JP2886846B2 - 1,5−アンヒドログルシトール脱水素酵素及びその製造法 - Google Patents
1,5−アンヒドログルシトール脱水素酵素及びその製造法Info
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Landscapes
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Description
有用な1,5-アンヒドログルシトールの測定用試薬として
有用な新規な1,5-アンヒドログルシトール脱水素酵素及
びその製造法に関する。
「1,5-AG」という)は、ヒトの血清、血漿、尿等の体液
中に存在し、ある種の疾患、特に糖尿病において体液中
の量が大きく変動する。このため、体液中における1,5-
AGの測定値は、有用な診断指標となり、近年臨床におい
て重要な検査項目となりつつある。
オキシダーゼを作用させて、生成する過酸化水素をパー
オキシダーゼ発色系にて比色定量する方法(特公平5-41
238号公報参照)が主流となり、近年、汎用の自動分析
装置に応用されている。
平3-24200 号公報参照)を作用させ、酸素の消費量や電
子受容体の還元体もしくは酸化された1,5-AG反応生成物
を測定する方法などが知られている。
来の被検体、例えば血清中の1,5-AGの濃度レベルは低
く、糖尿病患者においては更に低値化することから、ピ
ラノースオキシダーゼを用いたパーオキシダーゼ発色系
では、感度の面で十分なものとはいい難かった。
を用いて、その還元体を測定する方法においても、電子
受容体である2,6-ジクロロフェノールインドフェノー
ル、フェリシアン化合物等の還元体自身が不安定である
ことや、感度の面で十分なものとはいえず、多数検体処
理のための汎用の自動分析装置への応用が困難であるこ
となどの問題点があった。
異的に作用するとともに、保存安定性に優れた、汎用の
自動分析装置用の定量試薬に応用可能な、新規な1,5-AG
脱水素酵素及びその製造法を提供することにある。
め、本発明者らは、1,5-AGの分析に利用できる反応系に
ついて検討すると共に、それらに利用できる酵素につい
て探索を行った。その結果、アグロバクテリウム(Agro
bacterium )属に属する微生物の膜画分中に、1,5-AGを
特異的に酸化する新規な酵素(以下「1,5-AG脱水素酵
素」という)が存在することを見出し、この1,5-AG脱水
素酵素を1,5-AGに作用させると、1,5-AGの2位の水酸基
を酸化すると共に2,6-ジクロロフェノールインドフェノ
ールなどの電子受容体を還元させる反応を触媒するこ
と、及び当該反応を還元性発色剤を用いて行うと電子キ
ャリアーの非存在下においても1,5-AGの2位水酸基を酸
化すると共に直接還元性発色剤を還元し発色物質を生成
させることを見出し、既に特許出願を行った(特願平8
−323969号)。
テリウム・ツメファシエンスIF013532、アグロバクテリ
ウム・ツメファシエンスIF013533などの公知菌株を培養
して1,5-AG脱水素酵素を製造しており、この公知菌株由
来の1,5-AG脱水素酵素は、保存安定性の点でなおかつ満
足できるものではなかった。
に優れた1,5-AG脱水素酵素を得るべく、1,5-AG脱水素酵
素生産能を有する微生物を広く検索した結果、本発明者
らによって土壌中より新たに単離されたアグロバクテリ
ウム・ツメファシエンスに属する新規菌株が、保存安定
性に非常に優れた1,5-AG脱水素酵素を生産することを見
出し、本発明を完成するに至った。
性質を有する1,5-AG脱水素酵素を提供するものである。
いて、1,5-AGに特異的に作用して2位の水酸基を酸化す
るとともに、還元性発色剤を直接還元する反応を触媒す
る。
L-ソルボースに弱く作用する。また、D-グルコースに若
干作用する。
ある。
である。
にある。
上安定である。
%ニトロテトラゾリウムブルー 0.3ml、2重量%非イオ
ン性界面活性剤 0.3ml、50mM 1,5-アンヒドログルシト
ール水溶液 0.3ml、水0.45ml、及び酵素溶液0.15mlより
成る全量 3.0mlの酵素含有液を37℃で反応させ、 540nm
における吸光度変化 (△mOD/min )を測定する。この条
件下で生成するホルマザン色素の分子吸光係数を16.7×
103 とし、1分間に1μmol のホルマザンを生成する酵
素量を1単位 (unit) として、1,5-アンヒドログルシト
ール脱水素酵素の活性を下記数2に従って求める。
ルインドフェノール、フェリシアン化合物等のほか、還
元性発色剤も利用できる。また、NAD 、NADP等の補酵素
