JP2852669B2 - Liquid chromatography packing for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides and method for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the same - Google Patents
Liquid chromatography packing for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides and method for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the sameInfo
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、芳香族アミノ酸又は芳香族オリゴペプチド
分離用液体クロマトグラフィー充填剤及びそれを用いた
芳香族アミノ酸又は芳香族オリゴペプチドの分離用液体
の分離方法に関する。The present invention relates to a liquid chromatography packing material for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides and a liquid for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the same. And a method for separating the same.
［従来の技術］ 高速液体クロマトグラフィー（HPLC）は、移動相溶媒
を加圧して送液し分析成分をカラムで分離溶出させて検
出器で連続的にモニターするシステムであ。HPLCは、最
近、その応用範囲の広さから多くの化学分野で物質分離
に利用される分析手段となった。特に従来分析が困難で
あった天然有機化合物や生体成分の分析が可能となり、
臨床検査分析、医薬品分析、毒性試験分析等の実用分析
にも取り入れられ、HPLCは急速に発展してきている。[Prior art] High performance liquid chromatography (HPLC) is a system in which a mobile phase solvent is pressurized and sent to separate and elute an analyte in a column and continuously monitor it with a detector. HPLC has recently become an analytical tool used for material separation in many chemical fields due to its wide range of applications. In particular, it has become possible to analyze natural organic compounds and biological components that were difficult to analyze in the past.
HPLC has been developed rapidly, being incorporated into practical analysis such as clinical test analysis, drug analysis, and toxicity test analysis.
従来より、HPLCの充填剤としてはシリカ系充填剤と有
機高分子系充填剤（ポーラスポリマー）とが広く用いら
れている。しかしながら、シリカ系充填剤は、表面のシ
ラノール基による影響を受けやすいという欠点を有す
る。また、有機高分子系充填剤は、架橋されているので
いかなる溶媒にも溶解しないという利点を有するが、架
橋されていないポリマーを溶解する溶媒、すなわち良溶
媒には膨潤する性質がある。このため、通常ポリマーゲ
ルを固定相としたHPLCでは溶媒の交換は困難であり、ま
た、溶離液の流速を速くすることも固定相の耐圧性が十
分でないため限度があった。Conventionally, silica fillers and organic polymer fillers (porous polymers) have been widely used as fillers for HPLC. However, silica-based fillers have the disadvantage that they are susceptible to surface silanol groups. The organic polymer-based filler has an advantage that it is not dissolved in any solvent because it is crosslinked, but a solvent that dissolves a non-crosslinked polymer, that is, a good solvent has a property of swelling. For this reason, it is usually difficult to exchange solvents by HPLC using a polymer gel as a stationary phase, and increasing the flow rate of the eluent is also limited because the pressure resistance of the stationary phase is not sufficient.
このようなこれまでに開発された充填剤の問題点を克
服する新しい充填剤の開発が望まれている。その方法の
１つとして、炭素のカラム充填剤が膨潤、収縮が小さ
い、耐酸耐塩基性である、高温に強いなどの固有な性質
から優れた充填剤になるものと予想される。HPLC用充填
剤として有用な微粒子カーボンは、（１）高圧に耐え得
る十分な固さ、（２）分析や保管中での安定性、（３）
溶質の適切な保持、（４）均一な表面、（５）適当な細
孔径を有する、（６）合成が容易、等の特性を兼ね備え
ていることが重要である。It is desired to develop a new filler that overcomes the problems of the fillers developed so far. As one of the methods, it is expected that the carbon column packing material will be an excellent packing material due to its inherent properties such as small swelling and shrinkage, resistance to acid and base, and resistance to high temperatures. Fine particle carbon useful as a filler for HPLC includes (1) sufficient hardness to withstand high pressure, (2) stability during analysis and storage, and (3)
It is important to have characteristics such as proper retention of solute, (4) uniform surface, (5) appropriate pore size, and (6) easy synthesis.
グイオチョンらは、カーボンブラックにベンゼンの熱
分解生成物を蒸着させることにより熱分解修飾カーボン
ブラックを考案し、高強度を有する炭素吸着剤の合成に
成功した（J.Liq.Chromatogr.,119,41（1976）、J.Liq.
