JP2890384B2 - 固相イムノアッセイ法 - Google Patents

固相イムノアッセイ法

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JP2890384B2 JP9209034A JP20903497A JP2890384B2 JP 2890384 B2 JP2890384 B2 JP 2890384B2 JP 9209034 A JP9209034 A JP 9209034A JP 20903497 A JP20903497 A JP 20903497A JP 2890384 B2 JP2890384 B2 JP 2890384B2
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Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は被分析体のアッセイ
法、より詳細には固相アッセイ法に関する。
【０００２】
【従来の技術】各種の被分析体のアッセイがいわゆる固
相アッセイ法により行われている。固相アッセイ法にお
いては、少なくとも測定すべきリガンド（被分析体）に
特異的な結合剤を固形支持体に支持させる。このためこ
のアッセイ法ではアッセイに際して形成された結合相と
遊離相を分離するために付加的な試薬を用いる必要がな
い。
【０００３】一般にこの種の固形支持体はチューブ、固
体粒子、などの形状であり、場合により固相は“ディッ
プスティック（ｂｉｐ−ｓｔｉｃｋ）”の形状のもので
あった。
【０００４】ディップスティック固相アッセイ法の場
合、結合剤はディップスティックに支持されており、こ
の結合剤を含むディップスティックが被分析体を含有す
るアッセイ液に浸漬される。一般にこの種の溶液はさら
にトレーサーを含有する。その場合、ディップスティッ
ク上のトレーサーの存在および／または量の被分析体の
尺度として用いられる（被分析体の質的または量的尺
度）。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は被分析体を測
定するための改良された固相アッセイ法の提供、より詳
細には固相アッセイ法を目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明の一観点によれ
ば、第１部分および第２部分を備え、第１部分と第２部
分は相互に毛管流により連絡しており、これにより物質
が毛管現象によって流動する固形支持体が提供される。
これらの第１および第２部分は、第１部分が被分析体を
含む材料と接触し、この第１部分の材料が支持体の第１
部分からその第２部分へ毛管現象により輸送される状態
で固形支持体上に配置される。
【０００７】固形支持体の第２部分には結合剤が含まれ
る。これは少なくとも被分析体の結合剤であり、アッセ
イ形式がいわゆる競合アッセイ形式である場合はアッセ
イに用いられるトレーサーの結合剤でもある。
【０００８】固形支持体にはトレーサーも含まれる。こ
れはリガンド部分、およびトレーサーのリガンド部分に
結合した検出可能なラベル部分からなる。アッセイ形式
がいわゆる競合アッセイ形式である場合、トレーサーの
リガンド部分に固形支持体の第２部分に含まれる結合剤
が結合する。アッセイ形式いわゆるサンドイッチアッセ
イ形式である場合、トレーサーのリガンド部分に被分析
体が結合する。
【０００９】トレーサーは固形支持体のトレーサー部分
において、以下の様式で固形支持体に支持される。すな
わち湿潤するとトレーサーは毛管現象によって固形支持
体の第２部分へ輸送され、次いで被分析体の存在および
／または不在および／または被分析体量に応じて、のち
により詳細に説明するように固形支持体の第３部分へ輸
送されうる様式で支持される。
【００１０】固形支持体のトレーサー部分は固形支持体
