JP2797102B2 - 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 - Google Patents
酸性ホスフアターゼ活性測定用試液Info
- Publication number
- JP2797102B2 JP2797102B2 JP63236132A JP23613288A JP2797102B2 JP 2797102 B2 JP2797102 B2 JP 2797102B2 JP 63236132 A JP63236132 A JP 63236132A JP 23613288 A JP23613288 A JP 23613288A JP 2797102 B2 JP2797102 B2 JP 2797102B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- group
- acid
- solution
- reagent
- acp
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ［発明の利用分野］ 本発明は、血液、尿等生体試料中の酸性ホスファター
ゼ（以下、ACPと略記する）。活性測定用試液に関す
る。
ゼ（以下、ACPと略記する）。活性測定用試液に関す
る。
［発明の背景］ ACPは、前立腺、肝臓、脾臓、顆粒球、赤血球、骨等
各組織に広く分布しているが、前立腺組織とその分泌液
中に特に大量に含まれており、前立腺導管の閉塞によっ
て血中濃度が上昇することから、前立腺疾患の診断指標
として利用されている。
各組織に広く分布しているが、前立腺組織とその分泌液
中に特に大量に含まれており、前立腺導管の閉塞によっ
て血中濃度が上昇することから、前立腺疾患の診断指標
として利用されている。
従来のACP活性の測定方法としては、使用する基質で
分類すると、グリセロリン酸法、フェニルリン酸法、ｐ
−ニトロフェニルリン酸法、α−ナフチルリン酸法、チ
モールフタレインモノリン酸法、ブロムフェノールブル
ーモノリン酸法、2,6−ジクロル−４−ニトロフェニル
リン酸法等が報告されている。これらのうち試料中に共
存する物質による影響を比較的受け難く、レイトアッセ
イによる測定が可能な方法としては、α−ナフチルリン
酸法、ブロムフェノールブルーモノリン酸法、2,6−ジ
クロル−４−ニトロフェニルリン酸法等が挙げられる。
しかしながら、α−ナフチルリン酸法はACPにより分解
遊離したα−ナフトールをジアゾ試薬を用いてジアゾカ
ップリング反応により発色させるものであるので、この
反応の阻害剤である還元性物質の影響を受け易い。一
方、ブロムフェノールブルーモノリン酸法や,2,6−ジク
ロル−４−ニトロフェニルリン酸法に於いては、ACPに
より分解遊離するブロムフェノールブルーや2,6−ジク
ロル−４−ニトロフェノール等を直接測定するため、試
料中に共存する物質による影響は軽微であるが、基質そ
のものの安定性が悪く、測定試液中のみならず、固形状
態で保存した場合でも化学的な分解が起こり易く、それ
故基質を使用直前に合成或は精製する必要があったり、
測定試液調製後極く短時間しか使用できない等の問題が
あった。
分類すると、グリセロリン酸法、フェニルリン酸法、ｐ
−ニトロフェニルリン酸法、α−ナフチルリン酸法、チ
モールフタレインモノリン酸法、ブロムフェノールブル
ーモノリン酸法、2,6−ジクロル−４−ニトロフェニル
リン酸法等が報告されている。これらのうち試料中に共
存する物質による影響を比較的受け難く、レイトアッセ
イによる測定が可能な方法としては、α−ナフチルリン
酸法、ブロムフェノールブルーモノリン酸法、2,6−ジ
クロル−４−ニトロフェニルリン酸法等が挙げられる。
しかしながら、α−ナフチルリン酸法はACPにより分解
遊離したα−ナフトールをジアゾ試薬を用いてジアゾカ
ップリング反応により発色させるものであるので、この
反応の阻害剤である還元性物質の影響を受け易い。一
方、ブロムフェノールブルーモノリン酸法や,2,6−ジク
ロル−４−ニトロフェニルリン酸法に於いては、ACPに
より分解遊離するブロムフェノールブルーや2,6−ジク
ロル−４−ニトロフェノール等を直接測定するため、試
料中に共存する物質による影響は軽微であるが、基質そ
のものの安定性が悪く、測定試液中のみならず、固形状
態で保存した場合でも化学的な分解が起こり易く、それ
故基質を使用直前に合成或は精製する必要があったり、
測定試液調製後極く短時間しか使用できない等の問題が
あった。
これに対し、基質の分解を防ぐ代りに、従来の基質よ
りも安定性の良い２−クロル−４−ニトロフェニルリン
酸を用いる方法も開発されている（特公昭58−6480号公
報、特開昭62−96099号公報、特開昭62−115298号公
報）。この２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸は溶
液中での安定性は従来のものに比較して良く、その点に
関しては問題はない。しかしながら、この方法に於いて
は、ACPとの反応の結果遊離される、２−クロル−４−
ニトロフェノールのpKaが5.4付近である（pH5.4の溶液
中で50％しか解離しないことを意味する。）ため、ACP
の至適pHである５〜６の範囲で検出感度が低く、レイト
アッセイによる測定には利用できないという問題があっ
た。
りも安定性の良い２−クロル−４−ニトロフェニルリン
酸を用いる方法も開発されている（特公昭58−6480号公
報、特開昭62−96099号公報、特開昭62−115298号公
報）。この２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸は溶
液中での安定性は従来のものに比較して良く、その点に
関しては問題はない。しかしながら、この方法に於いて
は、ACPとの反応の結果遊離される、２−クロル−４−
ニトロフェノールのpKaが5.4付近である（pH5.4の溶液
中で50％しか解離しないことを意味する。）ため、ACP
の至適pHである５〜６の範囲で検出感度が低く、レイト
アッセイによる測定には利用できないという問題があっ
た。
この問題を解決すべく、２−クロル−４−ニトロフェ
ニルリン酸を基質として含むACP活性測定用試液に、シ
クロデキストリン（以下、CDと略記する。）、クラウン
エーテル等の包接化合物を共存させ、ACPとの反応の結
果遊離する２−クロル−４−ニトロフェノールの見かけ
のpKaをより酸性側に移行させて、検出感度を上昇させ
る方法が特表昭58−501357号公報及び特開昭62−115298
号公報に開示されている。しかしながら、この方法によ
り調製されたACP活性測定用試液に於いては、遊離して
くる２−クロル−４−ニトロフェノールの検出感度は上
昇するが、反面、基質である２−クロル−４−ニトロフ
ェニルリン酸の測定試液中での安定性が著しく低下する
という現象が起こる。このため、この方法を利用したAC
P測定用の試液に於いては、測定試液を基質溶液と包接
化合物溶液との２つに分ける、所謂２液法としなければ
実際の測定には応用し難く、更なる改良が望まれてい
た。
ニルリン酸を基質として含むACP活性測定用試液に、シ
クロデキストリン（以下、CDと略記する。）、クラウン
エーテル等の包接化合物を共存させ、ACPとの反応の結
果遊離する２−クロル−４−ニトロフェノールの見かけ
のpKaをより酸性側に移行させて、検出感度を上昇させ
る方法が特表昭58−501357号公報及び特開昭62−115298
号公報に開示されている。しかしながら、この方法によ
り調製されたACP活性測定用試液に於いては、遊離して
くる２−クロル−４−ニトロフェノールの検出感度は上
