JP3042738B2 - ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法 - Google Patents
ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、乳由来のガングリオシ
ドＧD3を加水分解して得られるガングリオシドＧM3組成
物及びその製造方法に関する。本発明の方法により得ら
れたガングリオシドＧM3組成物は医学・薬学・生化学・
食品などの分野において有用である。
ドＧD3を加水分解して得られるガングリオシドＧM3組成
物及びその製造方法に関する。本発明の方法により得ら
れたガングリオシドＧM3組成物は医学・薬学・生化学・
食品などの分野において有用である。
【０００２】
【従来の技術】ガングリオシドとは、シアル酸を含むス
フィンゴ糖脂質の総称でありその分子種は多様である。
そのうち、ガングリオシドＧM3（以下、ＧM3と略す）
は、セラミドに乳糖が結合しその非還元末端にシアル酸
がα２−３結合の構造を持っている。また、ガングリオ
シドＧD3（以下ＧD3と略す）は、ＧM3の非還元末端にさ
らにシアル酸がα２−８結合をした形でシアル酸を２分
子含んでいる。シアリダーゼとは、シアル酸を切断する
酵素のことである。ＧD3に対してシアリダーゼを作用さ
せるとＧD3からシアル酸が遊離され、最終的には、ラク
トシルセラミドまで分解されてしまう。ＧM3は、生体内
で多様な役割を果たしているとされており、例を挙げる
とＥＧＦレセプターのリン酸化を制御していたり、イン
フルエンザやニューカッスル病ウイルスのレセプターに
なっていたり血球の分化を制御したりしている。
フィンゴ糖脂質の総称でありその分子種は多様である。
そのうち、ガングリオシドＧM3（以下、ＧM3と略す）
は、セラミドに乳糖が結合しその非還元末端にシアル酸
がα２−３結合の構造を持っている。また、ガングリオ
シドＧD3（以下ＧD3と略す）は、ＧM3の非還元末端にさ
らにシアル酸がα２−８結合をした形でシアル酸を２分
子含んでいる。シアリダーゼとは、シアル酸を切断する
酵素のことである。ＧD3に対してシアリダーゼを作用さ
せるとＧD3からシアル酸が遊離され、最終的には、ラク
トシルセラミドまで分解されてしまう。ＧM3は、生体内
で多様な役割を果たしているとされており、例を挙げる
とＥＧＦレセプターのリン酸化を制御していたり、イン
フルエンザやニューカッスル病ウイルスのレセプターに
なっていたり血球の分化を制御したりしている。
【０００３】ガングリオシドを含めたスフィンゴ糖脂質
は、前記したように、糖鎖部分とセラミドと呼ばれる脂
質部分とによって構成され、さらにセラミド部分は長鎖
塩基と脂肪酸により構成されている。一般にスフィンゴ
糖脂質はその糖鎖部分により分類されているが、同じ糖
脂質に分類され同じ糖鎖を持ちながらセラミド部分は多
様性を有していることが知られている。つまり、同じ組
織由来の同じ糖脂質は糖鎖は同じでありながら種々の長
鎖塩基と脂肪酸により構成されているわけである。この
多様性はスフィンゴ糖脂質の含まれる臓器や組織によっ
て特徴があることも知られている。
は、前記したように、糖鎖部分とセラミドと呼ばれる脂
質部分とによって構成され、さらにセラミド部分は長鎖
塩基と脂肪酸により構成されている。一般にスフィンゴ
糖脂質はその糖鎖部分により分類されているが、同じ糖
脂質に分類され同じ糖鎖を持ちながらセラミド部分は多
様性を有していることが知られている。つまり、同じ組
織由来の同じ糖脂質は糖鎖は同じでありながら種々の長
鎖塩基と脂肪酸により構成されているわけである。この
多様性はスフィンゴ糖脂質の含まれる臓器や組織によっ
て特徴があることも知られている。
【０００４】また、スフィンゴ糖脂質の生理機能が糖鎖
部分によって担われていることが知られているが、一方
セラミドの部分の構造が生理機能発現に大きく関わって
いることも抗ストレス潰瘍活性セレブロシド等の例によ
り知られるところである。ＧM3の場合インフルエンザウ
イルスのレセプターになることは前記したが、セラミド
中の脂肪酸の鎖長が長いほうが、インフルエンザウイル
スとＧM3との親和性が高いということも知られている。
つまり、スフィンゴ糖脂質は糖鎖構造ばかりでなくセラ
ミドの部分の構造によっても生理機能の発現が影響を受
けるわけである。
部分によって担われていることが知られているが、一方
セラミドの部分の構造が生理機能発現に大きく関わって
いることも抗ストレス潰瘍活性セレブロシド等の例によ
り知られるところである。ＧM3の場合インフルエンザウ
イルスのレセプターになることは前記したが、セラミド
中の脂肪酸の鎖長が長いほうが、インフルエンザウイル
スとＧM3との親和性が高いということも知られている。
つまり、スフィンゴ糖脂質は糖鎖構造ばかりでなくセラ
ミドの部分の構造によっても生理機能の発現が影響を受
けるわけである。
【０００５】ＧM3の構造については、乳由来ＧM3の場
合、長鎖塩基はスフィンゴシン（ｄ18:1) 、脂肪酸はパ
ルミチン酸 (Ｃ16:0) とステアリン酸 (Ｃ18:0) オレイ
