JP2024512478A - Ｂリンパ球特異的アマトキシン抗体コンジュゲート - Google Patents

Ｂリンパ球特異的アマトキシン抗体コンジュゲート Download PDF

Info

Publication number
JP2024512478A
JP2024512478A JP2023557076A JP2023557076A JP2024512478A JP 2024512478 A JP2024512478 A JP 2024512478A JP 2023557076 A JP2023557076 A JP 2023557076A JP 2023557076 A JP2023557076 A JP 2023557076A JP 2024512478 A JP2024512478 A JP 2024512478A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antibody
amino acid
conjugate
seq
acid sequence
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2023557076A
Other languages
English (en)
Inventor
トルシュテン ヘヒラー
ミヒャエル クルケ
アンドレアス パール
Original Assignee
ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング filed Critical ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング
Publication of JP2024512478A publication Critical patent/JP2024512478A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6817—Toxins
    • A61K47/6831—Fungal toxins, e.g. alpha sarcine, mitogillin, zinniol or restrictocin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6875—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin
    • A61K47/6877—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody being a hybrid immunoglobulin the antibody being an immunoglobulin containing regions, domains or residues from different species
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]

Abstract

本出願は、アマトキシン、標的がＣＤ３７である標的結合部分、すなわちＣＤ３７結合部分、および任意選択的に、前記アマトキシンと前記ＣＤ３７結合部分を連結するリンカーを含むコンジュゲートに関する。本発明はさらに、前記コンジュゲートの合成に関する。さらに、本発明は、免疫細胞、特にＢ細胞および／またはリンパ腫に関連する疾患および／または悪性腫瘍の治療に使用するための、前記コンジュゲートを含む医薬組成物に関する（図１）。