昇するが、反面、基質である２−クロル−４−ニトロフ
ェニルリン酸の測定試液中での安定性が著しく低下する
という現象が起こる。このため、この方法を利用したAC
P測定用の試液に於いては、測定試液を基質溶液と包接
化合物溶液との２つに分ける、所謂２液法としなければ
実際の測定には応用し難く、更なる改良が望まれてい
た。
［発明の目的］ 本発明は、上記した如き状況に鑑みなされたもので、
レイトアッセイに使用でき且つ安定性に優れたACP活性
測定用試液を提供することを目的とする。
レイトアッセイに使用でき且つ安定性に優れたACP活性
測定用試液を提供することを目的とする。
［発明の構成］ 本発明は、一般式［Ｉ］ （式中、R1及びR4は何れか一方がハロゲン原子を示し、
他方は水素原子又はメチル基を示す。また、R2及びR3は
夫々独立して水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシア
ルキル基、スルホアルキル基、カルボキシアルキル基、
スルホニルアルキル基、チオアルキル基、低級アルコキ
シ基、スルホン酸基、カルボキシル基又はハロゲン原子
を示す。）で表わされる２−ハロ−４−ニトロフェニル
リン酸（以下、HNPと略記する。）又はその誘導体、又
はそれらの塩類と、21個の水酸基のうち、少なくとも２
個以上が炭素数２〜４のカルボキシアルキル基、炭素数
２〜４のスルホアルキル基、炭素数２〜４のモノ又はジ
ヒドロキシアルキル基、又はメチル基であるβ−CD誘導
体とを含んでなる酸性ホスファターゼ活性測定用試液で
ある。
他方は水素原子又はメチル基を示す。また、R2及びR3は
夫々独立して水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシア
ルキル基、スルホアルキル基、カルボキシアルキル基、
スルホニルアルキル基、チオアルキル基、低級アルコキ
シ基、スルホン酸基、カルボキシル基又はハロゲン原子
を示す。）で表わされる２−ハロ−４−ニトロフェニル
リン酸（以下、HNPと略記する。）又はその誘導体、又
はそれらの塩類と、21個の水酸基のうち、少なくとも２
個以上が炭素数２〜４のカルボキシアルキル基、炭素数
２〜４のスルホアルキル基、炭素数２〜４のモノ又はジ
ヒドロキシアルキル基、又はメチル基であるβ−CD誘導
体とを含んでなる酸性ホスファターゼ活性測定用試液で
ある。
即ち、本発明者らは、レイトアッセイに使用でき且つ
安定性に優れたACP活性測定用試液を開発すべく鋭意研
究を重ねた結果、HNP又はその誘導体、又はそれらの塩
類（以下、HNP等と略記する。）を本発明に係る特定のC
D誘導体と共存させた場合には、ACPの作用によりHNP等
から生成する２−ハロ−４−ニトロフェノール（以下、
HNと略記する。）又はその誘導体の見かけのpKaを小さ
くして、ACPの至適pH範囲内でほぼ100％解離させること
ができることのみならず、HNP等の溶液中での安定性
が、α又はβ−CDと共存させた場合に比較して、著しく
向上し、α又はβ−CDを使用する場合には２液法の形態
で使用せざるを得なかった、ACP活性測定用試液を１液
法の形態で利用できることを見出し本発明を完成するに
至った。
安定性に優れたACP活性測定用試液を開発すべく鋭意研
究を重ねた結果、HNP又はその誘導体、又はそれらの塩
類（以下、HNP等と略記する。）を本発明に係る特定のC
D誘導体と共存させた場合には、ACPの作用によりHNP等
から生成する２−ハロ−４−ニトロフェノール（以下、
HNと略記する。）又はその誘導体の見かけのpKaを小さ
くして、ACPの至適pH範囲内でほぼ100％解離させること
ができることのみならず、HNP等の溶液中での安定性
が、α又はβ−CDと共存させた場合に比較して、著しく
向上し、α又はβ−CDを使用する場合には２液法の形態
で使用せざるを得なかった、ACP活性測定用試液を１液
法の形態で利用できることを見出し本発明を完成するに
至った。
一般式［Ｉ］で示される本発明に係るHNP又はその誘
導体に於いて、R1又はR4で示されるハロゲン原子として
は、例えば塩素，臭素，沃素，弗素等が挙げられる。ま
た、R2,R3で示される低級アルキル基としては、例えば
メチル基，エチル基，プロピル基，ブチル基，アミル基
等炭素数１〜５の直鎖状若しくは分枝状のアルキル基が
挙げられ、ヒドロキシアルキル基、スルホアルキル基、
カルボキシアルキル基、スルホニルアルキル基、チオア
ルキル基のアルキル基としては、例えばメチル基，エチ
ル基，プロピル基，ブチル基，アミル基等炭素数１〜５
の直鎖状若しくは分枝状のアルキル基が挙げられ、低級
アルコキシ基としては、例えばメトキシ基，エトキシ
基，プロポキシ基，ブトキシ基等炭素数１〜４の直鎖状
若しくは分枝状のアルコキシ基が挙げられ、ハロゲン原
子としては、例えば塩素，臭素，沃素，弗素等が挙げら
れる。また、スルホン酸基，スルホアルキル基のスルホ
ン酸基、カルボキシル基，カルボキシルアルキル基のカ
ルボキシル基は、例えばナトリウム，カリウム，リチウ
ム等のアルカリ金属塩やアンモニウム塩等の如き塩の形
になっていてもよい。また、一般式［Ｉ］で示される本
発明に係るHNP又はその誘導体の塩類としては、例えば
ナトリウム，カリウム，リチウム等のアルカリ金属塩、
アンモニウム塩、例えばトリエタノールアミン塩，トリ
エチルアミン塩，シクロヘキシルアミン塩等の有機塩基
の塩等が挙げられる。
導体に於いて、R1又はR4で示されるハロゲン原子として
は、例えば塩素，臭素，沃素，弗素等が挙げられる。ま
た、R2,R3で示される低級アルキル基としては、例えば
メチル基，エチル基，プロピル基，ブチル基，アミル基
等炭素数１〜５の直鎖状若しくは分枝状のアルキル基が
挙げられ、ヒドロキシアルキル基、スルホアルキル基、
カルボキシアルキル基、スルホニルアルキル基、チオア
ルキル基のアルキル基としては、例えばメチル基，エチ
ル基，プロピル基，ブチル基，アミル基等炭素数１〜５
の直鎖状若しくは分枝状のアルキル基が挙げられ、低級
アルコキシ基としては、例えばメトキシ基，エトキシ
基，プロポキシ基，ブトキシ基等炭素数１〜４の直鎖状
若しくは分枝状のアルコキシ基が挙げられ、ハロゲン原
子としては、例えば塩素，臭素，沃素，弗素等が挙げら
れる。また、スルホン酸基，スルホアルキル基のスルホ
ン酸基、カルボキシル基，カルボキシルアルキル基のカ
ルボキシル基は、例えばナトリウム，カリウム，リチウ
ム等のアルカリ金属塩やアンモニウム塩等の如き塩の形
になっていてもよい。また、一般式［Ｉ］で示される本
発明に係るHNP又はその誘導体の塩類としては、例えば
ナトリウム，カリウム，リチウム等のアルカリ金属塩、
アンモニウム塩、例えばトリエタノールアミン塩，トリ
エチルアミン塩，シクロヘキシルアミン塩等の有機塩基
の塩等が挙げられる。
一般式［Ｉ］で示される本発明に係るHNP又はその誘
導体の各種塩類の中で、例えば２−クロル−４−ニトロ
フェニルリン酸のモノカリウム塩、モノアンモニウム
塩、モノ（エチル ２−ヒドロキシエチルアンモニウ
ム）塩、モノ（1,1−ジメチル−２−ヒドロキシエチル
アンモニウム）塩、モノ［1,1−ビス（ヒドロキシエチ
ルメチル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム］塩、
モノ（２−ヒドロキシエチルアンモニウム）塩等は保存
時の安定性及び水に対する溶解性が他と比べて特に優れ
ているので本発明で用いる基質として特に好ましい。
導体の各種塩類の中で、例えば２−クロル−４−ニトロ
フェニルリン酸のモノカリウム塩、モノアンモニウム
塩、モノ（エチル ２−ヒドロキシエチルアンモニウ
ム）塩、モノ（1,1−ジメチル−２−ヒドロキシエチル