ン酸 (Ｃ18:1) が主要構成脂肪酸であることが知られて
いる (J.Biol.Chem. 261, 5625-5630 (1985)) 。また、
ＧM3は牛脳もしくは雌牛の***から分離精製されている
のが一般的であるが、このＧM3の脂肪酸組成は、乳由来
とあまりかわらない。現在市販されているＧM3は、牛脳
もしくは雌牛の***から分離精製されているのだが、構
成脂肪酸の鎖長が短いため感染防御の面からみると不十
分である。
合、長鎖塩基はスフィンゴシン（ｄ18:1) 、脂肪酸はパ
ルミチン酸 (Ｃ16:0) とステアリン酸 (Ｃ18:0) オレイ
ン酸 (Ｃ18:1) が主要構成脂肪酸であることが知られて
いる (J.Biol.Chem. 261, 5625-5630 (1985)) 。また、
ＧM3は牛脳もしくは雌牛の***から分離精製されている
のが一般的であるが、このＧM3の脂肪酸組成は、乳由来
とあまりかわらない。現在市販されているＧM3は、牛脳
もしくは雌牛の***から分離精製されているのだが、構
成脂肪酸の鎖長が短いため感染防御の面からみると不十
分である。
【０００６】
【発明の解決しようとする課題】本発明者らは種々の天
然及び人為的に得られるガングリオシドの化学構造及び
生理活性について検討した。特に乳由来のＧD3にシアリ
ダーゼあるいは酸を作用させ、ガングリオシドＧD3のシ
アル酸部分の非還元末端のシアル酸１分子のみを脱シア
ル化してＧM3とし、そのセラミドの構成成分について検
討したところ、脂肪酸が従来の炭素数16〜18より多く、
炭素数20〜24より構成される長鎖脂肪酸を多量に含むＧ
M3組成物を見出した。そして、このＧM3組成物の生理活
性について検討したところ、従来の牛脳あるいは雌牛の
***から分離されたＧM3よりもインフルエンザウイルス
等に優れた感染防御作用のあることを見出して、本発明
をなすに到った。すなわち、本発明の目的は、このよう
なインフルエンザウイルス等に対し、優れた感染防御効
果をもち、生理活性の優れたＧM3ガングリオシド組成物
及びその製造法を提供することにある。
然及び人為的に得られるガングリオシドの化学構造及び
生理活性について検討した。特に乳由来のＧD3にシアリ
ダーゼあるいは酸を作用させ、ガングリオシドＧD3のシ
アル酸部分の非還元末端のシアル酸１分子のみを脱シア
ル化してＧM3とし、そのセラミドの構成成分について検
討したところ、脂肪酸が従来の炭素数16〜18より多く、
炭素数20〜24より構成される長鎖脂肪酸を多量に含むＧ
M3組成物を見出した。そして、このＧM3組成物の生理活
性について検討したところ、従来の牛脳あるいは雌牛の
***から分離されたＧM3よりもインフルエンザウイルス
等に優れた感染防御作用のあることを見出して、本発明
をなすに到った。すなわち、本発明の目的は、このよう
なインフルエンザウイルス等に対し、優れた感染防御効
果をもち、生理活性の優れたＧM3ガングリオシド組成物
及びその製造法を提供することにある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明は、牛乳もしくは
乳製品を原料として得られる一般式 (5)で示されるガン
グリオシドに関する。一般式 Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃ
ｅｒ（５） （ただし、式中Ｎｅｕはノイラミン酸を、Ｇａｌはガラ
クトースを、Ｇｌｃはグルコースを、Ｃｅｒはセラミド
を各々表す）。そして、このセラミドの主要構成成分の
長鎖塩基及び脂肪酸が一般式 (1),(2),(3)及び (4)に示
すような種々の長鎖塩基及び脂肪酸からなるものであ
る。
乳製品を原料として得られる一般式 (5)で示されるガン
グリオシドに関する。一般式 Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃ
ｅｒ（５） （ただし、式中Ｎｅｕはノイラミン酸を、Ｇａｌはガラ
クトースを、Ｇｌｃはグルコースを、Ｃｅｒはセラミド
を各々表す）。そして、このセラミドの主要構成成分の
長鎖塩基及び脂肪酸が一般式 (1),(2),(3)及び (4)に示
すような種々の長鎖塩基及び脂肪酸からなるものであ
る。
【０００８】
【式５】
【式６】
【式７】
【式８】
【０００９】すなわちセラミドの主要構成成分が、長鎖
塩基はスフィンゴシン(sphingosine, ｄ18:1) (1) 、ヘ
クサデカスフィンゲニン（hexsadecasphingenine, ｄ1
6:1)(2) 、スフィンガニン（sphinganine,ｄ18:0)(3)、
ヘクサデカスフィンガニン（hexsadecasphinganine, ｄ
16:0)(4)であり、脂肪酸はドコサン酸（docosanoic aci
d,Ｃ22:0) 、トリコサン酸（tricosanoic acid, Ｃ23:
0) 、テトラコサン酸 (tetracosanoic acid, Ｃ24：
0)、テトラコセイン酸（tetracosenoic acid, Ｃ24:1)