Chromatogra.,12,233（1976））が、低容量で再現性に
乏しいという欠点を有する。また、スモルコバらは、ポ
リテトラフルオロエチレンのリチウムアマルガムによる
室温還元物について（J.Chromatogr.,119 61（198
0））、またツバイアーとブルケはリチウムアマルガム
によるKel−F300の還元とグリニャール反応による表面
修飾によってフルオロポリマー誘導体のカーボンによる
表面化学修飾の有効性と固定相としての有効性について
（Anal.Chem.,53,812（1981））検討した。チチオリら
は市販のグラファイト化されたカーボンブラックについ
て（J.Chromatogr.,269,47（1983））、アンガーらはコ
ークスや活性炭について（J.Chromatogr.,202,3（198
0）検討した。萩原らはピッチを加熱して得られるメン
フェーズカーボンマイクロビーズについて検討した（第
７回炭素材料科学会要旨集70（1980）、Mol.Cryst.Liq.
Cryst.,94,97（1983）、特開昭56−44846、特開昭58−4
1351）。しかしながら、これらの多孔質炭素を細かく砕
いた粉砕型やゲル表面を炭素によって被覆した表面修飾
型、球晶型の充填剤は孔径を任意に調節できないこと及
びアモルファスからグラファイトまでの炭素の結晶状態
を調節できないという欠点を有し、本質的に高速液体ク
ロマトグラフィー（HPLC）用充填剤とはなり得ないとい
う欠点を有する。And others devised a pyrolysis-modified carbon black by depositing the pyrolysis product of benzene on carbon black, and succeeded in synthesizing a carbon adsorbent with high strength (J. Liq. Chromatogr., 119 , 41). (1976), J.Liq.
Chromatogra., 12 , 233 (1976)) has the disadvantage of low volume and poor reproducibility. Smolkova et al. Described a room-temperature reduction product of polytetrafluoroethylene with lithium amalgam (J. Chromatogr., 119 61 (198
0)), and the effectiveness of surface chemical modification of fluoropolymer derivatives with carbon by reduction of Kel-F300 with lithium amalgam and surface modification by Grignard reaction, and its effectiveness as a stationary phase (Anal. Chem., 53 , 812 (1981)). Chithioli et al. On commercially graphitized carbon black (J. Chromatogr., 269 , 47 (1983)), and Anger et al. On coke and activated carbon (J. Chromatogr., 202 , 3 (198)).
0) studied. Hagiwara and colleagues examined the membrane carbon microbeads obtained by heating pitch (7th Annual Meeting of the Society of Carbon Materials, 70 (1980), Mol. Cryst. Liq.
Cryst., 94 , 97 (1983), JP-A-56-44846, JP-A-58-4.
1351). However, these crushed porous carbon powders, surface-modified fillers in which the gel surface is coated with carbon, and spherulite-type fillers cannot control the pore size arbitrarily, and the crystalline state of carbon from amorphous to graphite It has the drawback that it cannot be adjusted, and that it cannot be essentially a packing for high performance liquid chromatography (HPLC).
一方、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン
及びヒスチジンのような芳香族アミノ酸は、ペプチド性
ホルモンや神経伝達物質の活性部位を形成したり、タン
パク質分解酵素の基質結合部位の形成に関与する重要な
アミノ酸である。従来、上記のような種々の炭素系粒子
を充填剤として用いた液体クロマトグラフィーにより芳
香族アミノ酸を分離することが試みられているが、必ず
しも成功しているとは言えない。On the other hand, aromatic amino acids such as phenylalanine, tyrosine, tryptophan, and histidine are important amino acids that form active sites for peptidic hormones and neurotransmitters and participate in formation of substrate binding sites for proteolytic enzymes. Conventionally, attempts have been made to separate aromatic amino acids by liquid chromatography using various carbon-based particles as a filler as described above, but they have not always been successful.
［発明が解決しようとする問題点］ 従って、本発明の目的は、芳香族アミノ酸又は芳香族
オリゴペプチドに対して優れた吸着分離能を有する、炭
素系の芳香族アミノ酸又は芳香族オリゴペプチド分離用
液体クロマトグラフィー充填剤及びそれを用いた芳香族
アミノ酸又は芳香族オリゴペプチドの分離方法を提供す
ることである。[Problems to be Solved by the Invention] Accordingly, an object of the present invention is to separate a carbon-based aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide having an excellent adsorption separation ability for an aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide. An object of the present invention is to provide a packing material for liquid chromatography and a method for separating an aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide using the packing material.
［問題点を解決するための手段］ 本出願人は、先に、有機ポリマーから成る実質的に球
状の網状ゲル中にピッチが包み込まれて成るピッチ系粒
子を発明した（特開昭63−147809号）。この度、このピ
ッチ系粒子を焼成した焼成ピッチ系粒子が、芳香族アミ
ノ酸及び芳香族オリゴペプチドに対して優れた吸着分離
能を有することを新たに見出し本発明を完成した。[Means for Solving the Problems] The present applicant has previously invented pitch-based particles in which pitch is wrapped in a substantially spherical network gel made of an organic polymer (Japanese Patent Application Laid-Open No. 63-147809). issue). The present inventors have newly found that fired pitch-based particles obtained by firing the pitch-based particles have excellent adsorption / separation ability for aromatic amino acids and aromatic oligopeptides, and completed the present invention.
