用いることによ
り、Ｔ細胞による腫瘍細胞の効率的な直接破壊が得ら
れ、さらに、腫瘍に対する免疫反応が開始される。本発
明の二特異的抗体に結合した補助細胞は、取り込まれ、
処理され、腫瘍の一部を表現するように刺激される。本
発明の二特異的抗体を用いることによって開始されるこ
れらの段階は、体液性及び細胞性免疫反応の誘発に本質
的に必要である。
り、Ｔ細胞による腫瘍細胞の効率的な直接破壊が得ら
れ、さらに、腫瘍に対する免疫反応が開始される。本発
明の二特異的抗体に結合した補助細胞は、取り込まれ、
処理され、腫瘍の一部を表現するように刺激される。本
発明の二特異的抗体を用いることによって開始されるこ
れらの段階は、体液性及び細胞性免疫反応の誘発に本質
的に必要である。
【００１２】本発明の方法において無傷の二特異的抗体
を用いることにより、量的効果が得られるだけでなく、
腫瘍に対する免疫反応の誘発という新たな質的効果も得
られる。
を用いることにより、量的効果が得られるだけでなく、
腫瘍に対する免疫反応の誘発という新たな質的効果も得
られる。
【００１３】本発明の無傷の二特異的抗体を用いること
により、Ｔ細胞の前処理のためにＩＬ−２のようなサイ
トカインを追加することも、少なくとも２週間というこ
れらの細胞の長期間培養することも必要でなくなる。こ
のＴ細胞の培養は、極めて高コストの特別な条件下（Ｇ
ＭＰ条件）で行う必要があり、Paul Ehrlich Institute
またはＦＤＡの認可の下に行う必要があった。本発明
の方法では、ＧＭＰ条件下でのＴ細胞培養は必要ない。
現在のところ、幹細胞移植片中の腫瘍細胞の有効な破壊
を得ることにできる他の方法は見出されていない。
により、Ｔ細胞の前処理のためにＩＬ−２のようなサイ
トカインを追加することも、少なくとも２週間というこ
れらの細胞の長期間培養することも必要でなくなる。こ
のＴ細胞の培養は、極めて高コストの特別な条件下（Ｇ
ＭＰ条件）で行う必要があり、Paul Ehrlich Institute
またはＦＤＡの認可の下に行う必要があった。本発明
の方法では、ＧＭＰ条件下でのＴ細胞培養は必要ない。
現在のところ、幹細胞移植片中の腫瘍細胞の有効な破壊
を得ることにできる他の方法は見出されていない。
【００１４】
【実施例】腫瘍細胞殺傷における無傷のｂｓＡｂの有効
性を定量化するために、１人の正常ドナー（表１、ドナ
ー２参照）及び２人の白血病患者のリオコフェレーシス
産物（１０8細胞）を、所定量（０．１％）の腫瘍細胞
（乳ガン細胞ラインＭＣＦ−７）と混合した。各細胞混
合物を４μｇのｂｓＡｂとともに（または、抗体無しあ
るいは等モル量の旁抗体とともに）、室温で４８時間、
５０，０００細胞／μｌの細胞密度で緩く振とうしなが
らインキュベートし、細胞を異なる細胞密度で、９６ウ
ェル（１０5細胞／ウェル）及び２４ウェル（各々３×
１０6または１０6細胞／ウェル）のNUNC（登録商標）細
胞培養平底プレートにプレートした。２週間の培養期間
の後、プレーとした細胞当たりの腫瘍細胞コロニーの数
に基づいて、ｂｓＡｂが、腫瘍細胞の成長を１，０００
−１０，０００倍（ｌｏｇ３−４）低減できることが観
察された。腫瘍コロニー成長アッセイ（ｃｏｌｏｎｏｇ
ｅｎｉｃＡ）の結果を、表１にまとめて示す。表１中、
ＭＮＣは、モノ−ヌクレーテド細胞(mono-nucleated ce
ll)を表し、a)は、各々６または１２サンプルウェル中
の、１４日培養後の陽性ウェル（腫瘍成長）の数であ
る。
性を定量化するために、１人の正常ドナー（表１、ドナ
ー２参照）及び２人の白血病患者のリオコフェレーシス
産物（１０8細胞）を、所定量（０．１％）の腫瘍細胞
（乳ガン細胞ラインＭＣＦ−７）と混合した。各細胞混
合物を４μｇのｂｓＡｂとともに（または、抗体無しあ
るいは等モル量の旁抗体とともに）、室温で４８時間、
５０，０００細胞／μｌの細胞密度で緩く振とうしなが
らインキュベートし、細胞を異なる細胞密度で、９６ウ
ェル（１０5細胞／ウェル）及び２４ウェル（各々３×
１０6または１０6細胞／ウェル）のNUNC（登録商標）細
胞培養平底プレートにプレートした。２週間の培養期間
の後、プレーとした細胞当たりの腫瘍細胞コロニーの数
に基づいて、ｂｓＡｂが、腫瘍細胞の成長を１，０００
−１０，０００倍（ｌｏｇ３−４）低減できることが観