で、その脂肪酸の比率がＣ22:0) 、Ｃ23:0、Ｃ24:0、Ｃ
24:1の順で20〜40％、15〜35％、10〜30％、 5〜15％で
あることを特徴とするガングリオシドＧM3組成物に関す
る。本発明の特徴は、このようなガングリオシドＧM3組
成物においてそのセラミドの構成脂肪酸として前記した
ような炭素数22〜24の長鎖脂肪酸を多量に含む点にあ
る。
塩基はスフィンゴシン(sphingosine, ｄ18:1) (1) 、ヘ
クサデカスフィンゲニン（hexsadecasphingenine, ｄ1
6:1)(2) 、スフィンガニン（sphinganine,ｄ18:0)(3)、
ヘクサデカスフィンガニン（hexsadecasphinganine, ｄ
16:0)(4)であり、脂肪酸はドコサン酸（docosanoic aci
d,Ｃ22:0) 、トリコサン酸（tricosanoic acid, Ｃ23:
0) 、テトラコサン酸 (tetracosanoic acid, Ｃ24：
0)、テトラコセイン酸（tetracosenoic acid, Ｃ24:1)
で、その脂肪酸の比率がＣ22:0) 、Ｃ23:0、Ｃ24:0、Ｃ
24:1の順で20〜40％、15〜35％、10〜30％、 5〜15％で
あることを特徴とするガングリオシドＧM3組成物に関す
る。本発明の特徴は、このようなガングリオシドＧM3組
成物においてそのセラミドの構成脂肪酸として前記した
ような炭素数22〜24の長鎖脂肪酸を多量に含む点にあ
る。
【００１０】本発明のガングリオシドＧM3組成物を得る
には、乳からガングリオシドＧD3組成物を大量に調製で
きることが知られているので（特開昭63−269992号公報
参照）、この方法でガングリオシドＧD3組成物を調製
し、このＧD3組成物にシアリダーゼを作用させるかある
いは酸で脱シアル化することによって得ることができ
る。また、これ以外に、ホエー蛋白濃縮物（ＷＰＣ）、
バターミルク等からガングリオシドＧD3を調製し、これ
を用いてもよい。
には、乳からガングリオシドＧD3組成物を大量に調製で
きることが知られているので（特開昭63−269992号公報
参照）、この方法でガングリオシドＧD3組成物を調製
し、このＧD3組成物にシアリダーゼを作用させるかある
いは酸で脱シアル化することによって得ることができ
る。また、これ以外に、ホエー蛋白濃縮物（ＷＰＣ）、
バターミルク等からガングリオシドＧD3を調製し、これ
を用いてもよい。
【００１１】さらに、ガングリオシドＧD3組成物を出発
原材料とせず、乳もしくはＷＰＣ、バターミルクなどの
乳製品に直接シアリダーゼもしくは酸を作用させること
によって、本発明のガングリオシドＧM3組成物を含む
乳、乳製品を得ることもできる。シアリダーゼを用いる
方法では、脱シアリル化されるガングリオシドＧD3組成
物と、脱シアリル化を行うシアリダーゼを緩衝溶液に懸
濁、または、溶解させてシアル酸酵素分解反応を行って
ガングリオシドＧM3組成物を得るか、脱シアリル化され
るガングリオシドＧD3組成物を適当なｐＨの緩衝溶液に
懸濁、または、溶解し、シアリダーゼを作用させてシア
ル酸を加水分解してガングリオシドＧM3組成物を得る。
本発明において用いるシアリダーゼは、コレラ菌由来、
クロストリジウム由来、アルスロバクター由来など、現
在市販されているどのようなシアリダーゼを用いてもガ
ングリオシドＧM3組成物を合成できる。また、用いる緩
衝溶液としては、用いる酵素が作用するｐＨであれば酢
酸緩衝液、燐酸緩衝液、クエン酸緩衝液、マレイン酸緩
衝液などどんな緩衝溶液でもよい。緩衝液の濃度は20〜
200mM の間がよい。さらに、基質のガングリオシドＧD3
組成物濃度は１ml中に 0.5〜５mg程度含有せしめるとよ
い。酵素量に関しては、余り多いとラクトシルセラミド
まで分解されてしまうし、少ないと反応が進まなくなっ
てしまう。そこで、酵素量は基質１mgに対し２〜20muni
t の間がよい。本発明におけるシアリダーゼを用いた方
法では緩衝液濃度、基質濃度、酵素量の３種の条件をそ
ろえることが望ましい。
原材料とせず、乳もしくはＷＰＣ、バターミルクなどの
乳製品に直接シアリダーゼもしくは酸を作用させること
によって、本発明のガングリオシドＧM3組成物を含む
乳、乳製品を得ることもできる。シアリダーゼを用いる
方法では、脱シアリル化されるガングリオシドＧD3組成
物と、脱シアリル化を行うシアリダーゼを緩衝溶液に懸
濁、または、溶解させてシアル酸酵素分解反応を行って
ガングリオシドＧM3組成物を得るか、脱シアリル化され
るガングリオシドＧD3組成物を適当なｐＨの緩衝溶液に
懸濁、または、溶解し、シアリダーゼを作用させてシア
ル酸を加水分解してガングリオシドＧM3組成物を得る。
本発明において用いるシアリダーゼは、コレラ菌由来、
クロストリジウム由来、アルスロバクター由来など、現
在市販されているどのようなシアリダーゼを用いてもガ
ングリオシドＧM3組成物を合成できる。また、用いる緩
衝溶液としては、用いる酵素が作用するｐＨであれば酢
酸緩衝液、燐酸緩衝液、クエン酸緩衝液、マレイン酸緩
衝液などどんな緩衝溶液でもよい。緩衝液の濃度は20〜