Description

本出願は、アマトキシン、標的がＣＤ３７である標的結合部分、すなわちＣＤ３７結合部分、および任意選択的に、前記アマトキシンと前記ＣＤ３７結合部分を連結するリンカーを含むコンジュゲートに関する。本発明はさらに、前記コンジュゲートの合成に関する。さらに、本発明は、免疫細胞、特にＢ細胞および／またはリンパ腫に関連する疾患および／または悪性腫瘍の治療に使用するための、前記コンジュゲートを含む医薬組成物に関する。
白血球細胞表面タンパク質ＣＤ３７は、「テトラスパニン」スーパーファミリーまたは膜貫通４スーパーファミリーのメンバーであり、４つの保存された膜貫通ドメインが存在することが特徴である。テトラスパニンファミリーメンバーは、細胞増殖、生存、接着、細胞間コミュニケーション、トラフィッキング、エクソソームを介した細胞間コミュニケーション、腫瘍形成、転移、免疫応答の制御など幅広い生命現象に関与する、シグナル伝達の「分子促進因子」と考えられている膜タンパク質である。また、テトラスパニンメンバーは、細胞運動、発生と分化、活性化、増殖、移動、腫瘍浸潤など、幅広い細胞プロセスにおいて機能的役割を持つことが報告されている（Ｈｅｍｌｅｒ ２００１； Ｘｕ－Ｍｏｎｅｔｔｅ ｅｔ ａｌ．２０１６）。
テトラスパニンタンパク質ファミリーのメンバーは、細胞内のＮ末端とＣ末端、２つの細胞外ドメイン（ＥＣ１とＥＣ２）、そして特に４つの膜貫通ドメインを持つ（図２）。テトラスパニンの構造構成は生物種間で高度に保存されており、ＥＣ２ドメインの高度に保存された「ＣＣＧ」モチーフには４つ以上のシステイン残基がある。ヒトでは少なくとも３３のテトラスパニンが同定されている（Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８）。
テトラスパニンは、パターン認識受容体（ＰＲＲ）や主要組織適合性複合体クラスＩＩ（ＭＨＣ－ＩＩ）のような膜受容体、接着タンパク質、シグナル伝達分子などを統合する「テトラスパニン富化マイクロドメイン（ＴＥＭ）」あるいは「テトラスパニン・ウェブ」と呼ばれる特殊な膜プラットフォームを組織している。重要なことは、テトラスパニンは、膜に結合しているパートナーの機能を調節することによって、免疫反応のさまざまな段階を制御しているということである。いくつかのテトラスパニンは、免疫レセプターの活性化閾値を正または負に制御することができる。また、接着分子の表面レベルや空間的配置、それに続く細胞内シグナル伝達を制御することにより、ＡＰＣの移動の際にも役割を果たしている。最後に、テトラスパニンは抗原プロセッシングに関与し、Ｔ細胞の共刺激とＭＨＣ－ＩＩ依存性抗原提示の制御を通じて、ナイーブＴ細胞のプライミングに重要である（Ｓａｉｚ ＭＬｅｔ ａｌ．２０１８； Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８）。
ＣＤ３７（テトラスパニンＴＳＰＡＮ２６）の発現は免疫系の細胞に限られており、正常細胞、特に悪性の成熟Ｂ細胞で最も多く、形質細胞では低下している（Ｈｅｍｌｅｒ ２００１）。ＣＤ３７はプレＢ細胞から末梢成熟Ｂ細胞の段階ではＢ細胞に高発現するが、初期の前駆細胞や終末分化した形質細胞には発現しない（Ｓｃｈｗａｒｔｚ－Ａｌｂｉｅｚら１９８８）。Ｔ細胞や骨髄系細胞では発現が低い。
Ｂ細胞は、抗原の提示や多様な抗体、炎症性サイトカイン、共刺激因子の産生を通じて免疫反応を促進する。Ｂ細胞はまた、ＩＬ－１０、ＩＬ－３５、ＴＧＦβ１の産生、制御性Ｔ細胞の誘導、自己抗原のクリアランスなど、様々なメカニズムを通して免疫反応を抑制することができる。多くの細胞表面分子がＢ細胞の発生と機能に関与している。テトラスパニンはそのような重要な分子ファミリーの一つである（Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８）。
ＣＤ３７は細胞表面の糖タンパク質で、他の膜貫通型４スーパーファミリータンパク質、Ｂ細胞上の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）クラスＩＩ分子、インテグリンと複合体を形成することが知られている； ＭＨＣ－ＩＩはプロフェッショナルな抗原提示細胞（ＡＰＣ）に発現し、ＡＰＣの表面でＣＤ９、ＣＤ３７、ＣＤ５３、ＣＤ８１、ＣＤ８２を含むいくつかのテトラスパニンと会合する。ＣＤ３７はＭＨＣ－ＩＩのクラスタリングを負に制御し、ＣＤ４+およびＣＤ８+Ｔ細胞へのＭＨＣ依存性抗原提示を負に制御している（Ｓａｉｚｅｔ ａｌ．２０１８）。ＣＤ３７は膜型Ｃ－型レクチン受容体Ｄｅｃｔｉｎ－１の表面発現を安定化し、その内在化を阻害し、Ｄｅｃｔｉｎ－１を介したＴＮＦ－αとＩＬ－６の産生を阻害することが示されている。ＣＤ３７に結合すると記載されている他のタンパク質には、ＡＣＰＡ、ＰＵＲＬ、ＹＢＴＯ、ＰＧ８７８６ ０８４、ＣＤ１９、ＣＤ５３、ＳＹＫ、ＫＡＲＳ、ＰＴＰＮ６、ＬＹＮ、ＰＩＫ３ＣＤ、ＰＩＫ３ＣＧ、ＣＤ８１、ＣＲ２がある（Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８）。
交互スプライシングの結果、ＣＤ３７の異なるアイソフォームをコードする複数の転写バリアントが生じる。ＣＤ３７は体液性免疫応答と細胞性免疫応答の両方の調節と制御に関与している。
ＣＤ３７はＴ細胞－Ｂ細胞相互作用、免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）／ＩｇＡの産生、免疫応答と寛容のバランスに重要である。マウスでＣＤ３７を破壊すると、Ｂ細胞のＩｇＧ産生は比較的微妙に変化し、Ｔ細胞依存性免疫応答の欠損は、特に準最適な刺激条件下で顕著であった。よって、ＣＤ３７はＴ細胞－Ｂ細胞相互作用だけでなく、Ｂ細胞の体液性応答も制御していると結論づけられた（Ｋｎｏｂｅｌｏｃｈｅｔ ａｌ．２０００）。マウスのＣＤ３７欠損はＢ細胞リンパ腫の自然発症につながる。Ｃｄ３７－／－マウスモデルおよびびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）患者で観察されたように、ＣＤ３７の欠損およびＣＤ３７とサイトカインシグナル伝達抑制因子３（ＳＯＣＳ３）の相互作用は、インターロイキン６（ＩＬ６）－ＡＫＴ－ＳＴＡＴ３経路の構成的活性化、胚中心由来のリンパ腫の自然発症、およびより不良な臨床転帰をもたらす（Ｘｕ－Ｍｏｎｅｔｔｅら ２０１６）。
Ｂ細胞では、ＣＤ３７は増殖と生存に深く関与している。ＣＤ３７は、α（４）β（１）インテグリンの移動とクラスター化を制御することによって、α（４）β（１）インテグリンの細胞膜分布を制御しており、これはＡｋｔ生存経路の活性化に必要なステップである。マウスでＣＤ３７をノックアウトすると、リンパ系臓器でＩｇＧを分泌する形質細胞の数が減少することが報告されているが、これはおそらく、ＶＣＡＭ－１とα（４）β（１）インテグリンとの結合が障害され、Ａｋｔ生存経路が障害され、生殖細胞中心で形質細胞のアポトーシスが増加するためであろう。最近の研究では、ＣＤ３７をノックアウトしたマウスは、サイトカインシグナル伝達抑制因子３の制御を失い、ＩＬ６経路の構成的活性化によってＢ細胞リンパ腫を進行させる可能性があった。ＣＤ３７はＢ細胞が生き残り、長期にわたる免疫防御を提供するために不可欠であるが、ＣＤ３７がチロシンリン酸化され、シグナル伝達因子と結合すると、アポトーシスをもたらす一連の事象を引き起こす可能性があることも判明している。この研究ではまた、ＣＤ３７はそのＮ末端ドメインを介して ＳＨＰ１依存性の死を媒介するのに対し、ＰＩ３Ｋ依存性の生存を媒介することによってＣ末端ドメインを介して死のシグナルに拮抗することも明らかになった（Ｚｏｕ ｅｔ ａｌ．２０１８）。
Ｂ細胞の増殖と生存における役割に加えて、ＣＤ３７はＩｇＧ１の産生を促進する一方で、ｉｎ ｖｉｖｏではＩｇＡ免疫応答を阻害する。ＣＤ３７の欠損は血清ＩｇＧ１レベルの低下を引き起こし、準最適な共刺激条件下でＴ細胞依存性抗原に対するＢ細胞の応答を変化させる。
Ｔ細胞では、テトラスパニンはＴ細胞受容体（ＴＣＲ）誘導性の活性化と増殖に関与している。ペプチドとＭＨＣの相互作用はＴＣＲを活性化し、ＳｒｃキナーゼＦｙｎとＬｃｋによる下流のシグナル伝達カスケードを開始する。Ｌｃｋはその後、Ｔ細胞の活性化と増殖に関与する機能性タンパク質を活性化する。ＬｃｋとＣＤ４／ＣＤ８との相互作用は、この経路において重要な役割を果たす。ＣＤ４がテトラスパニンＣＤ８１／８２と結合すると、ＬｃｋはＴＣＲシグナル伝達経路から隔離される。ＴＣＲ シグナル伝達の初期イベントに影響を与えることで、Ｔ細胞増殖におけるＣＤ３７の制御的役割がＶａｎ Ｓｐｒｉｅｌら（２００４）によって観察されている。ＣＤ３７はＬｃｋキナーゼのリン酸化を阻害し、ＴＣＲシグナル伝達を阻害することがわかっている。ＣＤ３７は、ＣＤ４－ＬｃｋのＴＣＲシグナル関連マイクロドメインへの分布動態に影響を与えることによって、ＴＣＲシグナル伝達のほとんどに関与している。このように、テトラスパニンは、Ｌｃｋ動員の近位でＴＣＲ－ＣＤ４／ＣＤ８カスケードに影響を与えることにより、Ｔ細胞の生物学的プロセスを制御している（Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８）。
Ｂ細胞悪性腫瘍でＣＤ３７発現の増加が認められた（Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８）。Ｂ細胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）やＢ細胞性慢性リンパ球性白血病（Ｂ－ＣＬＬ）など、ほとんどのＢ細胞性悪性腫瘍がＣＤ３７を発現している。ＣＤ３７はバーキットリンパ腫細胞株の６０％で様々なレベルで検出された。腫瘍性Ｂ細胞におけるＣＤ３７発現は、対応するＢ細胞の成熟段階と相関しているが、Ｂ－ＣＬＬは正常な成熟循環Ｂリンパ球よりもＣＤ３７レベルが低い（Ｘｕ－Ｍｏｎｅｔｔｅｅｔ ａｌ ２０１６）。Ｂｅｌｏｖら（２００１）は、免疫表現型分類に抗体マイクロアレイを利用することで、ＣＤ３７が悪性ＣＬＬ細胞（ＣＤ３７高発現）と正常末梢血リンパ球（ＣＤ３７低発現）の良好な識別因子であることを報告している。
ＣＤ３７は１９８６年にマウスモノクローナル抗体ＭＢ－１によって初めて報告され、特徴づけられた（Ｌｉｎｋｅｔ ａｌ、１９８６）。これは放射線治療にも使用されている。
ＣＤ３７を高発現しているＣＬＬやＮＨＬの患者では、モノクローナル抗体（例えばオトレルツズマブ）によってＣＤ３７を標的とすることができる。抗ＣＤ３７抗体との交差ライゲーションにより、ＣＤ３７は死シグナル（Ｓｒｃ相同領域２ドメイン含有ホスファターゼ－１（ＳＨＰ１）、ＬＹＮ、およびホスファチジルイノシトール３キナーゼγ（ＰＩ３Ｋγ）に関連するＮ末端ドメインからのシグナル）と、対立する生存シグナル（ｐ８５とＰＩ３Ｋδ）を動員するＣ末端ドメインからのシグナル）の両方を伝達する（Ｌａｐａｌｏｍｂｅｌｌａｅｔ ａｌ．２０１２； Ｘｕ－Ｍｏｎｅｔｔｅｅｔ ａｌ．２０１６）。
ＣＤ３７指向性抗体治療薬の候補は、これまでに限られた数の患者で評価されている。このような薬剤は、アポトーシス誘導、抗体依存性細胞性細胞傷害性、抗体依存性細胞貪食性、補体依存性細胞傷害性など、複数のメカニズムを通じて抗腫瘍細胞傷害効果を発揮する可能性がある。ＣＬＬ患者を対象とした抗体ＢＩ ８３６８２６を用いたＳｔｉｌｇｅｎｂａｕｅｒら （２０１９）による最近の臨床研究により、ＣＤ３７が有望な治療標的であることが確認された。ＣＤ３７結合小モジュール免疫医薬品タンパク質も、Ｂ細胞悪性腫瘍の治療薬として臨床試験が進められている（Ｚｈａｏｅｔ ａｌ．２００７）。
抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）は、細胞傷害性薬剤を腫瘍標的抗体に共有結合させ、その抗腫瘍特異性と効力を高めるために開発されてきた。このアプローチは、ＡＤＣの結合、内部移行、細胞内ペイロード放出を通じて、標的抗原を発現している細胞に細胞傷害性化合物を特異的に送達できるように設計されている。
チオエーテルリンカーであるＮ－スクシンイミジル－４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボキシレート（ＳＭＣＣ）を介して、強力な抗微小管剤であるメイタンシノイドＤＭ１に結合された、Ｂ細胞株に対する強力なｉｎ ｖｉｔｒｏ活性を有する抗ＣＤ３７抗体からなるＡＤＣが記載されている；当該ＡＤＣ（ＩＭＧＮ５２９）は、正常およびＣＬＬ Ｂ細胞の強力かつ特異的な枯渇をもたらした（Ｄｅｃｋｅｒｔｅｔ ａｌ．２０１３）．移植可能なｈＣＤ３７+白血病を発症するマウスＣＬＬモデルにおいて、ＡＤＣ ＩＭＧＮ５２９は末梢血白血病を消失させ、全生存期間を改善した。対照的に、ＩＭＧＮ５２９の抗体成分のみでは病勢を変えることはできなかった（Ｂｅｃｋｗｉｔｈ ＫＡｅｔ ａｌ．２０１４）。
これらのデータは、ＣＤ３７指向性治療が有効である可能性を示唆している。しかし、効力と有効性のプロフィールを改善した薬剤の必要性は依然として高い。
慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）では、低分子のブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）阻害剤イブルチニブによる治療が標準治療となっている。ブルトン型チロシンキナーゼ（ＢＴＫ）を介したＢ細胞受容体（ＢＣＲ）シグナルの慢性的な活性化は、Ｂ細胞リンパ腫の病勢進行を促す主要なメカニズムのひとつであると広く考えられている。イブルチニブは、臨床試験においてＣＬＬに顕著な有効性を示し、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）により、あらゆる治療ラインのＣＬＬ患者に対する治療薬として初めて承認されたＢＴＫ阻害剤である。その使用は、再発ＣＬＬ患者だけでなく、多くのフロントラインの高リスク患者や高齢患者に対する標準治療として急速に普及している（Ｂｒｏｗｎ ２０１８）。
しかし、ＢＴＫ標的化薬イブルチニブは有望な臨床効果を示しているものの、一次耐性または後天性耐性の存在は一般的であり、しばしば悲惨な臨床転帰をもたらす。イブルチニブ療法に対する耐性は、遺伝子変異、代替生存経路のアップレギュレーション、またはイブルチニブ療法では標的とされないその他の未知の因子によって媒介される可能性がある（Ｇｅｏｒｇｅ Ｂｅｔ ａｌ．２０２０； Ｆｕｈｒｍａｎｅｔ ａｌ．２０１４； Ｐｕｌａ Ｂｅｔ ａｌ．２０１９）。
アマトキシンと腫瘍抗原特異的抗体、抗体断片または誘導体を含む抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）が記載されている（ＷＯ２０１０／１１５６２９Ａ２、ＷＯ２０１６／１４２０４９Ａ１、ＷＯ２０１７／１４９０７７Ａ１）。
本発明者たちは、驚くべきことに、予想外に、本発明によるアマトキシンベースのコンジュゲート、特にＣＤ３７特異的抗体、または抗体断片もしくは抗体誘導体、抗ＣＤ３７抗体、抗体断片または抗体誘導体をアマトキシンに連結する非切断可能または切断可能リンカーを含む、本発明によるアマトキシンベースのコンジュゲートはイブルチニブ耐性を克服し、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで、ＣＤ３７陽性イブルチニブ耐性標的細胞に対して顕著な細胞傷害効果を発揮することができたことを見出した。
従って、先行技術に鑑みて、ＣＤ３７に結合する標的結合部分、少なくとも１つのアマトキシン、および任意選択で前記標的結合部分と前記少なくとも１つの毒素とを連結する少なくとも１つのリンカーを含んでなり、本願明細書に記載されているように標的細胞において細胞傷害効果を媒介するコンジュゲートを提供することが本発明の１つの目的であった。
ＣＤ３７に結合する標的結合部分、少なくとも１つのアマトキシン、および任意選択で少なくとも１つのリンカーを含むコンジュゲートを提供することは、本発明のさらなる目的の１つであり、ここで、前記標的結合部分は、ＣＤ３７に特異的に結合する抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体、または抗体様タンパク質である。
このようなコンジュゲートを含む医薬組成物を提供することは、本発明のさらなる目的の一つであった。
癌の治療方法に使用する化合物を提供することは、本発明のさらなる目的の一つであった。
Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療に使用するために、特に、非ホジキンリンパ腫、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、慢性リンパ性白血病、リヒター症候群、関節リウマチ、多発血管炎性および顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、尋常性天疱瘡の治療に使用するために、ＣＤ３７に結合する標的結合部分、少なくとも１つのアマトキシン、および任意選択で少なくとも１つのリンカーを含むコンジュゲートを提供することは、本発明のさらなる目的の１つであった。
これらおよび他の目的は、本発明の独立した請求項に記載の方法および手段によって達成される。従属請求項は、具体的な実施形態に関連する。
本発明及びその特徴の一般的な利点を以下に詳細に説明する。
様々なアマトキシンのマーカッシュ構造。太字の数字（１～８）は、アマトキシンを形成する８つのアミノ酸の標準的番号付与を指定する。アミノ酸１、３および４中の原子の標準的指定も示される（それぞれ、ギリシャ文字α～γ、ギリシャ文字α～δ、および１’～７’の数字）。 テトラスパニンタンパク質の模式図。テトラスパニンは、４つの膜貫通ドメイン（ＴＭ１－４）、細胞内のＮ末端とＣ末端、２つの細胞外ドメイン（ＥＣ１とＥＣ２）を含む。ＣＣＧモチーフは、システイン－システイン－グリシンと２つのジスルフィド結合（細線）によって形成されている（Ｚｏｕｅｔ ａｌ．２０１８より）。 蛍光活性化細胞選別（ＦＡＣＳ）分析による、抗ＣＤ３７モノクローナル抗体ｃｈＨＨ１－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃと、Ｂ細胞白血病（Ｂ－ＣＬＬ）細胞株ＭＥＣ－１およびＭＥＣ－２、ヒトバーキットリンパ腫細胞株ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓのそれぞれ、ならびにヒトＢ細胞前駆体白血病細胞株Ｎａｌｍ－６との結合。 （Ａ）ＣＤ３７陽性ＭＥＣ－１細胞、（Ｂ）～（Ｇ）ＣＤ３７陽性ＭＥＣ－２細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性試験の結果。異なる抗ＣＤ３７抗体標的化アマトキシンコンジュゲートを用いて９６時間培養後にＣＴＧアッセイを行った。 （Ａ）～（Ｄ）ＷＳＴ－１細胞増殖アッセイにおいて、異なる抗ＣＤ３７抗体標的化アマトキシンコンジュゲートを用いたＣＤ３７陽性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性試験の結果。 異なる抗ＣＤ３７抗体標的化アマトキシンコンジュゲート（（Ａ）～（Ｅ））を用いたＣＤ３７陽性Ｒａｊｉ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害性試験結果。標記アマトキシンコンジュゲートと９６時間インキュベートした後にＣＴＧアッセイを行った。 異なる抗ＣＤ３７抗体標的化アマトキシンコンジュゲート（（Ａ）～（Ｄ））を用いたＣＤ３７陽性Ｒａｍｏｓ細胞に対するｉｎ ｖｉｔｒｏでの細胞傷害性試験結果。標記アマトキシンコンジュゲートと９６時間インキュベートした後にＣＴＧアッセイを行った。 各種抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートを用いた、播種性ＭＥＣ２腫瘍異種移植モデルにおける１８０日間の処置の、ｉｎ ｖｉｖｏ 細胞傷害有効性試験の結果。各治療群の体重を示す。 標記の様々な抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートを用いた、播種性ＭＥＣ２腫瘍異種移植モデルにおける１８０日間の処置の、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害有効性試験結果：生存率。 各種抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートを用いた、播種性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ腫瘍異種移植モデルにおける１３０日間の処置の、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害有効性試験の結果。各治療群の体重を示す。 各種抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートを用いた、播種性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ腫瘍異種移植モデルにおける１２５日間の処置の、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害有効性試験の結果。バイオルミネッセンス（バックグラウンド正規化）。 各種抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートを用いた、播種性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ腫瘍異種移植モデルにおける１３０日間の処置の、ｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害有効性試験の結果。生存率。 カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を用いた探索的毒性試験の結果。（Ａ）、（Ｄ）アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）血清レベル（それぞれ平均値と中央値）；（Ｂ）、（Ｅ）アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）血清レベル（それぞれ平均値と中央値）；（Ｃ）、（Ｅ）乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）血清レベル（それぞれ平均値と中央値）。異なる抗ＣＤ３７抗体－アマトキシンコンジュゲートを用いて、各群に示されたように用量を漸増した。 カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を用いた探索的毒性試験の結果。標記の異なる抗ＣＤ３７抗体－アマトキシンコンジュゲートを使用した、（Ａ）－（Ｃ）アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）血清レベル；（Ｄ）－（Ｆ）アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）血清レベル；および（Ｇ）－（Ｉ）乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）血清レベル。十字は安楽死または死亡した動物を示す。 カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を用いた探索的毒性試験の結果。標記の１．０～２０ｍｇ／ｋｇの用量の非特異的抗体－アマトキシンコンジュゲートを用いた、２００日以上にわたる、（Ａ）アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）血清レベル、（Ｂ）アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）血清レベル、（Ｃ）乳酸デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）血清レベル。 リヒター症候群患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデル（ＲＳ１３１６）に本発明の抗ＣＤ３７抗体－アマトキシンコンジュゲートを投与した結果。（Ａ）本発明のアマトキシンコンジュゲートで処置した動物の７５日後までの生存率プロット、（Ｂ）標記のアマトキシンコンジュゲートによる単回処置後の、腎臓（ｋｉｄ）、肝臓（ｌｉｖ）、肺、骨髄（ＢＭ）、末梢血（ＰＢ）、脳（ｂｒａ）および脾臓（Ｓｐｌ）における残存ＲＳ細胞数（ＣＤ４５＋、ＣＤ１９＋、ＣＤ２０＋陽性細胞）。 フローサイトメトリーによるヒトおよびカニクイザル末梢血単核球（ＰＢＭＣ）と抗ＣＤ３７ ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ抗体の結合評価。（Ａ）左パネル：対照：ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆａｂのみで染色したヒトＰＢＭＣ； 右パネル：抗ＣＤ３７ ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃおよびヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆａｂ二次抗体で染色したヒトＰＢＭＣ。（Ｂ）左のパネル：対照：ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆａｂのみで染色したマウスＰＢＭＣ； 右パネル：マウス抗ヒトＣＤ３７抗体とヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆ（ａｂ）２－断片二次抗体で染色したヒトＰＢＭＣ。（Ｃ）左のパネル： ヤギ抗マウスＩｇＧ （Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆ（ａｂ）２－断片のみで染色したカニクイザルＰＢＭＣ、右パネル：抗ＣＤ３７ ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃおよびヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆａｂ二次抗体で染色したカニクイザルＰＢＭＣ； （Ｄ） 左パネル：ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆ（ａｂ）２－断片のみで染色したカニクイザルＰＢＭＣ、右パネル：マウス抗ヒトＣＤ３７抗体およびヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆ（ａｂ）２－断片を二次抗体として染色したカニクイザルＰＢＭＣ。 本発明のコンジュゲートの細胞傷害性。本発明のコンジュゲートの細胞傷害性の依存性は、ＭＥＣ－１、ＭＥＣ－２、ＲａｍｏｓおよびＲａｊｉ－ｌｕｃ細胞に対して２つの例示的なコンジュゲートを用いて評価した。（Ａ）コンジュゲートＸＸＶ、（Ｂ）コンジュゲートＸＸＩＩＩ。この結果は、細胞表面に発現する検出可能なＣＤ３７エピトープの数に関係なく（ＭＥＣ－２細胞での高発現に比べ、Ｒａｍｏｓ細胞またはＭＥＣ－１細胞での低発現）、本発明のコンジュゲートが標的細胞に対して高い細胞傷害性を有し、効果的な細胞殺傷によって証明されることを示している。ＣＤ３７エピトープの定量は、ＱｕａｎｔｕｍTM ＭＥＳＦ Ｋｉｔを使用し、メーカーの指示に従って行った。
本発明を詳細に説明する前に、本発明は説明されたデバイスの特定の構成要素部分に限定されず、あるいはそのようなデバイスおよび方法は変化する可能性があるので、説明された方法のプロセス工程に限定されないことを理解されたい。また、本明細書で使用される用語は特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図していないことを理解されたい。明細書および添付の請求項において使用されるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は文脈が明確に別途指示しない限り、単数形および／または複数形の参照を含むことに留意されたい。さらに、数値によって区切られるパラメータ範囲が与えられる場合、その範囲は、これらの限界値を含むものとみなされることを理解されたい。また、本書において、数値の範囲を示すのは、単に範囲内にある各個別の数値を個別に参照するための略記法としての役割を果たすことを意図している。本明細書で特に指示しない限り、個々の値は、あたかも本明細書に個別に記載されているかのように、本明細書に組み込まれる。
本明細書およびそれに続く特許請求の範囲を通じて、文脈上そうでない場合を除き、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」、および「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ」などの変形は、記載された部材、整数またはステップを含むことを意味するが、他の記載されていない部材、整数またはステップを除外することを意味しないと理解されるであろう。用語「ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ」は、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ」の特定の実施形態であり、他の非記載部材、整数又はステップが除外される。
さらに、本明細書に開示される実施形態は、互いに関連しない個々の実施形態として理解されることを意味しないことを理解されたい。一実施形態で議論される特徴は、本明細書に示される他の実施形態に関連しても開示されることを意味する。１つの場合において、特定の特徴が１つの実施形態で開示されず、別の実施形態で開示される場合、当業者は、前記特徴が前記他の実施形態で開示されることを意味しないことを必ずしも意味しないことを理解するのであろう。当業者であれば、他の実施形態についても前記特徴を開示することが本出願の主旨であるが、単に明瞭にするため、及び本明細書を管理可能な量に維持するために、これが行われていないことを理解されよう。
さらに、本明細書で参照される先行技術文献の内容は、参照により援用される。これは、特に、標準的または通常方法を開示する先行技術文献を指す。その場合、参照による援用は、主に、十分に実施可能な開示を提供し、長い繰り返しを回避する目的を有する。本出願を通じて使用される化学用語は、国際純正・応用化学連合（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｕｎｉｏｎ ｏｆ Ｐｕｒｅ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）発行の「Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ」（ＩＳＢＮ：０－９６７８５５０－９－８）に従って解釈されるものとする。
本出願を通じて、「約」という用語が使用されているが、これは使用されている数値の±１０％を指すものとする。
本発明の第１の態様によれば、本発明は、（ｉ）標的結合部分、（ｉｉ）少なくとも１つの毒素、および（ｉｉｉ）任意選択で、前記標的結合部分と前記少なくとも１つの毒素とを連結する少なくとも１つのリンカーを含むコンジュゲートに関し、ここで、前記標的結合部分はＣＤ３７に結合し、前記少なくとも１つの毒素はアマトキシンである。
アマトキシンは、タマゴテングタケ（Ａｍａｎｉｔａ ｐｈａｌｌｏｉｄｅｓ）キノコに見出される８つのアミノ酸から構成される二環状ペプチドである（図１参照）。アマトキシンは、哺乳動物細胞のＤＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＩＩを特異的に阻害し、それにより罹患細胞の転写およびタンパク質生合成も阻害する。細胞中の転写の阻害は、成長および増殖の停止を引き起こす。アマニチンおよびＲＮＡポリメラーゼＩＩ間の複合体は共有結合していないが、極めてタイトである（ＫＤ＝３ｎＭ）。この酵素からのアマニチンの解離は極めて緩慢なプロセスであり、したがってそれにより罹患細胞の回復の可能性が低くなる。転写の阻害が十分長く続く場合、細胞はプログラム細胞死（アポトーシス）を受ける。
本発明の、用語「アマトキシン」は、テングタケ属（ｇｅｎｕｓ Ａｍａｎｉｔａ）から単離され、Ｗｉｅｌａｎｄ， Ｔ． ａｎｄ Ｆａｕｌｓｔｉｃｈ Ｈ．（Ｗｉｅｌａｎｄ Ｔ， Ｆａｕｌｓｔｉｃｈ Ｈ．， ＣＲＣ Ｃｒｉｔ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ．５ （１９７８） １８５－２６０） に記載されているような８アミノ酸からなる全ての二環状ペプチド、さらにその全ての化学誘導体；さらにそのすべての半合成類似体； さらに、天然化合物のマスター構造（環状、８個のアミノ酸）に従ったビルディングブロックから構築された、すべての合成類似体、さらに、ヒドロキシル化アミノ酸の代わりに非ヒドロキシル化アミノ酸を含むすべての合成または半合成の類似体、さらにすべての合成または半合成の類似体であって、スルホキシド部分がスルホン、チオエーテル、または硫黄とは異なる原子、例えば、アマニチンのカルバナログのように炭素原子で置換されているものを含む。
本明細書に使用する場合、化合物の「誘導体」とは、化合物と類似した化学構造を持ちながら、由来する化合物に存在しない少なくとも１つの化学基を含み、かつ由来する化合物に存在する少なくとも１つの化学基が欠損している種を指すものとする。誘導体が比較される化合物は、「親」化合物と呼ばれる。典型的には、「誘導体」は、１つ以上の化学反応ステップで親化合物から生成される場合がある。
本明細書で使用する場合、化合物の「類似体」は、化合物と構造的に関連するが同一ではなく、化合物の少なくとも１つの活性を示すものである。類似体が比較される化合物は、「親」化合物と呼ばれる。前記活性としては、限定されないが、他の化合物との結合活性；阻害活性、例えば酵素阻害活性；毒性作用；活性化活性、例えば酵素活性化活性が挙げられる。なお、類似体が親化合物と同程度にそのような活性を示すことは要求されない。化合物は、親化合物の活性の少なくとも１％（より好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％）の程度で関連活性を示す場合、本願明細書に関して類似体とみなされる。したがって、本明細書で使用する「アマトキシンの類似体」とは、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリンおよびアマヌリン酸のいずれか１つと構造的に関連し、少なくとも１％（より好ましくは少なくとも５％、より好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも２０％、より好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％、５０％、６０％、より好ましくは少なくとも７０％、８０％、９０％）の、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、およびアマヌリン酸の少なくとも１つに対する哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害活性を示す。本発明における使用に適した「アマトキシンの類似体」は、α－アマニチン、β－アマニチン、γ－アマニチン、ε－アマニチン、アマニン、アマニンアミド、アマヌリン、またはアマヌリン酸のいずれか一つよりも哺乳類のＲＮＡポリメラーゼＩＩに対して大きな阻害活性を示すことさえある。阻害活性は、５０％阻害が起こる濃度（ＩＣ50値）を決定することによって測定することができる。哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩに対する阻害活性は、細胞増殖に対する阻害活性を測定することによって間接的に決定することができ、あるいは、本明細書に開示されるようなアマトキシン類およびその各誘導体類の阻害活性は、例えば、Ｖｏｓｓ ｅｔ ａｌ． ＢＭＣ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２０１４， １５：７に開示されるようなＲＮＡポリメラーゼＩＩ活性アッセイを用いて評価することができる。