察された。腫瘍コロニー成長アッセイ（ｃｏｌｏｎｏｇ
ｅｎｉｃＡ）の結果を、表１にまとめて示す。表１中、
ＭＮＣは、モノ−ヌクレーテド細胞(mono-nucleated ce
ll)を表し、a)は、各々６または１２サンプルウェル中
の、１４日培養後の陽性ウェル（腫瘍成長）の数であ
る。
【００１５】
【表１】 腫瘍コロニー成長アッセイ ──────────────────────────────────── フ゜レート 抗原数 非経口抗体 二特異的抗体 腫瘍細胞／ C215,抗-CD3 BiUII 抗-CD3XC215 MNCs／ウェル (=0.1%) ──────────────────────────────────── 患者１ ──────────────────────────────────── ２４ ６／６a 非検出 ０／６Σ＝1.8×107 ３０００／3×10e6 ２４ ６／６ 非検出 ０／６ １０００／10e6 ９６ １２／１２ 非検出 ０／１２ ５００／５×10e5 ９６ １０／１２ 非検出 ０／１２ １００／10e5 腫瘍低減 − ＞４ｌｏｇ ──────────────────────────────────── ドナー２ ──────────────────────────────────── ２４ ６／６ ０／６Σ＝3×107 ５０００／5×10e6 ２４ ６／６ 非検出 ０／６ １０００／10e6 ９６ １２／１２ 非検出 ０／１２ ５００／５×10e5 ９６ １２／１２ 非検出 ０／１２ １００／10e5 腫瘍低減 − − ＞４．３ｌｏｇ ──────────────────────────────────── 患者３ ──────────────────────────────────── ２４ ６／６ ６／６ ２／６ ４０００／4×10e6 ２４ ６／６ ６／６ １／６ １０００／10e6 ９６ １２／１２ １２／１２ ０／１２ ５００／５×10e5 ９６ １２／１２ １２／１２ ０／１２ １００／10e5 腫瘍低減 − − ３ｌｏｇ ────────────────────────────────────
【００１６】以下に乳ガン患者について例示するが、本
発明の方法は、乳ガン患者の幹細胞製剤における汚染腫
瘍細胞の低減のみならず、卵巣ガン患者または急性また
は慢性白血病、リンパ腫、精巣ガンまたは化学治療感受
性の他のガンの幹細胞製剤における汚染腫瘍細胞の低減
にも有用である。各々の用いるべき抗体または抗体の組
み合わせは当業者には周知であり、当業者には過度の実
験無しに日常的に選択及び決定することができる。
発明の方法は、乳ガン患者の幹細胞製剤における汚染腫
瘍細胞の低減のみならず、卵巣ガン患者または急性また
は慢性白血病、リンパ腫、精巣ガンまたは化学治療感受
性の他のガンの幹細胞製剤における汚染腫瘍細胞の低減
にも有用である。各々の用いるべき抗体または抗体の組
み合わせは当業者には周知であり、当業者には過度の実
験無しに日常的に選択及び決定することができる。
【００１７】即ち、本発明の治療の主題は、自家移植幹
細胞移植によって、乳ガン、特に進行した乳ガン患者の
治癒または疾患無しの生存期間の延長である。例えば、
本発明の好ましい実施態様においては、乳ガンの診断の
後、この主題は以下の過程によって達成される。 １．転移腫瘍細胞が得られるとの診断の後はいつでも可
能である。フローサイトメトリーによる、ｃ−ｅｒｂ−
Ｂ２及びｅｐ−ｃａｍ（上皮細胞接着分子）抗原の抗原
または抗原密度の検出。腫瘍細胞のクリオコンサベーシ
ョン(cryoconservation)。 ２．化学治療に先立つロイコフォレーシスによる末梢血
液からの自家Ｔリンパ球の調製。免疫組織学及びＲＴ−
ＰＣＲによるロイコフォレーシス産物の腫瘍細胞汚染可
能性の試験。免疫磁石ビーズによる腫瘍細胞汚染からの
Ｔ細胞濃縮物の精製。 ３．ＥＣスケジュール（エピルビシン６０ｍｇ／ｍ2に
＋シクロホスファミド６００ｍｇ／ｍ2、次いで、Ｇ−
ＣＳＦ（５−１０μｇ／ｋｇ／日））に従う２サイクル
の化学治療、サイクル後の造血及びＣＤ３４＋細胞動員
の回復の監視。
細胞移植によって、乳ガン、特に進行した乳ガン患者の
治癒または疾患無しの生存期間の延長である。例えば、
本発明の好ましい実施態様においては、乳ガンの診断の
後、この主題は以下の過程によって達成される。 １．転移腫瘍細胞が得られるとの診断の後はいつでも可