の別個の部分であってもよく、固形支持体の第１部分
（試料が添加される部分）であってもよい。
【００１１】固相の第２部分に支持される結合剤は、結
合剤が固定化された状態を保ち、毛管現象によって固形
支持体の第３部分へ輸送されることのない様式で支持さ
れている。
【００１２】固形支持体の第３部分は毛管現象によって
第２部分から第３部分へ輸送されたトレーサーを検出す
るための部分である。第３部分にはトレーサーを検出す
るための物質が支持されていてもよく、支持されていな
くてもよい。あるいは第３部分は第２部分に結合しなか
った材料を受容する機能をもつのみでもよい。
【００１３】本発明によれば、第２部分の結合剤に直接
に結合することにより（競合アッセイ形式の場合）、ま
たは結合剤に間接的に結合することにより（サンドイッ
チアッセイ形式の場合、トレーサーは結合剤に結合した
被分析体に結合する）固形支持体の第２部分に固定化さ
れたトレーサーの量は、試料中の被分析体の存在および
／または量に依存する。いわゆるサンドイッチアッセイ
形式の場合、固形支持体の第２部分から第３部分へ毛管
現象により送られるトレーサーの量は試料中の被分析体
の量に反比例する。またいわゆる競合アッセイ形式の場
合、固形支持体の第２部分から第３部分へ毛管現象によ
り送られるトレーサーの量は試料中の被分析体の量に正
比例する。
【００１４】本発明の好ましい形態においては、固形支
持体および各種成分は被分析体を競合アッセイ形式によ
り測定する様式で調製および使用され、トレーサーは固
形支持体の第１部分に支持されている。
【００１５】特に好ましい形態においては、のちにより
詳細に説明するようにトレーサーの検出可能な標識部分
は検出可能な標識を含むサック（ｓａｃ）、または脂質
小胞（しばしばリポソームと呼ばれる）からなる。
【００１６】アッセイ法が競合アッセイ法である好まし
い形態を採用する場合、トレーサーは固形支持体の第１
部分に支持され、固形支持体の第１部分は測定すべき被
分析体を含有する試料で湿潤される。固形支持体を試料
で湿潤させると、試料およびトレーサーが双方とも毛管
現象によって固形支持体の第２部分へ流入する。ここに
は被分析体およびトレーサーの双方に特異的な結合剤が
含まれており、この結合剤は固形支持体の第２部分に固
定化されている。試料部分の被分析体の存在および／ま
たは量に応じて、トレーサーは固形支持体の第２部分に
ある結合剤に結合する。第２部分の結合剤に結合しなか
ったトレーサーは次いで固形支持体の第３部分へ毛管現
象により流入し、そこで検出および／または測定され
る。アッセイ形式が単純な“有”または“無”の形式で
ある場合（試料中の被分析体の存否のみを判定する）、
固形支持体の第２部分に支持される結合剤は、試料中に
検出可能な量の被分析体が存在しない場合には固形支持
体の第３部分に検出可能なトレーサーが存在しない状態
になる量で支持されている。明らかに、試料中の被分析
体の量が増加するのに伴って固形支持体の第２部分にあ
る結合剤に結合しないトレーサーの量は増加し、これに
より固形支持体の第３部分に存在するトレーサーの量は
増加する。従って、固形支持体の第２部分に残留するト
レーサーおよび／または毛管現象によって固形支持体の
第３部分へ流入するトレーサーを測定し、この第２およ
び／または第３部分において検出されたトレーサーの量
を“標準曲線”と比較し、試量中の被分析体の量を測定
することによって、定量的アッセイを行うことができ
る。従ってアッセイに際しトレーサーおよび／または被
分析体の測定は定性的または定量的いずれも可能であ
る。
【００１７】サンドイッチアッセイ形式の場合、トレー
サーは固形支持体の第１部分と異なる、固形支持体のト
レーサー部分に支持されることが好ましい。トレーサー
のリガンド部分に被分析体が結合し、固形支持体の第２