や溶存酸素は利用できない。
ルアミド電気泳動法による分子量は、約55,000である。
緩衝液(pH7.0 )中に0.1u/ml の濃度で溶解させ、4℃
の条件で14日間保存した後の残存活性が、90%以上であ
る。
ウム属に属し、1,5-AG脱水素酵素生産能を有する微生物
により生産されるものであることが好ましい。
属に属し、前記の理化学的性質を有する1,5-AG脱水素酵
素生産能を有する微生物を栄養培地に培養し、膜画分中
に1,5-AG脱水素酵素を生成蓄積せしめ、これを採取する
ことを特徴とする1,5-AG脱水素酵素の製造法を提供する
ものである。
能を有する微生物としては、アグロバクテリウム・ツメ
ファシエンスNT1130株(Agrobacterium tumefaciens NT
1130、FERM BP-5997株)を用いることが好ましい。
において、1,5-AGに特異的に作用して2位の水酸基を酸
化するとともに、直接還元性発色剤を還元する反応を触
媒する1,5-AG脱水素酵素を提供することができる。そし
て、この酵素の作用により直接生成される還元された発
色物質を測定することにより、試料中の1,5-AGを簡便か
つ精度良く測定することができる。また、この1,5-AG脱
水素酵素は、保存安定性に優れているため、定量試薬と
して製品化する上で極めて有利である。
する微生物が生産する酵素としては、Hayanoら(ジャー
ナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、 242 巻、3
665-3692、 1967年)によって、細胞質画分中にグルコシ
ド-3- デヒドロゲナーゼが存在することが確認されてい
る。一方、Takeuchiら(ジャーナル・オブ・バイオケミ
ストリー、 100 巻、1049-1055、1986年)によって、1,5-
AGがグルコシド-3- デヒドロゲナーゼの基質となり得る
ことが報告されている。
うに、アグロバクテリウム(Agrobacterium )属に属す
る微生物の膜画分中に、電子キャリアーの非存在下で1,
5-AGを酸化するとともに、直接還元性発色剤を還元する
代謝酵素を見出した(特願平8−323969号)。こ
の酵素の作用は、下記化学式1に示す通りである。
robacterium )属に属する微生物の膜画分中に見出され
たものであり、上記化学式1に示す作用を有している。
しかし、本発明の酵素は、上記特願平8−323969
号に記載された酵素に比べて保存安定性が顕著に優れて
いるという点で相違している。
しては、アグロバクテリウム属に属し、前記の理化学的
性質を有する、保存安定性に優れた1,5-AG脱水素酵素を
生産するものであればいずれの菌株でもよいが、好適な
例としては、本発明者らによって土壌中から新たに単離
されたアグロバクテリウム・ツメファシエンスNT1130株
(Agrobacterium tumefaciens NT1130、FERM BP-5997
株)が挙げられる。この微生物の菌学的性質は以下に示
す通りである。
5 )×(1.0 〜3.0 )μmである。 2)胞子の有無:無 3)運動性:運動性有り、周鞭毛を有する。 4)グラム染色性:陰性
ンノース、アラビノース、フルクトース、マルトース、
ラムノース、マンニトール、サッカロースから酸を生成
し、ガスは発生しない。
リウム属(Agrobacterium )に分類されると考えられ
る。通常、微生物の同定の際には各微生物の分類学的性
質がまとめられている「バージーズ・マニュアル・オブ
・ディターミネーティブ・バクテオロジー」と対比さ
せ、微生物の同定が行われるが、本菌が属すると考えら
れるアグロバクテリウム属に関しては、最近、16Sr
RNAの遺伝子配列による系統的な分類が試みられ(In
ternational Journal of Bacteriology vol.43、1993、
p.694-702、及びvol.44、No.2、1994、p.373-374 参
照)、その結果に基づいて分類基準が変更になり再編成
された。その結果、種の統合や菌株の分類変更が加えら
れ、「バージーズ・マニュアル・オブ・ディターミネー
ティブ・バクテオロジー」との整合性が保たれなくなっ
た。
の遺伝子配列による系統的な分類を試みた。方法として
は、本菌の16SrRNAの全遺伝子配列を求め、遺伝
子のデータベース(GenBank, EMBL 及びDDBJ)に登録公
開されている微生物の遺伝子配列との相同性を検索した
結果、アグロバクテリウム・ツメファシエンス(Agroba
cterium tumefaciens )との相同性が99.4%と有意に一
致していた。この結果から、本菌株は、アグロバクテリ