200mM の間がよい。さらに、基質のガングリオシドＧD3
組成物濃度は１ml中に 0.5〜５mg程度含有せしめるとよ
い。酵素量に関しては、余り多いとラクトシルセラミド
まで分解されてしまうし、少ないと反応が進まなくなっ
てしまう。そこで、酵素量は基質１mgに対し２〜20muni
t の間がよい。本発明におけるシアリダーゼを用いた方
法では緩衝液濃度、基質濃度、酵素量の３種の条件をそ
ろえることが望ましい。
【００１２】また、一方、酸を用いた加水分解による方
法では、反応溶液のｐＨ、反応温度、時間の関係が非常
に重要である。低いｐＨおよび高い反応温度により、Ｇ
M3の生成速度は大きくなるが、分解速度も大きくなる。
ｐＨは２から５まで、反応温度は37℃から 100℃までの
条件に応じた反応時間の設定が必要である。本発明の方
法を用いると、比較的安価でかつ大量に入手できるガン
グリオシドＧD3組成物から、簡単にかつ大量にガングリ
オシドＧM3組成物を調製することができる。本発明の方
法で得られたガングリオシドについては、次の方法で構
造解析を行った。
法では、反応溶液のｐＨ、反応温度、時間の関係が非常
に重要である。低いｐＨおよび高い反応温度により、Ｇ
M3の生成速度は大きくなるが、分解速度も大きくなる。
ｐＨは２から５まで、反応温度は37℃から 100℃までの
条件に応じた反応時間の設定が必要である。本発明の方
法を用いると、比較的安価でかつ大量に入手できるガン
グリオシドＧD3組成物から、簡単にかつ大量にガングリ
オシドＧM3組成物を調製することができる。本発明の方
法で得られたガングリオシドについては、次の方法で構
造解析を行った。
【００１３】１．プロトン核磁気共鳴スペクトル 既知の方法に従って、約３mgの牛乳由来のガングリオシ
ドＧD3より調製したガングリオシドＧM3を重水置換した
後、ジメチルスルフォキシド−重水（98:2) に溶かし、
90℃でプロトン核磁気共鳴スペクトルを測定した。得ら
れたスペクトルを図４に示す。また、実施例１で得られ
たガングリオシドＧM3を同様の方法でプロトン該磁気共
鳴スペクトルで測定したところ図４と一致した。この結
果より分光工学的に本発明のガングリオシドの糖鎖構造
が式(5) に示されたとおりであることが証明された。
ドＧD3より調製したガングリオシドＧM3を重水置換した
後、ジメチルスルフォキシド−重水（98:2) に溶かし、
90℃でプロトン核磁気共鳴スペクトルを測定した。得ら
れたスペクトルを図４に示す。また、実施例１で得られ
たガングリオシドＧM3を同様の方法でプロトン該磁気共
鳴スペクトルで測定したところ図４と一致した。この結
果より分光工学的に本発明のガングリオシドの糖鎖構造
が式(5) に示されたとおりであることが証明された。
【００１４】２．メチル化分析によるシアル酸の決定 約１mgの牛乳由来のガングリオシドＧD3より実施例１の
方法で調製したガングリオシドＧM3を、箱守の方法で完
全メチル化しその半量を、0.5ml の 0.3Ｎ塩酸メタノー
ルで75℃18時間メタノリシスする。溶媒を留去後乾燥し
て60℃20分でトリメチルシリル化（以下、ＴＭＳとい
う）した。このＴＭＳ誘導体をＧＬＣ／ＭＳで分析した
（ＧＬＣのカラムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７
０ｅＶ）。その結果より、Ｎ−メチル−4, 7, 8, 9−テ
トラ−Ｏ−メチル−Ｎ−アセチル−ノイラミニルメチル
ケトシドメチルエステル（N-Methyl-4,7,8,9-tetra-O-m
ethyl-N-acetyl-neuraminylmethylketoside methyl est
er) の質量スペクトルを確認した。
方法で調製したガングリオシドＧM3を、箱守の方法で完
全メチル化しその半量を、0.5ml の 0.3Ｎ塩酸メタノー
ルで75℃18時間メタノリシスする。溶媒を留去後乾燥し
て60℃20分でトリメチルシリル化（以下、ＴＭＳとい
う）した。このＴＭＳ誘導体をＧＬＣ／ＭＳで分析した
（ＧＬＣのカラムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７
０ｅＶ）。その結果より、Ｎ−メチル−4, 7, 8, 9−テ
トラ−Ｏ−メチル−Ｎ−アセチル−ノイラミニルメチル
ケトシドメチルエステル（N-Methyl-4,7,8,9-tetra-O-m
ethyl-N-acetyl-neuraminylmethylketoside methyl est
er) の質量スペクトルを確認した。
【００１５】３．メチル化分析による糖鎖の結合位の決
定 前記２の完全メチル化ガングリオシドＧM3の半量用い、
既知の方法に従い、部分メチル化アルジトールアセテー
ト誘導体を調製した。ＧＬＣ／ＭＳ分析（ＧＬＣのカラ
ムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７０ｅＶ）した結
果、1, 3, 5 −トリ−アセチル−2, 4, 6 −トリ−メチ
ル−ガラクチトール(1, 3, 5-tri-acetyl-2, 4, 6-tri-
