JP2699435B2 - 核酸電気泳動用ゲル組成物 - Google Patents
核酸電気泳動用ゲル組成物Info
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- JP2699435B2 JP2699435B2 JP63205256A JP20525688A JP2699435B2 JP 2699435 B2 JP2699435 B2 JP 2699435B2 JP 63205256 A JP63205256 A JP 63205256A JP 20525688 A JP20525688 A JP 20525688A JP 2699435 B2 JP2699435 B2 JP 2699435B2
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- gel
- nucleic acid
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は核酸電気泳動用ゲル組成物に関する。
近年、バイオテクノロジーに関する研究の活発化によ
り、遺伝子工学に関する研究が活発に行なわれてきてい
る。この遺伝子工学の研究においては、生物細胞の遺伝
物質であるデオキシリボ核酸（DNA）の塩基配列の解
析、異種細胞への組換え等の研究が盛んに行われている
が、これらの研究においては、抽出されたDNAの分析、
それらの制限酵素による切断フラグメントの分析等が不
可欠であり、そのために電気泳動法が簡便かつ高感度分
析法として汎用されている。従って、このような電気泳
動を行なうためのゲル化剤及びゲル組成物を提供するこ
とは遺伝子工学研究の基礎及び応用において極めて有意
義である。
り、遺伝子工学に関する研究が活発に行なわれてきてい
る。この遺伝子工学の研究においては、生物細胞の遺伝
物質であるデオキシリボ核酸（DNA）の塩基配列の解
析、異種細胞への組換え等の研究が盛んに行われている
が、これらの研究においては、抽出されたDNAの分析、
それらの制限酵素による切断フラグメントの分析等が不
可欠であり、そのために電気泳動法が簡便かつ高感度分
析法として汎用されている。従って、このような電気泳
動を行なうためのゲル化剤及びゲル組成物を提供するこ
とは遺伝子工学研究の基礎及び応用において極めて有意
義である。
（従来技術） 従来核酸電気泳動用ゲルとしては、高純度寒天粉末を
電気泳動用緩衝液に添加し、加熱溶解後冷却してゲル化
させた寒天ゲル、アクリルアミドを適当な重合開始剤で
重合させて得られるポリアクリルアミドゲル等があり、
DNAのみならずRNA（リボ核酸）、タンパク質等の分離分
析用に利用されてきている。
電気泳動用緩衝液に添加し、加熱溶解後冷却してゲル化
させた寒天ゲル、アクリルアミドを適当な重合開始剤で
重合させて得られるポリアクリルアミドゲル等があり、
DNAのみならずRNA（リボ核酸）、タンパク質等の分離分
析用に利用されてきている。
（発明の解決しようとする問題点） 核酸電気泳動用ゲルとして要求される性質としては、
従来、主として次のような点があげられている。
従来、主として次のような点があげられている。
DNAフラグメントの大きさの順に泳動されること
（小さいフラグメントほど早い）。
（小さいフラグメントほど早い）。
泳動可能なDNAフラグメントの大きさの範囲が広い
こと。
こと。
ゲルが泳動しようとする核酸と反応、結合、分析分
解等の副反応をおこさないこと。
解等の副反応をおこさないこと。
泳動後核酸フラグメントのシャープなバンドパター
ンを与えること。
ンを与えること。
分離性能が高いこと。
泳動時間が短かくて済むこと。
ゲルが核酸と同じ吸収波長領域を持たないこと。
泳動した核酸フラグメントがゲル内で容易に拡散し
ないこと。
ないこと。
ゲルが適度の硬さを有し、取扱いが容易なこと。
然るに、従来利用されている寒天ゲル、ポリアクリル
アミドゲル等においては、上記の性能のうち、及び
の性質において必ずしも満足のいく性質を与えるもの
とはなっていない。
アミドゲル等においては、上記の性能のうち、及び
の性質において必ずしも満足のいく性質を与えるもの
とはなっていない。
（問題点を解決しようとする手段） そこで本発明者等は、上記性質をすべて満足する核酸
電気泳動用ゲルの開発を目的として鋭意研究を行なった
結果、シュードモナス・エロディア（Psevdonoas elode
