JP3180824B2 - 血液凝固試薬 - Google Patents
血液凝固試薬Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、光学的測定装置、粘張
度検出装置などを使用して検体血漿の凝固活性を測定す
るための血液凝固試薬、詳しくは、従来より大きな光学
的変化量、粘張度変化量などが得られるような組成に調
製することによって、低凝固活性の検体を測定可能なら
しめるとともに、通常検体においては正確性の向上に寄
与する血液凝固試薬に関するものである。
度検出装置などを使用して検体血漿の凝固活性を測定す
るための血液凝固試薬、詳しくは、従来より大きな光学
的変化量、粘張度変化量などが得られるような組成に調
製することによって、低凝固活性の検体を測定可能なら
しめるとともに、通常検体においては正確性の向上に寄
与する血液凝固試薬に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】血液凝固の機構を図６を参照して説明す
る。血液凝固の機構は通常二つの経路から起こるとされ
る。すなわち、一つの経路は、外因系凝固と言われる経
路であり、表皮細胞等から放出される組織トロンボプラ
スチンを出発点として凝固第VII因子が活性化され、こ
の活性化された凝固第VII因子により凝固第X因子が活性
化され、その後、凝固第V因子、第II因子の活性化が起
こり、最終的にはフィブリノーゲンがフィブリンに転化
することにより凝固が起こる経路である。もう一つは、
内因系凝固と言われる経路であり、接触等により、凝固
第XII因子に活性化が起こり、第XI因子を活性化させ
る。引き続いて活性化第XI因子は第IX因子を活性化さ
せ、さらに活性化第IX因子はカルシウムイオン・第VIII
因子の共同作用のもとに第X 因子を活性化させる。その
後、第V因子、II因子の活性化が起こり、最終的にはフ
ィブリノーゲンがフィブリンに転化することにより凝固
が起こる経路である。血液凝固の検出方法としては、血
液が凝固するに従って液体の粘性が高くなるのを調べる
方法（粘張度検出法）と、血液が凝固するに従って白く
濁るのを検出する方法（濁度検出法）、およびこれら二
つを混合した方法とに大別される。粘張度検出法は、検
体となる血漿に棒状あるいは球状の磁性物等を投入し、
凝固検出用試薬を混合したとき、凝固によってこれらの
磁性物等の動きが鈍くなるのを検出する方法である。し
かし、この粘張度検出法は血液凝固の最終産物であるフ
ィブリン塊の形成状態（すなわち、フィブリン量の多少
あるいは凝固状態の硬軟）によって測定結果が大きく左
右されると言う特性を持ち、ある一定値以上の粘張度が
なければ検出できないと言う致命的な欠点がある。ま
た、磁性物等の動きを観察する測定原理であるために、
磁性物等の強弱に影響されると言う欠点もある。濁度検
出法は、検体血漿と凝固試薬とを混合することによって
のみ凝固測定を行なう方法であり、磁性物等の投入は必
要としない。検出する方法としては透過光検出方式、ま
たは散乱光検出方式がある。これらの検出方式ではフィ
ブリノーゲン量が少ない場合でも透過光量の変化、ある
いは散乱光量の変化として捉えることができるので、粘
張度検出法にみられるような欠点はない。ただ、いずれ
の検出方法においても、光量の変化量が多いほうがより
正確な検出ができることになるのは当然であるので、使
用される凝固試薬は光変化量が大きく表示されるような
特性を持つものが望ましい。
る。血液凝固の機構は通常二つの経路から起こるとされ
る。すなわち、一つの経路は、外因系凝固と言われる経
路であり、表皮細胞等から放出される組織トロンボプラ
スチンを出発点として凝固第VII因子が活性化され、こ
の活性化された凝固第VII因子により凝固第X因子が活性
化され、その後、凝固第V因子、第II因子の活性化が起
こり、最終的にはフィブリノーゲンがフィブリンに転化
することにより凝固が起こる経路である。もう一つは、
内因系凝固と言われる経路であり、接触等により、凝固
第XII因子に活性化が起こり、第XI因子を活性化させ
る。引き続いて活性化第XI因子は第IX因子を活性化さ
せ、さらに活性化第IX因子はカルシウムイオン・第VIII
因子の共同作用のもとに第X 因子を活性化させる。その
後、第V因子、II因子の活性化が起こり、最終的にはフ
ィブリノーゲンがフィブリンに転化することにより凝固
が起こる経路である。血液凝固の検出方法としては、血
液が凝固するに従って液体の粘性が高くなるのを調べる
方法（粘張度検出法）と、血液が凝固するに従って白く
濁るのを検出する方法（濁度検出法）、およびこれら二
つを混合した方法とに大別される。粘張度検出法は、検
体となる血漿に棒状あるいは球状の磁性物等を投入し、
凝固検出用試薬を混合したとき、凝固によってこれらの
磁性物等の動きが鈍くなるのを検出する方法である。し
かし、この粘張度検出法は血液凝固の最終産物であるフ
ィブリン塊の形成状態（すなわち、フィブリン量の多少
あるいは凝固状態の硬軟）によって測定結果が大きく左
右されると言う特性を持ち、ある一定値以上の粘張度が
なければ検出できないと言う致命的な欠点がある。ま
た、磁性物等の動きを観察する測定原理であるために、
磁性物等の強弱に影響されると言う欠点もある。濁度検
出法は、検体血漿と凝固試薬とを混合することによって
のみ凝固測定を行なう方法であり、磁性物等の投入は必
要としない。検出する方法としては透過光検出方式、ま
たは散乱光検出方式がある。これらの検出方式ではフィ
ブリノーゲン量が少ない場合でも透過光量の変化、ある
いは散乱光量の変化として捉えることができるので、粘
張度検出法にみられるような欠点はない。ただ、いずれ
の検出方法においても、光量の変化量が多いほうがより
正確な検出ができることになるのは当然であるので、使
用される凝固試薬は光変化量が大きく表示されるような
特性を持つものが望ましい。
【０００３】図５は、散乱光検出方式で得られる信号強
度の変化を説明するための図である。血漿が凝固してい
く過程を光学式検出装置（散乱光検出方式）で調べた時
の結果を示す。図中のＡ点は血漿と凝固試薬が混合され
た時点であり、その後、多段におよぶ凝固反応が進行
し、安定的フィブリンの形成により散乱光の変化となっ
て現れる（図中Ｂ点）。安定的フィブリンの形成が進行
すると散乱光の変化は増加するが、ほとんどのフィブリ
ノーゲンが消費され、散乱光量の変化はなくなり、反応
は終息する（Ｃ点）。凝固時間は例えば、特開昭５９−
２０３９５９号公報に開示されているように、Ｂ時点の