methly-garactitol)と1, 4, 5 −トリ−アセチル− 2,
3, 6−トリ−メチル−グルクチトール(1,4,5−tri-mety
l-2, 3, 6-tri-methly-gluctitol) を確認した。
定 前記２の完全メチル化ガングリオシドＧM3の半量用い、
既知の方法に従い、部分メチル化アルジトールアセテー
ト誘導体を調製した。ＧＬＣ／ＭＳ分析（ＧＬＣのカラ
ムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７０ｅＶ）した結
果、1, 3, 5 −トリ−アセチル−2, 4, 6 −トリ−メチ
ル−ガラクチトール(1, 3, 5-tri-acetyl-2, 4, 6-tri-
methly-garactitol)と1, 4, 5 −トリ−アセチル− 2,
3, 6−トリ−メチル−グルクチトール(1,4,5−tri-mety
l-2, 3, 6-tri-methly-gluctitol) を確認した。
【００１６】４．構成脂肪酸 約１mgの牛乳由来のガングリオシドＧD3より実施例１の
方法によって調製したガングリオシドＧM3をテフロンシ
ール付ネジ口試験管にとり、１mlの含水メタノール性１
Ｎ塩酸を加え、75℃18時間加熱した。放冷後、２mlのヘ
キサンで３回抽出して脂肪酸メチルエステルを得た。さ
らにハイドロキシ酸をアセチル化するため、溶媒を窒素
を用いて除き、よく乾燥させて、0.1ml のピリジンー無
水酢酸（１：１）を加え80℃30分加熱した。得られた誘
導体をＧＬＣ／ＭＳ（ＤＢ−１）で分析した。結果は、
表１の通りである。
方法によって調製したガングリオシドＧM3をテフロンシ
ール付ネジ口試験管にとり、１mlの含水メタノール性１
Ｎ塩酸を加え、75℃18時間加熱した。放冷後、２mlのヘ
キサンで３回抽出して脂肪酸メチルエステルを得た。さ
らにハイドロキシ酸をアセチル化するため、溶媒を窒素
を用いて除き、よく乾燥させて、0.1ml のピリジンー無
水酢酸（１：１）を加え80℃30分加熱した。得られた誘
導体をＧＬＣ／ＭＳ（ＤＢ−１）で分析した。結果は、
表１の通りである。
【００１７】
【表１】 ハイドロキシ酸は検出されなかった。ｔｒ．は痕跡を示
し、また、ｎ．ｄ．は検出されずを示す。
し、また、ｎ．ｄ．は検出されずを示す。
【００１８】５．構成長鎖塩基 前記４のヘキサン抽出後のメタノール溶液を窒素気流中
で乾燥させ、トリメチルシリル化剤を加え60℃20分加熱
する。得られた誘導体をＧＬＣ／ＭＳで分析した。（Ｇ
ＬＣのカラムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７０ｅ
Ｖ）結果は、表２の通りである。
で乾燥させ、トリメチルシリル化剤を加え60℃20分加熱
する。得られた誘導体をＧＬＣ／ＭＳで分析した。（Ｇ
ＬＣのカラムはＤＢ−１、ＭＳのイオン化電圧は７０ｅ
Ｖ）結果は、表２の通りである。
【００１９】
【表２】
【００２０】上記１ないし５に示した性質から、本発明
に係わるガングリオシドは式 (1)、(2) 、(3) 、(4) を
有する Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃ
ｅｒ であると同定した。
に係わるガングリオシドは式 (1)、(2) 、(3) 、(4) を
有する Ｎｅｕ５Ａｃα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃβ１→１Ｃ
ｅｒ であると同定した。
【００２１】
【発明の効果】本発明を用いれば、分子種の違う新規な
ガングリオシドＧM3組成物を得ることができ、この新規
ガングリオシドＧM3組成物は、感染防御能を大幅に向上
する生理活性をもつ。さらに、今まで入手が困難であっ
たガングリオシドＧM3を容易にかつ大量に入手すること
ができる。そのため、医学・薬学・生化学・食品などの
分野において、非常に有用であり、本発明のガングリオ
シドＧM3組成物を用いて、機能性食品や、生理活性の高
い育児用粉乳、医薬、試薬等を製造することができる。
ガングリオシドＧM3組成物を得ることができ、この新規
ガングリオシドＧM3組成物は、感染防御能を大幅に向上
する生理活性をもつ。さらに、今まで入手が困難であっ
たガングリオシドＧM3を容易にかつ大量に入手すること
ができる。そのため、医学・薬学・生化学・食品などの
分野において、非常に有用であり、本発明のガングリオ
シドＧM3組成物を用いて、機能性食品や、生理活性の高
い育児用粉乳、医薬、試薬等を製造することができる。
【００２２】
【実施例】以下に実施例を示して本発明について、具体
的に説明する。ただし、実施例の中で用いた薄層クロマ
トグラフィーは、メルク社No.13749を用い、展開溶媒は
クロロホルム：メタノール： 0.2％ＣａＣl2水溶液＝5
5：45：10で、発色はオルシノール発色及びレゾルシン
発色が用いられた。
的に説明する。ただし、実施例の中で用いた薄層クロマ
トグラフィーは、メルク社No.13749を用い、展開溶媒は
クロロホルム：メタノール： 0.2％ＣａＣl2水溶液＝5
5：45：10で、発色はオルシノール発色及びレゾルシン
発色が用いられた。
【００２３】実施例１ ガングリオシドＧD3（牛乳由来）１ｇとシアリダーゼ
（アルスロバクター由来）５unitを 0.1Ｍ酢酸緩衝液
（pH7.0) 500mlに懸濁させた。そして、直ちに反応温度
40℃にて24時間反応させた。反応中は薄層クロマトグラ
フィーを用いて、ガングリオシドＧM3の生成量を確認し
た。反応をとめた段階での薄層クロマトグラフィーを図
１に示した。反応終了後、沸騰水中に１分間放置して酵
素を失活させた。続いて、減圧乾固を行い得られた白色
粉末をＤＥＡＥ−SephadexA-25 (ファルマシア社）を用
いた、イオン交換クロマトグラフィーに供し、さらに、
イアトロビーズ 6RS 8060(ヤトロン社）を用いたシリカ
ゲルクロマトグラフィーを行い、反応生成物を分離し
た。得られた反応生成物は、凍結乾燥を行い、白色粉末
を415mg をえた。
（アルスロバクター由来）５unitを 0.1Ｍ酢酸緩衝液
（pH7.0) 500mlに懸濁させた。そして、直ちに反応温度
40℃にて24時間反応させた。反応中は薄層クロマトグラ
フィーを用いて、ガングリオシドＧM3の生成量を確認し
た。反応をとめた段階での薄層クロマトグラフィーを図
１に示した。反応終了後、沸騰水中に１分間放置して酵
素を失活させた。続いて、減圧乾固を行い得られた白色
粉末をＤＥＡＥ−SephadexA-25 (ファルマシア社）を用
いた、イオン交換クロマトグラフィーに供し、さらに、
イアトロビーズ 6RS 8060(ヤトロン社）を用いたシリカ
ゲルクロマトグラフィーを行い、反応生成物を分離し
た。得られた反応生成物は、凍結乾燥を行い、白色粉末
を415mg をえた。
【００２４】この粉末を薄層クロマトグラフィーにて分
析したところ、標準品であるＧM3（牛脳由来）とＲｆ値
が同じであった（図２参照）。また、この粉末をＮＭ
Ｒ、ＩＲにて分析したところ、標準品とよく一致した
（図３及び図４参照）。以上の結果より、得られた白色
粉末が、ガングリオシドＧM3であることが確認された。
ここで得られたガングリオシドＧM3は、塩酸−メタノー
ルを用いて脂肪酸を遊離とし、ＧＣ−ＭＳを用いて脂肪
酸組成を測定したところ、従来知られていたガングリオ
シドＧM3とは脂肪酸組成が異なり、表１の脂肪酸組成を
示した。なお、参考のために由来の違うガングリオシド
ＧM3の脂肪酸組成を表３に示した。
析したところ、標準品であるＧM3（牛脳由来）とＲｆ値
が同じであった（図２参照）。また、この粉末をＮＭ
Ｒ、ＩＲにて分析したところ、標準品とよく一致した
（図３及び図４参照）。以上の結果より、得られた白色
粉末が、ガングリオシドＧM3であることが確認された。
ここで得られたガングリオシドＧM3は、塩酸−メタノー
ルを用いて脂肪酸を遊離とし、ＧＣ−ＭＳを用いて脂肪
酸組成を測定したところ、従来知られていたガングリオ
シドＧM3とは脂肪酸組成が異なり、表１の脂肪酸組成を
示した。なお、参考のために由来の違うガングリオシド
ＧM3の脂肪酸組成を表３に示した。
【００２５】
【表３】
【００２６】実施例２ ガングリオシドＧD3（牛乳由来）500mg とシアリダーゼ
（ストレプトコッカス由来）５unitを50mMマレイン酸緩
衝液（pH5.0)２リットルに懸濁させた。そして、直ちに
反応温度37℃にて12時間反応させた。反応終了後、沸騰
水中に１分間放置して酵素を失活させた。続いて、実施
例１と同じ処理を行い反応生成物を白色粉末として 372
mgを得た。得られた粉末を実施例１と同じ方法にて分析
したところ、その粉末は本発明のガングリオシドＧM3組
成物であることが確認された。
（ストレプトコッカス由来）５unitを50mMマレイン酸緩
衝液（pH5.0)２リットルに懸濁させた。そして、直ちに
反応温度37℃にて12時間反応させた。反応終了後、沸騰
水中に１分間放置して酵素を失活させた。続いて、実施
例１と同じ処理を行い反応生成物を白色粉末として 372
mgを得た。得られた粉末を実施例１と同じ方法にて分析
したところ、その粉末は本発明のガングリオシドＧM3組
成物であることが確認された。
【００２７】実施例３ ガングリオシドＧD3を１リットル当たり40mg含んだ10％
ホエーたん白濃縮溶液（ＷＰＣ溶液）に、塩酸を加えpH
2.5 に調整し、反応温度37℃にて８時間反応させた。反
応終了後、水酸化ナトリウムを用いて中和した。この溶
液から脂質画分を抽出した後、薄層クロマトグラフィー
分析を行った結果、この溶液中には、１リットル当たり
10mgの本発明のガングリオシドＧM3組成物が含まれてい
ることを確認した。
ホエーたん白濃縮溶液（ＷＰＣ溶液）に、塩酸を加えpH
2.5 に調整し、反応温度37℃にて８時間反応させた。反
応終了後、水酸化ナトリウムを用いて中和した。この溶
液から脂質画分を抽出した後、薄層クロマトグラフィー
分析を行った結果、この溶液中には、１リットル当たり
10mgの本発明のガングリオシドＧM3組成物が含まれてい
ることを確認した。
【００２８】実施例４ ガングリオシドＧD3を１リットル当たり28mg含んだ10％
バターミルク溶液に、クエン酸を加えpH４に調整し、反
応温度 100℃で15分間反応させた。反応終了後、水酸化
ナトリウムを用いて中和し、実施例３と同様に薄層クロ
マトグラフィー分析した結果、溶液中には本発明のガン
グリオシドＧM3組成物を１リットル当たり46mg含んでい
ることがわかった。
バターミルク溶液に、クエン酸を加えpH４に調整し、反
応温度 100℃で15分間反応させた。反応終了後、水酸化
ナトリウムを用いて中和し、実施例３と同様に薄層クロ
マトグラフィー分析した結果、溶液中には本発明のガン
グリオシドＧM3組成物を１リットル当たり46mg含んでい
ることがわかった。
【００２９】実施例５ 実施例１にて得た本発明のガングリオシドＧM3組成物及
び市販のガングリオシドＧM3、乳由来のＧD3を用いてイ
ンフルエンザウイルスのレセプター認識特異性を測定し
た。測定方法は、鈴木らの方法（J.Biol.Chem.,260,136
2-1365(1985)）にしたがった。その結果を表４に示す。
この結果より、本発明で得たＧM3組成物は、従来品に比
較してインフルエンザウイルスの認識特異性が高いこと
が示された。このことは、本発明のガングリオシドＧM3
組成物は、感染防御能が従来のＧM3より高いことを示し
ている。
び市販のガングリオシドＧM3、乳由来のＧD3を用いてイ
ンフルエンザウイルスのレセプター認識特異性を測定し
た。測定方法は、鈴木らの方法（J.Biol.Chem.,260,136
2-1365(1985)）にしたがった。その結果を表４に示す。
この結果より、本発明で得たＧM3組成物は、従来品に比
較してインフルエンザウイルスの認識特異性が高いこと
が示された。このことは、本発明のガングリオシドＧM3
組成物は、感染防御能が従来のＧM3より高いことを示し
ている。
【００３０】
【表４】 インフルエンザによるガングリオシドの認識 ──────────────────────── ガングリオシド 認識特異性 ──────────────────────── ＧM3 （実施例１） 21±4 ＧM3 （市販品） 13±3 ＧD3 （乳由来） 0 ──────────────────────── （単位はnmol/mG protein/min.である。）
【図１】実施例１において反応を止めた段階での薄層ク
ロマトグラフィーで得られた結果である。
ロマトグラフィーで得られた結果である。
【図２】実施例１で得られた本発明のガングリオシドＧ
M3と標準品のＧM3との薄層クロマトグラフィーで得られ
た結果である。
M3と標準品のＧM3との薄層クロマトグラフィーで得られ
た結果である。
【図３】実施例１で得られたガングリオシドＧM3のＩＲ
スペクトルである。
スペクトルである。
【図４】実施例１で得られたガングリオシドＧM3のＮＭ
Ｒスペクトルである。
Ｒスペクトルである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 出家 栄記 埼玉県狭山市入間川71−６−６−8026 (56)参考文献 特開 平３−219841（ＪＰ，Ａ) 前野正久、大條方義「酪農技術叢書理 論・実際牛乳加工法（増補４版）」（昭 31−７−20）、朝倉書店、第404−406頁 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C07H 15/10 A61K 31/7032 A61P 31/12
Claims (4)
- 【請求項１】 乳由来ガングリオシドＧD3を加水分解し
て得られ、その主要組成が次の一般式(1),(2),(3) 及び
(4) で示されるガングリオシドＧM3混合物であるガング
リオシドＧM3組成物。 【式１】 【式２】 【式３】 【式４】 - 【請求項２】 セラミド部分の主要な組成の脂肪酸の比
率が、ドコサン酸（Ｃ22:0) 20〜40％、トリコサン酸
(Ｃ23:0) 15〜35％、テトラコサン酸 (Ｃ24:0) 10〜30
％、及びテトラコセイン酸 (Ｃ24:1) ５〜15％よりなる
ガングリオシドＧM3混合物である請求項１記載の組成
物。 - 【請求項３】 乳由来のガングリオシドＧD3にシアリダ
ーゼを作用させて非還元末端のシアル酸１分子だけを加
水分解して脱シアル化し、ガングリオシドＧM3混合物を
得ることを特徴とする請求項１記載のガングリオシドＧ
M3組成物の製造法。 - 【請求項４】 乳由来のガングリオシドＧD3に酸を作用
させて非還元末端のシアル酸１分子だけを加水分解して
脱シアル化し、ガングリオシドＧM3混合物とすることを
特徴とする請求項１記載のガングリオシドＧM3組成物の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4105616A JP3042738B2 (ja) | 1992-03-31 | 1992-03-31 | ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4105616A JP3042738B2 (ja) | 1992-03-31 | 1992-03-31 | ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05279379A JPH05279379A (ja) | 1993-10-26 |
| JP3042738B2 true JP3042738B2 (ja) | 2000-05-22 |
Family
ID=14412435
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4105616A Expired - Fee Related JP3042738B2 (ja) | 1992-03-31 | 1992-03-31 | ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS54105379A (en) * | 1978-02-03 | 1979-08-18 | Potsupuribetsuto Fuasunaa Kk | Blind riveter |
| WO1996002255A1 (fr) * | 1994-07-15 | 1996-02-01 | Taiyo Kagaku Co., Ltd. | Composition medicamenteuse contenant un derive d'acide sialique |
| JP3615798B2 (ja) | 1994-09-30 | 2005-02-02 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシドの製造法 |
| JP2001158736A (ja) * | 1999-11-30 | 2001-06-12 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 骨関節疾患の予防及び改善剤 |
| JP2001158735A (ja) * | 1999-11-30 | 2001-06-12 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 歯周病の予防及び改善剤 |
| JP2001233773A (ja) * | 2000-02-22 | 2001-08-28 | Toko Yakuhin Kogyo Kk | 抗ウイルス剤 |
| EP1323424A1 (en) * | 2001-12-27 | 2003-07-02 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Buffalo milk gangliosides |
| DE10226367A1 (de) * | 2002-06-13 | 2003-12-24 | Nutricia Nv | Ganglioside mit modifizierter Acylfunktion |
| WO2005084694A1 (ja) * | 2004-03-09 | 2005-09-15 | Glycomedics, Inc. | インフルエンザウイルス感染抑制剤 |
| EP2335705B1 (en) * | 2006-08-04 | 2013-12-18 | MEGMILK SNOW BRAND Co., Ltd. | Use of sphingomyelin for the treatment of influenza |
| JP5546718B2 (ja) * | 2007-03-27 | 2014-07-09 | 雪印メグミルク株式会社 | ラクトシルセラミド組成物及びその製造方法 |
| JP5465834B2 (ja) * | 2008-01-15 | 2014-04-09 | 雪印メグミルク株式会社 | 肝機能保護剤 |
| KR102236851B1 (ko) | 2019-11-04 | 2021-04-06 | 주식회사 포스코 | 내구성이 우수한 고항복비형 후물 고강도강 및 그 제조방법 |
| KR102307927B1 (ko) | 2019-11-22 | 2021-09-30 | 주식회사 포스코 | 내구성 및 연신율이 우수한 후물 변태조직강 및 그 제조방법 |
| KR102307928B1 (ko) | 2019-12-02 | 2021-09-30 | 주식회사 포스코 | 내구성이 우수한 후물 복합조직강 및 그 제조방법 |
-
1992
- 1992-03-31 JP JP4105616A patent/JP3042738B2/ja not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 前野正久、大條方義「酪農技術叢書理論・実際牛乳加工法（増補４版）」（昭３１−７−２０）、朝倉書店、第４０４−４０６頁 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05279379A (ja) | 1993-10-26 |
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