a）菌の生産する多糖類が、核酸電気泳動用ゲルとして
の良好な性質を有することを見出し、本発明を完成する
に至った。
電気泳動用ゲルの開発を目的として鋭意研究を行なった
結果、シュードモナス・エロディア（Psevdonoas elode
a）菌の生産する多糖類が、核酸電気泳動用ゲルとして
の良好な性質を有することを見出し、本発明を完成する
に至った。
すなわち本発明は、無機金属イオン含有が緩衝液とシ
ュードモナス・エロディア（Pseudomonas elodea）生産
する多糖類の混合物を加熱溶解せしめた後、冷却するこ
とによりゲル化せしめてなる核酸電気泳動用ゲル組成物
である。
ュードモナス・エロディア（Pseudomonas elodea）生産
する多糖類の混合物を加熱溶解せしめた後、冷却するこ
とによりゲル化せしめてなる核酸電気泳動用ゲル組成物
である。
本発明において使用される無機金属イオン含有緩衝液
とは、従来核酸電気泳動用に使用されている緩衝液に、
使用しようとする濃度で、かつ目的とするゲル強度を与
えるのに必要な無機金属イオンを含有したものならば、
どのようなものでも使用可能である。すなわち、従来使
用されている緩衝液としては、トリスー酢酸緩衝液（0.
04M トリスー酢酸、0.001M EDTA pH8.0）、トリスーリ
ン酸緩衝液（0.08M トリスーリン酸、0.002M EDTA、pH
8.0）及びトリスーホウ酸緩衝液（0.089M トリスーホ
ウ酸、0.089Mホウ酸、0.002MEDTA、pH8.0）等が知られ
ているが、これら緩衝液にゲルを形成し、かつ目的とす
る核酸の分離能を与えるに十分な濃度の無機金属イオン
を含有せしめたものが使用される。
とは、従来核酸電気泳動用に使用されている緩衝液に、
使用しようとする濃度で、かつ目的とするゲル強度を与
えるのに必要な無機金属イオンを含有したものならば、
どのようなものでも使用可能である。すなわち、従来使
用されている緩衝液としては、トリスー酢酸緩衝液（0.
04M トリスー酢酸、0.001M EDTA pH8.0）、トリスーリ
ン酸緩衝液（0.08M トリスーリン酸、0.002M EDTA、pH
8.0）及びトリスーホウ酸緩衝液（0.089M トリスーホ
ウ酸、0.089Mホウ酸、0.002MEDTA、pH8.0）等が知られ
ているが、これら緩衝液にゲルを形成し、かつ目的とす
る核酸の分離能を与えるに十分な濃度の無機金属イオン
を含有せしめたものが使用される。
また、無機金属イオン含有緩衝液における無機金属イ
オンとしては周期律表の第１族から第３族に属する金属
のイオンであり、ナトリウム、カリウム、マグネシウ
ム、カルシウム、亜鉛、マンガン等の陽イオンである。
これら陽イオンは、実用上では、塩酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、有機酸塩等の形で、前述の緩衝液に溶解して使用さ
れ得るものである。また使用される金属イオンの濃度は
目的とするゲルの強度、泳動される核酸の種類と分子量
等に応じて適宜決定されるものであり、通常0.01重量％
〜１重量％、好ましくは0.05重量％〜0.5重量％の範囲
で使用される。
オンとしては周期律表の第１族から第３族に属する金属
のイオンであり、ナトリウム、カリウム、マグネシウ
ム、カルシウム、亜鉛、マンガン等の陽イオンである。
これら陽イオンは、実用上では、塩酸塩、硫酸塩、硝酸
塩、有機酸塩等の形で、前述の緩衝液に溶解して使用さ
れ得るものである。また使用される金属イオンの濃度は
目的とするゲルの強度、泳動される核酸の種類と分子量
等に応じて適宜決定されるものであり、通常0.01重量％
〜１重量％、好ましくは0.05重量％〜0.5重量％の範囲
で使用される。
次に、本発明において使用されるシュードモナス・エ
ロディア（Pseudomonas elodea）菌の生産する多糖類す
なわち、ジェランガムは、該菌株の培養物より抽出精製
されたもの、抽出精製前または後に脱アセチル化された
もの、または部分的に脱アセチル化された後精製された
もの等が、適宜使用されるものである。また使用される
濃度は、これもまた限定的でなく、目的とする電気泳動
におけるゲル強度、泳動される核酸の種類及び分子量
（大きさ）により適宜決定されるものであり、通常0.1
重量％〜３重量％の濃度で使用される。
ロディア（Pseudomonas elodea）菌の生産する多糖類す
なわち、ジェランガムは、該菌株の培養物より抽出精製
されたもの、抽出精製前または後に脱アセチル化された
もの、または部分的に脱アセチル化された後精製された
もの等が、適宜使用されるものである。また使用される
濃度は、これもまた限定的でなく、目的とする電気泳動
におけるゲル強度、泳動される核酸の種類及び分子量
（大きさ）により適宜決定されるものであり、通常0.1
重量％〜３重量％の濃度で使用される。
本発明においては、前記の如き、金属イオン含有核酸
電気泳動緩衝液とジェランガムの混合物を加熱溶解後冷
却することによりゲル化せしめてなる組成物に関するも
のであるが、該混合物の溶解方法としては、該混合物を
100℃前後の温度で数分間加熱することにより構成され
るものであり、この場合、加熱法としてはオートクレー
ブ、ガス電気等通常用いられる加熱法が利用可能であ
る。
電気泳動緩衝液とジェランガムの混合物を加熱溶解後冷
却することによりゲル化せしめてなる組成物に関するも
のであるが、該混合物の溶解方法としては、該混合物を
100℃前後の温度で数分間加熱することにより構成され
るものであり、この場合、加熱法としてはオートクレー
ブ、ガス電気等通常用いられる加熱法が利用可能であ
る。
また、冷却によりゲル化させる方法としては、該混合
物の加熱溶解液を電気泳動用平板容器、カラム等に流し
込んだ後、室温で放置し自然冷却によってゲル化させる
方法、低温度室内で急速冷却によってゲル化させる方法
等があげられる。
物の加熱溶解液を電気泳動用平板容器、カラム等に流し
込んだ後、室温で放置し自然冷却によってゲル化させる
方法、低温度室内で急速冷却によってゲル化させる方法
等があげられる。
以上の如くして、本発明の核酸電気泳動用ゲル組成物
は製造されるものであるが、該組成物を核酸電気泳動用
に使用するに際しては、泳動用緩衝液に、本発明のゲル
組成物作成時に用いられたと同じ金属イオンを同じ濃度
になるように含有せしめた緩衝液を用いて、寒天ゲル、
ポリアクリルアミドゲルを用いて行われる公知方法と全
く同様の方法により電気泳動を行なうことにより使用さ
れ得るものである。
は製造されるものであるが、該組成物を核酸電気泳動用
に使用するに際しては、泳動用緩衝液に、本発明のゲル
組成物作成時に用いられたと同じ金属イオンを同じ濃度
になるように含有せしめた緩衝液を用いて、寒天ゲル、
ポリアクリルアミドゲルを用いて行われる公知方法と全
く同様の方法により電気泳動を行なうことにより使用さ
れ得るものである。
このようにして得られた本発明の核酸電気泳動用ゲル
組成物を適用できる核酸としては、細菌、酵母、放射
菌、糸状菌等の各種微生物、動物植物、原生動物、ウイ
ルス等から抽出される遺伝子DNA、プラスミド及びこれ
らDNA、プラスミドの各種制御酵素によって得られる各
種分子量を有するフラグメントであり、また前記生物種
により抽出される各種分子量を有するRNA等があげられ
る。
組成物を適用できる核酸としては、細菌、酵母、放射
菌、糸状菌等の各種微生物、動物植物、原生動物、ウイ
ルス等から抽出される遺伝子DNA、プラスミド及びこれ
らDNA、プラスミドの各種制御酵素によって得られる各
種分子量を有するフラグメントであり、また前記生物種
により抽出される各種分子量を有するRNA等があげられ
る。
（発明の効果） 本発明による核酸電気泳動用ゲル組成物を用いてλ−
DNA、φ×174−DNA、pBR322−DNA及び各種微生物より抽
出された遺伝子DNAを各種制限酵素を用いて切断したDNA
フラグメントを電気泳動した結果、前述の核酸電気泳動
用ゲルとして要求される諸性質を満足することが明らか
となり、本発明の核酸電気泳動用ゲル組成物が実用上極
めて有用であることが判明した。
DNA、φ×174−DNA、pBR322−DNA及び各種微生物より抽
出された遺伝子DNAを各種制限酵素を用いて切断したDNA
フラグメントを電気泳動した結果、前述の核酸電気泳動
用ゲルとして要求される諸性質を満足することが明らか
となり、本発明の核酸電気泳動用ゲル組成物が実用上極
めて有用であることが判明した。
また、本発明において使用されるジエランガムは、そ
の特徴的なゲル形成能と形成されたゲルの透明性によ
り、各種微生物・植物細胞培養用のゲルマトリックスと
してすでに利用され、また各種食品製造における増粘剤
分散剤等としての利用の可能性が見出されているが、本
発明のごとく核酸電気泳動用ゲルマトリックスとして利
用できることは本発明者等によってはじめて見出された
ものであり、ジエランガムの新規用途開発の点でも産業
上極めて有意義である。
の特徴的なゲル形成能と形成されたゲルの透明性によ
り、各種微生物・植物細胞培養用のゲルマトリックスと
してすでに利用され、また各種食品製造における増粘剤
分散剤等としての利用の可能性が見出されているが、本
発明のごとく核酸電気泳動用ゲルマトリックスとして利
用できることは本発明者等によってはじめて見出された
ものであり、ジエランガムの新規用途開発の点でも産業
上極めて有意義である。
（実施例） 次に本発明を実施例を用いて更に詳しく説明する。
実施例１ トリスヒドロキシメチルアミノメタン10.8g、ホウ酸
5.5g、0.5M EDTA水溶液4.0ml及び塩化マグネシウム1.0g
を蒸留水に溶解（最終的に１にフィルアップ）し、こ
れにジエランガム粉末5.0gを懸濁した。該懸濁液を120
℃、１、２気圧で５分間加熱し、ジエランガムを完全に
溶解させた。続いて、該溶解液を70〜80℃まで冷却した
後、１％濃度のエチジウムプロマイド水溶液を1ml添加
し、均一に溶解した。このように得られた溶液をポリア
クリルアミド樹脂製の電気泳動用平板型枠に流し込ん
だ。その後、本型枠の一端側（枠の端から１〜2cm）の
ところに、溶液がゲル化した後に、供試反応核酸フラグ
メント含有反応液を添加できるのに十分な容積（60〜80
μ）を形成することのできる櫛をさし込み、室温に静
置した。静置後前記溶液が十分に固化（ゲル化）した
後、前記櫛を注意して抜き取り、スロット含有の本発明
のゲル調製を行なった。こうして調製されたゲルの強度
は約550g/cm2であった。本ゲルを４℃の冷蔵庫中に暗所
下、次の実施例２で使用するまで保管した。
5.5g、0.5M EDTA水溶液4.0ml及び塩化マグネシウム1.0g
を蒸留水に溶解（最終的に１にフィルアップ）し、こ
れにジエランガム粉末5.0gを懸濁した。該懸濁液を120
℃、１、２気圧で５分間加熱し、ジエランガムを完全に
溶解させた。続いて、該溶解液を70〜80℃まで冷却した
後、１％濃度のエチジウムプロマイド水溶液を1ml添加
し、均一に溶解した。このように得られた溶液をポリア
クリルアミド樹脂製の電気泳動用平板型枠に流し込ん
だ。その後、本型枠の一端側（枠の端から１〜2cm）の
ところに、溶液がゲル化した後に、供試反応核酸フラグ
メント含有反応液を添加できるのに十分な容積（60〜80
μ）を形成することのできる櫛をさし込み、室温に静
置した。静置後前記溶液が十分に固化（ゲル化）した
後、前記櫛を注意して抜き取り、スロット含有の本発明
のゲル調製を行なった。こうして調製されたゲルの強度
は約550g/cm2であった。本ゲルを４℃の冷蔵庫中に暗所
下、次の実施例２で使用するまで保管した。
実施例２ λ−DNA １μｇを全量50μの反応液中に常法に従
って、制限酵素のBan I、Ban II、Ban III、Aat II、Hi
nd III、Sma I、Sac II、Sal I、Hae III、を用いて、
切断し、DNAフラグメントを調製した。上記で調製され
た各制限酵素のDNAフラグメント含有液（50μ）に7.5
mM トリス塩酸、15％フィコール、0.05％ブロムフェー
ルブルー,80mH EDTA含有の反応停止液５μ１を添加、混
合した後、実施例１で調製したプレートのゲルの各スロ
ットに、該各フラグメント溶液を入れた後、ゲル両端を
200V（ボルト）の電圧差で２時間電気泳動した。電気泳
動後、泳動されたフラグメントを含むゲルを切り出し、
暗黒中、紫外線ランプによる照射下に映し出されるフラ
グメントのパターンを写真撮影した。第１図は本撮影に
よって得られた写真を示すものであり、各制限酵素に特
徴的な切断フラグメントのパターンが明確に見出された
って、制限酵素のBan I、Ban II、Ban III、Aat II、Hi
nd III、Sma I、Sac II、Sal I、Hae III、を用いて、
切断し、DNAフラグメントを調製した。上記で調製され
た各制限酵素のDNAフラグメント含有液（50μ）に7.5
mM トリス塩酸、15％フィコール、0.05％ブロムフェー
ルブルー,80mH EDTA含有の反応停止液５μ１を添加、混
合した後、実施例１で調製したプレートのゲルの各スロ
ットに、該各フラグメント溶液を入れた後、ゲル両端を
200V（ボルト）の電圧差で２時間電気泳動した。電気泳
動後、泳動されたフラグメントを含むゲルを切り出し、
