JP2707407B2 - 骨マトリックス合成促進剤 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、熱ショックタンパク質
（ｈｅａｔ ｓｈｏｃｋ ｐｒｏｔｅｉｎ；略称はＨＳ
Ｐ）を有効成分として含有する骨マトリックス合成促進
剤に関する。本発明による骨マトリックス合成促進剤に
よれば、特に骨芽細胞からのコラーゲンの合成を促進す
ることにより、骨マトリックス産生の低下の病態を示す
病気、例えば骨粗鬆症の患者の生理学的状態を有効に改
善し、骨粗鬆症などの骨マトリックス産生の低下の病態
を示す病気を効果的に治療することができる。

【０００２】

【従来の技術】近年、細胞外マトリックス産生の低下の
病態を示す病気が大きな問題となっている。ここで言う
細胞外マトリックス産生の低下の病態を示す病気とは、
例えば骨組織における骨粗鬆症を含む。骨組織は、生化
学的には、有機成分であるマトリックスと、無機質（ミ
ネラル）であるカルシウム−リンの骨塩（大部分はハイ
ドロキシアパタイト）とから構成されている。骨マトリ
ックスの約９０％はコラーゲンからなる。

【０００３】コラーゲンは生体の全タンパク質の約２５
〜３０％を占め、分子量約３０万、長さ約２８０ｎｍ、
直径約１．５ｎｍのロープ状の分子であり、特殊な螺旋
構造を有している。その構成アミノ酸は、約３０％がグ
リシン、約２０％がプロリン又はハイドロキシプロリン
である。骨のコラーゲンは、大部分がＩ型コラーゲン
で、骨組織の中で最も多いタンパク質である。

【０００４】骨組織は、一生を通じて絶え間なく改変
（リモデリング）を続け、骨芽細胞による骨形成と破骨
細胞による骨吸収により改変されている。骨形成の基本
は、まず骨の細胞が出現し、次いで、コラーゲンなど、
骨のマトリックス形成が起こり、最後にミネラルが沈着
する、という順序で進行する。骨吸収過程はこの逆であ
り、その繰り返しがリモデリングである。骨形成過程に
おいて骨芽細胞はコラーゲンを主成分とするマトリック
スを産生し、そのホールゾーンにおける石灰化が骨形成
の中心的現象であると考えられている。そして骨芽細胞
により産生されたコラーゲンは架橋結合が導入されるこ
とにより石灰化マトリックスとして機能的に完成する。

【０００５】コラーゲンが骨の形成に必須の役割を演じ
ていることは、プロコラーゲン遺伝子の異常に基づくコ
ラーゲン合成の異常により生ずる骨形成不全症が存在し
（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，２２９巻，２８７頁，１９８
５年）、その骨はもろくて骨折を起こしやすいこと、ま
た骨の形成に重要な働きをするホルモンであり、その欠
乏が閉経後骨粗鬆症の主要な原因である、エストロゲン
のリセプターが骨芽細胞に存在し、エストロゲンにより
骨芽細胞の増殖やコラーゲン合成が促進されること（Ｅ
ｒｎｓｔ Ｍ，Ｓｃｈｍｉｄ Ｃｈ，Ｆｒｏｅｓｃｈ
ＥＲ：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ，８５巻：２３０７−２３１０頁，１９８８年）、な
どからも明らかである。

【０００６】加齢における骨組織の変化は、成長期、成
熟期及び老齢期に大きく分けることができる。成熟期に
おいても、破骨細胞群による骨吸収と骨芽細胞群による
骨形成が絶えず繰り返され、その動的平衡の維持により
骨量及び形態が保たれている。しかしながら、骨形成よ
りも骨吸収が上回る状態になると骨の量は減少する。閉
経や老化とともに全身性にこのような状態になるのが退
行期骨粗鬆症である。