アンモニウム）塩、モノ［1,1−ビス（ヒドロキシエチ
ルメチル）−２−ヒドロキシエチルアンモニウム］塩、
モノ（２−ヒドロキシエチルアンモニウム）塩等は保存
時の安定性及び水に対する溶解性が他と比べて特に優れ
ているので本発明で用いる基質として特に好ましい。
一般式［Ｉ］で示される本発明に係るHNP又はその誘
導体は、自体公知のリン酸エステルの合成方法、例えば
実験化学講座19,有機化合物の合成I,第３版,206〜210頁
［丸善（株）発行］等に記載の方法に従って容易に合成
し得る。即ち、例えば、HN又はその誘導体を例えばベン
ゼン，トルエン等適当な溶媒に溶解し、ピリジン等の脱
塩酸剤の存在下、オキシ塩化リンを加えて反応させた
後、水を加えて加水分解し、水層より抽出或は析出させ
ることにより目的とするHNP又はその誘導体を得ること
ができる。また、これを所望の塩基又は塩類で造塩反応
させることにより、本発明に係るHNP又はその誘導体の
塩類を容易に得ることができる。
導体は、自体公知のリン酸エステルの合成方法、例えば
実験化学講座19,有機化合物の合成I,第３版,206〜210頁
［丸善（株）発行］等に記載の方法に従って容易に合成
し得る。即ち、例えば、HN又はその誘導体を例えばベン
ゼン，トルエン等適当な溶媒に溶解し、ピリジン等の脱
塩酸剤の存在下、オキシ塩化リンを加えて反応させた
後、水を加えて加水分解し、水層より抽出或は析出させ
ることにより目的とするHNP又はその誘導体を得ること
ができる。また、これを所望の塩基又は塩類で造塩反応
させることにより、本発明に係るHNP又はその誘導体の
塩類を容易に得ることができる。
本発明に係るHNP等のACP活性測定用試液中の濃度とし
ては、３〜10mM程度が好ましく用いられる。
ては、３〜10mM程度が好ましく用いられる。
本発明に於いて用いられる特定のCD誘導体としては、
β−CDの21個の水酸基の内、少なくとも２個以上が炭素
数２〜４のカルボキシアルキル基、炭素数２〜４のスル
ホアルキル基、炭素数２〜４のモノ又はジヒドロキシア
ルキル基、又はメチル基で置換されたβ−CD誘導体が挙
げられる。
β−CDの21個の水酸基の内、少なくとも２個以上が炭素
数２〜４のカルボキシアルキル基、炭素数２〜４のスル
ホアルキル基、炭素数２〜４のモノ又はジヒドロキシア
ルキル基、又はメチル基で置換されたβ−CD誘導体が挙
げられる。
本発明に係るβ−CD誘導体に於いて、上記した如き置
換基で置換された残りの水酸基は、無置換である場合が
一般的であるが、その一部又は全てが他の基に置き換わ
っているものでも、それらの置換基が本発明の効果を損
なわないような基であるならば、これを妨げない。
換基で置換された残りの水酸基は、無置換である場合が
一般的であるが、その一部又は全てが他の基に置き換わ
っているものでも、それらの置換基が本発明の効果を損
なわないような基であるならば、これを妨げない。
本発明に係るβ−CD7誘導体の具体例としては、例え
ばカルボキシメチル−β−CD、カルボキシエチル−β−
CD、カルボキシメチルエチル−β−CD、スルホプロピル
−β−CD、ヒドロキシエチル−β−CD、２−ヒドロキシ
プロピル−β−CD、３−ヒドロキシプロピル−β−CD、
2,3−ジヒドロキシプロピル−β−CD、メチル−β−CD
等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではな
い。
ばカルボキシメチル−β−CD、カルボキシエチル−β−
CD、カルボキシメチルエチル−β−CD、スルホプロピル
−β−CD、ヒドロキシエチル−β−CD、２−ヒドロキシ
プロピル−β−CD、３−ヒドロキシプロピル−β−CD、
2,3−ジヒドロキシプロピル−β−CD、メチル−β−CD
等が挙げられるが、勿論これらに限定されるものではな
い。
これら本発明に於いて使用されるβ−CD誘導体は、例
えば、米国特許第3,453,258号明細書；米国特許第3,45
3,259号明細書；米国特許第3,459,731号明細書等に記載
の一般的製造法により容易に合成することができるの
で、そのようにして合成されたものを用いることで足り
る。
えば、米国特許第3,453,258号明細書；米国特許第3,45
3,259号明細書；米国特許第3,459,731号明細書等に記載
の一般的製造法により容易に合成することができるの
で、そのようにして合成されたものを用いることで足り
る。
これら本発明に係るβ−CD誘導体は、単独で用いても
よいし、２種以上併用してもよく、その使用量としては
基質として用いられるHNP等と等モル〜５倍モル量程度
が好ましく用いられる。
よいし、２種以上併用してもよく、その使用量としては
基質として用いられるHNP等と等モル〜５倍モル量程度
が好ましく用いられる。
HNP等と特定のβ−CD誘導体を含んでなる本発明の測
定用試液に、更にフェノール、フェノール誘導体及びサ
リチル酸誘導体からなる群より選ばれた少なくとも一種
の化合物を共存させると、安定性が更に向上するので望
ましい。そのような安定化作用を有する化合物（以下、
安定化剤と略記する。）としては、本発明に係る特定の
β−CD誘導体との包接に係る相互作用がHNP等より強い
がHN等より弱いものであって、ある程度の水溶性を有す
るものであれば特に限定されることなく挙げられるが、
例えばフェノール、例えばｐ−フェノールスルホン酸,
2,3−ジクロロフェノール,2,4−ジクロロフェノール,2,
5−ジクロロフェノール,2,6−ジクロロフェノール,3,4
−ジクロロフェノール,3,5−ジクロロフェノール,4−ク
ロロ−２−メチルフェノール,4−クロロ−３−メチルフ
ェノール,2−クロロ−4,5−ジメチルフェノール,4−メ
トキシフェノール,2,4,6−トリクロロフェノール,4−ク
ロロ−3,5−ジメチルフェノール,3,5−ジメチルフェノ
ール,4,4′−チオジフェノール等のフェノール誘導体、
例えば５−ブロモサリチル酸,5−クロロサリチル酸,5,
5′−チオジサリチル酸等のサリチル酸誘導体等が好ま
しく挙げられる。
定用試液に、更にフェノール、フェノール誘導体及びサ
リチル酸誘導体からなる群より選ばれた少なくとも一種
の化合物を共存させると、安定性が更に向上するので望
ましい。そのような安定化作用を有する化合物（以下、
安定化剤と略記する。）としては、本発明に係る特定の
β−CD誘導体との包接に係る相互作用がHNP等より強い
がHN等より弱いものであって、ある程度の水溶性を有す
るものであれば特に限定されることなく挙げられるが、
例えばフェノール、例えばｐ−フェノールスルホン酸,
2,3−ジクロロフェノール,2,4−ジクロロフェノール,2,
5−ジクロロフェノール,2,6−ジクロロフェノール,3,4
−ジクロロフェノール,3,5−ジクロロフェノール,4−ク
ロロ−２−メチルフェノール,4−クロロ−３−メチルフ
ェノール,2−クロロ−4,5−ジメチルフェノール,4−メ
トキシフェノール,2,4,6−トリクロロフェノール,4−ク
ロロ−3,5−ジメチルフェノール,3,5−ジメチルフェノ
ール,4,4′−チオジフェノール等のフェノール誘導体、
例えば５−ブロモサリチル酸,5−クロロサリチル酸,5,
5′−チオジサリチル酸等のサリチル酸誘導体等が好ま
しく挙げられる。
これら安定化剤は、単独で用いてもよいし、２種以上
併用してもよく、その使用量としては、ACP活性測定用
試液に沈殿等が生じない範囲であれば特に限定されない
が、基質といて用いられるHNP等の0.5倍モル量以上、好
ましくは等モル〜５倍モル量程度が用いられる。
併用してもよく、その使用量としては、ACP活性測定用
試液に沈殿等が生じない範囲であれば特に限定されない
が、基質といて用いられるHNP等の0.5倍モル量以上、好