部分にある結合剤は被分析体に特異的である。固形支持
体の第１部分に試料を含有する被分析体を接触させ、固
形支持体のトレーサー部分を湿潤させ、トレーサーおよ
び被分析体の双方を支持体の第２部分に支持された結合
剤へ毛管現象によって流動させる。被分析体に結合した
トレーサーの量は試料中の被分析体の量に正比例し、被
分析体に結合したトレーサーおよび結合していないトレ
ーサーは毛管現象によって固形支持体の第２部分へ流入
する。固形支持体の第２部分において被分析体は被分析
体に特異的な固定化結合剤に結合する。結合していない
トレーサー（固定化結合剤に結合した被分析体に結合し
ていないトレーサー）は毛管現象によって固形支持体の
第３部分へ流入する。固形支持体の第３部分にあるトレ
ーサーを試料中の被分析体の存在および／または量の尺
度として検出することができる。
【００１８】“有”または“無”型のサンドイッチアッ
セイ形式の場合、固形支持体の第１部分に用いられるト
レーサーの量、および固形支持体の第２部分にある結合
剤の量は、検出可能な量の被分析体が存在する場合には
本質的に検出可能な量のトレーサーが固形支持体の第３
部分へ流入しないものである。
【００１９】サンドイッチアッセイ形式の場合、固形支
持体の第２部分に用いられる結合剤の量は、試料中に存
在すると思われる被分析体が本質的にすべて第２部分の
結合剤に結合する量である。
【００２０】アッセイに用いられる固形支持体は試料か
ら被分析体を吸収することができ、かつ湿潤した際被分
析体およびトレーサーを毛管作用によって固形支持体の
第１部分から第２部分を通って第３部分へ流動させるこ
とができるものである。さらに固形支持体はトレーサー
および結合剤を支持しうるものである。適切な固形支持
体の代表例としてはガラス繊維、セルロース、ナイロ
ン、架橋デキストラン、各種のクロマトグラフィー用
紙、ニトロセルロースなどが挙げられる。特に好ましい
材料はニトロセルロースである。
【００２１】固形支持体は好ましくはストリップの形状
をもち、第２および第３部分はストリップの同一平面上
に、物質が毛管作用により第１帯域から第２帯域を通っ
て第３帯域へ流入しうる様式で配列されている。好まし
い形状はストリップ状であるが、その形状および形式が
前記の各種機能を実施する別個の部分を形成しうる限
り、他の多種多様な形状または形式のいずれをも採用し
うる。
【００２２】前記のアッセイに用いられるトレーサーは
リガンド部分、およびこのリガンド部分に結合した検出
可能な標識部分からなる。検出可能な標識部分の検出可
能な標識は多種多様な検出可能な標識のいずれであって
もよいが、本発明の好ましい形態においては検出可能な
標識は固形支持体の第２および／または第３部分におい
て色の変化を生じるものであり、これは可視的な色の変
化であるか、または色の変化を検出するのに計測器を必
要とするものである。好ましい形態によれば、用いられ
る標識は固形支持体の第２および／または第３部分にお
いて、計測器を用いずに見ることができる色の変化を生
じる。たとえばこの色の変化は、検出可能な標識として
酵素を用い、固形支持体の第３部分にこの酵素の基質を
施し、この基質が酵素と接触した際に可視的な検出可能
な色の変化を生じることにより得られる。あるいは、検
出可能な標識が基質であり、固形支持体の第３部分にそ
の酵素が施され、これにより第３部分において酵素が基
質標識と接触することによって検出可能な色の変化が生
じるものであってもよい。他の検出可能な標識の代表例
（色の変化を検出するために計測器を必要としてもよ
く、必要としなくてもよい）としては、各種の色原体、
たとえば蛍光性物質、吸収性色素などが挙げられる。以
下に競合アッセイ法に示されるように、好ましい標識部
分は検出可能なマーカーを含む小胞であり、検出可能な
マーカーは可視である。
【００２３】トレーサーのリガンド部分はアッセイ形式