能である。フローサイトメトリーによる、ｃ−ｅｒｂ−
Ｂ２及びｅｐ−ｃａｍ（上皮細胞接着分子）抗原の抗原
または抗原密度の検出。腫瘍細胞のクリオコンサベーシ
ョン(cryoconservation)。 ２．化学治療に先立つロイコフォレーシスによる末梢血
液からの自家Ｔリンパ球の調製。免疫組織学及びＲＴ−
ＰＣＲによるロイコフォレーシス産物の腫瘍細胞汚染可
能性の試験。免疫磁石ビーズによる腫瘍細胞汚染からの
Ｔ細胞濃縮物の精製。 ３．ＥＣスケジュール（エピルビシン６０ｍｇ／ｍ2に
＋シクロホスファミド６００ｍｇ／ｍ2、次いで、Ｇ−
ＣＳＦ（５−１０μｇ／ｋｇ／日））に従う２サイクル
の化学治療、サイクル後の造血及びＣＤ３４＋細胞動員
の回復の監視。
【００１８】４．少なくとも４×１０６のＣＤ３４＋細
胞／ｋｇが得られるようなエピルビシン(epirubicine)
／シクロホスファミド化学治療及びＧ−ＣＳＦでの動員
後のロイコフォレーシスによる血液からの造血幹細胞の
調製。 ５．二特異的抗体（抗−ＣＤ３×抗−ｃ−ｅｒｂＢ−２
及び高ＣＤ３×抗−ｅｐ−ｃａｍ、５００μｇ／患者）
を用いた、３０，０００−５０，０００細胞／μｌの細
胞密度における室温での２４ー４８時間のインキュベー
ションによる自家幹細胞製剤中の汚染腫瘍細胞の破壊。
−１８０℃でのクリオコンサベーション。 ６．ＥＴスケジュール（エピルビシン６０ｍｇ／ｍ2＋
タクソール(taxole)１７５ｍｇ／ｍ2、次いで、ＣＳＦ
（５−１０μｇ／ｋｇ／日））に従う２サイクルの化学
治療、造血及びＣＤ３４＋細胞動員の回復の監視。任意
に、バックアップ調製のためのロイコフォレーシスの実
施。 ７．最後の誘発性化学治療の３週間後、チオテパ(thiot
epa)（６００ｍｇ／ｋｇ、静脈）及びメルファラン(mel
phalane)（１６０ｍｇ／ｋｇ、静脈）によるミエロアブ
ラチブ(myeloablative)高投与量化学治療の実施。 ８．引き続く自家幹細胞の再感染。
胞／ｋｇが得られるようなエピルビシン(epirubicine)
／シクロホスファミド化学治療及びＧ−ＣＳＦでの動員
後のロイコフォレーシスによる血液からの造血幹細胞の
調製。 ５．二特異的抗体（抗−ＣＤ３×抗−ｃ−ｅｒｂＢ−２
及び高ＣＤ３×抗−ｅｐ−ｃａｍ、５００μｇ／患者）
を用いた、３０，０００−５０，０００細胞／μｌの細
胞密度における室温での２４ー４８時間のインキュベー
ションによる自家幹細胞製剤中の汚染腫瘍細胞の破壊。
−１８０℃でのクリオコンサベーション。 ６．ＥＴスケジュール（エピルビシン６０ｍｇ／ｍ2＋
タクソール(taxole)１７５ｍｇ／ｍ2、次いで、ＣＳＦ
（５−１０μｇ／ｋｇ／日））に従う２サイクルの化学
治療、造血及びＣＤ３４＋細胞動員の回復の監視。任意
に、バックアップ調製のためのロイコフォレーシスの実
施。 ７．最後の誘発性化学治療の３週間後、チオテパ(thiot
epa)（６００ｍｇ／ｋｇ、静脈）及びメルファラン(mel
phalane)（１６０ｍｇ／ｋｇ、静脈）によるミエロアブ
ラチブ(myeloablative)高投与量化学治療の実施。 ８．引き続く自家幹細胞の再感染。
【００１９】９．再感染の２４時間後、幹細胞移植片の
含まれる活性化Ｔ細胞の再刺激のための１ｍｇのｂｓＡ
ｂの投与並びに過敏症反応の予防及び治療のための手段
による抗腫瘍活性の維持。Haagen 等は、in vitro 実験
において、３日以内のｂｓＡｂの連続投与が腫瘍細胞の
死滅をかなり促進することを示した。 １０．自家幹細胞移植後の造血再構成の後（約１４−２
１日目）の自家Ｔ細胞の再感染。特にＴヘルパー細胞の
ＣＤ４５ＲＡ／ＣＤ４５ＲＯ比を考慮したフローサイト
メトリーによる末梢血液中のＴ細胞再構成の監視。 １１．過敏生反応の予防及び治療のための手段を伴う投
与量を増加させながらの３日の in vivo 二特異的抗体
（２００μｇ／１ｍｇ／２ｍｇ）の投与。 １２．追跡調査：緩解の程度、マウス及びラットイムノ
グロブリンに対する抗−抗体反応の見積もり；造血及び
末梢血液におけるＴ細胞サブポピュレーションの再構成
の回復の監視；達成された緩解持続時間の評価のための
通常の後療法。末梢血液からの腫瘍特異的Ｔ細胞検出の
ための実験。
含まれる活性化Ｔ細胞の再刺激のための１ｍｇのｂｓＡ
ｂの投与並びに過敏症反応の予防及び治療のための手段