ましくは等モル〜５倍モル量程度が用いられる。
また、これら安定化剤の安定化効果は、一般に、基質
であるHNP等に比較して、親水性の弱いもののほうが優
れている。このことから、これらの化合物がHNP等の自
然分解を防止する機構としては、共存するβ−CD誘導体
との包接反応に於いて競合反応をするためではないかと
推察される。即ち、HNP等は、β−CD誘導体により包接
されることによって分解速度が加速されていると考えら
れるが、この溶液中に、更に上記した如き安定化剤を共
存させた場合には、β−CD誘導体は、HNP等とよりも、
これら安定化剤と優先的に包接化合物を形成し、その結
果β−CDとHNP等との包接化合物の形成を妨害するため
に、その安定性が向上すると推察される。
であるHNP等に比較して、親水性の弱いもののほうが優
れている。このことから、これらの化合物がHNP等の自
然分解を防止する機構としては、共存するβ−CD誘導体
との包接反応に於いて競合反応をするためではないかと
推察される。即ち、HNP等は、β−CD誘導体により包接
されることによって分解速度が加速されていると考えら
れるが、この溶液中に、更に上記した如き安定化剤を共
存させた場合には、β−CD誘導体は、HNP等とよりも、
これら安定化剤と優先的に包接化合物を形成し、その結
果β−CDとHNP等との包接化合物の形成を妨害するため
に、その安定性が向上すると推察される。
本発明の測定用試液を用いるACP活性測定法の方法そ
れ自体は、測定用試液として本発明の測定用試液を用い
る以外は自体公知のACP活性測定法の常法に従ってこれ
を行えば足りる。即ち、例えば、Enzyme,20,248〜256頁
（1975）等に記載の方法に準拠し、ACPの酵素反応によ
り遊離した２−ハロ−４−ニトロフェノール又はその誘
導体を比色し、ACP活性を測定すればよい。
れ自体は、測定用試液として本発明の測定用試液を用い
る以外は自体公知のACP活性測定法の常法に従ってこれ
を行えば足りる。即ち、例えば、Enzyme,20,248〜256頁
（1975）等に記載の方法に準拠し、ACPの酵素反応によ
り遊離した２−ハロ−４−ニトロフェノール又はその誘
導体を比色し、ACP活性を測定すればよい。
また、前立腺癌の診断の場合に、Ｌ（＋）酒石酸がAC
Pの内の前立腺画分を抑制する作用があることを利用
し、これを用いて測定を行うことがあるが、このような
場合にも本発明の測定試液は当然のことながら既存のAC
P活性測定用試液と同様に使用可能であることは言うま
でもない。
Pの内の前立腺画分を抑制する作用があることを利用
し、これを用いて測定を行うことがあるが、このような
場合にも本発明の測定試液は当然のことながら既存のAC
P活性測定用試液と同様に使用可能であることは言うま
でもない。
本発明の測定法に於いて用いられる緩衝剤その他の試
薬類は自体公知の測定法に於いて用いられるものに準じ
てこれを用いればよく、また、測定時のpHや測定温度等
の測定条件も自体公知のACP活性測定法のそれに準じて
行うことで足りる。
薬類は自体公知の測定法に於いて用いられるものに準じ
てこれを用いればよく、また、測定時のpHや測定温度等
の測定条件も自体公知のACP活性測定法のそれに準じて
行うことで足りる。
本発明のACP活性測定用試液は、血液、尿等生体試料
中のACP活性の測定に極めて有効に使用でき、その測定
法として、一点測定法、レイトアッセイ法等の何れにも
適用できる。また、本発明のACP活性測定用試液を用い
る測定法は、用手法に用い得ることは勿論であるが、自
動分析装置への適用性もよく、殊に本発明のACP活性測
定用試液とＬ（＋）酒石酸を含む緩衝液とを組み合わせ
て用いれば、１チャンネル内で総ACP活性と前立腺由来
外ACP活性とを連続して測定でき非常に有利である。
尚、本発明のACP活性測定用試液の成分を適宜２液に分
割して、２液法としてACP活性の測定を行っても、同様
に測定し得ることは言うまでもない。
中のACP活性の測定に極めて有効に使用でき、その測定
法として、一点測定法、レイトアッセイ法等の何れにも
適用できる。また、本発明のACP活性測定用試液を用い
る測定法は、用手法に用い得ることは勿論であるが、自
動分析装置への適用性もよく、殊に本発明のACP活性測
定用試液とＬ（＋）酒石酸を含む緩衝液とを組み合わせ
て用いれば、１チャンネル内で総ACP活性と前立腺由来
外ACP活性とを連続して測定でき非常に有利である。
尚、本発明のACP活性測定用試液の成分を適宜２液に分
割して、２液法としてACP活性の測定を行っても、同様
に測定し得ることは言うまでもない。
本発明のACP活性測定用試液の調製方法としては、蒸
留水や精製水により所定量に溶解すれば目的の組成とな
るように調製された凍結乾燥品として保存しておき、必
要に応じて溶解して調製する方法、或は基質であるHNP
等を含む溶液とそれ以外の必要成分を含む溶液とを調製
して保存しておき、これを用時適宜混合することにより
調製する方法等、自体公知の臨床検査用試薬の調製方法
に準じてこれを行えばよい。
留水や精製水により所定量に溶解すれば目的の組成とな
るように調製された凍結乾燥品として保存しておき、必
要に応じて溶解して調製する方法、或は基質であるHNP
等を含む溶液とそれ以外の必要成分を含む溶液とを調製
して保存しておき、これを用時適宜混合することにより
調製する方法等、自体公知の臨床検査用試薬の調製方法
に準じてこれを行えばよい。
以下に実験例及び実施例を挙げて、本発明を更に詳細
に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるも
のではない。
に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるも
のではない。
［実施例］ 実験例1.2−クロル−４−ニトロフェノールの分子吸光
係数の測定 （緩衝液） コハク酸5.9gを蒸留水800mlに溶解し、これを2Nの水
酸化カリウム溶液でpH6.0に調整した後、全量1000mlと
して緩衝液とした。
係数の測定 （緩衝液） コハク酸5.9gを蒸留水800mlに溶解し、これを2Nの水
酸化カリウム溶液でpH6.0に調整した後、全量1000mlと
して緩衝液とした。
（操作法） 上記緩衝液に、本発明に係るCD誘導体を8mM及び２−
クロル−４−ニトロフェノールを0.5mMとなるように添
加したものを試料として、常法により２−クロル−４−
ニトロフェノールの分子吸光係数を求めた。
クロル−４−ニトロフェノールを0.5mMとなるように添
加したものを試料として、常法により２−クロル−４−
ニトロフェノールの分子吸光係数を求めた。
（結果） 得られた結果を表１に示す。
実験例2.基質の安定性の検討 （基質緩衝液） 実験例１で使用した緩衝液に、２−クロル−４−ニト
ロフェニルリン酸モノアンモニウムが4mM及び本発明に
係るCD誘導体が8mMとなるように溶解し、基質溶液とし
た。
ロフェニルリン酸モノアンモニウムが4mM及び本発明に
係るCD誘導体が8mMとなるように溶解し、基質溶液とし
た。
（操作法） 基質緩衝液の調製直後の410nmの吸光度E0及びそれを
室温で３日間保存した後の410nmの吸光度E3を測定し
た。
室温で３日間保存した後の410nmの吸光度E3を測定し
た。
また、CD誘導体無添加の基質緩衝液を調製し、上記と
同様にして、CD誘導体無添加の基質緩衝液の調製直後の
410nmの吸光度EB10及びそれを室温で３日間保存した後
の410nmの吸光度EB13を測定した。
同様にして、CD誘導体無添加の基質緩衝液の調製直後の
410nmの吸光度EB10及びそれを室温で３日間保存した後
の410nmの吸光度EB13を測定した。
