JP3152532B2 - 抗インフルエンザａ活性クパラン型セスキテルペン化合物 - Google Patents
抗インフルエンザａ活性クパラン型セスキテルペン化合物Info
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Description
【０００１】本発明は、抗インフルエンザＡウイルス活
性を有する新規なクパラン型セスキテルペン化合物に関
する。
性を有する新規なクパラン型セスキテルペン化合物に関
する。
【０００２】インフルエンザＡウイルス感染症は他のウ
イルス感染症と同様に、確実な治療法を欠いている。従
来、化学療法剤としてはアマンタジンが２０年以上も前
から知られているが、その有効性についてはまだ評価が
定まっていない状況である。したがって、さらに新規で
有効な抗インフルエンザＡウイルス剤の開発が求められ
ている。
イルス感染症と同様に、確実な治療法を欠いている。従
来、化学療法剤としてはアマンタジンが２０年以上も前
から知られているが、その有効性についてはまだ評価が
定まっていない状況である。したがって、さらに新規で
有効な抗インフルエンザＡウイルス剤の開発が求められ
ている。
【０００３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、抗インフ
ルエンザＡウイルス感染抑制作用を有し、インフルエン
ザ治療薬として利用可能な化合物を提供することを目的
として鋭意検討し、カビの１種であるメタリチュウム
（Metarhizium）属に属する菌株Metarhizium sp.ＲＦ−
２９１８株が抗インフルエンザウイルス活性を有する物
質を産生することを見出した。次いで、この活性物質を
単離、精製し、物理化学的特性を明らかにし、構造決定
を行った。
ルエンザＡウイルス感染抑制作用を有し、インフルエン
ザ治療薬として利用可能な化合物を提供することを目的
として鋭意検討し、カビの１種であるメタリチュウム
（Metarhizium）属に属する菌株Metarhizium sp.ＲＦ−
２９１８株が抗インフルエンザウイルス活性を有する物
質を産生することを見出した。次いで、この活性物質を
単離、精製し、物理化学的特性を明らかにし、構造決定
を行った。
【０００４】即ち、本発明は式：
【化２】 で示されるクパラン型セスキテルペン化合物（以下、Ｒ
Ｆ−２１９８と称する）を提供するものである。
Ｆ−２１９８と称する）を提供するものである。
【０００５】本発明の化合物ＲＦ−２１９８の製造に有
用なMetarhizium sp.ＲＦ−２９１８株の菌学的性状 (T
axonomy)は以下の通りである。本菌株のポテト・デキス
トロ−ス寒天培地上でのコロニ−の生育はやや遅く、初
めは白色で、胞子形成にともないその部分は暗緑色とな
る。裏面は無色から薄黄色である。栄養菌糸は平滑で、
その幅は２〜３μｍである。胞子柄は分生子座型であ
り、胞子柄の先端に２〜４個の梗子(phialide)が形成さ
れ、最終的には柵状の層を形成する。梗子は棍棒状また
は円筒状で、長さは９〜１４μｍ、幅は３〜４μｍであ
る。分生胞子は長く鎖状に形成され、分生子座上に密な
円筒を形成し、培養が進むと湿潤する。分生胞子は単室
で、卵形から長楕円形であり、６〜８×４〜５μｍであ
る。これらの諸性状から、ＲＦ−２９１８株はメタリチ
ュウム(Metarhizium)属に属する株と判断され、Metarhi