による抗腫瘍活性の維持。Haagen 等は、in vitro 実験
において、３日以内のｂｓＡｂの連続投与が腫瘍細胞の
死滅をかなり促進することを示した。 １０．自家幹細胞移植後の造血再構成の後（約１４−２
１日目）の自家Ｔ細胞の再感染。特にＴヘルパー細胞の
ＣＤ４５ＲＡ／ＣＤ４５ＲＯ比を考慮したフローサイト
メトリーによる末梢血液中のＴ細胞再構成の監視。 １１．過敏生反応の予防及び治療のための手段を伴う投
与量を増加させながらの３日の in vivo 二特異的抗体
（２００μｇ／１ｍｇ／２ｍｇ）の投与。 １２．追跡調査：緩解の程度、マウス及びラットイムノ
グロブリンに対する抗−抗体反応の見積もり；造血及び
末梢血液におけるＴ細胞サブポピュレーションの再構成
の回復の監視；達成された緩解持続時間の評価のための
通常の後療法。末梢血液からの腫瘍特異的Ｔ細胞検出の
ための実験。
【００２０】即ち、本発明によると、二特異的抗体は、
例えば乳ガン細胞のような汚染腫瘍細胞の数を、幹細胞
製剤中でそれらを破壊することにより低減するために用
いられる。この方法では、抗体は、Ｔ細胞をガン細胞の
方向に再び向かせるように機能し、腫瘍壊死因子αのよ
うなサイトカインを分泌させて腫瘍細胞の溶解を導くよ
うにＴ細胞を活性化する。二特異的抗体のＦｃ部位に位
置するＦｃレセプターを介してマクロファージを活性化
することにより、このサイトカイン効果が促進され；重
要な共刺激シグナルが同時にＦｃγＲＩ＋細胞（単球／
マクロファージ／樹状細胞）からＴ細胞に伝達され、Ｔ
細胞のアネルギー化が阻害される。
例えば乳ガン細胞のような汚染腫瘍細胞の数を、幹細胞
製剤中でそれらを破壊することにより低減するために用
いられる。この方法では、抗体は、Ｔ細胞をガン細胞の
方向に再び向かせるように機能し、腫瘍壊死因子αのよ
うなサイトカインを分泌させて腫瘍細胞の溶解を導くよ
うにＴ細胞を活性化する。二特異的抗体のＦｃ部位に位
置するＦｃレセプターを介してマクロファージを活性化
することにより、このサイトカイン効果が促進され；重
要な共刺激シグナルが同時にＦｃγＲＩ＋細胞（単球／
マクロファージ／樹状細胞）からＴ細胞に伝達され、Ｔ
細胞のアネルギー化が阻害される。
【００２１】移植が終了した後、二特異的抗体は増加し
た投与量で感染され、自家Ｔ細胞で再感染される。Ｔ細
胞の活性化及び残存乳ガン細胞の溶解は、in vivo で達
成される。この場合、腫瘍特異的Ｔ細胞も膨張し（１で
述べた幹細胞製剤以外）、それは、に共刺激無しのＴ細
胞レセプターを介する腫瘍部位における部分的刺激によ
って、または腫瘍によるＩＬ−１０分泌によって既にア
ネルギー性となっている。今日の知識によれば、免疫治
療は、僅かに残った疾患の段階においてのみ自家腫瘍に
対する完全な有効性を発揮することができ；免疫治療と
高投与量化学治療及び自家幹細胞移植の組み合わせが最
も有望であると思われる。従って、Ｔ細胞は、化学治療
または放射線治療の終了後は注入すべきではない。
た投与量で感染され、自家Ｔ細胞で再感染される。Ｔ細
胞の活性化及び残存乳ガン細胞の溶解は、in vivo で達
成される。この場合、腫瘍特異的Ｔ細胞も膨張し（１で
述べた幹細胞製剤以外）、それは、に共刺激無しのＴ細
胞レセプターを介する腫瘍部位における部分的刺激によ
って、または腫瘍によるＩＬ−１０分泌によって既にア
ネルギー性となっている。今日の知識によれば、免疫治
療は、僅かに残った疾患の段階においてのみ自家腫瘍に
対する完全な有効性を発揮することができ；免疫治療と
高投与量化学治療及び自家幹細胞移植の組み合わせが最
も有望であると思われる。従って、Ｔ細胞は、化学治療
または放射線治療の終了後は注入すべきではない。
【００２２】二特異的抗体の調製は従来技術によって良
く知られている。例えば、無傷の二特異的抗体は新たに
開発された調製方法（２）を用いて十分な量を製造する
ことができる。乳ガン細胞上の２つの異なる腫瘍を伴う
抗原（例えば、ＧＡ−７３３−２＝Ｃ２１５のような、
ｃ−ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｐ−ｃａｍ）に対して向けられた
２つの二特異的抗体の組み合わせは、抗原の一方のみを
発現する腫瘍細胞を同定せずに残すという危険性を低減
させる。細菌腫瘍細胞をＴ細胞濃縮物とともに再注入す