これらの値を下記式に代入して、分解率Ｄを求めた。
尚、式中、εCDは、実験例１で求めた所定のCD誘導体を
用いた場合の２−クロル−４−ニトロフェノールの分子
吸光係数を、εはCD誘導体無添加の場合の２−クロル−
４−ニトロフェノールの分子吸光係数を夫々示す。
尚、式中、εCDは、実験例１で求めた所定のCD誘導体を
用いた場合の２−クロル−４−ニトロフェノールの分子
吸光係数を、εはCD誘導体無添加の場合の２−クロル−
４−ニトロフェノールの分子吸光係数を夫々示す。
Ａ＝（E3−E0）÷εCD A0＝（EB13−EB10）÷ε Ｄ（％）＝Ａ÷A0×100 （結果） 得られた結果を表１に併せて示す。
比較例1.無置換CDを用いた場合の２−クロル−４−ニト
ロフェノールの分子吸光係数の測定 実験例１に於いて、本発明に係るCD誘導体の代りにα
−CD、β−CD又はγ−CDを用いた以外は、実験例１と同
様の操作法により２−クロル−４−ニトロフェノールの
分子吸光係数を求めた。
ロフェノールの分子吸光係数の測定 実験例１に於いて、本発明に係るCD誘導体の代りにα
−CD、β−CD又はγ−CDを用いた以外は、実験例１と同
様の操作法により２−クロル−４−ニトロフェノールの
分子吸光係数を求めた。
（結果） 得られた結果を表１に併せて示す。
比較例2.無置換CDを用いた場合の基質の安定性の検討 実験例２の基質溶液に於いて、本発明に係るCD誘導体
の代りにα−CD、β−CD又はγ−CDを用いた以外は、実
験例２と同様の操作法により分解率Ｄを求めた。
の代りにα−CD、β−CD又はγ−CDを用いた以外は、実
験例２と同様の操作法により分解率Ｄを求めた。
（結果） 得られた結果を表１に併せて示す。
尚、下記表に於いて、3HP−β−CDは３−ヒドロキシ
プロピル−β−CDを、Ｍ−β−CDはメチル−β−CDを、
2,3DHP−β−CDは2,3−ジヒドロキシプロピル−β−CD
を、2HE−β−CDは２−ヒドロキシエチル−β−CDを、S
P−β−CDはスルホプロピル−β−CDを夫々示す。
プロピル−β−CDを、Ｍ−β−CDはメチル−β−CDを、
2,3DHP−β−CDは2,3−ジヒドロキシプロピル−β−CD
を、2HE−β−CDは２−ヒドロキシエチル−β−CDを、S
P−β−CDはスルホプロピル−β−CDを夫々示す。
また、置換度は、β−CD中に存在する21個の水酸基の
うち、置換基が導入された個数を表わす。
うち、置換基が導入された個数を表わす。
この結果から明らかな如く、本発明に係るCD誘導体を
包接化合物として用いた場合、２−クロル−４−ニトロ
フェノールの溶液中での分子吸光係数はα−又はβ−CD
を用いた場合とほぼ同等の値を示し、且つ基質の溶液中
での安定性はα−及びβ−CDに比較して明らかに改善さ
れていることが判る。
包接化合物として用いた場合、２−クロル−４−ニトロ
フェノールの溶液中での分子吸光係数はα−又はβ−CD
を用いた場合とほぼ同等の値を示し、且つ基質の溶液中
での安定性はα−及びβ−CDに比較して明らかに改善さ
れていることが判る。
実験例3.フェノール、フェノール誘導体及びサリチル酸
誘導体類の添加効果の検討 HNP等とCD誘導体を共存させたACP活性測定用試液に、
安定化剤としてフェノール、フェノール誘導体又はサリ
チル酸誘導体を更に添加した場合のACP活性測定用試液
の安定化効果について検討を行った。
誘導体類の添加効果の検討 HNP等とCD誘導体を共存させたACP活性測定用試液に、
安定化剤としてフェノール、フェノール誘導体又はサリ
チル酸誘導体を更に添加した場合のACP活性測定用試液
の安定化効果について検討を行った。
（試液） 以下の組成の緩衝液を試液とした。
コハク酸 50mM ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモ
ニウム 4mM HP−β−CD（置換度:5.0） 8mM 安定化剤 4mM KOH 適当量 pH 6.0 （操作法） 所定の安定化剤を添加した試液の調製直後の410nmの
吸光度ＥＳ・B1及び室温で３日間保存後の410nmの吸光
度ESを測定した。
ニウム 4mM HP−β−CD（置換度:5.0） 8mM 安定化剤 4mM KOH 適当量 pH 6.0 （操作法） 所定の安定化剤を添加した試液の調製直後の410nmの
吸光度ＥＳ・B1及び室温で３日間保存後の410nmの吸光
度ESを測定した。
同様にして、安定化剤無添加の試液の調製直後の410n
mの吸光度ＥＴ・B1及び室温で３日間保存後の410nmの吸
光度ETを測定した。
mの吸光度ＥＴ・B1及び室温で３日間保存後の410nmの吸
光度ETを測定した。
このようにして得られた各測定値を次式に代入して、
安定化率Ｓを求めた。
安定化率Ｓを求めた。
Ｓ（％）＝（ES−ＥＳ・B1）÷（ET−ＥＴ・B1）×100 得られた結果を表２−１及び２−２に示す。
表２−１及び２−２の結果から明らかな如く、本発明
に係る安定化剤を添加することにより、ACP活性測定用
試液の安定性が増加することが判る。
に係る安定化剤を添加することにより、ACP活性測定用
試液の安定性が増加することが判る。
実験例4.安定化剤の至適添加量の検討（その１） 実験例３の結果から本発明に係る安定化剤の安定化効
果が確認できたので、その至適添加量の検討を行った。
果が確認できたので、その至適添加量の検討を行った。
（検体） 新鮮人血清を検体とした。
（試液） 以下の組成の緩衝液を試液とした。
コハク酸 50mM ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモ
ニウム 4mM HP−β−CD（置換度:5.0） 8mM 安定化剤 所定濃度 KOH 適当量 pH 6.0 （操作法） （１）安定化率の検討 所定濃度の各安定化剤を添加した試液の調製直後の41
0nmの吸光度ＥＳ・B1及び室温で３日間保存した後の410
nmの吸光度ESを測定した。
ニウム 4mM HP−β−CD（置換度:5.0） 8mM 安定化剤 所定濃度 KOH 適当量 pH 6.0 （操作法） （１）安定化率の検討 所定濃度の各安定化剤を添加した試液の調製直後の41
0nmの吸光度ＥＳ・B1及び室温で３日間保存した後の410
nmの吸光度ESを測定した。
同様にして、安定化剤無添加の試液の調製直後の410n
mの吸光度ＥＴ・B1及び室温で３日間保存した後の410nm
の吸光度ETを測定した。
mの吸光度ＥＴ・B1及び室温で３日間保存した後の410nm
の吸光度ETを測定した。
このようにして得られた各測定値を次式に代入して、
安定化率Ｓを求めた。
安定化率Ｓを求めた。
Ｓ（％）＝（ES−ＥＳ・B1）÷（ET−ＥＴ・B1）×100 （２）ACP活性測定への影響の検討 検体200μｌと試液2.8mlとを良く混合し、37℃で２分
間放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あたりの
吸光度増加率ΔＥを求めた。
間放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あたりの
吸光度増加率ΔＥを求めた。
試料の代りに蒸留水を用いて同様に操作しΔEB1を求
めた。
めた。
得られた（ΔＥ−ΔEB1）値を用い、１分間に１μmol
の２−クロル−４−ニトロフェノールを遊離する酵素量
を１単位（IU）として総ACP活性値A1（IU/l）を求め
た。
の２−クロル−４−ニトロフェノールを遊離する酵素量
を１単位（IU）として総ACP活性値A1（IU/l）を求め
た。
また、検体、蒸留水多び安定化剤無添加の試液を用い
て同様の操作を行い、総ACP活性A2（IU/l）を求めた。
て同様の操作を行い、総ACP活性A2（IU/l）を求めた。
