JP2830378B2 - 発酵法によるアデノシンの製造法 - Google Patents
発酵法によるアデノシンの製造法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、発酵法によるアデノシンの製造法に関す
る。
る。
発酵法によるアデノシン生産に関しては、イソロイシ
ン要求性を有するバチルス・ズブチリスによるアデノシ
ン製造法（昭和39年度日本農芸化学大会）やキサンチ
ン、ヒスチジン及びスレオニン要求性を有し、かつ８−
アザキサンチン耐性を有するバチルス・ズブチリスによ
るアデノシン製造法（Agric.Biol.Chem.,35,1906（197
1））、更には、グアニン要求性を有し、かつ８−アザ
アデニン又は６−メチルアミノプリン耐性を有する変異
株を用いる方法（特願昭58−185313号）が知られてい
た。
ン要求性を有するバチルス・ズブチリスによるアデノシ
ン製造法（昭和39年度日本農芸化学大会）やキサンチ
ン、ヒスチジン及びスレオニン要求性を有し、かつ８−
アザキサンチン耐性を有するバチルス・ズブチリスによ
るアデノシン製造法（Agric.Biol.Chem.,35,1906（197
1））、更には、グアニン要求性を有し、かつ８−アザ
アデニン又は６−メチルアミノプリン耐性を有する変異
株を用いる方法（特願昭58−185313号）が知られてい
た。
しかしながら、これらの製造法は、いずれもアデノシ
ンの蓄積濃度が低く、また菌株の安定性に問題があっ
た。
ンの蓄積濃度が低く、また菌株の安定性に問題があっ
た。
〔発明が解決しようとする課題〕 本発明は、アデノシン生産能の更に高い微生物による
アデノシンの発酵法を提供することを目的とする。
アデノシンの発酵法を提供することを目的とする。
本発明者は上述の課題を解決すべく鋭意研究の結果、
バチルス属に属し、イソロイシン要求性、ヒスチジン要
求性及びアルギニン要求性を有する変異株並びに、ピリ
ミジンアナログ耐性を有する変異株を使用すれば、前記
の目的を達成し得ることを見出し、本発明を完成した。
バチルス属に属し、イソロイシン要求性、ヒスチジン要
求性及びアルギニン要求性を有する変異株並びに、ピリ
ミジンアナログ耐性を有する変異株を使用すれば、前記
の目的を達成し得ることを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は、バチルス続に属し、イソロイシ
ン要求性、ヒスチジン要求性及びアルギニン要求性を有
し、かつアデノシン生産能を有する微生物又は、バチル
ス属に属し、ピリミジンアナログ耐性を有し、かつアデ
ノシン生産能を有する微生物を培養して培養液中にアデ
ノシンを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴と
する発酵法によるアデノシンの製造法に関する。
ン要求性、ヒスチジン要求性及びアルギニン要求性を有
し、かつアデノシン生産能を有する微生物又は、バチル
ス属に属し、ピリミジンアナログ耐性を有し、かつアデ
ノシン生産能を有する微生物を培養して培養液中にアデ
ノシンを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴と
する発酵法によるアデノシンの製造法に関する。
以下、本発明について詳述する。
本発明で使用できる菌株は上述の微生物であれば特に
限定されるものではなく、該微生物の採取は、例えば次
のようにして行なうことができる。すなわち、バチルス
・ズブチリスのグアニン要求性を有し、かつ８−アザア
デニン耐性かつ６−メチルアミノプリン耐性を有する菌
株を通常の方法で変異処理（Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン等）に付して菌株の生育にグ
アニン及びアミノ酸を要求する菌株又は、各種薬剤耐性
株を採取する。これらの中から、スクリーニングにより
生育のためにイソロイシン、ヒスチジン、アルギニンを