る危険は、抗体及び免疫磁石ビーズによる精製によって
大部分回避できる。少量の残存腫瘍細胞は、免疫組織化
学的に、並びに、Ｃ２１５またはＣＫ１９抗原に対する
ＲＴ−ＰＣＲにより検出できる。
く知られている。例えば、無傷の二特異的抗体は新たに
開発された調製方法（２）を用いて十分な量を製造する
ことができる。乳ガン細胞上の２つの異なる腫瘍を伴う
抗原（例えば、ＧＡ−７３３−２＝Ｃ２１５のような、
ｃ−ｅｒｂ−Ｂ２、ｅｐ−ｃａｍ）に対して向けられた
２つの二特異的抗体の組み合わせは、抗原の一方のみを
発現する腫瘍細胞を同定せずに残すという危険性を低減
させる。細菌腫瘍細胞をＴ細胞濃縮物とともに再注入す
る危険は、抗体及び免疫磁石ビーズによる精製によって
大部分回避できる。少量の残存腫瘍細胞は、免疫組織化
学的に、並びに、Ｃ２１５またはＣＫ１９抗原に対する
ＲＴ−ＰＣＲにより検出できる。
【００２３】サイトカインが放出されろ可能性があるの
で、二特異的抗体は、最初は低投与量かつ厳格な制御下
で投与される。文献での報告によれば、類似の二特異的
抗体は、１３ｍｇまでの量で全身投与しても実質的に副
作用はない（１）。従って、患者当たり４ｍｇの投与量
では副作用はないものと考えられる。以下に、移植及び
患者における残存乳ガン細胞のの破壊のための化学治療
及び免疫治療の組み合わせにおける二特異的抗体の役割
を説明する。
で、二特異的抗体は、最初は低投与量かつ厳格な制御下
で投与される。文献での報告によれば、類似の二特異的
抗体は、１３ｍｇまでの量で全身投与しても実質的に副
作用はない（１）。従って、患者当たり４ｍｇの投与量
では副作用はないものと考えられる。以下に、移植及び
患者における残存乳ガン細胞のの破壊のための化学治療
及び免疫治療の組み合わせにおける二特異的抗体の役割
を説明する。
【００２４】末梢における幹細胞の動員のために用いら
れるＧ−ＣＳＦ治療によって、Ｆｃγ−ＲＩ−陽性細胞
の数も増加する（３）。これらは、殆どが、好中球顆粒
球でのＧ−ＣＳＦ−誘発Ｆｃγ−ＲＩ発現によるもので
ある。高親和性Ｆｃγ−レセプターＩは、ラットＩｇＧ
２ｂ及びマウスＩｇＧ２ａのアイソタイプの組み合わせ
という異種ラット／マウスｂｓＡｂにも結合できる
（４）。このアイソタイプの組み合わせは、ここで用い
るｂｓＡｂに対して、極めて豊富な低親和性Ｆｃγ−レ
セプタータイプＩ及びタイプＩＩに対する結合を阻害す
るために選択され（１２）、従って、サイトカインの未
調節放出の危険を最小にする。同様の挙動を示すアイソ
タイプの組み合わせラットＩｇＧ２ｂ及びマウスＩｇＧ
１を有するｂｓＡｂの１３ｍｇという投与量は、既に患
者の第１相試験でテストされている。僅かな毒性の副作
用（ＷＨＯ分類階級における grade I）があるので（１
３）、患者当たり４ｍｇという見積もられた投与量は許
容されるべきであろう。
れるＧ−ＣＳＦ治療によって、Ｆｃγ−ＲＩ−陽性細胞
の数も増加する（３）。これらは、殆どが、好中球顆粒
球でのＧ−ＣＳＦ−誘発Ｆｃγ−ＲＩ発現によるもので
ある。高親和性Ｆｃγ−レセプターＩは、ラットＩｇＧ
２ｂ及びマウスＩｇＧ２ａのアイソタイプの組み合わせ
という異種ラット／マウスｂｓＡｂにも結合できる
（４）。このアイソタイプの組み合わせは、ここで用い
るｂｓＡｂに対して、極めて豊富な低親和性Ｆｃγ−レ
セプタータイプＩ及びタイプＩＩに対する結合を阻害す
るために選択され（１２）、従って、サイトカインの未
調節放出の危険を最小にする。同様の挙動を示すアイソ
タイプの組み合わせラットＩｇＧ２ｂ及びマウスＩｇＧ
１を有するｂｓＡｂの１３ｍｇという投与量は、既に患
者の第１相試験でテストされている。僅かな毒性の副作
用（ＷＨＯ分類階級における grade I）があるので（１
３）、患者当たり４ｍｇという見積もられた投与量は許
容されるべきであろう。
【００２５】ｂｓＡｂのＦｃγ−ＲＩに対する結合は、
最適な抗−腫瘍効果について２つの本質的な利点を示
す： １．Ｆｃγ−ＲＩ−陽性細胞は、ＡＤＣＣによる腫瘍細
胞除去の能力を有しており（３）、よって、ｂｓＡｂに
よって腫瘍に向けられた細胞毒性Ｔ細胞の抗−腫瘍効果
に対して相乗的に寄与する。 ２．（単球／マクロファージ／樹状細胞のような）Ｆｃ
γＲＩ−陽性細胞は、Ｔ細胞への抗原提示に類似した重
要な共刺激シグナルを提供することができ、それによっ