zium sp. ＲＦ−２９１８として、工業技術院微生物工
業研究所に微工研条寄４１１８号（ＢＰ−４１１８）と
して寄託されている（寄託日：平成４年１２月１４
日）。
用なMetarhizium sp.ＲＦ−２９１８株の菌学的性状 (T
axonomy)は以下の通りである。本菌株のポテト・デキス
トロ−ス寒天培地上でのコロニ−の生育はやや遅く、初
めは白色で、胞子形成にともないその部分は暗緑色とな
る。裏面は無色から薄黄色である。栄養菌糸は平滑で、
その幅は２〜３μｍである。胞子柄は分生子座型であ
り、胞子柄の先端に２〜４個の梗子(phialide)が形成さ
れ、最終的には柵状の層を形成する。梗子は棍棒状また
は円筒状で、長さは９〜１４μｍ、幅は３〜４μｍであ
る。分生胞子は長く鎖状に形成され、分生子座上に密な
円筒を形成し、培養が進むと湿潤する。分生胞子は単室
で、卵形から長楕円形であり、６〜８×４〜５μｍであ
る。これらの諸性状から、ＲＦ−２９１８株はメタリチ
ュウム(Metarhizium)属に属する株と判断され、Metarhi
zium sp. ＲＦ−２９１８として、工業技術院微生物工
業研究所に微工研条寄４１１８号（ＢＰ−４１１８）と
して寄託されている（寄託日：平成４年１２月１４
日）。
【０００６】メタリチュウム(Metarhizium)属に属し、
本発明を産生する微生物、例えば上記の本発明の菌株を
適当な培地で培養すると、本発明化合物ＲＦ−２１９８
が産生される。活性は菌体のアセトン抽出部にも認めら
れたが, 主に濾液中に存在した。瀘液の酢酸エチル抽出
物をシリカゲルカラムクロマトで精製し、n−ヘキサン
／酢酸エチルから再結晶を行なうことにより、無色針状
晶の新規化合物ＲＦ−２１９８を得た。次いで、該化合
物の構造を、 質量分析スペクトル（Ｌ−ＳＩＭＳ）、
赤外線スペクトル（ＩＲ）、核磁気共鳴スペクトル（1
Ｈおよび13ＣＮＭＲ) から推定した。さらにＸ線結晶解
析により、その平面構造を決定し、円二色性スペクトル
（ＣＤ）の解析により絶対構造を決定した。その結果、
ＲＦ−２９１８の化学構造はクパラン（cupurane）型新
規セスキテルペン(sesquiterpene)である(＋)−(１Ｒ，
２Ｓ，５Ｓ）−２−メチル−５［（１Ｓ）−１，２，２
−トリメチルシクロペンチル］ビシクロ［３，１，０］
ヘキサン−２−オール−４−オンと同定された。
本発明を産生する微生物、例えば上記の本発明の菌株を
適当な培地で培養すると、本発明化合物ＲＦ−２１９８
が産生される。活性は菌体のアセトン抽出部にも認めら
れたが, 主に濾液中に存在した。瀘液の酢酸エチル抽出
物をシリカゲルカラムクロマトで精製し、n−ヘキサン
／酢酸エチルから再結晶を行なうことにより、無色針状
晶の新規化合物ＲＦ−２１９８を得た。次いで、該化合
物の構造を、 質量分析スペクトル（Ｌ−ＳＩＭＳ）、
赤外線スペクトル（ＩＲ）、核磁気共鳴スペクトル（1
Ｈおよび13ＣＮＭＲ) から推定した。さらにＸ線結晶解
析により、その平面構造を決定し、円二色性スペクトル
（ＣＤ）の解析により絶対構造を決定した。その結果、
ＲＦ−２９１８の化学構造はクパラン（cupurane）型新
規セスキテルペン(sesquiterpene)である(＋)−(１Ｒ，
２Ｓ，５Ｓ）−２−メチル−５［（１Ｓ）−１，２，２
−トリメチルシクロペンチル］ビシクロ［３，１，０］
ヘキサン−２−オール−４−オンと同定された。