このようにして得られたA1とA2とを次式に代入して、
安定化剤のACP活性測定への影響率Eff（％）を求めた。
安定化剤のACP活性測定への影響率Eff（％）を求めた。
Eff（％）＝A1÷A2×100 得られた結果を表３−１、３−２及び３−３に示す。
実験例5.安定化剤の至適添加量の検討（その２） 実験例４の試液中のHP−β−CDの代りにＭ−β−CD
（置換度:14.0）を使用した以外は、実験例４と同じ検
体を用い、同様の操作法により検討を行った。
（置換度:14.0）を使用した以外は、実験例４と同じ検
体を用い、同様の操作法により検討を行った。
結果を表４に示す。
表３−１〜３及び表４の結果から明らかな如く、本発
明に係る安定化剤の必要量としては、HNP等に対して0.5
倍モル以上であることが判る。
明に係る安定化剤の必要量としては、HNP等に対して0.5
倍モル以上であることが判る。
また、実験例４及び５に於いて、ACPとの反応の結果
遊離してくる２−クロロ−４−ニトロフェノールの分子
吸光係数は安定化剤の添加により、何ら影響されなかっ
た。
遊離してくる２−クロロ−４−ニトロフェノールの分子
吸光係数は安定化剤の添加により、何ら影響されなかっ
た。
実施例1. （試料） 新鮮人血清30検体を試料とした。
（試液） （１）基質緩衝液 以下の組成の緩衝液を基質緩衝液とした。
コハク酸 50mM ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモ
ニウム 4mM Ｍ−β−CD（置換度:14.0） 8mM KOH 適当量 pH 6.0 （２）酒石酸溶液 以下の組成のものを酒石酸溶液とした。
ニウム 4mM Ｍ−β−CD（置換度:14.0） 8mM KOH 適当量 pH 6.0 （２）酒石酸溶液 以下の組成のものを酒石酸溶液とした。
Ｌ（＋）酒石酸 100mM NaOH 適当量 pH 6.0 （操作法） 試料200μｌと基質緩衝液2.8mlとを良く混合し、37℃
で２分間放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あ
たりの吸光度増加率ΔETを求めた。
で２分間放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あ
たりの吸光度増加率ΔETを求めた。
次いで、前立腺由来外ACP活性を求めるために、これ
に酒石酸溶液700μｌを加え良く混合し、37℃で１分間
放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あたりの吸
光度増加率ΔESを求めた。
に酒石酸溶液700μｌを加え良く混合し、37℃で１分間
放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あたりの吸
光度増加率ΔESを求めた。
試料の代りに蒸留水を用いて同様に操作しΔＥＴ・B1
及びΔＥＳ・B1を求めた。
及びΔＥＳ・B1を求めた。
得られた（ΔET−ΔＥＴ・B1）値と（ΔES−ΔＥ
Ｓ・B1）値とを用い、１分間に１μmolの２−クロロ−
４−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位（IU）
として各試料中の総ACP活性値A1（IU/l）及び前立腺由
来外ACP活性値A2（IU/l）を求め、（A1−A2）値から前
立腺由来ACP活性値（IU/l）を求めた。
Ｓ・B1）値とを用い、１分間に１μmolの２−クロロ−
４−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位（IU）
として各試料中の総ACP活性値A1（IU/l）及び前立腺由
来外ACP活性値A2（IU/l）を求め、（A1−A2）値から前
立腺由来ACP活性値（IU/l）を求めた。
比較例1.p−ニトロフェニルリン酸を用いた前立腺由来A
CP活性の測定 （試料） 実施例１と同じ試料を用いた。
CP活性の測定 （試料） 実施例１と同じ試料を用いた。
（試液） （１）基質緩衝液 以下の組成の緩衝液を基質緩衝液とした。
クエン酸・１水和物 50mM ｐ−ニトロフェニルリン酸２ナトリウム・６水和物 10mM NaOH 適当量 pH 6.0 （２）酒石酸溶液 以下の組成のものを酒石酸溶液とした。
Ｌ（＋）酒石酸 200mM NaOH 適当量 pH 6.0 （３）アルカリ溶液 ２％水酸化ナトリウム溶液を用いた。
（操作法） 基質緩衝液100mlに蒸留水10mlを加えて良く混合し総A
CP活性測定用基質緩衝液とした。この0.5mlを37℃の恒
温槽中で３分間予備加温し、これに試料100μｌを加え3
7℃で30分間保温後アルカリ溶液5.0mlを加え、405nmの
吸光度ETを求めた。試料の代りに蒸留水を用いて同様に
操作を行いＥＴ・B1を求めた。
CP活性測定用基質緩衝液とした。この0.5mlを37℃の恒
温槽中で３分間予備加温し、これに試料100μｌを加え3
7℃で30分間保温後アルカリ溶液5.0mlを加え、405nmの
吸光度ETを求めた。試料の代りに蒸留水を用いて同様に
操作を行いＥＴ・B1を求めた。
基質緩衝液100mlに酒石酸溶液10mlを加えてよく混合
し前立腺由来外ACP活性測定用基質緩衝液とした。この
0.5mlを用いて前記と同じ試料と蒸留水について同様に
操作し、ES及びＥＳ・B1を求めた。
し前立腺由来外ACP活性測定用基質緩衝液とした。この
0.5mlを用いて前記と同じ試料と蒸留水について同様に
操作し、ES及びＥＳ・B1を求めた。
得られた（ET−ＥＴ・B1）値と（ES−ＥＳ・B1）値を
用い、１分間に１μmolのｐ−ニトロフェノールを遊離
する酵素量を１単位（IU）として、各試料中の総ACP活
性値B1（IU/l）及び前立腺由来外ACP活性値B2（IU/l）
を求め、（B1−B2）値から前立腺由来ACP活性値（IU/
l）を求めた。
用い、１分間に１μmolのｐ−ニトロフェノールを遊離
する酵素量を１単位（IU）として、各試料中の総ACP活
性値B1（IU/l）及び前立腺由来外ACP活性値B2（IU/l）
を求め、（B1−B2）値から前立腺由来ACP活性値（IU/
l）を求めた。
実施例１及び比較例１により得られた結果を、表５−
１及び５−２に併せて示す。
１及び５−２に併せて示す。
表５−１及び５−２の結果から明らかな如く、実施例
１で用いた基質と比較例１で用いた基質とでは基質親和
性が異なるため、個々の測定値は夫々顕著に異なるが、
（実施例１で得られた測定値は比較例１で得られた値よ
りも総じて約15％高い。）、相関は極めて良好である。
１で用いた基質と比較例１で用いた基質とでは基質親和
性が異なるため、個々の測定値は夫々顕著に異なるが、
（実施例１で得られた測定値は比較例１で得られた値よ
りも総じて約15％高い。）、相関は極めて良好である。
実施例2. （試料） 新鮮人血清53検体を試料とした。
（試液） （１）基質緩衝液 以下の組成の緩衝液を基質緩衝液とした。
コハク酸 50mM ２−クロル−４−ニトロフェニルリン酸モノアンモ
ニウム 4mM Ｍ−β−CD（置換度:14.0） 8mM ５−ブロモサリチル酸 6mM KOH 適当量 pH 6.0 （２）酒石酸溶液 以下の組成のものを酒石酸溶液とした。
ニウム 4mM Ｍ−β−CD（置換度:14.0） 8mM ５−ブロモサリチル酸 6mM KOH 適当量 pH 6.0 （２）酒石酸溶液 以下の組成のものを酒石酸溶液とした。
Ｌ（＋）酒石酸 100mM NaOH 適当量 pH 6.0 （操作法） 試料200μｌと基質緩衝液2.8mlとを良く混合し、37℃
で２分間放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あ