散乱光量を０％としＣ時点の散乱光量を１００％とする
時の５０％散乱光量になるまでの時間Ｔとして定めるこ
とができる。△Ｈは凝固反応開始と終了時の散乱光量の
変化分である。外因系凝固と言われる経路を測定するた
めには、クイック（Ｑｕｉｃｋ）の一段法と言われる方
法が今日最も一般的である。この測定（検査）は一般的
にＰＴ（プロトロンビン時間法）と呼称され、外因系凝
固因子の活性を総合的に測定するほかに、凝固因子欠乏
血漿を使用すれば個々の外因系凝固因子の測定も可能で
ある。また、今日、心臓病などの治療において抗凝固薬
（ワーファリンなど）の投与を受けている場合には、抗
凝固薬の効果をモニタリングできる測定方法として重要
である。
度の変化を説明するための図である。血漿が凝固してい
く過程を光学式検出装置（散乱光検出方式）で調べた時
の結果を示す。図中のＡ点は血漿と凝固試薬が混合され
た時点であり、その後、多段におよぶ凝固反応が進行
し、安定的フィブリンの形成により散乱光の変化となっ
て現れる（図中Ｂ点）。安定的フィブリンの形成が進行
すると散乱光の変化は増加するが、ほとんどのフィブリ
ノーゲンが消費され、散乱光量の変化はなくなり、反応
は終息する（Ｃ点）。凝固時間は例えば、特開昭５９−
２０３９５９号公報に開示されているように、Ｂ時点の
散乱光量を０％としＣ時点の散乱光量を１００％とする
時の５０％散乱光量になるまでの時間Ｔとして定めるこ
とができる。△Ｈは凝固反応開始と終了時の散乱光量の
変化分である。外因系凝固と言われる経路を測定するた
めには、クイック（Ｑｕｉｃｋ）の一段法と言われる方
法が今日最も一般的である。この測定（検査）は一般的
にＰＴ（プロトロンビン時間法）と呼称され、外因系凝
固因子の活性を総合的に測定するほかに、凝固因子欠乏
血漿を使用すれば個々の外因系凝固因子の測定も可能で
ある。また、今日、心臓病などの治療において抗凝固薬
（ワーファリンなど）の投与を受けている場合には、抗
凝固薬の効果をモニタリングできる測定方法として重要
である。
【０００４】この方法で用いられる試薬の多くは、ウサ
ギ脳をアセトン下で粉砕して脱水・乾燥させた後、組織
トロンボプラスチンを抽出することにより作製される。
組織トロンボプラスチンは抽出される条件により外因系
凝固因子に対する反応性や収率が異なるために、種々の
抽出方法がこれまでに発明されている。たとえば、ロナ
ルド バッハ（Ｒｏｎａｌｄ Ｂａｃｈ）ら（Ｔｈｅ
Ｊ． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖ
ｏｌ．２５６，Ｎｏ．１６，（ｐ８３２４−８３３
１），１９８１）は界面活性剤（トリトンＸ−１００）
を使用することによって組織トロンボプラスチンを可溶
化させ、収率の向上を図っている。これに類する方法と
しては、特公昭６３−５６５０１号公報に組織トロンボ
プラスチン抽出時にコール酸グループの界面活性剤を使
用することが示されており、これらについてエム フバ
タムとエッチ プライズ（Ｍ．Ｈｖａｔｕｍ，＆Ｈ．Ｐ
ｒｙｄｚ）（Ｂｏｉｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｏｉｐｈ
ｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１３０（ｐ９２〜１０
１），１９６６）ら、およびゴンモリ エッチとタケダ
（Ｇｏｎｍｏｒｉ，Ｈ＆Ｔａｋｅｄａ）（Ｔｈｒｏｍｂ
ｏｓ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓ．，Ｖｏｌ．３６（ｐ９０〜
１０３），１９７６）らはその文献で組織トロンボプラ
スチンの作製方法を詳しく報告している。また特公昭５
８−４３０８０号公報には、抽出時のｐＨをアルカリ性
側に保つことによって、有用な組織トロンボプラスチン
を作製する発明が示されている。いずれの抽出方法を採
ったにせよ、クイック（Ｑｕｉｃｋ）の一段法と言われ
る検査方法（プロトロンビン時間法）に使用される試薬
は、組織トロンボプラスチンを含有することが不可欠で
あり、また、その組織トロンボプラスチンは外因系凝固
因子に対する反応性が均一であり、かつ、最終的にはフ
ィブリノーゲンをフィブリンに転化させる作用をもたな
ければならない。
ギ脳をアセトン下で粉砕して脱水・乾燥させた後、組織
トロンボプラスチンを抽出することにより作製される。
組織トロンボプラスチンは抽出される条件により外因系
凝固因子に対する反応性や収率が異なるために、種々の
抽出方法がこれまでに発明されている。たとえば、ロナ
ルド バッハ（Ｒｏｎａｌｄ Ｂａｃｈ）ら（Ｔｈｅ
Ｊ． Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｖ
ｏｌ．２５６，Ｎｏ．１６，（ｐ８３２４−８３３
１），１９８１）は界面活性剤（トリトンＸ−１００）
を使用することによって組織トロンボプラスチンを可溶
化させ、収率の向上を図っている。これに類する方法と
しては、特公昭６３−５６５０１号公報に組織トロンボ
プラスチン抽出時にコール酸グループの界面活性剤を使
用することが示されており、これらについてエム フバ
タムとエッチ プライズ（Ｍ．Ｈｖａｔｕｍ，＆Ｈ．Ｐ
ｒｙｄｚ）（Ｂｏｉｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｏｉｐｈ
ｙｓｉｃａ Ａｃｔａ，Ｖｏｌ．１３０（ｐ９２〜１０
１），１９６６）ら、およびゴンモリ エッチとタケダ
（Ｇｏｎｍｏｒｉ，Ｈ＆Ｔａｋｅｄａ）（Ｔｈｒｏｍｂ
ｏｓ．Ｈａｅｍｏｓｔａｓ．，Ｖｏｌ．３６（ｐ９０〜
１０３），１９７６）らはその文献で組織トロンボプラ
スチンの作製方法を詳しく報告している。また特公昭５
８−４３０８０号公報には、抽出時のｐＨをアルカリ性
側に保つことによって、有用な組織トロンボプラスチン
を作製する発明が示されている。いずれの抽出方法を採
ったにせよ、クイック（Ｑｕｉｃｋ）の一段法と言われ
る検査方法（プロトロンビン時間法）に使用される試薬
は、組織トロンボプラスチンを含有することが不可欠で
あり、また、その組織トロンボプラスチンは外因系凝固
因子に対する反応性が均一であり、かつ、最終的にはフ
ィブリノーゲンをフィブリンに転化させる作用をもたな
ければならない。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来の血液凝固試薬
（以下、ＰＴ試薬という）は、外因系凝固因子に対する
反応性をより正確に持ち、かつ、最終的にフィブリンを