て、Ｔ細胞のアネルギー化を防止できる。さらに、図１
に示したように、（腫瘍細胞上のＭＨＣ抗原を介して表
現される）腫瘍特異的ペプチドを認識するＴ細胞レセプ
ターを有するＴ細胞でさえも、無傷のｂｓＡｂによって
媒介されたＴ細胞の補助細胞及び腫瘍細胞との相互作用
による所望の副産物として刺激される可能性がある。こ
の型において、Ｔ細胞の正しい活性化に必要な共刺激
は、（単球などの）補助細胞によって提供される。即
ち、直接的Ｔ細胞レセプター非依存性ｂｓＡｂ媒介腫瘍
殺傷（図１Ａ）以外に、ここで提供されるアプローチ
は、腫瘍特異的Ｔ細胞の活性化及び生成も可能であり
（図１Ｂ）、それはｂｓＡｂの劣化の後、患者の中で巡
回を続ける。即ち、（例えば、腫瘍細胞中のＢ−７のよ
うな共刺激抗原の組込による）遺伝子治療的方法と同様
に、無傷のｂｓＡｂにより、患者の腫瘍耐性を反転する
ことができる。実施例１に示した相乗的動物モデルで実
施した実験結果は、この仮説を支持している。
最適な抗−腫瘍効果について２つの本質的な利点を示
す： １．Ｆｃγ−ＲＩ−陽性細胞は、ＡＤＣＣによる腫瘍細
胞除去の能力を有しており（３）、よって、ｂｓＡｂに
よって腫瘍に向けられた細胞毒性Ｔ細胞の抗−腫瘍効果
に対して相乗的に寄与する。 ２．（単球／マクロファージ／樹状細胞のような）Ｆｃ
γＲＩ−陽性細胞は、Ｔ細胞への抗原提示に類似した重
要な共刺激シグナルを提供することができ、それによっ
て、Ｔ細胞のアネルギー化を防止できる。さらに、図１
に示したように、（腫瘍細胞上のＭＨＣ抗原を介して表
現される）腫瘍特異的ペプチドを認識するＴ細胞レセプ
ターを有するＴ細胞でさえも、無傷のｂｓＡｂによって
媒介されたＴ細胞の補助細胞及び腫瘍細胞との相互作用
による所望の副産物として刺激される可能性がある。こ
の型において、Ｔ細胞の正しい活性化に必要な共刺激
は、（単球などの）補助細胞によって提供される。即
ち、直接的Ｔ細胞レセプター非依存性ｂｓＡｂ媒介腫瘍
殺傷（図１Ａ）以外に、ここで提供されるアプローチ
は、腫瘍特異的Ｔ細胞の活性化及び生成も可能であり
（図１Ｂ）、それはｂｓＡｂの劣化の後、患者の中で巡
回を続ける。即ち、（例えば、腫瘍細胞中のＢ−７のよ
うな共刺激抗原の組込による）遺伝子治療的方法と同様
に、無傷のｂｓＡｂにより、患者の腫瘍耐性を反転する
ことができる。実施例１に示した相乗的動物モデルで実
施した実験結果は、この仮説を支持している。
【００２６】この点について、各細胞でのＦｃγ−ＲＩ
の発現がＧ−ＣＳＦ処理後に上方調節(up-regulate)さ
れ、Ｆｃ部分を持つｂｓＡｂのサーキュレーション時間
が、例えばｂｓＦ（ａｂ’）２またはｂｓ（ｓｃＦｖ）
抗体フラグメントより十分長く、匹敵する抗腫瘍効果を
達成するためにかなり少量の無傷のａｂ分子しか必要と
されないのがさらに有利である。ここで提示した治療方
法は、残存腫瘍細胞／微小転移の殺傷を目的としてい
る。固体腫瘍またはより大きな転移の治療においては、
上記の抗体フラグメントはサイズが小さいので主要に浸
透しやすく有利であるが、それらの知られたＦｃ部分依
存性エフェクター機構を持つ無傷のｂｓＡｂは、微小転
移の場合に好ましい。
の発現がＧ−ＣＳＦ処理後に上方調節(up-regulate)さ
れ、Ｆｃ部分を持つｂｓＡｂのサーキュレーション時間
が、例えばｂｓＦ（ａｂ’）２またはｂｓ（ｓｃＦｖ）
抗体フラグメントより十分長く、匹敵する抗腫瘍効果を
達成するためにかなり少量の無傷のａｂ分子しか必要と
されないのがさらに有利である。ここで提示した治療方
法は、残存腫瘍細胞／微小転移の殺傷を目的としてい
る。固体腫瘍またはより大きな転移の治療においては、
上記の抗体フラグメントはサイズが小さいので主要に浸
透しやすく有利であるが、それらの知られたＦｃ部分依
存性エフェクター機構を持つ無傷のｂｓＡｂは、微小転
移の場合に好ましい。
【００２７】ここで提示する投与スケジュール（５００
μｇのｂｓＡｂとともに自家ＰＢＳＺの２日までの in
vitro ｉｎキュベーション）は、治療を阻害する可能性
のある抗原は考えられない。自家幹細胞移植の後に患者
は免疫−抑制状態にあるので、移植２週間後に自家Ｔ細
胞とともに投与されたｂｓＡｂに対する抗体はまだ存在
しないと思われる。抗体特異性が選択されているので、
ｂｓＡｂを用いた免疫治療の自家幹細胞の成長に対する