【０００７】骨粗鬆症とは、全身又は局所での単位体積
当たりの骨組織に占める骨量の低下として定義され、骨
に穴がいっぱいできて、その構造が粗くなり、脆くなっ
た状態である。骨粗鬆症においては、骨のミネラルとマ
トリックスがともに量的に減少する。骨粗鬆症化状態
は、老化に伴って程度の差こそあれ存在しているが、疼
痛、変形又は骨折などが生じてきた際に、はじめて病的
状態として治療の対象になる。女性の場合は閉経後骨粗
鬆症が、男性の場合は７０歳以降に発症する老人性骨粗
鬆症が問題となっている。

【０００８】その治療の目的は、第一に骨折発生予防の
ための骨量維持あるいは増加をはかることであり、第二
に腰背部痛などの除痛である。現在、骨粗鬆症の治療又
は予防の指針としては、大別して２つの方向性が考えら
れている。すなわち、骨吸収の抑制による骨量減少の防
止、及び、骨形成の促進による骨量の増加である。骨吸
収抑制剤としては、カルシウム製剤、エストロゲン、カ
ルシトニン又はイブリフラボンを挙げることができ、骨
活性化又は骨形成促進剤としては活性型ビタミンＤ₃ を
挙げることができる。しかしながら、骨吸収の抑制は、
骨改変の抑制、すなわち、力学的負荷に対する骨の適合
反応の抑制を伴うことが危惧され、骨折率を低下させる
ことができるかどうかは疑わしい。一方、骨形成の促進
による骨量増加はこの点でより望ましい治療方向と考え
られるが、骨形成を促進する手段（治療薬）は少ない。

【０００９】このように、骨粗鬆症の診断ならびにそれ
らに基づく治療は、徐々に改善されてはいるものの、い
まだ根本的な治療法に到達していない。日本における退
行期骨粗鬆症の患者数は、現在でも既に約５００万人に
のぼり、代謝性骨疾患のなかで最も多く見られる疾患で
あり、今後の高齢化社会の到来とともにさらにその発生
頻度が増加すると予測される。骨粗鬆症はそれによって
もたらされる骨の脆弱性により、わずかな外傷で脊椎圧
迫骨折、大腿骨頸部骨折、橈骨遠位端骨折、上腕骨外科
頸骨折をおこし、日常生活動作の障害や歩行能力の喪失
をきたしやすくなる。特に大腿骨近位部骨折は寝たきり
老人となる原因ともなり、生命予後に直接影響しうる。
骨粗鬆症を原因として発症する大腿骨頸部骨折患者数
は、全国で現在、年間４〜５万人発生していると考えら
れているが、老人の増加に伴い、今後３０年間で患者数
が３倍以上になるものと予想されている。従って、骨形
成を促進する優れた新しい治療法の出現が望まれてい
た。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】上記したように、骨粗
鬆症などでは骨形成の著しく減少した病態が主病変であ
り、骨形成においてはコラーゲン生合成が必須の役割を
演じている。そして、骨形成過程においてコラーゲンを
主成分とするマトリックスを産生する中心的役割を担っ
ているのは骨芽細胞である。従って、骨芽細胞における
コラーゲンの生合成を促進させれば骨マトリックスの形
成が促進され、骨粗鬆症などの骨マトリックス産生の低
下の病態を示す病気は改善されることになる。

【００１１】本発明者は、意外にも、熱ショックタンパ
ク質（ＨＳＰ：ストレスタンパク質ともいう）が、骨芽
細胞におけるプロコラーゲンの合成を特異的に促進する
ことを見出した。本発明はこうした知見に基づくもので
あり、骨粗鬆症などの骨マトリックス産生の低下の病態
を示す病気の患者の生理学的状態を有効に改善し、骨粗
鬆症などの骨マトリックス産生の低下の病態を示す病気
を効果的に治療することのできる骨マトリックス合成促
進剤を提供することを目的とする。

【００１２】

【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、熱
ショックタンパク質（ＨＳＰ）を含有することを特徴と
する、骨マトリックス合成促進剤に関する。

【００１３】以下、本発明について詳細に説明する。Ｈ
ＳＰは、高温条件又は他のストレスをかけたときに細胞
から産生されるタンパク質群の総称である。本発明で
は、任意のＨＳＰを用いることができるが、例えば、哺
乳類（例えば、ヒト、ラット、マウスなど）由来のＨＳ
Ｐが、免疫性の点で好ましい。また、分子量５０キロダ
ルトン以下の低分子ＨＳＰ、例えば、分子量５〜５０キ
ロダルトンの低分子ＨＳＰを用いるのが好ましく、特に
はＨＳＰ４７を用いるのが好ましい。ＨＳＰ４７は、永
田などによって１９８６年に発見されたタンパク質であ
り、分子量４７キロダルトンの塩基性タンパク質（ｐＩ
＝９．０）である。なお、分子量が５〜５０キロダルト
ンの範囲内の低分子ＨＳＰは、調製法が容易なので好ま
しい。

【００１４】本発明の骨マトリックス合成促進剤は、有
効成分としてのＨＳＰの他に、製剤上許容することので
きる担体、例えば賦形剤、結合剤、保存剤、安定化剤及
び／又は着香料などを含有させて、慣用の調製方法によ
って製剤化することができる。

【００１５】本発明の骨マトリックス合成促進剤の投与
方法は、経口及び非経口的のいずれの方法によってもよ
い。非経口投与方法としては、注射（皮下、静脈内な
ど）、直腸投与などが例示される。これらのなかで、注
射による投与が最も好適である。投与剤形は、当業界で
公知の任意の剤形とすることができ、例えば経口投与用
としては粉末、顆粒、錠剤又はカプセル剤などが、非経
口投与用としては注射剤又は坐薬などがそれぞれ例示さ
れる。これらのなかで注射剤が最も好適に用いられる。
前記の投与以外にも、骨芽細胞へＨＳＰ遺伝子を導入
し、ＨＳＰの発現を促進させることによっても、同様の
効果を得ることができる。

【００１６】例えば注射剤の調製においては、有効成分
としてのＨＳＰの他に、例えば生理食塩水、滅菌水リン
ゲル液などの水溶性溶剤、植物油、脂肪酸エステルなど
の非水溶性溶剤、ブドウ糖、塩化ナトリウムなどの等張
化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、乳化
剤などを任意に用いることができる。具体的に一例を示
すと、ＨＳＰ４７（１０ｍｇ）とマンニトール（５０ｍ
ｇ）とを蒸留水に溶解して１０ｍｌとし、常法で除菌し
た後、溶液２ｍｌづつを注射用小瓶に分注し、又はその
まま凍結乾燥して注射剤とする。使用に際して、生理食
塩水で希釈して注射液とすることができる。

【００１７】本発明の骨マトリックス合成促進剤は、Ｈ
ＳＰを製剤中に一般に０．０１〜９０重量％、好ましく
は０．１〜６０重量％の割合で含有することができる。
また、本発明の骨マトリックス合成促進剤の投与量は、
患者の年齢、症状の程度などにより異なり、有効量であ
る限り特に限定されないが、通常、成人につき１日当た
り、ＨＳＰ４７量として、０．０１〜３０００ｍｇ、好
ましくは０．１〜５００ｍｇ程度である。そして、本発
明の骨マトリックス合成促進剤は、１日数回、例えば１
〜４回程度に分けて投与することができる。なお、ＨＳ
Ｐ、特にＨＳＰ４７に毒性は認められない。