たりの吸光度増加率ΔETを求めた。
で２分間放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あ
たりの吸光度増加率ΔETを求めた。
次いで、前立腺由来外ACP活性を求めるために、これ
を酒石酸溶液700μｌを加えよく混合し、37℃で１分間
放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あたりの吸
光度増加率ΔESを求めた。
を酒石酸溶液700μｌを加えよく混合し、37℃で１分間
放置した後、37℃で、410nmに於ける１分間あたりの吸
光度増加率ΔESを求めた。
試料の代りに蒸留水を用いて同様に操作し、ΔＥ
Ｔ・B1及びΔＥＳ・B1を求めた。
Ｔ・B1及びΔＥＳ・B1を求めた。
得られた（ΔET−ΔＥＴ・B1）値と（ΔES−ΔＥ
Ｓ・B1）値を用い、１分間に１μmolの２−クロル−４
−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位（IU）と
して、各試料中の総ACP活性値A1（IU/l）及び前立腺由
来外ACP活性値A2（IU/l）を求め、（A1−A2）値から前
立腺由来ACP活性値（IU/l）を求めた。
Ｓ・B1）値を用い、１分間に１μmolの２−クロル−４
−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１単位（IU）と
して、各試料中の総ACP活性値A1（IU/l）及び前立腺由
来外ACP活性値A2（IU/l）を求め、（A1−A2）値から前
立腺由来ACP活性値（IU/l）を求めた。
比較例2.p−ニトロフェニルリン酸を用いた前立腺由来A
CP活性の測定 （試料） 実施例２と同じ試料を用いた。
CP活性の測定 （試料） 実施例２と同じ試料を用いた。
（試液） 市販の酸性ホスファターゼ活性測定用キット［酸性ホ
スファターゼ Ｂ−テストワコー（和光純薬工業（株）
社製）］を用いた。
スファターゼ Ｂ−テストワコー（和光純薬工業（株）
社製）］を用いた。
（操作法） 上記のキットに添付された現品説明書の標準操作法に
従って行った。尚、各ACP活性値（IU/l）は、１分間に
１μmolのｐ−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１
単位（IU）として求めた。
従って行った。尚、各ACP活性値（IU/l）は、１分間に
１μmolのｐ−ニトロフェノールを遊離する酵素量を１
単位（IU）として求めた。
実施例２及び比較例２により得られた結果を、第１図
及び第２図に併せて示す。
及び第２図に併せて示す。
第１図は実施例２で得られた総ACP活性値（IU/l）と
比較例２で得られた総ACP活性値（IU/l）の相関関係を
示すものであり、縦軸（Ｙ）実施例１により得られた活
性値を、横軸（Ｘ）は比較例２により得られた活性値を
夫々示す。尚、得られた各活性値を統計処理した結果を
以下に示す。
比較例２で得られた総ACP活性値（IU/l）の相関関係を
示すものであり、縦軸（Ｙ）実施例１により得られた活
性値を、横軸（Ｘ）は比較例２により得られた活性値を
夫々示す。尚、得られた各活性値を統計処理した結果を
以下に示す。
平均値:Y＝31.48、Ｘ＝29.04。
相関係数：γ＝0.988。
回帰直線式:Y＝1.02X＋1.93。
第２図は実施例２で得られた前立腺由来ACP活性値（I
U/l）と比較例２で得られた前立腺由来ACP活性値（IU/
l）との相関関係を示すものであり、縦軸（Ｙ）は実施
例２により得られた活性値を、横軸（Ｘ）は比較例２に
より得られた活性値を夫々示す。尚、得られた各活性値
を統計処理した結果を以下に示す。
U/l）と比較例２で得られた前立腺由来ACP活性値（IU/
l）との相関関係を示すものであり、縦軸（Ｙ）は実施
例２により得られた活性値を、横軸（Ｘ）は比較例２に
より得られた活性値を夫々示す。尚、得られた各活性値
を統計処理した結果を以下に示す。
平均値:Y＝28.72、Ｘ＝24.51。
相関係数：γ＝0.998。
回帰直線式:Y＝1.11X＋1.58。
第１図及び第２図の結果から明らかな如く、実施例２
で用いた基質と比較例２で用いた基質とでは基質親和性
が異なるため、個々の測定値は夫々顕著に異なるが（実
施例２で得られた測定値は比較例２で得られた値よりも
総じて高い。）、相関は極めて良好である。
で用いた基質と比較例２で用いた基質とでは基質親和性
が異なるため、個々の測定値は夫々顕著に異なるが（実
施例２で得られた測定値は比較例２で得られた値よりも
総じて高い。）、相関は極めて良好である。
［発明の効果］ 以上述べた如く、本発明は、レイトアッセイに使用で
き、且つ安定性が良好で、１液法用試液としての使用が
可能な酸性ホスファターゼ活性測定用試液を提供するも
のであり、斯業に貢献するところ大なる発明である。
き、且つ安定性が良好で、１液法用試液としての使用が
可能な酸性ホスファターゼ活性測定用試液を提供するも
のであり、斯業に貢献するところ大なる発明である。
第１図は実施例２で得られた総酸性ホスファターゼ（以
下、ACPと略記する。）活性値（IU/l）と比較例２で得
られた総ACP活性値（IU/l）との相関関係を示すもので
あり、縦軸は実施例２で得られた活性値を、横軸は比較
例２で得られた活性値を夫々示す。 第２図は実施例２で得られた前立腺由来ACP活性値（IU/
l）と比較例２で得られた前立腺由来ACP活性値（IU/l）
との相関関係を示すものであり、縦軸は実施例２で得ら
れた活性値を、横軸は比較例２で得られた活性値を夫々
示す。
下、ACPと略記する。）活性値（IU/l）と比較例２で得
られた総ACP活性値（IU/l）との相関関係を示すもので
あり、縦軸は実施例２で得られた活性値を、横軸は比較
例２で得られた活性値を夫々示す。 第２図は実施例２で得られた前立腺由来ACP活性値（IU/
l）と比較例２で得られた前立腺由来ACP活性値（IU/l）
との相関関係を示すものであり、縦軸は実施例２で得ら
れた活性値を、横軸は比較例２で得られた活性値を夫々
示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C12Q 1/42 ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (3)
- 【請求項１】一般式［Ｉ］ （式中、R1及びR4は何れか一方がハロゲン原子を示し、
他方は水素原子又はメチル基を示す。また、R2及びR3は
夫々独立して水素原子、低級アルキル基、ヒドロキシア
ルキル基、スルホアルキル基、カルボキシアルキル基、
スルホニルアルキル基、チオアルキル基、低級アルコキ
シ基、スルホン酸基、カルボキシル基又はハロゲン原子
を示す。）で表わされる２−ハロ−４−ニトロフェニル
リン酸又はその誘導体、又はそれらの塩類と、21個の水
酸基のうち、少なくとも２個以上が炭素数２〜４のカル
ボキシアルキル基、炭素数２〜４のスルホアルキル基、
炭素数２〜４のモノ又はジヒドロキシアルキル基、又は
メチル基であるβ−シクロデキストリン誘導体とを含ん
でなる酸性ホスファターゼ活性測定用試液。 - 【請求項２】フェノール、フェノール誘導体及びサリチ
ル酸誘導体からなる群より選ばれた少なくとも１種の化
合物を共存させる請求項１に記載の酸性ホスファターゼ
活性測定用試液。 - 【請求項３】一般式［Ｉ］で示される化合物が、 である請求項１又は２に記載の酸性ホスファターゼ活性