悪影響は予想されない。さらに、無傷のｂｓＡｂは、ラ
ットとマウスのハイブリドーマの融合、それに続く一段
階生成によって臨床的に必要な量が越すと効率の高い方
法で製造れる。
μｇのｂｓＡｂとともに自家ＰＢＳＺの２日までの in
vitro ｉｎキュベーション）は、治療を阻害する可能性
のある抗原は考えられない。自家幹細胞移植の後に患者
は免疫−抑制状態にあるので、移植２週間後に自家Ｔ細
胞とともに投与されたｂｓＡｂに対する抗体はまだ存在
しないと思われる。抗体特異性が選択されているので、
ｂｓＡｂを用いた免疫治療の自家幹細胞の成長に対する
悪影響は予想されない。さらに、無傷のｂｓＡｂは、ラ
ットとマウスのハイブリドーマの融合、それに続く一段
階生成によって臨床的に必要な量が越すと効率の高い方
法で製造れる。
【００２８】参考文献： １．Weiner 及び Gast,「Ｂ細胞悪性腫瘍の二特異的モ
ノクローナル抗体治療(Bispecific monoclonal antibod
y therepy of B-cell malignancy)」,Leukaemia and Ly
mphoma, 1995, 16: 199. ２．Linghofer 等, 「ラット−マウス・クアドローマに
おける好ましい種−制限重−軽鎖ペアリング：二特異的
抗体の一段階精製のための連座(Preferentialspecies-r
estricted heavy-light chain pairing in rat-mouse q
uadromas:Implications for a single step purificati
on of bispecific antibodies)」,J. Immunology, 199
5, 155: 219. ３．Valerius 等, 「顆粒球コロニー刺激因子治療中の
神経細胞の進行した腫瘍細胞細胞毒性におけるＩｇＧ
（ＦｃｇＲＩ、ＣＤ６４）に対する高親和性レセプター
の連座(Involvement of the high-affinity receptor f
or IgG (FcgRI; CD64) in enhanced turmor cell cytot
oxicity of neurophils during granulocytecolony-sti
mulating factor therapy)」, Blood, 1993, 82:931-93
9. ４．Haagen 等, 「ラットＩｇＧ２ｂを持つヒト単球Ｆ
ｃｇレセプターの相互作用(Interaction of human mono
cyte Fcg receptors with rat IgG2b」,J. Immunology,
1995, 154: 1852-1860. ５．Weiner 等, 「抗−ＣＤ３×抗腫瘍に特異的抗体治
療におけるＴ細胞活性化の役割(The role of T cell ac
tivation in anti-CD3 x antiturmor bispecificantibo
dy therapy)」, J. Immunology, 1994, 152: 2385. ６．Kaneko 等, 「白血球細胞を有効に溶菌するＩＩ−
２刺激されたリンパ球及び二特異的抗体の組み合わせは
in nitro の骨髄ＣＤ３４−陽性幹細胞機能に影響しな
い(Combination of Il-2 stimulated lymphocytes and
bispecificantibodies that efficiently lyse leukemi
c cells does not affect bonemarrow CD34-positive s
tem cell function in vitro)」,Bone Marrow Transp
l., 1994, 14:213. ７．Gale 等, 「白血病における自家移植(Autotranspla
nts in leukaemia)」,Lancet, 1989, ii:315. ８．Gribben 等, 「Ｂ細胞リンパ腫にための自家ＢＮＴ
に先立つＰＣＲで評価した骨髄の免疫学的パージング(I
mmunologic purging of marrow assessed byPCR before
autologous BNT for B cell lymphoma)」, New Engl.
J. Med.,1991, 325:1525.
ノクローナル抗体治療(Bispecific monoclonal antibod
y therepy of B-cell malignancy)」,Leukaemia and Ly
mphoma, 1995, 16: 199. ２．Linghofer 等, 「ラット−マウス・クアドローマに
おける好ましい種−制限重−軽鎖ペアリング：二特異的
抗体の一段階精製のための連座(Preferentialspecies-r
estricted heavy-light chain pairing in rat-mouse q
uadromas:Implications for a single step purificati
on of bispecific antibodies)」,J. Immunology, 199
5, 155: 219. ３．Valerius 等, 「顆粒球コロニー刺激因子治療中の
神経細胞の進行した腫瘍細胞細胞毒性におけるＩｇＧ
（ＦｃｇＲＩ、ＣＤ６４）に対する高親和性レセプター
の連座(Involvement of the high-affinity receptor f
or IgG (FcgRI; CD64) in enhanced turmor cell cytot
oxicity of neurophils during granulocytecolony-sti
mulating factor therapy)」, Blood, 1993, 82:931-93
9. ４．Haagen 等, 「ラットＩｇＧ２ｂを持つヒト単球Ｆ
ｃｇレセプターの相互作用(Interaction of human mono
cyte Fcg receptors with rat IgG2b」,J. Immunology,
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【図１】 二特異的抗体による免疫治療における補助細
胞の役割を示す模式図である。
胞の役割を示す模式図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ヘルゲ・メンツェル ドイツ・Ｄ−81379・ミュンヘン・バー トシュトラーセ・17 (72)発明者 ハンス−ヨッヘム・コルプ ドイツ・Ｄ−80804・ミュンヘン・レル ヒェナウアーシュトラーセ・39 (72)発明者 シュテファン・ティアフェルダー ドイツ・Ｄ−82223・アイヒェナウ・ビ ルケンハイン・５ (56)参考文献 特開 平７−89873（ＪＰ，Ａ) 特表 平１−501200（ＪＰ，Ａ) Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，Ｖｏｌ．152, Ｐ．2385−2392（1994) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12N 5/10 C07K 16/46 C12N 15/02 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (10)
- 【請求項１】 生体外の幹細胞移植における汚染腫瘍細
胞の数を低減する方法であって、Ｔ細胞のＴ細胞レセプ
ター複合体、Ｆｃレセプター陽性細胞のＦｃレセプタ
ー、並びに、腫瘍細胞上の腫瘍関連抗原に結合できる無
傷の二特異的抗体を、前記腫瘍細胞、Ｔ細胞およびＦｃレセプター陽性細胞へ
の前記二特異的抗体の結合、 前記抗体結合による前記Ｔ細胞の活性化、 前記二特異的抗体のＦｃ部分への前記Ｆｃレセプター陽
性細胞の結合、 前記腫瘍細胞に対する前記Ｔ細胞とＦｃレセプター陽性
細胞の向け直し、 前記活性化したＴ細胞による前記腫瘍細胞の破壊、及び
前記Ｆｃレセプター陽性細胞による前記腫瘍細胞の殺
傷、を許す条件下で、 幹細胞移植片に接触させることを
特徴とする方法。 - 【請求項２】 前記幹細胞移植片が、乳ガン、卵巣ガ
ン、及び白血病からなる群から選択されるガンに罹患し
た患者からのものであることを特徴とする請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】 前記二特異的抗体が、抗−ＣＤ３×抗−
ｃ−ｅｒｂＢ−２抗体、抗−ＣＤ３×抗−ｅｐ−ｃａｍ
抗体、及び抗−ＣＤ３×抗−Ｌｅｗｉｓ Ｙ抗体からな
る群から選択される一員であることを特徴とする請求項
１記載の方法。 - 【請求項４】 前記幹細胞移植片を、４−７２時間、二
特異的抗体に接触させることを特徴とする請求項１記載
の方法。 - 【請求項５】 前記幹細胞移植片を、２０−２５℃の温
度で前記二特異的抗体に接触させることを特徴とする請
求項４記載の方法。 - 【請求項６】 幹細胞移植片中の細胞が、１μｌ当たり
３０，０００から７５，０００細胞の密度で存在するこ
とを特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項７】 Ｆｃレセプター陽性細胞が、単球、マク
ロファージ、および樹状細胞からなる群から選択される
一員であることを特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項８】 前記幹細胞移植片が、乳ガン及び／また
は卵巣ガンに罹患した女性患者、急性または慢性白血病
に罹患した患者、リンパ腫に罹患した患者、卵巣ガンに
罹患した患者、及び化学治療感受性の他のガンに罹患し
た患者からなる群から選択される患者から得られること
を特徴とする請求項１記載の方法。 - 【請求項９】 前記幹細胞移植片を、２４−４８時間、
二特異的抗体に接触させることを特徴とする請求項１記
載の方法。 - 【請求項１０】 前記幹細胞移植片を、室温で前記二特
異的抗体に接触させることを特徴とする請求項４記載の
方法。
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