ウム属ツメファシエンス種に属する細菌であると同定
し、本菌株をアグロバクテリウム・ツメファシエンスNT
1130株(Agrobacterium tumefaciens NT1130)と命名し
た。本菌は、通商産業省工業技術院生命工学工業技術研
究所に平成9年6月27日に寄託され、その寄託番号は
FERM BP-5997である。
菌株を栄養培地に培養し、膜画分中に1,5-AG脱水素酵素
を生成蓄積せしめ、これを採取することにより製造する
ことができる。上記栄養培地としては、炭素源、無機窒
素源及び無機塩を含む培地が用いられる。炭素源として
は基本的に糖類を利用し、L-ソルボース、グルコース等
を酵素誘導するものであればいずれも使用できる。無機
窒素源としては硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、
リン酸アンモニウム等が、無機塩としてはナトリウム、
カリウム、マグネシウム、鉄、マンガン等の塩類が使用
できる。
好気的条件下で行うのがよく、pH6〜8、25〜35℃で行
うのが好ましい。培養期間は1〜7 日間、通常は2〜
4日間で完了する。上記方法で培養することにより、主
に菌体の膜画分中に1,5-AG脱水素酵素が生成蓄積され
る。
るには、適当な緩衝液中で菌体をダイノミル、超音波処
理等により破壊し、その処理液から膜画分を超遠心等に
より分離する。次いでトリトンX-100 等の非イオン界面
活性剤により膜画分から酵素を遊離させ、不溶分を遠心
分離により除去すると、1,5-AG脱水素酵素含有抽出液を
得ることができる。精製酵素は、この抽出液を、疎水ク
ロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ヒ
ドロキシアパタイト、ゲル濾過等の酵素の精製に一般的
に使われている技術を適宜組み合せて精製することによ
り得られる。
ツメファシエンスNT1130株を用いて得られた本発明の1,
5-AG脱水素酵素の性質を示す。なお、以下における1,5-
AG脱水素酵素の活性は、前述した力価の測定方法に従っ
て測定した。
ール及び2.5mM 1,5-AGを含有する100mM トリス・塩酸緩
衝液 (pH9.0)に本発明酵素を添加し、37℃で反応させ、
経時的に反応液中の生成物と反応のモルバランスを表1
に示す条件で高速液体クロマトグラフィー(HPLC)にて
分析した。
ンタイム10.0分の1,5-AGのピークが減少し、新たにリテ
ンションタイム9.6 分の位置に反応物のピークが現れ
た。この反応のモルバランスは一致していた。また、1,
5-AGの3 位の水酸基を酸化する作用を持つグルコシド-3
- デヒドロゲナーゼ(EC1.1.99.13) を同様の条件で反応
させ、HPLCで分析した結果、1,5-AGのピーク減少ととも
に、新たにリテンションタイム10.8分の位置に反応物の
ピークが現れた。一方、1,5-AGの2 位の水酸基を酸化す
る作用を持つピラノースオキシダーゼ(EC1.1.3.10)を、
2.5mM 1,5-AGを含有する40mMホウ酸緩衝液 (pH7.5)に添
加し、37℃で反応させた結果、1,5-AGのピーク減少とと
もに、新たにリテンションタイム9.6 分の位置に反応物
のピークが現れた。これらの結果において、1,5-AGに本
発明酵素を作用させた場合の反応生成物とピラノースオ
キシダーゼを作用させた場合の反応生成物のリテンショ
ンタイムが一致していることから、本発明酵素による1,
5-AGの酸化部位は2 位の水酸基であることが分かる。
において、1,5-AGの代わりに各種糖溶液(いずれも終濃
度5mM )を用いた場合の相対反応性(基質特異性)を表
2に示す。本発明酵素は1,5-AGに対して強く、Lーソルボ
ースに対しては弱く作用し、D-グルコースに若干作用し
た。
の酵素活性測定法中における緩衝液の代わりに、種々の
pHを有するクエン酸緩衝液、リン酸カリウム緩衝液、ト
リスー塩酸緩衝液及びグリシン緩衝液を用いた場合の酵
素活性を測定した。この結果を図1に示す。図1より、
本発明酵素の至適pHは8.0 〜9.0 付近にあることがわか
る。
酸緩衝液、リン酸カリウム緩衝液、トリスー塩酸緩衝液
及びグリシン緩衝液(各緩衝液とも200mM )に本発明酵
素を添加し、37℃で60分間処理後、残存酵素活性を測定
した。この結果を図2に示す。図2より、本発明酵素の
安定pH範囲は、6.0 〜9.0 であることが分かる。
述の酵素活性測定法における組成で、種々の温度で10分
間反応させた。この結果を図3に示す。図3より、本発
明酵素の至適温度は35〜45℃付近であることが分かる。
酸カリウム緩衝液に添加し、種々の温度で10分間処理
