JP2512387B2 - Cell sorting method and cell collection method - Google Patents
Cell sorting method and cell collection methodInfo
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/04—Cell isolation or sorting
Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、細胞選別方法および細
胞補集方法に関し、さらに詳細には、細胞の接着状態の
違いを利用した細胞選別方法および細胞補集方法に関す
る。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for sorting cells and a method for collecting cells, and more particularly, to a method for sorting cells and a method for collecting cells utilizing a difference in the state of cell adhesion.
【０００２】[0002]
【従来の技術】従来より、細胞を他の細胞や物質に接触
させて、当該細胞と当該細胞に接触された他の細胞や物
質との接着状態の違いを観察し、細胞の選別を行う細胞
選別方法が知られている。2. Description of the Related Art Conventionally, cells are selected by contacting a cell with another cell or substance, observing a difference in adhesion between the cell and another cell or substance contacted with the cell, and selecting the cell. Sorting methods are known.
【０００３】これまでに、こうした細胞選別方法として
は、旋回培養器を用いる方法ならびに複数のマイクロ・
ピペットを用いる方法が提案され、検討されてきた。Heretofore, such cell sorting methods include a method using a swirling incubator and a plurality of micro-organisms.
Methods using pipettes have been proposed and discussed.
【０００４】上記細胞選別方法の中の旋回培養器を用い
る方法とは、培養液を満たした容器に単離した複数の細
胞を入れて旋回培養器にかけ、旋回による培養液の流れ
および振動などによって細胞同士を接触させて、一定時
間後に容器に入れた細胞の様子を観察する。この観察の
結果に基づき、細胞同士が接着状態にある細胞、あるい
は細胞同士が接着状態にない細胞の選別を行うものであ
った。[0004] Among the above-mentioned cell sorting methods, a method using a swirling incubator means that a plurality of isolated cells are put in a container filled with a culture solution, placed in a swirling incubator, and subjected to the flow and vibration of the culture solution by swirling. The cells are brought into contact with each other, and after a certain period of time, the state of the cells placed in the container is observed. Based on the results of this observation, cells that are in an adhered state or cells that are not in an adhered state are selected.
【０００５】そして、このようにして選別した細胞の補
集は、補集用のマイクロ・ピペットなどを用いて吸引し
て補集していた。[0005] The collection of the cells selected in this manner has been performed by suction using a micropipette or the like for collection.
【０００６】また、複数のマイクロ・ピペットを用いる
方法においては、機械的な第一の微動装置に固定した第
一のマイクロ・ピペットと、第一のマイクロ・ピペット
が固定された第一の微動装置とは異なる第二の微動装置
に固定された第二のマイクロ・ピペットとを用いるもの
であって、これら第一の微動装置および第二の微動装置
により第一のマイクロ・ピペットおよび第二のマイクロ
・ピペットを微動させながら、細胞選別のための操作を
行うものであった。In the method using a plurality of micro-pipettes, a first micro-pipette fixed to a mechanical first fine-movement device and a first micro-movement device to which the first micro-pipette is fixed And a second micro-pipette fixed to a second micro-motion device different from the first micro-motion device, wherein the first micro-motion device and the second micro-motion device use the first micro-pipet and the second micro-motion device. -The operation for cell sorting was performed while slightly moving the pipette.
【０００７】即ち、培養液中の第一の細胞を選択した
ら、第一の微動装置により第一のマイクロ・ピペットを
操作し、第一のマイクロ・ピペットの先端に第一の細胞
を吸引固定する。次に、培養液中の第一の細胞とは異な
る第二の細胞を選択したら、上記と同様に、第二の微動
装置により第二のマイクロ・ピペットを操作し、第二の
マイクロ・ピペットの先端に第二の細胞を吸引固定す
る。その後さらに、第二の微動装置により第二のマイク
ロ・ピペットを操作して、第二のマイクロ・ピペットの
先端に吸引固定された第二の細胞を、第一のマイクロ・
ピペットの先端に吸引固定された第一の細胞に接触さ
せ、一定時間後に、第一の細胞と第二の細胞との接触を
維持させつつ、第二の細胞を第二のマイクロ・ピペット
から分離する。That is, after selecting the first cell in the culture solution, the first micropipette is operated by the first micromotion device, and the first cell is suction-fixed to the tip of the first micropipette. . Next, when a second cell different from the first cell in the culture solution is selected, the second micropipette is operated by the second micromotion device, and the second micropipette is operated. The second cell is suction-fixed to the tip. Thereafter, further, the second micropipette is operated by the second micromotion device, and the second cells sucked and fixed to the tip of the second micropipette are transferred to the first micropipette.
The second cell is separated from the second micropipette while maintaining contact between the first cell and the second cell after a certain time, by contacting the first cell suction-fixed to the tip of the pipette. I do.
【０００８】そして、第二の細胞を第二のマイクロ・ピ
ペットから分離させた後に、重力による第二の細胞の落
下が生ずるか否かで、第一の細胞と第二の細胞とが接着
したか否かを判断して、細胞の選別を行うものであっ
た。After the second cell is separated from the second micropipette, the first cell and the second cell adhere to each other depending on whether the second cell falls due to gravity. It was determined whether the cells were sorted or not.
【０００９】また、このようにして選別した細胞の補集
は、第一の微動装置により第一のマイクロ・ピペットを
操作して補集するか、あるいは第一のマイクロ・ピペッ
トから第一の細胞を分離した後に、補集用のマイクロ・
ピペットなどを用いて吸引して補集していた。The collection of the cells selected in this manner can be performed by operating the first micropipette with the first microtremor or by collecting the first cell from the first micropipette. After separation, the micro
The sample was collected by suction using a pipette or the like.
【００１０】[0010]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記し
た細胞選別方法にあっては、接着の状態を指標とした細
胞の個別選抜が、精確には行われていない恐れがあると
いう問題点があった。However, in the above-described cell sorting method, there is a problem that individual selection of cells based on the state of adhesion may not be performed accurately. .
【００１１】即ち、上記した従来の細胞選別方法の中で
旋回培養器を用いる方法においては、細胞同士の接触が
培養液の流れおよび振動などによって偶然に行われるも
のであった。このため、培養液中の単離細胞の密度、旋
回培養器の旋回の速度および振幅、ならびに旋回の時間
を調整しても、個々の細胞によって接触の様子が著しく
異なることを避けることができなかった。That is, in the above-described conventional cell sorting method using a swirling incubator, the cells are contacted with each other by chance due to the flow of a culture solution, vibration, and the like. For this reason, even if the density of the isolated cells in the culture solution, the speed and amplitude of the swirling of the swirling incubator, and the time of the swirling are adjusted, it is inevitable that the state of contact differs significantly between individual cells. Was.
【００１２】その結果、細胞同士の接触が単離細胞同士
の一対一、あるいは単離細胞と複数の細胞集合体との一
対多、または複数の細胞集合体同士の多対多のいずれの
場合であったかを特定することが困難であった。As a result, whether the contact between the cells is one-to-one between the isolated cells, one-to-many between the isolated cells and a plurality of cell aggregates, or many-to-many between the plurality of cell aggregates Was difficult to identify.
【００１３】ところが、一般に、細胞間の接着状態は、
接触している細胞の数によって変化するので、偶然では
なく特定の条件下において細胞の接触を行うことができ
ないと、特定の単離細胞が接触した他の細胞や物質を識
別し、特定の細胞種の細胞や物質に対してのみ接着を示
すという事実を明らかにすることができないことにな
る。このため、旋回培養器を用いる方法では、接着の状
態を指標とした細胞の個別選別を行うことが、実際上は
極めて困難なものであった。However, in general, the state of adhesion between cells is
Because it depends on the number of cells in contact, if a cell cannot be contacted under certain conditions by accident, a particular isolated cell will identify other cells or substances with which it has contacted, It will not be possible to reveal the fact that it only shows adhesion to species of cells and substances. For this reason, in the method using a swirling incubator, it is actually extremely difficult to individually select cells using the state of adhesion as an index.
【００１４】一方、上記した従来の細胞選別方法の中で
複数のマイクロ・ピペットを用いる方法においては、偶
然ではなく特定の条件下において細胞同士の接触を行う
ことができるので、任意の細胞の接着状態を調べること
ができる点においては、旋回培養器を用いる方法と比較
すると有利である。On the other hand, in the above-mentioned conventional cell sorting method using a plurality of micro pipettes, cells can be brought into contact with each other under specific conditions, not by accident. The point that the state can be examined is advantageous as compared with the method using a swirling incubator.
【００１５】しかしながら、マイクロ・ピペットの先端
に細胞を吸引固定すると、その吸引圧力を微妙に調整し
ないと細胞膜に不自然な張力がかかり、吸引固定した細
胞に損傷や変形を与え、細胞選別後の細胞の利用に影響
を及ぼすこととなっていた。However, if cells are suction-fixed to the tip of the micropipette, an unnatural tension is applied to the cell membrane unless the suction pressure is delicately adjusted, causing damage or deformation to the suction-fixed cells, and It was to affect cell utilization.
【００１６】即ち、細胞に吸引圧力がかかりすぎたよう
な場合には、当該細胞を破壊してしまうこととなり、再
度の細胞の選別操作を行う必要があった。That is, if the suction pressure is applied too much to the cells, the cells will be destroyed, and it is necessary to perform the cell sorting operation again.
【００１７】ところで、こうしたマイクロ・ピペットの
先端に細胞を吸引固定するための吸引圧力の調整は、マ
イクロ・ピペット毎に異なる毛細管現象に応じて適宜微
細に行う必要があり、その調整は一般には極めて困難で
ある。Incidentally, the adjustment of the suction pressure for sucking and fixing the cells to the tip of the micro pipette needs to be performed finely as appropriate in accordance with the capillary phenomenon which differs for each micro pipette. Have difficulty.
【００１８】また、上記したようなマイクロ・ピペット
毎の吸引圧力の調整を達成できたとしても、細胞間接着
状態を調べる際には、第二の細胞を第二のマイクロ・ピ
ペットから分離する必要があり、この分離操作もやはり
微妙な吸引圧力の調整が必要であった。Even if the suction pressure of each micro pipette can be adjusted as described above, it is necessary to separate the second cells from the second micro pipette when examining the state of cell-cell adhesion. This separation operation also required fine adjustment of the suction pressure.
【００１９】この分離操作における吸引圧力の調整は、
吸引固定時の吸引圧力の調整より一層困難なものである
が、この分離操作における吸引圧力の調整が不十分な場
合には、細胞あるいは周囲の培養液に不要な勢いや擾乱
を与えることになり、たとえ接着状態を示している細胞
であっても、こうした勢いや擾乱によって接着状態が解
除されてしまい、接着形成の判断が困難となる恐れがあ
った。The adjustment of the suction pressure in this separation operation is as follows.
Adjustment of the suction pressure during suction fixation is more difficult, but insufficient adjustment of the suction pressure in this separation operation may cause unnecessary momentum or disturbance to the cells or the surrounding culture medium. However, even with cells showing an adhesive state, the adhesive state is released by such momentum or disturbance, and there is a fear that it is difficult to determine the formation of the adhesive.
【００２０】このように、上記したような従来の細胞選
別方法は、細胞の接着の状態を指標とした細胞の個別選
抜が精確には行われていない恐れがあるという問題点
を、内在するものであった。As described above, the conventional cell sorting method as described above has an inherent problem that individual selection of cells based on the state of cell adhesion may not be performed accurately. Met.
【００２１】本発明は、従来の技術の有するこのような
種々の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的と
するところは、細胞の個別選別を、細胞の接着の状態を
指標として精確に行うことができる細胞選別方法および
細胞補集方法を提供しようとするものである。The present invention has been made in view of such various problems of the prior art, and it is an object of the present invention to accurately select individual cells by using the state of cell adhesion as an index. It is an object of the present invention to provide a cell sorting method and a cell collection method which can be performed in the above.
【００２２】[0022]
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明による細胞選別方法は、任意の細胞を他の対
象物に接触させた後に、上記接触による上記細胞と上記
対象物との接着状態に基づいて、上記細胞の選別を行う
細胞選別方法において、上記細胞に光を照射して捕捉
し、上記光を上記対象物に対して相対的に移動すること
により、上記光により捕捉した上記細胞を上記対象物方
向へ移動して、上記細胞と上記対象物とを接触させ、上
記細胞と上記対象物との接触の後に上記光の照射を中止
して、上記光により捕捉した上記細胞の上記光による捕
捉を解除し、上記接触による上記細胞と上記対象物との
接着状態に基づいて、上記細胞の選別を行うようにした
ものである。Means for Solving the Problems In order to achieve the above object, a cell sorting method according to the present invention comprises contacting any cell with another object and then contacting the cell with the object by the contact. Based on the state of adhesion, in the cell sorting method for sorting the cells, the cells are captured by irradiating the cells with light, and the light is moved relative to the object, thereby capturing the cells with the light. The cell is moved in the direction of the object, the cell is brought into contact with the object, the irradiation of the light is stopped after the contact between the cell and the object, the cell captured by the light Is released, and the cells are sorted based on the state of adhesion between the cells and the object due to the contact.
【００２３】また、本発明による細胞選別方法において
は、上記細胞と上記対象物との接触により上記細胞と上
記対象物とが接着した場合には、必要に応じて、上記細
胞に光を照射して捕捉し、上記光を上記対象物に対して
相対的に移動することにより、上記光により捕捉した上
記細胞に対して上記対象物から引き離す方向に力を加え
て、上記接触による上記細胞と上記対象物との接着状態
に基づいて、上記細胞の選別を行うようにした。In the cell sorting method according to the present invention, if the cell and the object adhere to each other due to the contact between the cell and the object, the cell may be irradiated with light as necessary. By capturing the light and moving the light relative to the object, a force is applied to the cells captured by the light in a direction to separate the cells from the object, and the cells by the contact and the cells The cells were sorted based on the state of adhesion to the object.
【００２４】一方、本発明による細胞補集方法は、任意
の細胞を他の対象物に接触させた後に、上記接触による
上記細胞と上記対象物との接着状態に基づいて、上記細
胞の選別を行い、上記選別した細胞を任意の場所に補集
する細胞補集方法において、上記細胞に光を照射して捕
捉し、上記光を上記対象物に対して相対的に移動するこ
とにより、上記光により捕捉した上記細胞を上記対象物
方向へ移動して、上記細胞と上記対象物とを接触させ、
上記細胞と上記対象物との接触の後に上記光の照射を中
止して、上記光により捕捉した上記細胞の上記光による
捕捉を解除し、上記接触による上記細胞と上記対象物と
の接着状態に基づいて、上記細胞の選別を行い、さらに
上記選別した細胞に光を照射して捕捉し、上記光により
捕捉した上記選別した細胞を任意の場所に移動した後
に、上記光の照射を中止して、上記光により捕捉した上
記選別した細胞の上記光による捕捉を解除し、上記選別
した細胞を上記任意の場所に補集するようにしたもので
ある。On the other hand, the cell collection method according to the present invention comprises the steps of: after contacting an arbitrary cell with another object, sorting the cells based on the state of adhesion between the cell and the object due to the contact. Performing, in the cell collection method of collecting the selected cells at an arbitrary location, capturing and irradiating the cells with light, and moving the light relative to the object, thereby obtaining the light Move the cells captured by in the direction of the object, contact the cells and the object,
The irradiation of the light is stopped after the contact between the cell and the object, the capture by the light of the cell captured by the light is released, and the adhesion of the cell and the object by the contact is released. Based on, based on the sorting of the cells, further irradiating the selected cells with light and capturing the light, after moving the selected cells captured by the light to any location, stopping the irradiation of the light In addition, the capture of the selected cells captured by the light by the light is released, and the selected cells are collected at the arbitrary location.
【００２５】また、本発明による細胞補集方法において
は、上記細胞と上記対象物との接触により上記細胞と上
記対象物とが接着した場合には、必要に応じて、上記細
胞に光を照射して捕捉し、上記光を上記対象物に対して
相対的に移動することにより、上記光により捕捉した上
記細胞に対して上記対象物から引き離す方向に力を加え
て、上記接触による上記細胞と上記対象物との接着状態
に基づいて、上記細胞の選別を行い、さらに上記選別し
た細胞に光を照射して捕捉し、上記光により捕捉した上
記選別した細胞を任意の場所に移動した後に、上記光の
照射を中止して、上記光により捕捉した上記選別した細
胞の上記光による捕捉を解除し、上記選別した細胞を上
記任意の場所に補集するようにした。Further, in the cell collection method according to the present invention, if the cells adhere to the object by contacting the cells with the object, the cells may be irradiated with light as necessary. By capturing and moving the light relative to the object, a force is applied in a direction to separate the cell captured by the light from the object, and the cell is contacted with the cell. Based on the state of adhesion to the object, sorting the cells, further irradiating the selected cells with light to capture, after moving the selected cells captured by the light to any location, The irradiation of the light was stopped, the capture of the selected cells captured by the light by the light was released, and the selected cells were collected at the arbitrary location.
【００２６】[0026]
【作用】集光した光を物体に照射すると、光の反射およ
び屈折に伴う光圧力が物体に発生し、物体を捕捉するこ
とができるようになる。When an object is irradiated with condensed light, light pressure is generated in the object due to the reflection and refraction of light, and the object can be captured.
【００２７】従って、光を特定の細胞に照射することに
より当該細胞を捕捉すると、光によって捕捉された当該
細胞を任意の場所に向けて相対的に移動することができ
ることとなる。このため、特定の細胞を対象物に向けて
移動させて、特定の細胞と対象物とを接触させることが
可能となる。Therefore, when the cells are captured by irradiating the cells with light, the cells captured by the light can be relatively moved toward an arbitrary place. For this reason, it becomes possible to move a specific cell toward a target object and to contact the specific cell with the target object.
【００２８】また、この光による物体の捕捉力は、物体
に入射する光出力の調整で容易にかつ精密に制御できる
ので、捕捉する細胞に障害を与えない必要最小限の捕捉
力が容易に得られるばかりでなく、光の照射を中止する
ことにより、有害な振動を一切与えることなく細胞を開
放することができるので、細胞あるいは周囲の培養液に
不要な勢いや擾乱を与えることがない。Further, the capturing power of the object by the light can be easily and precisely controlled by adjusting the light output incident on the object, so that the necessary minimum capturing force that does not impair the cells to be captured can be easily obtained. In addition, by stopping the light irradiation, the cells can be released without giving any harmful vibration, so that unnecessary force or disturbance is not given to the cells or the surrounding culture solution.
【００２９】このため、細胞の接着の状態を指標とした
細胞の個別選抜ならびに補集を、精確に行うことができ
るようになる。[0029] Therefore, individual selection and collection of cells using the state of cell adhesion as an index can be performed accurately.
【００３０】[0030]
【実施例】以下、図面に基づいて、本発明による細胞選
別方法および細胞補集方法の一実施例を詳細に説明する
こととする。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a block diagram showing an embodiment of a cell sorting method and a cell collection method according to the present invention.
【００３１】図１には、本発明による細胞選別方法およ
び細胞補集方法を実施するための細胞選別・補集装置が
示されており、この細胞選別・補集装置は、レーザー部
１０と、顕微鏡照射部２０および試料容器部３０から構
成されている。FIG. 1 shows a cell selection / collection device for carrying out the cell selection method and the cell collection method according to the present invention. The cell selection / collection device includes a laser unit 10, It comprises a microscope irradiation unit 20 and a sample container unit 30.
【００３２】レーザー部１０は、赤外線レーザーを発生
する連続発振ＹＡＧレーザー１１と、連続発振ＹＡＧレ
ーザー１１から出射されたレーザー・ビームの偏光方向
の制御を行う二分の一波長板１２と、二分の一波長板１
２から出射されたレーザー・ビームを二つのビームに分
ける偏光ビーム・スプリッタ１３と、照明用光源１４と
を有して構成されている。The laser section 10 includes a continuous wave YAG laser 11 for generating an infrared laser, a half-wave plate 12 for controlling the polarization direction of a laser beam emitted from the continuous wave YAG laser 11, and a half-wave plate. Wave plate 1
It comprises a polarizing beam splitter 13 for splitting the laser beam emitted from 2 into two beams, and a light source 14 for illumination.
【００３３】このレーザー部１０においては、連続発振
ＹＡＧレーザー１１から出射した直線偏光のレーザー・
ビームは、二分の一波長板１２によって任意に偏光方向
が制御されて、偏光ビーム・スプリッタ１３に入射され
る。そしてさらに、偏光ビーム・スプリッタ１３によっ
て偏光方向が制御されて、単一のレーザー・ビームが二
つのレーザー・ビームに分けられる。そのうちの一方レ
ーザー・ビームは、照明用光源１４からの光と重ね合わ
されて顕微鏡照射部２０へ入射され、他方のレザー・ビ
ームは、そのまま顕微鏡照射部２０へ入射される。In the laser section 10, a linearly polarized laser beam emitted from the continuous wave YAG laser 11 is used.
The polarization direction of the beam is arbitrarily controlled by a half-wave plate 12 and is incident on a polarization beam splitter 13. Further, the polarization direction is controlled by the polarization beam splitter 13, and the single laser beam is divided into two laser beams. One of the laser beams is superimposed on the light from the illumination light source 14 and is incident on the microscope irradiation unit 20, and the other laser beam is directly incident on the microscope irradiation unit 20.
【００３４】なお、偏光ビーム・スプリッタ１３から出
射される二つのレーザー・ビームの出力比は、偏光ビー
ム・スプリッタ１３の偏光方向によって決定される。The output ratio between the two laser beams emitted from the polarization beam splitter 13 is determined by the polarization direction of the polarization beam splitter 13.
【００３５】また、連続発振ＹＡＧレーザー１１から出
射されるレーザー・ビームの出力は、適宜制御可能とさ
れている。The output of the laser beam emitted from the continuous wave YAG laser 11 can be appropriately controlled.
【００３６】次に、顕微鏡照射部２０は、上方に位置す
る第一の顕微鏡２１と下方に位置する第二の顕微鏡２２
とを備えていて、第一の顕微鏡部２１には、テレビ・カ
メラ２３が配設されている。Next, the microscope irradiating unit 20 includes a first microscope 21 located above and a second microscope 22 located below.
In the first microscope section 21, a television camera 23 is provided.
【００３７】このテレビ・カメラ２３は、連続発振ＹＡ
Ｇレーザー１１により発生される赤外線レーザーの光路
を確認するためのものであり、赤外領域において感度が
あるものとされている。The television camera 23 has a continuous oscillation YA
This is for confirming the optical path of the infrared laser generated by the G laser 11, and has sensitivity in the infrared region.
【００３８】そして、上記したように偏光ビーム・スプ
リッタ１３から出射される二つのレーザー・ビームの中
の一方のレーザー・ビームは、第一の顕微鏡２１の落射
蛍光装置の光路へ導入され、他方のレーザー・ビーム
は、照明用光源１４からの光と重ね合わされて照明用の
第二の顕微鏡２２の光路へ導かれている。Then, as described above, one of the two laser beams emitted from the polarization beam splitter 13 is introduced into the optical path of the epi-fluorescence device of the first microscope 21 and the other laser beam. The laser beam is superimposed with light from the illumination light source 14 and guided to the optical path of the second microscope 22 for illumination.
【００３９】ただし、第二の顕微鏡２２の照明用のコン
デンサ・レンズ２４は、精密な集光を行う必要があるた
めに、高精度対物レンズとされている。However, the condenser lens 24 for illumination of the second microscope 22 is a high-precision objective lens because it is necessary to perform precise light collection.
【００４０】さらに、試料容器部３０は、単離細胞をな
どの細胞を入れるための培養液Ａを収容する試料容器３
１と、マイクロ・ピペット３２と、補集容器３３とを備
えている。試料容器部３０全体は、第一の顕微鏡２１お
よび第二の顕微鏡２２を設置した基台上に配設された微
動ステージ３４に固定されている。従って、微動ステー
ジを移動することにより、第一の顕微鏡２１および第二
の顕微鏡２２から出射されるレーザー・ビームの光路上
の位置に、試料容器３１内に満たされた培養液Ａ中に入
れられた細胞を選択して位置合わせすることができるよ
うになされている。Further, the sample container section 30 contains a sample container 3 containing a culture solution A for containing cells such as isolated cells.
1, a micropipette 32, and a collection container 33. The entire sample container section 30 is fixed to a fine movement stage 34 arranged on a base on which the first microscope 21 and the second microscope 22 are installed. Therefore, by moving the fine movement stage, the laser beam is put into the culture solution A filled in the sample container 31 at a position on the optical path of the laser beam emitted from the first microscope 21 and the second microscope 22. Cells can be selected and aligned.
【００４１】また、マイクロ・ピペット３２の基端部３
２ａは真空ポンプ（図示せず）に配管してあり、この真
空ポンプを作動することによって、試料容器３１内に満
たされた培養液Ａ中に入れられた細胞を吸引固定するこ
とができる。The base end 3 of the micro pipette 32
2a is connected to a vacuum pump (not shown), and by operating this vacuum pump, cells contained in the culture solution A filled in the sample container 31 can be fixed by suction.
【００４２】一方、補集容器３３は、光を透過する材料
で作製されており、補集容器３３周辺で多少レーザー・
ビームの反射や散乱が発生しても、実用上はレーザー・
ビームによる光出力には影響が出ないように設定されて
いる。On the other hand, the collection container 33 is made of a material that transmits light, and a small amount of laser light is collected around the collection container 33.
Even if the beam is reflected or scattered, a laser
The light output by the beam is set so as not to be affected.
【００４３】次に、図２（ａ）乃至（ｄ）を参照しなが
ら、上記した細胞選別・補集装置を用いて、細胞を選別
して補集する操作の手順を示す。Next, referring to FIGS. 2A to 2D, a procedure for selecting and collecting cells using the above-described cell selection / collection apparatus will be described.
【００４４】まず、試料容器３１に満たされた培養液Ａ
中に入れられた試料細胞Ｂ1乃至Ｂ5の中の任意のひとつ
たる試料細胞Ｂ3に、連続発振ＹＡＧレーザー１１によ
り発生されて、第一の顕微鏡２１および第二の顕微鏡２
２を介して出射されるレーザー・ビームＣを照射して、
試料細胞Ｂ3を捕捉する。その後に、微動ステージ３４
を移動させて、レーザー・ビームＣによって捕捉された
試料細胞Ｂ3をマイクロ・ピペット３２の先端部３２ｂ
まで移動する。そして、真空ポンプを駆動して所定の吸
引力によって、マイクロ・ピペット３２の先端部３２ｂ
にレーザー・ビームＣに捕捉された試料細胞Ｂ3を吸引
固定する（図２（ａ））。First, the culture solution A filled in the sample container 31
A first microscope 21 and a second microscope 2 are generated by the continuous wave YAG laser 11 on any one sample cell B 3 among the sample cells B 1 to B 5 placed therein.
Irradiating a laser beam C emitted through 2;
Capturing the sample cell B 3. After that, the fine movement stage 34
To move the sample cell B 3 captured by the laser beam C to the tip 32 b of the micropipette 32.
Move up to. Then, the vacuum pump is driven and a predetermined suction force is applied to the tip 32b of the micro pipette 32.
Then, the sample cell B 3 captured by the laser beam C is fixed by suction (FIG. 2A).
【００４５】次に、第２の試料細胞として試料細胞Ｂ4
を選択し、上記と同様に、この試料細胞Ｂ4に第一の顕
微鏡２１および第二の顕微鏡２２から出射されるレーザ
ー・ビームＣを照射して、試料細胞Ｂ4を捕捉する。そ
の後に、微動ステージ３４を移動させて、レーザー・ビ
ームＣに捕捉された試料細胞Ｂ4をマイクロ・ピペット
３２の先端部３２ｂに吸引固定された試料細胞Ｂ3まで
移動して、試料細胞Ｂ3と試料細胞Ｂ4とを接触させる
（図２（ｂ））。Next, a sample cell B 4 was used as a second sample cell.
Select, as above, in the sample cell B 4 by irradiating a laser beam C emitted from the first microscope 21 and the second microscope 22, to capture the sample cell B 4. Thereafter, the fine movement stage 34 is moved to move the sample cell B 4 captured by the laser beam C to the sample cell B 3 suction-fixed to the tip 32 b of the micropipette 32, thereby moving the sample cell B 3. and contacting the sample cell B 4 (Figure 2 (b)).
【００４６】そして、レーザー・ビームＣに捕捉された
ままの状態で、試料細胞Ｂ4を一定時間の間試料細胞Ｂ3
に接触させた後に、連続発振ＹＡＧレーザー１１による
レーザーの発生を中止し、試料細胞Ｂ4のレーザー・ビ
ームＣによる捕捉を解除する。こうした試料細胞Ｂ4の
レーザー・ビームＣによる捕捉の解除の後に、試料細胞
Ｂ3と試料細胞Ｂ4との接着状態を観察する（図２
（ｃ））。[0046] Then, laser while the beam remains C trapped, while the sample cell B 3 for a predetermined time the sample cell B 4
After contacting the stops the generation of the laser by the continuous wave YAG laser 11, releases the capture by laser beams C of the sample cell B 4. After releasing the capture of the sample cell B 4 by the laser beam C, the adhesion state between the sample cell B 3 and the sample cell B 4 is observed (FIG. 2).
(C)).
【００４７】上記した試料細胞Ｂ3と試料細胞Ｂ4との接
着状態の観察に基づいて、接着が観察されたもの（ある
いは接着が観察されなかったもの）を、図２（ａ）およ
び図２（ｂ）に関して説明したと同様に、レーザー・ビ
ームＣにより捕捉して補集容器３３へ移動した後に、レ
ーザー・ビームＣによる捕捉を解除して補集容器３３内
に収容する（図２（ｄ））。Based on the observation of the adhesion state between sample cell B 3 and sample cell B 4 , a sample in which adhesion was observed (or a sample in which adhesion was not observed) was determined as shown in FIGS. As described with respect to (b), after capturing by the laser beam C and moving to the collection container 33, the capture by the laser beam C is released and stored in the collection container 33 (FIG. 2 (d)). )).
【００４８】また、試料細胞Ｂ3と試料細胞Ｂ4との接着
状態を観察する際に（図２（ｃ））、試料細胞Ｂ3と試
料細胞Ｂ4との接着が観察された場合には、必要に応じ
て当該接着に関する接着力の測定を行うようにしてもよ
い。即ち、連続発振ＹＡＧレーザー１１により発生され
るレーザー・ビームＣによって試料細胞Ｂ4を捕捉し、
その後に、微動ステージ３４を移動させて試料細胞Ｂ4
を試料細胞Ｂ3から引き離すように操作する。この際、
連続発振ＹＡＧレーザー１１の出力を調整して、試料細
胞Ｂ4を試料細胞Ｂ3から引き離すのに必要な最小光出力
を調べ、上記試料細胞の接着力を調べる（図３）。When observing the adhesion state between the sample cell B 3 and the sample cell B 4 (FIG. 2C), when the adhesion between the sample cell B 3 and the sample cell B 4 is observed, Alternatively, the measurement of the adhesive force related to the adhesion may be performed as necessary. That is, the sample cell B 4 is captured by the laser beam C generated by the continuous wave YAG laser 11,
Thereafter, the fine movement stage 34 is moved so that the sample cell B 4
The manipulated to detach from the sample cell B 3. On this occasion,
By adjusting the output of a continuous wave YAG laser 11, examine the minimum optical power required to pull the sample cell B 4 from a sample cell B 3, examine the adhesive strength of the sample cell (Figure 3).
【００４９】このように、試料細胞の接着力を調べるこ
とによる試料細胞Ｂ3と試料細胞Ｂ4との接着状態のより
詳細な観察に基づいて、上記において図２（ｄ）に関し
て説明したように、所望の試料細胞をレーザー・ビーム
Ｃにより捕捉して補集容器３３へ移動した後に、レーザ
ー・ビームＣによる捕捉を解除して補集容器３３内に収
容する。As described above, based on a more detailed observation of the adhesion state between the sample cells B 3 and B 4 by examining the adhesive force of the sample cells, as described above with reference to FIG. After the desired sample cells are captured by the laser beam C and moved to the collection container 33, the capture by the laser beam C is released and accommodated in the collection container 33.
【００５０】そして、補集容器３３内に補集した試料細
胞を試料容器３１外で用いる場合には、補集容器３３全
体を取り出すか、あるいは別途用意したマイクロ・ピペ
ットで補集容器３３内の試料細胞を吸引して取り出せば
よい。When the sample cells collected in the collection container 33 are used outside the sample container 31, the entire collection container 33 is taken out, or the inside of the collection container 33 is prepared using a separately prepared micropipette. The sample cells may be removed by suction.
【００５１】即ち、集光した光を物体に照射すると、光
の反射および屈折に伴う光圧力が物体に発生することに
なる。一般に、この光圧力は極めて微弱であるが、レー
ザーを光源とし、回折限界近くまで集光した光を用いる
と、培養液中の細胞を操作するのに十分な力が得られる
ばかりでなく、集光点付近に物体を捕捉することができ
るようになる。さらに、そのレーザー・ビームの位置を
変化させることで、前記物体を３次元的に操作すること
も可能となる。That is, when the object is irradiated with the condensed light, light pressure is generated on the object due to the reflection and refraction of the light. Generally, this light pressure is extremely weak, but using a laser as a light source and condensing light near the diffraction limit not only provides sufficient power to manipulate cells in a culture solution, but also collects light. An object can be captured near the light spot. Further, by changing the position of the laser beam, the object can be manipulated three-dimensionally.
【００５２】特に、上記した第一の顕微鏡２１および第
二の顕微鏡２２から出射されるレーザー・ビームＣのよ
うに、互いに向かい合った２本のレーザー・ビームを用
いて物体の捕捉を行うと、比較的操作が難しい鉛直方向
の移動も比較的容易に、しかも１ｍｍ以上の長い距離に
わたって行うことができる。In particular, when an object is captured using two laser beams facing each other, such as the laser beam C emitted from the first microscope 21 and the second microscope 22 described above, the comparison can be made. Vertical movement, which is difficult to perform, can be relatively easily performed over a long distance of 1 mm or more.
【００５３】さらに、このレーザー・ビームによる細胞
の捕捉力は、細胞に入射する光出力の調整で容易にかつ
精密に制御できるので、試料細胞に、障害を与えない必
要最小限の捕捉力を容易に得ることができる。Furthermore, the capturing power of the cells by the laser beam can be easily and precisely controlled by adjusting the light output incident on the cells, so that the minimum capturing power that does not impair the sample cells can be easily obtained. Can be obtained.
【００５４】また、接着状態を調べる際にはレーザー・
ビームの照射を中止することにより、細胞の接着状態に
悪影響を与える有害な振動を一切発生することなく細胞
を開放することができる。When examining the adhesion state, use a laser
By stopping the irradiation of the beam, the cells can be released without generating any harmful vibration that adversely affects the adhesion state of the cells.
【００５５】さらにまた、接着を示した試料細胞に対し
て、それを引き離すのに必要なレーザー・ビームの最低
光出力を調べることで、上記試料細胞の接着力を調べる
ことができる。これによって、試料細胞の接着状態をよ
り詳細に調べることができるので、細胞種の特定がより
精確になる。Further, by examining the minimum light output of the laser beam required to separate the sample cells showing the adhesion, the adhesive force of the sample cells can be examined. As a result, the adhesion state of the sample cells can be examined in more detail, so that the cell type can be specified more accurately.
【００５６】さらに、集光したレーザー光の照射領域
は、直径１μｍ程度の非常に狭い領域に限定できるの
で、通常の生物試料の場合においては、目的とする任意
の１個の細胞だけを選択的に捕捉することができる。ま
た、接触させる細胞の組み合わせに応じて、複数の細胞
集合体の捕捉を行うこともまた可能であるので、試料細
胞の組み合わせを単離細胞同志の一対一、単離細胞と複
数の細胞集合体の一対多、ならびに複数の細胞集合体同
志の多対多と任意に設定することができる。Furthermore, the irradiation area of the condensed laser light can be limited to a very narrow area of about 1 μm in diameter, so that in the case of a normal biological sample, only one desired cell can be selectively used. Can be captured. In addition, it is also possible to capture a plurality of cell aggregates according to the combination of cells to be brought into contact with each other. And many-to-many of a plurality of cell aggregates can be arbitrarily set.
【００５７】図４には、上記した細胞選別・補集装置を
用いて、ヒドラの内胚葉性および外胚葉性の上皮細胞の
接着特性を測定した結果が示されている。試料細胞とし
ては、単離細胞を用いた。図４中「○」により細胞の接
着が観測された組み合わせを示し、「×」により細胞の
接着が観測されなかった組み合わせを示している。FIG. 4 shows the results of measuring the adhesive properties of hydra endodermal and ectodermal epithelial cells using the above-described cell selection / collection apparatus. As sample cells, isolated cells were used. In FIG. 4, "O" indicates a combination in which cell adhesion was observed, and "X" indicates a combination in which cell adhesion was not observed.
【００５８】図４から理解されるように、明らかに同種
の細胞間のみで選択的に接着が起きていることがわか
る。従って、図４に基づいて、任意のヒドラ上皮細胞の
由来を決定し、選別・補集することができるようにな
る。As can be understood from FIG. 4, it is apparent that selective adhesion occurs only between cells of the same kind. Therefore, based on FIG. 4, it is possible to determine the origin of any hydra epithelial cells, and select and collect them.
【００５９】また、上記したヒドラの内胚葉性および外
胚葉性の上皮細胞の接着特性の測定において、接着が観
察された組み合わせについて、図３に示すように、一旦
接着を示した試料細胞に再度レーザー・ビームを照射し
て、接着部分を引き離す操作を行った。この結果、外胚
葉性のヒドラ上皮細胞は、容易に接着部分の引き離しが
できたが、内胚葉性のヒドラ上皮細胞は、レーザー・ビ
ームの光出力をいくら高めても接着部分を引き離すこと
ができなかった。In the measurement of the adhesion characteristics of the endodermal and ectodermal epithelial cells of the above-mentioned hydra, the combination in which the adhesion was observed was again applied to the sample cells which had once adhered, as shown in FIG. An operation of irradiating a laser beam and separating the bonded portion was performed. As a result, the ectodermal hydra epithelial cells could easily detach the adherent part, whereas the endodermal hydra epithelial cells could detach the adherent part no matter how much the light output of the laser beam was increased. Did not.
【００６０】即ち、接着が観察された試料細胞でも、細
胞種によってその接着力には明かな違いがあることがわ
かる。従って、試料細胞の接着力を調べることで、さら
に任意のヒドラ上皮細胞の由来をより精確に決定し、選
別・補集することができるようになる。That is, it can be seen that even in the sample cells in which the adhesion is observed, there is a clear difference in the adhesive strength depending on the cell type. Therefore, by examining the adhesive strength of the sample cells, the origin of any hydra epithelial cells can be determined more accurately, and the cells can be selected and collected.
【００６１】なお、上記実施例においては、レーザー発
生源として単一の連続発振ＹＡＧレーザーを用い、単一
のレーザー・ビームを分割して二つのレーザー・ビーム
を得たが、これに限られることなしに、二つのレーザー
発生源を備えるようにして、それぞれのレーザー発生源
からレーザー・ビームを得るようにしてもよい。In the above embodiment, a single continuous oscillation YAG laser was used as a laser source, and a single laser beam was divided to obtain two laser beams. However, the present invention is not limited to this. Alternatively, two laser sources may be provided so that a laser beam is obtained from each laser source.
【００６２】このように二つのレーザー発生源を備える
ようにすると、二つのレーザー・ビームの集光状態なら
びに光出力を各々独立して制御する場合には、図１に示
す構成よりも容易に行うことができるようになるので有
利である。When two laser sources are provided as described above, the control of the condensing state and the light output of the two laser beams can be performed more easily than the configuration shown in FIG. This is advantageous because it is possible to do so.
【００６３】また、レーザー・ビームは、連続発振ＹＡ
Ｇレーザーなどによる赤外線レーザー・ビームに限られ
ることなしに、捕捉する細胞に応じて、適宜なものを用
いて良い。The laser beam has a continuous oscillation YA
Without limitation to an infrared laser beam by a G laser or the like, an appropriate one may be used depending on the cells to be captured.
【００６４】さらに、補集容器は、図１に示すような単
体の容器でなくても、光透過材料によって、容器の一部
を仕切ることでも選択的な補集は可能である。Further, the collection container is not limited to a single container as shown in FIG. 1, but can be selectively collected by partitioning a part of the container with a light transmitting material.
【００６５】[0065]
【発明の効果】本発明は、以上説明したように構成され
ているので、以下に記載されるような効果を奏する。Since the present invention is configured as described above, it has the following effects.
【００６６】光の照射によって特定の細胞を捕捉して、
この捕捉した細胞を対象物に接触させるとともに、光の
照射を中止することにより有害な振動を一切与えること
なく細胞を開放するようにしたため、特定の細胞を選択
して対象物との接触を行うことができるとともに、細胞
を開放する際に、細胞あるいは周囲の培養液に不要な勢
いや擾乱を与えることがない。Specific cells are captured by light irradiation,
The captured cells are brought into contact with the object, and the irradiation of light is stopped to release the cells without giving any harmful vibration. When the cells are opened, unnecessary force and disturbance are not applied to the cells or the surrounding culture solution.
【００６７】また、接着を示した試料細胞に対して、そ
れを引き離すのに必要なレーザー・ビームの最低光出力
を調べることで、上記試料細胞の接着力を調べることが
できる。これによって、試料細胞の接着状態を、より詳
細に調べることができるようになる。Further, by examining the minimum light output of the laser beam required to separate the sample cells showing the adhesion, the adhesive force of the sample cells can be examined. As a result, the adhesion state of the sample cells can be examined in more detail.
【００６８】このため、細胞の接着状態を指標として、
細胞の個別選別を精確に行うことができるようになる。For this reason, the state of cell adhesion is used as an index.
The individual sorting of cells can be performed accurately.
【００６９】しかも、個別選別の対象を単離した個々の
細胞間の一対一、単離した個々の細胞と複数の細胞集合
体との一対多、あるいは複数の細胞集合体間の多対多と
いうように、適宜選択することができるので、接着特性
に応じた細胞選別を容易に行うことができるようにな
る。Furthermore, one-to-one between the individual cells from which the objects of individual selection are isolated, one-to-many between the isolated individual cells and a plurality of cell aggregates, or many-to-many among the plurality of cell aggregates. In addition, since it can be appropriately selected, cell sorting according to the adhesive property can be easily performed.
【図１】本発明による細胞選別方法および細胞補集方法
を実施するための細胞選別・補集装置の構成説明図であ
る。FIG. 1 is a configuration explanatory view of a cell sorting / collecting apparatus for carrying out a cell sorting method and a cell collecting method according to the present invention.
【図２】図２（ａ）乃至図２（ｄ）は、本発明による細
胞選別方法および細胞補集方法の操作手順を示す説明図
である。FIGS. 2 (a) to 2 (d) are explanatory diagrams showing operation procedures of a cell sorting method and a cell collection method according to the present invention.
【図３】試料細胞の接着力を調べる操作手順を示す説明
図である。FIG. 3 is an explanatory diagram showing an operation procedure for examining the adhesive force of a sample cell.
【図４】本発明による細胞選別方法によって得られた単
離細胞の選択的な接着状態の一例を示す図表である。FIG. 4 is a table showing an example of a selective adhesion state of isolated cells obtained by the cell sorting method according to the present invention.
１０ レーザー部 １１ 連続発振ＹＡＧレーザー １２ 二分の一波長板 １３ 偏光ビーム・スプリッタ １４ 照明用光源 ２０ 顕微鏡照射部 ２１ 第一の顕微鏡 ２２ 第二の顕微鏡 ２３ テレビ・カメラ ２４ コンデンサ・レンズ ３０ 試料容器部 ３１ 試料容器 ３２ マイクロ・ピペット ３３ 補集容器 ３４ 微動ステージ Ａ 培養液 Ｂ1 試料細胞 Ｂ2 試料細胞 Ｂ3 試料細胞 Ｂ4 試料細胞 Ｂ5 試料細胞 Ｃ レーザー・ビームDESCRIPTION OF SYMBOLS 10 Laser part 11 Continuous oscillation YAG laser 12 Half wave plate 13 Polarized beam splitter 14 Light source for illumination 20 Microscope irradiation part 21 First microscope 22 Second microscope 23 Television camera 24 Condenser lens 30 Sample container part 31 Sample container 32 Micro-pipette 33 Collection container 34 Fine movement stage A Culture solution B 1 sample cell B 2 sample cell B 3 sample cell B 4 sample cell B 5 sample cell C Laser beam
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｇ０１Ｎ 1/04 Ｇ０１Ｎ 1/04 Ｈ 1/28 15/14 Ｃ 15/14 Ｇ０２Ｂ 21/32 Ｇ０２Ｂ 21/32 Ｇ０１Ｎ 1/28 Ｊ ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification code Agency reference number FI Technical indication location G01N 1/04 G01N 1/04 H 1/28 15/14 C 15/14 G02B 21/32 G02B 21 / 32 G01N 1/28 J
Claims (6)
に、前記接触による前記細胞と前記対象物との接着状態
に基づいて、前記細胞の選別を行う細胞選別方法におい
て、 前記細胞に光を照射して捕捉し、前記光を前記対象物に
対して相対的に移動することにより、前記光により捕捉
した前記細胞を前記対象物方向へ移動して、前記細胞と
前記対象物とを接触させ、前記細胞と前記対象物との接
触の後に前記光の照射を中止して、前記光により捕捉し
た前記細胞の前記光による捕捉を解除し、前記接触によ
る前記細胞と前記対象物との接着状態に基づいて、前記
細胞の選別を行うことを特徴とする細胞選別方法。1. A cell sorting method in which, after contacting an arbitrary cell with another object, the cell is sorted based on an adhesion state between the cell and the object due to the contact, By irradiating and capturing light, by moving the light relative to the object, the cells captured by the light are moved in the direction of the object, and the cells and the object are Contact, stop the irradiation of the light after the contact between the cells and the object, release the capture of the cells captured by the light by the light, the contact between the cells and the object by the contact A cell sorting method, wherein the cells are sorted based on an adhesion state.
に、前記接触による前記細胞と前記対象物との接着状態
に基づいて、前記細胞の選別を行う細胞選別方法におい
て、 前記細胞に光を照射して捕捉し、前記光を前記対象物に
対して相対的に移動することにより、前記光により捕捉
した前記細胞を前記対象物方向へ移動して、前記細胞と
前記対象物とを接触させ、前記細胞と前記対象物との接
触の後に前記光の照射を中止して、前記光により捕捉し
た前記細胞の前記光による捕捉を解除したとき、前記接
触により前記細胞と前記対象物とが接着した場合に選択
的に、前記細胞に光を照射して捕捉し、前記光を前記対
象物に対して相対的に移動することにより、前記光によ
り捕捉した前記細胞に対して前記対象物から引き離す方
向に力を加え、前記接触による前記細胞と前記対象物と
の接着状態に基づいて、前記細胞の選別を行うことを特
徴とする細胞選別方法。2. A cell sorting method for sorting cells based on the state of adhesion between the cells and the object due to the contact after contacting an arbitrary cell with another object. By irradiating and capturing light, by moving the light relative to the object, the cells captured by the light are moved in the direction of the object, and the cells and the object are When the contact, the irradiation of the light is stopped after the contact between the cell and the object, when the capture of the cell captured by the light is released by the light, the cell and the object by the contact Selectively adhered to the cells by irradiating the cells with light, and moving the light relative to the objects, whereby the objects captured by the light Force in the direction away from Based on the state of adhesion between the cells and the object by said contact, cell sorting method and performing selection of said cell.
集合体であり、前記対象物が他の単離細胞あるいは他の
複数の細胞集合体である請求項１または２のいずれか１
項に記載の細胞選別方法。3. The cell according to claim 1, wherein the cell is an isolated cell or a plurality of cell aggregates, and the object is another isolated cell or another plurality of cell aggregates.
Item 4. The cell sorting method according to item 1.
に、前記接触による前記細胞と前記対象物との接着状態
に基づいて、前記細胞の選別を行い、前記選別した細胞
を任意の場所に補集する細胞補集方法において、 前記細胞に光を照射して捕捉し、前記光を前記対象物に
対して相対的に移動することにより、前記光により捕捉
した前記細胞を前記対象物方向へ移動して、前記細胞と
前記対象物とを接触させ、前記細胞と前記対象物との接
触の後に前記光の照射を中止して、前記光により捕捉し
た前記細胞の前記光による捕捉を解除し、前記接触によ
る前記細胞と前記対象物との接着状態に基づいて、前記
細胞の選別を行い、さらに前記選別した細胞に光を照射
して捕捉し、前記光により捕捉した前記選別した細胞を
任意の場所に移動した後に、前記光の照射を中止して、
前記光により捕捉した前記選別した細胞の前記光による
捕捉を解除し、前記選別した細胞を前記任意の場所に補
集することを特徴とする細胞補集方法。4. After contacting an arbitrary cell with another object, the cells are sorted based on an adhesion state between the cell and the object due to the contact, and the selected cell is sorted into an arbitrary cell. In the cell collection method of collecting cells at a location, the cells are irradiated with light and captured, and the light is moved relative to the object, so that the cells captured by the light are captured by the object. Moving in the direction, contact the cell and the object, stop the irradiation of the light after the contact between the cell and the object, capture the cells captured by the light by the light. Release, based on the state of adhesion between the cell and the object by the contact, sorting the cells, further irradiating the selected cells with light and capturing, the selected cells captured by the light After moving to any place , Discontinue irradiation of the light,
A cell collection method, comprising: releasing the selected cells captured by the light from being captured by the light, and collecting the selected cells at the arbitrary location.
に、前記接触による前記細胞と前記対象物との接着状態
に基づいて、前記細胞の選別を行い、前記選別した細胞
を任意の場所に補集する細胞補集方法において、 前記細胞に光を照射して捕捉し、前記光を前記対象物に
対して相対的に移動することにより、前記光により捕捉
した前記細胞を前記対象物方向へ移動して、前記細胞と
前記対象物とを接触させ、前記細胞と前記対象物との接
触の後に前記光の照射を中止して、前記光により捕捉し
た前記細胞の前記光による捕捉を解除したとき、前記接
触により前記細胞と前記対象物とが接着した場合に選択
的に、前記細胞に光を照射して捕捉し、前記光を前記対
象物に対して相対的に移動することにより、前記光によ
り捕捉した前記細胞に対して前記対象物から引き離す方
向に力を加え、前記接触による前記細胞と前記対象物と
の接着状態に基づいて、前記細胞の選別を行い、さらに
前記選別した細胞に光を照射して捕捉し、前記光により
捕捉した前記選別した細胞を任意の場所に移動した後
に、前記光の照射を中止して、前記光により捕捉した前
記選別した細胞の前記光による捕捉を解除し、前記選別
した細胞を前記任意の場所に補集することを特徴とする
細胞補集方法。5. After contacting an arbitrary cell with another object, the cells are sorted based on the state of adhesion between the cell and the object due to the contact, and the selected cells are sorted into an arbitrary cell. In the cell collection method of collecting cells at a location, the cells are irradiated with light and captured, and the light is moved relative to the object, so that the cells captured by the light are captured by the object. Moving in the direction, contact the cell and the object, stop the irradiation of the light after the contact between the cell and the object, capture the cells captured by the light by the light. When released, if the cell and the object adhere to each other due to the contact, selectively irradiate and capture the cell with light, and move the light relative to the object. The cells captured by the light Applying force in a direction to separate from the object, based on the state of adhesion between the cell and the object by the contact, sorting the cells, further irradiating the selected cells with light, capturing, After moving the selected cells captured by the light to an arbitrary location, the irradiation of the light is stopped, the capture of the selected cells captured by the light by the light is released, and the selected cells are removed. A method for collecting cells, wherein the cells are collected at the arbitrary place.
集合体であり、前記対象物が他の単離細胞あるいは他の
複数の細胞集合体である請求項４または５のいずれか１
項に記載の細胞補集方法。6. The cell according to claim 4, wherein the cell is an isolated cell or a plurality of cell aggregates, and the object is another isolated cell or another plurality of cell aggregates.
Item 4. The cell collection method according to item 1.
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-
1994
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