要求する菌株又はプリミジンアナログ耐性を有する菌株
が、著量のアデノシンを培養液中に蓄積するものである
ことが確認できる。プリミジンアナログとしては、４−
アミノピラゾロ〔3,4−α〕−ピリミジン、４−アミノ
−６−メルカプトピラゾール〔3,4−ｄ〕ピリミジン、
４−アミノピラゾロ〔3,4−ｄ〕ピリミジン２′−デオ
キシ−リボシト等から選ばれる。
限定されるものではなく、該微生物の採取は、例えば次
のようにして行なうことができる。すなわち、バチルス
・ズブチリスのグアニン要求性を有し、かつ８−アザア
デニン耐性かつ６−メチルアミノプリン耐性を有する菌
株を通常の方法で変異処理（Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−Ｎ−ニトロソグアニジン等）に付して菌株の生育にグ
アニン及びアミノ酸を要求する菌株又は、各種薬剤耐性
株を採取する。これらの中から、スクリーニングにより
生育のためにイソロイシン、ヒスチジン、アルギニンを
要求する菌株又はプリミジンアナログ耐性を有する菌株
が、著量のアデノシンを培養液中に蓄積するものである
ことが確認できる。プリミジンアナログとしては、４−
アミノピラゾロ〔3,4−α〕−ピリミジン、４−アミノ
−６−メルカプトピラゾール〔3,4−ｄ〕ピリミジン、
４−アミノピラゾロ〔3,4−ｄ〕ピリミジン２′−デオ
キシ−リボシト等から選ばれる。
こうして得られた菌株は、例えばグアニン要求性、８
−アザアデニン耐性及び６−メチルアミノプリン耐性を
有するバチルス・ズブチリスAJ12050（FERM P−7149）
を親株とし、これを変異処理した以下の菌株がある。
−アザアデニン耐性及び６−メチルアミノプリン耐性を
有するバチルス・ズブチリスAJ12050（FERM P−7149）
を親株とし、これを変異処理した以下の菌株がある。
（１） イソロイシン要求，ヒスチジン要求，アルギニ
ン要求性を有する菌株： バチルス・ズブチリスAJ 12518（FERM P−11473） （２） ４−アミノピラゾロ〔3,4−ｄ〕−ピリミジン
耐性を有する菌株： バチルス・ズブチリスAJ 12519（FERM P−11474） 本発明で例示された菌株のアミノ酸に対する要求性及
び薬剤に対する耐性度を示す実験例を以下に示す。
ン要求性を有する菌株： バチルス・ズブチリスAJ 12518（FERM P−11473） （２） ４−アミノピラゾロ〔3,4−ｄ〕−ピリミジン
耐性を有する菌株： バチルス・ズブチリスAJ 12519（FERM P−11474） 本発明で例示された菌株のアミノ酸に対する要求性及
び薬剤に対する耐性度を示す実験例を以下に示す。
実験例 下記の基本培地にアミノ酸を第１表に示す濃度に、
又、薬剤を第１表に示す濃度になるようにそれぞれ添加
した培地を調製し、試験管に3mlずつ分注し殺菌後、各
菌株を接種し、34℃,20時間振とう培養を行った。
又、薬剤を第１表に示す濃度になるようにそれぞれ添加
した培地を調製し、試験管に3mlずつ分注し殺菌後、各
菌株を接種し、34℃,20時間振とう培養を行った。
基本培地 グルコース 2 g/dl 塩化アンモニウム 0.5 〃 リン酸第一カリウム 0.1 〃 硫酸マグネシウム 0.04 〃 クエン酸ソーダ 0.05 〃 Ｌ−グルタミン酸 0.1 〃 グアニン 0.01 〃 Fe++,Mn++（各） 2 ppm pH（KOH） 7.0 〃 この培養により得られた各菌株の生育状況を第１表及
び第２表に相対生育値で示す。
び第２表に相対生育値で示す。
これらの菌株を用いてアデノシンを生産するには次の
ような方法が用いられる。培地としては、炭素源、窒素
源、無機塩類、グアニンおよび必要ならば更にその他の
微量栄養素を含有する通常の液体培地である。炭素源と
しては、グルコース、糖蜜、デンプン加水分解液などの
炭水化物、酢酸、プロピンオン酸、ピルビン酸、クエン
酸等の有機酸、エタノール、プロパノールなどのアルコ
ール類、さらに菌によっては炭化水素なども使用でき
る。窒素源としては硫安、硝安、塩安、リン安等のアン
モニューム塩、硝酸塩、尿素、アンモアガス等の無機態
窒素もしくはカゼイン加水分解物、アミノ酸等の有機態
窒素等が使用できる。また、栄養要求物質としてのグア
ニンは、グアニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グア
ニル酸、リボ核酸等のいずれも使用可能である。また、
必要に応じてビタミン類、アミノ酸、核酸塩基などの微
量栄養素を添加すればアデノシンの蓄積量を増すことが
できる場合が多い。特に本発明のアミノ酸要求株を用い
る場合にはその要求物質を添加しなければならない。培
養方法は好気的条件が良く、また、培養温度は20℃〜40
℃の範囲がよい。場合によっては発酵途中にて発酵温度
を若干変更させてもよい。培養開始時および培養中のpH
を5.0〜9.0の範囲の最適値に調節して培養するのが望ま
しい。pHの調整は無機酸、有機酸あるいはアルカリ、さ
らに尿素、炭酸カルシューム、アンモニア水、アンモニ
ウムガスなどを使用することができる。かくして２〜５
日間培養すれば著量のアデノシンが培地中に蓄積され
る。更に残炭素源濃度を0.5〜2g/dlに管理し、炭素源を
連続フィードすることによりアデノシンの蓄積を著しく
高めることができる。
ような方法が用いられる。培地としては、炭素源、窒素
源、無機塩類、グアニンおよび必要ならば更にその他の
微量栄養素を含有する通常の液体培地である。炭素源と
しては、グルコース、糖蜜、デンプン加水分解液などの
炭水化物、酢酸、プロピンオン酸、ピルビン酸、クエン
酸等の有機酸、エタノール、プロパノールなどのアルコ
ール類、さらに菌によっては炭化水素なども使用でき
る。窒素源としては硫安、硝安、塩安、リン安等のアン
モニューム塩、硝酸塩、尿素、アンモアガス等の無機態
窒素もしくはカゼイン加水分解物、アミノ酸等の有機態
窒素等が使用できる。また、栄養要求物質としてのグア
ニンは、グアニン、グアニン鉱酸塩、グアノシン、グア
ニル酸、リボ核酸等のいずれも使用可能である。また、
必要に応じてビタミン類、アミノ酸、核酸塩基などの微
量栄養素を添加すればアデノシンの蓄積量を増すことが
できる場合が多い。特に本発明のアミノ酸要求株を用い
る場合にはその要求物質を添加しなければならない。培
養方法は好気的条件が良く、また、培養温度は20℃〜40
℃の範囲がよい。場合によっては発酵途中にて発酵温度
を若干変更させてもよい。培養開始時および培養中のpH
を5.0〜9.0の範囲の最適値に調節して培養するのが望ま
しい。pHの調整は無機酸、有機酸あるいはアルカリ、さ
らに尿素、炭酸カルシューム、アンモニア水、アンモニ
ウムガスなどを使用することができる。かくして２〜５
日間培養すれば著量のアデノシンが培地中に蓄積され
る。更に残炭素源濃度を0.5〜2g/dlに管理し、炭素源を
連続フィードすることによりアデノシンの蓄積を著しく
高めることができる。
発酵液よりアデノシンを採取するには、例えば菌体を
分離除去し、アニオン交換樹脂、カチオン交換樹脂等の
樹脂処理あるいは濃縮・冷却晶析法の併用等によりアデ
ノシンを単離する。あるいは、常法の活性炭吸着法およ
び再結晶法を用いて精製してもよい。
分離除去し、アニオン交換樹脂、カチオン交換樹脂等の
樹脂処理あるいは濃縮・冷却晶析法の併用等によりアデ
ノシンを単離する。あるいは、常法の活性炭吸着法およ
び再結晶法を用いて精製してもよい。
以下、本発明を実施例により更に説明する。
第３表の組成のシード培地500mlを入れた500ml容フラ
スコに第４表に示す菌株を１白金耳接種し、34℃にて16
時間培養した。
スコに第４表に示す菌株を１白金耳接種し、34℃にて16
時間培養した。
この培養液を、上記主発酵培地20mlを入れた500ml容
フラスコに1ml添加し34℃にて72時間培養した。この培
養液中のアデノシンを、液体クロマトグラフィーにて定