暗黒中、紫外線ランプによる照射下に映し出されるフラ
グメントのパターンを写真撮影した。第１図は本撮影に
よって得られた写真を示すものであり、各制限酵素に特
徴的な切断フラグメントのパターンが明確に見出された
第１図は本発明の核酸電気泳動用ゲル組成物を用いて、
電気泳動したDNAフラグメントのパターンを示す写真で
ある。
電気泳動したDNAフラグメントのパターンを示す写真で
ある。
Claims (1)
- 【請求項１】無機金属イオン含有緩衝液およびシュード
モナス・エロディア（Pseudomonas elodea）が生産する
多糖類の混合物を加熱溶解せしめた後、冷却することに
よりゲル化せしめてなる核酸電気泳動用ゲル組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63205256A JP2699435B2 (ja) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | 核酸電気泳動用ゲル組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63205256A JP2699435B2 (ja) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | 核酸電気泳動用ゲル組成物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0254162A JPH0254162A (ja) | 1990-02-23 |
| JP2699435B2 true JP2699435B2 (ja) | 1998-01-19 |
Family
ID=16503975
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63205256A Expired - Fee Related JP2699435B2 (ja) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | 核酸電気泳動用ゲル組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2699435B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6203680B1 (en) * | 1998-02-05 | 2001-03-20 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of Commerce | Electrophoresis gels |
| JP5920650B2 (ja) | 2010-12-28 | 2016-05-18 | 株式会社Ｇｓユアサ | 蓄電素子 |
| JP5945904B2 (ja) | 2010-12-28 | 2016-07-05 | 株式会社Ｇｓユアサ | 蓄電素子の製造方法 |
| US8748034B2 (en) | 2011-04-14 | 2014-06-10 | Gs Yuasa International Ltd. | Battery including baffling member including one of projecting portion and recessed portion extending from lid plate |
| US8632912B2 (en) | 2011-04-14 | 2014-01-21 | Gs Yuasa International Ltd. | Battery including baffling member and sealing material that seals auxiliary terminal to lid plate |
| JP2021028605A (ja) * | 2019-08-09 | 2021-02-25 | 国立大学法人広島大学 | 電気泳動用ゲルおよびその利用 |
-
1988
- 1988-08-18 JP JP63205256A patent/JP2699435B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0254162A (ja) | 1990-02-23 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |