JP2670384B2 - 新規化学的保護化合物ならびにその調製法及び用途 - Google Patents
新規化学的保護化合物ならびにその調製法及び用途Info
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Description
【発明の詳細な説明】 [産業上の利用分野] 本発明は、新規の有用な化合物、その用途及びその調
製法に関する。さらに詳細には、本発明は、化学的保護
(chemopreventive)活性を有する新規化合物ならびに
該化合物を調製するための方法及び活性成分として該化
合物を含んで成る組成物に関する。
製法に関する。さらに詳細には、本発明は、化学的保護
(chemopreventive)活性を有する新規化合物ならびに
該化合物を調製するための方法及び活性成分として該化
合物を含んで成る組成物に関する。
[従来の技術] 生体は、生体異物を不活性化するかまたはその親油性
を減じて疎水性物質へと変換することにより、それら生
体異物を***する機能を有する。これらの機能は、種々
の酵素の仲介により実施され、酵素の種類に依存してフ
ェーズI反応(酸化、還元及び加水分解)ならびにフェ
ーズII反応(抱合)の、2つの群に分類されうる。時と
して、これらの機能が逆に実施されて、細胞内の高分子
に損傷を惹起こすかもしれない、より反応性の高い化合
物を形成し、かくして癌の形成が誘導される。
を減じて疎水性物質へと変換することにより、それら生
体異物を***する機能を有する。これらの機能は、種々
の酵素の仲介により実施され、酵素の種類に依存してフ
ェーズI反応(酸化、還元及び加水分解)ならびにフェ
ーズII反応(抱合)の、2つの群に分類されうる。時と
して、これらの機能が逆に実施されて、細胞内の高分子
に損傷を惹起こすかもしれない、より反応性の高い化合
物を形成し、かくして癌の形成が誘導される。
特に、肝細胞及び他の細胞の滑面小胞体に存在してい
る、シトクロムP-450(CYP450)は、フェーズI反応に
関与する酸化酵素である。シトクロムP-450は生体内で
合成されるステロイド、脂肪酸及びアミンを酸化するの
みならず、医薬、化学発癌物質及び変異原性物質をより
親水性の高い***可能な物質へと代謝する。ところが、
シトクロムP-450は時として、生体異物を活性化し、高
分子に損傷を惹起こし、その結果癌の形成を誘導する
(ブラック、エス ディー(Black,S.D.)、クーン、エ
ム ジェイ(Coon,M.J.)、P-450 cytochromes: Struct
ure and function、Adv.Enzymol.、60巻35〜87頁(198
7))。シトクロムP-450は、塩基配列の類似性によって
遺伝子ファミリー及びサブファミリーに分類される。P-
450の多様な型のなかで、シトクロムP-450 2E1は広範な
外来性物質に対してきわめて高い特異性を有し、外来性
物質を活性化することによりそれらの毒性を増強せしめ
る。
る、シトクロムP-450(CYP450)は、フェーズI反応に
関与する酸化酵素である。シトクロムP-450は生体内で
合成されるステロイド、脂肪酸及びアミンを酸化するの
みならず、医薬、化学発癌物質及び変異原性物質をより
親水性の高い***可能な物質へと代謝する。ところが、
シトクロムP-450は時として、生体異物を活性化し、高
分子に損傷を惹起こし、その結果癌の形成を誘導する
(ブラック、エス ディー(Black,S.D.)、クーン、エ
ム ジェイ(Coon,M.J.)、P-450 cytochromes: Struct
ure and function、Adv.Enzymol.、60巻35〜87頁(198
7))。シトクロムP-450は、塩基配列の類似性によって
遺伝子ファミリー及びサブファミリーに分類される。P-
450の多様な型のなかで、シトクロムP-450 2E1は広範な
外来性物質に対してきわめて高い特異性を有し、外来性
物質を活性化することによりそれらの毒性を増強せしめ
る。
例えば、慢性アルコール中毒者において、アセトアミ
ノフェンを治療的に有効な量投与すると肝毒性が惹起こ
される。これは、シトクロムP-450 2E1が高い基質特異
性をもってアセトアミノフェンを活性化し、活性化され
たアセトアミノフェンがタンパク質などの高分子を攻撃
して、肝壊死を生じさせるからである(リートン、エス
エー(Wrighton,S.A.)、トーマス、ピー イー(Tho
mas,P.E.)、モロワ、ディー ティー(Molowa,D.
T.)、ハニウ、エム(Haniu,M)ガゼリアン、ピー エ
ス(Guzelian P.S.)、Characterization of ethanol-i
nducible human liver N−nitrosodimethylamine demet
hylase、Biochemistry、25巻、6731〜6735頁(198
6))。
ノフェンを治療的に有効な量投与すると肝毒性が惹起こ
される。これは、シトクロムP-450 2E1が高い基質特異
性をもってアセトアミノフェンを活性化し、活性化され
たアセトアミノフェンがタンパク質などの高分子を攻撃
して、肝壊死を生じさせるからである(リートン、エス
エー(Wrighton,S.A.)、トーマス、ピー イー(Tho
mas,P.E.)、モロワ、ディー ティー(Molowa,D.
T.)、ハニウ、エム(Haniu,M)ガゼリアン、ピー エ
ス(Guzelian P.S.)、Characterization of ethanol-i
nducible human liver N−nitrosodimethylamine demet
hylase、Biochemistry、25巻、6731〜6735頁(198
6))。
肝壊死を惹起こす四塩化炭素の代謝について、反応性
代謝物のレベルの増大がシトクロムP-450 2E1の発現の
増大に密接に関連していると報告されている(アンシャ
ー、エス エス(Ansher,S.S.)、ドラン、ピー(Dola
n,P.)、ブーディング イー(Bueding E.)、Chemopro
tective effects of two dithiolthiones and buthylhy
droxyanisole against carbon tetrachloride and acet
aminophen toxicity、Hepatoloty、3巻、932〜935頁
(1983))。シトクロムP-450 2E1はまた、癌原物質前
駆体であるニトロソアミンへの高い親和性に起因して、
生体異物を活性化するうえで重要な役割も果たしている
(ペン、アール(Peng,R.)、ヤン、シー エス(Yang,
C.S.)、The induction and competitive inhibition o
f a high affinity microsomal nitrosodimethylamine
demethylase by ethanol、Carcinogenesis、3巻、145
7〜1461頁(1982))。
代謝物のレベルの増大がシトクロムP-450 2E1の発現の
増大に密接に関連していると報告されている(アンシャ
ー、エス エス(Ansher,S.S.)、ドラン、ピー(Dola
n,P.)、ブーディング イー(Bueding E.)、Chemopro
tective effects of two dithiolthiones and buthylhy
droxyanisole against carbon tetrachloride and acet
aminophen toxicity、Hepatoloty、3巻、932〜935頁
(1983))。シトクロムP-450 2E1はまた、癌原物質前
駆体であるニトロソアミンへの高い親和性に起因して、
生体異物を活性化するうえで重要な役割も果たしている
(ペン、アール(Peng,R.)、ヤン、シー エス(Yang,
C.S.)、The induction and competitive inhibition o
f a high affinity microsomal nitrosodimethylamine
demethylase by ethanol、Carcinogenesis、3巻、145
7〜1461頁(1982))。
ベンゼンは、白血球減少症、白血病及び無顆粒球性貧
血症を誘発することが知られており、シトクロムP-450
2E1がベンゼンの代謝に関与することが報告されている
(ルイス、ジェイ ジー(Lewis,J.G.)、スチュワー
ト、ダブリュー(Stewart,W.)、アダムス、ディー シ
ー(Adams,D.C.)、Role of oxygen radicals in induc
tion of DNA damage by metabolite of benzene、Cance
r Res.、48巻、4762〜4765頁(1988))。最近、この酵
素が吸入麻酔剤であるハロセン(halothane)に対して
きわめて高い基質特異性を示し、肝毒性を惹起こすこと
が報告されている。これは、中間体から形成され増加し
たトリフルオロアセチル遊離ラジカルが肝臓のタンパク
質と付加物(adduct)を形成し新生抗原(neoantigen)
をつくるという事実に起因する(ケンナ、ジェイ ジー
(Kenna,J.G.)、ポム、エル アール(Pohm,L.R.)、F
actors affecting the expression of trifluoroacetyl
ated microsomal protein neoantigen in rats treated
with halothane、Drug Metab.Dispos.、18巻、788〜792
頁(1990))。
血症を誘発することが知られており、シトクロムP-450
2E1がベンゼンの代謝に関与することが報告されている
(ルイス、ジェイ ジー(Lewis,J.G.)、スチュワー
ト、ダブリュー(Stewart,W.)、アダムス、ディー シ
ー(Adams,D.C.)、Role of oxygen radicals in induc
tion of DNA damage by metabolite of benzene、Cance
r Res.、48巻、4762〜4765頁(1988))。最近、この酵
素が吸入麻酔剤であるハロセン(halothane)に対して
きわめて高い基質特異性を示し、肝毒性を惹起こすこと
が報告されている。これは、中間体から形成され増加し
たトリフルオロアセチル遊離ラジカルが肝臓のタンパク
質と付加物(adduct)を形成し新生抗原(neoantigen)
をつくるという事実に起因する(ケンナ、ジェイ ジー
(Kenna,J.G.)、ポム、エル アール(Pohm,L.R.)、F
actors affecting the expression of trifluoroacetyl
ated microsomal protein neoantigen in rats treated
with halothane、Drug Metab.Dispos.、18巻、788〜792
頁(1990))。
さらに、シトクロムP-450 2E1はイソニアジド、エタ
ノール、アセトン、p−ニトロソジメチルアミン、ニト
ロソアミン、フェノール、ピリジン、ピラゾール、p−
ニトロフェノール、アニリンまたはジエチルエーテルな
どの種々の低分子有機物質を活性化することによって、
肝毒性の増強に密接に関連している。シトクロムP-450
2E1はまた、絶食または糖尿病などの疾患により誘導さ
れうる。
ノール、アセトン、p−ニトロソジメチルアミン、ニト
ロソアミン、フェノール、ピリジン、ピラゾール、p−
ニトロフェノール、アニリンまたはジエチルエーテルな
どの種々の低分子有機物質を活性化することによって、
肝毒性の増強に密接に関連している。シトクロムP-450
2E1はまた、絶食または糖尿病などの疾患により誘導さ
れうる。
他方、例えばグルタチオン S−トランスフェラーゼ
(以下、「GST」と称する)及びミクロソームのエポキ
シドヒドラーゼ(以下、「mEH)と称する)などといっ
たフェーズII反応に関与する酵素は、外来性の毒性物質
を解毒する役割を有する。これらの酵素は種々の経路
で、例えば、GSTの相異なるアイソザイムはグルタチオ
ンから求電子性受容体にチオール基を転移し、mEHは酸
化物を水和する、などといった経路で外来性の毒性物質
を解毒する。従って、このような酵素の量が増大するこ
とが、酸化的損傷及び環境からのストレスから組織を保
護するうえで重要な役割を果たしうる(ピケット、シー
ビー(Pickett,C.B.)、ルー エー ワイエイチ(L
u,A.Y.H.)、Glutathione S-transferase; Gene struct
ure,regulation and biological function、Annu.Rev.B
iochem.、58巻、743〜764頁(1983)及びシーデグラッ
ド、ジェイ(Seidegrad,J.)、デピエール、ジェー ダ
ブリュー(DePierre,J.W.)、Microsomal epoxide hydr
olase properties,regulation and function、Biochim.
Biophys.Acta.、695巻、251〜270頁(1983))。
(以下、「GST」と称する)及びミクロソームのエポキ
シドヒドラーゼ(以下、「mEH)と称する)などといっ
たフェーズII反応に関与する酵素は、外来性の毒性物質
を解毒する役割を有する。これらの酵素は種々の経路
で、例えば、GSTの相異なるアイソザイムはグルタチオ
ンから求電子性受容体にチオール基を転移し、mEHは酸
化物を水和する、などといった経路で外来性の毒性物質
を解毒する。従って、このような酵素の量が増大するこ
とが、酸化的損傷及び環境からのストレスから組織を保
護するうえで重要な役割を果たしうる(ピケット、シー
ビー(Pickett,C.B.)、ルー エー ワイエイチ(L
u,A.Y.H.)、Glutathione S-transferase; Gene struct
ure,regulation and biological function、Annu.Rev.B
iochem.、58巻、743〜764頁(1983)及びシーデグラッ
ド、ジェイ(Seidegrad,J.)、デピエール、ジェー ダ
ブリュー(DePierre,J.W.)、Microsomal epoxide hydr
olase properties,regulation and function、Biochim.
Biophys.Acta.、695巻、251〜270頁(1983))。
従って、生体異物の活性化に起因する癌の誘発及び毒
性は、代謝を修飾することによって、すわなち、フェー
ズI反応を阻害して活性化された毒性中間体の形成を阻
害することにより、及びフェーズII反応を増強して毒性
物質の***を促進することにより、阻止することができ
る。前記のように代謝修飾活性を有する化学的保護剤を
提供すべく、夥しい研究がなされてきている。それらの
結果として、化学的保護活性を有するいくつかの化合物
が報告されている。
性は、代謝を修飾することによって、すわなち、フェー
ズI反応を阻害して活性化された毒性中間体の形成を阻
害することにより、及びフェーズII反応を増強して毒性
物質の***を促進することにより、阻止することができ
る。前記のように代謝修飾活性を有する化学的保護剤を
提供すべく、夥しい研究がなされてきている。それらの
結果として、化学的保護活性を有するいくつかの化合物
が報告されている。
例えば、食物の抗酸化剤であるブチルヒドロキシアニ
ソールは、フェーズII反応に関与する酵素を誘導するこ
とにより抗癌活性を示し(チャ、ワイ エヌ(Cha,Y.
N.)ブーディング、イー、Effect of 2(3)‐tert-bu
tyl-4-hydroxyanisole administration on the activit
ies of several hepatic microsomal and cytoplasmic
enzymes in mice、Biochem.Pharmacol.、28巻、1917〜1
921頁(1979))、またブチルヒドロキシトルエンもや
はり、フェーズII反応に関与する酵素を誘導することに
より抗癌活性を示す(チャ、ワイ エヌ、及びハイネ、
エイチ エス(Heine,H.S.)、Comparative effects of
dietary administration of 2(3)‐tert-butyl-4-h
ydroxyanisole and 3,5-ditert-butyl-4-hydroxytoluen
e on the several hepatic enzyme activities in mice
and rat、Cancer Res.、42巻、2609〜2615頁(198
2))。天然に存在している化合物かまたはピラジンア
ミドもしくはオルチプラツ(oltipraz)などの合成医薬
であるピラジンは、フェーズI反応に関与する酵素であ
るシトクロムP-450 2E1のみならず、フェーズII反応に
関与する酵素であるGST及びmEHも誘導する活性を有する
ことが報告されている(ノバック、アール エフ(Nova
k,R.F.)、キム、エス ジー(Kim.S.G.)、ブルック
ス、エス シー(Brooks,S.C.)、プリミアノ、ティー
(Primiano,T.)、スリナス、エフ(Slinas,F.)及びノ
バック、ジェー シー(Novak,J.C.)、Thiazole,pyrid
azine and pyrazine induction of glutathione S-tran
sferase of rat、Toxicologist、11巻、48頁(199
0))。分子内にピラジンを含有するオルチプラツもま
た、フェーズII反応の酵素を誘導する能力を有するの
で、肺癌及び胃癌を抑制することができる。
ソールは、フェーズII反応に関与する酵素を誘導するこ
とにより抗癌活性を示し(チャ、ワイ エヌ(Cha,Y.
N.)ブーディング、イー、Effect of 2(3)‐tert-bu
tyl-4-hydroxyanisole administration on the activit
ies of several hepatic microsomal and cytoplasmic
enzymes in mice、Biochem.Pharmacol.、28巻、1917〜1
921頁(1979))、またブチルヒドロキシトルエンもや
はり、フェーズII反応に関与する酵素を誘導することに
より抗癌活性を示す(チャ、ワイ エヌ、及びハイネ、
エイチ エス(Heine,H.S.)、Comparative effects of
dietary administration of 2(3)‐tert-butyl-4-h
ydroxyanisole and 3,5-ditert-butyl-4-hydroxytoluen
e on the several hepatic enzyme activities in mice
and rat、Cancer Res.、42巻、2609〜2615頁(198
2))。天然に存在している化合物かまたはピラジンア
ミドもしくはオルチプラツ(oltipraz)などの合成医薬
であるピラジンは、フェーズI反応に関与する酵素であ
るシトクロムP-450 2E1のみならず、フェーズII反応に
関与する酵素であるGST及びmEHも誘導する活性を有する
ことが報告されている(ノバック、アール エフ(Nova
k,R.F.)、キム、エス ジー(Kim.S.G.)、ブルック
ス、エス シー(Brooks,S.C.)、プリミアノ、ティー
(Primiano,T.)、スリナス、エフ(Slinas,F.)及びノ
バック、ジェー シー(Novak,J.C.)、Thiazole,pyrid
azine and pyrazine induction of glutathione S-tran
sferase of rat、Toxicologist、11巻、48頁(199
0))。分子内にピラジンを含有するオルチプラツもま
た、フェーズII反応の酵素を誘導する能力を有するの
で、肺癌及び胃癌を抑制することができる。
しかしながら、これらの物質はフェーズII反応の酵素
を誘導する能力を有するものの、フェーズI反応の酵素
に対する阻害活性は示さない。
を誘導する能力を有するものの、フェーズI反応の酵素
に対する阻害活性は示さない。
他方、ニンニクオイルの成分であるアリルスルフィド
は、癌原物質の前駆体であるニトロソアミンを活性化す
るシトクロムP-450 2E1の発現を阻害することにより肝
癌及び大腸癌を強く抑制することが報告されている(ブ
ラディ、ジェー エフ(Brady,J.F.)、リ、ディー(L
i,D.)、イシザキ、エイチ(Ishzaki,H.)及びヤン、シ
ー エス(Yang,C.S.)、Effect of diallylsulfide on
rat liver microsomal nitrosoamine metabolism and
other monooxygenase activities、Cancer Res.、48
巻、5937〜5940頁(1988)ならびにヘイズ、エム エー
(Hayes,M.A.)、ラシュモア、ティー エイチ(Rushmo
re,T.H.)及びゴールドバーグ、エム ティー(Goldber
g,M.T.)、Inhibition of hepatocarcinogenic respons
es to 1,2-dimethylhy drazine by diallylsulfide,a c
omponent of garlic oil、Carcinogenesis、8巻、1155
〜1157頁(1987))。さらに、本願発明者らは、アリル
スルフィドがシトクロムP-450 2E1の発現を強く阻害
し、さらにピラジンの作用により誘導されたシトクロム
P-450 2E1を完全に抑制することを明らかにしている(B
iochemical Pharmacology、投稿中、1993)。
は、癌原物質の前駆体であるニトロソアミンを活性化す
るシトクロムP-450 2E1の発現を阻害することにより肝
癌及び大腸癌を強く抑制することが報告されている(ブ
ラディ、ジェー エフ(Brady,J.F.)、リ、ディー(L
i,D.)、イシザキ、エイチ(Ishzaki,H.)及びヤン、シ
ー エス(Yang,C.S.)、Effect of diallylsulfide on
rat liver microsomal nitrosoamine metabolism and
other monooxygenase activities、Cancer Res.、48
巻、5937〜5940頁(1988)ならびにヘイズ、エム エー
(Hayes,M.A.)、ラシュモア、ティー エイチ(Rushmo
re,T.H.)及びゴールドバーグ、エム ティー(Goldber
g,M.T.)、Inhibition of hepatocarcinogenic respons
es to 1,2-dimethylhy drazine by diallylsulfide,a c
omponent of garlic oil、Carcinogenesis、8巻、1155
〜1157頁(1987))。さらに、本願発明者らは、アリル
スルフィドがシトクロムP-450 2E1の発現を強く阻害
し、さらにピラジンの作用により誘導されたシトクロム
P-450 2E1を完全に抑制することを明らかにしている(B
iochemical Pharmacology、投稿中、1993)。
しかしながら、フェーズI反応の酵素を阻害すると共
にフェーズII反応の酵素を誘導する、有効な化学的保護
剤はない。
にフェーズII反応の酵素を誘導する、有効な化学的保護
剤はない。
[発明が解決しようとする課題] 本願発明者らは、フェーズI反応の酵素の発現及び活
性を阻害すると共に、フェーズII反応の酵素を誘導し、
かつイソニアジドなどの阻害物質による阻害からそれら
の酵素を回復させる、化学的保護剤を提供するために夥
しい研究を行い、その結果、本発明を完成するに至っ
た。
性を阻害すると共に、フェーズII反応の酵素を誘導し、
かつイソニアジドなどの阻害物質による阻害からそれら
の酵素を回復させる、化学的保護剤を提供するために夥
しい研究を行い、その結果、本発明を完成するに至っ
た。
[課題を解決するための手段] 前記のごとく、本発明の目的は、フェーズI反応の酵
素を阻害して活性化された毒性の中間代謝物の形成を妨
げうるのみならず、フェーズII反応を誘導して毒性物質
の***を促進せしめることができる、新規のピラジン誘
導体を提供することである。
素を阻害して活性化された毒性の中間代謝物の形成を妨
げうるのみならず、フェーズII反応を誘導して毒性物質
の***を促進せしめることができる、新規のピラジン誘
導体を提供することである。
本発明は、以下の一般式(I): (式中、R1は水素原子またはC1〜3のアルキル基を表
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される構造を有する新規化合物を提供する。
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される構造を有する新規化合物を提供する。
本発明は、さらに、式(II): の化合物を、一般式(III): (式中、Xはハロゲン原子または水酸基を表し、また、
R1及びR2は前記定義と同様のものを表す) の化合物と反応させることを含んで成る、化合物(I)
の調製法を提供する。
R1及びR2は前記定義と同様のものを表す) の化合物と反応させることを含んで成る、化合物(I)
の調製法を提供する。
本発明は、また、有効成分として化合物(I)を含ん
で成る、肝に損傷を与えうる化学物質から肝を保護する
ための薬剤組成物を提供する。
で成る、肝に損傷を与えうる化学物質から肝を保護する
ための薬剤組成物を提供する。
本発明の他の目的及び本発明の適用は、以下の発明の
詳細な説明によって、当業者に明らかとなるであろう。
詳細な説明によって、当業者に明らかとなるであろう。
[実施例] 本明細書中で用いられる、「化学的保護」の語は、あ
る化合物がフェーズI反応を抑制して活性化された毒性
の中間代謝物の形成を妨げることができると共に、フェ
ーズII反応を増大せしめて毒性物質の***を促進するこ
とができることを意味する。本発明の化合物はフェーズ
I反応の誘導剤またはフェーズII反応の阻害剤の存在下
において有効であり、従って、肝臓が種々の化学物質に
より損傷を受けることから有効に保護することができ
る。
る化合物がフェーズI反応を抑制して活性化された毒性
の中間代謝物の形成を妨げることができると共に、フェ
ーズII反応を増大せしめて毒性物質の***を促進するこ
とができることを意味する。本発明の化合物はフェーズ
I反応の誘導剤またはフェーズII反応の阻害剤の存在下
において有効であり、従って、肝臓が種々の化学物質に
より損傷を受けることから有効に保護することができ
る。
本発明によれば、以下の一般式(I): (式中、R1は水素原子またはC1〜3のアルキル基を表
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される構造を有する、新規ピラジン誘導体が提供さ
れる。
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される構造を有する、新規ピラジン誘導体が提供さ
れる。
とりわけ、R1が水素原子またはメチル基であり、かつ
R2が一般式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc)(式中、Ra、Rb及びRcは同
じかまたは互いに異なっており、水素原子またはメチル
基を表す)により示される基である化合物(I)が好ま
しい。
R2が一般式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc)(式中、Ra、Rb及びRcは同
じかまたは互いに異なっており、水素原子またはメチル
基を表す)により示される基である化合物(I)が好ま
しい。
高い化学的保護活性を示す、最も好ましい化合物
(I)を、以下の表1に掲げる。
(I)を、以下の表1に掲げる。
本発明によれば、化合物(I)の調製法が提供され
る。
る。
方法は、化合物(II): を化合物(III): (式中、Xはハロゲン原子または水酸基を表し、また、
R1及びR2は前記定義と同様のものを表す) と反応させることを含んで成る。
R1及びR2は前記定義と同様のものを表す) と反応させることを含んで成る。
Xがハロゲン原子である化合物(III)が、化合物(I
I)と反応せしめられる場合、例えばN,N−ジメチルホル
ムアミドまたはN,N−ジメチルアセタミドといった不活
性の溶媒中で塩基の存在下に反応を行うとよい。本発明
において用いられる塩基には、例えば、トリエチルアミ
ン、トリメチルアミン、N,N−ジメチルアニリンまたは
ジアザビシクロウンデセン(diazabicycloundecene)な
どが挙げられるが、それらに限定されない。反応温度は
0℃〜100℃、好ましくは30℃〜80℃の間で変化してよ
い。反応時間は、1〜5時間の間の範囲にある。
I)と反応せしめられる場合、例えばN,N−ジメチルホル
ムアミドまたはN,N−ジメチルアセタミドといった不活
性の溶媒中で塩基の存在下に反応を行うとよい。本発明
において用いられる塩基には、例えば、トリエチルアミ
ン、トリメチルアミン、N,N−ジメチルアニリンまたは
ジアザビシクロウンデセン(diazabicycloundecene)な
どが挙げられるが、それらに限定されない。反応温度は
0℃〜100℃、好ましくは30℃〜80℃の間で変化してよ
い。反応時間は、1〜5時間の間の範囲にある。
Xが水酸基である化合物(III)を用いた場合、化合
物(III)は、化合物(II)と反応せしめられる中間体
を形成すべく、例えばN,N−ジメチルホルムアミド、ジ
クロロメタン、クロロホルムまたはテトラヒドロフラン
などといった不活性の溶媒中でトリフェニルホスフィン
などの有機ホスフィンを用いて処理される。この目的の
ため、化合物(II)は、例えばトリエチルアミン、トリ
メチルアミンまたはN,N−ジメチルアニリンなどといっ
た有機塩基の助けにより、N,N−ジメチルアセタミドな
どの不活性溶媒中に溶解される。
物(III)は、化合物(II)と反応せしめられる中間体
を形成すべく、例えばN,N−ジメチルホルムアミド、ジ
クロロメタン、クロロホルムまたはテトラヒドロフラン
などといった不活性の溶媒中でトリフェニルホスフィン
などの有機ホスフィンを用いて処理される。この目的の
ため、化合物(II)は、例えばトリエチルアミン、トリ
メチルアミンまたはN,N−ジメチルアニリンなどといっ
た有機塩基の助けにより、N,N−ジメチルアセタミドな
どの不活性溶媒中に溶解される。
本発明はさらに、有効成分として化合物(I)を含ん
で成る薬剤組成物を提供する。組成物は薬学的に許容し
うる通例の担体または賦形剤を含有することができる。
組成物は、固形、液体または散剤の形態に、通常の技術
に従って剤形化するとよい。
で成る薬剤組成物を提供する。組成物は薬学的に許容し
うる通例の担体または賦形剤を含有することができる。
組成物は、固形、液体または散剤の形態に、通常の技術
に従って剤形化するとよい。
剤形化の技術及び添加物は、薬学分野において通常用
いられており、本発明によって限定されることはなく、
当業者により難なく選択されうる。
いられており、本発明によって限定されることはなく、
当業者により難なく選択されうる。
化合物(I)がヒトまたは動物に投与される経路は、
限定されることはない。化合物(I)の量は投与経路、
年齢及び適用される症候、または目的に応じて変動しう
るが、50〜500mg/kg、好ましくは100〜300mg/kgの間の
範囲から選択されるとよい。
限定されることはない。化合物(I)の量は投与経路、
年齢及び適用される症候、または目的に応じて変動しう
るが、50〜500mg/kg、好ましくは100〜300mg/kgの間の
範囲から選択されるとよい。
以下の実施例により、本発明をさらに詳細に述べる
が、これら実施例により本発明がいかようにも限定され
ることは意図していない。
が、これら実施例により本発明がいかようにも限定され
ることは意図していない。
参考例1:2−メルカプトピラジンの調製 5.0gの2−クロロピラジンを40mlのジメチルホルムア
ミド中に溶解し、5.0gのNaSH・xH2Oをそれに添加した。
混液を2時間、60℃に加熱し、5℃に冷却した。その結
果得られた沈殿物を濾過し、濾液に400mlのジエチルエ
ーテルを添加した。
ミド中に溶解し、5.0gのNaSH・xH2Oをそれに添加した。
混液を2時間、60℃に加熱し、5℃に冷却した。その結
果得られた沈殿物を濾過し、濾液に400mlのジエチルエ
ーテルを添加した。
沈澱をジエチルエーテルで洗浄し、乾燥して3.0gの黄色
の固体を得た。
の固体を得た。
IR(KBr): 1650、1570、1562、1425 cm-1 NMR(DMSO-d6)ppm: 7.60(d,1H)、7.80(d,1H)、8.5
5(s,1H)、14.35(bs,1H) 実施例1−1:2−(2−プロペニルチオ)ピラジンの調
製 参考例1において調製した6.57gの2−メルカプトピ
ラジンを、80mlのジメチルホルムアミド中に溶解し、8.
6mlのトリエチルアミンをそれに添加した。その溶液に
6.84mlの臭化アリルを添加し、混液を50℃にて2時間攪
拌した。500mlの氷水を反応溶液に添加し、得られた混
液をジエチルエーテルで抽出して濃縮した。
5(s,1H)、14.35(bs,1H) 実施例1−1:2−(2−プロペニルチオ)ピラジンの調
製 参考例1において調製した6.57gの2−メルカプトピ
ラジンを、80mlのジメチルホルムアミド中に溶解し、8.
6mlのトリエチルアミンをそれに添加した。その溶液に
6.84mlの臭化アリルを添加し、混液を50℃にて2時間攪
拌した。500mlの氷水を反応溶液に添加し、得られた混
液をジエチルエーテルで抽出して濃縮した。
残渣を減圧蒸留して、7.85g(85%)の油状の淡黄色の
液体を得た。
液体を得た。
沸点 0.5 torr/68〜69℃ IR(パラフィン油): 1700、1633、1559、1506 cm-1 NMR(DMSO-d6)ppm: 3.77(d,2H)、5.10(d,1H)、5.3
0(d,1H)、5.81〜6.02(m,1H)、8.33(s,1H)、8.48
(s,1H)、8.60(s,1H) 実施例1−2:2−(2−プロペニルチオ)ピラジンの調
製 臭化アリルの代わりに塩化アリルを用いたこと以外は
実施例1−1と同じ手順を行って、標記の化合物を得
た。
0(d,1H)、5.81〜6.02(m,1H)、8.33(s,1H)、8.48
(s,1H)、8.60(s,1H) 実施例1−2:2−(2−プロペニルチオ)ピラジンの調
製 臭化アリルの代わりに塩化アリルを用いたこと以外は
実施例1−1と同じ手順を行って、標記の化合物を得
た。
沸点 0.5 torr/68〜69℃ IR(パラフィン油): 1700、1633、1559、1506 cm-1 NMR(DMSO-d6)ppm: 3.77(d,2H)、5.10(d,1H)、5.3
0(d,1H)、5.81〜6.02(m,1H)、8.33(s,1H)、8.48
(s,1H)、8.60(s,1H) 実施例1−3:2−(2−プロペニルチオ)ピラジンの調
製 0.58gのアリルアルコールを、50mlのジクロロメタン
中に溶解し、2.89gのトリフェニルホスフィン及び1.96g
のN−ブロモスクシンイミドをそれに添加した。混液を
室温にて30分間攪拌し、前記溶液に1.0gの2−メルカプ
トピラジン及び1mlのトリエチルアミンを溶解した5mlの
ジメチルホルムアミド溶液を添加した。得られた混液を
室温にて1時間攪拌し、ついで100mlの水の中に注加し
た。有機層を分離して、濃縮乾燥した。残渣は、溶離液
として酢酸エチル:n−ヘキサン=1:1を用いたシリカゲ
ルクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を
0.6g得た。
0(d,1H)、5.81〜6.02(m,1H)、8.33(s,1H)、8.48
(s,1H)、8.60(s,1H) 実施例1−3:2−(2−プロペニルチオ)ピラジンの調
製 0.58gのアリルアルコールを、50mlのジクロロメタン
中に溶解し、2.89gのトリフェニルホスフィン及び1.96g
のN−ブロモスクシンイミドをそれに添加した。混液を
室温にて30分間攪拌し、前記溶液に1.0gの2−メルカプ
トピラジン及び1mlのトリエチルアミンを溶解した5mlの
ジメチルホルムアミド溶液を添加した。得られた混液を
室温にて1時間攪拌し、ついで100mlの水の中に注加し
た。有機層を分離して、濃縮乾燥した。残渣は、溶離液
として酢酸エチル:n−ヘキサン=1:1を用いたシリカゲ
ルクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を
0.6g得た。
沸点 0.5 torr/68〜69℃ IR(パラフィン油): 1700、1633、1559、1506 cm-1 NMR(DMSO-d6)ppm: 3.77(d,2H)、5.10(d,1H)、5.3
0(d,1H)、5.81〜6.02(m,1H)、8.33(s,1H)、8.48
(s,1H)、8.60(s,1H) 実施例2:2−(2−ベンジルチオ)ピラジンの調製 臭化アリルの代わりに臭化ベンジルを用い、かつ溶離
液として酢酸エチル:n−ヘキサン=1:5を用いてシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行ったこと
以外は実施例1−1と同じ手順を行って、標記の化合物
を得た。
0(d,1H)、5.81〜6.02(m,1H)、8.33(s,1H)、8.48
(s,1H)、8.60(s,1H) 実施例2:2−(2−ベンジルチオ)ピラジンの調製 臭化アリルの代わりに臭化ベンジルを用い、かつ溶離
液として酢酸エチル:n−ヘキサン=1:5を用いてシリカ
ゲルカラムクロマトグラフィーによる精製を行ったこと
以外は実施例1−1と同じ手順を行って、標記の化合物
を得た。
融点 65〜67℃(白色固体) IR(KBr): 1500、1445、1380 cm-1 NMR(DMSO-d6)ppm: 4.45(s,2H)、7.2〜7.35(m,5
H)、8.2〜8.35(m,3H) 実施例3:2−(3−メチル−2−ブテニルチオ)ピラジ
ンの調製 アリルアルコールの代わりにプレニルアルコールを用
いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油状
の液体として標記の化合物を得た。
H)、8.2〜8.35(m,3H) 実施例3:2−(3−メチル−2−ブテニルチオ)ピラジ
ンの調製 アリルアルコールの代わりにプレニルアルコールを用
いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油状
の液体として標記の化合物を得た。
IR(パラフィン油): 1501、1375 cm-1 NMR(CDCl3)ppm: 1.74(s,6H)、3.81(d,2H)、5.35
(m,1H)、8.2、8.35、8.4(m,3H) 実施例4:2−(シンナミルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりにシンナミルアルコールを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、白
色の固体として標記の化合物を得た。
(m,1H)、8.2、8.35、8.4(m,3H) 実施例4:2−(シンナミルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりにシンナミルアルコールを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、白
色の固体として標記の化合物を得た。
IR(パラフィン油): 1490、1440、1380 cm-1 NMR(CDCl3)ppm: 4.04(d,2H)、6.35(tt,1H)、6.6
(d,1H)、7.2〜7.4(m,5H)、8.2、8.4、8.47(m,3H) 実施例5:2−(フルフリルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりにフルフリルアルコールを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油
状の液体として標記の化合物を得た。
(d,1H)、7.2〜7.4(m,5H)、8.2、8.4、8.47(m,3H) 実施例5:2−(フルフリルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりにフルフリルアルコールを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油
状の液体として標記の化合物を得た。
IR(パラフィン油): 1450、1456、1382 cm-1 NMR(CDCl3)ppm: 4.46(s,2H)、6.26(m,2H)、7.34
(d,1H)、8.2、8.4、8.45(m,3H) 実施例6:2−(3−メチル−3−ブテニルチオ)ピラジ
ンの調製 アリルアルコールの代わりに3−メチル−3−ブテン
−1−オルを用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順
を行って、油状の液体として標記の化合物を得た。
(d,1H)、8.2、8.4、8.45(m,3H) 実施例6:2−(3−メチル−3−ブテニルチオ)ピラジ
ンの調製 アリルアルコールの代わりに3−メチル−3−ブテン
−1−オルを用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順
を行って、油状の液体として標記の化合物を得た。
IR(パラフィン油): 1500、1450、1370 cm-1 NMR(CDCl3)ppm: 1.80(s,3H)、2.42(t,2H)、3.3
(t,2H)、4.8(d,2H)、8.2、8.4、8.45(m,3H) 実施例7:2−(2−ブテニルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりに2−ブテン−1−オルを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油
状の液体として標記の化合物を得た。
(t,2H)、4.8(d,2H)、8.2、8.4、8.45(m,3H) 実施例7:2−(2−ブテニルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりに2−ブテン−1−オルを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油
状の液体として標記の化合物を得た。
IR(パラフィン油): 1502、1455、1381 cm-1 NMR(CDCl3)ppm: 1.7(d,3H)、3.8(d,2H)、5.6(m,
2H)、8.2、8.4、8.45(m,3H) 実施例8:2−(3−ブテニルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりに3−ブテン−2−オルを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油
状の液体として標記の化合物を得た。
2H)、8.2、8.4、8.45(m,3H) 実施例8:2−(3−ブテニルチオ)ピラジンの調製 アリルアルコールの代わりに3−ブテン−2−オルを
用いたこと以外は実施例1−3と同じ手順を行って、油
状の液体として標記の化合物を得た。
IR(パラフィン油): 1502、1475、1380 cm-1 NMR(CDCl3)ppm: 1.4(d,3H)、4.4(m,1H)、5.0(d,
1H)、5.2(d,1H)、5.9(m,1H)、8.14、8.3、8.35
(m,3H) 実験例1:フェーズI反応の阻害(1) (1)ウェスタンブロット分析 フェーズI反応に関与する酵素の発現に対する本発明
の化合物の効果を調べるために、以下のようにウェスタ
ンブロット分析を行った。
1H)、5.2(d,1H)、5.9(m,1H)、8.14、8.3、8.35
(m,3H) 実験例1:フェーズI反応の阻害(1) (1)ウェスタンブロット分析 フェーズI反応に関与する酵素の発現に対する本発明
の化合物の効果を調べるために、以下のようにウェスタ
ンブロット分析を行った。
体重190±30gの雄性スプラグ−ドウリー(Sprague-Da
wley)ラット28匹を、7群に分けた。第1群には対照群
として、体重200g当たり0.1mlのコーン油を腹腔内投与
した。第2〜第4群には、コーン油で希釈したピラジン
を200mg/kg体重の投与量でそれぞれ1、2または3日
間、腹腔内投与した。第5〜第7群には、実施例1−1
において調製した化合物をコーン油で希釈して、200mg/
kg体重の投与量でそれぞれ1、2または3日間、腹腔内
投与した。被検化合物は、およそ午前11時に投与した。
wley)ラット28匹を、7群に分けた。第1群には対照群
として、体重200g当たり0.1mlのコーン油を腹腔内投与
した。第2〜第4群には、コーン油で希釈したピラジン
を200mg/kg体重の投与量でそれぞれ1、2または3日
間、腹腔内投与した。第5〜第7群には、実施例1−1
において調製した化合物をコーン油で希釈して、200mg/
kg体重の投与量でそれぞれ1、2または3日間、腹腔内
投与した。被検化合物は、およそ午前11時に投与した。
ラットは、被検化合物を投与した後18時間絶食させ、
翌日のおよそ午前7〜8時に頸部脱骨により屠殺した。
致死直後に、肝組織から血液を除去すべく、肝門脈を通
じて生理的食塩水を潅流させた。肝臓を取り出し、細か
くミンスした。4倍容量の0.1Mトリス塩酸緩衝液(pH7.
4)を加え、肝組織をホモジナイズした。すべての工程
を、4℃の一定温度にて行った。ホモジナイズした組織
を12,000gにて20分間遠心し、その上清を105,000gにて
1時間超遠心して、上清のサイトゾルからミクロソーム
を沈澱として分離した。このようにして得られたミクロ
ソームを、0.1MトリスKClに分散させ(distributed)、
105,000gにて1時間超遠心して清澄化し、純粋な肝ミク
ロソームを得た。
翌日のおよそ午前7〜8時に頸部脱骨により屠殺した。
致死直後に、肝組織から血液を除去すべく、肝門脈を通
じて生理的食塩水を潅流させた。肝臓を取り出し、細か
くミンスした。4倍容量の0.1Mトリス塩酸緩衝液(pH7.
4)を加え、肝組織をホモジナイズした。すべての工程
を、4℃の一定温度にて行った。ホモジナイズした組織
を12,000gにて20分間遠心し、その上清を105,000gにて
1時間超遠心して、上清のサイトゾルからミクロソーム
を沈澱として分離した。このようにして得られたミクロ
ソームを、0.1MトリスKClに分散させ(distributed)、
105,000gにて1時間超遠心して清澄化し、純粋な肝ミク
ロソームを得た。
このようにして分離したミクロソームを、リームリ
(Laemmli)の方法(リームリ、ユー ケー(Laemmli,
U.K.)、Cleavage of structual proteins during asse
mbly of the head of the bacteriophage T4、Nature、
227巻、680〜685頁(1970))に従って、ドデシル硫酸
ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(以下、
「SDS-PAGE」と称する)でのイムノブロッティングに付
した。
(Laemmli)の方法(リームリ、ユー ケー(Laemmli,
U.K.)、Cleavage of structual proteins during asse
mbly of the head of the bacteriophage T4、Nature、
227巻、680〜685頁(1970))に従って、ドデシル硫酸
ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(以下、
「SDS-PAGE」と称する)でのイムノブロッティングに付
した。
バイオラッド(BioRad)ミニプロテイン(Mini Prote
in)IIを用い、ゲルは以下のように調製した。
in)IIを用い、ゲルは以下のように調製した。
4.9mlの第2蒸留水、2.5mlの1.5Mトリス緩衝液(pH8.
8)、50μlの20%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)及び
30%アクリルアミドと0.8%ビスアクリルアミドとの混
液2.5mlを混合し、真空を利用して容器内を脱気し、50
μlの10%過硫酸アンモニウム及び5μlのN,N,N′,
N′−テトラメチルエチレンジアミンを加え、そして得
られた混液を2枚のガラス板の間に1時間静置してゲル
を得ることにより、分離ゲルを調製した。
8)、50μlの20%ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)及び
30%アクリルアミドと0.8%ビスアクリルアミドとの混
液2.5mlを混合し、真空を利用して容器内を脱気し、50
μlの10%過硫酸アンモニウム及び5μlのN,N,N′,
N′−テトラメチルエチレンジアミンを加え、そして得
られた混液を2枚のガラス板の間に1時間静置してゲル
を得ることにより、分離ゲルを調製した。
7.35mlの第2蒸留水、1.25mlの1.5Mトリス緩衝液(pH
6.8)、50μlの20%SDS及び30%アクリルアミドと0.8
%ビスアクリルアミドとの混液1.3mlを混合し、真空を
利用して容器内を脱気し、50μlの10%過硫酸アンモニ
ウム及び10μlのN,N,N′,N′−テトラメチルエチレン
ジアミンを加え、そして得られた混液を2枚のガラス板
の間に1時間静置してゲルを得ることにより、スタッキ
ングゲルを調製した。
6.8)、50μlの20%SDS及び30%アクリルアミドと0.8
%ビスアクリルアミドとの混液1.3mlを混合し、真空を
利用して容器内を脱気し、50μlの10%過硫酸アンモニ
ウム及び10μlのN,N,N′,N′−テトラメチルエチレン
ジアミンを加え、そして得られた混液を2枚のガラス板
の間に1時間静置してゲルを得ることにより、スタッキ
ングゲルを調製した。
第1、第2及び第3群から得たミクロソームを、試料
用緩衝液(1Mトリス(pH6.8)2.5ml、80%グリセロール
5ml、20%SDS 5ml、1%ブロモフェノールブルー0.2m
l、β−メルカプトエタノール2ml及び第2蒸留水5.3m
l)を用いて希釈し、100℃に5分間加熱した。希釈の割
合は、各試料が7μl当たり20μgのミクロソームを含
有するように定めた。
用緩衝液(1Mトリス(pH6.8)2.5ml、80%グリセロール
5ml、20%SDS 5ml、1%ブロモフェノールブルー0.2m
l、β−メルカプトエタノール2ml及び第2蒸留水5.3m
l)を用いて希釈し、100℃に5分間加熱した。希釈の割
合は、各試料が7μl当たり20μgのミクロソームを含
有するように定めた。
試料をゲル上に載せ、展開用(running)緩衝液(1L
中に、3.04gのトリス、14.42gのグリシン及び5mlの20%
ADS)を用いて電気泳動を行った。適用した電流の強度
は、スタッキングゲルに対しては12.5mA、展開ゲルに対
しては20mAである。
中に、3.04gのトリス、14.42gのグリシン及び5mlの20%
ADS)を用いて電気泳動を行った。適用した電流の強度
は、スタッキングゲルに対しては12.5mA、展開ゲルに対
しては20mAである。
電気泳動終了後、ゲルをデイビス(Davis)の方法
(デイビス、エル ジー(Davis,L.G.)、ディブナー、
エム ディー(Dibner,M.D.)、バッテイ、ジェイ エ
フ(Battey,J.F.)、Basic methods in molecular biol
ogy、ニューヨーク、エルセビエ(Elsevier)、311〜31
4頁(1986))に従ってウエスタンブロット分析に付し
た。バイオラッドミニトランス−ブロット(Mini Trans
-blot)を用いて、70ボルトにて2時間、ニトロセルロ
ースペーパーにゲルを転写した。転写用緩衝液は、1Lの
蒸留水中に、3.04gのトリス、14.42gのグリシン及び200
mlのメタノールを溶解することにより調製した。転写終
了後、ニトロセルロースペーパーは水洗し、3%脱脂乳
溶液中に4℃にて一晩浸漬した。次いで、生理的食塩水
を用いて洗浄し、以下の免疫化学的分析に付した。
(デイビス、エル ジー(Davis,L.G.)、ディブナー、
エム ディー(Dibner,M.D.)、バッテイ、ジェイ エ
フ(Battey,J.F.)、Basic methods in molecular biol
ogy、ニューヨーク、エルセビエ(Elsevier)、311〜31
4頁(1986))に従ってウエスタンブロット分析に付し
た。バイオラッドミニトランス−ブロット(Mini Trans
-blot)を用いて、70ボルトにて2時間、ニトロセルロ
ースペーパーにゲルを転写した。転写用緩衝液は、1Lの
蒸留水中に、3.04gのトリス、14.42gのグリシン及び200
mlのメタノールを溶解することにより調製した。転写終
了後、ニトロセルロースペーパーは水洗し、3%脱脂乳
溶液中に4℃にて一晩浸漬した。次いで、生理的食塩水
を用いて洗浄し、以下の免疫化学的分析に付した。
14μlのヤギ抗ウサギP-450 2E1 IgGを15mlのPBSに混
合し、前記の処理を施したニトロセルロースペーパーを
含むバッグの中に入れて、2時間振盪した。PBSで洗浄
したニトロセルロースペーパーに、15μlのビオチン化
したロバ抗ヤギIgGを含む15mlのPBSを加え、2時間反応
させた。PBSを用いて反応混合物を洗浄し、1μlのス
トレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダー
ゼを含む15mlのPBSを添加した。1時間の反応の後、4
−クロロ−1−ナフトール(1mg/mlメタノール)及び15
μlの過酸化水素を反応混合物に加えた。約30秒後に、
発色が観察されると、脱イオン水で洗浄して反応を停止
した。
合し、前記の処理を施したニトロセルロースペーパーを
含むバッグの中に入れて、2時間振盪した。PBSで洗浄
したニトロセルロースペーパーに、15μlのビオチン化
したロバ抗ヤギIgGを含む15mlのPBSを加え、2時間反応
させた。PBSを用いて反応混合物を洗浄し、1μlのス
トレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダー
ゼを含む15mlのPBSを添加した。1時間の反応の後、4
−クロロ−1−ナフトール(1mg/mlメタノール)及び15
μlの過酸化水素を反応混合物に加えた。約30秒後に、
発色が観察されると、脱イオン水で洗浄して反応を停止
した。
結果を図1に示す。ピラジン投与群、すなわち第2〜
第4群では、投与期間に比例してP-450 2E1の発現が有
意に増大することが示された。しかしながら、実施例1
−1の化合物が与えられた第5〜第7群では、投与期間
に比例してP-450 2E1の発現がかなり低減することが示
された。特に、2及び3日間投与された第6及び第7群
ではそれぞれ、対照群よりも発現が低いという、タンパ
ク質発現の低減における有意な効果が示された。
第4群では、投与期間に比例してP-450 2E1の発現が有
意に増大することが示された。しかしながら、実施例1
−1の化合物が与えられた第5〜第7群では、投与期間
に比例してP-450 2E1の発現がかなり低減することが示
された。特に、2及び3日間投与された第6及び第7群
ではそれぞれ、対照群よりも発現が低いという、タンパ
ク質発現の低減における有意な効果が示された。
(2)酵素活性 フェーズI反応に関与する酵素の活性に対する本発明
の化合物の効果を調べるために、以下の実験を行った。
の化合物の効果を調べるために、以下の実験を行った。
(2−1)P−ニトロフェノールヒドロキシラーゼ 体重190±30gのスプラグ−ドウリーラットの6群に、
ピラジン(第1〜3群)または実施例1−1にて調製し
た化合物(第4〜6群)を、1、2または3日間、200m
g/kgの投与量で投与した。前記の(1)と同様の手順に
従って肝ミクロソームを分離した後、p−ニトロフェノ
ールヒドロキシラーゼの活性を、クープ(Koop)の方法
(デニス アール クープ(Danis R.Koop)、Hydroxyl
ation p-nitrophenol by rabbit ethanol inducible cy
tochrome P-450 isozyme 3a、Molecular Pharmacol.、2
9巻、399〜404頁(1986))に従って測定した。
ピラジン(第1〜3群)または実施例1−1にて調製し
た化合物(第4〜6群)を、1、2または3日間、200m
g/kgの投与量で投与した。前記の(1)と同様の手順に
従って肝ミクロソームを分離した後、p−ニトロフェノ
ールヒドロキシラーゼの活性を、クープ(Koop)の方法
(デニス アール クープ(Danis R.Koop)、Hydroxyl
ation p-nitrophenol by rabbit ethanol inducible cy
tochrome P-450 isozyme 3a、Molecular Pharmacol.、2
9巻、399〜404頁(1986))に従って測定した。
すなわち、1mgのミクロソーム及び1mMのp−ニトロフ
ェノールを、0.6mlの0.1Mリン酸カリウム緩衝液(pH6.
8)に添加し、総容量を0.9mlとした。得られた混液を、
37℃のインキュベーター中で2分間、前反応せしめ、1m
M NADPH(0.1ml)を添加して反応を開始した。3分後に
0.5mlの0.6N過塩素酸を添加して、発色させ、ただちに5
46nmにおける吸光度を測定した。酵素活性は、1分間の
反応による、産物である4−ニトロカテコールのモル濃
度として表した。
ェノールを、0.6mlの0.1Mリン酸カリウム緩衝液(pH6.
8)に添加し、総容量を0.9mlとした。得られた混液を、
37℃のインキュベーター中で2分間、前反応せしめ、1m
M NADPH(0.1ml)を添加して反応を開始した。3分後に
0.5mlの0.6N過塩素酸を添加して、発色させ、ただちに5
46nmにおける吸光度を測定した。酵素活性は、1分間の
反応による、産物である4−ニトロカテコールのモル濃
度として表した。
結果を図2に示す。図2において、符号「★」は各個
体の有意差を意味しており、「★」「★★」及び「★★
★」はそれぞれ、p<0.05、p<0.01及びp<0.001を
示す。これはすべての図について同様である。図2より
認められるように、4〜6群(本発明の化合物を与え
た)において、1〜3群(ピラジンを与えた)に比し
て、1、2及び3日の投与につきそれぞれ64%、73%及
び82%、p−ニトロフェノールヒドロキシラーゼの活性
が低減している。
体の有意差を意味しており、「★」「★★」及び「★★
★」はそれぞれ、p<0.05、p<0.01及びp<0.001を
示す。これはすべての図について同様である。図2より
認められるように、4〜6群(本発明の化合物を与え
た)において、1〜3群(ピラジンを与えた)に比し
て、1、2及び3日の投与につきそれぞれ64%、73%及
び82%、p−ニトロフェノールヒドロキシラーゼの活性
が低減している。
(2−2)アニリンヒドロキシラーゼ アニリンヒドロキシラーゼの活性を測定するために、
前記と同じ手順(2−1)を行った。アニリンヒドロキ
シラーゼの活性は、ミーヤル(Mieyal)の方法(ジョン
ジェイ ミーヤル(John J.Mieyal)、Acceleration
of the autooxidation of human oxyhemoglobin by ani
line and its relation to hemoglobin-catalyzed anil
ine hydroxylation、J.Biol.Chem.、251巻、3442〜3446
頁(1976))に従って測定した。
前記と同じ手順(2−1)を行った。アニリンヒドロキ
シラーゼの活性は、ミーヤル(Mieyal)の方法(ジョン
ジェイ ミーヤル(John J.Mieyal)、Acceleration
of the autooxidation of human oxyhemoglobin by ani
line and its relation to hemoglobin-catalyzed anil
ine hydroxylation、J.Biol.Chem.、251巻、3442〜3446
頁(1976))に従って測定した。
すなわち、1mgのミクロソーム及び5mMのアニリンを、
0.6mlの0.1Mリン酸カリウム緩衝液(pH6.8)に添加し、
総容量を0.9mlとした。1mM NADPHを添加して総容量を1.
0mlとし、得られた混液を37℃にて反応させた。10分後
に、20%トリクロロ酢酸を添加して反応を停止し、反応
混液を遠心した。1mlの上清に、0.1mlの5%フェノール
及び0.1N NaOHに溶解した2.5N炭酸ナトリウム0.1mlを添
加した。混液を30分間静置して発色させ、ただちに630n
mにおける吸光度を測定した。酵素活性は、1分間の反
応による、産物である4−アミノフェノールのモル濃度
として表した。
0.6mlの0.1Mリン酸カリウム緩衝液(pH6.8)に添加し、
総容量を0.9mlとした。1mM NADPHを添加して総容量を1.
0mlとし、得られた混液を37℃にて反応させた。10分後
に、20%トリクロロ酢酸を添加して反応を停止し、反応
混液を遠心した。1mlの上清に、0.1mlの5%フェノール
及び0.1N NaOHに溶解した2.5N炭酸ナトリウム0.1mlを添
加した。混液を30分間静置して発色させ、ただちに630n
mにおける吸光度を測定した。酵素活性は、1分間の反
応による、産物である4−アミノフェノールのモル濃度
として表した。
結果を図3に示す。図3より認められるように、4〜
6群(本発明の化合物を与えた)において、1〜3群
(ピラジンを与えた)に比して、1、2及び3日の投与
につきそれぞれ57%、80%及び88%、アニリンヒドロキ
シラーゼの活性が低減している。
6群(本発明の化合物を与えた)において、1〜3群
(ピラジンを与えた)に比して、1、2及び3日の投与
につきそれぞれ57%、80%及び88%、アニリンヒドロキ
シラーゼの活性が低減している。
(2−3)N−ニトロソジメチルアミンデメチラーゼ N−ニトロソジメチルアミンデメチラーゼの活性を測
定するために、前記と同じ手順(2−1)を行った。N
−ニトロソジメチルアミンデメラーゼの活性は、カウル
(Kaul)及びノバックの方法(カウル、エル エル(Ka
ul,L.L.)及びノバック、アール エフ、Induction of
rabbit hepatic microsomal cytochrome P-450 by imid
azole; enhanced metabolic activity and altered sub
strate specificity、Arch.Biochem.Biophys.、235巻、
470〜481頁(1984))に従って測定した。
定するために、前記と同じ手順(2−1)を行った。N
−ニトロソジメチルアミンデメラーゼの活性は、カウル
(Kaul)及びノバックの方法(カウル、エル エル(Ka
ul,L.L.)及びノバック、アール エフ、Induction of
rabbit hepatic microsomal cytochrome P-450 by imid
azole; enhanced metabolic activity and altered sub
strate specificity、Arch.Biochem.Biophys.、235巻、
470〜481頁(1984))に従って測定した。
すなわち、1mgのミクロソームに、10mMのN−ニトロ
ソジメチルアミン及び0.6mlの0.1Mリン酸カリウム緩衝
液(pH7.4)を添加し、1mM NADPHを添加して総容量を1.
0mlとした。混液を37℃にて30分間反応させた後、20%
トリクロロ酢酸を添加して反応を停止し、反応混液を遠
心した。0.75mlの上清に、ナッシュ(Nash)試薬(100m
lの蒸留水中、酢酸アンモニウム15.416g、酢酸アセチル
0.206ml及び酢酸0.289ml)を添加した。混液を37℃にて
45分間静置して発色させ、412nmにおける吸光度を測定
した。酵素活性は、1分間の反応で生成したホルムアル
デヒドの濃度として表した。
ソジメチルアミン及び0.6mlの0.1Mリン酸カリウム緩衝
液(pH7.4)を添加し、1mM NADPHを添加して総容量を1.
0mlとした。混液を37℃にて30分間反応させた後、20%
トリクロロ酢酸を添加して反応を停止し、反応混液を遠
心した。0.75mlの上清に、ナッシュ(Nash)試薬(100m
lの蒸留水中、酢酸アンモニウム15.416g、酢酸アセチル
0.206ml及び酢酸0.289ml)を添加した。混液を37℃にて
45分間静置して発色させ、412nmにおける吸光度を測定
した。酵素活性は、1分間の反応で生成したホルムアル
デヒドの濃度として表した。
結果を図4に示す。図4より認められるように、4〜
6群(本発明の化合物を与えた)において、1〜3群
(ピラジンを与えた)に比して、投与の期間に比例して
N−ニトロソジメチルアミンデメチラーゼの活性が49〜
73%、時間に依存して低減している。
6群(本発明の化合物を与えた)において、1〜3群
(ピラジンを与えた)に比して、投与の期間に比例して
N−ニトロソジメチルアミンデメチラーゼの活性が49〜
73%、時間に依存して低減している。
実験例2:フェーズI反応の阻害(2) (1)イムノブロット分析 フェーズI反応に関与する酵素の発現に対する、イソ
ニアジド(INAH、フェーズI反応に関与する酵素系の誘
導剤)と共に投与した場合の本発明の化合物の効果を調
べるために、以下のようにイムノブロット分析を行っ
た。
ニアジド(INAH、フェーズI反応に関与する酵素系の誘
導剤)と共に投与した場合の本発明の化合物の効果を調
べるために、以下のようにイムノブロット分析を行っ
た。
体重190±30gの雄性スプラグ−ドウリーラット36匹
を、9群に分けた。第1群には対照群として、0.1ml/20
0g体重の量でコーン油を腹腔内投与した。第2群には、
PBSで希釈したINAHを200mg/kg体重の投与量で腹腔内投
与した。第3〜第9群には、PBSで希釈したINAHを200mg
/kg体重の投与量で腹腔内投与し、その後実施例2〜8
の化合物をそれぞれ、200mg/kg体重の投与量でコーン油
で希釈して腹腔内投与した。前記実験例1(1)と同じ
手順に従って、肝ミクロソームを分離し、SDS-PAGEでの
ウェスタンブロット分析に付した。
を、9群に分けた。第1群には対照群として、0.1ml/20
0g体重の量でコーン油を腹腔内投与した。第2群には、
PBSで希釈したINAHを200mg/kg体重の投与量で腹腔内投
与した。第3〜第9群には、PBSで希釈したINAHを200mg
/kg体重の投与量で腹腔内投与し、その後実施例2〜8
の化合物をそれぞれ、200mg/kg体重の投与量でコーン油
で希釈して腹腔内投与した。前記実験例1(1)と同じ
手順に従って、肝ミクロソームを分離し、SDS-PAGEでの
ウェスタンブロット分析に付した。
結果を図5に示す。図5から認められるように、INAH
と本発明の化合物を併用して与えた第3〜第9群(レー
ン3〜9)は弱いバンドを示し、INAHの作用により誘導
される酵素発現を本発明の化合物が抑制することが示唆
される。実施例8の化合物を与えた第9群が、最も強い
抑制を示す。
と本発明の化合物を併用して与えた第3〜第9群(レー
ン3〜9)は弱いバンドを示し、INAHの作用により誘導
される酵素発現を本発明の化合物が抑制することが示唆
される。実施例8の化合物を与えた第9群が、最も強い
抑制を示す。
(2)酵素活性 フェーズI反応に関与する酵素の活性に対する、INAH
と組合わせて投与した場合の本発明の化合物の効果を調
べるために、以下のように実験を行った。
と組合わせて投与した場合の本発明の化合物の効果を調
べるために、以下のように実験を行った。
体重190±30gのスプラグ−ドウリーラットの8群に、
INAH(第1群)またはINAHと実施例2〜8の化合物(第
2〜8群)を併用して、各々200mg/kgの投与量で腹腔内
投与した。本発明の化合物及びINAHはそれぞれ、コーン
油及びPBSで希釈し、被検化合物はINAHを投与した直後
に投与した。
INAH(第1群)またはINAHと実施例2〜8の化合物(第
2〜8群)を併用して、各々200mg/kgの投与量で腹腔内
投与した。本発明の化合物及びINAHはそれぞれ、コーン
油及びPBSで希釈し、被検化合物はINAHを投与した直後
に投与した。
実験例1(2−1)及び(2−2)におけると同様の
手順に従って、p−ニトロフェノールヒドロキシラーゼ
及びアニリンヒドロキシラーゼの活性における変化を測
定した。酵素の活性は、INAH単独投与の場合を100%の
酵素活性として決定した。結果を表2に示す。
手順に従って、p−ニトロフェノールヒドロキシラーゼ
及びアニリンヒドロキシラーゼの活性における変化を測
定した。酵素の活性は、INAH単独投与の場合を100%の
酵素活性として決定した。結果を表2に示す。
表2より認められるように、本発明の化合物は、INAH
によって誘導されたp−ニトロフェノールヒドロキシラ
ーゼ及びアニリンヒドロキシラーゼの発現を阻害する。
特に、実施例7及び8の化合物が、優れた阻害作用を示
している。
によって誘導されたp−ニトロフェノールヒドロキシラ
ーゼ及びアニリンヒドロキシラーゼの発現を阻害する。
特に、実施例7及び8の化合物が、優れた阻害作用を示
している。
実験例3:フェーズII反応の誘導(1) (1)ウェスタンブロット分析 フェーズII反応に関与する酵素の発現に対する、本発
明の化合物の効果を調べるために、以下のようにウェス
タンブロット分析を行った。
明の化合物の効果を調べるために、以下のようにウェス
タンブロット分析を行った。
体重190±30gの雄性スプラグ−ドウリーラット28匹
を、7群に分けた。第1群には対照群として、体重200g
当たり0.1mlのコーン油を腹腔内投与した。第2〜第4
群には、コーン油で希釈したピラジンを200mg/kg体重の
投与量でそれぞれ1、2または3日間、腹腔内投与し
た。第5〜第7群には、実施例1−1において調製した
化合物をコーン油で希釈して、200mg/kg体重の投与量で
それぞれ1、2または3日間、腹腔内投与した。
を、7群に分けた。第1群には対照群として、体重200g
当たり0.1mlのコーン油を腹腔内投与した。第2〜第4
群には、コーン油で希釈したピラジンを200mg/kg体重の
投与量でそれぞれ1、2または3日間、腹腔内投与し
た。第5〜第7群には、実施例1−1において調製した
化合物をコーン油で希釈して、200mg/kg体重の投与量で
それぞれ1、2または3日間、腹腔内投与した。
前記実験例1(1)と同じ手順に従って、肝ミクロソ
ームを分離し、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
に付した。その後、以下のようにミクロソームのエポキ
シドヒドロラーゼ(mEH)についてウェスタンブロット
分析を行った。
ームを分離し、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動
に付した。その後、以下のようにミクロソームのエポキ
シドヒドロラーゼ(mEH)についてウェスタンブロット
分析を行った。
5μlのウサギ抗ラット エポキシドヒドロラーゼIgG
を15mlのPBSに混合し、電気泳動を行ったニトロセルロ
ースペーパーを含むバックの中に入れて、2時間振盪し
た。そのニトロセルロースペーパーに、2次抗体とし
て、ビオチン化したヤギ抗ウサギIgGを15μl含む15ml
のPBSを加え、2時間反応させた。ストレプトアビジン
−ホースラディッシュペルオキシダーゼ及び4−クロロ
−1−ナフトールを加えて発色させた。
を15mlのPBSに混合し、電気泳動を行ったニトロセルロ
ースペーパーを含むバックの中に入れて、2時間振盪し
た。そのニトロセルロースペーパーに、2次抗体とし
て、ビオチン化したヤギ抗ウサギIgGを15μl含む15ml
のPBSを加え、2時間反応させた。ストレプトアビジン
−ホースラディッシュペルオキシダーゼ及び4−クロロ
−1−ナフトールを加えて発色させた。
結果を図6に示す。本発明の化合物が与えられた第5
〜第7群では、第1(対照)群またはピラジンを与えた
第2〜第4群に比して、mEHの発現の有意な増大が示さ
れた。特に、それぞれ2及び3日間本発明の化合物を投
与した第6及び第7群では、投与期間に比例してmEHの
発現が4〜5倍増大した。
〜第7群では、第1(対照)群またはピラジンを与えた
第2〜第4群に比して、mEHの発現の有意な増大が示さ
れた。特に、それぞれ2及び3日間本発明の化合物を投
与した第6及び第7群では、投与期間に比例してmEHの
発現が4〜5倍増大した。
(2)酵素活性 フェーズII反応に関与する酵素であるグルタチオンS
−トランスフェラーゼ(GST)の活性に対する、本発明
の化合物の効果を調べるために、以下のように実験を行
った。
−トランスフェラーゼ(GST)の活性に対する、本発明
の化合物の効果を調べるために、以下のように実験を行
った。
体重190±30gのスプラグ−ドウリーラットの9群に、
コーン油(第1〜3群)、ピラジン(第4〜6群)また
は実施例1−1にて調製した化合物(第7〜9群)を、
1、2または3日間、200mg/kgの投与量で投与した。さ
らに第10群には、ピラジンと実施例1−1にて調製した
化合物を併用して3日間、200mg/kgの投与量で投与し
た。実験例1(1)におけると同様の手順に従って肝ミ
クロソームを分離した後、GSTのサイトゾル活性を、ハ
ビグ(Habig)の方法(ハビグ、ダブリュー エイチ(H
abig,W.H.)、J.Biol.Chem.、249巻、7130〜7139頁(19
74))に従って測定した。
コーン油(第1〜3群)、ピラジン(第4〜6群)また
は実施例1−1にて調製した化合物(第7〜9群)を、
1、2または3日間、200mg/kgの投与量で投与した。さ
らに第10群には、ピラジンと実施例1−1にて調製した
化合物を併用して3日間、200mg/kgの投与量で投与し
た。実験例1(1)におけると同様の手順に従って肝ミ
クロソームを分離した後、GSTのサイトゾル活性を、ハ
ビグ(Habig)の方法(ハビグ、ダブリュー エイチ(H
abig,W.H.)、J.Biol.Chem.、249巻、7130〜7139頁(19
74))に従って測定した。
すなわち、サイトゾルのタンパク質に0.1mMの1−ク
ロロ−2,4−ニトロベンゼン及び基質として1.0mMのグル
タチオンを加え、そして、0.1Mリン酸カリウムを添加
し、総容量を1.0ml(pH6.4)とした。得られた混液を、
室温で2分間静置し、そして1分間にわたって340nmに
おける吸光度を15秒毎に測定した。標準として、加熱に
より変性させたサイトゾルタンパク質を用いた。GSTの
活性は1分間にわたる吸光度の変化を測定し、9.6mM-1c
m-1の消衰係数を用いて算出した。
ロロ−2,4−ニトロベンゼン及び基質として1.0mMのグル
タチオンを加え、そして、0.1Mリン酸カリウムを添加
し、総容量を1.0ml(pH6.4)とした。得られた混液を、
室温で2分間静置し、そして1分間にわたって340nmに
おける吸光度を15秒毎に測定した。標準として、加熱に
より変性させたサイトゾルタンパク質を用いた。GSTの
活性は1分間にわたる吸光度の変化を測定し、9.6mM-1c
m-1の消衰係数を用いて算出した。
結果を図7から9に示す。図7は対照群の結果と本発
明の化合物を与えた群の結果とを比較した棒グラフであ
る。図8はピラジンを与えた群の結果と本発明の化合物
を与えた群の結果とを比較した棒グラフである。図9は
対照群の結果と、ピラジン、アリルスルフィド、及びピ
ラジンと本発明の化合物とを併用して、3日間投与した
群の結果とを比較した棒グラフである。
明の化合物を与えた群の結果とを比較した棒グラフであ
る。図8はピラジンを与えた群の結果と本発明の化合物
を与えた群の結果とを比較した棒グラフである。図9は
対照群の結果と、ピラジン、アリルスルフィド、及びピ
ラジンと本発明の化合物とを併用して、3日間投与した
群の結果とを比較した棒グラフである。
図7から9より認められるように、本発明の化合物を
与えた群において、対照群に比して、1、2及び3日の
投与につき、135%、178%及び200%というように、時
間に依存してGST活性が増大しており、3日間ピラジン
を与えた群及びピラジンと本発明の化合物を併用して与
えた群での130%及び140%の増大よりもはるかに高い。
従って、本発明の化合物はフェーズII反応に関与する酵
素の誘導に有効である。
与えた群において、対照群に比して、1、2及び3日の
投与につき、135%、178%及び200%というように、時
間に依存してGST活性が増大しており、3日間ピラジン
を与えた群及びピラジンと本発明の化合物を併用して与
えた群での130%及び140%の増大よりもはるかに高い。
従って、本発明の化合物はフェーズII反応に関与する酵
素の誘導に有効である。
実験例4:フェーズII反応の誘導(2) (1)イムノブロット分析 フェーズII反応に関与する酵素の発現に対する、本発
明の化合物の効果を調べるために、以下のようにイムノ
ブロット分析を行った。
明の化合物の効果を調べるために、以下のようにイムノ
ブロット分析を行った。
体重190±30gの雄性スプラグ−ドウリーラット32匹
を、8群に分けた。第1群には対照群として、体重200g
当たり0.1mlのコーン油を腹腔内投与した。第2〜第8
群には、コーン油で希釈した実施例2〜8の化合物を、
200mg/kg体重の投与量で腹腔内投与した。
を、8群に分けた。第1群には対照群として、体重200g
当たり0.1mlのコーン油を腹腔内投与した。第2〜第8
群には、コーン油で希釈した実施例2〜8の化合物を、
200mg/kg体重の投与量で腹腔内投与した。
肝ミクロソームを分離し、前記実験例1(1)におけ
ると同じ手順に従って、SDS-PAGEでのウェスタンブロッ
ト分析に付した。
ると同じ手順に従って、SDS-PAGEでのウェスタンブロッ
ト分析に付した。
結果を図10に示す。図10より認められるように、本発
明の化合物が与えられた第2〜第8群(レーン2〜8)
では強いバンドが現れ、本発明の化合物が酵素発現を誘
導することが示唆される。
明の化合物が与えられた第2〜第8群(レーン2〜8)
では強いバンドが現れ、本発明の化合物が酵素発現を誘
導することが示唆される。
(2)酵素活性 フェーズII反応に関与する酵素の活性に対する、単独
でまたはINAHと組合わせて投与した場合の、本発明の化
合物の効果を調べるために、以下のように実験を行っ
た。
でまたはINAHと組合わせて投与した場合の、本発明の化
合物の効果を調べるために、以下のように実験を行っ
た。
体重190±30gのスプラグ−ドウリーラットの16群に、
コーン油(第1群)、実施例2〜8の化合物(第2〜8
群)、INAH(第9群)またはINAHと併用して実施例2〜
8の化合物(第10〜16群)を、各々200mg/kgの投与量で
腹腔内投与した。本発明の化合物及びINAHは、コーン油
で希釈し、被検化合物はINAHの投与直後に投与した。
コーン油(第1群)、実施例2〜8の化合物(第2〜8
群)、INAH(第9群)またはINAHと併用して実施例2〜
8の化合物(第10〜16群)を、各々200mg/kgの投与量で
腹腔内投与した。本発明の化合物及びINAHは、コーン油
で希釈し、被検化合物はINAHの投与直後に投与した。
GSTの活性の変化を実験例3(2)と同様の手順に従
って測定した。酵素の活性はコーン油またはINAH単独投
与の場合の酵素活性を100%として決定した。結果を表
3に示す。
って測定した。酵素の活性はコーン油またはINAH単独投
与の場合の酵素活性を100%として決定した。結果を表
3に示す。
表3より認められるように、本発明の化合物はグルタ
チオンS−トランスフェラーゼの発現を誘導し、特に実
施例5、7及び8の化合物が70%もしくはそれより多
く、酵素の発現を増大せしめる。さらに、表3の結果に
より、酵素発現の阻害剤であるINAHが投与された場合で
さえも、本発明の化合物、特に実施例3、5及び8の化
合物は酵素の発現を強く誘導することが示される。
チオンS−トランスフェラーゼの発現を誘導し、特に実
施例5、7及び8の化合物が70%もしくはそれより多
く、酵素の発現を増大せしめる。さらに、表3の結果に
より、酵素発現の阻害剤であるINAHが投与された場合で
さえも、本発明の化合物、特に実施例3、5及び8の化
合物は酵素の発現を強く誘導することが示される。
結論として、本発明の化合物はフェーズII反応に関与
する酵素の発現を活性化する一方でフェーズI反応に関
与する酵素の発現を有効に阻害することができる。
する酵素の発現を活性化する一方でフェーズI反応に関
与する酵素の発現を有効に阻害することができる。
図面の簡単な説明 図1は、コーン油、ピラジン及び本発明の化合物を用
いて処理したラットからの肝ミクロソームの、抗−P450
2E1抗体を用いたイムノブロット分析(実験例1
(1))を示す図である。
いて処理したラットからの肝ミクロソームの、抗−P450
2E1抗体を用いたイムノブロット分析(実験例1
(1))を示す図である。
図2は、ピラジン及び本発明の化合物を用いた処理に
続くp−ニトロソフェノールヒドロキシラーゼ活性の経
時変化(実験例1(2−1))を示す図である。
続くp−ニトロソフェノールヒドロキシラーゼ活性の経
時変化(実験例1(2−1))を示す図である。
図3は、ピラジン及び本発明の化合物を用いた処理に
続くアニリンヒドロキシラーゼ活性の経時変化(実験例
1(2−2))を示す図である。
続くアニリンヒドロキシラーゼ活性の経時変化(実験例
1(2−2))を示す図である。
図4は、ピラジン及び本発明の化合物を用いた処理に
続くN−ニトロソジメチルアミンデメチラーゼ活性の経
時変化(実験例1(2−3))を示す図である。
続くN−ニトロソジメチルアミンデメチラーゼ活性の経
時変化(実験例1(2−3))を示す図である。
図5は、コーン油、INAH、INAHと本発明の化合物の併
用、を用いて処理したラットから単離したミクロソーム
の、抗−P450 2E1抗体を用いたイムノブロット分析(実
験例2)を示す図である。
用、を用いて処理したラットから単離したミクロソーム
の、抗−P450 2E1抗体を用いたイムノブロット分析(実
験例2)を示す図である。
図6は、コーン油、ピラジン及び本発明の化合物を用
いて処理したラットから単離した肝ミクロソームの、抗
−mEH抗体を用いたイムノブロット分析(実験例3
(1))を示す図である。
いて処理したラットから単離した肝ミクロソームの、抗
−mEH抗体を用いたイムノブロット分析(実験例3
(1))を示す図である。
図7は、コーン油及び本発明の化合物を用いた処理に
続くグルタチオンS−トランスフェラーゼ活性の経時変
化(実験例3(2))を示す図である。
続くグルタチオンS−トランスフェラーゼ活性の経時変
化(実験例3(2))を示す図である。
図8は、ピラジン及び本発明の化合物を用いた処理に
続くグルタチオンS−トランスフェラーゼ活性の経時変
化(実験例3(2))を示す図である。
続くグルタチオンS−トランスフェラーゼ活性の経時変
化(実験例3(2))を示す図である。
図9は、コーン油、ピラジン、本発明の化合物及びピ
ラジンと本発明の化合物との併用を用いた処理後のグル
タチオンS−トランスフェラーゼ活性(実験例3
(2))を示す図である。
ラジンと本発明の化合物との併用を用いた処理後のグル
タチオンS−トランスフェラーゼ活性(実験例3
(2))を示す図である。
図10は、コーン油及び本発明の化合物を用いて処理し
たラットから単離したミクロソームの、抗−mEH抗体を
用いたイムノブロット分析(実験例4)を示す図であ
る。
たラットから単離したミクロソームの、抗−mEH抗体を
用いたイムノブロット分析(実験例4)を示す図であ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 キム,サン,ゲオン 大韓民国 139―242 ソウル ノウォン ―ク ゴンヌン―2―ドン 230 ヒン ダイ アパートメント 16―203 (72)発明者 チョル,ヨン,ロ 大韓民国 437―082 キュンギ―ドウ エウイワン―シティ ナエソン―2―ド ン ダエウー アパートメント 20― 106
Claims (5)
- 【請求項1】以下の一般式(I): (式中、R1は水素原子またはC1〜3のアルキル基を表
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される構造を有する化合物。 - 【請求項2】R1が水素原子またはメチル基であり、かつ
R2が、一般式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチル基を表す) により示される基である請求項1に記載の化合物。 - 【請求項3】2−(2−プロペニルチオ)ピラジン、2
−(ベンジルチオ)ピラジン、2−(3−メチル−2−
ブテニルチオ)ピラジン、2−(シンナミルチオ)ピラ
ジン、2−(フルフリルチオ)ピラジン、2−(3−メ
チル−3−ブテニルチオ)ピラジン、2−(2−ブテニ
ルチオ)ピラジン及び2−(3−ブテニルチオ)ピラジ
ンより成る群から選択される請求項1に記載の化合物。 - 【請求項4】一般式(I): (式中、R1は水素原子またはC1〜3のアルキル基を表
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式: −C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される化合物を調製する方法であって、 式(II): の化合物を一般式(III): (式中、Xはハロゲン原子または水酸基を表し、また、
R1及びR2は前記定義と同様のものを表す) の化合物と反応させることを含んで成る調製法。 - 【請求項5】有効成分として、一般式(I): (式中、R1は水素原子またはC1〜3のアルキル基を表
し、またR2はフェニルもしくはフラニル基、または一般
式:−C(Ra)=C(Rb)(Rc) (式中、Ra、Rb及びRcは同じかまたは互いに異なってお
り、水素原子またはメチルもしくはフェニル基を表す)
により示される基を表す) で示される化合物及び薬学的に許容しうる担体を含んで
成る化学的保護組成物。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1019930021876A KR0138005B1 (ko) | 1993-10-21 | 1993-10-21 | 신규의 화학적 보호제(chemopreventive agent)및 그의 제조방법 |
KR1993/21876 | 1993-10-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH08503972A JPH08503972A (ja) | 1996-04-30 |
JP2670384B2 true JP2670384B2 (ja) | 1997-10-29 |
Family
ID=19366274
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP7511619A Expired - Lifetime JP2670384B2 (ja) | 1993-10-21 | 1994-10-21 | 新規化学的保護化合物ならびにその調製法及び用途 |
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---|---|
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EP (1) | EP0674628B1 (ja) |
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CN (1) | CN1043887C (ja) |
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WO2001011035A1 (en) * | 1999-08-05 | 2001-02-15 | Merck & Co., Inc. | Monoclonal antibodies for human cytochrome p450 3a4 and human cytochrome p450 2c9 |
US7078045B2 (en) * | 2000-03-02 | 2006-07-18 | Sang-Geon Kim | Pharmaceutical composition for treatment and prevention of liver fibrosis and cirrhosis |
GB0008689D0 (en) * | 2000-04-07 | 2000-05-31 | Nokia Networks Oy | A method and system for processing signals |
KR20030067935A (ko) * | 2002-02-09 | 2003-08-19 | 김상건 | 올티프라즈를 포함하는 간경화(간경변증) 치료를 위한 간 조직 재생용 제약 조성물 |
BR0109747A (pt) * | 2000-04-07 | 2003-02-04 | Sang-Geon Kim | Uso de 5-(2-pirazinil)-4-metil-1-2-ditiol-3-tiona (oltipraz) como um medicamento, composição farmacêutica para a prevenção e tratamento da progressão da fibrose hepática, uso de 5-(2-pirazinil)-4-metil-1, 2-ditiol-3-tiona e método para a prevenção e tratamento da progressão da fibrose e da cirrose hepática |
US7001619B2 (en) * | 2002-03-27 | 2006-02-21 | Council Of Scientific And Industrial Research | Hepatocurative effect of emblica officinalis against CYP 450 bio-activation hepatotoxicity of drugs |
US7498331B2 (en) * | 2003-11-06 | 2009-03-03 | United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Arthropod repellent pharmacophore models, compounds identified as fitting the pharmacophore models, and methods of making and using thereof |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3931166A (en) * | 1972-04-13 | 1976-01-06 | Firmenich & Cie | Certain 2,5-dimethyl-3-thiopyrazines |
CA1001631A (en) * | 1972-05-05 | 1976-12-14 | Merck Sharp And Dohme (I.A.) Corp. | 2-(3-substituted amino-2-hydroxy-propoxy)-3-substituted pyrazines and method for preparation |
US4085109A (en) * | 1974-06-24 | 1978-04-18 | Firmenich & Cie | Pyridine sulfur flavoring agents |
US3989713A (en) * | 1974-07-24 | 1976-11-02 | Firmenich & Cie | Pyrrylmethylthio flavoring agents |
GB1549829A (en) * | 1976-05-26 | 1979-08-08 | Farmaceutici Italia | 10'-methoxy-1',6'-dimethylergoline-8'-beta-methyl-amino(or thio)-pyrazines |
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1993
- 1993-10-21 KR KR1019930021876A patent/KR0138005B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-10-21 JP JP7511619A patent/JP2670384B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-21 US US08/454,160 patent/US5658913A/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-21 DE DE69422275T patent/DE69422275T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-21 CN CN94190810A patent/CN1043887C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-21 WO PCT/KR1994/000144 patent/WO1995011236A1/en active IP Right Grant
- 1994-10-21 EP EP94931210A patent/EP0674628B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
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EP0674628B1 (en) | 1999-12-22 |
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