量したところ第４表に示すアデノシン量が生成蓄積し
た。更に、AJ−12519の培養で残糖を0.5−2.0g/dlに管
理し、炭素源を連続フィードすることにより、アデノシ
ン蓄積を18.0g/（培養90時間）まで高めることができ
た。
フラスコに1ml添加し34℃にて72時間培養した。この培
養液中のアデノシンを、液体クロマトグラフィーにて定
量したところ第４表に示すアデノシン量が生成蓄積し
た。更に、AJ−12519の培養で残糖を0.5−2.0g/dlに管
理し、炭素源を連続フィードすることにより、アデノシ
ン蓄積を18.0g/（培養90時間）まで高めることができ
た。
上記と同様の方法によって得た菌株AJ12519の培養液1
0より菌体を遠心分離法で除いた後、上清をエバポレ
ーターにて２まで濃縮した。この濃縮液を５℃に放置
してアデノシンの結晶を生成させた。得られたアデノシ
ンの結晶を水に溶融し、更に活性炭に吸着せしめ常法に
より溶出しアデノシン画分を採取し、濃縮冷却晶析する
ことにより、アデノシンの結晶99gを得た。
0より菌体を遠心分離法で除いた後、上清をエバポレ
ーターにて２まで濃縮した。この濃縮液を５℃に放置
してアデノシンの結晶を生成させた。得られたアデノシ
ンの結晶を水に溶融し、更に活性炭に吸着せしめ常法に
より溶出しアデノシン画分を採取し、濃縮冷却晶析する
ことにより、アデノシンの結晶99gを得た。
〔発明の効果〕 本発明の菌株を使用することにより、アデノシンの蓄
積量が向上することから工業レベルでの実用化が期待さ
れる。
積量が向上することから工業レベルでの実用化が期待さ
れる。
Claims (2)
- 【請求項１】バチルス属に属し、イソロイシン要求性、
ヒスチジン要求性及びアルギニン要求性を有し、かつア
デノシン生産能を有する微生物を培養して培養液中にア
デノシンを生成蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とする発酵法によるアデノシンの製造法。 - 【請求項２】バチルス属に属し、ピリミジンアナログ耐
性を有し、かつアデノシン生産能を有する微生物を培養
して培養液中にアデノシンを生成蓄積せしめ、これを採
取することを特徴とする発酵法によるアデノシンの製造
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13602290A JP2830378B2 (ja) | 1990-05-25 | 1990-05-25 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13602290A JP2830378B2 (ja) | 1990-05-25 | 1990-05-25 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0430797A JPH0430797A (ja) | 1992-02-03 |
| JP2830378B2 true JP2830378B2 (ja) | 1998-12-02 |
Family
ID=15165358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13602290A Expired - Lifetime JP2830378B2 (ja) | 1990-05-25 | 1990-05-25 | 発酵法によるアデノシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2830378B2 (ja) |
-
1990
- 1990-05-25 JP JP13602290A patent/JP2830378B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0430797A (ja) | 1992-02-03 |
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