すなわち、本発明は、有機ポリマーから成る実質的に
球状の網状ゲル中にピッチが包み込まれて成るピッチ系
粒子を焼成した焼成ピッチ系粒子から成る芳香族アミノ
酸又は芳香族オリゴペプチド分離用液体クロマトグラフ
ィー充填剤を提供する。That is, the present invention provides a liquid chromatography for separation of aromatic amino acids or aromatic oligopeptides comprising fired pitch-based particles obtained by firing pitch-based particles obtained by wrapping pitch in a substantially spherical network gel made of an organic polymer. Provide a filler.
さらにまた、本発明は、上記本発明の充填剤を用いた
液体クロマトグラフィーにより芳香族アミノ酸又は芳香
族オリゴペプチドを分離することから成る、芳香族アミ
ノ酸又は芳香族オリゴペプチドの分離方法を提供する。Furthermore, the present invention provides a method for separating an aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide, comprising separating an aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide by liquid chromatography using the packing material of the present invention.
［発明の効果］ 本発明により、芳香族アミノ酸及び芳香族オリゴペプ
チドに対して特に優れた吸着分離能を有する新規な炭素
系液体クロマトグラフィー充填剤及びそれを用いた芳香
族アミノ酸又は芳香族オリゴペプチドの分離方法が提供
された。本発明の充填剤は、芳香族アミノ酸及び芳香族
オリゴペプチドに対して優れた吸着分離能を有するのみ
ならず、耐酸耐塩基性で、高圧に耐え得る十分な固さを
有し、分析や保管中での安定性が良く、溶質を適切に保
持し、均一な表面を有し、しかも実質的に完全な球形を
しており、液体クロマトグラフィー用充填剤として優れ
た性質を有している。従って、本発明の液体クロマトグ
ラフィー充填剤は、実質的な液体クロマトグラフィー充
填剤、特に高速液体クロマトグラフィー充填剤として芳
香族アミノ酸及び芳香族オリゴペプチドの分離に用いる
ことができる。[Effects of the Invention] According to the present invention, a novel carbon-based liquid chromatography packing material having particularly excellent adsorption / separation ability for aromatic amino acids and aromatic oligopeptides, and aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the same Was provided. The packing material of the present invention not only has excellent adsorptivity and separation ability for aromatic amino acids and aromatic oligopeptides, but also has acid resistance and base resistance, and has sufficient hardness to withstand high pressure, and can be analyzed and stored. It has good stability in water, retains solutes properly, has a uniform surface, and has a substantially perfect sphere, and has excellent properties as a packing material for liquid chromatography. Therefore, the liquid chromatography packing material of the present invention can be used as a substantial liquid chromatography packing material, particularly as a high performance liquid chromatography packing material, for separating aromatic amino acids and aromatic oligopeptides.
［発明の具体的説明］ 上述したように、この発明の充填剤を構成する焼成ピ
ッチ系粒子の焼成前のピッチ系粒子は、有機ポリマーか
ら成る実質的に球状の網状ゲル中にピッチが包み込まれ
て成る。[Specific Description of the Invention] As described above, the pitch-based particles of the fired pitch-based particles constituting the filler of the present invention are wrapped in a substantially spherical network gel made of an organic polymer before firing. Consisting of
有機ポリマーとしては架橋結合により、実質的に球状
の網状ゲルを形成することができるものであればいずれ
の有機ポリマーをも用いることができる。好ましい有機
ポリマーとしてポリジビニルベンゼン、ポリトリビニル
ベンゼン等の芳香族ビニルポリマーやポリエチレンジメ
タクリレートを挙げることができる。Any organic polymer can be used as long as it can form a substantially spherical network gel by cross-linking. Preferred organic polymers include aromatic vinyl polymers such as polydivinylbenzene and polytrivinylbenzene, and polyethylene dimethacrylate.
ピッチ系粒子中に含まれるピッチとしては原油精製処
理の工程中で得られるものをそのまま用いることができ
る。また、石炭の乾留工程で得られるピッチを使用する
こともできる。安定な粒子を得るためには、原料ピッチ
の有機溶媒（トルエン、クロロホルム等）可溶成分が比
較的大きいものを採用することが好ましく、有機溶媒可
溶成分の平均分子量は約700ないし2000が好ましい。As the pitch contained in the pitch-based particles, those obtained in the step of crude oil refining treatment can be used as they are. Further, a pitch obtained in a coal carbonization step can also be used. In order to obtain stable particles, it is preferable to employ a material having a relatively large organic solvent (toluene, chloroform, etc.) soluble component in the raw material pitch, and the average molecular weight of the organic solvent soluble component is preferably about 700 to 2,000. .