【００１８】

【作用】上記したように、ＨＳＰ（特にＨＳＰ４７）に
は、骨芽細胞のプロコラーゲン合成を特異的に促進する
作用があるので、ＨＳＰを投与すると骨芽細胞でのコラ
ーゲン生合成が特異的に増加し、骨マトリックスの形成
が促進される。その結果、骨形成も促進されることにな
る。従って、ＨＳＰは、コラーゲンの減少を伴う骨マト
リックス産生低下の病態を示す病気、例えば骨粗鬆症な
どの予防及び治療に使用することができ、高度に成立し
た骨粗鬆症などの骨疾患も治療することができる。

【００１９】

【実施例】以下、実施例によって本発明を具体的に説明
するが、これらは本発明の範囲を限定するものではな
い。骨芽細胞において、プロリンのタンパク質への取り
込み活性が、コラーゲン合成に比例することが知られて
いるので、以下の実施例においてタンパク質の合成は、
プロリンの取り込み活性を測定することにより評価し
た。

【００２０】調製例１：ＨＳＰ４７の精製 １日齢のＣ５７ＢＬマウスを屠殺し、頭部と内臓を除去
した後、０．２５Ｍスクロース、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２
ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライド、２ｍＭ−
Ｎ−エチルマレイミド（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｃｏ．）、１μｇ／ｍｌロイペプチン（Ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ）、及び１μｇ／ｍｌペプスタチンＡ（Ｂｏｅｈｒｉ
ｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｓ）を含む１０ｍＭトリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）４５
０ｍｌ中で、４℃にて３分間、最高速度でホモジナイザ
ー（Ｐｏｌｙｔｒｏｎ）でホモジナイズした。

【００２１】続いて、以下の操作も全て４℃で行った。
得られたホモジネートを遠心分離（１５分間；４２００
ｇ）した。粗膜画分を得るために、上清溶液を超遠心分
離（１時間；１５００００ｇ）した。得られたペレット
を、１％オクチルフェノキシポリエトキシエタノール
（Ｎｏｎｉｄｅｔ Ｐ−４０）、５０ｍＭトリス−ＨＣ
ｌ（ｐＨ８．０）、０．１５Ｍ−ＮａＣｌと５ｍＭ−Ｅ
ＤＴＡ、２ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオライ
ド、２ｍＭ−Ｎ−エチルマレイミド、１μｇ／ｍｌロイ
ペプチン及び１μｇ／ｍｌペプスタチンＡを含む抽出バ
ッファー１２５ｍｌに再懸濁し、ホモジナイザー（Ｄｏ
ｕｎｃｅ）で処理し、得られたホモジネートを１時間、
静かに攪拌した。抽出液を超遠心分離（１時間；１５０
０００ｇ）し、膜抽出液として上清溶液を得た。

【００２２】膜抽出液をｇｅｌａｔｉｎ−Ｓｅｐｈａｒ
ｏｓｅ ４Ｂ（ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌｓ）と３０〜４０（ｖ／ｖ）％懸濁液となるよ
う混合した。混合液を４℃で１６時間、十分に攪拌し
た。その膜抽出液を含むｇｅｌａｔｉｎ−Ｓｅｐｈａｒ
ｏｓｅ懸濁液を２．５ｃｍ直径のカラムに詰め込み、１
０ベッド・ボリュームの、４０ｍＭオクチル−β−Ｄ−
グルコピラノシド（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃ
ｏ．）、０．４Ｍ−ＮａＣｌ、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍ
Ｍフェニルメチルスルホニルフルオライド、２ｍＭ−Ｎ
−エチルマレイミド、１μｇ／ｍｌロイペプチン及び１
μｇ／ｍｌペプスタチンＡを含む５０ｍＭトリス−ＨＣ
ｌ（ｐＨ８．０）で洗浄した。ＨＳＰ４７は、ｇｅｌａ
ｔｉｎ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４Ｂカラムより、４０ｍ
Ｍオクチル−β−Ｄ−グルコピラノシド、０．１５Ｍ−
ＮａＣｌ、５ｍＭ−ＥＤＴＡ、２ｍＭフェニルメチルス
ルホニルフルオライド、１μｇ／ｍｌロイペプチン及び
１μｇ／ｍｌペプスタチンＡを含む５０ｍＭトリス−Ｈ
Ｃｌを用いて、ｐＨを６．３に下げることにより溶出し
た。さらに、プレパラティブＳＤＳ／ＰＡＧＥにより精
製した。４７キロダルトンのバンドは染料（Ｃｏｏｍａ
ｓｓｉｅ ｂｒｉｌｌｉａｎｔ ｂｌｕｅ）で染色して
切り取り、電気泳動で溶出し、０．１（ｗ／ｖ）％ＳＤ
Ｓを含む蒸留水で透析した。

【００２３】調製例２ 調製例１にて製造したＨＳＰ４７を、以下のようにして
ラット骨芽肉腫由来骨芽細胞様細胞株ＵＭＲ−１０６細
胞へ細胞内導入し、ＵＭＲ−１０６細胞内におけるコラ
ーゲン産生量を測定した。（１）ＵＭＲ−１０６細胞の培養 ＵＭＲ−１０６細胞（大日本製薬）を７５ｃｍ² フラス
コに約１．０×１０⁴／ｃｍ² の密度で播種した。ＵＭ
Ｒ−１０６細胞を３７℃でＣＯ₂ インキュベータ中で、
１０％牛胎児血清（ＦＢＳ；Ｓｅｒａ−Ｌａｂ）、１
４．３ｍＭ−ＮａＨＣＯ₃ 、１．２ｍＭグルタミン（日
水製薬）、１００Ｕ／ｍｌペニシリン（ＧＩＢＣＯ）及
び０．１ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン（ＧＩＢＣＯ）
を含むダルベッコ変性イーグル（ＤＭＥ）とＦ−１２の
混合（ＤＭＥ／Ｆ−１２，１：１）培地で細胞を、コン
フルエントになるまで培養した。その後、１．０％ウシ
血清アルブミン（ＢＳＡ；生化学工業）を含む血清不含
培地に交換して２４時間培養し、細胞を収集した。

【００２４】（２）ＵＭＲ−１０６細胞内へのＨＳＰ４
７の注入 赤血球ゴースト法による細胞融合にて、ＵＭＲ−１０６
細胞内へＨＳＰ４７を注入した。すなわち、ヒト赤血球
をＫ⁺ 溶液（１６０ｍＭ−ＫＣｌ及び２０ｍＭトリシン
−ＮａＯＨバッファー；ｐＨ７．４）で３回洗浄した。
チトクロームｃ（２００μｇ）、ＨＳＰ４７（０．５ｍ
ｇ）及び３５％（ｖ／ｖ）赤血球Ｋ⁺ 溶液との混合液
０．５ｍｌを、４℃で１時間、４０ｍＭ−ＫＣｌと１０
ｍＭトリシン−ＮａＯＨバッファー（ｐＨ７．４）との
溶液２５０ｍｌに対して透析した。２．２Ｍ−ＫＣｌと
２０ｍＭ−ＭｇＣｌ₂ とを含む溶液を０．０５倍当量加
え、ゴースト懸濁液を３７℃で３０分間インキュベート
した。この段階で、ゴーストを４℃で一晩、放置した。

【００２５】ＨＳＰ４７内包赤血球ゴーストをＫ⁺ 溶液
で３回洗浄し、ＵＭＲ−１０６細胞と融合した。すなわ
ち、Ｎａ⁺ 溶液（１６０ｍＭ−ＮａＣｌ及び２０ｍＭト
リシン−ＮａＯＨバッファー；ｐＨ７．４）６．０ｍｌ
中のＵＭＲ−１０６細胞２×１０⁷ 個に、０．０８ｍＭ
−Ｌａ（ＮＯ₃ ）₃ を加え、続いて１．５×１０⁹ 個の
ＨＳＰ４７内包赤血球ゴーストを加えた。センダイウイ
ルスは４００ＨＡＵ／ｍｌの濃度まで加え、０℃で５分
間静置し、続いて３７℃で４５分間、静かに振盪しなが
らインキュベートした。細胞を培地と共に遠心（５分
間；１５０ｇ）し、融合した細胞からゴーストを除去し
た。この融合細胞、ならびにコントロールとしてＨＳＰ
４７を注入していないＵＭＲ−１０６細胞を用い、以下
の薬理試験例にて、ＤＮＡ合成量、コラーゲン合成量及
び非コラーゲン性タンパク質合成量を測定した。

