JP2756941B2 - ２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板凝集抑制剤としての用途 - Google Patents
２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板凝集抑制剤としての用途Info
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- JP2756941B2 JP2756941B2 JP1223396A JP1223396A JP2756941B2 JP 2756941 B2 JP2756941 B2 JP 2756941B2 JP 1223396 A JP1223396 A JP 1223396A JP 1223396 A JP1223396 A JP 1223396A JP 2756941 B2 JP2756941 B2 JP 2756941B2
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は血小板凝集抑制作用
を有する１，４−ナフトキノン誘導体を含有する血液凝
固抑制用薬剤学的組成物に関するものである。更に詳し
くは、本発明は血小板凝集抑制作用を有するので、血液
凝固抑制剤及び血栓症治療剤として使用することのでき
る、次の一般式（Ｉ）の２−クロロ−３−アリールアミ
ノ−１，４−ナフトキノン誘導体を含有する血液凝固抑
制用薬剤学的組成物に関するものである。
を有する１，４−ナフトキノン誘導体を含有する血液凝
固抑制用薬剤学的組成物に関するものである。更に詳し
くは、本発明は血小板凝集抑制作用を有するので、血液
凝固抑制剤及び血栓症治療剤として使用することのでき
る、次の一般式（Ｉ）の２−クロロ−３−アリールアミ
ノ−１，４−ナフトキノン誘導体を含有する血液凝固抑
制用薬剤学的組成物に関するものである。
【０００２】
【化３】
【０００３】〔式中、Ｘは炭素（Ｃ）原子を示し、Ｒは
シアノを示すか、あるいはＸは窒素（Ｎ）原子を示し、
Ｒはメチルを示す。〕
シアノを示すか、あるいはＸは窒素（Ｎ）原子を示し、
Ｒはメチルを示す。〕
【０００４】本発明は、活性成分として上記一般式
（Ｉ）の化合物を含有する血液凝固抑制用薬剤学的組成
物に関するものである。
（Ｉ）の化合物を含有する血液凝固抑制用薬剤学的組成
物に関するものである。
【０００５】
【従来の技術・発明が解決しようとする課題】血小板は
血液構成細胞中で一番少ない部分を占めるが、微細な刺
激に対しても容易に反応を示し、血液凝固作用等の体内
恒常性維持に重要な機能を担当している。また、血小板
の機能変化によって誘発される血小板凝集能の異常は血
液流動学において主要な陰性的要因（negative factor
）の一つで、止血メカニズム異常を起こすか、あるい
は微小循環障害を起こすようになる。特に、現代社会で
急激に発病が増加している高血圧、動脈硬化等の成人病
と糖尿病等の代謝性疾患で頻繁に示される血行障害もそ
の主たる要因は血小板凝集能の異常的亢進によるものと
報告されており、血小板機能を正常化することによって
このような関連疾患を治療及び予防することができるも
のと予想されている。
血液構成細胞中で一番少ない部分を占めるが、微細な刺
激に対しても容易に反応を示し、血液凝固作用等の体内
恒常性維持に重要な機能を担当している。また、血小板
の機能変化によって誘発される血小板凝集能の異常は血
液流動学において主要な陰性的要因（negative factor
）の一つで、止血メカニズム異常を起こすか、あるい
は微小循環障害を起こすようになる。特に、現代社会で
急激に発病が増加している高血圧、動脈硬化等の成人病
と糖尿病等の代謝性疾患で頻繁に示される血行障害もそ
の主たる要因は血小板凝集能の異常的亢進によるものと
報告されており、血小板機能を正常化することによって
このような関連疾患を治療及び予防することができるも
のと予想されている。
【０００６】１，４−ナフトキノン誘導体は一般的に抗
菌作用、抗真菌作用、抗癌作用、抗凝固作用等の多様な
薬理学的作用を持っており、抗癌剤、抗菌剤等のような
新医薬品の開発のための重要な物質として活用されてい
る。研究者等の研究結果によると、１，４−ナフトキノ
ン誘導体中の一つであるビタミンＫ3 （メナジオン）が
ヒト血小板の凝集作用を抑制する効果があると報告され
たが、その作用メカニズムは未だ明確でない（参照：Bl
ackwell, G. J., Radomski, M. and Moncada,S. Inhibi
tion of human platelet aggregation by vitamin K. T
hromb. Res. 37, 103-114, 1985）。一方、２−クロロ
−３−メチル−１，４−ナフトキノン（ＣＭＮ）が兎の
血小板凝集反応を抑制するものとも明らかになったが、
これは多様な血小板活性化物質（platelet agonist）等
による燐脂質の代謝過程を２−クロロ−３−メチル−
１，４−ナフトキノンが抑制するため示されるものと報
告された（参照：Ko, F. N., Sheu, S. J., Liu, Y.
M., Huang, T. F. and Teng, C. M. Inhibition of rab
bit platelet aggregation by 1,4-naphthoquinones. T
hromb. Res. 57, 453-463, 1990 ）。
菌作用、抗真菌作用、抗癌作用、抗凝固作用等の多様な
薬理学的作用を持っており、抗癌剤、抗菌剤等のような
新医薬品の開発のための重要な物質として活用されてい
る。研究者等の研究結果によると、１，４−ナフトキノ
ン誘導体中の一つであるビタミンＫ3 （メナジオン）が
ヒト血小板の凝集作用を抑制する効果があると報告され
たが、その作用メカニズムは未だ明確でない（参照：Bl
ackwell, G. J., Radomski, M. and Moncada,S. Inhibi
tion of human platelet aggregation by vitamin K. T
hromb. Res. 37, 103-114, 1985）。一方、２−クロロ
−３−メチル−１，４−ナフトキノン（ＣＭＮ）が兎の
血小板凝集反応を抑制するものとも明らかになったが、
これは多様な血小板活性化物質（platelet agonist）等
による燐脂質の代謝過程を２−クロロ−３−メチル−
１，４−ナフトキノンが抑制するため示されるものと報
告された（参照：Ko, F. N., Sheu, S. J., Liu, Y.