後、残存酵素活性を測定した。この結果を図4に示す。
図4より、本発明酵素は40℃付近まで90%以上安定であ
ることが分かる。
緩衝液 (pH8.0)中に、本発明酵素とともに種々の電子受
容体を共存させた場合の、各電子受容体での活性を相対
活性で表し、表3に示した。表3より、電子受容体とし
ては、還元性発色剤であるニトロテトラゾリウムブルー
の他に、2,6-ジクロロフェノールインドフェノール及び
フェリシアニド化合物が利用可能であることがわかっ
た。
ルアミド電気泳動法により求めた本発明酵素の分子量
は、約55,000であった。
weaver-Burk )プロットにより、本発明酵素の1,5-AGに
対するKm値を求めた結果、約0.5mM であった。
緩衝液(pH7.0 )中に0.1u/ml の濃度で溶解させ、4℃
の条件で14日間保存し、7日間及び14日間保存後に残存
活性を測定した結果を、図5に示す。
寄託され、分譲可能な公知菌株であるアグロバクテリウ
ム・ツメファシエンスIF013532、アグロバクテリウム・
ツメファシエンスIF013533を用いて、実施例1、2と同
様な方法で1,5-AG脱水素酵素を製造した。そして、これ
らの酵素について、上記と同様に保存安定性を測定した
結果を図5に併せて示す。
ツメファシエンスNT1130株由来の本発明の酵素の結果を
示し、◆−◆は、アグロバクテリウム・ツメファシエン
スIF013532由来の酵素の結果を示し、▲−▲は、アグロ
バクテリウム・ツメファシエンスIF013533由来の酵素の
結果を示す。
ム・ツメファシエンスNT1130株由来の本発明の1,5-AG脱
水素酵素は、14日間保存した後の残存活性が90%以上で
あって、優れた保存安定性を示す。これに対し、アグロ
バクテリウム・ツメファシエンスIF013532由来の1,5-AG
脱水素酵素及びアグロバクテリウム・ツメファシエンス
IF013533由来の1,5-AG脱水素酵素は、14日間保存した後
の残存活性がいずれも40%以下であり、保存安定性が著
しく劣る。
素酵素を生産するという点で、アグロバクテリウム・ツ
メファシエンスNT1130株は、公知のアグロバクテリウム
・ツメファシエンスと異なっているため、アグロバクテ
リウム・ツメファシエンスに属する新規菌株であると判
断した。
ロバクテリウム・ツメファシエンスIF013532由来の1,5-
AG脱水素酵素、及びアグロバクテリウム・ツメファシエ
ンスIF013533由来の1,5-AG脱水素酵素と比べて、その他
の理化学的性質においては有意差がなかったが、上記保
存安定性において顕著に相違しており、その点で上記公
知菌株由来の1,5-AG脱水素酵素とは明確に区別できるも
のである。
法は、例えば次のような方法で行うことができる。すな
わち、被検体を還元性発色剤の存在下、1,5-AG脱水素酵
素又はこれを含有する酵素製剤とともにインキュベート
し、2-ケト-1,5-AG 及び還元された発色物質を生成せし
め、生成した発色物質量を測定することにより、被検体
中の1,5-AG量を定量することができる。
6-10のリン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液、グッド緩衝
液、ホウ酸緩衝液等、通常使用されるものであればいず
れも使用可能である。
はその塩が挙げられるが、具体的には、ニトロテトラゾ
リウムブルー(以下NTB と略す)、2-(4- ヨードフェニ
ル)-3-(4- ニトロフェニル)-5-フェニル-2H テトラゾリ
ウムクロライド、3-(4,5- ジメチル-2- チアゾリル)-2,
5-ジフェニル-2H テトラゾリウムブロマイド、2-(4ヨー
ドフェニル)-3-(4- ニトロフェニル)-5-(2,4- ジスルホ
フェニル)-2Hテトラゾリウム塩(以下WST-1 と略す)等
が利用でき、その使用濃度は、50〜2000μmol/l、特に1
00 〜1000μmol/l の範囲が好ましい。
は20〜10,000単位/リットル、特に200 〜2,000 単位/
リットルの範囲で使用するのが好ましい。
5-AGを含む血清、血漿、尿等の生体由来の試料が挙げら
れる。
は、上記の如くして反応せしめた後、発色物質特有の吸
収波長において、一定時間後の吸光度あるいは一定時間
内の吸光度変化を測定することにより行うことができ
る。
明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
シエンスNT1130株由来1,5-AG脱水素酵素の取得] リン酸二カリウム2% 、リン酸一カリウム0.5%、塩化カリ
ウム0.75% 、塩化ナトリウム2.5%、塩化アンモニウム1.
25% 、硫酸ナトリウム0.025%、硫酸マグネシウム0.005%
及びLーソルボース0.1%より成る培地(pH7.0)50ml を、20
0ml 容の培養フラスコに添加し、120 ℃で15分間殺菌後
冷却し、アグロバクテリウム・ツメファシエンスNT1130
株(FERM BP-5997)を1白金耳接種し、30℃で3 日間振
とう培養して種培養液とした。得られた種培養液10ml
を、2 リットル培養フラスコ中、上記と同じ組成の液体
培地1000mlに接種し、30℃で3 日間振とう培養した。
た。得られた菌体量は培養液1リットル当たり約2gであ
った。得られた菌体を1g当たり2.5ml の20mMリン酸カリ
ウム緩衝液(pH7.2) に懸濁させ、超音波ホモジナイザー
により、菌体を細断した。得られた破砕液を10,000g で
遠心分離し、その上清を更に100,000gで遠心分離して膜
画分を得た。膜画分1g当たり、10mlの1%トリトンX-10
0 含有20mMリン酸カリウム緩衝液(pH7.2)で懸濁させ、
攪拌しながら一晩膜画分から酵素の可溶化を行った。得
られた可溶化液を再度100,000gで遠心分離して膜残渣を
除き、粗酵素液を得た。この粗酵素液の酵素活性を前述
の測定法に基づいて測定したところ、菌体1g当たり2単
位の活性が得られた。
0 含有 20mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.2) で平衡化し
たハイドロキシアパタイトカラムに通して酵素を吸着さ
せ、同組成の緩衝液で洗浄後、1%トリトンX-100 含有
20mM リン酸カリウム緩衝液(pH7.2) の直線グラジエン
トで溶出し、酵素の活性画分を集めた。更に比活性を上
げるため、再度ハイドロキシアパタイトカラムに通して
上記同様の操作を行い、活性画分を集め限外濾過により
濃縮し、比活性が14単位/mg蛋白質である精製酵素を
得た。該精製標品は、ポリアクリルアミド電気泳動にお
いて単一バンドを示した。
カリウム緩衝液(pH8.0)2.25mlに、各種濃度の1,5-AG溶
液0.15ml及び実施例2により得られた1,5-AG脱水素酵素
溶液0.3ml(0.54単位) を加えた全量3.0ml の反応液を、
37℃で10分間反応させ、540nm の吸光度を測定して検量
線を作成した。図6にこの結果を示した。検量線は、0
〜50μg/mlまで直線となり、還元性発色剤としてNTB を
用いた1,5-AGの定量が可能であることが分かる。
量] 試験例1の還元性発色剤に代えてWST-1 を用い、吸光度
の測定波長を450nm とした以外は、上記と同様の操作に
て測定を行い検量線を作成した。図7にこの結果を示し
た。検量線は、0 〜50μg/mlまで直線となり、還元性発
色剤としてWST-1 を用いた1,5-AGの定量が可能であるこ
とが分かる。
素は、電子キャリアー非存在下において1,5-AGに特異的
に作用し直接還元性発色剤を還元する作用を有する。し
たがって、上記特異酵素の作用により直接生成される還
元された発色物質を測定することにより、試料中の1,5-
AGを簡便かつ精度良く測定することができ、特に糖尿病
等の診断に極めて有用である。また、本発明の1,5-AG脱
水素酵素は、優れた保存安定性を有するため、定量試薬
として製品化する上で極めて有利である。
株を培養して得られた本発明の1,5-AG脱水素酵素の最適
pHを示す図表である。
す図表である。
す図表である。
示す図表である。
リウム・ツメファシエンスIF013532由来の1,5-AG脱水素
酵素、及びアグロバクテリウム・ツメファシエンスIF01
3533由来の1,5-AG脱水素酵素の保存安定性を比較して示
す図表である。
としてNTB とを用いた1,5-AG測定の検量線である。
としてWST-1 とを用いた1,5-AG測定の検量線である。
Claims (4)
- 【請求項1】 次の理化学的性質を有する1,5-アンヒド
ログルシトール脱水素酵素。 (1)作用:電子キャリアー非存在下において、1,5-ア
ンヒドログルシトールに特異的に作用して2位の水酸基
を酸化するとともに、直接還元性発色剤を還元する反応
を触媒する。 (2)基質特異性:1,5-アンヒドログルシトールに強く
作用し、L-ソルボースに弱く作用する。また、D-グルコ
ースに若干作用する。 (3)至適pH:至適pHは8.0 〜9.0 付近にある。 (4) pH 安定性:pH6.0〜9.0 にて安定である。 (5)至適温度:至適温度は35〜45℃付近にある。 (6)温度安定性:40 ℃付近まで90%以上安定であ
る。 (7)力価の測定法 0.2Mリン酸カリウム緩衝液 (pH8.0) 1.5ml、 0.25 重量
%ニトロテトラゾリウムブルー 0.3ml、2重量%非イオ
ン性界面活性剤 0.3ml、50mM 1,5-アンヒドログルシト
ール水溶液 0.3ml、水0.45ml、及び酵素溶液0.15mlより
成る全量 3.0mlの酵素含有液を37℃で反応させ、 540nm
における吸光度変化 (△mOD/min )を測定する。この条
件下で生成するホルマザン色素の分子吸光係数を16.7×
103 とし、1分間に1μmol のホルマザンを生成する酵
素量を1単位 (unit) として、1,5-アンヒドログルシト
ール脱水素酵素の活性を下記数1に従って求める。 【数1】 (8)電子受容体: 2,6-ジクロロフェノールインドフェノール、フェリシア
ン化合物等のほか、還元性発色剤も利用できる。また、
NAD 、NADP等の補酵素や溶存酸素は利用できない。 (9)分子量:ドデシル硫酸−ポリアクリルアミド電気
泳動法による分子量は、約55,000である。 (10)保存安定性:100mM トリス−塩酸緩衝液(pH7.
0 )中に0.1u/ml の濃度で溶解させ、4℃の条件で14日
間保存した後の残存活性が、90%以上である。 - 【請求項2】 アグロバクテリウム属に属し、1,5-アン
ヒドログルシトール脱水素酵素生産能を有する微生物に
より生産されるものである請求項1記載の1,5-アンヒド
ログルシトール脱水素酵素。 - 【請求項3】 アグロバクテリウム属に属し、請求項1
記載の1,5-アンヒドログルシトール脱水素酵素生産能を
有する微生物を栄養培地に培養し、膜画分中に1,5-アン
ヒドログルシトール脱水素酵素を生成蓄積せしめ、これ
を採取することを特徴とする1,5-アンヒドログルシトー
ル脱水素酵素の製造法。 - 【請求項4】 アグロバクテリウム属に属し、請求項1
記載の1,5-アンヒドログルシトール脱水素酵素生産能を
有する微生物が、アグロバクテリウム・ツメファシエン
スNT1130株(Agrobacterium tumefaciens NT1130、FERM
BP-5997株)である請求項3記載の1,5-アンヒドログル
シトール脱水素酵素の製造法。
Priority Applications (6)
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US08/980,792 US5871949A (en) | 1996-12-04 | 1997-12-01 | Method of quantitative assay for 1,5-anhydroglucitol and reagent for quantitative assay |
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EP97309747A EP0846773B1 (en) | 1996-12-04 | 1997-12-03 | Method of quantitative assay for 1,5-anhydroglucitol and reagent for quantitative assay |
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