形成することが命題であり、正確な測定結果の表示に関
してはあまり省みられなかった。そのため、凝固に関す
る検査結果が大きくバラついていても容認するしかない
状況となっていた。本発明が解決しようとする課題は、
正確な測定結果の表示を行なうために、光学的変化量を
大きくするような組成に調製することにある。このこと
によって、低凝固活性の検体を測定可能とならしめると
共に、通常検体においては正確性の向上に寄与するもの
である。本発明は、上記の諸点に鑑みなされたもので、
光学的変化量、粘張度変化量を大きくすることができる
血液凝固試薬を提供することを目的とするものである。
（以下、ＰＴ試薬という）は、外因系凝固因子に対する
反応性をより正確に持ち、かつ、最終的にフィブリンを
形成することが命題であり、正確な測定結果の表示に関
してはあまり省みられなかった。そのため、凝固に関す
る検査結果が大きくバラついていても容認するしかない
状況となっていた。本発明が解決しようとする課題は、
正確な測定結果の表示を行なうために、光学的変化量を
大きくするような組成に調製することにある。このこと
によって、低凝固活性の検体を測定可能とならしめると
共に、通常検体においては正確性の向上に寄与するもの
である。本発明は、上記の諸点に鑑みなされたもので、
光学的変化量、粘張度変化量を大きくすることができる
血液凝固試薬を提供することを目的とするものである。
【０００６】 上記の目的を達成するために、本発明の
血液凝固試薬は、凝固因子活性化物質と、カルシウムイ
オンと、高分子物質とを含有することを特徴としてい
る。凝固因子活性化物質としては次のものがある。 （ａ） 組織トロンボプラスチン含有試薬 プロトロンビン時間試薬、ビタミンＫ依存性タンパク測
定用試薬（複合因子測定用試薬） （ｂ） リン脂質含有試薬 部分トロンボプラスチン時間試薬、活性化部分トロンボ
プラスチン時間試薬 （ｃ） トロンビン含有試薬 フイブリノーゲン測定用試薬、ＡＴ−ＩＩＩ測定用試薬 すなわち、本発明においては、凝固因子活性化物質が、
組織トロンボプラスチン、リン脂質、トロンビンからな
る群より選ばれた物質であることを特徴としている。
血液凝固試薬は、凝固因子活性化物質と、カルシウムイ
オンと、高分子物質とを含有することを特徴としてい
る。凝固因子活性化物質としては次のものがある。 （ａ） 組織トロンボプラスチン含有試薬 プロトロンビン時間試薬、ビタミンＫ依存性タンパク測
定用試薬（複合因子測定用試薬） （ｂ） リン脂質含有試薬 部分トロンボプラスチン時間試薬、活性化部分トロンボ
プラスチン時間試薬 （ｃ） トロンビン含有試薬 フイブリノーゲン測定用試薬、ＡＴ−ＩＩＩ測定用試薬 すなわち、本発明においては、凝固因子活性化物質が、
組織トロンボプラスチン、リン脂質、トロンビンからな
る群より選ばれた物質であることを特徴としている。
【０００７】 以下に、組織トロンボプラスチン含有試
薬を例にあげて説明する。組織トロンボプラスチン含有
試薬は哺乳動物（ヒト、ウサギ、ウシ、ウマ、サルな
ど）の組織（脳、肺、胎盤など）をアセトン処理するこ
とによりアセトン処理粉末（以下、単にアセトン粉末と
いう）を作製し、このアセトン粉末から組織トロンボプ
ラスチン含有画分を取り出し、この画分にカルシウムイ
オン・高分子物質を含有させる。製造工程の一例を挙げ
て説明する。 Ｉ ウサギの脳を取り出す。 ＩＩ アセトン粉末の作製 上記ウサギ脳をアセトンと共に混合・粉砕する。これを
ろ過し、乾燥させる。ＩＩＩ血液成分や夾雑蛋白質の除
去 上記アセトン粉末を酸性液に混合した後、遠心分離して
沈澱画分を得る。この時、浮遊画分には血液成分や夾雑
蛋白質がある。 ＩＶ 組織トロンボプラスチンの抽出 上記沈澱画分を液に混合・攪拌した後、遠心分離して、
組織トロンボプラスチンを含有する浮遊画分を収集す
る。 Ｖ 高分子物質の添加 上記組織トロンボプラスチン含有画分にカルシウムイオ
ンと高分子物質を添加する。 ＶＩ 凍結乾燥 上記試薬を凍結乾燥させる。なお、ＩＩにおいてはウサ
ギ脳とアセトンとを重量比で１：７とすることが望まし
い。なお、アセトン粉末は市販されているので、これを
使用してもかまわない。さらに、ＩＩＩにおいては酸性
液（例えば塩酸水）にアセトン粉末を混合することによ
り、不要成分を液中により多く溶出させることができる
ので、不要成分の除去率が向上する（酸性下で血球は溶
血する）。また、ＩＶにおいては２５〜２５０ｍＭ濃度
の蟻酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウムを用いれば凝固
活性の高い組織トロンボプラスチンを効率良く得ること
ができる。
薬を例にあげて説明する。組織トロンボプラスチン含有
試薬は哺乳動物（ヒト、ウサギ、ウシ、ウマ、サルな
ど）の組織（脳、肺、胎盤など）をアセトン処理するこ
とによりアセトン処理粉末（以下、単にアセトン粉末と
いう）を作製し、このアセトン粉末から組織トロンボプ
ラスチン含有画分を取り出し、この画分にカルシウムイ
オン・高分子物質を含有させる。製造工程の一例を挙げ
て説明する。 Ｉ ウサギの脳を取り出す。 ＩＩ アセトン粉末の作製 上記ウサギ脳をアセトンと共に混合・粉砕する。これを
ろ過し、乾燥させる。ＩＩＩ血液成分や夾雑蛋白質の除
去 上記アセトン粉末を酸性液に混合した後、遠心分離して
沈澱画分を得る。この時、浮遊画分には血液成分や夾雑
蛋白質がある。 ＩＶ 組織トロンボプラスチンの抽出 上記沈澱画分を液に混合・攪拌した後、遠心分離して、
組織トロンボプラスチンを含有する浮遊画分を収集す
る。 Ｖ 高分子物質の添加 上記組織トロンボプラスチン含有画分にカルシウムイオ
ンと高分子物質を添加する。 ＶＩ 凍結乾燥 上記試薬を凍結乾燥させる。なお、ＩＩにおいてはウサ
ギ脳とアセトンとを重量比で１：７とすることが望まし
い。なお、アセトン粉末は市販されているので、これを
使用してもかまわない。さらに、ＩＩＩにおいては酸性
液（例えば塩酸水）にアセトン粉末を混合することによ
り、不要成分を液中により多く溶出させることができる
ので、不要成分の除去率が向上する（酸性下で血球は溶
血する）。また、ＩＶにおいては２５〜２５０ｍＭ濃度
の蟻酸ナトリウムまたは酢酸ナトリウムを用いれば凝固
活性の高い組織トロンボプラスチンを効率良く得ること
ができる。
【０００８】Vにおける高分子物質としては、ポリエチ
レングリコール、ポリビニルアルコール、ポリノキシリ
ンなどからなる群より選ばれた高分子ビニルや、あるい
は、アガロース、可溶性デンプン、グリコーゲン、デキ
ストラン、デキストリンなどからなる群より選ばれた高
分子多糖が使用できる。高分子物質は、高分子ビニル、
高分子多糖の一方又は両方を使用する。例を挙げてより
詳細に説明すれば、例えばポリエチレングリコールでは
分子量１，０００〜５００，０００（より好適には５，
０００〜１００，０００、最良は２０，０００）のも
の、デキストランでは分子量５，０００〜２，０００，
０００（より好適には５０，０００〜５００，０００の
もの、最良は１７０，０００〜２２０，０００）のもの
が良い。含有量については適宜決めれば良いが、少なす
ぎると高感度の効果が得られず、多すぎると粘性が高く
なって反応性能が劣化するので、０．２５％〜２．０％
（Ｗ／Ｖ）が妥当である。また、高分子物質を添加した
後、試薬を次の１〜３の内、少なくとも１つの条件を満
たす状態にしておくとさらに感度の高い試薬が得られる
（３つの条件を満たした時が最良）。 １．電気伝導度を４．０〜１５mSに調整する（より好適
には６．５〜１１．０mS）。 ２．ｐＨを６．７〜８．２に調整する（より好適には
７．２〜７．５）。 ３．浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に調整する
（より好適には３５０〜７００mOsm／kgcm2）。 電気伝導度の調整には電解質を用いれば良い（例えば食
塩）。また、ｐＨの調整には酸あるいはアルカリを用い
れば良い（例えば塩酸、水酸化ナトリウム）。また、浸
透圧の調整には、非電解質であり同時に水溶性である物
質を使用すれば良い（例えば糖類や尿素）。なお、作製
したトロンボプラスチン試薬は長期保存がきくように凍
結乾燥しておくのが好ましい。使用時には、各々の乾燥
粉末に所定量の水を混ぜ、もとの溶液状態に戻して使用
する。
レングリコール、ポリビニルアルコール、ポリノキシリ
ンなどからなる群より選ばれた高分子ビニルや、あるい
は、アガロース、可溶性デンプン、グリコーゲン、デキ
ストラン、デキストリンなどからなる群より選ばれた高
分子多糖が使用できる。高分子物質は、高分子ビニル、
高分子多糖の一方又は両方を使用する。例を挙げてより
詳細に説明すれば、例えばポリエチレングリコールでは
分子量１，０００〜５００，０００（より好適には５，
０００〜１００，０００、最良は２０，０００）のも
の、デキストランでは分子量５，０００〜２，０００，
０００（より好適には５０，０００〜５００，０００の
もの、最良は１７０，０００〜２２０，０００）のもの
が良い。含有量については適宜決めれば良いが、少なす
ぎると高感度の効果が得られず、多すぎると粘性が高く
なって反応性能が劣化するので、０．２５％〜２．０％
（Ｗ／Ｖ）が妥当である。また、高分子物質を添加した
後、試薬を次の１〜３の内、少なくとも１つの条件を満
たす状態にしておくとさらに感度の高い試薬が得られる
（３つの条件を満たした時が最良）。 １．電気伝導度を４．０〜１５mSに調整する（より好適
には６．５〜１１．０mS）。 ２．ｐＨを６．７〜８．２に調整する（より好適には
７．２〜７．５）。 ３．浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に調整する
（より好適には３５０〜７００mOsm／kgcm2）。 電気伝導度の調整には電解質を用いれば良い（例えば食
塩）。また、ｐＨの調整には酸あるいはアルカリを用い
れば良い（例えば塩酸、水酸化ナトリウム）。また、浸
透圧の調整には、非電解質であり同時に水溶性である物
質を使用すれば良い（例えば糖類や尿素）。なお、作製
したトロンボプラスチン試薬は長期保存がきくように凍
結乾燥しておくのが好ましい。使用時には、各々の乾燥
粉末に所定量の水を混ぜ、もとの溶液状態に戻して使用
する。
【０００９】上記のように、本発明においては、凝固因
子活性化物質として、哺乳動物の組織をアセトン処理し
て得られるアセトン処理粉末から取り出された組織トロ
ンボプラスチン含有画分を使用するのが望ましい。ま
た、組織トロンボプラスチン含有画分が、アセトン処理
粉末を液に溶かし、混合・攪拌した後、遠心分離するこ
とにより得られたものであるか、組織トロンボプラスチ
ン含有画分が、アセトン処理粉末を酸性液に浮遊させ、
遠心分離により血液成分や夾雑蛋白質を除き、沈降画分
に液を加え、攪拌した後、遠心分離することにより得ら
れたものであるのが望ましい。
子活性化物質として、哺乳動物の組織をアセトン処理し
て得られるアセトン処理粉末から取り出された組織トロ
ンボプラスチン含有画分を使用するのが望ましい。ま
た、組織トロンボプラスチン含有画分が、アセトン処理
粉末を液に溶かし、混合・攪拌した後、遠心分離するこ
とにより得られたものであるか、組織トロンボプラスチ
ン含有画分が、アセトン処理粉末を酸性液に浮遊させ、
遠心分離により血液成分や夾雑蛋白質を除き、沈降画分
に液を加え、攪拌した後、遠心分離することにより得ら
れたものであるのが望ましい。
【００１０】以上、組織トロンボプラスチン含有試薬に
ついて説明したが、リン脂質含有試薬、トロンビン含有
試薬についても公知の技術を使用して得ることができ
る。あるいは、組織トロンボプラスチン含有試薬として
は、プロトロンビン時間試薬（ＰＴ試薬、図６において
外因系凝固反応を総合的に測定する試薬）が米国ＤＡＤ
Ｅ社、ＯＲＴＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅｒｉｎｇ社、Ｂ
Ｍ社等から販売されている。ビタミンＫ由来酵素活性測
定用試薬（複合因子測定用試薬）としてはエーザイ
（株）よりトロンボテスト、ヘパプラスチンテスト（い
ずれも商品名）として、また国際試薬（株）より複合因
子Ｈ、複合因子Ｔ（いずれも商品名）として販売されて
いるものを使用できる。リン脂質含有試薬としてはＡＰ
ＴＴ試薬またはＰＴＴ試薬（図３において内因系凝固反
応を総合的に測定する試薬）が米国ＤＡＤＥ社、ＯＲＴ
ＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅｒｉｎｇ社、ＢＭ社等から販
売されているものを使用できる。トロンビン含有試薬と
しては、フィブリノーゲン測定用試薬、トロンビンタイ
ム測定用試薬、あるいは、ＡＴ−III測定用試薬とし
て、米国ＤＡＤＥ社、ＯＲＴＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅ
ｒｉｎｇ社、ＢＭ社、国際試薬（株）等から販売されて
いるものを使用できる。したがって、本発明において
は、凝固因子活性化物質として、哺乳動物の組織をアセ
トン処理して得られるアセトン処理粉末から取り出され
たリン脂質含有画分、または、哺乳動物の血漿より精製
されたトロンビン含有画分を使用することができる。
ついて説明したが、リン脂質含有試薬、トロンビン含有
試薬についても公知の技術を使用して得ることができ
る。あるいは、組織トロンボプラスチン含有試薬として
は、プロトロンビン時間試薬（ＰＴ試薬、図６において
外因系凝固反応を総合的に測定する試薬）が米国ＤＡＤ
Ｅ社、ＯＲＴＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅｒｉｎｇ社、Ｂ
Ｍ社等から販売されている。ビタミンＫ由来酵素活性測
定用試薬（複合因子測定用試薬）としてはエーザイ
（株）よりトロンボテスト、ヘパプラスチンテスト（い
ずれも商品名）として、また国際試薬（株）より複合因
子Ｈ、複合因子Ｔ（いずれも商品名）として販売されて
いるものを使用できる。リン脂質含有試薬としてはＡＰ
ＴＴ試薬またはＰＴＴ試薬（図３において内因系凝固反
応を総合的に測定する試薬）が米国ＤＡＤＥ社、ＯＲＴ
ＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅｒｉｎｇ社、ＢＭ社等から販
売されているものを使用できる。トロンビン含有試薬と
しては、フィブリノーゲン測定用試薬、トロンビンタイ
ム測定用試薬、あるいは、ＡＴ−III測定用試薬とし
て、米国ＤＡＤＥ社、ＯＲＴＨＯ社、ＧＤ社、独国Ｂｅ
ｒｉｎｇ社、ＢＭ社、国際試薬（株）等から販売されて
いるものを使用できる。したがって、本発明において
は、凝固因子活性化物質として、哺乳動物の組織をアセ
トン処理して得られるアセトン処理粉末から取り出され
たリン脂質含有画分、または、哺乳動物の血漿より精製
されたトロンビン含有画分を使用することができる。
【００１１】
【作用】血漿に本発明の血液凝固試薬を混合することに
より、血漿中の凝固因子が次々に活性化されてゆき、最
終的にフィブリノーゲン（繊維素原）がフィブリンに転
化し凝固反応が終了する。その最終過程において、まず
フィブリンのモノマーができ、そのモノマーは次々に重
合してポリマー（繊維状）を形成することによりフィブ
リンは繊維状になる。フィブリン繊維は網のように絡み
合うことにより混合液は濁り、かつ、ゲル化する。試薬
混合から逐次混合液の光学的特性（例えば散乱光強度）
を追跡することにより、凝固終了までの時間がわかり、
それとともに凝固能を算出している。本発明の試薬には
高分子物質が含有されている。この繊維と高分子物質の
共存により絡み合いはより複雑なものとなり、試薬混合
直後（凝固前）と凝固反応終了時との光学的特性の差は
従来より大きくなる（つまり高感度になる）。また、電
気伝導度、ｐＨ、浸透圧を変えることにより、光学的変
化量が変わる。そこで、これらの値を適当な範囲に設定
することにより、より高感度化が図られる。上記のよう
に、本発明の試薬を検体血漿に混合すると、血漿中の凝
固因子が順次活性化され、最終的にフィブリノーゲン
（繊維素原）がフィブリンに転化する。この時の例え
ば、濁度変化（濁度の増加）を光学的に検出することに
より凝固時間が測定され、結果として凝固能が算出され
る。血液凝固の最終過程において、フィブリノーゲンは
フィブリンに転化するが、初期にはフィブリンの単体
（フィブリンモノマー）が形成される。反応が進行する
と、このフィブリンモノマーはダイマーに、さらにポリ
マー（繊維）になる重合反応が起きる。この過程におい
ては繊維（フィブリン）の量が多く、かつ、繊維の絡み
合いが複雑であればあるほど濁度変化は大きく、このこ
とにより凝固能の測定は正確度・再現性は向上する。本
発明の血液凝固試薬はより大きな濁度変化を生じるよう
に試薬に高分子物質を含有させ、単に繊維の絡み合いだ
けではなく、繊維と高分子物質を絡み合わせることによ
って凝固の硬度を増し、光学的変化量を大きくしてい
る。また、電気伝導度などの条件を適正にすればフィブ
リンモノマーからフィブリンポリマーへの重合反応を促
進させることができる。いずれも血液凝固に伴う濁度変
化を大きくさせる効果があり、結果として感度の高い試
薬を作製できる。
より、血漿中の凝固因子が次々に活性化されてゆき、最
終的にフィブリノーゲン（繊維素原）がフィブリンに転
化し凝固反応が終了する。その最終過程において、まず
フィブリンのモノマーができ、そのモノマーは次々に重
合してポリマー（繊維状）を形成することによりフィブ
リンは繊維状になる。フィブリン繊維は網のように絡み
合うことにより混合液は濁り、かつ、ゲル化する。試薬
混合から逐次混合液の光学的特性（例えば散乱光強度）
を追跡することにより、凝固終了までの時間がわかり、
それとともに凝固能を算出している。本発明の試薬には
高分子物質が含有されている。この繊維と高分子物質の
共存により絡み合いはより複雑なものとなり、試薬混合
直後（凝固前）と凝固反応終了時との光学的特性の差は
従来より大きくなる（つまり高感度になる）。また、電
気伝導度、ｐＨ、浸透圧を変えることにより、光学的変
化量が変わる。そこで、これらの値を適当な範囲に設定
することにより、より高感度化が図られる。上記のよう
に、本発明の試薬を検体血漿に混合すると、血漿中の凝
固因子が順次活性化され、最終的にフィブリノーゲン
（繊維素原）がフィブリンに転化する。この時の例え
ば、濁度変化（濁度の増加）を光学的に検出することに
より凝固時間が測定され、結果として凝固能が算出され
る。血液凝固の最終過程において、フィブリノーゲンは
フィブリンに転化するが、初期にはフィブリンの単体
（フィブリンモノマー）が形成される。反応が進行する
と、このフィブリンモノマーはダイマーに、さらにポリ
マー（繊維）になる重合反応が起きる。この過程におい
ては繊維（フィブリン）の量が多く、かつ、繊維の絡み
合いが複雑であればあるほど濁度変化は大きく、このこ
とにより凝固能の測定は正確度・再現性は向上する。本
発明の血液凝固試薬はより大きな濁度変化を生じるよう
に試薬に高分子物質を含有させ、単に繊維の絡み合いだ
けではなく、繊維と高分子物質を絡み合わせることによ
って凝固の硬度を増し、光学的変化量を大きくしてい
る。また、電気伝導度などの条件を適正にすればフィブ
リンモノマーからフィブリンポリマーへの重合反応を促
進させることができる。いずれも血液凝固に伴う濁度変
化を大きくさせる効果があり、結果として感度の高い試
薬を作製できる。
【００１２】
【実施例】クイック（Ｑｕｉｃｋ）の一段法と言われる
検査方法（プロトロンビン時間法）に使用される試薬に