M., Huang, T. F. and Teng, C. M. Inhibition of rab
bit platelet aggregation by 1,4-naphthoquinones. T
hromb. Res. 57, 453-463, 1990 ）。
【０００７】故に本発明者は多様な１，４−ナフトキノ
ン誘導体を合成し、その血小板凝集抑制効果を試し、そ
の結果、特定の１，４−ナフトキノン誘導体が強力な血
小板凝集抑制効果を示すことを確認し、本発明を完成す
るに至った。
ン誘導体を合成し、その血小板凝集抑制効果を試し、そ
の結果、特定の１，４−ナフトキノン誘導体が強力な血
小板凝集抑制効果を示すことを確認し、本発明を完成す
るに至った。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明の目的は、上記一
般式（Ｉ）の化合物を活性成分として含有する血小板凝
集抑制用薬剤学的組成物を提供するものである。
般式（Ｉ）の化合物を活性成分として含有する血小板凝
集抑制用薬剤学的組成物を提供するものである。
【０００９】以下、本発明を更に詳しく説明すると次の
通りである。本発明は次の一般式（Ｉ）で示される２−
クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘
導体を有効成分として含有する血液凝固抑制用薬剤学的
組成物に関するものである。
通りである。本発明は次の一般式（Ｉ）で示される２−
クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘
導体を有効成分として含有する血液凝固抑制用薬剤学的
組成物に関するものである。
【００１０】
【化４】
【００１１】〔式中、Ｘは炭素（Ｃ）原子を示し、Ｒは
シアノを示すか、あるいはＸは窒素（Ｎ）原子を示し、
Ｒはメチルを示す。〕
シアノを示すか、あるいはＸは窒素（Ｎ）原子を示し、
Ｒはメチルを示す。〕
【００１２】
【００１３】
【００１４】本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、下記の
化合物である。 ・２−クロロ−３−〔（４−シアノフェニル）−アミ
ノ〕−１，４−ナフトキノン、又は ・２−クロロ−３−〔（５−メチルピリジン−２−イ
ル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノン。
化合物である。 ・２−クロロ−３−〔（４−シアノフェニル）−アミ
ノ〕−１，４−ナフトキノン、又は ・２−クロロ−３−〔（５−メチルピリジン−２−イ
ル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノン。
【００１５】本発明によるとまた一般式（Ｉ）の２−ク
ロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導
体の製造方法も提供される。本発明によると、下記一般
式（Ｉ）の２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−
ナフトキノン誘導体は、下記反応図式に示されるよう
に、下記構造式（ＩＩ）の２，３−ジクロロ−１，４−
ナフトキノンを下記一般式（ＩＩＩ）のアリールアミン
と反応させることによって製造することができる。
ロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導
体の製造方法も提供される。本発明によると、下記一般
式（Ｉ）の２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−
ナフトキノン誘導体は、下記反応図式に示されるよう
に、下記構造式（ＩＩ）の２，３−ジクロロ−１，４−
ナフトキノンを下記一般式（ＩＩＩ）のアリールアミン
と反応させることによって製造することができる。
【００１６】
【化５】
【００１７】上記反応図式中、Ｘ及びＲは上記で定義し
た通りの意味を有する。
た通りの意味を有する。
【００１８】本発明の方法において出発物質として使用
される構造式（II）の２，３−ジクロロ−１，４−ナフ
トキノン（以下、ＤＮＱともいう）は当該技術分野で公
知の化合物であり、１，４−ナフトキノンを塩素（Ｃｌ
2 ）ガスと反応させることによって製造することができ
る。
される構造式（II）の２，３−ジクロロ−１，４−ナフ
トキノン（以下、ＤＮＱともいう）は当該技術分野で公
知の化合物であり、１，４−ナフトキノンを塩素（Ｃｌ
2 ）ガスと反応させることによって製造することができ
る。
【００１９】本発明の方法によると、構造式（II）のＤ
ＮＱをアルコール溶媒中で一般式（III)のアリールアミ
ン誘導体と反応させることによって一般式（Ｉ）の化合
物を製造する。本反応に使用されるアルコール溶媒とし
てはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロ
パノール、ブタノール等のような炭素数１乃至６の低級
アルカノール溶媒が好ましく、特に好ましくはエタノー
ルを使用する。
ＮＱをアルコール溶媒中で一般式（III)のアリールアミ
ン誘導体と反応させることによって一般式（Ｉ）の化合
物を製造する。本反応に使用されるアルコール溶媒とし
てはメタノール、エタノール、プロパノール、イソプロ
パノール、ブタノール等のような炭素数１乃至６の低級
アルカノール溶媒が好ましく、特に好ましくはエタノー
ルを使用する。
【００２０】本反応は一般的に室温乃至１００℃の温
度、好ましくは使用された溶媒の沸点で還流下で行うこ
とができる。反応時間は一般的に２乃至６時間、好まし
くは３乃至５時間である。
度、好ましくは使用された溶媒の沸点で還流下で行うこ
とができる。反応時間は一般的に２乃至６時間、好まし
くは３乃至５時間である。
【００２１】反応が完結された後に、得られた一般式
（Ｉ）の化合物は必要によって通常的な後処理方法、例
えば再結晶化、クロマトグラフィー等の方法によって分
離及び精製することができる。
（Ｉ）の化合物は必要によって通常的な後処理方法、例
えば再結晶化、クロマトグラフィー等の方法によって分
離及び精製することができる。
【００２２】本発明の一般式（Ｉ）の化合物は強力な血
小板凝集抑制作用を有するので、臨床的に有用な血液凝
固抑制剤及び血栓症治療剤として使用することができ
る。
小板凝集抑制作用を有するので、臨床的に有用な血液凝
固抑制剤及び血栓症治療剤として使用することができ
る。
【００２３】血小板凝集能は血小板顆粒からの分泌能、
血小板内のアラキドン酸遊離及び代謝等の過程によって
大いに影響を受けるものと知られている。即ち、血小板
は他の細胞に比べて密集顆粒（dense granule ）、アル
ファ顆粒（α-granule）、リソソーム（lysosome）及び
ペルオキシソーム（peroxisome）等のような多くの顆粒
を含有しており、それぞれの顆粒には生理学的に非常に
有用な物質等が貯蔵されている。或る刺激によって血小
板が活性化されると、顆粒に貯蔵された物質等は細胞外
排出現象（エキソサイトーシス，exocytosis）を通じて
細胞外に分泌される。特に、密集顆粒にはＡＤＰ（aden
osine diphosphate ）、ＡＴＰ（adenosine triphospha
te）等のアデニンヌクレオチド、カルシウム及びセロト
ニン等が貯蔵されているので、血小板が凝集される時に
遊離され、非可逆的な２次凝集作用を誘発するようにな
る。即ち、ＡＤＰ、トロンビン等で凝集を誘導した場合
の非可逆的な２次凝集反応が、かかる顆粒分泌による結
果だと言える。以下の実験例によって立証されるよう
に、本発明の化合物は上記言及した生理活性物質の血小
板凝集能及び顆粒放出を抑制することによって血小板凝
集抑制効果を示す。
血小板内のアラキドン酸遊離及び代謝等の過程によって
大いに影響を受けるものと知られている。即ち、血小板
は他の細胞に比べて密集顆粒（dense granule ）、アル
ファ顆粒（α-granule）、リソソーム（lysosome）及び
ペルオキシソーム（peroxisome）等のような多くの顆粒
を含有しており、それぞれの顆粒には生理学的に非常に
有用な物質等が貯蔵されている。或る刺激によって血小
板が活性化されると、顆粒に貯蔵された物質等は細胞外
排出現象（エキソサイトーシス，exocytosis）を通じて
細胞外に分泌される。特に、密集顆粒にはＡＤＰ（aden
osine diphosphate ）、ＡＴＰ（adenosine triphospha
te）等のアデニンヌクレオチド、カルシウム及びセロト
ニン等が貯蔵されているので、血小板が凝集される時に
遊離され、非可逆的な２次凝集作用を誘発するようにな
る。即ち、ＡＤＰ、トロンビン等で凝集を誘導した場合
の非可逆的な２次凝集反応が、かかる顆粒分泌による結
果だと言える。以下の実験例によって立証されるよう
に、本発明の化合物は上記言及した生理活性物質の血小
板凝集能及び顆粒放出を抑制することによって血小板凝
集抑制効果を示す。
【００２４】一方、活性化された血小板で活性が増加す
るＰＬＡ2 （ホスホリパーゼＡ2 ，phospholipase A2）
は血小板膜のホスファチジルコリン、ホスファチジルエ
タノールアミン、ホスファチジルイノシトール等の燐脂
質からアラキドン酸を遊離させるようになる。遊離され
たアラキドン酸はシクロオキシゲナーゼによって極めて
短い時間のみ存在するプロスタグランジン エンドペル
オキシド中間体としてプロスタグランジンＧ2 とプロス
タグランジンＨ2 を生成する。このエンドペルオキシド
等は強力な血小板凝集作用があるが、極めて不安定な物
質であるのでトロンボキサン合成酵素の作用を受けて一
番強力な血小板凝集能のあるトロンボキサンＡ2 （ＴＸ
Ａ2 ）を生成する。トロンボキサンＡ2 は極めて低い濃
度（０．１μＭ以下）でも血小板付着能増加、血小板の
形態変化誘発、アデニレートシクラーゼ抑制を介したサ
イクリックアデノシンモノホスファート（ｃＡＭＰ）生
成の減少、血小板内カルシウム濃度の増加、フィブリノ
ーゲン受容体の露出拡大等を通じて血小板を活性化して
非可逆的な大規模凝集を誘発させる。以下の実験例によ
って立証されるように、本発明の化合物はこのように活
性化された血小板で示されるトロンボキサンＡ2 の合成
能を抑制するメカニズムを通じて血小板凝集抑制に寄与
するものと確認された。
るＰＬＡ2 （ホスホリパーゼＡ2 ，phospholipase A2）
は血小板膜のホスファチジルコリン、ホスファチジルエ
タノールアミン、ホスファチジルイノシトール等の燐脂
質からアラキドン酸を遊離させるようになる。遊離され
たアラキドン酸はシクロオキシゲナーゼによって極めて
短い時間のみ存在するプロスタグランジン エンドペル
オキシド中間体としてプロスタグランジンＧ2 とプロス
タグランジンＨ2 を生成する。このエンドペルオキシド
等は強力な血小板凝集作用があるが、極めて不安定な物
質であるのでトロンボキサン合成酵素の作用を受けて一
番強力な血小板凝集能のあるトロンボキサンＡ2 （ＴＸ
Ａ2 ）を生成する。トロンボキサンＡ2 は極めて低い濃
度（０．１μＭ以下）でも血小板付着能増加、血小板の
形態変化誘発、アデニレートシクラーゼ抑制を介したサ
イクリックアデノシンモノホスファート（ｃＡＭＰ）生
成の減少、血小板内カルシウム濃度の増加、フィブリノ
ーゲン受容体の露出拡大等を通じて血小板を活性化して
非可逆的な大規模凝集を誘発させる。以下の実験例によ
って立証されるように、本発明の化合物はこのように活
性化された血小板で示されるトロンボキサンＡ2 の合成
能を抑制するメカニズムを通じて血小板凝集抑制に寄与
するものと確認された。
【００２５】上記の言及通り、本発明の一般式（Ｉ）の
目的化合物は強力な血小板凝集抑制作用を示し、従って
臨床的に有用な血液凝固抑制剤及び血栓症治療剤として
使用することができる。本発明の一般式（Ｉ）の化合物
を臨床的に利用しようとする場合、この活性化合物は薬
剤学的に許容される担体を利用して通常的な方法に従っ
て、薬剤学的分野で通常的な製剤、例えば錠剤、カプセ
ル剤、トローチ剤（troche）、液剤、懸濁剤等の経口投
与用製剤、注射用溶液または懸濁液、または注射時に注
射用蒸留水で再調剤して使用することのできるようにな
っている即時使用型の注射用乾燥粉末等の形態である注
射剤、軟膏剤、クリーム剤、液剤等の局所適用型製剤等
の多様な製剤に剤型化して使用することができる。
目的化合物は強力な血小板凝集抑制作用を示し、従って
臨床的に有用な血液凝固抑制剤及び血栓症治療剤として
使用することができる。本発明の一般式（Ｉ）の化合物
を臨床的に利用しようとする場合、この活性化合物は薬
剤学的に許容される担体を利用して通常的な方法に従っ
て、薬剤学的分野で通常的な製剤、例えば錠剤、カプセ
ル剤、トローチ剤（troche）、液剤、懸濁剤等の経口投
与用製剤、注射用溶液または懸濁液、または注射時に注
射用蒸留水で再調剤して使用することのできるようにな
っている即時使用型の注射用乾燥粉末等の形態である注
射剤、軟膏剤、クリーム剤、液剤等の局所適用型製剤等
の多様な製剤に剤型化して使用することができる。
【００２６】かかる目的のため使用される担体は薬剤学
的分野で通常的なものであり、例えば経口投与用製剤の
場合には結合剤、滑沢剤、崩解剤、賦形剤、可溶化剤、
分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料等があり、注
射剤の場合には保存剤、無痛化剤、可溶化剤、安定化剤
等があり、局所投与用製剤の場合には基剤、賦形剤、潤
滑剤、保存剤等がある。このように製造された薬剤学的
製剤は経口的に投与するか、あるいは非経口的に、例え
ば静脈内、皮下、腹腔内投与または局所適用することが
できる。また、経口投与時に薬剤が胃酸によって分解さ
れるのを防止するため制酸剤を併用するか、あるいは錠
剤等の経口投与用製剤を腸溶コーティングで被覆された
製剤に剤型化するのが好ましい場合もある。
的分野で通常的なものであり、例えば経口投与用製剤の
場合には結合剤、滑沢剤、崩解剤、賦形剤、可溶化剤、
分散剤、安定化剤、懸濁化剤、色素、香料等があり、注
射剤の場合には保存剤、無痛化剤、可溶化剤、安定化剤
等があり、局所投与用製剤の場合には基剤、賦形剤、潤
滑剤、保存剤等がある。このように製造された薬剤学的
製剤は経口的に投与するか、あるいは非経口的に、例え
ば静脈内、皮下、腹腔内投与または局所適用することが
できる。また、経口投与時に薬剤が胃酸によって分解さ
れるのを防止するため制酸剤を併用するか、あるいは錠
剤等の経口投与用製剤を腸溶コーティングで被覆された
製剤に剤型化するのが好ましい場合もある。
【００２７】本発明の一般式（Ｉ）の目的とする２−ク
ロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導
体の人体に対する投与量は、体内での活性成分の吸収
度、不活性化率及び***速度、患者の年齢、性別及び状
態、治療されるべきの疾病の状態及び重症度によって適
切に選択されるが、一般的には１日に５ｍｇ乃至３５ｍ
ｇ、好ましくは１０ｍｇ乃至２５ｍｇの量が投与される
ようにする。勿論、患者個々人の状態や疾病の状態及び
合併症等を考慮して専門家の判断と個人の要求に従って
専門化された投薬法を使用し、投与量を適切に増減させ
ることができる。活性成分の１日有効量は１日１回投与
するか、一定時間間隔で数回、好ましくは３乃至６回に
わたって分割投与することもできる。
ロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導
体の人体に対する投与量は、体内での活性成分の吸収
度、不活性化率及び***速度、患者の年齢、性別及び状
態、治療されるべきの疾病の状態及び重症度によって適
切に選択されるが、一般的には１日に５ｍｇ乃至３５ｍ
ｇ、好ましくは１０ｍｇ乃至２５ｍｇの量が投与される
ようにする。勿論、患者個々人の状態や疾病の状態及び
合併症等を考慮して専門家の判断と個人の要求に従って
専門化された投薬法を使用し、投与量を適切に増減させ
ることができる。活性成分の１日有効量は１日１回投与
するか、一定時間間隔で数回、好ましくは３乃至６回に
わたって分割投与することもできる。
【００２８】
【実施例・実験例】本発明は以下の実施例及び実験例に
よって更に具体的に説明されるが、本発明がこれらの実
施例によって何ら制限されるものではない。
よって更に具体的に説明されるが、本発明がこれらの実
施例によって何ら制限されるものではない。
【００２９】実施例１：２−クロロ−３−〔（４−シア
ノフェニル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノンの製造
ノフェニル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノンの製造
【００３０】
【化６】
【００３１】（１）１，４−ナフトキノン２０ｇを酢酸
２００ｍｌに溶解させ、生成された溶液に塩素（Ｃ
ｌ2 ）ガス約１０ｇを導入させた後に室温で４時間振蕩
させた。その後、反応混合物を氷５００ｇに注いで生成
された沈殿物を濾過して空気中で乾燥させた。沈殿物を
エタノールに懸濁させた後に３０分水浴上で加熱し、室
温で放置して目的とする２，３−ジクロロ−１，４−ナ
フトキノン２８．６ｇ（収率９０％）を得た。
２００ｍｌに溶解させ、生成された溶液に塩素（Ｃ
ｌ2 ）ガス約１０ｇを導入させた後に室温で４時間振蕩
させた。その後、反応混合物を氷５００ｇに注いで生成
された沈殿物を濾過して空気中で乾燥させた。沈殿物を
エタノールに懸濁させた後に３０分水浴上で加熱し、室
温で放置して目的とする２，３−ジクロロ−１，４−ナ
フトキノン２８．６ｇ（収率９０％）を得た。
【００３２】（２）２００ｍｌ丸底フラスコ中で上記
（１）で得た２，３−ジクロロ−１，４−ナフトキノン
１ｇを９５％エタノール水溶液５０ｍｌに溶解させ、こ
こに４−シアノアニリン０．７０ｇを加えた。この反応
混合物を３時間加熱下で還流させ反応させた。薄層クロ
マトグラフィーによって反応の終結を確認した後に反応
液を冷却させ、析出した結晶を濾過し、エタノールから
再結晶化させ精製して赤黄色プレート状物質として目的
とする表題化合物０．８４ｇ（収率６２％）を得た。 融点：１８８−１８９℃
（１）で得た２，３−ジクロロ−１，４−ナフトキノン
１ｇを９５％エタノール水溶液５０ｍｌに溶解させ、こ
こに４−シアノアニリン０．７０ｇを加えた。この反応
混合物を３時間加熱下で還流させ反応させた。薄層クロ
マトグラフィーによって反応の終結を確認した後に反応
液を冷却させ、析出した結晶を濾過し、エタノールから
再結晶化させ精製して赤黄色プレート状物質として目的
とする表題化合物０．８４ｇ（収率６２％）を得た。 融点：１８８−１８９℃
【００３３】ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ-1）：３２３０（ｓ，
ＮＨ），３０５０，２９５５，２２５０（ｓ，ＣＮ），
１６８０（ｓ，Ｃ＝Ｏ），１６４０，１５１５，８８
０，７１０1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）：δ ｐｐｍ＝１．５９
（１Ｈ，ＮＨ），２．３（２Ｈ，ｑ，ＣＨ2 ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），７．４−８．５（８Ｈ，ｍ，芳香族）
ＮＨ），３０５０，２９５５，２２５０（ｓ，ＣＮ），
１６８０（ｓ，Ｃ＝Ｏ），１６４０，１５１５，８８
０，７１０1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ）：δ ｐｐｍ＝１．５９
（１Ｈ，ＮＨ），２．３（２Ｈ，ｑ，ＣＨ2 ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），７．４−８．５（８Ｈ，ｍ，芳香族）
【００３４】実施例２：２−クロロ−３−〔（５−メチ
ルピリジン−２−イル）−アミノ〕−１，４−ナフトキ
ノンの製造
ルピリジン−２−イル）−アミノ〕−１，４−ナフトキ
ノンの製造
【００３５】
【化７】
【００３６】４−シアノ−アニリンの代わりに２−アミ
ノ−５−メチルピリジン０．５ｇを使用して５時間反応
する以外は、実施例１−（２）と同様の方法で反応を行
って赤黄色プレート状物質として目的とする表題化合物
０．９９ｇ（収率７６％）を得た。 融点：２６０−２６１℃
ノ−５−メチルピリジン０．５ｇを使用して５時間反応
する以外は、実施例１−（２）と同様の方法で反応を行
って赤黄色プレート状物質として目的とする表題化合物
０．９９ｇ（収率７６％）を得た。 融点：２６０−２６１℃
【００３７】ＩＲ（ＫＢｒ，ｃｍ-1）：３２２０（ｓ，
ＮＨ），３０２５，１６８０（ｓ，Ｃ＝Ｏ），１６４
０，１５１５，８８０，８１０1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ／ＤＭＳＯ−ｄ6 ）：δ ｐ
ｐｍ＝１．５９（１Ｈ，ＮＨ），１．９（３Ｈ，ｓ，Ｃ
Ｈ3 ），７．３−７．８（４Ｈ，ｍ，芳香族），８．１
−８．４（３Ｈ，ｍ，ピリジン環）
ＮＨ），３０２５，１６８０（ｓ，Ｃ＝Ｏ），１６４
０，１５１５，８８０，８１０1 Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3 ／ＤＭＳＯ−ｄ6 ）：δ ｐ
ｐｍ＝１．５９（１Ｈ，ＮＨ），１．９（３Ｈ，ｓ，Ｃ
Ｈ3 ），７．３−７．８（４Ｈ，ｍ，芳香族），８．１
−８．４（３Ｈ，ｍ，ピリジン環）
【００３８】本発明の一般式（Ｉ）の２−クロロ−３−
アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板
凝集抑制効果は、以下の実験例によって明らかに立証さ
れた。以下の実験例において本発明の化合物としては実
施例１で製造された２−クロロ−３−〔（４−シアノフ
ェニル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノン（以下では
“ＮＱ−Ｙ１５”と略称する）を使用した。
アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板
凝集抑制効果は、以下の実験例によって明らかに立証さ
れた。以下の実験例において本発明の化合物としては実
施例１で製造された２−クロロ−３−〔（４−シアノフ
ェニル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノン（以下では
“ＮＱ−Ｙ１５”と略称する）を使用した。
【００３９】実験例１：血小板活性化物質の血小板凝集
能に対する抑制効果の測定 （１）血小板を多量含有する血漿と洗浄血小板の調製：
ナトリウムシトレート（最終濃度０．３８％）を予め入
れておいた注射器を利用してラットの腹大動脈から採血
して得た血液を常温で１６０ｘｇで１５分間遠心分離さ
せ、上清液として血小板を多量含有する血漿を得た。血
小板を多量含有する血漿を１５００ｘｇで１５分間更に
遠心分離させ得た沈殿を２ｍＭエチレンジアミンテトラ
酢酸を含有する洗浄用緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウ
ム，０．８ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナト
リウム，２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグ
ネシウム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭ Ｎ−〔２
−ヒドロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタ
ンスルホン酸〕，緩衝液の酸性度ｐＨ７．４）で３回洗
浄して血漿内の蛋白質、カルシウム等を除去した後、牛
血清アルブミン（bovine serum albumin）を含有する変
形されたタイロード緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウ
ム，０．８ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナト
リウム，２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグ
ネシウム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭ Ｎ−〔２
−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタン
スルホン酸〕，緩衝液の酸性度ｐＨ７．４）に再懸濁さ
せ洗浄血小板を調製した。
能に対する抑制効果の測定 （１）血小板を多量含有する血漿と洗浄血小板の調製：
ナトリウムシトレート（最終濃度０．３８％）を予め入
れておいた注射器を利用してラットの腹大動脈から採血
して得た血液を常温で１６０ｘｇで１５分間遠心分離さ
せ、上清液として血小板を多量含有する血漿を得た。血
小板を多量含有する血漿を１５００ｘｇで１５分間更に
遠心分離させ得た沈殿を２ｍＭエチレンジアミンテトラ
酢酸を含有する洗浄用緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウ
ム，０．８ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナト
リウム，２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグ
ネシウム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭ Ｎ−〔２
−ヒドロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタ
ンスルホン酸〕，緩衝液の酸性度ｐＨ７．４）で３回洗
浄して血漿内の蛋白質、カルシウム等を除去した後、牛
血清アルブミン（bovine serum albumin）を含有する変
形されたタイロード緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウ
ム，０．８ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナト
リウム，２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグ
ネシウム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭ Ｎ−〔２
−ヒドロキシエチル〕ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタン
スルホン酸〕，緩衝液の酸性度ｐＨ７．４）に再懸濁さ
せ洗浄血小板を調製した。
【００４０】（２）血小板凝集能の測定： 本実験で血小板凝集能はボーン（Ｂｏｒｎ）等の方法
（参照：Ｂｏｒｎ，Ｇ．Ｖ．Ｒ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９
４，９２７，１９６２）に従って血小板凝集能測定器
（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ社：ペンシルベニア ハバータウ
ン所在）を利用して濁度の変化による光の通過程度（ｌ
ｉｇｈｔ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）の変化を測定す
ることによって判定した。血小板が殆どない血漿の場合
に示される光の通過程度を対照とし、上記（１）で調製
された血小板を多量含有する血漿４９５μｌを、表面が
シリコンで処理された凝集検出計（ａｇｇｒｅｇｏｍｅ
ｔｅｒ）用キュベットに入れて、このキュベットを３７
℃で温度が維持されているキュベット用チャンネルに刺
して３０秒間維持させることによって前処理した後、ジ
メチルスルホキシドに溶解させた本発明の化合物ＮＱ−
Ｙ１５ ２．５μｌ（最終濃度１０−４Ｍ）を加え、更
に３７℃で８分間反応させた後に、トロンビン２．５μ
ｌ（最終濃度０．５Ｕ／ｍｌ）を添加して示される光の
通過程度の変化を１０分間測定した。また、タイロード
緩衝液の場合に示される光の通過程度を対照として、上
記（１）で調製された洗浄血小板４９５μｌを３７℃で
３０秒間上記と同様の方法で前処理した後、ジメチルス
ルホキシドに溶解させた本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ
１５ ２．５μｌを加え、更に３７℃で８分間反応させ
た後に、２．５μｌの血小板活性化物質（トロンビン
０．１Ｕ／ｍｌ，コラーゲン１０μｇ／ｍｌ，または下
記構造式で示されるカルシウムイオノホアーＡ２３１８
７ ２μＭ）を加えて血小板の凝集を誘発させ、１０分
間で示される光の通過程度の変化を測定した。
（参照：Ｂｏｒｎ，Ｇ．Ｖ．Ｒ．，Ｎａｔｕｒｅ，１９
４，９２７，１９６２）に従って血小板凝集能測定器
（Ｃｈｒｏｎｏｌｏｇ社：ペンシルベニア ハバータウ
ン所在）を利用して濁度の変化による光の通過程度（ｌ
ｉｇｈｔ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ）の変化を測定す
ることによって判定した。血小板が殆どない血漿の場合
に示される光の通過程度を対照とし、上記（１）で調製
された血小板を多量含有する血漿４９５μｌを、表面が
シリコンで処理された凝集検出計（ａｇｇｒｅｇｏｍｅ
ｔｅｒ）用キュベットに入れて、このキュベットを３７
℃で温度が維持されているキュベット用チャンネルに刺
して３０秒間維持させることによって前処理した後、ジ
メチルスルホキシドに溶解させた本発明の化合物ＮＱ−
Ｙ１５ ２．５μｌ（最終濃度１０−４Ｍ）を加え、更
に３７℃で８分間反応させた後に、トロンビン２．５μ
ｌ（最終濃度０．５Ｕ／ｍｌ）を添加して示される光の
通過程度の変化を１０分間測定した。また、タイロード
緩衝液の場合に示される光の通過程度を対照として、上
記（１）で調製された洗浄血小板４９５μｌを３７℃で
３０秒間上記と同様の方法で前処理した後、ジメチルス
ルホキシドに溶解させた本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ
１５ ２．５μｌを加え、更に３７℃で８分間反応させ
た後に、２．５μｌの血小板活性化物質（トロンビン
０．１Ｕ／ｍｌ，コラーゲン１０μｇ／ｍｌ，または下
記構造式で示されるカルシウムイオノホアーＡ２３１８
７ ２μＭ）を加えて血小板の凝集を誘発させ、１０分
間で示される光の通過程度の変化を測定した。
【００４１】
【化８】
【００４２】実験結果は血小板活性化物質のみを処理し
た場合に示される光の通過程度を凝集が１００％示され
たものとし、各場合の光の通過程度を相対的な比率で計
算することによって判断した。
た場合に示される光の通過程度を凝集が１００％示され
たものとし、各場合の光の通過程度を相対的な比率で計
算することによって判断した。
【００４３】上記実験の結果は図１乃至図３に示した。
図１乃至図３に図示された結果よりわかるように、血小
板活性化物質であるトロンビン、コラーゲン、Ａ２３１
８７による洗浄血小板の凝集能に対する本発明の化合物
ＮＱ−Ｙ１５の効果は、それぞれの場合に濃度依存的に
示された。即ちそれぞれの血小板活性化物質による血小
板の凝集能を５０％減少させるＮＱ−Ｙ１５の濃度はト
ロンビン（０．１Ｕ／ml）の場合に約３８μＭ（図
１）、コラーゲン（１０μｇ／ml）の場合に約７μＭ
（図２）、Ａ２３１８７（２μＭ）の場合に約１００μ
Ｍ（図３）であるものと示された。従って、本発明の化
合物は多様な血小板活性化物質等による血小板の凝集能
を濃度依存的に抑制させるものと確認された。
図１乃至図３に図示された結果よりわかるように、血小
板活性化物質であるトロンビン、コラーゲン、Ａ２３１
８７による洗浄血小板の凝集能に対する本発明の化合物
ＮＱ−Ｙ１５の効果は、それぞれの場合に濃度依存的に
示された。即ちそれぞれの血小板活性化物質による血小
板の凝集能を５０％減少させるＮＱ−Ｙ１５の濃度はト
ロンビン（０．１Ｕ／ml）の場合に約３８μＭ（図
１）、コラーゲン（１０μｇ／ml）の場合に約７μＭ
（図２）、Ａ２３１８７（２μＭ）の場合に約１００μ
Ｍ（図３）であるものと示された。従って、本発明の化
合物は多様な血小板活性化物質等による血小板の凝集能
を濃度依存的に抑制させるものと確認された。
【００４４】実験例２：５−〔14Ｃ〕−セロトニン分泌
抑制効果の測定 血小板は他の細胞等に比べて密集顆粒、アルファ顆粒、
リソソーム等のような多くの顆粒を含有しており、それ
ぞれの顆粒には生理学的に非常に有用な物質等が貯蔵さ
れている。或る刺激によって血小板が活性化されると、
顆粒に貯蔵された物質等は細胞外流出現象（エキソサイ
トーシス）により細胞外に分泌される。特に密集顆粒に
はアデノシンジホスファート（ＡＤＰ），アデノシント
リホスファート（ＡＴＰ）等のアデニンヌクレオチド、
カルシウム及びセロトニン等が貯蔵されており、血小板
が凝集される時遊離され、非可逆的な２次凝集作用を誘
発するようになる。即ち、ＡＤＰ、トロンビン等で凝集
を誘導した場合の非可逆的な２次凝集反応が、かかる顆
粒分泌による結果だと言える。従って、顆粒からこのよ
うな生理活性物質中の一つであるセロトニンの分泌に及
ぼす本発明の化合物の影響を測定することによって、本
発明の化合物の血小板凝集抑制効果を確認するため、次
のような実験を行った。
抑制効果の測定 血小板は他の細胞等に比べて密集顆粒、アルファ顆粒、
リソソーム等のような多くの顆粒を含有しており、それ
ぞれの顆粒には生理学的に非常に有用な物質等が貯蔵さ
れている。或る刺激によって血小板が活性化されると、
顆粒に貯蔵された物質等は細胞外流出現象（エキソサイ
トーシス）により細胞外に分泌される。特に密集顆粒に
はアデノシンジホスファート（ＡＤＰ），アデノシント
リホスファート（ＡＴＰ）等のアデニンヌクレオチド、
カルシウム及びセロトニン等が貯蔵されており、血小板
が凝集される時遊離され、非可逆的な２次凝集作用を誘
発するようになる。即ち、ＡＤＰ、トロンビン等で凝集
を誘導した場合の非可逆的な２次凝集反応が、かかる顆
粒分泌による結果だと言える。従って、顆粒からこのよ
うな生理活性物質中の一つであるセロトニンの分泌に及
ぼす本発明の化合物の影響を測定することによって、本
発明の化合物の血小板凝集抑制効果を確認するため、次
のような実験を行った。
【００４５】フザー（Huzoor）等の方法（参照：Huzoor
-Akbar, Patel, S., Kokrady, S.,Witiak, D.T., Newma
n, H.A.I. and Feller, D.R., Biochem. Pharmacol. 3
0, 2013-2020, 1981) によって〔14Ｃ〕−セロトニンが
負荷された血小板を利用して本発明の化合物のセロトニ
ン分泌抑制効果を測定した。即ち、洗浄血小板に５−〔
14Ｃ〕−セロトニンを加えて３７℃で３０分間培養した
後に洗浄用緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウム，０．８
ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナトリウム，
２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグネシウ
ム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭ Ｎ−〔２−ヒド
ロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタンスル
ホン酸〕，緩衝液の酸性度ｐＨ７．４）を用いて洗浄
し、０．３５％牛血清アルブミンを含有する変更された
タイロード緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウム，０．８
ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナトリウム，
２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグネシウ
ム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭＮ−〔２−ヒドロ
キシエチル〕ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタンスルホン
酸〕，酸性度ｐＨ７．４）に再懸濁させ細胞数を調整し
た。２μＭイミプラミンを加えて分泌されたセロトニン
の再吸収を遮断させ、本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ１
５を加えた後に３７℃で８分間反応させ、血小板活性化
物質（トロンビンまたはコラーゲン）を加えた。４ｍＭ
エチレンジアミンテトラ酢酸、１０ｍＭホルムアルデヒ
ドを加えて反応を停止させた後に常温で１２，０００ｘ
ｇで２分間遠心分離し、上清液を取って分泌された５−
〔14Ｃ〕−セロトニンの放射線量を測定した。測定され
た結果は図４及び図５に示した。
-Akbar, Patel, S., Kokrady, S.,Witiak, D.T., Newma
n, H.A.I. and Feller, D.R., Biochem. Pharmacol. 3
0, 2013-2020, 1981) によって〔14Ｃ〕−セロトニンが
負荷された血小板を利用して本発明の化合物のセロトニ
ン分泌抑制効果を測定した。即ち、洗浄血小板に５−〔
14Ｃ〕−セロトニンを加えて３７℃で３０分間培養した
後に洗浄用緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウム，０．８
ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナトリウム，
２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグネシウ
ム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭ Ｎ−〔２−ヒド
ロキシエチル〕−ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタンスル
ホン酸〕，緩衝液の酸性度ｐＨ７．４）を用いて洗浄
し、０．３５％牛血清アルブミンを含有する変更された
タイロード緩衝液（１２９ｍＭ塩化ナトリウム，０．８
ｍＭ第二燐酸カリウム，８．９ｍＭ炭酸ナトリウム，
２．８ｍＭ塩化カリウム，０．８ｍＭ塩化マグネシウ
ム，５．６ｍＭグルコース，１０ｍＭＮ−〔２−ヒドロ
キシエチル〕ピペラジン−Ｎ’−〔２−エタンスルホン
酸〕，酸性度ｐＨ７．４）に再懸濁させ細胞数を調整し
た。２μＭイミプラミンを加えて分泌されたセロトニン
の再吸収を遮断させ、本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ１
５を加えた後に３７℃で８分間反応させ、血小板活性化
物質（トロンビンまたはコラーゲン）を加えた。４ｍＭ
エチレンジアミンテトラ酢酸、１０ｍＭホルムアルデヒ
ドを加えて反応を停止させた後に常温で１２，０００ｘ
ｇで２分間遠心分離し、上清液を取って分泌された５−
〔14Ｃ〕−セロトニンの放射線量を測定した。測定され
た結果は図４及び図５に示した。
【００４６】図４及び図５に図示された結果よりわかる
ように、図１及び図２で確認されたもので、血小板活性
化物質等によって誘導される血小板凝集能を抑制する濃
度範囲で、本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ１５はトロン
ビン（図４）及びコラーゲン（図５）によって増加され
るセロトニン分泌を抑制した。従って、本発明の化合物
は、活性化された血小板で凝集能を増幅させる効果のあ
る物質等が密集顆粒から遊離されるのを抑制させるメカ
ニズムを通じて血小板の凝集能を低下させるのに寄与す
るものと判断される。
ように、図１及び図２で確認されたもので、血小板活性
化物質等によって誘導される血小板凝集能を抑制する濃
度範囲で、本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ１５はトロン
ビン（図４）及びコラーゲン（図５）によって増加され
るセロトニン分泌を抑制した。従って、本発明の化合物
は、活性化された血小板で凝集能を増幅させる効果のあ
る物質等が密集顆粒から遊離されるのを抑制させるメカ
ニズムを通じて血小板の凝集能を低下させるのに寄与す
るものと判断される。
【００４７】実験例３：トロンボキサンＡ2 生成能に対
する抑制効果の測定 文献〔Ko, F.N., Sheu, S.J., Liu, Y.M., Huang, T.
F., and Teng, C.M., Inhibition of rabbit platelet
aggregation by 1,4-naphthoquinones, Thromb.Res.57,
453-463, 1990〕に記述された方法によって、次の通り
トロンボキサンＡ2 の生成能を測定した。０．５mlの洗
浄血小板（３×１０8 血小板／ml）が入れられたプラス
チックキュベットで３７℃を維持させながら実験を行っ
た。まず、洗浄血小板を本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ
１５で８分間前処理した後にコラーゲンを加えた。５分
間培養した後に２ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸と５
０μＭインドメタシンを加えて反応を停止させた。常温
で１２，０００ｘｇで２分間遠心分離させた後に上清液
を取って−２０℃で保管した。トロンボキサンＡ2は不
安定な構造を持っているので、直ちに安定した形態であ
るトロンボキサンＢ 2 に変わるので、トロンボキサンＢ
2 の生成をトロンボキサンＡ2 生成の指標とし、放射免
疫検定法で測定した。測定した結果は次の表１に示し
た。
する抑制効果の測定 文献〔Ko, F.N., Sheu, S.J., Liu, Y.M., Huang, T.