【０００７】本発明化合物ＲＦ−２１９８の製造を目的
とするＲＦ−２９１８株の発酵は、発酵学の分野におい
て同様の場合に用いられる培地および条件を用いて行う
ことができる。例えば、ポリペプトン、グルコース、牛
肉エキス、酵母エキスおよび食塩を含むｐＨ約７.０の
培地にＲＦ−２９１８株の種培養を接種し約２８℃で約
１８０回転／分にて約７２時間振とう培養を行なう。こ
の培養液を、シュークロース、グリセリン、酵母エキス
および牛肉エキスを含むｐＨ約７.０の発酵培地に接種
し、１８０回転／分で２８℃にて１０日間振とう培養を
行なうと、本発明化合物が産生される。培地からの目的
化合物の分離、精製も発酵学の分野で既知の方法に従っ
て行うことができる。例えば、ハイフロスーパーセルを
用いて濾過し, 瀘液部と菌体部に分ける。瀘液を例えば
塩酸でpＨ７.０に調節した後、酢酸エチルで抽出する。
抽出液を濃縮し、例えばシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにかけて精製する。活性な画分を集めて濃縮し、
適当な溶媒、例えばｎ−ヘキサン／酢酸エチル、から再
結晶すると無色針状晶の本発明化合物ＲＦ−２１９８が
得られる。後述する実施例には好適な製造方法および条
件が記載されているが、本発明はこれらに限定されるも
のではなく、ＲＦ−２９１８株に適した、他の培養条
件、並びに他の分離精製法を用いても目的化合物を得る
ことが可能である。さらに本発明化合物を化学合成によ
って得ることも可能であり、それら他の方法で得られる
ＲＦ−２１９８も全て本発明の範囲に含まれる。
とするＲＦ−２９１８株の発酵は、発酵学の分野におい
て同様の場合に用いられる培地および条件を用いて行う
ことができる。例えば、ポリペプトン、グルコース、牛
肉エキス、酵母エキスおよび食塩を含むｐＨ約７.０の
培地にＲＦ−２９１８株の種培養を接種し約２８℃で約
１８０回転／分にて約７２時間振とう培養を行なう。こ
の培養液を、シュークロース、グリセリン、酵母エキス
および牛肉エキスを含むｐＨ約７.０の発酵培地に接種
し、１８０回転／分で２８℃にて１０日間振とう培養を
行なうと、本発明化合物が産生される。培地からの目的
化合物の分離、精製も発酵学の分野で既知の方法に従っ
て行うことができる。例えば、ハイフロスーパーセルを
用いて濾過し, 瀘液部と菌体部に分ける。瀘液を例えば
塩酸でpＨ７.０に調節した後、酢酸エチルで抽出する。
抽出液を濃縮し、例えばシリカゲルカラムクロマトグラ
フィーにかけて精製する。活性な画分を集めて濃縮し、
適当な溶媒、例えばｎ−ヘキサン／酢酸エチル、から再
結晶すると無色針状晶の本発明化合物ＲＦ−２１９８が
得られる。後述する実施例には好適な製造方法および条
件が記載されているが、本発明はこれらに限定されるも
のではなく、ＲＦ−２９１８株に適した、他の培養条
件、並びに他の分離精製法を用いても目的化合物を得る
ことが可能である。さらに本発明化合物を化学合成によ
って得ることも可能であり、それら他の方法で得られる
ＲＦ−２１９８も全て本発明の範囲に含まれる。
【０００８】本発明の新規な化合物ＲＦ−２１９８は後
述する実験例に示すように、インビトロで抗インフルエ
ンザＡウイルス活性を有していた。従って, この物質
は, 感受性ウイルスによる感染症の治療及び予防に有用
と考えられる。
述する実験例に示すように、インビトロで抗インフルエ
ンザＡウイルス活性を有していた。従って, この物質
は, 感受性ウイルスによる感染症の治療及び予防に有用
と考えられる。
【０００９】本発明化合物は、経口的または非経口的に
投与することができる。経口投与による場合、本発明化
合物は通常の製剤、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプ
セル剤等の固形剤；水剤；油性懸濁剤；またはシロップ
剤もしくはエリキシル剤等の液剤のいずれかの剤形とし
ても用いることができる。非経口投与による場合、本発
明化合物は、水性または油性懸濁注射剤として用いるこ
とができる。その調製に際しては、慣用の賦形剤、結合
剤、滑沢剤、水性溶剤、油性溶剤、乳化剤、懸濁化剤等
のいずれも用いることができ、また他の添加剤、例えば
保存剤、安定剤等を含むものであってもよい。本発明化
合物の投与量は、投与方法、患者の年齢、体重、状態お
よび疾患の種類によっても異なるが、通常、経口的に
は、１日あたり0.05〜2000mg、好ましくは、0.1〜500m
g、また非経口的には、１日あたり0.01〜1000mg、好ま
しくは0.05〜300mgであり、これを1〜5回に分割して投
与すればよい。以下に実施例を挙げて本発明を詳しく説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
投与することができる。経口投与による場合、本発明化
合物は通常の製剤、例えば、錠剤、散剤、顆粒剤、カプ
セル剤等の固形剤；水剤；油性懸濁剤；またはシロップ
剤もしくはエリキシル剤等の液剤のいずれかの剤形とし
ても用いることができる。非経口投与による場合、本発
明化合物は、水性または油性懸濁注射剤として用いるこ
とができる。その調製に際しては、慣用の賦形剤、結合
剤、滑沢剤、水性溶剤、油性溶剤、乳化剤、懸濁化剤等
のいずれも用いることができ、また他の添加剤、例えば
保存剤、安定剤等を含むものであってもよい。本発明化
合物の投与量は、投与方法、患者の年齢、体重、状態お
よび疾患の種類によっても異なるが、通常、経口的に
は、１日あたり0.05〜2000mg、好ましくは、0.1〜500m
g、また非経口的には、１日あたり0.01〜1000mg、好ま
しくは0.05〜300mgであり、これを1〜5回に分割して投
与すればよい。以下に実施例を挙げて本発明を詳しく説
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１０】
【実施例】実施例１ （＋）−（１Ｒ，２Ｓ，５Ｓ）−２−メチル
−５［（１Ｓ）−１，２，２−トリメチルシクロペンチ
ル］ビシクロ［３,１，０］ヘキサン−２−オール−４
−オン（ＲＦ−２１９８） １．発酵 ポリペプトン１.０％、グルコース２.０％、牛肉エキス
０.３％、酵母エキス０.２％、食塩０.１％、水道水
（滅菌前、ｐＨ７.０）よりなる培地１００ｍｌを含む
５００ｍｌ容広口三角マイヤーにメタリチュウム エス
ピー ＲＦ−２９１８の種培養スラントを接種し、毎分
１８０回転で２８℃、７２時間振とう培養を行なう。こ
の培養液４ｍｌずつをシュークロース２.０％、グリセ
リン２.０％、酵母エキス０.２％、牛肉エキス０.３％
（滅菌前、ｐＨ７.０）よりなる発酵培地１００ｍｌを
含む５００ｍｌ容広口三角マイヤー１００本に接種し，
毎分１８０回転で２８℃で１０日間振とう培養を行な
う。
−５［（１Ｓ）−１，２，２−トリメチルシクロペンチ
ル］ビシクロ［３,１，０］ヘキサン−２−オール−４
−オン（ＲＦ−２１９８） １．発酵 ポリペプトン１.０％、グルコース２.０％、牛肉エキス
０.３％、酵母エキス０.２％、食塩０.１％、水道水
（滅菌前、ｐＨ７.０）よりなる培地１００ｍｌを含む
５００ｍｌ容広口三角マイヤーにメタリチュウム エス
ピー ＲＦ−２９１８の種培養スラントを接種し、毎分
１８０回転で２８℃、７２時間振とう培養を行なう。こ
の培養液４ｍｌずつをシュークロース２.０％、グリセ
リン２.０％、酵母エキス０.２％、牛肉エキス０.３％
（滅菌前、ｐＨ７.０）よりなる発酵培地１００ｍｌを
含む５００ｍｌ容広口三角マイヤー１００本に接種し，
毎分１８０回転で２８℃で１０日間振とう培養を行な
う。
【００１１】２．分離精製 フラスコ１００本の培養液をハイフロスーパーセルを用
いて濾過し、濾液部と菌体部に分ける。瀘液（６.７
Ｌ、ｐＨ８.０）を６Ｎ ＨＣｌでｐＨ７.０に調製後、
酢酸エチル抽出（２Ｌ ｘ ２回抽出）し、減圧下溶媒
留去して残渣４０４ｍｇを得た。これをシリカゲルカラ
ムクロマト；カラム：ＳｉＯ2３０ｇ；メルク−キーセ
ルゲル（Merck Kieselgel）６０、７０〜２３０mesh、
溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：１）、１Fr.＝
６.７ml）に付し，Ｆｒ.１６〜１９を集め減圧下溶媒留
去後、残渣をｎ−ヘキサン／酢酸エチルから再結晶し無
色針状晶のＲＦ−２１９８（９７ｍｇ）を得た。
いて濾過し、濾液部と菌体部に分ける。瀘液（６.７
Ｌ、ｐＨ８.０）を６Ｎ ＨＣｌでｐＨ７.０に調製後、
酢酸エチル抽出（２Ｌ ｘ ２回抽出）し、減圧下溶媒
留去して残渣４０４ｍｇを得た。これをシリカゲルカラ
ムクロマト；カラム：ＳｉＯ2３０ｇ；メルク−キーセ
ルゲル（Merck Kieselgel）６０、７０〜２３０mesh、
溶媒：ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（１：１）、１Fr.＝
６.７ml）に付し，Ｆｒ.１６〜１９を集め減圧下溶媒留
去後、残渣をｎ−ヘキサン／酢酸エチルから再結晶し無
色針状晶のＲＦ−２１９８（９７ｍｇ）を得た。
【００１２】上記の生成物（ＲＦ−２１９８）の物理化
学的性質は以下のとおりである。 １）形状：無色針状晶 ２）溶解度：クロロホルム、エーテル、アセトン、酢酸
エチル、メタノールに可溶、ｎ−ヘキサンに僅かに可
溶、水に不溶性。 ３）融点：１１９〜１２０℃ ４）旋光度：［α］D 25＝＋２９.７±０.７℃（ｃ＝１.
００，ＭｅＯＨ） ５）元素分析（Ｃ15Ｈ24Ｏ2として） 計算値：Ｃ，７６.３３；Ｈ，１０.２７ 実測値：Ｃ，７６.１０；Ｈ，１０.１７ ６）質量分析（ＨＲ−ＬＳＩＭＳ）：ｍ／ｚ２３７.１
８４７（Ｍ＋Ｈ）+、計算値（Ｃ15Ｈ25Ｏ2として）２３
７.１８５３ ７）紫外スペクトル（ＵＶ）：メタノール中、末端吸収 ８）円二色性（ＣＤ）：メタノール中、［θ］222＝−
１３００、［θ］282 ＝−４４００
学的性質は以下のとおりである。 １）形状：無色針状晶 ２）溶解度：クロロホルム、エーテル、アセトン、酢酸
エチル、メタノールに可溶、ｎ−ヘキサンに僅かに可
溶、水に不溶性。 ３）融点：１１９〜１２０℃ ４）旋光度：［α］D 25＝＋２９.７±０.７℃（ｃ＝１.
００，ＭｅＯＨ） ５）元素分析（Ｃ15Ｈ24Ｏ2として） 計算値：Ｃ，７６.３３；Ｈ，１０.２７ 実測値：Ｃ，７６.１０；Ｈ，１０.１７ ６）質量分析（ＨＲ−ＬＳＩＭＳ）：ｍ／ｚ２３７.１
８４７（Ｍ＋Ｈ）+、計算値（Ｃ15Ｈ25Ｏ2として）２３
７.１８５３ ７）紫外スペクトル（ＵＶ）：メタノール中、末端吸収 ８）円二色性（ＣＤ）：メタノール中、［θ］222＝−
１３００、［θ］282 ＝−４４００
【００１３】９）赤外スペクトル（ＩＲ）：λmaxＣＨ
Ｃｌ3ｃｍ-1：３６８０，２９５０，２８７０，１７１
９，１６０１，１４６３，１３７３，１３２２，１２９
０ １０）1Ｈ ＮＭＲ：（２００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
δ，Ｊ＝Ｈｚ；０.９２（３Ｈ，ｓ），１.１０（３Ｈ，
ｓ），１.３１（３Ｈ，ｓ），１.５６（３Ｈ，ｓ），
２.２１（１Ｈ，ＡＢＸのＡ部，ＪＡＢ＝１８.８，ＪＡ
Ｘ＝０ Ｈｚ），２.２５（１Ｈ，ｄ，ｄ，Ｊ＝３.２，
４.２ Ｈｚ），２.３７（１Ｈ，ＡＢＸのＢ部，ＪＡＢ
＝１８.８，ＪＢＸ＝１.４ Ｈｚ） １１）13Ｃ ＮＭＲ：（５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
δ；１５.５４，１９.１６，２３.２５，２５.７１，２
７.６６，３０.０２，３６.８７，３９.４０，４２.２
４，４４.３０，４６.６３，４６.９８，５０.０９，７
１.５３，２１０.５１ １２）ＴＬＣ：（濃硫酸試薬で検出）；酢酸エチル；Ｒ
ｆ＝０.４５，ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝９：１；Ｒｆ＝
０.４８. １３）ＨＰＬＣ：カラム；ＬiＣhroＣＡＲＴ，ＬiＣhro
sorb ＲＰ−１８，７μｍ，４.０ Ｘ ２５０ｍｍ
（Ｃika−ＭＥＲＣＫ），溶媒；６０％アセトニトリル
／０.１％ＴＦＡ，流速；１ｍｌ／ｍｉｎ，検出；ＵＶ
（２２０ｎｍ），保持時間（Ｒｔ）；５.２３ｍｉｎ．
Ｃｌ3ｃｍ-1：３６８０，２９５０，２８７０，１７１
９，１６０１，１４６３，１３７３，１３２２，１２９
０ １０）1Ｈ ＮＭＲ：（２００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
δ，Ｊ＝Ｈｚ；０.９２（３Ｈ，ｓ），１.１０（３Ｈ，
ｓ），１.３１（３Ｈ，ｓ），１.５６（３Ｈ，ｓ），
２.２１（１Ｈ，ＡＢＸのＡ部，ＪＡＢ＝１８.８，ＪＡ
Ｘ＝０ Ｈｚ），２.２５（１Ｈ，ｄ，ｄ，Ｊ＝３.２，
４.２ Ｈｚ），２.３７（１Ｈ，ＡＢＸのＢ部，ＪＡＢ
＝１８.８，ＪＢＸ＝１.４ Ｈｚ） １１）13Ｃ ＮＭＲ：（５０ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ3）
δ；１５.５４，１９.１６，２３.２５，２５.７１，２
７.６６，３０.０２，３６.８７，３９.４０，４２.２
４，４４.３０，４６.６３，４６.９８，５０.０９，７
１.５３，２１０.５１ １２）ＴＬＣ：（濃硫酸試薬で検出）；酢酸エチル；Ｒ
ｆ＝０.４５，ＣＨＣｌ3：ＭｅＯＨ＝９：１；Ｒｆ＝
０.４８. １３）ＨＰＬＣ：カラム；ＬiＣhroＣＡＲＴ，ＬiＣhro
sorb ＲＰ−１８，７μｍ，４.０ Ｘ ２５０ｍｍ
（Ｃika−ＭＥＲＣＫ），溶媒；６０％アセトニトリル
／０.１％ＴＦＡ，流速；１ｍｌ／ｍｉｎ，検出；ＵＶ
（２２０ｎｍ），保持時間（Ｒｔ）；５.２３ｍｉｎ．
【００１４】実験例１ ＲＦ−２１９８の生物学的活性 実施例で製造したＲＦ−２１９８のインフルエンザＡウ
イルス感染抑制作用および細胞毒性を以下の方法で試験
した。抗ウイルス活性 インフルエンザＡ／ＷＳＮ／３３株、Ａ／Ｋｕｍａｍｏ
ｔｏ／５／６７株、Ａ／Ｏsaka／５／７０株を発育鶏卵
で増殖させ、感染価を測定して保存しておく。ＭＤＣＫ
細胞（犬の腎臓由来細胞）或いはＭＤＢＫ細胞（牛の腎
臓由来細胞）を９６穴マイクロテストチューブに入れ、
１０％牛胎児血清を添加したＥ−ＭＥＭ培地あるいは、
Ham F-12培地にて５％炭酸ガス中、３７℃で一夜培養す
る。次いで、試料をジメチルスルホキシドに溶解し、さ
らに上記培地で適当量に希釈したものを５０μｌづつ各
ウェルに加える。ついでウイルスを上記培地で希釈した
ものを５０μｌ（感染多重度０.００３）加え、５％炭
酸ガス中、３７℃で４８時間培養する。ウイルスによる
細胞障害を５０％抑制する化合物の濃度をＩＣ50とす
る。対照としてアマンタジン（amantadine)を用い、同
様に処理した。
イルス感染抑制作用および細胞毒性を以下の方法で試験
した。抗ウイルス活性 インフルエンザＡ／ＷＳＮ／３３株、Ａ／Ｋｕｍａｍｏ
ｔｏ／５／６７株、Ａ／Ｏsaka／５／７０株を発育鶏卵
で増殖させ、感染価を測定して保存しておく。ＭＤＣＫ
細胞（犬の腎臓由来細胞）或いはＭＤＢＫ細胞（牛の腎
臓由来細胞）を９６穴マイクロテストチューブに入れ、
１０％牛胎児血清を添加したＥ−ＭＥＭ培地あるいは、
Ham F-12培地にて５％炭酸ガス中、３７℃で一夜培養す
る。次いで、試料をジメチルスルホキシドに溶解し、さ
らに上記培地で適当量に希釈したものを５０μｌづつ各
ウェルに加える。ついでウイルスを上記培地で希釈した
ものを５０μｌ（感染多重度０.００３）加え、５％炭
酸ガス中、３７℃で４８時間培養する。ウイルスによる
細胞障害を５０％抑制する化合物の濃度をＩＣ50とす
る。対照としてアマンタジン（amantadine)を用い、同
様に処理した。
【００１５】細胞毒性試験 抗ウイルス活性測定と同様にサンプルを加え、ウイルス
の代わりに培養液５０μｌを加えて同様に培養し、化合
物の毒性によって細胞が５０％死滅する濃度をＣＣ50と
する。本発明のＲＦ−２１９８のＭＤＢＫ細胞での抗ウ
イルス活性、細胞毒性を表１に、またＭＤＣＫ細胞での
Ａ型ウイルス亜型に対する抗ウイルス活性を表２に示
す。
の代わりに培養液５０μｌを加えて同様に培養し、化合
物の毒性によって細胞が５０％死滅する濃度をＣＣ50と
する。本発明のＲＦ−２１９８のＭＤＢＫ細胞での抗ウ
イルス活性、細胞毒性を表１に、またＭＤＣＫ細胞での
Ａ型ウイルス亜型に対する抗ウイルス活性を表２に示
す。
【００１６】
【表１】 表１ ＲＦ−２１９８によるインフルエンザＡ／ＷＳＮ／３３のＭＤＢＫ細 胞での増殖抑制作用と細胞毒性 ＩＣ50（μｇ／ｍｌ） ＣＣ50（μｇ／ｍｌ） ＲＦ−２１９８ ０.１ ５０−１００ アマンタジン １０−１００ ＞１００
【表２】 表２ ＲＦ−２１９８によるインフルエンザＡ亜型のＭＤＣＫ細胞での増殖 抑制作用 ＩＣ50（μｇ／ｍｌ） インフルエンザＡ／ＷＳＮ／３３ ０.１ インフルエンザＡ／Ｋumamoto／５／６７ １ インフルエンザＡ／Ｏsaka／５／７０ ０.１
【００１７】
【発明の効果】上記の表１および２から明らかに、本発
明のＲＦ−２１９８は抗インフルエンザウイルス活性を
有する。したがって、本発明化合物を用いてインフルエ
ンザの治療を行うこと、並びに、該化合物を用いてさら
に薬効の優れた誘導体を開発することが可能である。
明のＲＦ−２１９８は抗インフルエンザウイルス活性を
有する。したがって、本発明化合物を用いてインフルエ
ンザの治療を行うこと、並びに、該化合物を用いてさら
に薬効の優れた誘導体を開発することが可能である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ //(Ｃ１２Ｐ 7/38 Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 上垣内 俊行 大阪府豊中市上新田１丁目28番地 Ｋ− 302 (72)発明者 板崎 弘 兵庫県宝塚市清荒神４−９−３ (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07C 49/513 A61K 31/12 C12N 1/14 C12P 7/38 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (4)
- 【請求項１】 式Ｉ： 【化１】 で示される化合物、またはその塩。
- 【請求項２】 請求項１の化合物の有効量と薬学上許容
される担体とを含有するインフルエンザＡウイルス感染
症の予防または治療剤 - 【請求項３】 請求項１の化合物を産生するメタリチュ
ウム エスピー ＲＦ２９１８株（Metarhizium sp. RF-2
918)(ＦＥＲＭ ＢＰ−４１１８）。 - 【請求項４】 メタリチュウム（Metarhizium)属に属
し、請求項１記載の化合物を産生する微生物を培養し、
得られた培養物から該化合物を分離、精製することを特
徴とする請求項１記載の化合物の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1735893A JP3152532B2 (ja) | 1993-02-04 | 1993-02-04 | 抗インフルエンザａ活性クパラン型セスキテルペン化合物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1735893A JP3152532B2 (ja) | 1993-02-04 | 1993-02-04 | 抗インフルエンザａ活性クパラン型セスキテルペン化合物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06228040A JPH06228040A (ja) | 1994-08-16 |
| JP3152532B2 true JP3152532B2 (ja) | 2001-04-03 |
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ID=11941823
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1735893A Expired - Fee Related JP3152532B2 (ja) | 1993-02-04 | 1993-02-04 | 抗インフルエンザａ活性クパラン型セスキテルペン化合物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3152532B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20140064887A (ko) | 2011-09-22 | 2014-05-28 | 코스메드 파마소티컬 씨오 쩜 엘티디 | 마이크로니들 패치 수납 용기 |
| KR102586606B1 (ko) * | 2015-12-04 | 2023-10-10 | 코스메드 파마소티컬 씨오 쩜 엘티디 | 마이크로니들 패치 수납도구, 하측 팔레트 및 상측 팔레트 |
-
1993
- 1993-02-04 JP JP1735893A patent/JP3152532B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| KR101990654B1 (ko) * | 2011-09-22 | 2019-06-18 | 코스메드 파마소티컬 씨오 쩜 엘티디 | 마이크로니들 패치 수납 용기 |
| KR102586606B1 (ko) * | 2015-12-04 | 2023-10-10 | 코스메드 파마소티컬 씨오 쩜 엘티디 | 마이크로니들 패치 수납도구, 하측 팔레트 및 상측 팔레트 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06228040A (ja) | 1994-08-16 |
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