に依存する。アッセイが競合アッセイである場合、トレ
ーサーのリガンド部分は被分析体またはその適宜な同族
体である。適宜な同族体とは、そのリガンドの同族体に
も被分析体の結合剤が特異的に結合することを意味す
る。アッセイ形式がサンドイッチ型のアッセイである場
合、トレーサーのリガンド部分は被分析体または抗体
（被分析体がこれに特異的に結合する）が特異的に結合
するリガンドである。
【００２４】アッセイに用いられる結合剤は少なくとも
被分析体に結合するものである。前記のようにアッセイ
形式が競合型のアッセイ形式である場合、結合剤はトレ
ーサーのリガンド部分にも結合する。
【００２５】当技術分野で一般に知られているように、
被分析体が抗原またはハプテンである場合には結合剤は
天然の結合剤または被分析体に特異的な抗体（多クロー
ン抗体および／または単クローン抗体）のいずれであっ
てもよい。被分析体が抗体である場合には、結合剤はそ
の抗体に特異的な抗原、またはその被分析抗体に特異的
に結合する抗体のいずれであってもよい。
【００２６】結合剤は結合剤を固定化する様式、たとえ
ば吸着、共有結合などにより固形支持体に支持させるこ
とができる。結合剤を固形支持体に固定化する方法は当
技術分野で一般に知られている。
【００２７】固形支持体の第１部分に支持されるトレー
サーは、第１部分が湿潤した場合、トレーサーが毛管作
用により流動する様式で支持される。たとえばトレーサ
ーは支持体の第１部分に吸収されていてもよい。
【００２８】本発明の特に好ましい形態によれば、競合
アッセイ法の場合、トレーサーは小胞に結合したリガン
ドからなり、この小胞は検出可能なマーカーを含み、ト
レーサーは固形支持体に支持されている。本発明者はこ
の種のトレーサーを前記の種類の固形支持体に支持させ
るのが可能であること、この種のトレーサーは固形支持
体が被分析体を含有するかまたは含有すると推定される
試料で湿潤した場合に毛管現象によって流動することを
見出した。
【００２９】使用される脂質小胞（リポソーム）は多種
多様な脂質から調製することができ、これにはリン脂
質、糖脂質が含まれ、代表例としてはレシチン、スフィ
ンゴミエリン、ジパルミトイルレシチン、ジステアロイ
ルホスファチジルコリンなどが挙げられる。リポソーム
を調製するために用いられる両親媒性脂質は一般に親水
基、たとえばホスファト基、カルボキシル基、スルファ
ト基またはアミノ基、ならびに疎水基、たとえば飽和お
よび不飽和脂肪族炭化水素残基、および１個または２個
以上の芳香族または脂環式基により置換された脂肪族炭
化水素残基を含む。リポソームを調製するための壁形成
化合物にはさらにステロイド成分、たとえばコレステロ
ール、コレスタノールなどが含まれる。リポソームを調
製するための化合物は一般に当技術分野で知られてお
り、本発明を完全に理解するためにこれに関してさらに
詳述する必要はないと思われる。
【００３０】リポソームは当技術分野で一般に用いられ
る方法により調製できる。たとえばリポソームを逆相蒸
発法により調製することができ、この場合リポソームを
調製する際に用いられる化合物１種または２種以上をま
ず有機相に溶解し、次いで水相を添加し、均質なエマル
ジョンを形成させる。エマルジョンを調製したのち有機
溶剤を蒸発させてゲル様物質となし、これを水性媒質中
で撹拌または分散させることによってリポソームに変え
る。
【００３１】リポソームの製法はたとえば米国特許第
４，２４１，０４６号、第４，３４２，８２６号および
国際特許出願公開ｗｏ８０−０１５１５号明細書に記載
されている。
【００３２】ある物質をリポソームに封入したい場合、
その物質をリポソームが形成される水溶液に含有させる
ことによって、リポソームにその物質を封入させること
ができる。あるいは米国特許出願第６５９，２００号明
細書（１９８４年９月１３日出願）に記載の方法によ