F., and Teng, C.M., Inhibition of rabbit platelet
aggregation by 1,4-naphthoquinones, Thromb.Res.57,
453-463, 1990〕に記述された方法によって、次の通り
トロンボキサンＡ2 の生成能を測定した。０．５mlの洗
浄血小板（３×１０8 血小板／ml）が入れられたプラス
チックキュベットで３７℃を維持させながら実験を行っ
た。まず、洗浄血小板を本発明の化合物であるＮＱ−Ｙ
１５で８分間前処理した後にコラーゲンを加えた。５分
間培養した後に２ｍＭエチレンジアミンテトラ酢酸と５
０μＭインドメタシンを加えて反応を停止させた。常温
で１２，０００ｘｇで２分間遠心分離させた後に上清液
を取って−２０℃で保管した。トロンボキサンＡ2は不
安定な構造を持っているので、直ちに安定した形態であ
るトロンボキサンＢ 2 に変わるので、トロンボキサンＢ
2 の生成をトロンボキサンＡ2 生成の指標とし、放射免
疫検定法で測定した。測定した結果は次の表１に示し
た。
【００４８】
【表１】
【００４９】上記表１に記載された結果よりわかるよう
に、コラーゲン処理によって顕著に増加されるトロンボ
キサンＡ2 生成に対して本発明のＮＱ−Ｙ１５を５０μ
Ｍ，３０μＭ濃度で前処理した場合にそれぞれ８６．３
５％，１５．５４％の有意な抑制効果を示した。従っ
て、本発明の化合物は活性化された血小板で分泌され血
小板の活性化を増幅させる効果のあるトロンボキサンＡ
2 の合成能を抑制させるメカニズムを経由して血小板の
凝集抑制に寄与するものと判断される。
に、コラーゲン処理によって顕著に増加されるトロンボ
キサンＡ2 生成に対して本発明のＮＱ−Ｙ１５を５０μ
Ｍ，３０μＭ濃度で前処理した場合にそれぞれ８６．３
５％，１５．５４％の有意な抑制効果を示した。従っ
て、本発明の化合物は活性化された血小板で分泌され血
小板の活性化を増幅させる効果のあるトロンボキサンＡ
2 の合成能を抑制させるメカニズムを経由して血小板の
凝集抑制に寄与するものと判断される。
【００５０】実験例４：乳酸脱水素酵素流出実験 乳酸脱水素酵素（lactic acid dehydrogenase : LDH)は
血小板の細胞質内に存在する酵素で、血小板膜が損傷さ
れるか、あるいは細胞溶解現象等の細胞毒性が誘発され
ると細胞外液で流出されるようになる。従って、本発明
の化合物で前処理した後に流出された乳酸脱水素酵素を
定量化することによって、本発明の化合物が細胞毒性を
誘発するか否かを確認しようとした。
血小板の細胞質内に存在する酵素で、血小板膜が損傷さ
れるか、あるいは細胞溶解現象等の細胞毒性が誘発され
ると細胞外液で流出されるようになる。従って、本発明
の化合物で前処理した後に流出された乳酸脱水素酵素を
定量化することによって、本発明の化合物が細胞毒性を
誘発するか否かを確認しようとした。
【００５１】洗浄された血小板に本発明の化合物である
ＮＱ−Ｙ１５を溶解させる溶媒であるジメチルスルホキ
シド（ＤＭＳＯ）（対照群）、ＮＱ−Ｙ１５、または細
胞膜を崩解させる作用をするトリトン（Triton）Ｘ−１
００（０．１％）を加えた後、常温で１２，０００ｘｇ
で２分間遠心分離させた後に上清液を分離した。分離さ
れた上清液に乳酸脱水素酵素測定試薬であるＬＤ−Ｌ１
０R （Sigma 社）を加え、自動で乳酸脱水素酵素を定量
化することのできる自動化臨床化学分析器（automated
clinical chemistry analyzer)ＳＢＡ３００（Gilford
社）を利用して流出された乳酸脱水素酵素を定量化し
た。測定された結果は次の表２に示した。
ＮＱ−Ｙ１５を溶解させる溶媒であるジメチルスルホキ
シド（ＤＭＳＯ）（対照群）、ＮＱ−Ｙ１５、または細
胞膜を崩解させる作用をするトリトン（Triton）Ｘ−１
００（０．１％）を加えた後、常温で１２，０００ｘｇ
で２分間遠心分離させた後に上清液を分離した。分離さ
れた上清液に乳酸脱水素酵素測定試薬であるＬＤ−Ｌ１
０R （Sigma 社）を加え、自動で乳酸脱水素酵素を定量
化することのできる自動化臨床化学分析器（automated
clinical chemistry analyzer)ＳＢＡ３００（Gilford
社）を利用して流出された乳酸脱水素酵素を定量化し
た。測定された結果は次の表２に示した。
【００５２】
【表２】
【００５３】上記表２に示された通り、本発明の化合物
であるＮＱ−Ｙ１５は血小板の凝集能を完全に抑制させ
る濃度である０．１ｍＭ濃度で前処理して１２０分間処
理した場合にも、ＬＤＨの濃度において対照群と有意な
差異を示さなかった。従って、ＮＱ−Ｙ１５は高濃度で
も細胞毒性をおこさないものと確認された。
であるＮＱ−Ｙ１５は血小板の凝集能を完全に抑制させ
る濃度である０．１ｍＭ濃度で前処理して１２０分間処
理した場合にも、ＬＤＨの濃度において対照群と有意な
差異を示さなかった。従って、ＮＱ−Ｙ１５は高濃度で
も細胞毒性をおこさないものと確認された。
【図１】トロンビンで活性化された血小板の凝集能に対
する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を示す
グラフである。
する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を示す
グラフである。
【図２】コラーゲンで活性化された血小板の凝集能に対
する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を示す
グラフである。
する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を示す
グラフである。
【図３】Ａ２３１８７で活性化された血小板の凝集能に
対する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を示
すグラフである。
対する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を示
すグラフである。
【図４】トロンビンで誘導される顆粒内セロトニン分泌
に対する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を
示すグラフである。
に対する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を
示すグラフである。
【図５】コラーゲンで誘導される顆粒内セロトニン分泌
に対する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を
示すグラフである。
に対する本発明の化合物（ＮＱ−Ｙ１５）の抑制効果を
示すグラフである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 ＡＲＣＨＩＶＥＳ ＯＦ ＰＨＡＲＭ ＡＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，1993，16 （２），161−163 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A61K 31/275 ACB A61K 31/44 ＣＡ（ＳＴＮ) ＣＡＯＬＤ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ)
Claims (1)
- 【請求項１】 有効成分として２−クロロ−３−〔（４
−シアノフェニル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノン
又は２−クロロ−３−〔（５−メチルピリジン−２−イ
ル）−アミノ〕−１，４−ナフトキノンを、薬剤学的に
許容される担体と共に含有することを特徴とする血液凝
固抑制用薬剤学的組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1223396A JP2756941B2 (ja) | 1996-01-26 | 1996-01-26 | ２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板凝集抑制剤としての用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1223396A JP2756941B2 (ja) | 1996-01-26 | 1996-01-26 | ２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板凝集抑制剤としての用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09208551A JPH09208551A (ja) | 1997-08-12 |
| JP2756941B2 true JP2756941B2 (ja) | 1998-05-25 |
Family
ID=11799661
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1223396A Expired - Lifetime JP2756941B2 (ja) | 1996-01-26 | 1996-01-26 | ２−クロロ−３−アリールアミノ−１，４−ナフトキノン誘導体の血小板凝集抑制剤としての用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2756941B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2476643B (en) * | 2009-12-23 | 2012-11-14 | Haomamedica Ltd | 1,4-Dihydro-1,4-dioxonaphtalene derivatives as anticoagulants |
| GB2476644B (en) | 2009-12-23 | 2012-11-14 | Haomamedica Ltd | 1,4-Dihydro-1,4-dioxonaphtalene derivatives for the treatment of osteoporosis |
-
1996
- 1996-01-26 JP JP1223396A patent/JP2756941B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ＡＲＣＨＩＶＥＳ ＯＦ ＰＨＡＲＭＡＣＡＬ ＲＥＳＥＡＲＣＨ，１９９３，１６（２），１６１−１６３ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH09208551A (ja) | 1997-08-12 |
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