ピッチ系粒子は、上記した有機ポリマーとピッチの他
に、任意的にポリスチレンやテフロン系ポリマー等の熱
分解型の物質を含んでいてもよい。このような熱分解型
の物質が存在すると、加熱処理後に大きな細孔を有する
粒子が得られる。すなわち、このような熱分解型の粒子
中の含量を調節することによって加熱処理後の粒子の細
孔径を調節することができ、所望の細孔径を有する粒子
を得ることができる。The pitch-based particles may optionally contain a thermally decomposable substance such as polystyrene or a Teflon-based polymer in addition to the organic polymer and the pitch. When such a pyrolytic substance is present, particles having large pores are obtained after the heat treatment. That is, by adjusting the content in such thermally decomposable particles, the pore size of the particles after the heat treatment can be adjusted, and particles having a desired pore size can be obtained.
ピッチ系粒子は、上記有機ポリマーのモノマーと、ピ
ッチと重合開始剤とを溶媒中で混合し、懸濁重合させる
ことによって製造することができる。懸濁重合の条件は
基本的に従来の合成樹脂製造の場合と同様である。出発
時における溶媒中の有機モノマーの濃度は通常２ないし
20重量％、好ましくは４ないし10重量％であり、原料ピ
ッチの濃度は通常２ないし20重量％であり、好ましくは
４ないし10重量％である。重合開始剤としては従来と同
様、例えばα，α′−アゾビスイソブチロニトチル、過
酸化ベンゾイル及び2,2′−アゾビス−（2,4−ジメチル
バレロニトリル）等を用いることができる。好ましい溶
媒は水である。また、従来と同様、必要に応じてトルエ
ン、キシレン、ベンゼン及びベンゾニトリルのような有
機溶媒を希釈剤として用いることができる。さらに、必
要に応じ、例えばポリビニルアルコール、メチルセルロ
ースのような懸濁安定剤を加えることもできる。また、
上記熱分解型の物質を粒子に含ませる場合には、その物
質のモノマーを上記成分と共に混合する。The pitch-based particles can be produced by mixing a monomer of the organic polymer, pitch and a polymerization initiator in a solvent, and subjecting the mixture to suspension polymerization. The conditions for suspension polymerization are basically the same as in the case of conventional synthetic resin production. The concentration of the organic monomer in the solvent at the time of starting is usually 2 to
It is 20% by weight, preferably 4 to 10% by weight, and the concentration of the raw material pitch is usually 2 to 20% by weight, preferably 4 to 10% by weight. As the polymerization initiator, for example, α, α′-azobisisobutyronitotyl, benzoyl peroxide, 2,2′-azobis- (2,4-dimethylvaleronitrile) and the like can be used as in the prior art. The preferred solvent is water. As in the conventional case, an organic solvent such as toluene, xylene, benzene and benzonitrile can be used as a diluent, if necessary. Further, if necessary, a suspension stabilizer such as polyvinyl alcohol and methyl cellulose can be added. Also,
In the case where the above pyrolytic substance is contained in the particles, the monomer of the substance is mixed with the above components.
有機モノマー、ピッチ及び重合開始剤並びに必要に応
じて希釈剤、懸濁剤及び熱分解型物質を溶媒中でかくは
んして均一な懸濁物を生ぜしめた後、通常50℃ないし90
℃で４時間ないし10時間、好ましくは60℃ないし80℃で
５時間ないし８時間重合させる。Stir the organic monomer, pitch and polymerization initiator, and if necessary, diluent, suspending agent and pyrolyzable substance in a solvent to produce a uniform suspension.
C. for 4 to 10 hours, preferably 60 to 80.degree. C. for 5 to 8 hours.
上記操作により、有機モノマーが重合し、かつ架橋し
て実質的に球状の有機ポリマーの網状ゲルが形成され、
この網状ゲルの中にピッチが包み込まれた粒子が得られ
る。By the above operation, the organic monomer is polymerized and crosslinked to form a substantially spherical organic polymer network gel,
Particles in which the pitch is wrapped in the reticulated gel are obtained.
このようにして得られたピッチ系粒子を焼成すること
によって、粒子中のピッチが少なくとも部分的に炭素化
され、本発明の液体クロマトグラフィー充填剤となる。
焼成処理は、特に限定されないが、酸化性雰囲気中250
℃ないし400℃、非酸化性雰囲気中400℃ないし1700℃で
焼成することが好ましい。この焼成処理により、ピッチ
中の低沸点成分が除去され、その結果、ピッチ中に細孔
が形成され、優れた芳香族アミノ酸及び芳香族オリゴペ
プチド吸着分離能を有する液体クロマトグラフィー充填
剤になる。By firing the pitch-based particles thus obtained, the pitch in the particles is at least partially carbonized, and becomes the liquid chromatography filler of the present invention.
The baking treatment is not particularly limited, but may be performed in an oxidizing atmosphere at 250.
It is preferable to bake at 400 ° C. to 400 ° C. in a non-oxidizing atmosphere at 400 ° C. to 1700 ° C. By this baking treatment, low boiling components in the pitch are removed, and as a result, pores are formed in the pitch, resulting in a liquid chromatography packing material having excellent ability to adsorb and separate aromatic amino acids and aromatic oligopeptides.
焼成ピッチ系粒子の平均粒径は、特に限定されないが
１μｍないし50μｍが好ましく、さらに好ましくは２μ
ｍないし20μｍである。The average particle size of the fired pitch-based particles is not particularly limited, but is preferably 1 μm to 50 μm, more preferably 2 μm.
m to 20 μm.
本発明の液体クロマトグラフィー充填剤を用いた液体
クロマトグラフィーにより、芳香族アミノ酸及び芳香族
オリゴペプチドを分離することができる。ここで、「芳
香族アミノ酸」とは、複素環を有するアミノ酸をも含め
た広義の意味であり、また、「芳香族オリゴペプチド」
とは、芳香族アミノ酸を少なくとも１つ含むオリゴペプ
チドを意味する。Aromatic amino acids and aromatic oligopeptides can be separated by liquid chromatography using the liquid chromatography packing material of the present invention. Here, the “aromatic amino acid” has a broad meaning including an amino acid having a heterocyclic ring, and the “aromatic oligopeptide”
Means an oligopeptide containing at least one aromatic amino acid.
本発明の液体クロマトグラフィー充填剤は、従来と同
様の態様で用いることができる。すなわち、この充填剤
をカラムに充填し、市販の液体クロマトグラフィー装置
に装填し、芳香族アミノ酸又は芳香族オリゴペプチドを
含む試料液をカラムにかけ、水に可溶で極性を有する適
当な展開溶媒、例えばアセトニトリル、メタノールのよ
うなアルコール類、テトラヒドロフランのようなエーテ
ル類、ジメチルスルホキシド等で展開することにより、
芳香族アミノ酸及び芳香族オリゴペプチドを分離するこ
とができる。The packing material for liquid chromatography of the present invention can be used in the same manner as in the prior art. That is, the packing material is packed in a column, loaded in a commercially available liquid chromatography apparatus, a sample solution containing an aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide is applied to the column, and a suitable developing solvent having water solubility and polarity, For example, acetonitrile, alcohols such as methanol, ethers such as tetrahydrofuran, by developing with dimethyl sulfoxide,
Aromatic amino acids and aromatic oligopeptides can be separated.
［発明の実施例］ 石油ピッチ系粒子の製造 500ml三角フラスコにポリビニルアルコール（株式会
社クラレ製、PVA−224E）3.6gを含む蒸留水360mlを入
れ、これに下記第１表に示す性質を有する石油ピッチＡ
又はＢ（いずれも東亜燃料工業株式会社製）20gと、ジ
ビニルベンゼン（和光純薬工業株式会社製１級を減圧蒸
溜（4mmHg）し、43℃の留分を回収したもの）20mlと、
希釈剤としてのトルエン20ml、重合開始剤のα，α′−
アゾビスイソブチロニトチル1.0gとから成る均一混合溶
液を加えた。この系を氷水浴に入れ十分に冷却して内温
を20℃以下に保ちながらフラスコ内の重合液を高速撹拌
モーターにより、スライダックの電圧を約80Vにして約1
0分間高速撹拌した。均一な懸濁物が生成していること
を光学顕微鏡で確認した後、懸濁液を収容したフラスコ
を水浴に入れ、水浴を80℃に保ち、撹拌しながら６時間
重合させた。上記操作により、粒径が7.5ないし15.0μ
ｍの安定な粒子が得られた。これを熱水で５回、メタノ
ールで１回洗浄し、十分乾燥させた。[Example of the Invention] Production of Petroleum Pitch-Based Particles A 500 ml Erlenmeyer flask is charged with 360 ml of distilled water containing 3.6 g of polyvinyl alcohol (Kuraray Co., Ltd., PVA-224E), and petroleum oil having properties shown in Table 1 below. Pitch A
Or 20 g of B (both manufactured by Toa Fuel Industry Co., Ltd.) and 20 ml of divinylbenzene (distilled at 43 ° C. by vacuum distillation (4 mmHg) of grade 1 manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.)
20 ml of toluene as diluent, α, α'- of polymerization initiator
A homogeneous mixed solution consisting of 1.0 g of azobisisobutyronitotyl was added. Put the system in an ice-water bath, cool sufficiently, and keep the internal temperature below 20 ° C.
Stirred at high speed for 0 minutes. After confirming the formation of a uniform suspension with an optical microscope, the flask containing the suspension was placed in a water bath, and the water bath was kept at 80 ° C., and the polymerization was carried out for 6 hours while stirring. By the above operation, the particle size is 7.5 to 15.0μ
m stable particles were obtained. This was washed 5 times with hot water and 1 time with methanol and dried sufficiently.
上記操作により得られた石油ピッチ系粒子5.0gをソッ
クスレー抽出法によりアセトンで24時間抽出し、抽出前
後で減った重さを測定した。その結果、粒子の形状を維
持したままＡピッチ系粒子では94％、Ｂピッチ系粒子で
は90％の石油ピッチが抽出された。このことから、この
ピッチ系粒子では、石油ピッチと有機ポリマーとが共重
合しておらず、有機ポリマーが架橋により網状のゲル粒
子を形成し、この中に石油ピッチが包み込まれた構造に
なっていることがわかった。 5.0 g of petroleum pitch-based particles obtained by the above operation were extracted with acetone for 24 hours by the Soxhlet extraction method, and the weight reduced before and after the extraction was measured. As a result, 94% of the A pitch-based particles and 90% of the B pitch-based particles extracted petroleum pitch while maintaining the shape of the particles. From this, in the pitch-based particles, the petroleum pitch and the organic polymer are not copolymerized, and the organic polymer forms a network-like gel particle by cross-linking, and has a structure in which the petroleum pitch is wrapped therein. I knew it was there.
粒子の加熱処理 上記操作により得られた粒子を石英ガラス管に取り、
空気流通下3.5時間で300℃まで昇温し、その温度で３時
間加熱、次に窒素流通下3.5時間で1050℃まで昇温し、
その温度で30分間焼成した。焼成後、常温になるまで放
置し、ベンゼンで３〜５回超音波をかけよく分散させな
がら洗浄し、分解生成物や炭素化されないピッチを除去
した。これを十分乾燥させた。Heat treatment of particles Take the particles obtained by the above operation in a quartz glass tube,
The temperature was raised to 300 ° C in 3.5 hours under air flow, and heated at that temperature for 3 hours, and then heated to 1050 ° C in 3.5 hours in nitrogen flow,
It was baked at that temperature for 30 minutes. After calcination, the mixture was allowed to stand at room temperature and washed with benzene 3 to 5 times while applying ultrasonic waves to disperse well to remove decomposition products and non-carbonized pitch. This was thoroughly dried.
焼成ピッチ系粒子の性状 上記のようにして得られた焼成ピッチ系粒子の性状を
下記に示す。Properties of fired pitch-based particles The properties of fired pitch-based particles obtained as described above are shown below.
粒径:1μｍ〜10μｍ 比表面積:380m2/g 見掛け密度:0.57g/ml 細孔容積:1.00ml/g 細孔径:3nm〜300μｍ 走査電子顕微鏡で焼成ピッチ系粒子を観察した結果、
粒子は実質的に球状であり、多孔質で表面にしわがなか
った。また、粒子は、高速液体クロマトグラフィーの充
填剤として十分な固さを有していた。Particle size: 1 μm to 10 μm Specific surface area: 380 m 2 / g Apparent density: 0.57 g / ml Pore volume: 1.00 ml / g Pore diameter: 3 nm to 300 μm As a result of observing the fired pitch particles with a scanning electron microscope,
The particles were substantially spherical, porous and wrinkled on the surface. Further, the particles had sufficient hardness as a filler for high performance liquid chromatography.
高速液体クロマトグラフィー （１）上記のようにして得た焼成ピッチ系粒子を内径7.
8mm、長さ50mmのカラムに充填した。このカラムを市販
の高速液体クロマトグラフィー装置（横河LC 100システ
ム）に装填した。High performance liquid chromatography (1) The fired pitch-based particles obtained as described above have an inner diameter of 7.
An 8 mm, 50 mm long column was packed. This column was loaded on a commercially available high-performance liquid chromatography apparatus (Yokogawa LC100 system).
第２表に示す各種アミノ酸（和光純薬工業社製）又は
第３表に示す各種合成オリゴペプチド（米国ニュートリ
ショナル・バイオケミカルズ社製）をそれぞれ水又は微
量のアルカリを加えた水溶液に溶解して試料液を調製
し、これを上記液体クロマトグラフィーカラムにかけ
た。アセトニトリル（クロマトグラフィー級、金子化学
社製）を展開溶媒として用い、１重量％（0.07重量％の
TFAを含む）から60重量％（0.1重量％のTFAを含む）の
直線濃度勾配で、1ml/分の流速で20分間溶出した。溶出
した画分は210nmにおける吸光度を測定することにより
分析し、キャパシティレシオ（capacity ratio）を求め
た。Various amino acids (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) shown in Table 2 or various synthetic oligopeptides (manufactured by Nutritional Biochemicals, USA) shown in Table 3 are each dissolved in water or an aqueous solution to which a trace amount of alkali is added. A sample solution was prepared and applied to the above liquid chromatography column. Using acetonitrile (chromatographic grade, manufactured by Kaneko Kagaku) as a developing solvent, 1% by weight (0.07% by weight)
Elution was performed with a linear gradient from 60% by weight (containing 0.1% by weight TFA) to 60% by weight (containing TFA) at a flow rate of 1 ml / min for 20 minutes. The eluted fraction was analyzed by measuring the absorbance at 210 nm to determine a capacity ratio.
結果を第２表及び第３表に示す。第２表には各アミノ
酸の疎水性パラメーターも併せて示す。The results are shown in Tables 2 and 3. Table 2 also shows the hydrophobicity parameter of each amino acid.
上記第２表及び第３表から、本発明の充填剤は、芳香
族アミノ酸及び芳香族オリゴペプチドに対して優れた吸
着分離能を有し、他のアミノ酸は疎水性パラメーターに
関わらず吸着されないことがわかる。 From Tables 2 and 3, it can be seen that the packing material of the present invention has excellent adsorptivity and separation ability for aromatic amino acids and aromatic oligopeptides, and that other amino acids are not adsorbed regardless of the hydrophobic parameter. I understand.
（２）上記と同様の条件により、フェニルアラニン、チ
ロシン及びトリプトファンを含む試料溶液並びにチロシ
ン及びアセチルチロシンを含む試料溶液を分離した。結
果をそれぞれ第１図及び第２図に示す。(2) Under the same conditions as above, a sample solution containing phenylalanine, tyrosine and tryptophan and a sample solution containing tyrosine and acetyltyrosine were separated. The results are shown in FIGS. 1 and 2, respectively.
第１図及び第２図から、本発明の液体クロマトグラフ
ィー充填剤により、芳香族アミノ酸同士の分離も可能で
あることがわかる。From FIG. 1 and FIG. 2, it can be seen that the liquid chromatography packing material of the present invention can also separate aromatic amino acids.
（３）上記と同様の条件により、Ｌ−ロイシル−Ｌ−ロ
イシン、フェニルアラニン、DL−アラニル−DL−フェニ
ルアラニン、トリプトファン及びグリシル−Ｌ−トリプ
トファンを含む試料溶液を分離した。結果を第３図に示
す。第３図から、本発明の充填剤により、これらの芳香
族アミノ酸及び芳香族オリゴペプチドの分離が可能であ
ることがわかる。(3) Under the same conditions as above, a sample solution containing L-leucyl-L-leucine, phenylalanine, DL-alanyl-DL-phenylalanine, tryptophan and glycyl-L-tryptophan was separated. The results are shown in FIG. From FIG. 3, it can be seen that these aromatic amino acids and aromatic oligopeptides can be separated by the filler of the present invention.
（４）上記と同様の条件により、カモジュリンのトリプ
シン分解物を高速液体クロマトグラフィーにかけた。結
果を第４図に示す。(4) Under the same conditions as above, the trypsin hydrolyzate of camumodulin was subjected to high performance liquid chromatography. The results are shown in FIG.
第４図に示すように、種々のピークが得られ、本発明
の充填剤により種々雑多なアミノ酸やペプチドを含むタ
ンパク質加水分解物の分析が可能であることがわかる。As shown in FIG. 4, various peaks were obtained, indicating that the filler of the present invention enables analysis of protein hydrolyzate containing various miscellaneous amino acids and peptides.
（５）上記と同様の条件により、市販の合成甘味料であ
るパルスウィート（商品名）及び清涼飲料水コークライ
ト（商品名）を分析した。これらは、甘味料としてアス
パルテーム（Asp−Phe−Me）を含む。結果をそれぞれ第
５図及び第６図に示す。(5) Under the same conditions as described above, commercially available synthetic sweeteners, pulse wheat (trade name) and soft drink corklite (trade name) were analyzed. These include aspartame (Asp-Phe-Me) as a sweetener. The results are shown in FIGS. 5 and 6, respectively.
第５図及び第６図に示されるように、アスパルテーム
のピークが明瞭に得られており、本発明の充填剤を用い
た高速液体クロマトグラフィーにより食品中のアスパル
テーム等の芳香族オリゴペプチドの分離、検出が可能で
あることがわかる。As shown in FIG. 5 and FIG. 6, peaks of aspartame are clearly obtained, and separation of aromatic oligopeptides such as aspartame in food by high performance liquid chromatography using the filler of the present invention. It can be seen that detection is possible.
第１図ないし第６図は、本発明の液体クロマトグラフィ
ー充填剤を用いて各種アミノ酸及びオリゴペプチドを分
析したクロマトグラフを示す図である。1 to 6 are diagrams showing chromatographs of various amino acids and oligopeptides analyzed using the packing material for liquid chromatography of the present invention.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 227/40 Ｃ０７Ｃ 227/40 229/02 229/02 Ｃ０７Ｋ 1/14 Ｃ０７Ｋ 1/14 5/06 5/06 Ａ Ｃ１０Ｃ 3/00 Ｃ１０Ｃ 3/00 3/14 3/14 Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｊ 30/88 30/88 Ｆ Ｊ (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) G01N 30/48 ＣＡＳ ＯＮ−ＬＩＮＥ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code FI C07C 227/40 C07C 227/40 229/02 229/02 C07K 1/14 C07K 1/14 5/06 5/06 A C10C 3 / 00 C10C 3/00 3/14 3/14 G01N 30/48 G01N 30/48 J 30/88 30/88 F J (58) Fields investigated (Int. Cl. 6 , DB name) G01N 30/48 CAS ON -LINE
Claims (4)
ゲル中にピッチが包み込まれて成るピッチ系粒子を焼成
した焼成ピッチ系粒子から成る芳香族アミノ酸又は芳香
族オリゴペプチド分離用液体クロマトグラフィー充填
剤。1. Packing of aromatic amino acids or aromatic oligopeptides for separation of aromatic amino acids or aromatic oligopeptides by baking pitch-based particles obtained by baking pitch-based particles in which pitch is wrapped in a substantially spherical network gel made of an organic polymer. Agent.
ｍないし50μｍである請求項１記載の充填剤。2. The fired pitch-based particles having a particle size of 1 μm.
The filler according to claim 1, which has a particle size of from 50 to 50 µm.
ン、ポリトリビニルベンゼン又はポリエチレンジメタク
リレートである請求項１又は２記載の充填剤。3. The filler according to claim 1, wherein the organic polymer is polydivinylbenzene, polytrivinylbenzene or polyethylene dimethacrylate.
充填剤を用いた液体クロマトグラフィーにより芳香族ア
ミノ酸又は芳香族オリゴペプチドを分離することから成
る、芳香族アミノ酸又は芳香族オリゴペプチドの分離方
法。4. An aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide comprising separating an aromatic amino acid or an aromatic oligopeptide by liquid chromatography using the filler according to any one of claims 1 to 3. Separation method.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1247768A JP2852669B2 (en) | 1989-09-22 | 1989-09-22 | Liquid chromatography packing for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides and method for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the same |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1247768A JP2852669B2 (en) | 1989-09-22 | 1989-09-22 | Liquid chromatography packing for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides and method for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the same |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03108659A JPH03108659A (en) | 1991-05-08 |
| JP2852669B2 true JP2852669B2 (en) | 1999-02-03 |
Family
ID=17168367
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP1247768A Expired - Lifetime JP2852669B2 (en) | 1989-09-22 | 1989-09-22 | Liquid chromatography packing for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides and method for separating aromatic amino acids or aromatic oligopeptides using the same |
Country Status (1)
| Country | Link |
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| JP (1) | JP2852669B2 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE102005005848A1 (en) * | 2005-02-08 | 2006-08-10 | Mann + Hummel Gmbh | Filter system for fuel |
| JP4803579B2 (en) * | 2005-12-22 | 2011-10-26 | 株式会社吉野工業所 | Closure with metering and dispensing equipment |
-
1989
- 1989-09-22 JP JP1247768A patent/JP2852669B2/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03108659A (en) | 1991-05-08 |
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