り、あらかじめ形成された空のリポソーム（封入すべき
物質を含まないもの）にその物質を封入することもでき
る。
【００３３】リポソームは米国特許第４，５２２，８０
３号明細書に記載の方法によっても調製することができ
る。
【００３４】リポソーム内に閉込められ、または封入さ
れる物質（その物質はリポソームの水性コンパートメン
ト内または二重膜内にある）は検出可能なマーカー、た
とえば色素、放射性標識、蛍光物質、化学発光物質、電
子スピン共鳴物質など；検出可能なマーカーの基質など
である。あるいはリポソーム内にマーカーを封入するの
ではなく、リポソームを検出可能なマーカーで誘導体化
することもできる。
【００３５】リポソームはトレーサーを形成するための
リガンドで誘導体化される。当技術分野で知られている
方法、たとえば共有結合、誘導体化または活性化などに
よりリポソームをリガンドで誘導体化することができ
る。リポソームをリガンドで誘導体化する場合、リポソ
ームの形成に用いられる化合物１種または２種以上をリ
ポソームの形成前にリガンドで誘導体化するか、または
リポソームの形成後にリポソームをリガンドで誘導体化
することができる。リポソームをリガンドで誘導体化す
る方法、および誘導体化リポソームの調製に適したカッ
プリング剤などは当技術分野で知られており、本発明を
完全に理解するためにこれに関してさらに詳述する必要
はないと思われる。
【００３６】検出可能なマーカー部分が競合アッセイ法
に用いるマーカーを含むリポソームからなる好ましいト
レーサーを使用する場合、アッセイは各種トレーサー一
般に関して先に述べたと同様に行われ、ただしトレーサ
ーがトレーサーの検出可能なマーカー部分としてリポソ
ームを含む。
【００３７】特に好ましい形態においては、アッセイに
用いられるトレーサーは粒状の可視標識に結合したリガ
ンドである。粒状標識は金属もしくは合金（たとえばコ
ロイド状の金）またはサック、特に可視色素を含むリポ
ソームである。好ましくはサックに含まれるマーカーは
サックを溶解しなくても見える色素またはある種の他の
物質である。
【００３８】リガンドおよび粒状標識からなるトレーサ
ーは、リガンドを疎水性色素もしくは顔料の、または色
素もしくは顔料でコーチングしたポリマー核の水性分散
液で標識することによっても調製される。この種の標識
は米国特許第４，３７３，９３２号明細書（１９８３年
２月１５日発行）に、より詳細に記載されている。この
特許に従って調製されたトレーサーも本発明におけるト
レーサーとして用いられる。
【００３９】上記特許明細書に示されるように、標識と
して用いられる着色有機化合物は疎水性ゾル状であり、
この疎水性有機色素または顔料は水に不溶性であるか、
またはごく限られた程度に可溶性であるにすぎない。
【００４０】可視粒状標識は可視ポリマー粒子、たとえ
ば好ましくは球状の着色ポリスチレン粒子であってもよ
い。
【００４１】トレーサーが可視である本発明のアッセイ
法に用いられるトレーサーの調製に使用できる他の粒状
標識の代表例としては下記のものが挙げられる。フェリ
チン、フィコエリトリンその他のフィコビリ蛋白質；析
出または不溶性金属または合金；菌類、藻類または細菌
の色素または誘導体、たとえば細菌クロロフィル；植物
材料または誘導体金属ゾルなど。この形態の場合、少な
くとも結合剤を含む物品部分は、この部分に結合したト
レーサーが可視である量の結合剤を支持しうる表面積を
もつ材料から形成される。一般にこの表面積は少なくと
も１μｇ／ｃｍ2の濃度、きわめて一般的には少なくと
も１０μｇ／ｃｍ2の濃度の結合剤を支持しうる。特に
好ましい材料はニトロセルロースである。これらの材料
およびトレーサーは米国特許出願第５７９，６６７号明
細書（１９８４年２月１４日出願）に記載されている。
これをここに参考として引用する。