【００２６】薬理試験例 （１）ＤＮＡ合成量の測定 ＤＮＡ合成は〔³ Ｈ〕チミジンの２時間取り込み量で測
定した。１．０％ＢＳＡを含む血清不含培地中で、〔メ
チル−³ Ｈ〕−チミジン（１μＣｉ／ｍｌ）及び非標識
のチミジン（５μＭ）を加え、融合細胞及びコントロー
ル細胞をインキュベートした。２時間インキュベーショ
ンした後、培地を除去し、氷冷したリン緩衝生理食塩水
（ＰＢＳ）で３回細胞層を洗い、細胞を集めた。冷やし
たトリクロロ酢酸でＤＮＡを沈殿させた（最終濃度：１
０％）。そして、沈殿物を０．２Ｎ−ＮａＯＨで溶解
し、放射能活性を測定した。

【００２７】（２）コラーゲン合成量、及び非コラーゲ
ン性タンパク質合成量の測定 細胞を〔³ Ｈ〕プロリン存在下で２時間培養し、タンパ
ク質合成量を測定した。コラーゲンは、以下に述べるよ
うに、バクテリアコラゲナーゼ法により測定した。コラ
ーゲン合成の割合（％）は、コラーゲンが他のタンパク
質より５．４倍のイミノ酸を含むことによる補正を行っ
た。１．０％ＢＳＡ、８０μｇ／ｍｌ−β−アミノプロ
ピオニトリル及び１００μｇ／ｍｌアスコルビン酸とを
含む血清不含培地中で、Ｌ−〔２，３−³ Ｈ〕プロリン
及び非標識プロリンをそれぞれ最終濃度が３μＣｉ／ｍ
ｌ及び１μＭとなるように培地に加えて、融合細胞及び
コントロール細胞を２時間インキュベーションした。そ
の後、細胞及び培養液を氷で冷やしながら超音波処理し
た。超音波処理液に、１０％トリクロロ酢酸を加えて沈
殿させ、その沈殿物を３回、１０％トリクロロ酢酸で洗
った。

【００２８】乾燥した沈殿物を０．１Ｎ−ＮａＯＨに
２．５ｍｇ／ｍｌとなるように溶かし、時々振盪しなが
ら３７℃で５分間、暖めた。０℃に冷却した後、この基
質溶液０．２ｍｌを反応混合液〔Ｎ−エチルマレイミド
（１．２５μモル）、ＣａＣｌ₂ （０．２５μモル）、
及びセファデックスＧカラムで精製したコラゲナーゼ
（２６μｇ）からなる〕０．５ｍｌと混合し、６０μモ
ルのヘぺス（Ｈｅｐｅｓ）バッファー（ｐＨ７．２）を
加えた。過剰のＮａＯＨを０．０８Ｎ−ＨＣｌ（０．２
ｍｌ）で中和した。

【００２９】３７℃で振盪しながら９０分間、インキュ
ベートした。反応は０．５％タンニン酸を含む１０％ト
リクロロ酢酸０．５ｍｌを加えることにより停止した。
０℃にて５分間静置し、４℃で遠心分離（５分間；４０
０ｇ）した。上清をカウント用バイアルに移した。沈殿
物を５％トリクロロ酢酸−０．２５％タンニン酸０．５
ｍｌに懸濁し、遠心分離した。得られた上清を上記の上
清と併せた。上清、及びアルカリに溶かした沈殿物を、
それぞれコラゲナーゼにより分解されるタンパク質（Ｃ
ＤＰ）すなわちコラーゲン、及びコラゲナーゼにより分
解されないタンパク質（ＮＣＰ）すなわち非コラーゲン
性タンパク質として、放射能活性を測定した。放射能活
性の測定は、試料を液体シンチレーション計数用試薬
（ＡＱＵＡＳＯＬ−２；ＤｕＰｏｎｔ Ｃａｔ．♯ＮＥ
Ｆ−９５２）５ｍｌに溶かし、液体シンチレーションカ
ウンター（Ｂｅｃｋｍａｎ ＬＳ ３８００）で計測し
た。結果を表１及び表２に示す。

【００３０】

【表１】 ＵＭＲ−１０６細胞でのＤＮＡ合成活性に対するＨＳＰ４７注入の影響 〔³ Ｈ〕チミジン取り込み量 ＵＭＲ−１０６細胞 （ｃｐｍ／１０⁴ ｃｅｌｌｓ） 正常対照細胞 ６１．０ ＨＳＰ４７注入細胞 ５７．９

【００３１】

【表２】ＵＭＲ−１０６細胞でのコラーゲン合成活性・
非コラーゲン性 タンパク質合成活性に対するＨＳＰ４７注入の影響 ＣＤＰ ＮＣＰ コラーゲン合成 ＵＭＲ−１０６細胞 (cpm/10⁴cells) (cpm/10⁴cells) ％ 正常対照細胞 ４．２３ １９．２ ３．９２ ＨＳＰ４７注入細胞 ９．５２ １８．９ ８．５３

【００３２】表１及び表２から明らかなように、ＵＭＲ
−１０６細胞内へＨＳＰ４７を注入したところ、ＤＮＡ
及び非コラーゲン性タンパク質のいずれもがコントロー
ル細胞と比べてほとんどその含有量が変わらず、合成が
促進されなかったにもかかわらず、コラーゲンについて
はその含有量がコントロール細胞に比べて約２〜３倍と
なった。これらの実験は、ＨＳＰ４７を骨芽細胞に注入
してやることによって得られた結果であるが、このこと
は骨芽細胞がＨＳＰ４７によりコラーゲンの産生を高め
ることを証明するものであり、ＨＳＰ４７が骨マトリッ
クス合成の促進に有効であることを示すものである。

【００３３】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明によるＨＳ
Ｐを有効成分として含有する骨マトリックス合成促進剤
は、骨粗鬆症などの骨疾患に罹患した骨芽細胞中にみら
れるコラーゲン合成減少を改善する作用を有する。従っ
て、本発明による骨マトリックス合成促進剤を投与する
ことにより骨粗鬆症などの骨マトリックス産生の低下の
病態を示す病気の患者の生理学的状態を有効に改善し、
骨粗鬆症などの骨マトリックス産生の低下の病態を示す
病気を効果的に治療することができる。

フロントページの続き (56)参考文献 特表 平４−502920（ＪＰ，Ａ) 特表 平５−507908（ＪＰ，Ａ) Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒ ｙ，Ｖｏｌ．265，Ｎｏ．２（1990）Ｐ. 992−999 化学と生物，Ｖｏｌ．28，Ｎｏ．10 （1990）Ｐ．626−627 生体の科学，Ｖｏｌ．39，Ｎｏ．４ （1988）Ｐ．270−274

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）を含有
   することを特徴とする、骨マトリックス合成促進剤。
2. 【請求項２】 熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）が分子
   量５０キロダルトン以下の低分子ＨＳＰファミリーであ
   る、請求項１記載の骨マトリックス合成促進剤。
3. 【請求項３】 熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）がＨＳ
   Ｐ４７である、請求項１記載の骨マトリックス合成促進
   剤。