「半合成類似体」とは、天然物（植物原料、細菌培養物、真菌培養物、細胞培養物など）由来の化合物を出発材料として、化学合成により得られた類似体である。典型的には、本発明の「半合成類似体」は、テングタケ科のキノコから単離された化合物から出発して合成されたものである。一方、「合成類似体」とは、小さな（典型的には石油化学的な）ビルディングブロックからいわゆる全合成によって合成された類似体のことである。通常、この全合成は生物学的プロセスの助けを借りることなく行われる。
本発明のいくつかの実施形態によれば、アマトキシンは、α－アマニチン、β－アマニチン、アマニン、アマニンアミド及びそれらの類似体、誘導体、塩からなる群から選択することができる。
機能的に、アマトキシンは、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩを阻害するペプチドまたはデプシペプチドとして定義される。好ましいアマトキシンは、下記定義のリンカー分子または標的結合部分と反応させることができる官能基（例えば、カルボキシ基、アミノ基、ヒドロキシ基、チオールもしくはチオール捕捉基）を有するものである。
本発明に関して、「アマニチン」という用語は特に、１位のアスパラギン酸残基またはアスパラギン残基、２位のプロリン残基、特にヒドロキシプロリン残基、３位のイソロイシン、ヒドロキシイソロイシンまたはジヒドロキシイソロイシン（またはアマヌル酸の場合はアスパラギン酸）、４位のトリプトファンまたはヒドロキシトリプトファン残基（プロアマヌリンの場合はプロリン）、５位と７位のグリシン残基（アマヌル酸とプロアマヌリンの場合はイソロイシン残基）、６位のイソロイシン残基、および８位はシステイン残基に基づく二環構造を指し、特に、スルホキシドまたはスルホン誘導体に酸化されたシステインの誘導体であり（番号付けとアマニチンの代表例については、図１を参照）、さらにそのすべての化学誘導体；さらにそのすべての半合成類似体を含み；さらに、天然化合物のマスター構造（環状、８個のアミノ酸）に従ったビルディングブロックから構築された、すべての合成類似体、さらに、ヒドロキシル化アミノ酸の代わりに非ヒドロキシル化アミノ酸を含むすべての合成または半合成の類似体、さらにすべての合成または半合成類似体であって、いずれの場合も、そのような誘導体または類似体は、哺乳動物ＲＮＡポリメラーゼＩＩを阻害することにより機能的に活性である。
本明細書で使用する「標的結合部分」という用語は、標的分子または標的エピトープに特異的に結合することができる任意の分子または分子の一部を意味する。本発明に関して、好ましい標的結合部分は、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片；（ｉｉ）抗体様タンパク質；および（ｉｉｉ）核酸アプタマー、（ｉｖ）アンチカリンであり、または（ｖ）本発明における使用に適した「標的結合部位」は、典型的には４００００Ｄａ（４０ｋＤａ）以上の分子量を有する。
本発明に関して「リンカー」とは、２つの成分間の距離を増大させる分子を指し、例えば、標的結合部分とアマトキシンとの間の立体干渉を緩和するためであり、そうでなければアマトキシンがＲＮＡポリメラーゼＩＩと相互作用する能力を低下させるかもしれない。リンカーは、標的結合部分によって標的とされる細胞において特異的にアマトキシンの放出を促進することができるため、別の目的を果たすことができる。リンカー、好ましくは、一方の側のリンカーとアマトキシンとの間の結合、および他方の側のリンカーと標的結合部分または抗体との間の結合が、細胞外、例えば血液の生理的条件下で安定である一方、細胞内、特に標的細胞内、例えば癌細胞内で切断されることができることが好ましい。この選択的な安定性を提供するために、リンカーは、好ましくはｐＨ感受性またはプロテアーゼ感受性である官能基を含んでいてもよい。また、リンカーと標的結合部分をつなぐ結合が、選択的な安定性をもたらすこともある。好ましくは、リンカーは少なくとも１、好ましくは１～３０原子の長さ（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０原子）、ここでリンカーの一方の側はアマトキシンと反応されて、他の側は標的結合部分と反応していたものである。本発明に関して、リンカーは、好ましくは、任意に置換された、Ｃ1-30－アルキル、Ｃ1-30－ヘテロアルキル、Ｃ2-30－アルケニル、Ｃ2-30－ヘテロアルケニル、Ｃ2-30－アルキニル、Ｃ2-30－ヘテロアルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、アラキルまたはヘテロアルキル基である。リンカーは、アミド、エステル、エーテル、チオエーテル、ジスルフィド、炭化水素部分等のような１以上の構造要素を含むことができる。リンカーはまた、これらの構造要素の２つ以上の組合せを含むことができる。これらの構造要素の各１つは、リンカー中に１回以上、例えば、２回、３回、４回、５回、または６回存在することができる。いくつかの実施形態において、リンカーはジスルフィド結合を含むことができる。リンカーは、アマトキシンおよび標的結合部分に対して、単一工程または２工程以上の後続工程のいずれかで結合されなければならないことが理解される。その目的のために、リンカーは、好ましくは近位末端および遠位末端に、２つの基を担持し、（ｉ）アマトキシンまたは標的結合部分上の基、好ましくは活性化された基に共有結合を形成することができるか、または（ｉｉ）アマトキシン上の基と共有結合を形成するために活性化されるか、または形成することができる。従って、リンカーが存在するならば、このようなカップリング反応の結果である化学基（例えば、エステル、エーテル、ウレタン、ペプチド結合など）は、リンカーの遠位末端および近位末端にあることが好ましい。「リンカー」の存在は任意選択的であり、すなわち、標的結合部位毒素コンジュゲートのいくつかの実施形態において、アマトキシンは標的結合部分の残基に直接連結されてもよいが、本発明の好ましい実施形態において、アマトキシンはリンカーを介して標的結合部位に連結される。
本発明はさらに、ＣＤ３７に結合する標的結合部分、少なくとも１つのアマトキシン、および任意選択でリンカーを含むコンジュゲートに関し、ここで、前記標的結合部分は、
（ｉ）抗体、好ましくはモノクローナル抗体、
（ｉｉ）その抗原結合断片、好ましくは可変ドメイン（Ｆｖ）、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ）2断片、
（ｉｉｉ）その抗原結合性誘導体、好ましくは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、および
（ｉｖ）抗体様タンパク質
からなる群より選択され、それぞれＣＤ３７に結合する。
好ましい実施形態では、前記ＣＤ３７はヒトＣＤ３７（配列番号１３）であり；最も好ましい実施形態では、前記標的結合部分が特異的に結合するヒトＣＤ３７の細胞外ドメインである。本明細書で使用する「特異的に結合する」という用語は、抗ＣＤ３７抗体などの本発明の標的化部分の結合を指し、その抗原、例えばヒトＣＤ３７のエピトープ、好ましくはヒトＣＤ３７の細胞外エピトープに対し、少なくとも約１０-6Ｍ、１０-7Ｍ、１０-8Ｍ、または約１０-8Ｍから約１０-9Ｍ、１０-10Ｍ、１０-11Ｍ、１０-12Ｍ、または約５ｘ１０-9Ｍ、５ｘ１０-10Ｍから約２．５ｘ１０-11Ｍ、５ｘ１０-11Ｍ、２．５ｘ１０-12Ｍ、５ｘ１０-12ＭのＫDを有する。
本発明の標的結合部分、例えば本明細書に開示される抗体の結合のＫDの決定は、Ｋａｍａｔ ｅｔ ａｌ． Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５３６ （２０１７） １６－３１に開示される方法論に従って、または例えばＮｏｙ－Ｐｏｒａｔら、ＳＴＡＲ Ｐｒｏｔｏｃ． ２０２１ Ｓｅｐ １５；２（４）：１００８３６に開示されるように決定することができる。
前記抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体は、それぞれ、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体とすることができる。
本明細書中で使用する「抗体」という用語は、免疫グロブリン遺伝子または免疫グロブリン遺伝子の断片またはそれに由来するｃＤＮＡによってコードされる１つ以上のポリペプチド鎖からなるタンパク質を意味する。前記免疫グロブリン遺伝子には、軽鎖カッパ、ラムダおよび重鎖アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミュー定常領域遺伝子ならびに多くの様々な可変領域遺伝子のいずれかが含まれる。
基本的な免疫グロブリン（抗体）構造ユニットは通常、軽鎖（Ｌ、分子量約２５ｋＤａ）と重鎖（Ｈ、分子量約５０～７０ｋＤａ）の２本の同一なポリペプチド鎖対からなる四量体である。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨまたはＶHと略す）と重鎖定常領域（ＣＨまたはＣHと略す）で構成されている。重鎖定常領域は、３つのドメイン、すなわち、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３からなる。それぞれの軽鎖には、軽鎖可変領域（ＶＬまたはＶ Lと略す）と軽鎖定常領域（ＣＬまたはＣ Lと略す）が含まれている。ＶＨおよびＶＬ領域はさらに超可変性の領域に細分化することができ、これらはフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域の間に挿入された相補性決定領域（ＣＤＲ）とも呼ばれる。各ＶＨおよびＶＬ領域は、ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４の順にアミノ末端からカルボキシ末端に配列する３つのＣＤＲおよび４つのＦＲから構成されている。重鎖と軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを形成している。
抗体のＣＤＲおよびフレームワーク領域は、例えば、Ｋａｂａｔ（ＥＡ Ｋａｂａｔ， ＴＴ Ｗｕ， Ｈ． Ｂｉｌｏｆｓｋｙ， Ｍ． Ｒｅｉｄ－Ｍｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｈ． Ｐｅｒｒｙ， Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ， Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ （１９８３）， Ｃｈｏｔｈｉａ （Ｃｏｔｈｉａ ＆ Ｌｅｓｋ， Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ．１９８７ Ａｕｇ ２０；１９６（４）：９０１－１７）、またはＩＭＧＴ（登録商標） （ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ， Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ． Ｄｅｖ Ｃｏｍｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００３） ２７：５５－７７．）のような、当該技術分野で公知の異なる番号付けスキームに従って定義することができる。本発明に関して、ＣＤＲへの言及はＫａｂａｔに従って行われる。
ＣＤＲは、抗体またはその抗原結合部分の結合にとって最も重要である。ＦＲは、抗原の結合に必要な三次元構造が保持されていれば、他の配列に置き換えることができる。構築物の構造変化は、抗原への十分な結合の損失につながることが最も多い。
（モノクローナル）抗体の用語「抗原結合部分」とは、そのネイティブ型においてＣＤ２０抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１以上の断片を意味する。抗体の抗原結合部分の例としては、Ｆａｂ断片（ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価の断片）、Ｆ（ａｂ’）2断片（ヒンジ領域でジスルフィドブリッジにより結合した２つのＦａｂ断片を含む２価の断片）、ＶＨとＣＨ１ドメインからなるＦｄ断片、抗体のシングルアームのＶＬとＶＨドメインからなるＦｖ断片、ＶＨドメインと孤立した相補性決定領域（ＣＤＲ）からなるｄＡｂ断片が挙げられる。
本発明による抗体またはその抗体断片もしくは抗体誘導体は、モノクローナル抗体であり得る。本明細書において、「モノクローナル抗体」（「ｍＡｂ」）という用語は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を有する抗体分子の調製物を指し、均質な抗体集団、すなわち免疫グロブリン全体、またはその断片もしくは誘導体からなる均質な集団を表す。好ましくは、そのような抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡおよび／またはＩｇＭ、またはそれらの断片もしくは誘導体からなる群から選択され、好ましくは、本発明のモノクローナル抗体は、ＩｇＧアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、またはＩｇＧ４であり、より好ましくはＩｇＧ１アイソタイプである。
本明細書中で使用される「断片」または「抗原結合断片」という言葉は、標的結合能を保持するこのような抗体の断片、例えば、ＣＤＲ （相補性決定領域）、超可変領域、可変ドメイン（Ｆｖ）、ＩｇＧ重鎖（ＶＨ、ＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２およびＣＨ３領域からなる）、ＩｇＧ軽鎖（ＶＬおよびＣＬ領域からなる）、および／またはＦａｂおよび／またはＦ（ａｂ）2を指す。
本明細書において、「誘導体」または「抗原結合誘導体」という用語は、一般的な抗体概念、例えばｓｃＦｖ、Ｆａｂおよび／またはＦ（ａｂ）2とは構造的に異なるが、依然として何らかの構造的関係を有するタンパク質構築物、ならびに本発明のモノクローナル抗体とほぼ同じ標的結合特異性を有する二重特異性、三重特異性またはそれ以上の特異性を有する抗体構築物を指すものとする。
当業者に知られている他の抗体誘導体は、ダイアボディ、ラクダ抗体、ドメイン抗体、ｓｃＦｖｓの２つの鎖からなる二価ホモ二量体、ＩｇＡｓ （２つのＩｇＧ構造がＪ鎖と分泌成分によって連結されている）、サメ抗体（ＩｇＮＡＲ）、新世界霊長類フレームワークと非新世界霊長類ＣＤＲからなる抗体、ＣＨ３＋ＶＬ＋ＶＨを含む二量体構築物、ＣＤＲを含む他の足場タンパク質フォーマット、および抗体コンジュゲート（例えば、薬剤、毒素、サイトカイン、アプタマー、デソキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）などの核酸、治療用ポリペプチド、放射性同位体または標識に連結された抗体またはその断片もしくは誘導体）である。
本明細書で使用する場合、「抗体様タンパク質」という用語は、標的分子に特異的に結合するように（例えば、Ｉｇループの変異誘発によって）改変されたタンパク質を意味する。典型的には、このような抗体様タンパク質は、タンパク質足場に両端が取り付けられた少なくとも１つの可変ペプチドループを含む。この二重構造束縛は、抗体様タンパク質の結合親和性を、抗体のものに匹敵するレベルまで大きく増加させる。可変ペプチドループの長さは、通常１０～２０アミノ酸からなる。足場タンパク質は、良好な溶解性を有する任意のタンパク質であってもよい。好ましくは、足場タンパク質は、小球状タンパク質である。抗体様タンパク質には、限定されないが、アフィリンタンパク質、アフィボディ、アンチカリン、および設計されたアンキリン反復タンパク質が含まれる（Ｂｉｎｚ ｅｔ ａｌ．， ２００５）。抗体様タンパク質は、例えば大規模なファージディスプレイライブラリーからのパンニングによって、変異体の大規模なライブラリーから得ることができ、通常の抗体と同様に単離することができる。また、球状タンパク質の表面露出残基のコンビナトリアル変異誘発により、抗体様結合タンパク質を得ることができる。
本発明による抗体様タンパク質は、例えば、１２～１５ｋＤａのＶＨまたはＶＬドメインから構成され、例えばラクダのＶＨドメイン（ＶＨＨ）やＩｇＮＡＲの抗原結合ドメインであるＶ－ＮＡＲと呼ばれるサメのＶＨドメインなど、完全な抗原結合特異性を保持する最小の機能的抗体断片であるナノボディとしても知られる単一ドメイン抗体断片（ｄＡｂｓ）を含むこともできる（例えば、Ｅｎｇｌｉｓｈ ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ， ２０２０， Ｖｏｌ． ３， Ｎｏ． １ １-９を参照）。）
本明細書中で使用される、用語「Ｆａｂ」は、抗原結合領域を含むＩｇＧ断片に関するものであり、前記断片は、抗体の各々の重鎖および軽鎖からの１つの定常および１つの可変ドメインで構成される
本明細書中で使用される、「Ｆ（ａｂ）2」という言葉は、ジスルフィド結合によって互いに結合した２つのＦａｂ断片からなるＩｇＧ断片に関する。
本明細書中で使用される「ｓｃＦｖ」という言葉は、単鎖可変領域フラグメントが、通常セリン（Ｓ）および／またはグリシン（Ｇ）残基を含む短いリンカーと共に連結された、免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の可変領域の融合体であることに関する。このキメラ分子は、定常領域を除去し、リンカーペプチドを導入するにもかかわらず、元の免疫グロブリンの特異性を保持している。
改変された抗体フォーマットは、例えば、二重または三重特異性抗体構築物、抗体ベースの融合タンパク質、免疫コンジュゲートなどである。
ＩｇＧ，ｓｃＦｖ，Ｆａｂおよび／またはＦ（ａｂ）2は当業者によく知られた抗体フォーマットである。関連する有効化技術は、それぞれの教科書から入手することができる。
本発明の好ましい実施形態によれば、前記抗体、またはその抗原結合断片もしくは抗原結合誘導体は、それぞれ、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体、またはその抗原結合断片もしくは抗原結合誘導体であり、より好ましくは、前記抗体またはその抗原結合断片は、ヒト化またはヒト抗体である。
マウス由来のモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、抗薬剤抗体を誘発する可能性のある別種由来のタンパク質を含むため、望ましくない免疫学的副作用を引き起こす可能性がある。この問題を克服するために、抗体のヒト化及び成熟化方法は、非ヒト親抗体の特異性及び親和性を理想的には依然として保持しながら、ヒトに適用した場合に最小限の免疫原性を有する抗体分子を生成するように設計されている（レビューはＡｌｍａｇｒｏ及びＦｒａｎｓｓｏｎ ２００８を参照のこと）。これらの方法を用いて、例えば、マウスＭＡｂフレームワーク領域を対応するヒトフレームワーク領域に置き換える（いわゆるＣＤＲ移植）。ＷＯ２００９０７８６１は、組換えＤＮＡ技術によって、非ヒト抗体のＣＤＲ領域をヒト定常領域に結びつけることによって、マウス抗体のヒト化形態の作製を開示する。Ｍｅｄｉｃａｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ＣｏｕｎｃｉｌによるＵＳ６５４８６４０にはＣＤＲ移植技術が記載されており、ＣｅｌｌｔｅｃｈによるＵＳ５８５９２０５にはヒト化抗体の産生が記載されている。
本明細書で使用する場合、「キメラ抗体」という用語は、抗体本来の抗原結合可変ドメインと、異なる生物種由来の定常ドメインからなる抗体に関する。抗体、特にモノクローナル抗体はもともとマウス由来のものが多いため、ヒトでの免疫原性を低減するために、ヒトの定常ドメインとマウスの可変ドメインを含むキメラ抗体が一般的である。臨床治療に用いられるキメラ抗体の例としては、インフリキシマブ、リツキシマブ、アブシキシマブなどがある。
本明細書中で使用される「ヒト化抗体」という言葉は、抗体、断片またはその誘導体に関するものであり、この用語は、抗体の定常領域および／またはフレームワーク領域の少なくとも一部、および任意にＣＤＲ領域の一部が、ヒト免疫グロブリン配列に由来するか、またはヒト免疫グロブリン配列に調整される。
本明細書に開示されている抗体、抗体断片またはその抗体誘導体は、特に適切なリガンド親和性を維持する好ましいＶＨおよびＶＬベースの抗原結合領域のヒト化配列を含み得る。前記ヒト化配列を得るためのアミノ酸配列改変は、ＣＤＲ領域及び／又は元の抗体のフレームワーク領域、及び／又は抗体定常領域配列に起こり得る。
前記抗体またはその抗体断片もしくは抗体誘導体をグリコシル化することができる。グリカンは、重鎖のアスパラギン２９７のＮ－結合オリゴ糖鎖であり得る。
本発明の抗体または断片もしくは誘導体は、本発明の抗体のコード配列を含む発現ベクターを宿主細胞にトランスフェクションすることによって産生することができる。発現ベクターまたは組換えプラスミドは、コード化抗体配列を、例えばＣＭＶプロモーターのようなプロモータおよびエンハンサ配列を含む適切な調節性遺伝要素の制御下に置くことによって生産される。重鎖配列および軽鎖配列は、同時トランスフェクトされる個々の発現ベクター、または二重発現ベクターから発現され得る。前記トランスフェクションは、一過性のトランスフェクションまたは安定なトランスフェクションであり得る。トランスフェクトされた細胞は、続いて、トランスフェクトされた抗体構築物を産生するために培養される。安定なトランスフェクションを実施する場合、次に、適切に関連する重鎖および軽鎖を有する抗体を分泌する安定なクローンを、例えば、ＥＬＩＳＡ、サブクローン化、および将来の産生のために増殖するような適切なアッセイによるスクリーニングによって選択する。モノクローナル抗体発現のための哺乳動物細胞の一過性または安定的トランスフェクションに対応する方法は、先行技術に記載されている。例えば、Ｊaｇｅｒ ｅｔ ａｌ． ＢＭＣ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０１３， １３：５２は、ＨＥＫ２９３細胞における組換え抗体の一過性生産法を開示しており、Ｋａｍｌｅ ｅｔ ａｌ． Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ （２０２２） ｐ．３１－３９は、抗体の一過性発現および精製のための代替法を開示している。安定した細胞クローンを作製する方法は、例えばＵＳ ２０１０／０３１１１１６ Ａ１またはＵＳ ７，４９１，５３２ Ｂ２に開示されている。モノクローナル抗体産生のための細胞工学のガイドラインは、例えばＣｏｓｔａ， Ｒ．Ａ．， ｅｔ ａｌ． Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．７４ （２０１０） １２７－１３８により報告されている。Ｋｉｍ， Ｄ．Ｗ．らは、ヒト伸長因子１αプロモーターを、多用途で効率的な発現系として使用することを報告している（Ｇｅｎｅ ９１ （１９９０） ２１７－２２３） 。イントロン依存的な遺伝子発現とイントロン非依存的な遺伝子発現の比較は、Ｂｕｃｈｍａｎ， Ａ．Ｒ．， ｅｔ ａｌ． （Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ． ８ （１９８８） ４３９５－ ４４０５）によって報告されている。
本発明の実施形態によれば、前記抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体は、それぞれ、テツロマブ（Ｌｉｌｏｔｏｍａｂ）、オトレルツズマブ（ＴＲＵ－０１６）、およびナラツキシマブ、ＢＩ ８３６８２６、またはＧｅｎ３００９からなる群から選択され得るか、またはこれらから誘導され得る。
本発明の好ましい実施形態において、抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体、または抗体様タンパク質、少なくとも１つのアマトキシン、および任意選択でリンカーを含むコンジュゲートにおいて、前記抗体、またはその断片もしくは誘導体、または抗体様タンパク質は、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む：
配列番号１（ＤＹＮＭＹ）に記載のＣＤＲＨ１、
配列番号２（ＹＩＤＰＹＮＧＤＴＴＹＮＱＫＦＫＧ）に記載のＣＤＲＨ２、
配列番号３（ＳＰＹＧＨＹＡＭＤＹ）に記載のＣＤＲＨ３、
配列番号４（ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＤ）に記載のＣＤＲＬ１、
配列番号５（ＷＡＳＴＲＨＴ）に記載のＣＤＲＬ２、
配列番号６（ＲＱＨＹＳＴＰＦＴ）に記載のＣＤＲＬ３、
ここで、前記ＣＤＲは、ＣＤ３７、好ましくはヒトＣＤ３７、最も好ましくはヒトＣＤ３７の細胞外ドメイン、特に好ましくは、ヒトＣＤ３７のＥＣ１および／またはＥＣ２に含有されるか、またはこれらによって形成されるエピトープに結合できるように、適切なタンパク質またはアミノ酸フレームワークに含有され、ＥＣ１は配列番号１３のアミノ酸３９－５９を含むか、またはこれらからなり、ＥＣ２は配列番号１３のアミノ酸１１２－２４１を含むか、またはこれらからなる。
本明細書で使用する「エピトープ」という用語は、本明細書で開示する本発明の抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体のような抗原結合分子によって、より詳細には前記分子の抗原結合部位によって認識される高分子、好ましくはポリペプチドの部分を指す。エピトープは抗体分子の最小結合部位を規定し、したがって抗体分子の特異性の標的を表す。エピトープはさらに、構造エピトープまたは機能的エピトープとして定義することができる。「構造エピトープ」とは、通常構造によって明らかにされる抗体と密接に接触する領域にあるアミノ酸やその他の分子から構成される。「機能的エピトープ」とは、結合にエネルギー的な寄与をする分子の部分であり、その部分が変化すると結合親和性が低下するものと定義される。構造エピトープは、例えば、長さ約５アミノ酸から約１０、１５、２０、２５、３０、４０、４５、５０、１００アミノ酸までの直鎖状連続配列、または約６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５から約５０、７５、１００アミノ酸までの直鎖状連続配列、またはポリペプチドの三次元構造によって形成され、ポリペプチドの不連続アミノ酸を含み得る立体配置エピトープであってもよい。
一実施形態では、上記に開示した本発明によるコンジュゲートに含まれる抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体は、配列番号１３のアミノ酸３９～５９、および／または配列番号１３のアミノ酸１１２～２４１によって形成される立体配置エピトープに特異的に結合する。前記立体配置エピトープは、１つ以上のＣＤ３７タンパク質、例えば多量体を形成する２つ、３つまたは４つのＣＤ３７分子によって形成され得る。
一実施形態では、上記に開示した本発明によるコンジュゲートに含まれる本発明の抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体は、配列番号１３に記載のアミノ酸配列を含むカニクイザルＣＤ３７に特異的に結合しない。したがって、本発明によるコンジュゲートに含まれる抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体は、配列番号１６によるアミノ酸配列を含むか、またはそのアミノ酸配列からなるカニクイザルＣＤ３７には特異的に結合しない。本明細書で使用される用語「非特異的結合（ｎｏ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ）」またはその文法的等価物は、本発明によるコンジュゲートに含まれる本発明の抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体が、＞１０-6Ｍ、１０-5Ｍ、１０-4ＭのＫDを有することを示すものとする。
本発明のさらに好ましい実施形態において、前記抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体、または抗体様タンパク質は、それぞれ、配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは、配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む。「配列類似性」または「配列同一性」という用語は、いずれも本発明を通して互換的に使用され、２つ以上のアミノ酸配列またはポリヌクレオチド配列の互いまたは参照配列に対する類似性または同一性を指す。本発明による配列同一性は、例えば、それぞれの参照配列と比較される各配列の全長にわたって決定することができ（いわゆる「グローバルアラインメント」）、これは同一または類似の長さの配列に特に適しており、あるいはより短く定義された長さにわたって決定することができ（いわゆる「ローカルアラインメント」）、これは不均等な長さの配列により適している。上記文脈において、少なくとも、例えば、照会アミノ酸配列に対して９５％の「配列同一性」を有するアミノ酸配列は、対象アミノ酸配列の配列が、照会アミノ酸配列の各々１００アミノ酸当たり最大５個のアミノ酸変化を含み得ることを除いて、対象アミノ酸配列の配列が照会配列と同一であることを意味するよう意図されている。言い換えると、照会アミノ酸配列に対して少なくとも９５％の同一性を有する配列を得るためには、対象アミノ酸配列中のアミノ酸残基の５％（１００個中５個）までを別のアミノ酸で挿入または置換するか、欠失させてもよい。配列同一性は、例えば、配列番号７または配列番号８の全長にわたって計算することができる。一実施形態によれば、配列番号７または配列番号８との配列同一性は、配列同一性の計算において、配列番号７中の配列番号１、配列番号２、配列番号３のアミノ酸配列を除外して、および／または配列同一性の計算のために、配列番号８中の配列番号４、配列番号５、配列番号６のアミノ酸配列を除外して、配列番号７または配列番号８のフレームワーク領域の長さにわたって計算される。
２つ以上の配列の同一性および配列類似性を比較する方法は、当該技術分野において周知である。２つの配列が同一であるパーセンテージは、例えば数学的アルゴリズムを用いて決定することができる。使用可能な数学的アルゴリズムの好ましい例（限定的ではないが）は、Ｋａｒｌｉｎら（１９９３）、ＰＮＡＳ ＵＳＡ、９０：５８７３－５８７７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ＢＬＡＳＴファミリーのプログラムに統合されており（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．Ｂｉｏｌ．２１５，４０３－４１０またはＡｌｔｓｃｈｕｌら，（１９９７）， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ， ２５：３３８９－３４０２も参照）、ワールドワイドウェブサイト（ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ）のＮＣＢＩのホームページ、ＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ （１９９０）， Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．８３， ６３－９８； Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｌｉｐｍａｎ （１９８８）， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ． Ｓ． Ａ ８５， ２４４４－２４４８）からアクセスできる。他の配列とある程度同一である配列は、これらのプログラムによって同定することができる。さらに、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ （Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ， １９８４， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ３８７－３９５； Ｗｏｍｂｌｅ Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ． ２０００；１３２：３－２２）で利用可能なプログラム、例えばプログラムＢＥＳＴＦＩＴおよびＧＡＰを使用して、２つのポリペプチド配列間の同一性％を決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴは（Ｓｍｉｔｈ ａｎｄ Ｗａｔｅｒｍａｎ （１９８１）， Ｊ． Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ． １４７， １９５－ １９７．）の「局所配列類似性」アルゴリズムを使用し、２つの配列間の類似性の最も良い単一領域を見つける。例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．， １９９７， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２に記載されているように、「ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴ」が利用され得る。あるいは、ＰＳＩ－Ｂｌａｓｔ を使って分子間の遠い関係を検出する反復検索を行うこともできる。上記のＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムのいずれかを使用する場合、それぞれのプログラム（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。
本発明のさらに好ましい実施態様において、上記のような前記抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む。
配列番号９によるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１２によるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む本発明の抗体を、本明細書では「ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ」と呼ぶ。
本発明の好ましい実施形態によれば、上記のような前記抗体は、ＥＵ番号付けシステム（Ｅｄｅｌｍａｎ， Ｇ．Ｍ． ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ．ＵＳＡ， ６３， ７８－８５ （１９６９）による重鎖１１８Ｃｙｓ、重鎖２３９Ｃｙｓ、および／または重鎖２６５Ｃｙｓ、好ましくは、ＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓを含むように遺伝子改変されており、ここで、前記リンカーは、存在する場合、または前記アマトキシンは、それぞれ、前記重鎖１１８Ｃｙｓ、または前記重鎖２３９Ｃｙｓ、または前記重鎖２６５Ｃｙｓ残基を介して前記抗体に連結され、より好ましくは、前記アマトキシンは、前記重鎖２６５Ｃｙｓを介して前記抗体に連結される。従って、前記遺伝子操作された重鎖１１８Ｃｙｓ、重鎖２３９Ｃｙｓ、及び／又は重鎖２６５Ｃｙｓ残基は、存在する場合には、抗体を前記リンカー又は前記アマトキシンに結合させるために使用することができる。
本明細書で使用する場合、用語「遺伝子操作された」または「遺伝子改変」は、ヌクレオチドおよび／またはアミノ酸の置換、挿入、欠失または復帰（ｒｅｖｅｒｓｉｏｎ）、またはそれらの任意の組み合わせという意味で、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．（１９８６） Ｖｏｌ． ２３７：１－７またはＪ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．（２０１５） Ｖｏｌ． ２９０（５）：２５７７－２５９２．に記載されているような、例えば部位特異的変異誘発法などの遺伝子技術的方法によって、所定のまたは天然のポリペプチドまたはタンパク質のアミノ酸配列またはその一部を変更することに関するものである。
本明細書中で使用される、用語「アミノ酸置換」は、タンパク質のアミノ酸配列の改変に関するものであり、ここで、１つ以上のアミノ酸が同じ数の異なるアミノ酸と置換され、元のタンパク質とは異なるアミノ酸配列を含むタンパク質が生成される。保存的アミノ酸置換は、類似の大きさ、電荷、極性および／または立体構造による、タンパク質の構造および機能に有意に影響しない置換に関係すると理解される。その意味での保存的アミノ酸の群、例えば、非極性アミノ酸であるＧｌｙ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＩｌｅおよびＬｅｕ；芳香族アミノ酸であるＰｈｅ、ＴｒｐおよびＴｙｒ；正電荷を帯びたアミノ酸であるＬｙｓ、ＡｒｇおよびＨｉｓ；ならびに負電荷を帯びたアミノ酸であるＡｓｐおよびＧｌｕを表す。例示的なアミノ酸の置換を以下の表１に示す：
本発明の好ましい実施形態によれば、上記のようなコンジュゲートの抗体は、ＥＵ番号付けシステムによる重鎖２３４Ａｌａ及び／又は２３５Ａｌａを含むように遺伝子操作されている。
本発明のさらに好ましい実施形態によれば、上記のようなコンジュゲートの抗体は、ＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ、２３４Ａｌａおよび２３５Ａｌａを含むように遺伝子操作されており、前記リンカーは、存在する場合、または前記アマトキシンは、前記重鎖２６５Ｃｙｓ残基を介して前記抗体に連結される。
本発明の特に好ましい実施形態によれば、上記のようなコンジュゲートの抗体は、配列番号１０または１１によるアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは配列番号１０または１１によるアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号１０または１１に記載のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む。
配列番号１０によるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１２によるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体を、本明細書では「ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－Ｄ２６５Ｃ」と呼ぶ。この抗体の重鎖は、遺伝子操作された、ＥＵ番号付けシステムによる２６５Ｃｙｓ残基を含む。
配列番号１１によるアミノ酸配列からなる重鎖と配列番号１２によるアミノ酸配列からなる軽鎖を含む抗体を、本明細書では「ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ」と呼ぶ。この抗体の重鎖は、遺伝子操作された、ＥＵ番号付けシステムによる２３４Ａｌａおよび２３５Ａｌａ残基と２６５Ｃｙｓ残基を含む。
本発明の好ましい実施形態では、前記コンジュゲートの抗体、または抗体断片もしくは抗体誘導体は、ＣＤ３７分子の細胞外ドメインに結合する。
好ましい実施形態において、本発明は、ＣＤ３７の細胞外ドメインに結合する抗体、または上記の抗体断片もしくは抗体誘導体を含むコンジュゲートに関する。
さらに、本発明によるコンジュゲートは、１０ｘ１０-9 Ｍ、９ｘ１０-9 Ｍ、８ｘ１０-9 Ｍ、７ｘ１０-9 Ｍ、６ｘ１０-9 Ｍ、５ｘ１０-9 Ｍ、４ｘ１０-9 Ｍ、３ｘ１０-9 Ｍ、２ｘ１０-9 Ｍ、好ましくは１０ｘ１０-10Ｍ、９ｘ１０-10Ｍ、８ｘ１０-10Ｍ、７ｘ１０-10Ｍ、６ｘ１０-10Ｍ、５ｘ１０-10Ｍ、４ｘ１０-10Ｍ、３ｘ１０-10Ｍ、２ｘ１０-10Ｍ、より好ましくは１０ｘ１０-11Ｍ、９ｘ１０-11Ｍ、８ｘ１０-11Ｍ、７ｘ１０-11Ｍ、６ｘ１０-11Ｍ、５ｘ１０-11Ｍ、４ｘ１０-11Ｍ、３ｘ１０-11Ｍ、２ｘ１０-11Ｍ又は１ｘ１０-11Ｍより優れたＩＣ50の細胞傷害活性を有することができる。
本発明の一実施形態によれば、前記リンカー、存在する場合、または前記アマトキシンは、前記抗体の天然に存在するＣｙｓ残基のいずれかを介して、好ましくは、前記抗体の鎖間ジスルフィド結合を形成する天然に存在するＣｙｓ残基のいずれかを介して、および／またはジスルフィド結合を介して、前記抗体に連結され、例えば、Ｂｅｈｒｅｎｓら、Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２０１５ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ０２； １２（１１）：３９８６－３９９８に開示されるように行われ得る。
本発明の好ましい実施形態によれば、前記リンカーは、存在する場合、操作されたシステイン残基重鎖１１８Ｃｙｓ、重鎖２３９Ｃｙｓ、および／または重鎖２６５Ｃｙｓのうちの１つ以上を介して前記抗体に連結または結合される。前記リンカーと前記システイン改変抗体とのコンジュゲーションは、例えば、ＷＯ２０１６／１４２０４９ Ａ１に開示されているように行うことができる。
本発明の好ましい実施形態によれば、記載されるような前記コンジュゲートは、リンカーを含み、ここで、前記リンカーは、非切断性リンカーまたは切断可能リンカーであり得る。
いくつかの実施形態では、抗体またはその抗原結合断片とアマトキシンを結合させるリンカーは非切断性である。非切断性リンカーは、分解（例えば、タンパク質分解）に対して耐性がある安定な化学結合からなる。一般に、非切断性リンカーは標的細胞内でのタンパク質分解を必要とし、高い細胞外安定性を示す。本明細書において、使用に適した非切断性リンカーは、さらに、例えば、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、Ｃ1－Ｃ6アルキレン、Ｃ1－Ｃ6ヘテロアルキレン、Ｃ2－Ｃ6アルケニレン、Ｃ2－Ｃ6ヘテロアルケニレン、Ｃ2－Ｃ6アルキニレン、Ｃ2－Ｃ6へテロアルキニレン、Ｃ3－Ｃ6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレンおよびこれらの組み合わせから選ばれる１以上の基であって、それぞれが任意で置換されてよく、および／または、１以上の炭素原子の場所に１以上のヘテロ原子（例えば、Ｓ、Ｎ、またはＯ）を含むことができる。このような基の非限定的な例としては、（ＣＨ2）p、（Ｃ＝Ｏ）（ＣＨ2）p、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ；（ＣＨ2ＣＨ2Ｏ）p）（ｐは各機会に独立して選ばれる１～６の整数である）単位を含む。
いくつかの実施形態において、本発明の非切断性リンカーは、結合、－（Ｃ＝Ｏ）－、－Ｃ（Ｏ）ＮＨ－基、－ＯＣ（Ｏ）ＮＨ－基、Ｃ1－Ｃ6アルキレン、Ｃ1－Ｃ6ヘテロアルキレン、Ｃ2－Ｃ6アルケニレン、Ｃ2－Ｃ6ヘテロアルケニレン、Ｃ2－Ｃ6アルキニレン、Ｃ2－Ｃ6へテロアルキニレン、Ｃ3－Ｃ6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、－（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）p－基（ｐは１～６の整数である）の１つ以上を含む。
いくつかの実施形態において、各Ｃ1－Ｃ6アルキレン、Ｃ1－Ｃ6ヘテロアルキレン、Ｃ2－Ｃ6アルケニレン、Ｃ2－Ｃ6ヘテロアルケニレン、Ｃ2－Ｃ6アルキニレン、Ｃ2－Ｃ6へテロアルキニレン、Ｃ3－Ｃ6シクロアルキレン、ヘテロシクロアルキレン、アリーレン、またはヘテロアリーレンは、任意選択で、Ｏ、ＳおよびＮから選択される１つ以上のヘテロ原子によって中断されていてもよく、またはアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アルカリル、アルキルヘテロアリール、アミノ、アンモニウム、アシル、アシルオキシ、アシルアミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニル、ウレイド、カルバメート、アリール、ヘテロアリール、スルフィニル、スルホニル、水酸化、アルコキシ、スルファニル、ハロゲン、カルボキシ、トリハロメチル、シアノ、水酸化、メルカプト、ニトロからなる群から各機会に独立して選択される１～５の置換基で任意選択で置換されていてもよい。
一実施形態では、本発明の非切断性リンカーは、－（ＣＨ２）n-単位を含み、ｎは２～１２の整数、または２～６の整数、または６～１２の整数、例えば２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２である。
好ましい実施形態において、本発明の非切断性リンカーは－（ＣＨ２）n単位を含み、ここでｎは４、５、または６であり、より好ましくはｎは６である。
特に好ましい実施形態において、本発明の非切断性リンカーは、以下の式で表される－（ＣＨ２）n－（式中、ｎ＝６）である：
いくつかの実施形態によれば、上記に開示された本発明のチオール反応基を含む非切断性リンカーは、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミド、メチルスルホニルベンゾチアゾール、４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イルアミノ基メチルスルホニルフェニルテトラゾールまたはメチルスルホニルフェニルオキサジアゾール、ピリジン－２－チオール、５－ニトロピリジン－２－チオール、メタンチオスルホン酸またはマレイミドから選択される。
好ましい実施形態によれば、チオール反応性基は、以下に描かれるようなマレイミド（マレイミジル部分）である：
好ましい実施形態によれば、チオール反応性基マレイミド（メレイミジル部分）を含む本発明の非切断性リンカーは、本明細書に開示される本発明のアマトキシンとカップリングする前の構造を有し：
非切断性リンカーである１－ｎ－ヘキシルマレイミドと呼ばれることもある。リンカー末端の波線は、アマトキシンとの結合点を示す。リンカーアマトキシンを、本明細書に開示する本発明の抗体の反応性システイン、例えば本明細書に開示する本発明のシステインエンジニアリング抗体の重鎖のＣｙｓ２６５に結合させた後、前記リンカーは以下の構造を有する：
ここで、Ｓは硫黄原子であり、ヒトＣＤ３７に特異的に結合する抗体またはその抗原結合断片内に存在する反応性置換基を表す。リンカー末端の波線は、アマトキシンとの結合点を示す。前述のリンカー部分およびアマトキシン－リンカーコンジュゲートは、本明細書に記載される組成物および方法とともに有用な他のものの中で、例えば、特許出願公開ＷＯ２０１４／０４３４０３ Ａ１号および特許出願公開第ＷＯ２０１７／１４９０７７号に記載されており、これらの各々の開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
本発明による「切断可能リンカー」は、少なくとも１つの切断部位を含むと理解される。本明細書で使用する場合、「切断部位」という用語は、特定の条件下で定義された位置で特定の切断を受けやすい部分を指すものとする。当該条件は、例えば、特定の酵素や、特定の体内または細胞区画における還元的な環境（ｒｅｄｕｃｔｉｖｅ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ）である。例えば、還元条件下で切断するリンカーとしては、例えば、Ｂａｒｇｈら、Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ Ｒｅｖ． ２０１９ Ａｕｇ １２；４８（１６）：４３６１－４３７４に開示されているようなＮ－アシルヒドラゾンベースのリンカーを挙げることができる。還元条件下で切断可能なリンカーとしては、例えばジスルフィドが挙げられる。様々なジスルフィドリンカーが当技術分野で知られており、例えば、以下のものを用いて形成することができる。ＳＡＴＡ（Ｎ－スクシンイミジル－Ｓ－アセチルチオアセテート）、ＳＰＤＰ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）プロピオネート）、ＳＰＤＢ（Ｎ－スクシンイミジル－３－（２－ピリジルジチオ）ブチレート）と ＳＭＰＴ（Ｎ－スクシンイミジル－オキシカルボニル－α－メチル－α－（２－ピリジルジチオ）トルエン）、ＳＰＤＢとＳＭＰＴ （例えば、Ｔｈｏｒｐｅ ｅｔ ａｌ．， １９８７， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．４７：５９２４－５９３１； Ｗａｗｒｚｙｎｃｚａｋ ｅｔ ａｌ．， Ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｉｎ Ｒａｄｉｏｉｍａｇｅｒｙ ａｎｄ Ｔｈｅｒａｐｙ ｏｆ Ｃａｎｃｅｒ （Ｃ． Ｗ．Ｖｏｇｅｌ ｅｄ．， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕ． Ｐｒｅｓｓ， １９８７）．米国特許第４，８８０，９３５号 も参照されたい。共有結合に適したリンカーに関するそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。
一実施形態によれば、本発明による切断可能リンカーは、高鉄（ＩＩ）濃度下で切断され、例えば、鉄（ＩＩ）反応性１，２，４－トリオキソラン足場（ＴＲＸ）を含む。このようなリンカーは、腫瘍細胞内の鉄（ＩＩ）濃度が高いことを特徴とする腫瘍の治療に特に有用であろう。対応するリンカーは、例えばＳｐａｎｇｌｅｒ ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ ． ２０１８ Ｍａｙ ７；１５（５）：２０５４－２０５９ に開示されている。ＡＤＣペイロードのリソソーム放出が所望される場合に例えば使用され得るリンカーには、Ｐｉｌｌｏｗ ｅｔ ａｌ． Ｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．， ２０１７， ８， ３６６-３７０．に開示されているようなジスルフィドコンジュゲートが含まれる。酸性条件下で加水分解可能な代替リンカーとしては、例えばヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾン、シス－アコニットアミド、オルトエステル、アセタール、ケタールなどが挙げられる。（例えば、米国特許第５，１２２，３６８号；同第５，８２４，８０５号；同第５，６２２，９２９号； Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋ ａｎｄ Ｗａｌｋｅｒ， １９９９， Ｐｈａｒｍ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８３：６７－１２３； Ｎｅｖｉｌｌｅら， １９８９， Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１４６５３－１４６６１、共有結合に好適なリンカーに関するそれぞれの開示は、参照によりその全体が本明細書に援用される。このようなリンカーは、血液中のような中性ｐＨ条件下では切断されないが、リソソームのおおよそのｐＨであるｐＨ５．５または５．０以下では切断可能であるか、自己切断を受ける。
本発明による酵素的に切断可能な部分は、「酵素によって切断可能」とも呼ばれる。リンカーの酵素的切断は、本明細書に開示される標的化部分または抗体に結合した毒素カーゴ、または内部移行後のその代謝産物の細胞内放出をもたらす（Ｄｕｂｏｗｃｈｉｋら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ．１３ （２００２） ８５５－６９）．
前記切断可能リンカーは、酵素的に切断可能なリンカー、好ましくはプロテアーゼ切断可能なリンカー、および化学的に切断可能なリンカー、好ましくはジスルフィド橋を含むリンカーからなる群から選択することができる。
本発明の好ましい実施形態によれば、切断部位は、２つ以上のアミノ酸を含む酵素的に切断可能な部分である。好ましくは、前記酵素的に切断可能な部分は、バリン－アラニン（Ｖａｌ－Ａｌａ）、バリン－シトルリン（Ｖａｌ－Ｃｉｔ）、バリン－リジン（Ｖａｌ－Ｌｙｓ）、バリン－アルギニン（Ｖａｌ－Ａｒｇ）のジペプチドを含み、フェニルアラニン－リジン－グリシン－プロリン－ロイシン－グリシン（Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ）またはアラニン－アラニン－プロリン－バリン（Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｖａｌ）ペプチド、またはβ－グルクロニドまたはβ－ガラクトシドを含む。
いくつかの実施形態によれば、前記切断部位は、システインプロテアーゼ、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、スレオニンプロテアーゼ、およびアスパラギン酸プロテアーゼからなる群より選択される少なくとも１つのプロテアーゼによって切断可能であり得る。
システインプロテアーゼは、チオールプロテアーゼとも呼ばれ、求核性のシステインチオールを触媒とする共通の触媒機構を持つプロテアーゼであり、触媒トリアドまたはダイアドである。
メタロプロテアーゼは、触媒機構に金属が関与しているプロテアーゼである。ほとんどのメタロプロテアーゼは亜鉛を必要とするが、コバルトを使用するものもある。金属イオンは、３つの配位子を介してタンパク質に配位する。金属イオンを配位する配位子は、ヒスチジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニンと様々である。４番目の配位は、不安定な水分子が占有している。
セリンプロテアーゼは、タンパク質のペプチド結合を切断する酵素で、酵素の活性部位の求核アミノ酸はセリンである。セリンプロテアーゼは、その構造からキモトリプシン様（トリプシン様）とサブチリシン様の２つに大別される。
スレオニンプロテアーゼは、活性部位にスレオニン（Ｔｈｒ）残基を持つタンパク質分解酵素の一群である。このクラスの酵素の原型はプロテアソームの触媒サブユニットであるが、アシルトランスフェラーゼは収束的に同じ活性部位形状とメカニズムを進化させた。
アスパラギン酸プロテアーゼは、１つ以上のアスパラギン酸残基に結合した活性化水分子を触媒として、ペプチド基質を処理するプロテアーゼ酵素の一種である。一般に、これらは活性部位に高度に保存された２つのアスパラギン酸を持ち、酸性ｐＨで最適に活性化される。ほぼすべての既知のアスパルチルプロテアーゼは、ペプスタチンによって阻害される。
本発明の特定の実施形態において、切断可能部位は、カテプシンＡまたはＢ、マトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ）、エラスターゼ、β－グルクロニダーゼおよびβ－ガラクトシダーゼからなる群から選択される少なくとも１つの薬剤によって切断され、好ましくはカテプシンＢである。
特定の好ましい実施形態では、本発明の酵素的に切断可能なリンカーは： Ｐｈｅ－Ｌｙｓ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｐｈｅ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｐｈｅ－ＣｉｔおよびＶａｌ－Ｃｉｔから選択されるジペプチドを含み、特に、切断可能リンカーが、ジペプチドとアマトキシンとの間のｐ－アミノベンジル（ＰＡＢ）スペーサーをさらに含む。
したがって、本明細書に開示される本発明のコンジュゲートは、上記に開示されるジペプチド－ＰＡＢ部分Ｐｈｅ－Ｌｙｓ－ＰＡＢ、Ｖａｌ－ＬｙｓＰＡＢ、Ｐｈｅ－Ａｌａ－ＰＡＢ、Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢ、Ｐｈｅ－Ｃｉｔ－ＰＡＢ、またはＶａｌ－Ｃｉｔ－ＰＡＢのいずれか１つを含む酵素切断可能リンカーを含み得る。好ましくは、本発明のコンジュゲートの切断可能リンカーは、ジペプチド－ＰＡＢ部分Ｖａｌ－Ａｌａ－ＰＡＢを含む。
ここで、ＰＡＢ部分は、アマトキシンに連結されている。
いくつかの実施形態によれば、上記に開示された本発明のチオール反応基を含むリンカーは、ブロモアセトアミド、ヨードアセトアミド、メチルスルホニルベンゾチアゾール、４，６－ジクロロ－１，３，５－トリアジン－２－イルアミノ基メチルスルホニルフェニルテトラゾールまたはメチルスルホニルフェニルオキサジアゾール、ピリジン－２－チオール、５－ニトロピリジン－２－チオール、メタンチオスルホン酸またはマレイミドから選択される。
好ましい実施形態によれば、チオール反応性基は、以下に描かれるようなマレイミド（マレイミジル部分）である：
特に好ましい実施形態によれば、本発明のリンカーは以下の構造を含む。
本発明の特定の実施形態では、切断部位はジスルフィド結合であり、特定の切断は、還元的環境、例えば、細胞内の還元的環境、例えば、酸性のｐＨ条件によって行われる。
本発明の好ましい実施形態によれば、前記コンジュゲートにおいて、リンカー（存在する場合）または前記標的結合部分が、（ｉ）アマトキシンアミノ酸１のγＣ－原子、または（ｉｉ）アマトキシンアミノ酸３のδＣ－原子、または（ｉｉｉ）アマトキシンアミノ酸４の６’－Ｃ－原子を介して前記アマトキシンに連結される。
本発明の好ましい実施形態において、記載された前記コンジュゲートは、（ｉ）６’－デオキシ位置を有するアミノ酸４と（ｉｉ）Ｓ－デオキシ位置を有するアミノ酸８とを含むアマトキシンを含む。
本発明の特定の好ましい実施形態によれば、前記コンジュゲートは、リンカー－アマトキシン部分として、それぞれ以下の式（Ｉ）～（ＸＩ）の化合物のいずれかを含む：
さらに、本発明の特に好ましい実施形態によれば、前記コンジュゲートは、式（ＸＩＩ）～（ＸＸＩＩ）のいずれか１つに記載の少なくとも１つのアマトキシンリンカー部分にコンジュゲートされた標的結合部分としての抗体を含む：
ここで、前記アマトキシンリンカー部分は、抗体のシステイン残基のチオール基にチオエーテルを介して結合され、ｎは好ましくは１～７、例えば１、２、３、４、５、６、または７であり、好ましくはｎは１、２、または４であり、これによりｎは前記抗体に結合されたアマトキシンリンカー部分の数を示す。反応性マレイミジル残基を含む対応するアマトキシンリンカー部分の抗体のシステイン残基のスルフヒドリル基へのコンジュゲーションは、例えば、Ｊｕｎｔｕｌａら， Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ． ２００８ Ａｕｇ；２６（８）：９２５－３２に記載の方法に従って行うことができる。
本発明の最も特に好ましい実施形態によれば、前記コンジュゲートは、以下からなる群から選択される：
（ｉ）式（ＸＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＩＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるかまたはそれを含み、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含む、コンジュゲート（ＸＸＩＩＩ）、
（ｉｉ）式（ＸＩＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＩＶ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＩＶ）、
（ｉｉｉ）式（ＸＩＶ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶ）、
（ｉｖ）式（ＸＶ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶＩ）、
（ｖ）式（ＸＶＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶＩＩ）、
（ｉｖ）式（ＸＶＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶＩＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶＩＩＩ）、
（ｖｉｉ）式（ＸＶＩＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＩＸ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＩＸ）、
（ｖｉｉｉ）式（ＸＩＸ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸ）、
（ｉｘ）式（ＸＸ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸＩ）、
（ｘ）式（ＸＸＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸＩＩ）、
（ｘｉ）式（ＸＸＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸＩＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸＩＩＩ）、
ここで、ｎは、コンジュゲート（ＸＸＩＩＩ）から（ＸＸＸＩＩＩ）について１～２である。例えば、コンジュゲート（ＸＸＩＩＩ）～（ＸＸＸＩＩＩ）は、重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基にチオエーテル結合を介して連結された、本明細書に開示されるようなアマトキシン－リンカー部分（ＸＩＩ）～（ＸＸＩＩ）のいずれか１つ（ｎ＝１）、または２つ（ｎ＝２）を含み得る。従って、上記に開示された本発明のコンジュゲートは、ｎ＝１の場合はＤＡＲ＝１、ｎ＝２の場合はＤＡＲ＝２の薬物対抗体比（ＤＡＲ）を有することができる。
一実施形態によれば、本発明は、抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用するための抗体を提供し、ここで、抗体は、２つの重鎖を含み、各重鎖は、配列番号７に対応するか、またはそれと少なくとも９０％、９５％類似するアミノ酸配列を含むか、またはそれらからなり、２つの軽鎖を含み、各軽鎖は配列番号８に対応するか、またはそれと少なくとも９０％、９５％類似しているアミノ酸配列を含む。
好ましい実施形態によれば、上記に開示した本発明による抗体－薬物コンジュゲートの製造に使用するための抗体は、２つの重鎖を含み、各重鎖は、好ましくは配列番号９、より好ましくは、配列番号１０、または配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含み、および２本の軽鎖を含み、各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含む。
例えば本明細書に開示されるような抗体－薬物コンジュゲートの製造における本発明抗体の使用は、高収率および高純度で部位特異的抗体－薬物コンジュゲートを達成するために、抗体のＣｙｓ２６５へのマリミド－スルフヒドリル結合を介して、本明細書に開示されるリンカー－アマトキシンコンジュゲートのようなリンカー－毒素コンジュゲートの部位特異的コンジュゲートを達成するために特に有利である。さらに、アミノ酸置換Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａは、ＦｃγＲＩ、ＩＩ、ＩＩに対する本発明の抗体の結合を低下させ、それにより抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、ならびに補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）である前記抗体のエフェクター機能を低下させる。得られたコンジュゲートの純度および／または均一性、例えばＤＡＲ＝１またはＤＡＲ＝２に制御されたコンジュゲートの純度および／または均一性、およびエフェクター機能の低減の両方が、本発明の抗体－薬物コンジュゲートの治療指数（ＴＩ）を大きくする。本明細書で使用する「治療指数」という用語は、個体の５０％が薬物の毒性作用を示す毒性量と、個体の５０％が治療効果を示す最小濃度または薬物量との比を意味する。ＴＩは、例えば、ＴＩ＝ＴＤ５０：ＥＤ５０と表されることもあり、薬剤の相対的な安全性の定量的測定値である。治療効果をもたらす治療薬の量と、毒性をもたらす量の比較である。したがって、ＴＩ値が大きいほど、ある薬物の相対的な安全性が高いことになる。
別の態様によれば、本発明は、上記のようなコンジュゲートを含む医薬組成物を提供する。
前記医薬組成物は、さらに、１つ以上の薬学的に許容される緩衝剤、界面活性剤、希釈剤、担体、賦形剤、充填剤、結合剤、潤滑剤、滑沢剤、崩壊剤、吸着剤、および／または保存剤を含むことができる。
水性形態では、前記医薬製剤は投与準備済みであり得るが、一方、凍結乾燥形態では、前記製剤は、投与前に、例えば、これに限定されないが、例えば、ベンジルアルコールのような防腐剤、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、パルミチン酸レチニル、セレニウムなどの抗酸化剤、アミノ酸のシステインとメチオニン、クエン酸とクエン酸ナトリウム、パラベンのメチルパラベンとプロピルパラベンのような合成保存剤を含んでいても含んでいなくてもよい注射用水の添加によって液体形態に移すことができる。
前記医薬製剤は、さらに、例えばアミノ酸、糖ポリオール、二糖類および／または多糖類であり得る１つ以上の安定剤を含み得る。前記医薬製剤は、１つ以上の界面活性剤、１つ以上の等張化剤、および／または１つ以上の金属イオンキレート剤、および／または１つ以上の防腐剤をさらに含むことができる。
本明細書に記載される医薬製剤は、少なくとも静脈内、筋肉内または皮下投与に適している。あるいは、本発明による前記コンジュゲートは、一定期間にわたる生物学的に活性な薬剤の持続的放出を可能にするデポ剤で提供されてもよい。
本発明のさらに別の態様では、充填済み注射器もしくはペン、バイアル、または注入バッグのような一次包装が提供され、これは、本発明の以前の態様による前記製剤を含む。
充填済み注射器またはペンは、凍結乾燥形態（次いで、投与前に、例えば注射用水で溶解されなければならない）、または水性形態のいずれかで製剤を含有していてもよい。前記注射器またはペンは、単回使用のみのディスポーザブルの物品であることが多く、容量が０．１～２０ｍｌの場合がある。しかしながら、注射器またはペンは、多回使用または多回投与注射器またはペンでもよい。
前記バイアルはまた、凍結乾燥形態または水性形態の製剤を含有していてもよく、単回または複数回の使用装置として役立つことがある。複数回使用装置として、前記バイアルはより大きな容量を有することができる。
本明細書に開示される本発明による医薬組成物は、例えば、輸液バッグを介して投与するために提供され得る。輸液バッグは、通常、水性形態の製剤を含み、２０ｍｌ、５０ｍｌ、７５ｍｌ、１００ｍｌおよび１２５ｍｌ、２５０ｍｌ、３００ｍｌ、５００ｍｌ、７５０ｍｌ、１０００ｍｌ、２５００ｍｌ、５０００ｍｌの間、または１２５ｍｌ、２５０ｍｌと５００ｍｌ、６００ｍｌ、７５０ｍｌの間の容量を有することができる。
本発明の別の態様によれば、本発明は、Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療に使用するための、特に、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＤＢＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を含む非ホジキンリンパ腫のサブタイプ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リヒター症候群、原発性皮膚辺縁帯リンパ腫（ＰＣＭＺＬ）、ヘアリー細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、リウマチ関節炎、多発血管炎性および顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、および尋常性天疱瘡の治療に使用するための、本明細書に開示される前記コンジュゲートまたは医薬組成物に関する。
一実施形態によれば、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患は、染色体１７ ｐ１３．１の欠失によって特徴付けられ、それによって欠失はヘミ接合型またはホモ接合型（ヌル接合型）である。
従って、本明細書に開示される本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物で治療されるべき、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患のＢ細胞は、染色体１７ ｐ１３．１の欠失によって特徴付けられ、それによって欠失はヘミ接合型またはホモ接合型である。本明細書で使用する「欠失」という用語は、染色体１７ｐ１３．１のゲノム遺伝子座全体の欠損、またはＴＰ５３遺伝子およびＰＯＬＲ２Ａ遺伝子を包含する少なくとも１、２、３、４、５、６、７Ｍｂの欠損を指す。前記Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患は、例えば、ｔ（１１；１４）、ｔ（４；１４）、ｔ（１４；１６）またはｔ（１４；２０）のような転座のような、さらなる細胞遺伝学的異常を保持している可能性がある。
多発性骨髄腫に対する標準治療の選択肢には、例えば、Ｒａｊｋｕｍａｒ ａｎｄ Ｋｕｍａｒ Ｂｌｏｏｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ （２０２０） １０：９４に記載されているものが含まれる。
一実施形態によれば、例えば本明細書に開示される本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物で治療され得る、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患のＢ－細胞は、ＰＯＬＲ２Ａ遺伝子、またはＴＰ５３遺伝子およびＰＯＬＲ２Ａ遺伝子のヘミ接合型欠損によって特徴付けられる。本発明で用いる「ヘミ接合型」という用語は、遺伝子または染色体セグメントの対立遺伝子が通常の２つではなく、１つしかない個体または細胞を指す。ヘミ接合体（ｈｅｍｉｚｙｇｏｔｅ）とは、野生型か変異型かを問わず、ある遺伝子座に１つの完全な対立遺伝子のみを含むゲノムを持つ細胞または生物を指す。例えば、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の細胞は、染色体座１７ｐ１３のヘミ接合体であり、好ましくは、上記に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の細胞は、遺伝子ＴＰ５３およびＰＯＬＲ２Ａのヘミ接合体である。本明細書で使用する「ＴＰ５３」は、転写活性化、ＤＮＡ結合、オリゴマー化ドメインを含む腫瘍抑制タンパク質（Ｐ５３）をコードする「腫瘍タンパク質５３」遺伝子を指す。コードされたタンパク質は、様々な細胞ストレスに応答して標的遺伝子の発現を制御し、それによって細胞周期の停止、アポトーシス、老化、ＤＮＡ修復、あるいは代謝の変化を誘導する。この遺伝子の変異は、Ｌｉ－Ｆｒａｕｍｅｎｉ症候群のような遺伝性の癌を含む、ヒトの様々な癌と関連している。
腫瘍抑制遺伝子ＴＰ５３は、ヒト腫瘍の大部分において変異や欠失によって不活性化されることが多い。本明細書で使用する「ＰＯＬＲ２Ａ」とは、ヒトＲＮＡポリメラーゼＩＩ複合体の最大サブユニットをコードし、ｍＲＮＡ合成におけるポリメラーゼ活性に不可欠なＰＯＬＲ２Ａ遺伝子のことである。１７ｐ１３染色体のヘミ接合型欠損、例えばｄｅｌ（１７ｐ１３．１） は、Ｍｅｒｚら． Ａｍ Ｊ Ｈｅｍａｔｏｌ．２０１６ Ｎｏｖ；９１（１１）：Ｅ４７３－Ｅ４７７に開示されているように、蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）によって検出することができる。
上記に開示されたＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の細胞は、例えば、ＴＰ５３および／またはＰＯＬＲ２Ａの欠失に関して均質な細胞群ではない可能性がある。例えば、約５％、７．５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、５０％、６０％から約７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、または約７０％、７５％、８０％、８５％から約９０％、９２．５％、９５％、９７．５％、１００％の細胞が、上記に開示したＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患のｄｅｌ（１７ｐ１３． １）、ＴＰ５３および／またはＰＯＬＲ２Ａについてヘミ接合型であるか、または例えば、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介性自己免疫疾患の細胞の少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、９０％、９５％が、ｄｅｌ（１７ｐ１３）、またはＴＰ５３および／またはＰＯＬＲ２Ａについてヘミ接合型である。染色体１７ｐ１３．１、またはＴＰ５３および／もしくはＰＯＬＲ２Ａのヘミ接合型欠損を特徴とするＢリンパ球関連悪性腫瘍の治療に使用するための本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物は、特に有利である。染色体１７ｐ１３．１、ＴＰ５３および／またはＰＯＬＲ２Ａのヘミ接合型欠損を特徴とする細胞は、本明細書に開示される本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物に対して、少なくとも１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、１０００倍感受性であるからである。したがって、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患が、ＴＰ５３および／またはＰＯＬＲ２Ａの欠損についてヘミ接合型である細胞を含むか、またはそのような細胞からなるかどうかを決定することは有益であり得、本明細書に開示される本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物の少なくとも１０倍、２５倍、５０倍、１００倍、２５０倍、５００倍、または１０００倍少ない量が、所望の治療効果を達成するために使用され得るからである。本明細書に開示される本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物に対する感受性を評価するためのアッセイは、例えば、Ｎａｔｕｒｅ２０１５ Ａｐｒｉｌ ３０； ５２０（７５４９）：６９７－７０１に記載されるように行うことができる。
一態様によれば、本明細書に開示されるコンジュゲートまたは医薬組成物は、上記に開示されるように、Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療において免疫チェックポイント阻害剤と併用される。本発明に関して、用語「免疫チェックポイント阻害剤」または単に「チェックポイント阻害剤」または「ＩＣＩ」は、直接的または間接的に、免疫細胞の表面上に見出される免疫チェックポイント受容体タンパク質または分子のレベルを低下させ、またはその機能を阻害する任意の薬剤または化合物を指す（例えば、Ｔ細胞）、または、直接または間接的に、可溶性化合物または免疫細胞阻害細胞の表面で、前記免疫チェックポイント受容体タンパク質または分子に結合するリガンドのレベルを低下させ、またはその機能を阻害する薬剤または化合物に適用される。このような抑制細胞は、例えば、癌細胞、制御性Ｔ細胞、寛容原性抗原提示細胞、骨髄由来抑制細胞、腫瘍関連マクロファージ、または癌関連線維芽細胞であり得る。前記リガンドは、通常、免疫細胞上の免疫チェックポイント受容体タンパク質又は分子を結合することができる。免疫チェックポイント受容体タンパク質－リガンドペアの非限定的な例として、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１が挙げられる。ＰＤ－１は、Ｔ細胞に存在する免疫チェックポイント受容体タンパク質である。癌細胞で過剰発現するＰＤ－Ｌ１は、ＰＤ－１と結合し、癌細胞が宿主の免疫システムの攻撃を回避するのを助ける。したがって、免疫チェックポイント阻害剤は、Ｔ細胞上のＰＤ－１を阻害する（すなわち、ＰＤ－１阻害剤として作用する）か、癌細胞上のＰＤ－Ｌ１を阻害する（すなわち、ＰＤ－Ｌ１阻害剤として作用する）ことにより、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１相互作用を防ぎ、それによって抗腫瘍Ｔ細胞活性を維持または回復するか、阻害癌細胞活性を阻害する。
免疫チェックポイント受容体または分子には、限定されないが、例えば、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＬＡＧ－３、ＴＩＭ－３、ＴＩＧＩＴ、ＶＩＳＴＡ、ＯＸ４０、ＧＩＴＲ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２７６（Ｂ７－Ｈ３）、Ｂ７－Ｈ４（ＶＴＣＮ１）、ＩＤＯ、ＫＩＲ、ＣＤ１２２、ＣＤ１３７ 、ＣＤ９４／ＮＫＧ２Ａ、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ガレクチン－３、ＬＳＥＣｔｉｎ、ＣＤ１１２、Ｃｅａｃａｍ－１、Ｇａｌ－９、ＰｔｄＳｅｒ、ＨＭＧＢ１、ＨＶＥＭ、ＣＤ１５５ およびＢＴＬＡ （ＣＤ２７２）を含む。
免疫チェックポイント阻害剤は、上記で開示したような免疫阻害受容体、例えばＰＤ－１の拮抗薬を含み、この場合、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路のＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１を阻害する。ＰＤ－１またはＰＤ－Ｌ１阻害剤の例としては、限定されないが、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、セミピリマブ、ＪＴＸ－４０１４、スパルタリズマブ、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２、ＷＢＰ－２８５）、ＩＮＣＭＧＡ０００１２（ＭＧＡ０１２）、ＡＭＰ－２２４、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、ＢＣＤ－１００、ＡＧＥＮ－２０３４、トリパリマブ（ＴＡＢ００１、ＪＳ００１）、またはＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）などのヒトＰＤ－１機能に拮抗または阻害するヒト化抗体またはヒト抗体、さらにＰＤ－１をブロックするニボルマブ、ＰＤ－Ｌ１をブロックするアベルマブ、デュルバルマブ、コシベリマブ（ＣＫ－３０１）、ＷＢＰ－３１５５（ＣＳ１００１）、アテゾリズマブ、組換え抗ＰＤ－Ｌ１プロボディＣＸ－０７２のような完全ヒト抗体を挙げることができる。
ペムブロリズマブ（旧称ラムブロリズマブ；商品名キイトルーダ；別名ＭＫ－３４７５）は、Ｈａｍｉｄ， Ｏ． ｅｔ ａｌ．（２０１３） Ｎｅｗ Ｅｎｇｌａｎｄ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３６９（２）：１３４－４４に開示されており、ＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ４モノクローナル抗体であり、Ｆｃ媒介細胞傷害性を阻止するように設計されたＣ２２８Ｐの変異を含んでいる。ペムブロリズマブは、例えばＵＳ８，３５４，５０９及びＷＯ２００９／１１４３３５に開示されている。切除不能または転移性メラノーマに罹患している患者、および転移性ＮＳＣＬＣの患者の治療薬としてＦＤＡに承認されている。
ニボルマブ（ＣＡＳ Ｒｅｇｉｓｔｒｙ Ｎｕｍｂｅｒ：９４６４１４－９４－４； ＢＭＳ－９３６５５８またはＭＤＸ１１０６ｂ）は、検出可能な抗体依存性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を欠き、ＰＤ－１を特異的にブロックする完全ヒトＩｇＧ４モノクローナル抗体である。ニボルマブは、例えばＵＳ８，００８，４４９およびＷＯ２００６／１２１１６８に開示されている。切除不能または転移性メラノーマ、転移性ＮＳＣＬＣ、進行性腎細胞癌に罹患している患者の治療薬としてＦＤＡの承認を取得している。
ピジリズマブ（ＣＴ－０１１、Ｃｕｒｅ Ｔｅｃｈ）は、ＰＤ－１に結合するヒト化ＩｇＧ１ｋモノクローナル抗体である。ピジリズマブは、例えば、ＷＯ２００９／１０１６１１に開示されている。
ＰＤ１－１～ＰＤ１－５は、ＷＯ２０１８／２２０１６９に開示されている抗ＰＤ－１抗体を指す。
本明細書で使用するＩＮＮは、本明細書で開示する対応するオリジネーター抗体のすべてのバイオシミラー抗体も包含することを意味し、米国の４２ＵＳＣ§２６２サブセクション（ｋ）および他の法域の同等の規制で承認されたバイオシミラー抗体を含むがこれに限定されない。
本明細書に開示された本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物と組み合わせて本発明に従って使用するための免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、低分子（有機）化合物またはペプチドもしくは核酸のような高分子であってもよい。例えば、本発明による低分子免疫チェックポイント阻害剤には、ＷＯ１５０３３３０１ Ａ１に開示されているような、その前駆体ＡＵＮＰ－１２を含むＣＡ－１７０；または例えばＢＭＳ－８（ＣＡＳ番号１６７５２０１－９０－７）などがある。本発明の少なくとも１つの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体である。好ましい実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、モノクローナル抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体である。
本発明のいくつかの実施形態において、本明細書に開示されるようなＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療に使用するための本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物は、本明細書に開示されるような２つの免疫チェックポイント阻害剤と併用され得るか、またはこれらを含み得る。例えば、本明細書に開示されるコンジュゲートまたは医薬組成物は、異なる免疫チェックポイント、例えば、ＣＴＬＡ－４およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＴＩＧＩＴ、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＯＸ４０、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ、ＣＴＬＡ４およびＴＩＧＩＴ、ＣＴＬＡ４およびＯＸ４０を標的とする２つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わされるか、またはこれらを含むことが好ましい。したがって、本発明によるコンジュゲートまたは医薬組成物は、例えば、以下の免疫チェックポイント阻害剤の組み合わせの１つと組み合わせることができるか、または含むことができる：
ＣＴＬＡ４ － ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１：
ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたイピリムマブ
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＴＩＧＩＴ：
ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたチラゴルマブ；または、ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたＢＭＳ９８６２０７；
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＯＸ４０：
ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたＢＭＳ９８６１７８；
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１およびＶＩＳＴＡ
ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたＣＩ－８９９３；
ＯＸ４０およびＰＤ－１／ ＰＤ－Ｌ１：
ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたＭＥＤＩ０５６２、またはニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピディリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたＰＦ０４５１８６００；
ＴＩＭ－３およびＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１：
ニボルマブ、アベルマブ、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５、デュルバルマブ、アテゾリズマブのいずれかと組み合わせたＭＢＧ４５３；
ＣＴＬＡ４およびＴＩＧＩＴ：
チラゴルマブまたはＢＭＳ９８６２０７のひとつと組み合わせたイピリムマブ。
ＣＴＬＡ４およびＯＸ４０：
ＭＥＤＩ０５６２、またはＰＦ０４５１８６００のひとつと組み合わせたイピリムマブ。
本発明によるコンジュゲートまたは医薬組成物が１つの免疫チェックポイント阻害剤と組み合わされるか、または１つの免疫チェックポイント阻害剤のみを含む場合、上記に開示されたＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１およびＣＴＬＡ４阻害剤の群から選択されるチェックポイント阻害剤が好ましい免疫チェックポイント阻害剤である。したがって、一実施形態において、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療における使用のために、本明細書に開示される本発明によるコンジュゲートは、好ましくは、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、セミピリマブ、ＪＴＸ－４０１４、スパルタリズマブ、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２、ＷＢＰ－２８５）、ＩＮＣＭＧＡ０００１２（ＭＧＡ０１２）、ＡＭＰ－２２４、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４．ＰＤ１－５、ＢＣＤ－１００、ＡＧＥＮ－２０３４、トリパリマブ（ＴＡＢ００１、ＪＳ００１）、またはＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）、アベルマブ、デュルバルマブ、コシベリマブ（ＣＫ－３０１）、ＷＢＰ－３１５５（ＣＳ１００１）、およびアテゾリズマブ、ＣＸ－０７２、イピリムマブの一つと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介性自己免疫疾患の治療における使用のために、本発明の医薬組成物は、好ましくは、ペムブロリズマブ、ピジリズマブ、セミピリマブ、ＪＴＸ－４０１４、スパルタリズマブ、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２、ＷＢＰ－２８５）、ＩＮＣＭＧＡ０００１２（ＭＧＡ０１２）、ＡＭＰ－２２４、ＰＤ１－１、ＰＤ１－２、ＰＤ１－３、ＰＤ１－４、ＰＤ１－５．ＢＣＤ－１００、ＡＧＥＮ－２０３４、トリパリマブ（ＴＡＢ００１、ＪＳ００１）、またはＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）、アベルマブ、デュルバルマブ、コシベリマブ（ＣＫ－３０１）、ＷＢＰ－３１５５（ＣＳ１００１）、およびアテゾリズマブ、ＣＸ－０７２、イピリムマブの一つと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫；原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫、古典的ホジキンリンパ腫；多発性骨髄腫の治療に使用するために、ペムブロリズマブと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、
Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、または濾胞性リンパ腫の治療に使用するために、ニボルマブと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、
濾胞性リンパ腫、またはマントル細胞リンパ腫の治療に使用するために、イピリムマブと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、古典的ホジキンリンパ腫；Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫；多発性骨髄腫の治療に使用するために、イピリムマブおよびニボルマブと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫の治療に使用するために、アテゾリズマブと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫の治療に使用するためにアベルマブと併用される。
一実施形態によれば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、マントル細胞リンパ腫の治療に使用するためにデュルバルマブと併用される。
一実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるような患者におけるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療における使用のための、本明細書に開示されるような本発明の医薬組成物に関し、任意選択で、本明細書に開示されるような免疫チェックポイント阻害剤の投与を含み、ここで、患者は、治療レジメンＲ－ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ、ハイパー－ＣＶＡＤ、またはＣＶＤのうちの１つによる事前の標準治療を受けている。
例えば、標準治療には、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に用いられる標準レジメン、Ｒ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ＋シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）が含まれる。マントル細胞リンパ腫の標準治療には以下のようなものがある。１）シクロホスファミド、ビンクリスチン、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、デキサメタゾンを含む「ハイパー－ＣＶＡＤ」治療レジメンと、高用量メトトレキサート＋シタラビンの交互投与、または ２） リツキシマブとシタラビンを交互に投与する「用量強化型」Ｒ－ＣＨＯＰ（リツキシマブ、シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）、または ３）ＲＤＨＡＰ（リツキシマブ、デキサメタゾン、シタラビン、シスプラチン）。濾胞性リンパ腫（ＦＣ）の標準治療は、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン）またはＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン）レジメンと併用したリツキシマブまたはオビヌツズマブによる治療を含み得る。
非ホジキンリンパ腫に対する標準治療は、例えば、リツキシマブ、オビヌツズマブ、オファツムマブ、またはイブリツモマブ・チウキセタン単独、またはＣＨＯＰ治療レジメンであるシクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチン、プレドニゾン、またはＣＶＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン）による化学療法との併用治療を含み得る。
本明細書に開示される治療選択肢と共に使用される用語「組み合わせる」または「併用」およびその文法的等価物は、本明細書に開示される本発明の医薬組成物および本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤の連続適用または併用適用を指す。例えば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物を最初に投与し、その後に本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤を投与してもよいし、本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤を最初に投与し、その後に本発明の医薬組成物を投与してもよい。本明細書で開示される本発明の医薬組成物および免疫チェックポイント阻害剤の連続投与は、前記医薬組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤の１５分、３０分、４５分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、１２時間、２４時間、４８時間、７２時間の投与レジメンを意味し、いずれの順序で最初に投与されるかにかかわらず、前記医薬組成物および前記免疫チェックポイント阻害剤は、例えば、同一の治療レジメンまたは治療サイクル内で投与することもできる。併用投与とは、本発明の医薬組成物と本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤とを同時に、または互いに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０分以内に投与する投与レジメンを指すものとする。前述の投与レジメンはすべて、本発明による「組み合わせ」とみなされる。
本発明は、Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療のための医薬、特に非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＤＢＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を含む非ホジキンリンパ腫のサブタイプ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リヒター症候群、原発性皮膚辺縁帯リンパ腫（ＰＣＭＺＬ）、ヘアリー細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、リウマチ関節炎、多発血管炎性および顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、尋常性天疱瘡の治療のための医薬の製造における、上記のようなコンジュゲートまたは医薬組成物の使用に関する。
一実施形態によれば、上記に開示した本発明のコンジュゲートまたは本発明の医薬組成物は、リヒター症候群の治療に使用することができる。リヒター症候群は、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）／小リンパ球性リンパ腫から、侵攻性リンパ腫、最も一般的なびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）への変化と定義される。ＣＬＬ患者の約２％～１０％にみられるリヒター症候群は侵攻性が強く、治療抵抗性であることが多く、診断後の生存期間は約８～１４ヵ月と予後不良である。症例の約８０％は基礎疾患であるＣＬＬとクローン的に関連しているが、残りの２０％の患者はクローン的に非関連なＤＬＢＣＬであり、ｄｅ ｎｏｖｏ ＤＬＢＣＬと同様に予後が良好である（Ｖａｉｓｉｔｔｉｅｔ ａｌ２０１８）。生殖細胞系列の遺伝的特徴、臨床的特徴、ＣＬＬ Ｂ細胞の生物学的および体細胞遺伝的特徴、特定のＣＬＬ治療法の組み合わせが、リヒター症候群の高いリスクと関連している。
一実施形態では、本発明は、患者におけるリヒター症候群の治療に使用するための、本明細書に開示される本発明の医薬組成物に関し、任意選択で、本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤の投与を含む。例えば、本明細書に開示される本発明の医薬組成物は、任意選択で、本明細書に開示されるびまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）の治療に使用されてきた免疫チェックポイント阻害剤、例えば、イピリムマブ、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブまたはニボルマブと併用することができる。
一実施形態では、本発明は、患者におけるリヒター症候群の治療に使用するための、本明細書に開示される本発明の医薬組成物に関し、任意選択で、本明細書に開示される免疫チェックポイント阻害剤の投与を含み、ここで、患者は、治療レジメンＲ－ＣＨＯＰ、ハイパーＣＶＸＤ、リツキシマブおよびＧＭ－ＣＳＦと、ハイパーＣＶＸＤおよびＭＴＸ／シタラビンの交互投与との組み合わせ；またはＯＦＡＲ、または90Ｙ、イブリツモマブ、チウキセタンなどによる放射免疫療法のうちの１つによる先行標準治療を受けている。本明細書で使用する「ハイパーＣＶＸＤ」とは、シクロホスファミド、ビンクリスチン、リポソーム型ダウノルビシン、およびデキサメタゾンの分割投与を含む治療レジメンを指す。「ＯＦＡＲ 」とは、オキサリプラチン、フルダラビン、シタラビン、およびリツキシマブの投与を含む治療レジメンを指す（例えば、Ｔｓｉｍｂｅｒｉｄｏｕ ｅｔ ａｌ． Ｊ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ．２００８ Ｊａｎ １０；２６（２）：１９６－２０３に開示されている通り）。
一実施形態において、本発明は、本明細書に開示されるような患者におけるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療における使用のための、本明細書に開示されるような本発明の医薬組成物に関し、任意選択で、本明細書に開示されるような免疫チェックポイント阻害剤の投与を含み、ここで、前記Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患のＢ細胞は、その細胞表面に１３０，０００未満のＣＤ３７エピトープ、または約３２，５００、３５，０００、４０，０００、４５，０００、５０，０００、６０，０００、７５，０００、１００，０００から約１１０，００、１２０，０００、１２５，０００、１３０，０００、または約１１０，００、１２０，０００、１２５，０００から約１３０，０００のＣＤ３７エピトープを発現する。例えば、ＣＤ３７の細胞表面発現は、Ｅ Ｃａｂｒａｌ Ｆｉｌｈｏ ｅｔ ａｌ． Ｉｎｔ Ｊ Ｎａｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ． ２０１５； １０：４３９３－４４０４に開示されている方法に従って、またはＱｕａｎｔｕｍTM ＭＥＳＦキットを用いて本明細書に開示されているように行うことができる。
一実施形態において、本発明はまた、本明細書に開示されるようなＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患に罹患している患者を治療する方法に関し、該方法は、治療的有効量の本明細書に記載されるような前記コンジュゲートまたは医薬組成物を患者に投与することを含む。
一実施形態において、本明細書に開示されるようなＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患に罹患している患者を治療する本発明方法は、本明細書に開示されるような１以上の免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて、本明細書に記載されるような前記コンジュゲートまたは医薬組成物の治療的有効量を患者に投与することをさらに含む。本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物と、本明細書に開示される１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤は、順次投与することも、併用することもできる。例えば、本明細書に記載のコンジュゲートまたは医薬組成物を最初に投与した後に１つ以上のチェックポイント阻害剤を投与してもよいし、本明細書に記載のコンジュゲートまたは医薬組成物を投与する前に１つ以上のチェックポイント阻害剤を投与してもよい。前記患者に投与される治療方法において使用される１つまたは複数の免疫チェックポイント阻害剤によっては、前記１つまたは複数のチェックポイント阻害剤が順次投与されると有利であり得る。
一実施形態では、本発明は、本明細書に開示されるようなＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患に罹患している患者を治療する方法に関し、本方法は、本明細書に開示されるような１つ以上の免疫チェックポイント阻害剤と任意選択で組み合わせて、本明細書に記載されるようなコンジュゲートまたは医薬組成物の治療的有効量を患者に投与することを含み、ここで、患者は、治療レジメンＲ－ＣＨＯＰ、ＣＨＯＰ、ハイパー－ＣＶＡＤ、またはＣＶＤのうちの１つを含む先行標準治療を受けている。
一実施形態において、本発明は、本明細書中に開示されるような、Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患に罹患した患者を処置する方法に関し、ここで、該方法は、以下の工程を含む。
－ 工程１）方法Ａにより式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）のいずれかに記載のコンジュゲートを製造すること、または方法Ｂにより式（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＸＩＩＩ）のいずれかに記載のコンジュゲートを製造すること：
ＷＯ２０１８／１１５４６６ Ａ１に開示されているように、カップリング試薬２－（１Ｈ－ベンゾトリアゾール－１－イル）－１，１，３，３－テトラメチルアミニウムテトラフルオロボレート（ＴＢＴＵ）、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）、またはＮ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）のうちの１つを使用すること、または
ここで、ａ１）、ａ２）、ｂ１）、ｂ２）、ｂ３）は以下を指す。
ａ１）臭化リンカー、１Ｍ ＮａＯＨ、ＤＭＳＯ； ａ２） １００ ℃， ＤＭＳＯ
ａ１）－ａ２）は、ＷＯ ２０１６／１４２０４９ Ａ１の実施例２に開示されている通りである。
ｂ１）臭化リンカー、Ｎ，Ｎ－ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、水中０．２Ｍ炭酸セシウム；ｂ２） １．） ＴＦＡ、 ２．） アンモニア水；ｂ３）３－（マレイミド）プロピオン酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステル、ＤＩＰＥＡ、ＤＭＦおよびｂ１）～ｂ３）は、ＷＯ２０１９／０３０１７３ Ａ１に記載されている通りである。

－ 工程２）式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、（ＸＩ）、（Ｉ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＸＩＩＩ）のいずれかに記載の化合物を、Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患によって発現されるヒトＣＤ３７に特異的に結合する、本発明に記載の標的結合部分にコンジュゲートすることであり、これによってカップリングは、ＷＯ２０１６／１４２０４９ Ａ１に開示されるように行われる

－ 工程３） 工程２で得られたコンジュゲートを含む医薬組成物を、本明細書に開示されるＢリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介性自己免疫疾患に罹患している患者に投与すること。
一実施形態において、本発明は、リヒター症候群に罹患している患者を治療する方法に関し、該方法は、上記で開示した本発明のコンジュゲートまたは医薬組成物の治療的有効量を前記患者に投与することを含み、該コンジュゲートまたは医薬組成物は、例えば、単剤療法として、または上記で開示した免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与され得る。
一実施形態によれば、本発明は、配列番号１１および／または配列番号１２によるアミノ酸配列をコードするポリヌクレオチドに関する。
一実施形態において、本発明は、配列番号１４および／または配列番号１５を含むポリヌクレオチドに関する。
一実施形態によれば、本発明は、配列番号１１または配列番号１２に記載の少なくとも１つのアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのポリヌクレオチドを含む宿主細胞に関する。本明細書で使用する「宿主」細胞という用語は、本発明のポリヌクレオチドを含む原核細胞または真核細胞を指し、それによってポリヌクレオチドは発現ベクターであってもよい。本発明の宿主細胞が真核細胞、例えば酵母細胞（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｈｗａｎｎｉｏｍｙｃｅｓ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓｌａｃｔｉｓ、Ｙａｒｒｏｗｉａ ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ および Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ）、昆虫細胞（例えば、Ｓｆ９、Ｓｆ２１、Ｓ２、Ｈｉ５またはＢＴＩ－ＴＮ－５Ｂ１－４）であり、より好ましくは、本発明の宿主細胞は、ＨＥＫ２９３、ＨＥＫ２９３Ｔ、ＨＥＫ２９３Ｅ、ＨＥＫ２９３Ｆ、ＮＳ０、ｐｅｒ．Ｃ６、ＭＣＦ－７、ＨｅＬａ、Ｃｏｓ－１、Ｃｏｓ－７、ＰＣ－１２、３Ｔ３、Ｖｅｒｏ、Ｖｅｒｏ－７６、ＰＣ３、Ｕ８７、ＳＡＯＳ－２、ＬＮＣＡＰ、ＤＵ１４５、Ａ４３１、Ａ５４９、Ｂ３５、Ｈ１２９９、ＨＵＶＥＣ、Ｊｕｒｋａｔ、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１、ＭＤＡ－ＭＢ－４６８、ＭＤＡ－ＭＢ－４３５、Ｃａｃｏ－２、ＣＨＯ、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｂ１１、ＣＨＯ－ＤＧ４４、ＢＨＫ、ＡＧＥ１．ＨＮ、Ｎａｍａｌｗａ、ＷＩ－３８、ＭＲＣ－５、ＨｅｐＧ２、Ｌ－９２９、ＲＡＢ－９、ＳＩＲＣ、ＲＫ１３、１１Ｂ１１、１Ｄ３、２．４Ｇ２、Ａ－１０、Ｂ－３５、Ｃ－６、Ｆ４／８０、ＩＥＣ－１８、Ｌ２、ＭＨ１Ｃ１、ＮＲＫ、ＮＲＫ－４９Ｆ、ＮＲＫ－５２Ｅ、ＲＭＣ、ＣＶ－１、ＢＴ、ＭＤＢＫ、ＣＰＡＥ、ＭＤＣＫ．１、ＭＤＣＫ．２、Ｄ－１７から選択される哺乳類細胞である。
配列
本発明は図面および前記の説明において詳細に図示および説明されてきたが、そのような図示および説明は例示または例示的であり、限定的ではないと考えられるべきであり、本発明は開示された実施形態に限定されない。開示される実施形態に対する他の変形形態は、図面、開示、及び添付の特許請求の範囲の研究から、請求される発明を実施する際に当業者によって理解され、実施され得る。特許請求の範囲において、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という語は、他の要素又はステップを排除するものではなく、不定冠詞「ａ（１つの）」又は「ａｎ（１つの）」は複数形を除外するものではない。特定の手段が相互に異なる従属請求項に列挙されているという単なる事実は、これらの手段の組合せを使用して利益を得ることができないことを示すものではない。特許請求の範囲のどの引用符号も、範囲を限定すると解釈するべきではない。
本明細書に開示される全てのアミノ酸配列は、Ｎ末端からＣ末端まで示される；本明細書に開示される全ての核酸配列は、５’－＞３’で示される。

実施例１ アマトキシン抗体コンジュゲートの合成と特性評価
実施例１．１： ＣＤ３７特異的抗体の発現
実施例で使用したＣＤ３７特異的モノクローナル抗体（ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ、ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－Ｄ２６５Ｃ、およびｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ）は、ＣＨＯ細胞で発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーで精製した。達成された収量は約５８ｍｇ／Ｌであった。抗体モノマーを９３．９０％含有し、高分子凝集体はわずか１．５４％～１．８８％であった。
実施例で使用したＣＤ３７特異的モノクローナル抗体（ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ、ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－Ｄ２６５Ｃ、およびｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ）もＨＥＫ２９３細胞で発現させ、プロテインＡクロマトグラフィーとサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）で精製した。達成された収率は約５０ｍｇ／Ｌであった。この製剤には９５．２６％の抗体モノマーが含まれ、高分子凝集体はわずか２．３８％であった。

実施例１．２： アマトキシンリンカー構築物の合成
実施例１．３： 抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの合成
いわゆるチオマブ技術によって、アマトキシンリンカーコンジュゲートに抗体をコンジュゲートした。このアプローチでは、以下の反応スキームに示すように、毒素リンカーコンストラクトのマレイミド残基を抗体のシステイン残基の遊離ＳＨ基に結合することで行われる：
このコンジュゲーション法の原理は、Ｊｕｎｕｔｕｌａ ｅｔ ａｌ （２００８）に開示されており、その内容は参照により本明細書に援用される。
本実験で使用した抗体は、両ＦｃドメインにＤ２６５Ｃ置換を含み、遊離ＳＨ基を有するシステイン残基を付与しているものである。それぞれの技術は、ＷＯ２０１６／１４２０４９ Ａ１に開示されており、その内容は参照により本明細書に援用され、その結果、固定薬物対抗体比（「ＤＡＲ」）が約２である均質な製品および部位特異的コンジュゲーションが得られる。

実施例２： ＣＤ３７特異的抗体ｃｈＨＨ１－ＨＤＰのリンパ腫細胞株への結合
実施例２．１：セルサイトメトリー結合アッセイ
抗ＣＤ３７モノクローナル抗体ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃと、ＣＤ３７陽性Ｂ細胞白血病（Ｂ－ＣＬＬ）細胞株ＭＥＣ－１およびＭＥＣ－２、ならびにヒトバーキットリンパ腫細胞株ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓ、ならびにＣＤ３７陰性であることが知られているヒトＢ細胞前駆白血病細胞株Ｎａｌｍ－６との結合を、蛍光活性化セルソーティング（ＦＡＣＳ）分析により試験した。抗体ｃｈＨＨ１－ＧＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃは、ＣＤ３７陽性のＭＥＣ－１、ＭＥＣ－２、ＲａｊｉおよびＲａｍｏｓ細胞株に強く結合することが示された（図３）。Ｎａｌｍ－６細胞との結合は検出されなかった。
フローサイトメトリーで細胞あたりの抗体結合数（ＡＢＣ）を推定するために、ＢＤ Ｑｕａｎｔｉｂｒｉｔｅ ＰＥ チューブ（Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用した。このチューブはアッセイと同じ装置設定で実行し、ＦＬ２ 軸を細胞あたりの結合 ＰＥ 分子の数に変換できるようにした。ＰＥと抗体の既知の比率を用いることで、細胞あたりのＰＥ分子を細胞あたりの抗体数に変換することができる（Ｉｙｅｒｅｔ ａｌ．１９９７）。結果を表２に示す。
実施例２．２：Ｂｉａｃｏｒｅ結合アッセイ
モノクローナル抗体ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５ＣのＣＤ３７への結合は、表面プラズモン共鳴（Ｂｉａｃｏｒｅ）相互作用解析によって確認された。０．１μＭのｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃを抗Ｆａｂ捕捉（ＦＡＢ２Ｇ）バイオセンサーを用いて捕捉した。あるいは、ビオチン化モノクローナル抗体ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃをストレプトアビジン（ＳＡ）センサーで捕捉した。Ｆｃ融合タグ部分（Ｔｈｒ １０６からＬｙｓ ３３０）と共にＨＥＫ２９３細胞で発現させた、アミノ酸Ａｌａ １１３からＡｓｎ ２４０を含むＣＤ３７コンストラクトを、３１．２５ ｎＭから５００ ｎＭの濃度（１：２希釈ステップ）でセンサーに添加し、ＣＤ３７コンストラクトの結合を評価した。
あるいは、昆虫細胞で発現させたアミノ酸１から２８１を含むＣＤ３７コンストラクトを、モノクローナル抗体ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５ＣのＣＤ３７への結合確認に用いた。

実施例３： 抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの細胞傷害性 ｉｎ ｖｉｔｒｏ
ｉｎ ｖｉｔｒｏ細胞傷害試験は、ＣＤ３７陽性ＭＥＣ－１細胞およびＣＤ３７陽性ＭＥＣ－２細胞（Ｂ－慢性リンパ性白血病）、ＣＤ３７陽性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ細胞、Ｒａｊｉ細胞およびＲａｍｏｓ細胞（バーキットリンパ腫）；およびＣＤ３７陰性Ｎａｌｍ－６細胞（Ｂ細胞前駆白血病）に対して、それぞれ異なる抗ＣＤ３７抗体標的化アマトキシンコンジュゲートを用いて、９６時間インキュベーション後のＣＴＧアッセイまたはＷＳＴ－１アッセイにおいて実施した。結果を図４Ａ（ＭＥＣ－１細胞）、図４Ｂ～Ｇ（ＭＥＣ－２細胞）、図５Ａ～Ｄ（Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ細胞）、図６Ａ～Ｅ（Ｒａｊｉ細胞）、図７Ａ～Ｄ（Ｒａｍｏｓ細胞）に示す。結果は表３にまとめられている。
細胞生存率の定量的決定は、ＣＴＧ（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ Ｇｌｏ ２．０）アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ社製）を用いて行った。これは、代謝的に活性な細胞の存在を示すＡＴＰの定量に基づいて、培養中の生存細胞数を決定する均質な方法である。このアッセイ法を用いると、ルシフェラーゼ反応によって「グロー型」の発光シグナルが生成され、それを検出することができる。
いくつかの実験における細胞生存率の定量的決定は、市販のＷＳＴ－１アッセイ（Ｒｏｃｈｅ）を用いて行った。「細胞増殖試薬」ＷＳＴ－１は、マルチウェルプレートフォーマットを用いた細胞集団における、細胞生存率の分光光度法による定量に使用するように設計されており、わずかに赤色のテトラゾリウム塩ＷＳＴ－１（４－［３－（４－ヨードフェニル）－２－（４－ニトロフェニル）－２Ｈ－５－テトラゾリオ］－１，３－ベンゼンスルホン酸塩）の暗赤色ホルマザンへの切断に基づいている。
試験したすべての抗ＣＤ３７ ＡＴＡＣは、ＣＤ３７陽性細胞株に対してｉｎ ｖｉｔｒｏでピコモル単位の細胞傷害性を示した。ＣＤ３７陰性細胞に対する細胞傷害活性は認められなかった。
実施例４： マウスモデルにおける抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの細胞傷害性ｉｎ ｖｉｖｏ
実施例４．１：播種性ＭＥＣ－２腫瘍異種移植モデルにおける抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの細胞傷害有効性
播種性ＭＥＣ－２腫瘍異種移植モデルを用いて、さまざまな抗ＣＤ３７抗体アマトキシンコンジュゲートを用いたｉｎ ｖｉｖｏ 細胞傷害試験を１４０日間にわたって行った。
研究の概要
腫瘍細胞の接種は、ＣＢ１７ Ｓｃｉｄマウスに２．５ｘ１０6個のＭＥＣ－２細胞をｉ．ｖ．注射して３日目に行った。投与は０日目に、最大耐用量（ＭＴＤ）１／８およびＭＴＤ１／１６の用量で、それぞれ単回ｉ．ｖ．注射により行った。研究の結果は体重と生存率であった。結果を図１０（体重）と図１１（生存率）に示す。治療後１３８日目。コンジュゲートを投与した全群は、対照群とは対照的に、体重が通常通り増加した。
処置グループは表４に定義されている。第１０群（ｃｈＨＨ１－ＧＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ、ｐ．ｏ．、単回投与；１０ｍｇ／ｋｇ）は解析から除外した。第１１群（イブルチニブ）にはイブルチニブがｐ．ｏ．投与された。２５ｍｇ／ｋｇを５回／週で３週間投与。
使用した略語：「ｃｈＨＨ１－ＧＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ」は、配列番号１１および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖をそれぞれ含むコンジュゲートしていない抗体を指す。使用した略語：「ｃｈＨＨ１－ＧＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ」は、配列番号１０および配列番号１２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖および軽鎖をそれぞれ含むコンジュゲートしていない抗体を指す。ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－Ｄ２６５Ｃのような抗体に対する－（ＸＩＩ）のような形の接尾辞は、本明細書で開示されるように前記抗体に連結されたそれぞれのアマトキシン－リンカーコンジュゲートを指す。

実施例４．２：播種性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ腫瘍異種移植モデルにおける抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの細胞傷害有効性
種々の抗ＣＤ３７抗体アマトキシンコンジュゲートを用いて、播種性Ｒａｊｉ－Ｌｕｃ腫瘍異種移植モデルを用い、８９日間にわたるｉｎ ｖｉｖｏ細胞傷害有効性試験を行った。
研究の概要
腫瘍細胞の接種は、３日目にＣＢ１７ Ｓｃｉｄマウスに２．５ｘ１０6個のＲａｊｉ－Ｌｕｃ細胞をｉ．ｖ．注射した。投与は０日目に、最大耐用量（ＭＴＤ）がカニクイザルＭＴＤの１／１６、ＭＴＤが１／６４となるように、それぞれ単回ｉ．ｖ．注射で行った。研究の結果は体重、バイオルミネッセンスおよび生存率であった。処置後８９日目における結果を図１０（体重）、図１１（バイオルミネッセンス）、図１２（生存率）に示す。コンジュゲートを投与した全群は、対照群とは対照的に、体重が通常通り増加した。
治療群は表５の通りである。
要約すると、播種マウス異種移植片腫瘍モデル（ＭＥＣ－２およびＲａｊｉ－Ｌｕｃ）およびＣＤ３７陽性患者由来異種移植片（ＰＤＸ；リヒター症候群）モデルを単回投与実験で行った。
マウス異種移植モデルでは、ＭＥＣ－２モデルで１／１６ ＭＴＤ、Ｒａｊｉ－Ｌｕｃモデルで１／６４ ＭＴＤの２種類の抗ＣＤ３７ ＡＴＡＣで、試験期間中（１００日以上）８０～１００％の全生存率が達成された。０．１ｍｇ／ｋｇという低用量の単回投与は、処置後７日後に迅速かつ完全な腫瘍寛解を引き起こした。試験したＡＴＡＣのマウスにおける忍容性は、＞１５ｍｇ／ｋｇであることが示された。

実施例５：カニクイザルにおける抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの探索的毒性試験 カニクイザル
カニクイザル（Ｍａｃａｃａ ｆａｓｃｉｃｕｌａｒｉｓ）を用いた探索的毒性試験は、異なる抗ＣＤ３７抗体－アマトキシンコンジュゲートを用いて行われた。
１群につき３匹のサル（体重３ｋｇ）が割り当てられた。ＣＨＯ細胞で発現させた抗ＣＤ３７モノクローナル抗体を、異なるアマトキシンリンカー構築物とのコンジュゲーションに使用した。３群に分け、以下のように投与した：
コンジュゲートＸＸＩＩＩ：５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ
コンジュゲートＸＸＩＶ ：１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ
コンジュゲートＸＸＶ ：１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ
アラニントランスアミナーゼ（ＡＬＴ）評価、アスパラギン酸トランスアミナーゼ（ＡＳＴ）評価、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）評価に関する結果を図１３～図１５に示す。
本研究で使用した抗体は、非ヒト霊長類（ＮＨＰ）を含む動物ではＣＤ３７と交差反応性を示さない。そこで、リンカー－アマニチン誘導体を非結合性抗ＤＩＧ抗体に結合させた。この抗ＤＩＧコンジュゲートは、ＮＨＰにおいて標的外毒性が低いことを示す良好な忍容性を示した。血液学および臨床化学パラメータは、肝トランスアミナーゼとＬＤＨを除いて影響を受けなかった。軽度から中等度の一過性の増加が観察された。
結論として、抗ＣＤ３７抗体標的化アマトキシンコンジュゲート（ＡＴＡＣ）を用いることにより、ＣＤ３７陽性細胞株への標的化細胞傷害薬物送達が達成された。ペイロードアマニチンの作用機序は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ およびｉｎ ｖｉｖｏで効率的な抗腫瘍効果をもたらし、ヒト以外の霊長類では良好な忍容性を示した。示された実験データは、ＡＴＡＣをＢ細胞リンパ腫や他のＢ細胞関連悪性腫瘍（リヒター形質転換を受けた悪性腫瘍を含む）の治療に用いることが有望なアプローチであることを示唆している。
実施例６：リヒター症候群（ＲＳ）患者由来異種移植（ＰＤＸ）モデルにおける抗ＣＤ３７アマトキシンコンジュゲートの探索的毒性試験
研究の概要
リヒター症候群の患者由来異種移植片（ＰＤＸ）モデルは、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ （２０１８）； ７８（１３）； ３４１３－２０を改変して使用した。
簡単に説明すると、末梢血またはリンパ節から得た 合計２×１０7個の初代リヒター症候群細胞をマトリゲル（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に懸濁し、８週齢のＣＢ１７ Ｓｃｉｄマウス免疫不全マウスの皮下（両脇腹）に注射し、そのまま生着させた。その後、腫瘍塊を回収し、部分的に破砕し、腫瘍細胞をマトリゲル中の単細胞懸濁液として再注入した。リヒター症候群の安定したモデルを得るために、これらの手順を数回繰り返した。
静脈注射モデルでは、腫瘍塊から精製した１０7個のリヒター症候群細胞をＰＢＳに懸濁し、マウスの尾静脈に注射した。各群ｎ＝４匹のマウスを、図１６Ａに示したように、生着後１５日目に処置した。マウスにＸＸＩＩＩ、ＸＸＩＶまたはＸＸＶＩ結コンジュゲートを指示通りに単回注射した。ＰＢＳ対照群のマウスはすべて、移植後６８日以内に死亡した。コンジュゲートＸＸＶＩを５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｖ．投与した群の１匹は、生着後９０日目に死亡した。その結果、コンジュゲートＸＸＩＩＩ、ＸＸＩＶ、ＸＸＶＩの単回投与は、投与量を変えても忍容性が高く、ＲＳの治療に有効であることが示された。
臓器におけるＲＳ残存疾患活動性の評価
移植動物の臓器に残存するＲＳの疾患活動性を評価するため、マウスを安楽死させ、末梢血と臓器（腎臓、脾臓、骨髄、肺、肝臓、脳）を採取し、抗ヒト抗体（ＣＤ４５ＰｅｒＣＰＣｙ５．５／ＣＤ１９ＡＰＣ／ＣＤ２０ＦＩＴＣ）を用いたフローサイトメトリーで疾患の広がりを評価した。結果を図１６Ｂに示すが、本発明のコンジュゲートの単回投与は、移植動物の臓器からのＲＳ疾患活性を有意に減少させ（コンジュゲートＸＸＩＶの場合、５ｍｇ）、さらには消失させることができる。

実施例７：抗ＣＤ３７抗体の交差反応性の評価
抗ＣＤ３７ ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃとカニクイザル末梢血単核球（ＰＢＭＣ）との交差反応性をフローサイトメトリーで評価した。対照として、ヒトＰＢＭＣを同じ抗体セットで染色した。ＦＡＣＳ解析は標準プロトコールに従って行われた。簡単に説明するとＰＢＭＣを３００μＬの染色培地に懸濁した（３．３ｘ１０5細胞／５０μｌ染色媒体）。各サンプル５０μｌの細胞懸濁液（サンプルあたり３．３ｘ１０5細胞）をＵウェルプレートの１ウェルに分注した。５０μｌの希釈済みアイソタイプおよび抗体溶液を各ウェルの検体に加え、氷上で３０分間インキュベートした後、１００μｌの氷冷ＰＢＳを加え、４℃、３００ｇ、６分間遠心した。得られた上清を捨て、２００μｌの氷冷ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で細胞を洗浄した後、４℃、３００ｇ、６分間の遠心分離を行った。洗浄工程を１回繰り返した。上清を捨て、細胞を１００μｌの二次抗体溶液に再懸濁した。未処置のサンプル（対照）には１００μｌの染色媒体を使用した。細胞を遮光した氷上で３０分間インキュベートした。１００μｌの氷冷ＰＢＳを加え、細胞を４℃、３００ｇ、６分間遠心した。上清を捨て、細胞を２００μｌの氷冷ＰＢＳ（ｐＨ７．４）で２回洗浄し、４℃、３００ｇ、６分間遠心した。その後、上清を捨て、細胞を２００μｌの新しく調製した固定液に懸濁した。細胞は、ＦＡＣＳｕｉｔｅソフトウェアを用いてＢＤ ＦＡＣＳＬｙｒｉｃ装置で解析するまで、４℃で遮光し、固定液中で保存した。その結果を図１７に示すが、ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５ＣはカニクイザルＣＤ３７に特異的な結合を示さない。

使用した抗体
－ 抗ヒトＣＤ３７ ｃｈＨＨ１－ＨＤＰ－ＬＡＬＡ－Ｄ２６５Ｃ １０．０ｍｇ／ｍｌ、４℃で保存、染色媒体で１００μｇ／ｍｌに希釈（１μｌ 抗体希釈液＋９９μＬ 染色媒体）；
－ マウス抗ヒトＣＤ３７（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ 社製）、－２０℃で保存、染色媒体で１：１００希釈（抗体希釈液１μｌ＋染色媒体９９μＬ）
－ ヤギ抗ヒト ＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆａｂ：１．５ｍｇ／ｍｌ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏ；１０９－５４６－００８）（保存：－７０℃）
－ ヤギ抗マウスＩｇＧ（Ｆｃ）－ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８ Ｆ（ａｂ）２－断片：１．５ｍｇ／ｍｌ（ｉｎ ｖｉｔｒｏｇｅｎ：Ａ１１００１）

染色媒体：ＲＰＭＩ １６４０、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、３％ ＦＣＳ、０．０２％ Ｎａ－Ａｚｉｄ
固定液：ＰＢＳ中２％パラホルムアルデヒド


参考文献：
Bargh et al.(2019) Cleavable linkers in antibody-drug conjugates Chem Soc Rev. Aug 12;48(16):4361-4374.

Beckwith KA et al.(2014).The CD37-targeted antibody-drug conjugate IMGN529 is highly active against human CLL and in a novel CD37 transgenic murine leukemia model.Leukemia.Vol. 28(7):1501-1510.

Belov L et al.(2001) Immunophenotyping of Leukemias Using a Cluster of Differentiation Antibody Microarray.Cancer Research Vol. 61:4483-4489.

Brown JR (2018).How I treat CLL patients with ibrutinib.Blood Vol. 131(4):379-386.

Buchman, A.R., et al.(1988) Comparison of intron-dependent and intron-independent gene expression.Mol. Cell. Biol. 8:4395- 4405

Costa, R.A., et al.(2010) Guidelines to cell engineering for monoclonal antibody production.Eur.J. Pharmaceut.Biopharmaceut.74:127-138

Cothia & Lesk, (1987) Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins.J Mol Biol .Aug 20;196(4):901-17

Deckert J et al.(2013).A novel anti-CD37 antibody-drug conjugate with multiple anti-tumormechanisms for the treatment of B-cell malignancies.Blood Vol. 122(20):3500-3510.

Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad.USA, 63, 78-85 (1969).The covalent structure of an entire gammaG immunoglobulin molecule.

English et al.(2020) Ancient species offers contemporary therapeutics: an update on shark VNAR single domain antibody sequences, phage libraries and potential clinical applications.Antibody Therapeutics, Vol. 3, No. 1 1-9

Fuhrman et al.(2014).Ibrutinib Resistance in Chronic Lymphocytic Leukemia.N Engl J Med. doi:10.1056/NEJMc1402716

George B et al.(2020).Ibrutinib Resistance Mechanisms and Treatment Strategies for B-Cell Lymphomas.Cancers Vol. 12:1328; doi:10.3390/cancers12051328.

Hemler ME (2001).Specific tetraspanin functions.The Journal of Cell Biology Vol. 155(7):1103-1107.

Iyer S et al.(1997).Quantibrite:A New Standard for Fluorescence Quantitation.Becton Dickinson Immunocytometry Systems, San Jose, CA.White Paper.

Jager et al.(2013) High level transient production of recombinant antibodies and antibody fusion proteins in HEK293 cells.BMC Biotechnology 13:52
Junutula JR et al.(2008).Site-specific conjugation of a cytotoxic drug to an antibody improves the therapeutic index.Nat Biotechnology Vol. 26:925-932.

Kabat EA, Wu TT, Bilofsky H., et al., Sequence of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda (1983))

Kamle et al (2022) Methods for transient expression and purification of monoclonal antibodies in mammalian cells.Advances in Protein Molecular and Structural Biology Methods p.31-39

Kim, D.W., et al.(1990) Use of the human elongation factor 1 alpha promoter as a versatile and efficient expression system.Gene 91:217-223

Knobeloch KP et al.(2000).Targeted inactivation of the tetraspanin CD37 impairs T-cell-dependent B-cell response under suboptimal costimulatory conditions.Mol Cell Biol.Vol. 20:5363-5369.

Lapalombella R et al.(2012).Tetraspanin CD37 directly mediates transduction of survival and apoptotic signals.Cancer Cell Vol. 21(5):694-708.

Lefranc et al.(2003) IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor variable domains and Ig superfamily V-like domains.Dev Comp Immunol.27:55-77.

Link MP et al.(1986).A unique antigen on mature B cells defined by a monoclonal antibody.J Immunol Vol. 137(9):3013-3018.

Merz et al.(2016) Baseline characteristics, chromosomal alterations, and treatment affecting prognosis of deletion 17p in newly diagnosed myeloma.Am J Hematol.2016 Nov;91(11):E473-E477.

Pillow et al.(2017) Decoupling stability and release in disulfide bonds with antibody-small molecule conjugates.Chem. Sci., 8, 366-370.

Pula B et al.(2019).Overcoming Ibrutinib Resistance in Chronic Lymphocytic Leukemia.Cancers Vol. 11:1834; doi:10.3390/cancers11121834.

Saiz ML et al.(2018).Tetraspanins as Organizers of Antigen-Presenting Cell Function.Frontiers in Immunology Vol. 9:Article 1074.

Schwartz-Albiez R et al.(1988).The B cell-associated CD37 antigen (gp40-52).Structure and subcellular expression of an extensively glycosylated glycoprotein.J Immunol.Vol. 140(3):905-914.

Smeland E et al.(1985).Characterization of Two Murine Monoclonal Antibodies Reactive with Human B Cells.Scand.J. Immunol.Vol. 21:205-214.

Spangler et al.(2018) Toward a Ferrous Iron-Cleavable Linker for Antibody-Drug Conjugates.Mol Pharm .May 7;15(5):2054-2059

Stacchini A et al.(1999).MEC1 and MEC2: two new cell lines derived from B-chronic lymphocytic leukaemia in prolymphocytoid transformation.Leukemia Research Vol. 23:127-136.

Stilgenbauer S et al.(2019).Phase 1 first-in-human trial of the anti-CD37 antibody BI 836826 in relapsed/refractory chronic lymphocytic leukemia.Leukemia Vol. 33:2531-2535.

Tsimberidou et al.(2008) Phase I-II study of oxaliplatin, fludarabine, cytarabine, and rituximab combination therapy in patients with Richter’s syndrome or fludarabine-refractory chronic lymphocytic leukemia.J Clin Oncol.Jan 10;26(2):196-203).

Vaisitti et al.(2018).Novel Richter Syndrome Xenograft Models to Study Genetic Architecture, Biology, and Therapy Responses.Cancer Research Vol. 78:3413-3420.

Van Spriel AB et al.(2004).A Regulatory Role for CD37 in T Cell Proliferation.Journal of Immunology Vol. 172:2953-2961.

Wieland T et al.(1978).Amatoxins, Phallotoxins, Phallolysin, and Antamanide:The Biologically Active Components of Poisonous Amanita Mushroom.CRC Crit Rev Biochem.Vol. 5:185-260.

Xu-Monette ZY et al.(2016).Assessment of CD37 B-cell antigen and cell of origin significantly improves risk prediction in diffuse large B-cell lymphoma.Blood Vol. 128(26):3083-3100.

Zhao X et al.(2007).Targeting CD37-positive lymphoid malignancies with a novel engineered small modular immunopharmaceutical.Blood Vol. 110(7):2569-2577.

Zou F et al.(2018).Expression and Function of Tetraspanins and Their Interacting Partners in B Cells.Frontiers in Immunology Vol. 9.Article 1606.

Claims (28)

  1. （ｉ）標的結合部分、（ｉｉ）少なくとも１つの毒素、および（ｉｉｉ）任意選択で、前記標的結合部分と前記少なくとも１つの毒素とを連結する少なくとも１つのリンカーを含むコンジュゲートであって、前記標的結合部分がＣＤ３７に結合し、前記少なくとも１つの毒素がアマトキシンである、コンジュゲート。
  2. 前記標的結合部分が、
    （ｉ）抗体、好ましくはモノクローナル抗体、
    （ｉｉ）その抗原結合断片、好ましくは可変ドメイン（Ｆｖ）、Ｆａｂ断片またはＦ（ａｂ）2断片、
    （ｉｉｉ）その抗原結合性誘導体、好ましくは単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、および
    （ｉｖ）抗体様タンパク質からなる群より選択され、それぞれＣＤ３７に、好ましくはヒトＣＤ３７に、より好ましくはヒトＣＤ３７の細胞外ドメインに結合する、請求項１に記載のコンジュゲート。
  3. 前記抗体、またはその抗原結合断片もしくは抗原結合誘導体が、それぞれ、マウス抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体もしくはヒト抗体、またはその抗原結合断片もしくは抗原結合誘導体である、請求項２に記載のコンジュゲート。
  4. 前記抗体が、テツロマブ（Ｌｉｌｏｔｏｍａｂ）、オトレルツズマブ（ＴＲＵ－０１６）、およびナラツキシマブ、ＢＩ８３６８２６、またはＧＥＮ３００９からなる群から選択される、請求項２に記載のコンジュゲート。
  5. 前記抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体が、それぞれ
    配列番号１（ＤＹＮＭＹ）に記載のＣＤＲＨ１、
    配列番号２（ＹＩＤＰＹＮＧＤＴＴＹＮＱＫＦＫＧ）に記載のＣＤＲＨ２、
    配列番号３（ＳＰＹＧＨＹＡＭＤＹ）に記載のＣＤＲＨ３、
    配列番号４（ＫＡＳＱＤＶＳＴＡＶＤ）に記載のＣＤＲＬ１、
    配列番号５（ＷＡＳＴＲＨＴ）に記載のＣＤＲＬ２、
    配列番号６（ＲＱＨＹＳＴＰＦＴ）に記載のＣＤＲＬ３
    の相補性決定領域（ＣＤＲ）を含み、
    前記ＣＤＲはＣＤ３７、好ましくはヒトＣＤ３７、最も好ましくはヒトＣＤ３７の細胞外ドメインに結合できるように、適切なタンパク質フレームワークに含有される、請求項２に記載のコンジュゲート。
  6. 前記抗体、またはその抗原結合断片、またはその抗原結合誘導体は、それぞれ、配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは配列番号７に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号７に記載のアミノ酸配列からなる重鎖可変領域、および配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは、配列番号８に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号８に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖可変領域を含む、請求項５に記載のコンジュゲート。
  7. 前記抗体は、配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは配列番号９に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号９に記載のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項５または６に記載のコンジュゲート。
  8. 前記抗体は、ＥＵ番号付けシステムによる重鎖１１８Ｃｙｓ、重鎖２３９Ｃｙｓ、または重鎖２６５Ｃｙｓ、好ましくはＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓを含むように遺伝子操作されており、存在する場合に前記リンカー、または前記アマトキシンはそれぞれ前記重鎖１１８Ｃｙｓ、または重鎖２３９Ｃｙｓ、または重鎖２６５Ｃｙｓ残基を介して前記抗体へ接続される、請求項２～６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  9. 前記抗体が、ＥＵ番号付けシステムによる重鎖２３４Ａｌａおよび／または２３５Ａｌａを含むように遺伝子操作されている、請求項２～６および８のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  10. 前記抗体が、ＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ、２３４Ａｌａおよび２３５Ａｌａを含むように遺伝子操作されており、存在する場合前記リンカーが、または前記アマトキシンが、前記重鎖２６５Ｃｙｓ残基を介して前記抗体に連結される、請求項２～６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  11. 前記抗体は、配列番号１０または１１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは配列番号１０または１１に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号１０または１１に記載のアミノ酸配列からなる重鎖、および配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％の配列類似性、好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列に対して少なくとも９５％の配列類似性を有するか、最も好ましくは、配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなる軽鎖を含む、請求項５または６に記載のコンジュゲート。
  12. 存在する場合前記リンカーは、または前記アマトキシンは、前記抗体の天然に存在するＣｙｓ残基のいずれかを介して、好ましくは、前記抗体の鎖間ジスルフィド結合を形成する天然に存在するＣｙｓ残基のいずれかを介して、および／またはジスルフィド結合を介して、前記抗体に連結される、請求項２～６のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  13. 前記リンカーが非切断性リンカーまたは切断可能リンカーである、請求項１～１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  14. 前記切断可能リンカーは、酵素的に切断可能なリンカー、好ましくはプロテアーゼ切断可能なリンカー、および化学的に切断可能なリンカー、好ましくはジスルフィド橋を含むリンカーからなる群から選択される、請求項１３に記載のコンジュゲート。
  15. 存在する場合前記リンカーまたは前記標的結合部分が、（ｉ）アマトキシンアミノ酸１のγＣ－原子、または（ｉｉ）アマトキシンアミノ酸３のδＣ－原子、または（ｉｉｉ）アマトキシンアミノ酸４の６’－Ｃ－原子を介して、前記アマトキシンに連結される、請求項１～１４のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  16. 前記アマトキシンが、（ｉ）６’－デオキシ位置を有するアミノ酸４および（ｉｉ）Ｓ－デオキシ位置を有するアミノ酸８を含む、請求項１～１５のいずれか一項に記載のコンジュゲート。
  17. 前記コンジュゲートが、リンカー－アマトキシン部分として、それぞれ以下の式（Ｉ）～（ＸＩ）の化合物のいずれかを含む、請求項１～１２のいずれか一項に記載のコンジュゲート：
  18. 前記コンジュゲートが、式ＸＩＩ～ＸＸＩＩのいずれか１つによるチオエーテル結合を介してアマトキシンリンカー部分にコンジュゲートされた標的結合部分としての抗体を含む、請求項２～１２のいずれか１項に記載のコンジュゲート：
    ここで、前記アマトキシンリンカー部分は抗体のシステイン残基のチオール基に結合しており、ｎは好ましくは１～７である。
  19. 前記アマトキシンリンカー部分が抗体のシステイン残基のチオール基に結合され、ｎが１または２である、請求項１８に記載のコンジュゲート。
  20. 前記コンジュゲートが以下からなる群より選択される、請求項２に記載のコンジュゲート。
    （ｉ） 式（ＸＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＩＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列からなるかまたはそれを含み、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列からなるか、またはそれを含む、コンジュゲート（ＸＸＩＩＩ）、
    （ｉｉ） 式（ＸＩＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＩＶ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＩＶ）、
    （ｉｉｉ） 式（ＸＩＶ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶ）、
    （ｉｖ） 式（ＸＶ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶＩ）、
    （ｖ） 式（ＸＶＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶＩＩ）、
    （ｉｖ） 式（ＸＶＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＶＩＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＶＩＩＩ）、
    （ｖｉｉ） 式（ＸＶＩＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＩＸ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＩＸ）、
    （ｖｉｉｉ） 式（ＸＩＸ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸ）、
    （ｉｘ） 式（ＸＸ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸＩ）、
    （ｘ） 式（ＸＸＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸＩＩ）、
    （ｘｉ） 式（ＸＸＩＩ）の少なくとも１つのアマトキシン－リンカー部分に、リンカーのチオエーテル結合を介して、前記抗体のＥＵ番号付けシステムによる重鎖２６５Ｃｙｓ残基のスルフヒドリル基と結合された、２つの重鎖および２つの軽鎖からなる抗体からなるコンジュゲート（ＸＸＸＩＩＩ）であって、標的結合部分として、各重鎖は配列番号１１に記載のアミノ酸配列を有し、および各軽鎖は配列番号１２に記載のアミノ酸配列を有する、コンジュゲート（ＸＸＸＩＩＩ）、
    ここでｎは１～２である。
  21. 請求項１～２０のいずれか一項に記載のコンジュゲートを含む医薬組成物。
  22. さらに、１つ以上の薬学的に許容される緩衝剤、界面活性剤、希釈剤、担体、賦形剤、充填剤、結合剤、潤滑剤、滑沢剤、崩壊剤、吸着剤、および／または保存剤を含む、請求項２１に記載の医薬組成物。
  23. Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療のための、特に非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＤＢＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を含む非ホジキンリンパ腫のサブタイプ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リヒター症候群、原発性皮膚辺縁帯リンパ腫（ＰＣＭＺＬ）、有毛細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、関節リウマチ、多発血管炎性および顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、尋常性天疱瘡の治療のために使用される、請求項１～２０のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項２１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  24. チェックポイント阻害剤と併用される、請求項２３に記載の使用のためのコンジュゲートまたは医薬組成物。
  25. Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患が、ＴＰ５３、ＰＯＬＲ２Ａ、またはｄｅｌ（１７ｐ１３）のヘミ接合型欠損によって特徴付けられる、請求項２３または請求項２４に記載のコンジュゲート、または使用のための医薬組成物。
  26. Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患の治療のための医薬、特に非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、濾胞性リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞非ホジキンリンパ腫（ＤＢＮＨＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）を含む非ホジキンリンパ腫のサブタイプ、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、リヒター症候群、原発性皮膚辺縁帯リンパ腫（ＰＣＭＺＬ）、有毛細胞白血病、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、関節リウマチ、多発血管炎性および顕微鏡的多発血管炎を伴う肉芽腫症、尋常性天疱瘡の治療のための医薬の製造における、請求項１～２０のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項２１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物の使用。
  27. Ｂリンパ球関連悪性腫瘍またはＢ細胞媒介自己免疫疾患に罹患している患者を治療する方法であって、請求項１～２０のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項２１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物の治療有効量を前記患者に投与することを含む、方法。
  28. 請求項２７に記載の患者を治療する方法であって、患者がリヒター症候群に罹患しており、治療的有効量の請求項１～２０のいずれか一項に記載のコンジュゲートまたは請求項２１～２２のいずれか一項に記載の医薬組成物を単剤療法として、または免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて投与することを含む方法。
JP2023557076A 2021-03-19 2022-03-17 Ｂリンパ球特異的アマトキシン抗体コンジュゲート Pending JP2024512478A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP21163784.8 2021-03-19
EP21163784 2021-03-19
PCT/EP2022/056932 WO2022194988A2 (en) 2021-03-19 2022-03-17 B-lymphocyte specific amatoxin antibody conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2024512478A true JP2024512478A (ja) 2024-03-19

Family

ID=75111534

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2023557076A Pending JP2024512478A (ja) 2021-03-19 2022-03-17 Ｂリンパ球特異的アマトキシン抗体コンジュゲート

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20220370632A1 (ja)
EP (1) EP4308169A2 (ja)
JP (1) JP2024512478A (ja)
KR (1) KR20230159480A (ja)
CN (1) CN117241832A (ja)
AR (1) AR125130A1 (ja)
AU (1) AU2022236461A1 (ja)
BR (1) BR112023018189A2 (ja)
CA (1) CA3208117A1 (ja)
CO (1) CO2023012358A2 (ja)
IL (1) IL304966A (ja)
WO (1) WO2022194988A2 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20230355792A1 (en) 2022-04-07 2023-11-09 Heidelberg Pharma Research Gmbh Methods of improving the therapeutic index

Family Cites Families (27)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
WO1997023243A1 (en) 1995-12-22 1997-07-03 Bristol-Myers Squibb Company Branched hydrazone linkers
US6855544B1 (en) 1999-04-15 2005-02-15 Crucell Holland B.V. Recombinant protein production in a human cell
CA2970873C (en) 2005-05-09 2022-05-17 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to programmed death 1 (pd-1) and methods for treating cancer using anti-pd-1 antibodies alone or in combination with other immunotherapeutics
EP3222634A1 (en) 2007-06-18 2017-09-27 Merck Sharp & Dohme B.V. Antibodies to human programmed death receptor pd-1
DE202007018529U1 (de) 2007-07-07 2008-12-04 Chamalow S.A. Implantierbarer Funkfrequenzdefibrillator R.F.
US8747847B2 (en) 2008-02-11 2014-06-10 Curetech Ltd. Monoclonal antibodies for tumor treatment
EP2262837A4 (en) 2008-03-12 2011-04-06 Merck Sharp & Dohme PD-1 BINDING PROTEINS
SI3192529T1 (sl) 2009-04-08 2020-07-31 Faulstich, Heinz Dr. Z amatoksinom ojačane vezne komponente terapevtske celične površine, zasnovane za zdravljenje tumorjev
US20100311116A1 (en) 2009-06-04 2010-12-09 Excellgene Sa Fast generation of high expression stable cell lines expressing recombinant proteins under minimal and short-term selective pressure
EP2311397B1 (de) * 2009-10-15 2012-05-30 W+S Solutions GmbH Drehmomentbegrenzer
US20130088363A1 (en) * 2011-10-06 2013-04-11 Alexander Gonzalez Telemetry Method and System for Well Logging
RU2658438C2 (ru) * 2011-12-13 2018-06-21 Нордик Нановектор Аса Химерное терапевтическое антитело нн1 против cd-37
US20150218220A1 (en) 2012-09-12 2015-08-06 Brian Alan MENDELSOHN Amatoxin derivatives and cell-permeable conjugates thereof as inhibitors of rna polymerase
EP2774624A1 (en) * 2013-03-04 2014-09-10 Heidelberg Pharma GmbH Amatoxin derivatives
RS57559B1 (sr) 2013-09-06 2018-10-31 Aurigene Discovery Tech Ltd 1,3,4-oksadiazol i 1,3,4-tiadiazol derivativi kao imunomodulatori
JP6863900B2 (ja) * 2015-03-09 2021-04-21 ハイデルベルク ファルマ リサーチ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング 新規アマトキシン−抗体コンジュゲート
EP3222292A1 (en) 2016-03-03 2017-09-27 Heidelberg Pharma GmbH Amanitin conjugates
MX2019007604A (es) 2016-12-23 2019-08-16 Heidelberg Pharma Res Gmbh Novedoso conjugado de amanitina.
KR20200013231A (ko) 2017-06-02 2020-02-06 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 항암 조합 요법
US10961277B2 (en) 2017-08-07 2021-03-30 Heidelberg Pharma Research Gmbh Method for synthesizing amanitins
CA3137373A1 (en) * 2019-04-24 2020-10-29 Heidelberg Pharma Research Gmbh Amatoxin antibody-drug conjugates and uses thereof
MX2023005192A (es) * 2020-11-04 2023-05-15 Heidelberg Pharma Res Gmbh Composicion que comprende una combinacion de inhibidor de punto de control inmunitario y conjugado de anticuerpo-amatoxina para uso en la terapia del cancer.

Also Published As

Publication number Publication date
CO2023012358A2 (es) 2024-01-15
AR125130A1 (es) 2023-06-14
CA3208117A1 (en) 2022-09-22
WO2022194988A3 (en) 2022-12-29
CN117241832A (zh) 2023-12-15
BR112023018189A2 (pt) 2023-10-24
IL304966A (en) 2023-10-01
US20220370632A1 (en) 2022-11-24
AU2022236461A1 (en) 2023-10-05
KR20230159480A (ko) 2023-11-21
EP4308169A2 (en) 2024-01-24
AU2022236461A9 (en) 2024-02-22
WO2022194988A2 (en) 2022-09-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20220089768A1 (en) Multi-specific protein molecules and uses thereof
JP6817674B2 (ja) 抗ｎｔｂ−ａ抗体ならびに関連する組成物および方法
JP7404423B2 (ja) ヒト化抗ヒトｐｄ－１抗体
EP3774910A1 (en) Trispecific binding molecules against cancers and uses thereof
US20200255523A1 (en) Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
US20220267421A1 (en) Anti-mesothelin antibodies
WO2021057822A1 (en) Anti-ror1 antibodies and preparation method and uses thereof
US20240075157A1 (en) Fc silenced antibody drug conjugates (adcs) and uses thereof
CN116251196A (zh) 抗-edb抗体和抗体-药物缀合物
US20220370632A1 (en) B-lymphocyte specific amatoxin antibody conjugates
CA3162282A1 (en) Treatment of cancers with antibody drug conjugates (adc) that bind to 191p4d12 proteins
JP2023548522A (ja) 免疫チェックポイント阻害剤と抗体－アマトキシンコンジュゲートの組合せを含む癌治療に使用するための組成物
JP2023530978A (ja) 抗体薬物複合体（ａｄｃ）によるがんの治療のための方法に使用するためのマーカー
US20220133902A1 (en) Composition Comprising a Combination of Immune Checkpoint Inhibitor and Antibody-Amatoxin Conjugate for Use in Cancer Therapy
JP2022552349A (ja) Ｂリンパ球特異的アマトキシン抗体コンジュゲート
WO2023156790A1 (en) Novel methods of therapy

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20230927