【００４２】本発明をさらに添付の図面を参照しながら
説明する。
【００４３】図面は本発明によるディップスティックの
略図である。
【００４４】図面にはトレーサーが支持される第１部分
Ａ；結合剤が支持されている第２部分Ｂ；およびトレー
サーが測定される可能性のある第３部分Ｄを含むストリ
ップが示されている。特に示されるように、部分Ｃが部
分ＢとＤの間にあり、部分ＢとＤの間に間隔を与えてい
る。これによりトレーサー測定部分が結合剤を含む部分
から一定距離分離している。
【００４５】酵素を検出可能な標識として用いる競合ア
ッセイ形式の場合、部分Ａは酵素で標識されたリガンド
を含み、リガンド部分は被分析体またはその適宜な同族
体である。部分Ｂは被分析体およびトレーサーのリガン
ド部分に特異的な結合剤を含み；部分Ｄは上記酵素と相
互作用して色の変化を生じる、酵素基質を含むであろ
う。
【００４６】使用する際には、ストリップ１０の部分Ａ
を被分析体が含まれる試料と接触させる。これにより部
分Ａは試料で湿潤するであろう。部分Ａのトレーサーお
よび試料は毛管現象により部分Ｂへ輸送され、ここでト
レーサーと被分析体は結合剤上の結合部位に対し競合す
る。非結合トレーサーおよび非結合被分析体は毛管現象
によって部分Ｃを通過して部分Ｄへ移動し、ここでトレ
ーサーがある場合には部分Ｄの基質と相互作用して色の
変化を生じる。前記のように、アッセイ法は“有−無”
アッセイ法または定量的アッセイ法のいずれであっても
よく、部分Ｄにおけるトレーサーの検出は採用するアッ
セイ法に依存する。
【００４７】トレーサーがその検出のために付加的な物
質を必要としない検出可能な標識を含む場合、部分Ｄは
付加的な物質を必要としないであろう。すなわち部分Ｄ
もブランクであろう。たとえばトレーサーが検出可能な
標識として色素を含むリポソームを含有する場合、トレ
ーサーは部分Ｄに付加的な物質を支持させることなく測
定できる。あるいはたとえば検出可能な標識をリポソー
ムから放出する必要がある場合、部分Ｄは適切な溶解剤
（ｌｙｓｉｎｇ ａｇｅｎｔ）、たとえばリポソームを
溶解する酵素または界面活性剤を含み、部分Ｄにおいて
トレーサーの検出のためにリポソームから標識を放出さ
せる。
【００４８】さらに、トレーサーを部分Ｃにおいて測定
することも可能であり、その際部分Ｄにおいてはトレー
サーの測定を行うか、または行わない。たとえば標識が
酵素である場合には、部分Ｃに基質を添加することがで
きる。
【００４９】上記物品はディップスティックとして使用
することができる。あるいは試料を部分Ａに施すことも
できる。従って物品は水平または垂直いずれの向きでも
使用できる。
【００５０】本発明は多種多様な被分析体、たとえば下
記のものを検出および／または測定するために利用でき
る。薬物；治療用薬物および乱用薬物を含む；ホルモ
ン、ビタミン、蛋白質：あらゆる種類の抗体、ペプチド
を含む；ステロイド；細菌；菌類；ウイルス；寄生虫；
細菌、菌類、ウイルスまたは寄生虫の成分または産物；
あらゆる種類のアレルゲン；正常細胞または悪性細胞の
産物または成分など。たとえば特にＴ4；Ｔ3；ジゴキシ
ン；ＨＣＧ；インシュリン；テオフィリン；黄体形成ホ
ルモン；各種疾患状態の原因となる、またはそれらに伴
う生物、たとえば化膿性連鎖球菌（ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｙｒｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群）、単純ヘルペ
スＩおよびII、サイトメガロウィルス、クラミジア属菌
（ｃｈｌａｍｙｄｉａｅ）、風疹抗体などが挙げられ
る。
【００５１】
【実施例】本発明をさらに以下の実施例により説明す
る。
【００５２】［実施例］ポリスチレンの０．５×８ｃｍ
のストリップにまずスコッチ（Ｓｃｏｔｅｈ、登録商
標）＃９６９接着剤転写テープ（スリーエム、ミネソタ
州セントポール５５１４４）を貼付することによりディ
ップスティックを作成した。０．５×０．５ｃｍの正方
形の細孔５μｍニトロセルロース（エス−アンド・エ
ス、ニューハンプシャー州キーン）からなる帯域Ｂにア
フィニテイ精製した家兎抗Ａ群連鎖球菌抗原３μｌをス
ポットし、次いで３％ウシ血清アルブミンでブロックし
た。乾燥後、これをディップスティックのテープ貼付面
に、スティックの下から約１ｃｍのところに施した。
０．５×６．５ｃｍの濾紙ストリップ（ワットマン、３
ｍｍ）をニトロセルロースのすぐ上方に、これと接触さ
せて施した（帯域ＣおよびＤで示される位置）。次いで
乾燥セファデックスＧ５０ファイングレード（ファルマ
シア）からなる帯域Ａを施す。
【００５３】スルホ−ローダミン色素を充填した検出用
リポソームはオコンネルら（クリニ．ケミ．（Ｃｌｉ
ｎ．Ｃｈｅｍ．）３１：１４２４［１９８５］）に概説
された方法により調製された。これらをアフィニテイ精
製した家兎抗Ａ群連鎖球菌抗原に共有結合させた。
【００５４】検出用リポソームを下から０．５ｃｍの帯
域Ａにスポットし（２μｌ）、風乾した。リポソームは
グリセリン２％、ジメチルスルホキシド０．０５％、Ｅ
ＤＴＡ ２０ｍＭを含有する０．０５Ｍトリス緩衝液
（ｐＨ６．８）中にある。
【００５５】Ａ群連鎖球菌は培養プレートから採取さ
れ、食塩液（０．９％ＮａＣｌ）で洗浄され、菌数１×
１０9個／ｍｌに調整された。細菌１×１０8個を含むア
リコート（０．１ｍｌ）をＡ群炭水化物抗原を露出させ
る微量亜硝酸抽出法で処理した。この方法は０．１Ｍ・
ＨＣｌ ０．３ｍｌを４Ｍ・ＮａＮＯ2 ４０μｌと混
合し、これを連鎖球菌に添加し、３分後に１Ｍトリス塩
基４０μｌで中和することよりなる。抽出およびディッ
プスティック分析を容易にするためにＨＣｌおよび後続
の希釈液は０．１％ツイーン−２０非イオン界面活性剤
を含有する。
【００５６】抽出された抗原を用いて菌数８×１０6〜
１．２５×１０5個／ｍｌの希釈系列を調製した。これ
ら希釈液のアリコート（０．５ｍｌ）を１２×７５ｍｍ
の試験管に入れ、ディップスティックを各試験管内の液
体に入れた。抽出された抗原を含有する液体がスティッ
クに吸上げられるのに伴って、これは捕捉抗体のスポッ
トを通って検出用リポソームを運搬する。抗原が存在す
ると、これが捕捉抗体スポットに結合し、若干のリポソ
ームも結合し、その結果帯域Ｂに赤色のスポットが現わ
れる。残りのリポソームおよび抗原溶液は通過して帯域
Ｄへ入る。
【００５７】アッセイ結果は帯域Ｂに赤色のスポットを
生じた最小菌体濃度を観察することにより“読取る”こ
とができる。この例の結果を次表に示す。これは終末点
５×１０5個／ｍｌであることを示す。これはＡ群スト
レプトコッカス・ファリンギチス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ ｐｈａｒｙｎｇｉｔｉｓ）の直接咽喉スワブ
診断に必要な感度に近接する。
【００５８】
【表１】 （＋）＝抗原（赤色スポット）陽性の指示 （−）＝抗原（赤色スポット）陰性の指示
【００５９】
【発明の効果】本発明はアッセイを行うのに容易に使用
できる物品および方法を提供するという点で有利であ
る。この物品および方法は、トレーサーが物品に含まれ
るのでトレーサーの添加を必要としない。さらにこの物
品および方法は迅速アッセイ法を提供しうる。
【００６０】これらおよび他の利点はここに教示される
ものから当業者には自明であろう。
【００６１】以上の教示からみて本発明につき多数の改
良および変法が可能であり、従って本発明は個々に記述
されたもの以外の形態で実施することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明の物品であるディップスティック１０
の略図であり、各記号は下記のものを表わす。 Ａ：第１部分（トレーサーを含む） Ｂ：第２部分（結合剤を含む） Ｃ：分離帯域 Ｄ：第３部分（測定部分）
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (73)特許権者 595117091 １ ＢＥＣＴＯＮ ＤＲＩＶＥ， ＦＲ ＡＮＫＬＩＮ ＬＡＫＥＳ， ＮＥＷ ＪＥＲＳＥＹ 07417−1880， ＵＮＩ ＴＥＤ ＳＴＡＴＥＳ ＯＦ ＡＭＥＲ ＩＣＡ (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 33/543

Claims (13)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】ａ）同一平面上に存在し互いに毛管流によ
    り連絡可能である第１部分および第２部分を含む、トレ
    ーサーおよび結合剤を支持するための固体支持体である
    試験ストリップ； ｂ）その中に移動可能なように支持されたトレーサーを
    含む上記第１部分であって、ここで該トレーサーは被分
    析体に特異的な、小胞マーカーを除く不溶性粒状マーカ
    ーに結合したリガンドを含み、そして試料添加部位であ
    る上記第１部分；そして ｃ）その中に被分析体に特異的な固定化された結合剤を
    含む上記第２部分であって、ここで該結合剤は第２部分
    中で結合したトレーサーが可視化される量で存在し、そ
    して上記粒状マーカーの存否を可視的に検出する部位で
    ある上記第２部分；を含む、液体試料中の被分析体の存
    否を測定するためのアッセイ装置。
  2. 【請求項２】不溶性粒状マーカーが着色重合体ビーズ、
    金属、合金および重合染料粒子からなる群から選択され
    る、請求項１記載の装置。
  3. 【請求項３】粒状マーカーが着色重合体ビーズである、
    請求項２記載の装置。
  4. 【請求項４】被分析体が抗原であり、かつ上記リガンド
    および結合剤がその抗体である、請求項１記載の装置。
  5. 【請求項５】上記リガンドおよび結合剤が抗原またはそ
    の類似物であり、かつ被分析体がその抗体である、請求
    項１記載の装置。
  6. 【請求項６】上記結合剤がリガンドに特異的である、請
    求項１記載の装置。
  7. 【請求項７】上記第１部分と第２部分と同一平面上に第
    ３部分を含み、上記すべての部分が互いに毛管流により
    連絡可能である、請求項６記載の装置。
  8. 【請求項８】検出可能な粒状マーカーが着色重合体ビー
    ズ、金属、合金および重合染料粒子からなる群から選択
    される、請求項６記載の装置。
  9. 【請求項９】粒状マーカーが着色重合体ビーズである、
    請求項６記載の装置。
  10. 【請求項１０】ビーズがポリスチレンビーズである、請
    求項９記載の装置。
  11. 【請求項１１】被分析体が抗原である、請求項９記載の
    装置。
  12. 【請求項１２】被分析体が抗体である、請求項６記載の
    装置。
  13. 【請求項１３】ａ）請求項１記載の装置の第１部分に液
    体試料を添加し； ｂ）上記液体試料がトレーサーと混合されるのに十分で
    あり、かつ、該トレーサー−被分析体混合物が請求項１
    記載の装置の第２部分に流れるのに十分な時間放置し；
    そして ｃ）上記第２部分中の上記小胞マーカーを除く粒状マー
    カーの存否を可視的に測定することにより結果を読み取
    る、工程からなる、液体試料中の被分析体の存否を測定
    する一段階法。
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