は、外因系凝固因子に対する反応性を持たせるために、
組織トロンボプラスチンを含有させることが不可欠であ
り、また、反応した結果が正確に測定されるように、凝
固塊をより強固なものとなるようにする反応環境の設定
が必要である。そのため、本実施例においては、ウサギ
脳組織から反応性の高い組織トロンボプラスチンをつぎ
の方法により抽出した。 クロロホルム等の麻酔剤を使用してウサギを麻酔し、
首頸動脈より全採血を行なう。次に脳動脈から生理食塩
水を灌流させて脳内の血液を洗浄する。その後、頭蓋骨
を開け、脳を摘出する。 このようにして得られたウサギ脳１００gに対して７
００mlの冷アセトンを混合し、ミキサーで粉砕・攪拌
し、脱水・粉砕を行なう。粉砕物はろ過した後、真空下
において乾燥させる。以下、これをアセトン粉末（Ａ
Ｐ）と言う。 ＡＰ１０gを採り、１００mlの塩酸水（０．０２規
定）中に混合した後、遠心分離（３，０００rpm×３０
分間）して沈降画分を集める。分離・除去した浮遊画分
には血液成分や夾雑蛋白質がある。 集められた沈澱画分を１００mlの蟻酸ナトリウム
（０．０５規定）に混合・攪拌する。遠心分離（３，０
００rpm×３０分間）して、組織トロンボプラスチンを
含有する浮遊画分を集める。 集められた約１００mlの組織トロンボプラスチンを含
有する浮遊画分に対してｐＨ安定化のための５０mMの緩
衝剤（燐酸緩衝液、あるいはバルビタール緩衝液、トリ
ス緩衝液も使用可能である）、防腐剤（０．１％Ｗ／Ｖ
アジ化ナトリウム）、安定化剤（０．１％塩化カルシウ
ム）を混合するとともに、凝固反応を顕在化させるため
に０．５％ポリエチレングリコール（分子量２０，００
０）、あるいは０．１％デキストラン（分子量２００，
０００）等の試剤を混合する。さらに、０．１規定の水
酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．２０〜７．５０に
調整し、電気伝導度を６．５〜１０．０mSとなるよう食
塩を混合し、また浸透圧を３５０〜７００mOsm／kgcm2
になるようブドウ糖を混合して調整する。 このようにして得られた組織トロンボプラスチン含有
試薬は凍結乾燥して、保存する。 つぎに、アセトン粉末を処理して血液成分や夾雑蛋白質
を除くことによる効果について説明する。組織トロンボ
プラスチンを抽出する前にアセトン粉末を液に溶かし、
血液成分や夾雑蛋白質を除くことによる効果を調べるた
めに、脱蛋白質処理（酸性の液でアセトン粉末を洗浄す
る操作）をしたものと、この処理をしなかったものとを
作製し、それらのＰＴ試薬を使用してそれぞれ１０回づ
つ測定して比較した。その結果、表１に示すように、脱
蛋白質処理をしたＰＴ試薬（脱蛋白質処理−あり）は脱
蛋白質処理をしなかったＰＴ試薬（脱蛋白質処理−な
し）に比べ凝固活性が高くなり（つまり、凝固時間が短
くなり）、また再現性も良くなった。このことから、組
織トロンボプラスチンを抽出する前に酸性の液でアセト
ン粉末を洗浄する操作を行なうことによって、ＰＴ試薬
の凝固活性が向上し、かつ、高精度の結果が得られるよ
うになることがわかる。
検査方法（プロトロンビン時間法）に使用される試薬に
は、外因系凝固因子に対する反応性を持たせるために、
組織トロンボプラスチンを含有させることが不可欠であ
り、また、反応した結果が正確に測定されるように、凝
固塊をより強固なものとなるようにする反応環境の設定
が必要である。そのため、本実施例においては、ウサギ
脳組織から反応性の高い組織トロンボプラスチンをつぎ
の方法により抽出した。 クロロホルム等の麻酔剤を使用してウサギを麻酔し、
首頸動脈より全採血を行なう。次に脳動脈から生理食塩
水を灌流させて脳内の血液を洗浄する。その後、頭蓋骨
を開け、脳を摘出する。 このようにして得られたウサギ脳１００gに対して７
００mlの冷アセトンを混合し、ミキサーで粉砕・攪拌
し、脱水・粉砕を行なう。粉砕物はろ過した後、真空下
において乾燥させる。以下、これをアセトン粉末（Ａ
Ｐ）と言う。 ＡＰ１０gを採り、１００mlの塩酸水（０．０２規
定）中に混合した後、遠心分離（３，０００rpm×３０
分間）して沈降画分を集める。分離・除去した浮遊画分
には血液成分や夾雑蛋白質がある。 集められた沈澱画分を１００mlの蟻酸ナトリウム
（０．０５規定）に混合・攪拌する。遠心分離（３，０
００rpm×３０分間）して、組織トロンボプラスチンを
含有する浮遊画分を集める。 集められた約１００mlの組織トロンボプラスチンを含
有する浮遊画分に対してｐＨ安定化のための５０mMの緩
衝剤（燐酸緩衝液、あるいはバルビタール緩衝液、トリ
ス緩衝液も使用可能である）、防腐剤（０．１％Ｗ／Ｖ
アジ化ナトリウム）、安定化剤（０．１％塩化カルシウ
ム）を混合するとともに、凝固反応を顕在化させるため
に０．５％ポリエチレングリコール（分子量２０，００
０）、あるいは０．１％デキストラン（分子量２００，
０００）等の試剤を混合する。さらに、０．１規定の水
酸化ナトリウムを使用してｐＨを７．２０〜７．５０に
調整し、電気伝導度を６．５〜１０．０mSとなるよう食
塩を混合し、また浸透圧を３５０〜７００mOsm／kgcm2
になるようブドウ糖を混合して調整する。 このようにして得られた組織トロンボプラスチン含有
試薬は凍結乾燥して、保存する。 つぎに、アセトン粉末を処理して血液成分や夾雑蛋白質
を除くことによる効果について説明する。組織トロンボ
プラスチンを抽出する前にアセトン粉末を液に溶かし、
血液成分や夾雑蛋白質を除くことによる効果を調べるた
めに、脱蛋白質処理（酸性の液でアセトン粉末を洗浄す
る操作）をしたものと、この処理をしなかったものとを
作製し、それらのＰＴ試薬を使用してそれぞれ１０回づ
つ測定して比較した。その結果、表１に示すように、脱
蛋白質処理をしたＰＴ試薬（脱蛋白質処理−あり）は脱
蛋白質処理をしなかったＰＴ試薬（脱蛋白質処理−な
し）に比べ凝固活性が高くなり（つまり、凝固時間が短
くなり）、また再現性も良くなった。このことから、組
織トロンボプラスチンを抽出する前に酸性の液でアセト
ン粉末を洗浄する操作を行なうことによって、ＰＴ試薬
の凝固活性が向上し、かつ、高精度の結果が得られるよ
うになることがわかる。
【００１３】
【表１】
【００１４】また、試薬に高分子物質を混合することの
効果を調べるために、組織トロンボプラスチン含有ＰＴ
試薬に高分子物質を混合したものと、なにも混合しない
ＰＴ試薬とを作製し、それらの凝固曲線を比較した。そ
の結果、図１に示すように、高分子物質を混合したＰＴ
試薬は、これを混合しなかったＰＴ試薬に比べ散乱光の
変化量が大きくなった。（△Ｈ＞△Ｈ1 ） このことから、ＰＴ試薬に高分子物質を混合することに
よって、凝固反応をより精密に解析できることがわか
る。なお、高分子物質としては分子量２０，０００のポ
リエチレングリコールを使用し、混合する場合の添加量
は０．５Ｗ／Ｖ％であった。また、△Ｈは高分子物質を
添加した場合の散乱光の変化量を示し、△Ｈ1 は高分子
物質を添加しない場合の散乱光の変化量を示している。
効果を調べるために、組織トロンボプラスチン含有ＰＴ
試薬に高分子物質を混合したものと、なにも混合しない
ＰＴ試薬とを作製し、それらの凝固曲線を比較した。そ
の結果、図１に示すように、高分子物質を混合したＰＴ
試薬は、これを混合しなかったＰＴ試薬に比べ散乱光の
変化量が大きくなった。（△Ｈ＞△Ｈ1 ） このことから、ＰＴ試薬に高分子物質を混合することに
よって、凝固反応をより精密に解析できることがわか
る。なお、高分子物質としては分子量２０，０００のポ
リエチレングリコールを使用し、混合する場合の添加量
は０．５Ｗ／Ｖ％であった。また、△Ｈは高分子物質を
添加した場合の散乱光の変化量を示し、△Ｈ1 は高分子
物質を添加しない場合の散乱光の変化量を示している。
【００１５】図２は、電気伝導度を４．０〜１５．０mS
に調整することによる効果を示している。ＰＴ試薬中の
電気伝導度を４．０〜１５．０mSに整えることによる効
果を調べるため、組織トロンボプラスチン抽出液に食塩
を添加し、電気伝導度が２．０〜２０．０mSになるよう
なＰＴ試薬を作製し、それらのＰＴ試薬を使用して血漿
の凝固測定を行ない、その時の散乱光変化量の平均値
（それぞれ１０回づつ測定した時の平均値）を比較し
た。その結果、図２に示すように、電気伝導度が高くな
るほど散乱光の変化量は低下する傾向はあるものの、
４．０〜１５．０mSの間においては安定的になる傾向が
あった。このことから、ＰＴ試薬中の電気伝導度を４．
０〜１５．０mSに整えることによって、散乱光の変化量
を高めに維持しつつ、かつ、検体血漿による電気伝導度
の変化に対しても安定的な散乱光の変化量を得られるこ
とがわかる。
に調整することによる効果を示している。ＰＴ試薬中の
電気伝導度を４．０〜１５．０mSに整えることによる効
果を調べるため、組織トロンボプラスチン抽出液に食塩
を添加し、電気伝導度が２．０〜２０．０mSになるよう
なＰＴ試薬を作製し、それらのＰＴ試薬を使用して血漿
の凝固測定を行ない、その時の散乱光変化量の平均値
（それぞれ１０回づつ測定した時の平均値）を比較し
た。その結果、図２に示すように、電気伝導度が高くな
るほど散乱光の変化量は低下する傾向はあるものの、
４．０〜１５．０mSの間においては安定的になる傾向が
あった。このことから、ＰＴ試薬中の電気伝導度を４．
０〜１５．０mSに整えることによって、散乱光の変化量
を高めに維持しつつ、かつ、検体血漿による電気伝導度
の変化に対しても安定的な散乱光の変化量を得られるこ
とがわかる。
【００１６】図３は、ｐＨを６．７〜８．２に、好まし
くは７．２〜７．５に調整することによる効果を示して
いる。ＰＴ試薬中のｐＨを６．７〜８．２に、好ましく
は７．２〜７．５に調整することによる効果を調べるた
め、組織トロンボプラスチン抽出液に１規定の塩酸およ
び１規定の水酸化ナトリウムを用いてｐＨを６．７〜
８．５に変えたＰＴ試薬を作製し、それらのＰＴ試薬を
使用して血漿の凝固測定を行ない、その時の散乱光変化
量の平均値（それぞれ１０回づつ測定した時の平均値）
を比較した。その結果、図３に示すように、ｐＨ６．７
〜７．５では散乱光の変化量は高めに安定する傾向があ
るが、ｐＨ７．５〜８．２の間においてはｐＨが上昇す
るに伴い散乱光の変化量は低下する傾向があり、ｐＨ
８．２以上では散乱光の変化量は低めに安定的になる傾
向があった。このことから、ＰＴ試薬中のｐＨを６．７
〜８．２に、好ましくは７．２〜７．５に調整すること
によって、散乱光の変化量を高めに維持しつつ、かつ、
検体血漿によるｐＨの変動に対しても安定的な散乱光の
変化量を得られることがわかる。
くは７．２〜７．５に調整することによる効果を示して
いる。ＰＴ試薬中のｐＨを６．７〜８．２に、好ましく
は７．２〜７．５に調整することによる効果を調べるた
め、組織トロンボプラスチン抽出液に１規定の塩酸およ
び１規定の水酸化ナトリウムを用いてｐＨを６．７〜
８．５に変えたＰＴ試薬を作製し、それらのＰＴ試薬を
使用して血漿の凝固測定を行ない、その時の散乱光変化
量の平均値（それぞれ１０回づつ測定した時の平均値）
を比較した。その結果、図３に示すように、ｐＨ６．７
〜７．５では散乱光の変化量は高めに安定する傾向があ
るが、ｐＨ７．５〜８．２の間においてはｐＨが上昇す
るに伴い散乱光の変化量は低下する傾向があり、ｐＨ
８．２以上では散乱光の変化量は低めに安定的になる傾
向があった。このことから、ＰＴ試薬中のｐＨを６．７
〜８．２に、好ましくは７．２〜７．５に調整すること
によって、散乱光の変化量を高めに維持しつつ、かつ、
検体血漿によるｐＨの変動に対しても安定的な散乱光の
変化量を得られることがわかる。
【００１７】図４は、浸透圧を１００〜７００mOsm／kg
cm2、好ましくは３５０〜７００mOsm／kgcm2になるよう
に調整することによる効果を示している。ＰＴ試薬中の
浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に、好ましくは３
５０〜７００mOsm／kgcm2になるように調整を調整する
ことによる効果を調べるため、組織トロンボプラスチン
抽出液にブドウ糖を混合してＰＴ試薬中の浸透圧を５０
〜９００mOsm／kgcm2に調整した試薬を作製し、それら
のＰＴ試薬を使用して血漿の凝固測定を行ない、その時
の散乱光変化量の平均値（それぞれ１０回づつ測定した
時の平均値）を比較した。その結果、図４に示すよう
に、浸透圧の上昇に伴い散乱光の変化量は低下する傾向
にあるが、浸透圧が１００〜７００mOsm／kgcm2に、特
に３５０〜７００mOsm／kgcm2の間では散乱光の変化量
は安定的になる傾向があった。このことから、ＰＴ試薬
中の浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に、好ましく
は３５０〜７００mOsm／kgcm2になるように調整するこ
とによって、散乱光の変化量を高めに維持しつつ、か
つ、検体血漿による浸透圧の変動に対しても安定的な散
乱光の変化量を得られることがわかる。
cm2、好ましくは３５０〜７００mOsm／kgcm2になるよう
に調整することによる効果を示している。ＰＴ試薬中の
浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に、好ましくは３
５０〜７００mOsm／kgcm2になるように調整を調整する
ことによる効果を調べるため、組織トロンボプラスチン
抽出液にブドウ糖を混合してＰＴ試薬中の浸透圧を５０
〜９００mOsm／kgcm2に調整した試薬を作製し、それら
のＰＴ試薬を使用して血漿の凝固測定を行ない、その時
の散乱光変化量の平均値（それぞれ１０回づつ測定した
時の平均値）を比較した。その結果、図４に示すよう
に、浸透圧の上昇に伴い散乱光の変化量は低下する傾向
にあるが、浸透圧が１００〜７００mOsm／kgcm2に、特
に３５０〜７００mOsm／kgcm2の間では散乱光の変化量
は安定的になる傾向があった。このことから、ＰＴ試薬
中の浸透圧を１００〜７００mOsm／kgcm2に、好ましく
は３５０〜７００mOsm／kgcm2になるように調整するこ
とによって、散乱光の変化量を高めに維持しつつ、か
つ、検体血漿による浸透圧の変動に対しても安定的な散
乱光の変化量を得られることがわかる。
【００１８】
【発明の効果】本発明の血液凝固試薬は、従来の凝固因
子活性化試薬と同様、凝固因子に対しての反応性を有す
ると共に、高分子物質を含有しているので、血液凝固に
伴う濁度変化を大きくさせる効果がある。電気伝導度な
どの条件を適正にすることによりフィブリンモノマーか
らフィブリンポリマーへの重合反応を促進させることが
でき、さらに血液凝固に伴う濁度変化を大きくさせる効
果を持つことになる。これらのことは、血液凝固の最終
産物であるフィブリン塊の形成状態が強固である特徴を
有するため、粘張度検出法を測定原理とする測定機器で
は、フィブリノーゲン量が少ない場合でも検出できる範
囲が拡大し、また、磁性物等の強弱に影響されると言う
欠点も解決できる。濁度検出法においては透過光あるい
は散乱光の変化量が増大し、より正確な検出ができるこ
とになる。以上は、血液凝固の分野において説明した
が、凝固反応環境を整備し、反応を顕在化させる方法及
び試薬は、本発明が示す凝固因子活性化物質に使用され
る試剤に限定されず、物理的に固まる凝固反応すべてに
適用される。
子活性化試薬と同様、凝固因子に対しての反応性を有す
ると共に、高分子物質を含有しているので、血液凝固に
伴う濁度変化を大きくさせる効果がある。電気伝導度な
どの条件を適正にすることによりフィブリンモノマーか
らフィブリンポリマーへの重合反応を促進させることが
でき、さらに血液凝固に伴う濁度変化を大きくさせる効
果を持つことになる。これらのことは、血液凝固の最終
産物であるフィブリン塊の形成状態が強固である特徴を
有するため、粘張度検出法を測定原理とする測定機器で
は、フィブリノーゲン量が少ない場合でも検出できる範
囲が拡大し、また、磁性物等の強弱に影響されると言う
欠点も解決できる。濁度検出法においては透過光あるい
は散乱光の変化量が増大し、より正確な検出ができるこ
とになる。以上は、血液凝固の分野において説明した
が、凝固反応環境を整備し、反応を顕在化させる方法及
び試薬は、本発明が示す凝固因子活性化物質に使用され
る試剤に限定されず、物理的に固まる凝固反応すべてに
適用される。
【図１】本発明の血液凝固試薬、及び高分子物質を含有
しない従来の血液凝固試薬の散乱光量と時間との関係を
示すグラフである。
しない従来の血液凝固試薬の散乱光量と時間との関係を
示すグラフである。
【図２】電気伝導度と散乱光の変化量との関係を示すグ
ラフである。
ラフである。
【図３】ｐＨと散乱光の変化量との関係を示すグラフで
ある。
ある。
【図４】浸透圧と散乱光の変化量との関係を示すグラフ
である。
である。
【図５】散乱光検出方式で得られる信号の変化と血液凝
固との関係を示すグラフである。
固との関係を示すグラフである。
【図６】血液凝固の機構を示すブロック図である。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭62−250364（ＪＰ，Ａ) 特開 昭58−154515（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−178161（ＪＰ，Ａ) 特表 平３−503534（ＪＰ，Ａ) ＴＨＲＯＭＭＢＯＳＩＳ ＲＥＳＥＡ ＲＣＨ Ｖｏｌ．９（1976）ｐ．623− 636 ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＣＨＥＭＩＳＴＲ Ｙ Ｖｏｌ．29，Ｎｏ．４，（1983) ｐ．614−617 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/48 - 33/98 G01N 21/17
Claims (8)
- 【請求項１】 組織トロンボプラスチン、リン脂質及び
トロンビンからなる群より選ばれる凝固因子活性化物質
と、カルシウムイオンと、高分子物質とを含有し、電気
伝導度が４．０〜１５．０mSに調整されていることを特
徴とする血液凝固試薬。 - 【請求項２】 高分子物質が、ポリエチレングリコー
ル、ポリビニルアルコールからなる群より選ばれた高分
子ビニルであることを特徴とする請求項１記載の血液凝
固試薬。 - 【請求項３】 高分子物質が、アガロース、可溶性デン
プン、グリコーゲン、デキストラン、デキストリンから
なる群より選ばれた高分子多糖であることを特徴とする
請求項１記載の血液凝固試薬。 - 【請求項４】 凝固因子活性化物質が、哺乳動物の組織
をアセトン処理して得られるアセトン処理粉末から取り
出された組織トロンボプラスチン含有画分であることを
特徴とする請求項１記載の血液凝固試薬。 - 【請求項５】 ｐＨが６．７〜８．２に調整されている
ことを特徴とする請求項４記載の血液凝固試薬。 - 【請求項６】 浸透圧が１００〜７００mOsm／kgcm2に
調整されていることを特徴とする請求項４記載の血液凝
固試薬。 - 【請求項７】 凝固因子活性化物質が、哺乳動物の組織
をアセトン処理して得られるアセトン処理粉末から取り
出されたリン脂質含有画分であることを特徴とする請求
項１記載の血液凝固試薬。 - 【請求項８】 凝固因子活性化物質が、哺乳動物の組織
をアセトン処理して得られるアセトン処理粉末から取り
出されたトロンビン含有画分であることを特徴とする請
求項１記載の血液凝固試薬。
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