測定用試液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63236132A JP2797102B2 (ja) | 1988-09-20 | 1988-09-20 | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63236132A JP2797102B2 (ja) | 1988-09-20 | 1988-09-20 | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0284199A JPH0284199A (ja) | 1990-03-26 |
| JP2797102B2 true JP2797102B2 (ja) | 1998-09-17 |
Family
ID=16996234
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63236132A Expired - Fee Related JP2797102B2 (ja) | 1988-09-20 | 1988-09-20 | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2797102B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5614281B2 (ja) * | 2008-04-14 | 2014-10-29 | 和光純薬工業株式会社 | フェニルホスホリルコリン誘導体 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60160896A (ja) * | 1984-01-31 | 1985-08-22 | Wako Pure Chem Ind Ltd | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定方法 |
| JPS61260900A (ja) * | 1985-05-11 | 1986-11-19 | Wako Pure Chem Ind Ltd | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性測定方法 |
| JPS6248399A (ja) * | 1985-08-29 | 1987-03-03 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 酵素活性測定用試薬 |
| JPS6296099A (ja) * | 1985-10-22 | 1987-05-02 | Toyobo Co Ltd | 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 |
-
1988
- 1988-09-20 JP JP63236132A patent/JP2797102B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60160896A (ja) * | 1984-01-31 | 1985-08-22 | Wako Pure Chem Ind Ltd | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性の測定方法 |
| JPS61260900A (ja) * | 1985-05-11 | 1986-11-19 | Wako Pure Chem Ind Ltd | γ−グルタミルトランスペプチダ−ゼ活性測定方法 |
| JPS6248399A (ja) * | 1985-08-29 | 1987-03-03 | Meiji Seika Kaisha Ltd | 酵素活性測定用試薬 |
| JPS6296099A (ja) * | 1985-10-22 | 1987-05-02 | Toyobo Co Ltd | 酸性フオスフアタ−ゼ活性測定試薬 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0284199A (ja) | 1990-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111876465B (zh) | 一种高稳定性alp测定试剂盒及其制备方法和用途 | |
| US5935861A (en) | Diazonium ion assay reagents and methods for their use | |
| JP2797102B2 (ja) | 酸性ホスフアターゼ活性測定用試液 | |
| JPH06294799A (ja) | 臨床診断に用いる安定した液体対照および／または 較正用血清 | |
| JPH04229192A (ja) | 安定な水性ｎａｄｈ試薬及びキット | |
| JP2722874B2 (ja) | 新規Ｎ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミン誘導体及びこれを基質に用いたＮ−アセチル−β−Ｄ−グルコサミニダーゼ活性測定法 | |
| US4132598A (en) | Stabilized liquid phosphate containing diagnostic compositions and method of preparing same | |
| US5266472A (en) | Stabilization of the enzyme urate oxidase in liquid form | |
| JP4130724B2 (ja) | キレート物質を含む測定試薬 | |
| JP3797603B2 (ja) | 試薬組成物の安定化方法 | |
| EP0989189B1 (en) | Reagent compositions for assaying electrolytes | |
| US12012630B2 (en) | Quantitative acetaminophen analytics | |
| US4965210A (en) | Stable reagent for determining bilirubin in serum and method of preparation | |
| JP3622286B2 (ja) | α２ −プラスミンインヒビタ−の測定方法及び測定試 薬 | |
| JP3674015B2 (ja) | 尿素窒素の測定方法およびその測定用キット | |
| JPS6349081A (ja) | アスコルビン酸オキシダ−ゼの安定化法 | |
| JP4067147B2 (ja) | クレアチンホスホキナーゼ活性の測定方法及び試薬 | |
| JPS5985290A (ja) | 安定なクレアチンアミジノヒドロラーゼ製剤 | |
| JPS6232364A (ja) | 血清中の不飽和鉄結合能の測定方法 | |
| EP0335954B1 (en) | Method for forming a stable reagent for determining bilirubin in serum and reagent obtainable by said method | |
| JP3823461B2 (ja) | γ−グルタミルトランスペプチダーゼ活性測定用試薬 | |
| JPH1062416A (ja) | 分析装置用の沈殿防止性組成物 | |
| JPH0145360B2 (ja) | ||
| JPH0157A (ja) | 新規コリン誘導体及びそれを用いたコリンエステラ−ゼ活性測定法 | |
| JP2883619B2 (ja) | エステル加水分解酵素活性阻害剤及び遊離脂肪酸測定方法並びにこれに用いる測定試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |