JP2023544799A - 凝集体形成物を含む製剤などの脈絡膜上投与用の製剤 - Google Patents

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Abstract

対象の眼の脈絡膜上腔への投与用の医薬組成物を本明細書で提供する。医薬組成物は、導入遺伝子をコードする組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含み得る。治療に有効な量の医薬組成物を必要な対象に投与することによって、対象における疾患を治療または予防するための方法もまた本明細書で提供する。【選択図】図１

Description

優先権
本出願は、２０２０年１０月７日に出願の米国特許出願第６３／０８８，８２８号及び２０２１年２月９日に出願の米国特許出願第６３／１４７，５３８号の優先権の利益を主張し、それぞれの内容の全体が参照により本明細書に援用される。
電子的に提出した配列表の参照
本願では、２０２１年９月３０日に作成したファイル名「１２６５６－１４２－２２８＿Ｓｅｑｕｅｎｃｅ＿Ｌｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔ」、ファイルサイズ１０７，１４３バイトのテキストファイルとして本願と共に提出した配列表を、参照により援用する。
１．背景技術
ヒトの眼は、非常に複雑で、高度に発達した感覚器官であり、多くの疾患及び障害を引き起こしやすい。世界で約２億８，５００万人が視力障害をもっており、そのうち３，９００万人が盲目であり、また２億４，６００万人が中程度から重度の視力障害を有する（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，２０１２，“Ｇｌｏｂａｌ Ｄａｔａ Ｏｎ Ｖｉｓｕａｌ Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｓ ２０１０，”Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）。失明の主な原因としては、白内障（４７％）、緑内障（１２％）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）（９％）、及び糖尿病性網膜症（５％）がある（Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ，２００７，“Ｇｌｏｂａｌ Ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ Ｆｏｒ Ｔｈｅ Ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ Ｏｆ Ａｖｏｉｄａｂｌｅ Ｂｌｉｎｄｎｅｓｓ：Ａｃｔｉｏｎ Ｐｌａｎ ２００６－２０１１，”Ｇｅｎｅｖａ：Ｗｏｒｌｄ Ｈｅａｌｔｈ Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）。
遺伝子治療が、特定の眼疾患を治療する際に利用されている（例えば、国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０２７６５０号（国際公開特許第ＷＯ ２０１７／１８１０２１ Ａ１号）を参照されたい）。アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、非病原性、広範な宿主及び細胞型（***細胞及び非***細胞の両方を含む）への感染性の向性範囲、ならびに長期間の導入遺伝子発現能力があるといった特性のため、遺伝子治療において魅力的なツールである（例えば、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，２００５，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２：４３）。
眼の遺伝子治療で使用される現在の方法（例えば、硝子体内または網膜下投与）は、侵襲的であり、白内障、網膜剥離、及び中心窩における網膜色素上皮（ＲＰＥ）からの光受容体の分離のリスクが上がるなど、深刻な障害がある。現在の眼の遺伝子治療を改善するか、障害を排除する治療法に対する大きな満たされていない医療ニーズがある。
Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ科、Ｄｅｐｅｎｄｏｖｉｒｕｓ属のメンバーであるアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、およそ４．７キロベース（ｋｂ）～６ｋｂの一本鎖線状ＤＮＡゲノムを有する小型非エンベロープ正二十面体型ウイルスである。非病原性、広範な宿主及び細胞型（***細胞及び非***細胞の両方を含む）への感染性の向性範囲、ならびに長期間の導入遺伝子発現能力があるといった特性により、ＡＡＶは、遺伝子治療における魅力的なツールである（例えば、Ｇｏｎｃａｌｖｅｓ，２００５，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ Ｊｏｕｒｎａｌ，２：４３）。
構築物ＩＩが、脈絡膜上腔への注入によって送達される治療剤として研究されている。脈絡膜上腔（ＳＣＳ）は、薬液の注入時に拡張する強膜と脈絡膜との間の領域である（Ｈａｂｏｔ－Ｗｉｌｎｅｒ，２０１９）。ＳＣＳ腔は、注入された溶液が、生理学的プロセスによって排除されると、注入前のサイズに逆転する。薬液は、ＳＣＳ内部で拡散し、隣接する組織に吸収される。脈絡膜の毛細管は、低分子量オスモライトを透過させる。本開示は、脈絡膜上腔におけるより長い滞留時間をもたらし、その結果として有効性を改善する医薬組成物を提供するといった満たされていないニーズに対応する。
２．発明の概要
一態様では、ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物を本明細書で提供するが、ここで、該医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ、該医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む。
一態様では、ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物を本明細書で提供するが、ここで、該医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ、該医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に少なくとも約３％の凝集組換えＡＡＶを含む。
一態様では、ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物を本明細書で提供するが、ここで、該医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、該導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体であり、かつ、該医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む。
一態様では、ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物を本明細書で提供するが、ここで、該医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、該導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体であり、かつ、該医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に少なくとも約３％の凝集組換えＡＡＶを含む。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間と同等またはそれ以上であり、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散と比較して小さく、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さが、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さと比較した場合に同等またはそれ以上であり、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子の発現レベルは、導入遺伝子の発現レベルが参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される期間と比較して、医薬組成物の脈絡膜上投与後、より長い期間、眼で検出され、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における導入遺伝子の濃度は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における導入遺伝子の濃度と比較した場合に同等またはそれ以上であり、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率と比較した場合に同等またはそれ以上であり、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較した場合に同等またはそれより低く、ここで、該参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えＡＡＶを含み、該組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、医薬組成物または参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ該医薬組成物は、参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、構築物ＩＩである。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６からなる群から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８である。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、少なくとも約または約３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の凝集組換えＡＡＶを含む。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または少なくとも約１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、または約もしくは少なくとも約１００ｎｍの平均組換えＡＡＶ直径を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物における平均組換えＡＡＶ直径よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きい平均組換えＡＡＶ直径を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散は、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％小さい。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％長い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、または約３日～約７日である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より前ではない。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間は、最大でも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日である。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、ＳＣＳからまたは眼からのものである。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さは、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％大きい。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さは、約５００μｍ～約３．０ｍｍ、７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、または約１ｍｍ～約２ｍｍである。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さは、少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、または１０ｍｍである。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さは、最大でも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、または１０００μｍである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さは、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、または少なくとも５年間持続する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における導入遺伝子の濃度は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％高い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のより長い期間は、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より長い。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、少なくとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日間、医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、最大でも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日間、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較した場合に同等またはそれより低い。いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、少なくとも約２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％低い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％高い。
いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶの安定性は、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶの安定性の少なくとも約５０％である。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶの安定性は、組換えＡＡＶの感染力によって特定される。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶの安定性は、組換えＡＡＶによって放出される遊離ＤＮＡのレベルによって特定される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物中の遊離ＤＮＡのレベルと比較して、少なくとも約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、約３分の１の遊離ＤＮＡを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶの感染力と比較して、約５０％低い、およそ同じ、または少なくとも約２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い感染力を有する。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、目的の疾患の治療、または目的の疾患の進行の緩和、予防、もしくは遅延に適切な導入遺伝子である。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、ｎＡＭＤ（ウェット型ＡＭＤ）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、または糖尿病性網膜症（ＤＲ）またはバッテン病であると診断されている。その他の実施形態では、ヒト対象は、緑内障または非感染性ブドウ膜炎であると診断されている。いくつかの実施形態では、ヒト対象は、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管性疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び散発性封入体筋炎、またはカリクレイン関連疾患であると診断されている。いくつかの実施形態では、ＡＡＶは、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）またはトリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）をコードする。その他の実施形態では、ＡＡＶは、抗ＶＥＧＦ融合タンパク質、抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗カリクレイン抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗Ｃ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合フラグメントをコードする。
いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、ベクターゲノム濃度に基づく。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、１回の投与当たりのゲノムコピーに基づく。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、ヒト対象に投与される総ゲノムコピーに基づく。いくつかの実施形態では、１回の投与当たりのゲノムコピーは、脈絡膜上投与１回当たりの組換えＡＡＶのゲノムコピーである。いくつかの実施形態では、投与される総ゲノムコピーは、脈絡膜上投与される組換えＡＡＶの総ゲノムコピーである。
いくつかの実施形態では、ベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、または約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである。いくつかの実施形態では、投与される総ゲノムコピーは、約６．０×１０１０ゲノムコピー、約１．６×１０１１ゲノムコピー、約２．５×１０１１ゲノムコピー、約５．０×１０１１ゲノムコピー、約１．５×１０１２ゲノムコピー、約３×１０１２ゲノムコピー、約１．０×１０１２ゲノムコピー、約２．５×１０１２ゲノムコピー、または約３．０×１０１３ゲノムコピーである。いくつかの実施形態では、１回の投与当たりのゲノムコピーは、約６．０×１０１０ゲノムコピー、約１．６×１０１１ゲノムコピー、約２．５×１０１１ゲノムコピー、約５．０×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１２ゲノムコピー、約１．０×１０１２ゲノムコピー、約１．５×１０１２ゲノムコピー、約２．５×１０１２ゲノムコピー、または約３．０×１０１３ゲノムコピーである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回投与される。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回投与される。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回投与される。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、ＤＰＢＳ及びショ糖を含む。
一態様では、医薬組成物を調製する方法を本明細書で提供するが、該方法は、（ｉ）リン酸緩衝生理食塩水、ショ糖、及び導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を調製することと、（ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を組成物に混合することとを含み、この際、該医薬組成物は、組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。
一態様では、医薬組成物を調製する方法を本明細書で提供するが、該方法は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を組成物に混合することを含み、この際、該組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ該医薬組成物は、組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。
一態様では、（ｉ）導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物と、（ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液とを含むキットを本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、キットは、組成物と溶液とを混合することに関する指示書をさらに含む。いくつかの実施形態では、指示書は、溶液と組成物とを混合して医薬組成物を得ることに関する指示を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、４％ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、溶液は、１０％ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物と実質的に同じ等張性または重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の凝集組換えＡＡＶの少なくとも一部は、医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与された後に脱凝集する。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶの凝集体は、医薬組成物の脈絡膜上投与を受けて、非凝集ＡＡＶまたは単量体に逆転する。いくつかの実施形態では、組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、溶液は、リン酸緩衝塩化ナトリウム及びショ糖を含む。
いくつかの実施形態では、溶液と組成物との混合により、約または少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍に組成物を希釈する。いくつかの実施形態では、溶液と組成物とを混合することは、医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与されるのと同じ日に行われる。いくつかの実施形態では、溶液と組成物とを混合することは、医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与される２４時間以内に行われる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ヒト対象への投与前に保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ほぼ室温、２０℃、４℃、または－８０℃で保管される。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８由来の成分を含み、かつ医薬組成物は、約３０ｍＭ～約６０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９由来の成分を含み、かつ医薬組成物は、約１５ｍＭ～約３０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ２由来の成分を含み、かつ医薬組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む。
２．１ 例示的実施形態
１．ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む、前記医薬組成物。
２．ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に少なくとも約３％の凝集組換えＡＡＶを含む、前記医薬組成物。
３．ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、前記導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体であり、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む、前記医薬組成物。
４．ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、前記導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体であり、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に少なくとも約３％の凝集組換えＡＡＶを含む、前記医薬組成物。
５．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間と同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
６．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散と比較して小さく、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さが、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さと比較した場合に同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
８．前記導入遺伝子の発現レベルは、前記導入遺伝子の発現レベルが参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される期間と比較して、前記医薬組成物の脈絡膜上投与後、より長い期間、眼で検出され、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
９．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における前記導入遺伝子の濃度は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における前記導入遺伝子の濃度と比較した場合に同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１０．脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率と比較した場合に同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１１．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較した場合に同等またはそれより低く、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、条項３～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１２．前記組換えＡＡＶは、構築物ＩＩである、条項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１３．前記導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である、条項１、２、５～１０及び１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１４．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６からなる群から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む、条項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１５．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８である、条項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１６．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９である、条項１、２、５～１０、及び１２～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１７．前記医薬組成物は、約または最大でも約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭのイオン強度を有する、条項１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１８．前記医薬組成物は、少なくとも約または約３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の凝集組換えＡＡＶを含む、条項１～１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
１９．前記医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する、条項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２０．前記医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する、条項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２１．前記医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する、条項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２２．前記医薬組成物は、約または少なくとも約１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、または約もしくは少なくとも約１００ｎｍの平均組換えＡＡＶ直径を有する、条項１～２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２３．前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物における平均組換えＡＡＶ直径よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きい平均組換えＡＡＶ直径を有する、条項５～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２４．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記周辺への拡散は、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％小さい、条項６及び１２～２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２５．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％長い、条項５及び１２～２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２６．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、または約３日～約７日である、条項１～２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２７．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より前ではない、条項１～２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２８．前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、最大でも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日である、条項５～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
２９．前記クリアランス時間は、ＳＣＳからまたは眼からのものである、条項１～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３０．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％大きい、条項７及び１２～２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３１．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、約５００μｍ～約３．０ｍｍ、７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、または約１ｍｍ～約２ｍｍである、条項１～３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３２．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、または１０ｍｍである、条項１～３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３３．前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、最大でも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、または１０００μｍである、条項７及び１２～３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３４．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、または少なくとも５年間持続する、条項１～３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３５．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における前記導入遺伝子の濃度は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％高い、条項９及び１２～３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３６．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記より長い期間は、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より長い、条項８及び１２～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３７．前記導入遺伝子は、少なくとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日間、前記医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される、条項１～３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３８．前記導入遺伝子は、最大でも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日間、前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される、条項５～３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３９．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較した場合に同等またはそれより低い、条項１３に記載の医薬組成物。
４０．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記ＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、少なくとも約２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％低い、条項１１及び１３～３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
４１．前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位における前記形質導入率は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％高い、条項１０及び１２～４０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
４２．前記医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの安定性は、前記参照医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの安定性の少なくとも約５０％である、条項１～４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
４３．前記組換えＡＡＶの安定性は、前記組換えＡＡＶの感染力によって特定される、条項４２に記載の医薬組成物。
４４．前記組換えＡＡＶの安定性は、前記組換えＡＡＶによって放出される遊離ＤＮＡのレベルによって特定される、条項４２に記載の医薬組成物。
４５．前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物中の遊離ＤＮＡのレベルと比較して、少なくとも約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、約３分の１の遊離ＤＮＡを含む、条項４４に記載の医薬組成物。
４６．前記医薬組成物中の前記組換えＡＡＶは、前記参照医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの感染力と比較して、約５０％低い、およそ同じ、または少なくとも約２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い感染力を有する、条項４３に記載の医薬組成物。
４７．前記導入遺伝子は、目的の疾患の治療、または目的の疾患の進行の緩和、予防、もしくは遅延に適切な導入遺伝子である、条項１～４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
４８．前記ヒト対象は、ｎＡＭＤ（ウェット型ＡＭＤ）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）、バッテン病、緑内障、または非感染性ブドウ膜炎であると診断されている、条項１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
４９．前記ヒト対象は、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管性疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び散発性封入体筋炎、またはカリクレイン関連疾患であると診断されている、条項１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５０．前記ＡＡＶは、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、抗ＶＥＧＦ融合タンパク質、抗ＴＮＦ融合タンパク質、抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗カリクレイン抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗Ｃ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合フラグメントをコードする、条項１～２、５～１０、及び１２～４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５１．前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、ベクターゲノム濃度に基づく、条項５～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５２．前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、１回の投与当たりのゲノムコピーに基づく、条項５～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５３．前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記ヒト対象に投与される総ゲノムコピーに基づく、条項５～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５４．前記１回の投与当たりのゲノムコピーは、脈絡膜上投与１回当たりの前記組換えＡＡＶのゲノムコピーである、条項５２に記載の医薬組成物。
５５．前記投与される総ゲノムコピーは、脈絡膜上投与される前記組換えＡＡＶの総ゲノムコピーである、条項５３に記載の医薬組成物。
５６．前記ベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、または約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである、条項５１に記載の医薬組成物。
５７．前記投与される総ゲノムコピーは、約６．０×１０１０ゲノムコピー、約１．６×１０１１ゲノムコピー、約２．５×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１１ゲノムコピー、約５．０×１０１１ゲノムコピー、約６×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１２ゲノムコピー、約１．０×１０１２ゲノムコピー、約１．５×１０１２ゲノムコピー、約２．５×１０１２ゲノムコピー、または約３．０×１０１３ゲノムコピーである、条項５３及び５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５８．前記１回の投与当たりのゲノムコピーは、約６．０×１０１０ゲノムコピー、約１．６×１０１１ゲノムコピー、約２．５×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１１ゲノムコピー、約５．０×１０１１ゲノムコピー、約６×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１２ゲノムコピー、約１．０×１０１２ゲノムコピー、約１．５×１０１２ゲノムコピー、約２．５×１０１２ゲノムコピー、または約３．０×１０１３ゲノムコピーである、条項５２及び５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
５９．前記医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回投与される、条項１～５８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
６０．前記参照医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回投与される、条項５～５９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
６１．前記医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回投与される、条項１～６０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
６２．前記参照医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回投与される、条項５～６０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
６３．前記参照医薬組成物は、ＤＰＢＳ及びショ糖を含む、条項１～６２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
６４．医薬組成物を調製する方法であって、
（ｉ）リン酸緩衝生理食塩水、ショ糖、及び導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を調製することと、
（ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を前記組成物に混合することと、を含み、
前記医薬組成物は、前記組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、前記方法。
６５．医薬組成物を調製する方法であって、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を組成物に混合することを含み、前記組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ前記医薬組成物は、前記組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、前記方法。
６６．
（ｉ）導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物と、
（ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液と、を含む、キット。
６７．前記キットは、前記組成物と前記溶液とを混合することに関する指示書をさらに含む、条項６６に記載のキット。
６８．前記組成物は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む、条項６５に記載の方法または条項６６に記載のキット。
６９．前記組成物は、４％ショ糖を含む、条項６４及び６８のいずれか１項に記載の方法または条項６６及び６８のいずれか１項に記載のキット。
７０．前記溶液は、１０％ショ糖を含む、条項６４、６５、６８及び６９のいずれか１項に記載の方法または条項６６～６９のいずれか１項に記載のキット。
７１．前記医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する、条項６４、６５、及び６８～７０のいずれか１項に記載の方法または条項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７２．前記医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する、条項６４、６５、及び６８～７１のいずれか１項に記載の方法または条項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７３．前記医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する、条項６４、６５、及び６８～７２のいずれか１項に記載の方法または条項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７４．前記医薬組成物は、前記組成物と実質的に同じ等張性または重量オスモル濃度を有する、条項６４、６５、及び６８～７３のいずれか１項に記載の方法または条項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７５．前記医薬組成物中の前記凝集組換えＡＡＶの少なくとも一部は、前記医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与された後に脱凝集する、条項６４、６５、及び６８～７４のいずれか１項に記載の方法または条項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７６．前記組換えＡＡＶの凝集体は、前記医薬組成物の脈絡膜上投与を受けて、非凝集ＡＡＶまたは単量体に逆転する、条項６４、６５、及び６８～７５のいずれか１項に記載の方法または条項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
７７．前記組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む、条項６４、６５、及び６８～７６のいずれか１項に記載の方法または条項６６～６９のいずれか１項に記載のキット。
７８．前記組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む、条項６４、６５、及び６８～７７のいずれか１項に記載の方法または条項６６～６９及び７７のいずれか１項に記載のキット。
７９．前記組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び界面活性剤を含む、条項６４、６５、及び６８～７８のいずれか１項に記載の方法または条項６６～６９及び７７～７８のいずれか１項に記載のキット。
８０．前記溶液は、リン酸緩衝塩化ナトリウム及びショ糖を含む、条項６４、６５、及び６８～７９のいずれか１項に記載の方法または条項６６～６９及び７７～７９のいずれか１項に記載のキット。
８１．前記指示書は、前記溶液と前記組成物とを混合して医薬組成物を得ることに関する指示を含む、条項６７に記載のキット。
８２．前記溶液と前記組成物との前記混合により、約または少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍に前記組成物を希釈する、条項６４、６５、及び６８～８０のいずれか１項に記載の方法または条項８１に記載のキット。
８３．前記溶液と前記組成物とを前記混合することは、前記医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与されるのと同じ日に行われる、条項６４、６５、６８～８０及び８２のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８２のいずれか１項に記載のキット。
８４．前記溶液と前記組成物とを前記混合することは、前記医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与される２４時間以内に行われる、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８３のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８３のいずれか１項に記載のキット。
８５．前記医薬組成物は、ヒト対象への投与前に保管される、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８４のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８４のいずれか１項に記載のキットまたは条項１～６３及び７１～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
８６．前記医薬組成物は、ほぼ室温、２０℃、４℃、または－８０℃で保管される、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８５のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８５のいずれか１項に記載のキットまたは条項１～６３、７１～７６及び８５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
８７．前記医薬組成物は、前記組換えＡＡＶの約１．０×１０１２～約３．０×１０１２ゲノムコピーを含む、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８６のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８６のいずれか１項に記載のキットまたは条項１～６３、７１～７６、及び８５～８６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
８８．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８７のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８７のいずれか１項に記載のキット。
８９．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８由来の成分を含み、かつ前記医薬組成物は、約３０ｍＭ～約６０ｍＭのイオン強度を有する、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８８のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８８のいずれか１項に記載のキットまたは条項１～６３、７１～７６、及び８５～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
９０．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９由来の成分を含み、かつ前記医薬組成物は、約１５ｍＭ～約３０ｍＭのイオン強度を有する、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８８のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８８のいずれか１項に記載のキットまたは条項１～６３、７１～７６、及び８５～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
９１．前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ２由来の成分を含み、かつ前記医薬組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのイオン強度を有する、条項６４、６５、６８～８０、及び８２～８８のいずれか１項に記載の方法または条項８１～８８のいずれか１項に記載のキットまたは条項１～６３、７１～７６、及び８５～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
９２．前記医薬組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む、条項１～６３、７１～７６、及び８５～９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
９３．前記医薬組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む、条項１～６３、７１～７６、及び８５～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
９４．前記医薬組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む、条項１～６３、７１～７６、及び８５～９３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
３．図面の簡単な説明
低塩及び／または低イオン強度の希釈液を使用して誘導されるＡＡＶカプシドのクラスター形成の概要を示す。
ＡＡＶの直径に対するイオン強度及び塩濃度の影響を示すグラフである。
ＡＡＶの直径に対するイオン強度及び塩濃度の影響の電子顕微鏡の視覚的表現物である。Ａは、対照または参照医薬組成物中のＡＡＶを示す。Ａは、参照医薬組成物中でＡＡＶが凝集しないことを示している。Ｂは、低イオン強度溶液（参照医薬組成物と比較してより低いイオン強度を含む医薬組成物）中のＡＡＶ凝集を示す。
２５℃での希釈時から希釈後約２１時間までに測定された、異なるイオン強度及び塩の量を有する溶液中のＡＡＶクラスターの平均見かけ直径を示すグラフである。対照は、４％ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ中に組換えＡＡＶを含んでいる。２倍、４倍、及び８倍の希釈液は、２倍、４倍、及び８倍の希釈液となるように異なる量のリン酸緩衝１０％ショ糖希釈液で希釈した、４％ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ中に組換えＡＡＶを含む。クラスターは、２５℃で少なくとも２１時間、安定であった。およそ２１．８時間後、塩のレベルが少なくとも７５ｍＭの溶液となるように塩化ナトリウムのスパイクを加えたところ、クラスターは単量体に逆転した。
組換えＡＡＶのキュムラント動的光散乱法（ＤＬＳ）強度加重平均見かけ直径を示すグラフである。図５は、低イオン強度のリン酸緩衝１０％ショ糖希釈液に２倍、４倍、及び８倍に希釈した対照におけるＡＡＶの、最大約２１．８時間の、図４からの初期の誘導されたクラスター形成データを示す（図４を参照）。
組換えＡＡＶのキュムラント動的光散乱法（ＤＬＳ）強度加重平均見かけ直径を示すグラフである。図６は、低イオン強度のリン酸緩衝１０％ショ糖希釈液に２倍、４倍、及び８倍に希釈した場合の、誘導されたクラスター形成の逆転を示す。誘導されたクラスター形成の逆転は、ＡＡＶの約２１．８時間後の塩のスパイクによって影響を受けた（図４を参照）。
４％ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ製剤中の組換えＡＡＶのキュムラント径、リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液による希釈により調製された誘導されるクラスター形成の低塩溶液（１０倍希釈液）中の組換えＡＡＶのキュムラント径、及び塩の添加によるクラスター形成の逆転後の組換えＡＡＶのキュムラント径を示すグラフである。この図はまた、試料を３７℃まで加熱した後もクラスターが残ったことも示している。
４．発明の詳細な説明
対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む医薬組成物を本明細書で提供する。対象は、セクション４．５に記載する多くの疾患のうち１つであると診断された対象であり得る。ＡＡＶベクターについては、セクション４．４に記載し、かつそのようなベクターの投薬量については、セクション４．３に記載する。いくつかの実施形態では、セクション４．１に提示する医薬組成物は、セクション４．２に記載する１つ以上の機能的特性を有するように製剤化される。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、種々の利点、例えば、クリアランス時間の延長または遅延（セクション４．２．１）；周辺への拡散の減少（セクション４．２．２）、ＳＣＳの厚さの増加（セクション４．２．３）、血管拡張及び／または血管漏出の減少（セクション４．２．４）、注入部位におけるＡＡＶレベルの増加及び形質導入率（感染率）の上昇（セクション４．２．５）、ならびに医薬組成物がＳＣＳに投与された後の導入遺伝子の濃度の上昇を有する。理論に縛られることなく、機能的特性は、セクション４．１に開示するような凝集ウイルスベクター製剤を含む組成物を使用して実現することができる。また、関連する試験で使用することができるアッセイについても本明細書で提供する（セクション４．６）。
４．１ 医薬組成物の製剤化
本開示は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む、脈絡膜上投与に適した医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、異なる凝集レベルのＡＡＶを有するいくつかの医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、導入遺伝子をコードするＡＡＶの投与に使用される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、同等の医薬組成物（参照医薬組成物）よりも高いレベルのＡＡＶ凝集を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを使用して、それぞれ対象に投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、対照のウイルスベクター凝集のパーセンテージよりも高いパーセンテージの凝集ウイルスベクターを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、網膜下注入に通常使用される溶液の凝集ウイルスベクターのパーセンテージよりも高いパーセンテージの凝集ウイルスベクターを有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、医薬組成物よりもウイルスベクター凝集が少ない。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、医薬組成物と、同じまたは類似のパーセンテージのウイルスベクター凝集を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、対照溶液（例えば、ＤＰＢＳ、ＰＢＳ、水、またはＨＢＳＳ）である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、対照溶液（例えば、ＤＰＢＳ、ＰＢＳ、水、またはＨＢＳＳ）中にＡＡＶを含む。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、ＡＡＶ網膜下注入に通常使用される医薬組成物である。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶを含む医薬組成物は、医薬組成物中のＡＡＶがＡＡＶクラスターまたは凝集を形成するように希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、より低いイオン強度及び塩類含有量を有するＡＡＶ溶液を得るのに適した任意の溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物のイオン強度を低下させるのに適した任意の溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＡＡＶクラスター形成を誘導するために、減少させたイオン性賦形剤塩化ナトリウムを有する溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、減少させたイオン性賦形剤及び／または増加させた非イオン性賦形剤を含有する溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、減少させたイオン性賦形剤塩化ナトリウム及び増加させた非イオン性賦形剤であるショ糖を含有する溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、リン酸緩衝１０％ショ糖溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、様々な非イオン性賦形剤レベル（例えば、４％ショ糖、６％ショ糖、８％ショ糖、１０％ショ糖、１５％ショ糖、または２０％ショ糖）を含む溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、４％ショ糖、６％ショ糖、または１０％ショ糖を含む溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、様々なイオン性賦形剤を含有する溶液（例えば、医薬組成物中の塩化ナトリウム濃度と比較して減少させた塩化ナトリウム濃度を有する溶液）で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、希釈の前後で同じ等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物または対照と同じ等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物または対照よりも高い等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物または対照よりも低い等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ以上の等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物または参照医薬組成物は、少なくとも２４０ｍＯｓｍ／ｋｇの等張性／重量オスモル濃度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、投与（例えば、脈絡膜上投与）前に希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与（例えば、脈絡膜上投与）と同じ日に希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与（例えば、脈絡膜上投与）の約２０時間前または約２４時間前に希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与の約５分、１０分、１５分、３０分、４５分、１時間、１．５時間、２時間、２．５時間、３時間、３．５時間、４時間、４．５時間、５時間、５．５時間、６時間、６．５時間、７時間、７．５時間、８時間、８．５時間、９時間、９．５時間、１０時間、１０．５時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、２年、３年、４年、５年、１０年、１５年、２０年（またはそれ以上）前に希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与の最大でも約１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１１時間、１２時間、１３時間、１４時間、１５時間、１６時間、１７時間、１８時間、１９時間、２０時間、２１時間、２２時間、２３時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月、１２ヶ月、２年、３年、４年、５年、１０年、１５年、２０年（またはそれ以上）前に希釈される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、希釈されて、室温で保管される（例えば、希釈後、または投与前）。いくつかの実施形態では、医薬組成物は希釈され、希釈後約２０℃で保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は希釈され、希釈後約２５℃で保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は希釈され、希釈後４℃で保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は希釈され、希釈後－２０℃で保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は希釈され、希釈後－８０℃で保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は希釈され、希釈後、急速冷凍される。いくつかの実施形態では、希釈されていない医薬組成物、参照医薬組成物、希釈された医薬組成物及び／または希釈された参照医薬組成物は、長期間保管に適している（例えば、適切な温度で）。いくつかの実施形態では、長期間保管は、約または少なくとも約１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、１年、２年、３年、４年、５年、または５年超である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または最大でも約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、５００ｍＭ、５５０ｍＭ、６００ｍＭ、６５０ｍＭ、７００ｍＭ、８００ｍＭ、９００ｍＭ、または最大でも約１０００ｍＭのイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または最大でも約１５ｍＭ、２０ｍＭ、４０ｍＭ、６０ｍＭ、８０ｍＭ、１００ｍＭ、１３０ｍＭ、１５０ｍＭ、１７５ｍＭ、２００ｍＭ、または３００ｍＭのイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約５ｍＭ～約１４０ｍＭ、約１５ｍＭ～約１５０ｍＭ、約５ｍＭ～約６５ｍＭ、約５ｍＭ～約２００ｍＭ、約１５ｍＭ～約１３４ｍＭ、約１０ｍＭ～約２００ｍＭ、約２０ｍＭ～約４５ｍＭ、約１５ｍＭ～約３００ｍＭ、約５ｍＭ～約６００ｍＭ、約１５ｍＭ～約６００ｍＭ、約１０ｍＭ～約５５０ｍＭ、または約１５ｍＭ～約７０ｍＭの範囲のイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、希釈された参照医薬組成物は、最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、最大でも約１００ｍＭのイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、最大でも約２００ｍＭのイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物または希釈されていない医薬組成物は、少なくとも約または約８０ｍＭ、１００ｍＭ、１２０ｍＭ、１５０ｍＭ、２００ｍＭ、または２００ｍＭ超のイオン強度を有する（またはイオン性賦形剤濃度を有する）。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、希釈前の希釈されていない医薬組成物よりも、より低いイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、１０倍、１５倍、２０倍、３０倍、４０倍、５０倍、または１００倍に希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、ウイルスベクターのクラスター形成を誘導するのに必要なイオン強度（例えば、クラスター形成閾値）を下回るイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、ＡＡＶクラスター形成のためのイオン強度を下回るイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、ＡＡＶクラスター形成のイオン強度を２倍下回るイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターに対するクラスター形成閾値が決定される。いくつかの実施形態では、クラスター形成閾値は、セクション４．６に記載する任意の好適な方法または任意の好適なアッセイによって決定される。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ８に対するクラスター形成閾値は、約６０ｍＭのイオン強度と相関する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、クラスター形成閾値に対するイオン強度の約半分のイオン強度（例えば、３０ｍＭ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、約または最大でも約３０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、クラスター形成閾値に対するイオン強度の約３分の２のイオン強度（例えば、４０ｍＭ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ９に対するクラスター形成閾値は、約３０ｍＭのイオン強度と相関する。いくつかの実施形態では、ＡＡＶ２に対するクラスター形成閾値は、約２００ｍＭのイオン強度と相関する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、クラスター形成閾値に対するイオン強度の約半分のイオン強度（例えば、１５ｍＭまたは１００ｍＭ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、クラスター形成閾値に対するイオン強度の約３分の２のイオン強度（例えば、２０ｍＭまたは１３４ｍＭ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、約または最大でも約１３４ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、クラスター形成閾値に対するイオン強度の約４分の３のイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、クラスター形成閾値に対するイオン強度の約５分の２のイオン強度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、クラスター形成閾値に対するイオン強度のおよそまたは最大でも２％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のイオン強度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または最大でも約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２０５ｍＭ、２１０ｍＭ、２１５ｍＭ、２２０ｍＭ、２２５ｍＭ、２３０ｍＭ、２３５ｍＭ、２４０ｍＭ、２４５ｍＭ、２５０ｍＭ、２５５ｍＭ、２６０ｍＭ、２６５ｍＭ、２７０ｍＭ、２７５ｍＭ、２８０ｍＭ、２８５ｍＭ、２９０ｍＭ、２９５ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、５００ｍＭ、５５０ｍＭ、６００ｍＭ、６５０ｍＭ、７００ｍＭ、８００ｍＭ、９００ｍＭ、または最大でも約１０００ｍＭの塩濃度（例えば、塩化ナトリウム）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または最大でも約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、２００ｍＭ、または３００ｍＭの塩濃度（例えば、塩化ナトリウム）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または最大でも約１０ｍＭ、２０ｍＭ、４０ｍＭ、６０ｍＭ、１００ｍＭ、または１５０ｍＭの塩濃度（例えば、塩化ナトリウム）を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物または希釈されていない医薬組成物は、約または少なくとも約８０ｍＭ、１００ｍＭ、１２０ｍＭ、１５０ｍＭ、１７５ｍＭ、２００ｍＭ以上の塩（例えば、塩化ナトリウム）濃度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、少なくとも約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇの等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、少なくとも約１００ｍＯｓｍ／ｋｇ、１５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、１９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２００ｍＯｓｍ／ｋｇ、２１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２３０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３００ｍＯｓｍ／ｋｇ、３１０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３２０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３４０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３６０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３７０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３８０ｍＯｓｍ／ｋｇ、３９０ｍＯｓｍ／ｋｇ、４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、４５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、５００ｍＯｓｍ／ｋｇ、５５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、６５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、または７００ｍＯｓｍ／ｋｇの等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、少なくとも約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約６００ｍＯｓｍ／ｋｇ、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約３５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、少なくとも約２２０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約４００ｍＯｓｍ／ｋｇ、または少なくとも約２００ｍＯｓｍ／ｋｇ～約５００ｍＯｓｍ／ｋｇの等張性／重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ～約６００ｍＯｓｍ／ｋｇの等張性／重量オスモル濃度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、少なくともいくつかの凝集ウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または少なくとも約１％、２％、３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の凝集ウイルスベクター（例えば、凝集ＡＡＶ）を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約１％～約２０％、１％～約１０％、１％～約５０％、３％～約９５％、３％～約９０％、３％～約８０％、３％～約７０％、３％～約６０％、３％～約５０％、３％～約４０％、３％～約３０％、３％～約２０％、３％～約１５％、３％～約１０％、５％～約９５％、５％～約９０％、５％～約８０％、５％～約７０％、５％～約６０％、５％～約５０％、５％～約４０％、５％～約３０％、５％～約２０％、５％～約１５％、５％～約１０％、１０％～約９５％、１０％～約９０％、１０％～約８０％、１０％～約７０％、１０％～約６０％、１０％～約５０％、１０％～約４０％、１０％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約１５％、１５％～約９５％、１５％～約９０％、１５％～約８０％、１５％～約７０％、１５％～約６０％、１５％～約５０％、１５％～約４０％、１５％～約３０％、１５％～約２０％、２０％～約９５％、２０％～約９０％、２０％～約８０％、２０％～約７０％、２０％～約６０％、２０％～約５０％、２０％～約４０％、２０％～約３０％、３０％～約９５％、３０％～約９０％、３０％～約８０％、３０％～約７０％、３０％～約６０％、３０％～約５０％、３０％～約４０％、４０％～約９５％、４０％～約９０％、４０％～約８０％、４０％～約７０％、４０％～約６０％、または４０％～約５０％の凝集ウイルスベクター（例えば、凝集ＡＡＶ）を含む。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、対照溶液または希釈前の医薬組成物または希釈前の参照医薬組成物と比較して、少なくとも２倍多い、少なくとも３倍多い、少なくとも４倍多い、少なくとも５倍多い、少なくとも６倍多い、少なくとも７倍多い、少なくとも８倍多い、少なくとも９倍多い、少なくとも１０倍多い、少なくとも１５倍多い、少なくとも２０倍多い、少なくとも５０倍多い、少なくとも１００倍多い、少なくとも５％多い、少なくとも１０％多い、少なくとも１５％多い、少なくとも２０％多い、少なくとも２５％多い、少なくとも３０％多い、少なくとも３５％多い、少なくとも４０％、少なくとも４５％多い、少なくとも５０％多い、少なくとも５５％多い、少なくとも６０％多い、少なくとも６５％多い、少なくとも７０％多い、少なくとも７５％多い、少なくとも８０％多い、少なくとも８５％多い、少なくとも９０％多い、少なくとも９５％多い、少なくとも１００％多い、少なくとも１５０％多い、または少なくとも２００％多い、少なくとも２５０％多い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％多い、または少なくとも５００％多い凝集ウイルスベクター（例えば、凝集ＡＡＶ）を含む。
いくつかの実施形態では、ウイルスベクターの分子直径（例えば、ウイルスベクター凝集のレベル）は、任意の好適な方法または任意の好適なアッセイによって決定される（セクション４．６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターの分子直径は、ウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量を決定するために測定される。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）中または希釈された参照医薬組成物中のウイルスベクターの分子直径は、希釈前の医薬組成物中、または対照溶液中、または希釈前の参照医薬組成物中のウイルスベクターの分子直径よりも大きい。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、対照溶液中、または希釈前の医薬組成物中、または参照医薬組成物中のウイルスベクターの直径よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きい直径（例えば、平均で）のウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）または希釈された参照医薬組成物は、約または少なくとも約１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、１００ｎｍ、１２５ｎｍ、１５０ｎｍ、１７５ｎｍ、２００ｎｍ、２２５ｎｍ、２５０ｎｍ、２７５ｎｍ、３００ｎｍ、３２５ｎｍ、３５０ｎｍ、３７５ｎｍ、４００ｎｍ、４５０ｎｍ、５００ｎｍ、または５００ｎｍ超の直径（例えば、平均で）のウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、希釈前の医薬組成物または希釈前の参照医薬組成物または対照は、約または最大でも約５ｎｍ、１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、または１００ｎｍの直径（例えば、平均で）のウイルスベクターを含む。いくつかの実施形態では、希釈前の医薬組成物または希釈前の参照医薬組成物または対照は、およそまたは最大でも２５ｎｍ、３０ｎｍ、３５ｎｍ、または４０ｎｍの直径（例えば、平均で）のウイルスベクターを含む。
いくつかの実施形態では、分子直径またはウイルスベクター凝集のレベルは、医薬組成物が希釈されてから３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、２０時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、２週間、３週間、４週間、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、１年、２年、５年、または５年以上後に測定される。いくつかの実施形態では、分子直径またはウイルスベクター凝集のレベルは、投与（例えば、脈絡膜上投与）前に測定される。いくつかの実施形態では、分子直径またはウイルスベクター凝集のレベルは、投与（例えば、脈絡膜上投与）直前に測定される。いくつかの実施形態では、分子直径またはウイルスベクター凝集のレベルは、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）、希釈された参照医薬組成物、希釈されていない医薬組成物、希釈されていない参照医薬組成物、または対照の投与（例えば、脈絡膜上投与）の、３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１５時間、２０時間、２４時間、または２日前に測定される。いくつかの実施形態では、分子直径またはウイルスベクター凝集のレベルは、長期間保管（例えば、２５℃、２０℃、４℃、－８０℃での保管）後に測定される。いくつかの実施形態では、分子直径またはウイルスベクター凝集のレベルは、急速冷凍された希釈された医薬組成物が解凍された後に測定される。
いくつかの実施形態では、希釈された医薬組成物、希釈されていない医薬組成物、参照医薬組成物、または対照は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、希釈された医薬組成物、希釈されていない医薬組成物、参照医薬組成物、または対照は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、希釈されていない医薬組成物と（または対照もしくは参照医薬組成物と）少なくとも同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、希釈されていない医薬組成物と（または対照もしくは参照医薬組成物と）少なくとも同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、希釈されていない医薬組成物と（または対照もしくは参照医薬組成物と）少なくとも同じウイルスベクター力価（例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＡＡＶ力価）を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）のイオン強度は、投与（例えば、脈絡膜上投与）後に増大する。いくつかの実施形態では、ウイルスベクター凝集（クラスター形成）のレベルは、投与後に低下する。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液と比較して、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液と比較して、ウイルスベクターまたは有効成分の注入部位での長時間の持続が可能となる。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる注入部位の厚さと比較して、投与後の注入部位の厚さが増加する。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる注入部位の周辺への拡散と比較して、投与後の注入部位の周辺への拡散が減少する。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる注入部位のクリアランス時間と比較して、投与後の注入部位のクリアランス時間が長くなる。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較して、投与後の血管拡張及び／または血管漏出のレベルが減少する。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる注入部位の形質導入率（感染率）と比較して、投与後の注入部位の形質導入率（感染率）が高くなる。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる注入部位のＡＡＶレベルと比較して、投与後の注入部位のＡＡＶレベルが増加する。いくつかの実施形態では、投与前の医薬組成物中のウイルスベクター凝集（クラスター形成）により、ウイルスベクターを含むがウイルスベクター凝集のない溶液が投与された後、またはウイルスベクター凝集の量が少ないウイルスベクターを含む溶液が投与された後に得られる眼における導入遺伝子発現レベルと比較して、投与後の眼における導入遺伝子発現レベルが増加する。いくつかの実施形態では、希釈された医薬組成物とは、参照医薬組成物と比較して、より低いイオン強度及び／またはより低い塩濃度を有する医薬組成物を指す。いくつかの実施形態では、希釈された医薬組成物とは、最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む医薬組成物を指す。いくつかの実施形態では、希釈された医薬組成物とは、少なくとも約３％のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）を含む医薬組成物を指す。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、投与後少なくとも２時間、注入部位（例えば、ＳＣＳ）の少なくとも１部分を少なくとも５００μｍまたは約５００μｍ～約３ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量のウイルスベクター凝集を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を、約７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、または約１ｍｍ～約２ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）中のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、または少なくとも５年間、約５００μｍ～約３．０ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）中のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、約１ｍｍ～約３ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）中のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、または少なくとも５年間、約１ｍｍ～約２ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）中のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を、投与後少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、または少なくとも５年間、約２ｍｍ～約３ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）中のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）の量は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を、無期限で約７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、または約１ｍｍ～約２ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量である。無期限は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）における医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）の安定性に起因して、少なくとも部分的に達成され得る。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を少なくとも５００μｍまたは約５００μｍ～約３ｍｍの厚さに拡張するのに十分な量のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）は、注入部位（例えば、ＳＣＳ）を少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、１０ｍｍ、または１０ｍｍ超の厚さに拡張するのに十分な量のウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物または希釈されていない医薬組成物は、注入部位を最大でも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、または１０ｍｍの厚さに拡張することができる。
セクション４．５に記載する疾患（例えば、眼疾患）を、本明細書にて開示する医薬組成物（例えば、希釈された医薬組成物）を使用して治療する方法も本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、眼疾患を治療する方法は、有効量の医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター）を対象（例えば、ヒト）に投与することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）に投与される。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、網膜下に投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量よりも少ない。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、硝子体内に投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量よりも少ない。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに投与された場合と、網膜下投与または硝子体内投与を介して投与された場合とで、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに投与された場合と、網膜下投与または硝子体内投与を介して投与された場合とで、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、対象における治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、ＳＣＳに投与された場合の対象における治療応答を誘発するのに十分な参照医薬組成物の有効量と比較して少ない。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、希釈される前の医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、医薬組成物と比較してより高いイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物と比較してより高いレベルのウイルスベクター凝集（例えば、ＡＡＶ凝集）を有する。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、網膜下に投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な参照医薬組成物の有効量よりも少ない。いくつかの実施形態では、ＳＣＳに投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な医薬組成物の有効量は、硝子体内に投与された場合に治療応答を誘発するのに十分な参照医薬組成物の有効量よりも少ない。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。
医薬組成物を調製する方法もまた、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物を調製する方法は、リン酸緩衝生理食塩水、ショ糖、及び導入遺伝子をコードする発現カセットを含む治療に有効な量の組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物（例えば、参照医薬組成物）を調製することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物を調製する方法は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を、ＡＡＶを含む組成物に混合することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物（または参照医薬組成物）よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物と実質的に同じ等張性または重量オスモル濃度を有する。
医薬組成物を調製する方法を本明細書で提供するが、該方法は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを有する組成物）に混合することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物と実質的に同じ等張性または重量オスモル濃度を有する。
医薬組成物を調製するキットもまた、本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、キットは、（ｉ）導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物と、（ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液とを含む。いくつかの実施形態では、キットは、組成物と溶液とを混合することに関する指示書を含む場合がある。いくつかの実施形態では、指示書は、溶液と組成物とを混合して医薬組成物を得ることに関する指示を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、４％ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、溶液は、１０％ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組成物と実質的に同じ等張性または重量オスモル濃度を有する。
いくつかの実施形態では、本開示の方法または医薬組成物またはキットのいずれかにより、医薬組成物中の少なくともいくつかの凝集組換えＡＡＶが、医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与された後に脱凝集する。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶの凝集体は、ヒト対象への医薬組成物の脈絡膜上投与を受けて逆転することができる。いくつかの実施形態では、凝集組換えＡＡＶは、対象のＳＣＳに注入されると、単量体になるか、または凝集が減る。いくつかの実施形態では、組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び界面活性剤を含む。いくつかの実施形態では、溶液は、リン酸緩衝塩化ナトリウム及びショ糖を含む。いくつかの実施形態では、溶液と組成物との混合により、約または少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍に組成物を希釈する。いくつかの実施形態では、溶液と組成物とを混合することは、医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与されるのと同じ日に行われる。いくつかの実施形態では、溶液と組成物とを混合することは、医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与される２４時間以内に行われる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、組換えＡＡＶの約１．０×１０１２～約３．０×１０１２ゲノムコピーを含む。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８由来の成分を含み、かつ医薬組成物は、約３０ｍＭ～約６０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９由来の成分を含み、かつ医薬組成物は、約１５ｍＭ～約３０ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、組換えＡＡＶは、ＡＡＶ２由来の成分を含み、かつ医薬組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのイオン強度を有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、挿入部位の近くに実質的に局在化される（例えば、セクション４．２．１及びセクション４．２．２を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、導入遺伝子発現（濃度）のレベルがより高くなる（セクション４．２．６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内またはＳＣＳに投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、導入遺伝子発現（濃度）のレベルがより高くなる（セクション４．２．６を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、ＡＡＶのレベルがより高くなる（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内またはＳＣＳに投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、ＡＡＶのレベルがより高くなる（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、注入部位における形質導入率（感染率）がより高くなる（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内またはＳＣＳに投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、注入部位における形質導入率（感染率）がより高くなる（セクション４．２．５を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、血管拡張及び／または血管漏出が減少する（セクション４．２．４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、医薬組成物により、参照医薬組成物が網膜下、硝子体内またはＳＣＳに投与された場合と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された場合に、血管拡張及び／または血管漏出が減少する（セクション４．２．４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物よりも高いレベルのＡＡＶ凝集を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。
４．１．１ イオン強度の希釈
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、医薬組成物のイオン強度を低下させるために、より低いイオン強度を有する溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、投与前に希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、希釈されて、保管される。いくつかの実施形態では、医薬組成物と比較してより低いイオン強度を有する溶液は、希釈されていない医薬組成物の５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％のイオン強度を含む医薬組成物（例えば、２倍、３倍、４倍、８倍、または１０倍に希釈された医薬組成物）を得るために、医薬組成物に加えられる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、リン酸緩衝１０％ショ糖溶液で希釈される。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、４％ショ糖を含む改質ＤＰＢＳを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ポロキサマー（例えば、Ｐ１８８）を含む。
いくつかの実施形態では、より低いイオン強度を有し、かつ医薬組成物を希釈するのに使用される溶液は、希釈されていない医薬組成物と比較して、より少量のまたはより低濃度の塩を含む。このような塩類の例としては、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、及び硫酸アンモニウムが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態では、より低いイオン強度を有し、かつ希釈に使用される溶液は、希釈されていない医薬組成物中の塩濃度の約または最大でも約１％、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％を含む。いくつかの実施形態では、より低いイオン強度を有し、かつ希釈に使用される溶液は、塩を含まない。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約０ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２５０ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、５００ｍＭ、５５０ｍＭ、または６００ｍＭの塩（例えば、ＮａＣｌ）を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、塩を含まない。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約０ｍＭ～約３０ｍＭ、０ｍＭ～約２５ｍＭ、０ｍＭ～約１００ｍＭ、０ｍＭ～約５０ｍＭ、０ｍＭ～約２００ｍＭ、５ｍＭ～約１００ｍＭ、１０ｍＭ～約３０ｍＭ、１０ｍＭ～約４０ｍＭ、１０ｍＭ～約５０ｍＭ、１０ｍＭ～約６０ｍＭ、１０ｍＭ～約１００ｍＭ、５ｍＭ～約５０ｍＭ、５ｍＭ～約３０ｍＭ、１ｍＭ～約１００ｍＭ、１ｍＭ～約４０ｍＭ、または１ｍＭ～約３０ｍＭ、１ｍＭ～約２００ｍＭ、１ｍＭ～約６００ｍＭ、または１ｍＭ～約３００ｍＭの塩濃度を有する。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約１０ｍＭの塩を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約１００ｍＭの塩を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約２００ｍＭの塩を含む。いくつかの実施形態では、より低いイオン強度を有し、かつ希釈に使用される溶液は、ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、より低いイオン強度を有し、かつ希釈に使用される溶液は、４％、６％、８％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％（またそれ以上）ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、４％ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液は、６％ショ糖を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液は、１０％ショ糖を含む。
いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約０ｍＭ、１ｍＭ、２ｍＭ、３ｍＭ、４ｍＭ、５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭ、２５０ｍＭ、３００ｍＭ、３５０ｍＭ、４００ｍＭ、４５０ｍＭ、５００ｍＭ、５５０ｍＭ、または６００ｍＭのイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約２５ｍＭのイオン強度を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約５０ｍＭのイオン強度を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約１５ｍＭのイオン強度を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約８０ｍＭのイオン強度を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約または最大でも約１００ｍＭのイオン強度を含む。いくつかの実施形態では、希釈に使用される溶液（例えば、より低いイオン強度を有する溶液）は、約５ｍＭ～約１００ｍＭ、１０ｍＭ～約３０ｍＭ、１０ｍＭ～約４０ｍＭ、１０ｍＭ～約５０ｍＭ、１０ｍＭ～約６０ｍＭ、１０ｍＭ～約１００ｍＭ、５ｍＭ～約５０ｍＭ、５ｍＭ～約３０ｍＭ、１ｍＭ～約１００ｍＭ、１ｍＭ～約４０ｍＭ、または１ｍＭ～約３０ｍＭ、１ｍＭ～約２００ｍＭ、１ｍＭ～約６００ｍＭ、または１ｍＭ～約３００ｍＭのイオン強度を有する。
いくつかの実施形態では、低イオン強度の医薬組成物は、導入遺伝子をコードするＡＡＶの投与に使用される。いくつかの実施形態では、参照と比較して低減されたイオン強度を有する医薬組成物（例えば、希釈された液体製剤）は、導入遺伝子をコードするＡＡＶを投与するために使用される。いくつかの実施形態では、低塩の医薬組成物（例えば、希釈された液体製剤）は、導入遺伝子をコードするＡＡＶの投与に使用される。いくつかの実施形態では、対照溶液と比較して、または参照医薬組成物と比較して、またはＰＢＳと比較して、または一般に網膜下注入に使用される医薬組成物と比較して、より低い塩濃度を有する医薬組成物が、導入遺伝子をコードするＡＡＶの投与に使用される。
いくつかの実施形態では、塩を調製するために使用することができる化合物の例としては、酢酸アルミニウム、グルタミン酸塩、粘液酸塩、アルギニン、アスパラギン酸塩、グリコール酸塩、ナプシレート、ベンザチン、ベンゼンスルホン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、硝酸塩、カルシウム、安息香酸塩、ヘキサン酸塩、オクタン酸塩、クロロプロカイン、ベシル酸塩、ヘキシルレゾルシン酸塩、オレイン酸塩、コリン、重炭酸塩、ヒドラバミン、パモ酸塩、ジエタノールアミン、酒石酸水素塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、パントテン酸塩、エタノールアミン、臭化物、ヨウ化物、リン酸塩、エチレンジアミン、カンシル酸塩、イセチオン酸塩、ポリガラクツロ酸塩、ヒスチジン、炭酸塩、イセチオン酸塩、プロピオン酸塩、リチウム、塩化物、乳酸塩、サリチル酸塩、リジン、クエン酸塩、ラクトビオン酸塩、ステアリン酸塩、マグネシウム、デカン酸塩、りんご酸塩、塩基性酢酸塩、メグルミン、エデト酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、カリウム、エストレート、マンデル酸塩、硫酸塩、プロカイン、エシレート、メシレート、酒石酸塩、ナトリウム、フマル酸塩、臭化メチル、テオクル酸塩、トリメチルアミン、グルセプト酸塩、メチル硝酸塩、トシル酸塩、亜鉛、グルコン酸塩、メチル硫酸塩、及びトリエチオジドが挙げられる（ただしこれらに限定されない）。
いくつかの実施形態では、溶液中の塩、または医薬組成物で使用される塩としては、フッ化ナトリウム、塩化ナトリウム、臭化ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、硫酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸ナトリウム、ナトリウムアミド（ＮａＮＨ２）または任意の適切な塩または医薬製剤が挙げられるが、これらに限定されない。
４．１．２ 製剤のその他の成分
いくつかの実施形態において、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ならびに一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び界面活性剤のうち少なくとも１つを含む医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を提供する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、ショ糖を含まない。
いくつかの実施形態において、本開示は、組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）、ならびにイオン性塩賦形剤または緩衝剤、ショ糖及び界面活性剤のうち少なくとも１つを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態では、イオン性塩賦形剤または緩衝剤は、一塩基性リン酸カリウム、リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム六水和物、一塩基性リン酸ナトリウム一水和物、トロメタミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン塩酸塩（トリス－ＨＣｌ）、アミノ酸、ヒスチジン、塩酸ヒスチジン（ヒスチジン－ＨＣｌ）、コハク酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、及び（４－（２－ヒドロキシエチル）－１－ピペラジンエタンスルホン酸）（ＨＥＰＥＳ）、硫酸ナトリウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム６－水和物、硫酸カルシウム、塩化カリウム、塩化カルシウム、及びクエン酸カルシウムからなる群からの１つ以上の成分であり得る。いくつかの実施形態では、界面活性剤は、ポロキサマー１８８、ポリソルベート２０、及びポリソルベート８０からなる群からの１つ以上の成分であり得る。
特定の実施形態では、医薬組成物は、約６０ｍＭ～約１１５ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約６０ｍＭ～約１００ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約６５ｍＭ～約９５ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約７０ｍＭ～約９０ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約７５ｍＭ～約８５ｍＭのイオン強度を有する。
特定の実施形態では、医薬組成物は、約３０ｍＭ～約１００ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約３５ｍＭ～約９５ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約４０ｍＭ～約９０ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約４５ｍＭ～約８５ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約５０ｍＭ～約８０ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約５５ｍＭ～約７５ｍＭのイオン強度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約６０ｍＭ～約７０ｍＭのイオン強度を有する。
特定の実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウム（例えば、０．２ｇ／Ｌの濃度で）を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、一塩基性リン酸カリウム（例えば、０．２ｇ／Ｌの濃度で）を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、塩化ナトリウム（例えば、５．８４ｇ／Ｌの濃度で）を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、無水二塩基性リン酸ナトリウム（例えば、１．１５ｇ／Ｌの濃度で）を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、及び無水二塩基性リン酸ナトリウムを含む。
いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、医薬組成物と同じ成分を含む。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、医薬組成物と同じ成分を含むが、医薬組成物よりも低いイオン強度を有する。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、組成物または溶液のイオン強度に影響を与えるか、またはイオン強度を増大させる１つ以上の成分を除いて、医薬組成物と同じ成分を含む。
特定の実施形態では、医薬組成物は、１０％（重量／体積、３０ｇ／Ｌ）～１８％（重量／体積、１８０ｇ／Ｌ）の濃度でショ糖を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、４％（重量／体積、４０ｇ／Ｌ）の濃度でショ糖を含む。
特定の実施形態では、医薬組成物は、０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度でポロキサマー１８８を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、０．０００５％（重量／体積、０．００５ｇ／Ｌ）～０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度でポロキサマー１８８を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、０．００１％（重量／体積、０．０１ｇ／Ｌ）の濃度でポロキサマー１８８を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、０．０００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）～０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度でポリソルベート２０を含む。特定の実施形態では、医薬組成物は、０．０００５％（重量／体積、０．０５ｇ／Ｌ）～０．０５％（重量／体積、０．５ｇ／Ｌ）の濃度でポリソルベート８０を含む。
特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは約７．４である。特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは約６．０～９．０である。特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは７．４である。特定の実施形態では、医薬組成物のｐＨは６．０～９．０である。
特定の実施形態では、医薬組成物は、疎水性コーティングされたガラスバイアル中にある。特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｃｙｃｌｏ Ｏｌｅｆｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ（ＣＯＰ）バイアル中にある。特定の実施形態では、医薬組成物は、Ｄａｉｋｙｏ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｚｅｎｉｔｈ（登録商標）（ＣＺ）バイアル中にある。特定の実施形態では、医薬組成物は、ＴｏｐＬｙｏでコーティングされたバイアル中にある。
特定の実施形態において、組換えＡＡＶ、ならびに（ａ）０．２ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｂ）０．２ｇ／Ｌの濃度の一塩基性リン酸カリウム、（ｃ）５．８４ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｄ）１．１５ｇ／Ｌの濃度の無水二塩基性リン酸ナトリウム、（ｅ）４％重量／体積（４０ｇ／Ｌ）の濃度のショ糖、（ｆ）０．００１％重量／体積（０．０１ｇ／Ｌ）の濃度のポロキサマー１８８、及び（ｇ）水のうち少なくとも１つを含む医薬組成物であって、この際、組換えＡＡＶがＡＡＶ８である、医薬組成物を本明細書で開示する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ショ糖を含まない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ａ）抗ヒト血管内皮成長因子（ｈＶＥＧＦ）抗体をコードする構築物ＩＩ、ならびに（ｂ）０．２ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｃ）０．２ｇ／Ｌの濃度の一塩基性リン酸カリウム、（ｄ）５．８４ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｅ）１．１５ｇ／Ｌの濃度の無水二塩基性リン酸ナトリウム、（ｆ）４％の濃度、重量／体積（４０ｇ／Ｌ）のショ糖、（ｇ）０．００１％重量／体積（０．０１ｇ／Ｌ）の濃度のポロキサマー１８８、及び（ｈ）水のうち少なくとも１つを含み、かつ該抗ｈＶＥＧＦ抗体は、配列番号２、または配列番号４のアミノ酸配列で構成される重鎖、及び配列番号１または配列番号３のアミノ酸配列で構成される軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ショ糖を含まない。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、（ａ）トリペプチジルペプチダーゼ１をコードするＡＡＶ８またはＡＡＶ９、ならびに（ｂ）０．２ｇ／Ｌの濃度の塩化カリウム、（ｃ）０．２ｇ／Ｌの濃度の一塩基性リン酸カリウム、（ｄ）５．８４ｇ／Ｌの濃度の塩化ナトリウム、（ｅ）１．１５ｇ／Ｌの濃度の無水二塩基性リン酸ナトリウム、（ｆ）４％重量／体積（４０ｇ／Ｌ）の濃度のショ糖、（ｇ）０．００１％重量／体積（０．０１ｇ／Ｌ）の濃度のポロキサマー１８８、及び（ｈ）水のうち少なくとも１つを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ショ糖を含まない。いくつかの実施形態では、医薬組成物中のＡＡＶ凝集のレベルは、バッテン病ＣＬＮ２関連視力喪失に影響を与える。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、脈絡膜上注入（例えば、マイクロニードルを備えたマイクロインジェクターなどの脈絡膜上薬物送達デバイスを介した）に適した所望の粘度、密度、及び／または重量オスモル濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、液体組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、凍結組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、本明細書にて開示する液体組成物からの凍結乾燥組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、溶液調製される凍結乾燥製剤である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１％～約７％の残存水分含有量を含む凍結乾燥組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約２％～約６％の残存水分含有量を含む凍結乾燥組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約１０％～約４％の残存水分含有量を含む凍結乾燥組成物である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、約５％の残存水分含有量を含む凍結乾燥組成物である。
特定の実施形態では、医薬組成物は、２００ｍＯｓｍ／Ｌ～６６０ｍＯｓｍ／Ｌの範囲の重量オスモル濃度を有する。特定の実施形態では、医薬組成物は、約、少なくとも約、または最大でも約２００ｍＯｓｍ／Ｌ、２５０ｍＯｓｍ／Ｌ、３００ｍＯｓｍ／Ｌ，３５０ｍＯｓｍ／Ｌ，４００ｍＯｓｍ／Ｌ、４５０ｍＯｓｍ／Ｌ，５００ｍＯｓｍ／Ｌ、５５０ｍＯｓｍ／Ｌ、６００ｍＯｓｍ／Ｌ、６５０ｍＯｓｍ／Ｌ、または６６０ｍＯｓｍ／Ｌの重量オスモル濃度を有する。
特定の実施形態では、遺伝子治療構築物は、製剤用緩衝液中のＡＡＶベクター有効成分の凍結滅菌の単回使用溶液として供給される。ある特定の実施形態では、脈絡膜上投与に適した医薬組成物は、生理学的に適合性の水性緩衝液、界面活性剤、及び任意の賦形剤を含む製剤用緩衝液中の組換え（例えば、ｒＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉ）ベクターの懸濁液を含む。いくつかの実施形態では、構築物は、ｐＨ７．４のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水及び０．００１％ポロキサマー１８８中で製剤化される。
４．２ 機能的特性
４．２．１ クリアランス時間
本開示は、ＳＣＳからのクリアランス時間を遅延させる医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を提供する。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含むか、またはより高いレベルの凝集ＡＡＶを含む医薬組成物により、より低いレベルの凝集ＡＡＶを含むか、または凝集ＡＡＶを実質的に含んでいない、または凝集体を含んでいない医薬組成物と比較して、ＳＣＳからのクリアランス時間が遅くなる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含むか、またはより高いレベルの凝集ＡＡＶを含む医薬組成物により、より低いレベルの凝集ＡＡＶを含むか、または凝集ＡＡＶを実質的に含んでいない、または凝集体を含んでいない医薬組成物と比較して、眼からのクリアランス時間が遅くなる。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、網膜下注入に対して通常使用される参照組成物よりも多い凝集ＡＡＶを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物のクリアランス時間は、参照医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物のクリアランス時間は、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後の参照医薬組成物のクリアランス時間と同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物中の凝集ＡＡＶのレベルよりも多い凝集ＡＡＶを有する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤または低イオン強度の製剤）により、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、または約３日～約７日のＳＣＳからのクリアランス時間が生じる。いくつかの実施形態では、ＳＣＳからのクリアランス時間は、約３日～約３６５日、約３日～約３００日、約３日～約２００日、約３日～約１５０日、約３日～約１２５日、約７日～約３６５日、約７日～約３００日、約７日～約２００日、約７日～約１５０日、約７日～約１２５日である。「ＳＣＳからのクリアランス時間」とは、医薬組成物、医薬剤、またはＡＡＶの実質的に全てがＳＣＳから排除されるのに必要な時間である。いくつかの実施形態では、「ＳＣＳからのクリアランス時間」とは、医薬組成物、医薬剤、またはＡＡＶが任意の標準的な方法（セクション４．６及びセクション５に記載するような方法）でＳＣＳにおいて検出されなくなるのに必要な時間である。いくつかの実施形態では、「ＳＣＳからのクリアランス時間」とは、医薬組成物、医薬剤、またはＡＡＶが、任意の標準的な方法（セクション４．６及びセクション５に記載するような方法）で検出する際に、最大でも約２％または最大でも約５％の量でＳＣＳに存在する時間である。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤または低イオン強度の製剤）により、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、または約３日～約７日の眼からのクリアランス時間が生じる。いくつかの実施形態では、眼からのクリアランス時間は、約３日～約３６５日、約３日～約３００日、約３日～約２００日、約３日～約１５０日、約３日～約１２５日、約７日～約３６５日、約７日～約３００日、約７日～約２００日、約７日～約１５０日、約７日～約１２５日である。「眼からのクリアランス時間」とは、医薬組成物、医薬剤、またはＡＡＶの実質的に全てが眼から漏出するのに必要な時間である。いくつかの実施形態では、「眼からのクリアランス時間」とは、医薬組成物、医薬剤、またはＡＡＶが任意の方法（セクション４．６及びセクション５に記載するような方法）で眼において検出されなくなるのに必要な時間である。いくつかの実施形態では、「眼からのクリアランス時間」とは、医薬組成物、医薬剤、またはＡＡＶが、任意の標準的な方法（セクション４．６及びセクション５に記載するような方法）で検出する際に、最大でも約２％または最大でも約５％の量で眼に存在する時間である。
いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、医薬組成物（例えば、液体製剤）の投与後、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より前ではない（例えば、ＳＣＳまたは眼からのクリアランス時間は、これらの時間の前には起こらない）。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、医薬組成物（例えば、希釈された製剤または低イオン強度の製剤）の投与後、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日である。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ凝集またはより高いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤または低イオン強度の製剤）により、ＡＡＶ凝集を含まないか、またはより低いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（参照医薬組成物）が、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与（例えば、網膜下投与、硝子体内投与を介した、またはＳＣＳへの投与）に使用される場合よりも、少なくとも２倍長い、少なくとも３倍長い、少なくとも４倍長い、少なくとも５倍長い、少なくとも６倍長い、少なくとも７倍長い、少なくとも８倍長い、少なくとも９倍長い、少なくとも１０倍長い、少なくとも１５倍長い、少なくとも２０倍長い、少なくとも５０倍長い、少なくとも１００倍長い、少なくとも５％長い、少なくとも１０％長い、少なくとも１５％長い、少なくとも２０％長い、少なくとも２５％長い、少なくとも３０％長い、少なくとも３５％長い、少なくとも４０％、少なくとも４５％長い、少なくとも５０％長い、少なくとも５５％長い、少なくとも６０％長い、少なくとも６５％長い、少なくとも７０％長い、少なくとも７５％長い、少なくとも８０％長い、少なくとも８５％長い、少なくとも９０％長い、少なくとも９５％長い、少なくとも１００％長い、少なくとも１５０％長い、または少なくとも２００％長い、少なくとも２５０％長い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％長い、または少なくとも５００％長いクリアランス時間が生じる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ凝集またはより高いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤または低イオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、ＡＡＶ凝集を含まないか、またはより低いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（参照医薬組成物）が、例えば、脈絡膜上投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍長い、少なくとも３倍長い、少なくとも４倍長い、少なくとも５倍長い、少なくとも６倍長い、少なくとも７倍長い、少なくとも８倍長い、少なくとも９倍長い、少なくとも１０倍長い、少なくとも１５倍長い、少なくとも２０倍長い、少なくとも５０倍長い、少なくとも１００倍長い、少なくとも５％長い、少なくとも１０％長い、少なくとも１５％長い、少なくとも２０％長い、少なくとも２５％長い、少なくとも３０％長い、少なくとも３５％長い、少なくとも４０％、少なくとも４５％長い、少なくとも５０％長い、少なくとも５５％長い、少なくとも６０％長い、少なくとも６５％長い、少なくとも７０％長い、少なくとも７５％長い、少なくとも８０％長い、少なくとも８５％長い、少なくとも９０％長い、少なくとも９５％長い、少なくとも１００％長い、少なくとも１５０％長い、または少なくとも２００％長い、少なくとも２５０％長い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％長い、または少なくとも５００％長いクリアランス時間が生じる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ凝集またはより高いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤または低イオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、ＡＡＶ凝集を含まないか、またはより低いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（参照医薬組成物）が、例えば、網膜下投与によるか、または硝子体内投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍長い、少なくとも３倍長い、少なくとも４倍長い、少なくとも５倍長い、少なくとも６倍長い、少なくとも７倍長い、少なくとも８倍長い、少なくとも９倍長い、少なくとも１０倍長い、少なくとも１５倍長い、少なくとも２０倍長い、少なくとも５０倍長い、少なくとも１００倍長い、少なくとも５％長い、少なくとも１０％長い、少なくとも１５％長い、少なくとも２０％長い、少なくとも２５％長い、少なくとも３０％長い、少なくとも３５％長い、少なくとも４０％、少なくとも４５％長い、少なくとも５０％長い、少なくとも５５％長い、少なくとも６０％長い、少なくとも６５％長い、少なくとも７０％長い、少なくとも７５％長い、少なくとも８０％長い、少なくとも８５％長い、少なくとも９０％長い、少なくとも９５％長い、少なくとも１００％長い、少なくとも１５０％長い、または少なくとも２００％長い、少なくとも２５０％長い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％長い、または少なくとも５００％長いクリアランス時間が生じる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ凝集または参照と比較してより高いレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤または低イオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、同じ医薬組成物が、例えば、網膜下投与または硝子体内投与を介した導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍長い、少なくとも３倍長い、少なくとも４倍長い、少なくとも５倍長い、少なくとも６倍長い、少なくとも７倍長い、少なくとも８倍長い、少なくとも９倍長い、少なくとも１０倍長い、少なくとも１５倍長い、少なくとも２０倍長い、少なくとも５０倍長い、少なくとも１００倍長い、少なくとも５％長い、少なくとも１０％長い、少なくとも１５％長い、少なくとも２０％長い、少なくとも２５％長い、少なくとも３０％長い、少なくとも３５％長い、少なくとも４０％、少なくとも４５％長い、少なくとも５０％長い、少なくとも５５％長い、少なくとも６０％長い、少なくとも６５％長い、少なくとも７０％長い、少なくとも７５％長い、少なくとも８０％長い、少なくとも８５％長い、少なくとも９０％長い、少なくとも９５％長い、少なくとも１００％長い、少なくとも１５０％長い、または少なくとも２００％長い、少なくとも２５０％長い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％長い、または少なくとも５００％長いクリアランス時間が生じる。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上注入によって投与される凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与または硝子体内投与を介して投与される同じ医薬組成物のクリアランス時間よりも長い。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後のクリアランス時間は、ＡＡＶ凝集を含まないか、またはより低いレベルのＡＡＶ凝集を含む同等の医薬組成物（例えば、参照医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後のクリアランス時間よりも長い。いくつかの実施形態では、脈絡膜上注入後の凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与後または硝子体内投与を介した後の、より低いレベルのＡＡＶ凝集を含む（または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない）同等の医薬組成物のクリアランス時間よりも長い。いくつかの実施形態では、脈絡膜上注入によって投与される凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与または硝子体内投与を介して投与される、より低いレベルのＡＡＶ凝集を含む（または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない）同等の医薬組成物よりも長い。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、網膜下投与または硝子体内投与後の同じ医薬組成物のクリアランス時間よりも、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日長い。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、より少ない凝集ＡＡＶを含むか、または検出可能な凝集ＡＡＶを含まない同等の医薬組成物が脈絡膜上注入によって投与された後のクリアランス時間よりも、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日長い。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上投与後の凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）のクリアランス時間は、より少ない凝集ＡＡＶを含むか、または検出可能な凝集ＡＡＶを含まない同等の医薬組成物が網膜下投与または硝子体内投与によって投与された後のクリアランス時間よりも、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日長い。
いくつかの実施形態では、硝子体内注入を介して、または網膜下注入を介して投与された医薬組成物のクリアランス時間は、投与後、最大でも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または最大でも約４００日である。
いくつかの実施形態では、硝子体内注入、網膜下注入によって、またはＳＣＳに投与された参照医薬組成物のクリアランス時間は、投与後、最大でも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または最大でも約４００日である。
いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、眼からのクリアランス時間である。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、ＳＣＳからのクリアランス時間である。いくつかの実施形態では、クリアランス時間は、注入部位からのクリアランス時間である。
４．２．２ 周辺への拡散
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、注入部位において局在化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、より少ないＡＡＶ凝集を含むか、または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない参照医薬組成物よりも、より長い期間、注入部位において局在化する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、医薬組成物が網膜下注入または硝子体内注入によって投与される場合と比較して、ＳＣＳに注入される場合に、より長い期間、注入部位において局在化する。医薬組成物は、異なるレベルのウイルスベクター凝集を有する場合がある。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物は、より少ないＡＡＶ凝集を含むか、または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない医薬組成物（例えば、参照医薬組成物）と比較して、より長い期間、ＳＣＳにおける局在化を維持する。
いくつかの実施形態では、局在化は、周辺への拡散（例えば、２Ｄの周辺への拡散）を評価することによって特定することができる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）により、参照医薬組成物（例えば、より少ないＡＡＶ凝集を含むか、検出可能なレベルのＡＡＶ凝集を含まない）が、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与（例えば、脈絡膜上注入による、網膜下注入による、または硝子体内注入による）に使用される場合よりも、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１の周辺への拡散、少なくとも５％小さい、少なくとも１０％小さい、少なくとも１５％小さい、少なくとも２０％小さい、少なくとも２５％小さい、少なくとも３０％小さい、少なくとも３５％小さい、少なくとも４０％、少なくとも４５％小さい、少なくとも５０％小さい、少なくとも５５％小さい、少なくとも６０％小さい、少なくとも６５％小さい、少なくとも７０％小さい、少なくとも７５％小さい、少なくとも８０％小さい、少なくとも８５％小さい、少なくとも９０％小さい、少なくとも９５％小さい、少なくとも１００％小さい、少なくとも１５０％小さい、または少なくとも２００％小さい、少なくとも２５０％小さい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％小さい、または少なくとも５００％小さい周辺への拡散が生じる。
いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、参照医薬組成物（例えば、より少ないＡＡＶ凝集を含むか、検出可能なレベルのＡＡＶ凝集を含まない）が、例えば、脈絡膜上投与、網膜下投与、または硝子体内投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１の周辺への拡散、少なくとも５％小さい、少なくとも１０％小さい、少なくとも１５％小さい、少なくとも２０％小さい、少なくとも２５％小さい、少なくとも３０％小さい、少なくとも３５％小さい、少なくとも４０％、少なくとも４５％小さい、少なくとも５０％小さい、少なくとも５５％小さい、少なくとも６０％小さい、少なくとも６５％小さい、少なくとも７０％小さい、少なくとも７５％小さい、少なくとも８０％小さい、少なくとも８５％小さい、少なくとも９０％小さい、少なくとも９５％小さい、少なくとも１００％小さい、少なくとも１５０％小さい、または少なくとも２００％小さい、少なくとも２５０％小さい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％小さい、または少なくとも５００％小さい周辺への拡散が生じる。
いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、同じ医薬組成物が、例えば、網膜下投与、または硝子体内投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１の周辺への拡散、少なくとも５％小さい、少なくとも１０％小さい、少なくとも１５％小さい、少なくとも２０％小さい、少なくとも２５％小さい、少なくとも３０％小さい、少なくとも３５％小さい、少なくとも４０％、少なくとも４５％小さい、少なくとも５０％小さい、少なくとも５５％小さい、少なくとも６０％小さい、少なくとも６５％小さい、少なくとも７０％小さい、少なくとも７５％小さい、少なくとも８０％小さい、少なくとも８５％小さい、少なくとも９０％小さい、少なくとも９５％小さい、少なくとも１００％小さい、少なくとも１５０％小さい、または少なくとも２００％小さい、少なくとも２５０％小さい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％小さい、または少なくとも５００％小さい周辺への拡散が生じる。
いくつかの実施形態では、周辺への拡散は、医薬組成物または参照医薬組成物が投与されてから３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日後に測定することができる。
４．２．３ ＳＣＳの厚さ
いくつかの実施形態では、局在化は、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）が対象に投与された後のＳＣＳの厚さを評価することによって特定することができる。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）は、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）がＳＣＳに注入された後に、ＳＣＳの厚さを増加させる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）のＳＣＳへの注入により、参照医薬組成物（例えば、より低いレベルのＡＡＶ凝集を含むか、検出可能なＡＡＶ凝集を含まない）がＳＣＳに注入される場合に達成されるＳＣＳの厚さ以上に、ＳＣＳの厚さを拡張できる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）によるＳＣＳの厚さの増加により、ＳＣＳへの接近が容易になり、それにより、ＳＣＳ内へのデバイスの配置を容易にまたは促進することができる。いくつかの実施形態では、ＳＣＳの厚さを拡張することにより、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）及び／または導入遺伝子をコードしたＡＡＶを、注入部位により長い期間維持させる（局在化させる）ことが可能になる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物は、参照医薬組成物と比較して、より長い期間、注入部位における、または注入部位近くの厚さを増加させる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物は、より少ないＡＡＶ凝集を含むか、または検出可能なレベルのＡＡＶ凝集を含まない医薬組成物と比較して、より長い期間、注入部位における、または注入部位近くの厚さを増加させる。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位の厚さは、参照医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された後の参照医薬組成物の注入部位の厚さと同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の医薬組成物の注入部位の厚さは、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後の参照医薬組成物の注入部位の厚さと同等またはそれ以上である。
いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、参照医薬組成物（より低いレベルのＡＡＶ凝集を含むか、または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない）が、例えば、脈絡膜上投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きいＳＣＳの厚さの増加が得られる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、参照医薬組成物（より低いレベルのＡＡＶ凝集を含むか、または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない）が、例えば、網膜下投与または硝子体内投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きい注入部位における、または注入部位近くの厚さの増加が得られる。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶ凝集を含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、同じ医薬組成物が、例えば、網膜下投与または硝子体内投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きい注入部位における、または注入部位近くの厚さの増加が得られる。
いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後に注入部位で得られる厚さは、参照医薬組成物が脈絡膜上注入によって投与された後よりも大きい。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後に注入部位で得られる厚さは、参照医薬組成物が網膜下注入または硝子体内注入によって投与された後よりも大きい。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後に注入部位で得られる厚さは、同じ医薬組成物が網膜下投与または硝子体内投与によって投与された後よりも大きい。
いくつかの実施形態では、注入部位における、または注入部位近くの厚さ（例えば、ＳＣＳにおける、またはＳＣＳ近くの厚さ）は、医薬組成物または参照医薬組成物が投与されてから３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日後に測定することができる。
４．２．４ 血管拡張及び血管漏出
いくつかの実施形態では、医薬組成物（凝集ＡＡＶを含む）がＳＣＳへ投与された後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、参照医薬組成物が網膜下または硝子体内に投与された後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと同等またはそれより低い。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳへ投与された後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、参照医薬組成物がＳＣＳに投与された後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと同等またはそれより低い。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセット含むＡＡＶの希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）により、医薬組成物が網膜下投与または硝子体内投与を介して投与された後と比較して、同じ医薬組成物がＳＣＳに投与された後に、ＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルが低下する。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）により、参照医薬組成物が網膜下投与もしくは硝子体内投与を介して、またはＳＣＳに投与された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに投与された後に、ＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルが低下する。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出は、少なくとも約２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％減少する。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である。
いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出は、投与から約３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１５時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または最大でも約４００日後に測定される。
４．２．５ 注入部位における形質導入率（感染率）
いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）は、同じ医薬組成物が網膜下投与または静脈内投与を介して投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）と比較した場合に同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）は、参照医薬組成物が網膜下投与もしくは静脈内投与を介して、またはＳＣＳに投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）と比較した場合に同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物よりも高いレベルのＡＡＶ凝集を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）は、同じ医薬組成物が網膜下または硝子体内投与を介して投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％上昇する。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）は、参照医薬組成物がＳＣＳに、または網膜下もしくは硝子体内投与を介して投与された後の注入部位における形質導入率（感染率）と比較して、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％上昇する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物と比較して、より高いレベルのＡＡＶ凝集を有する。
いくつかの実施形態では、注入部位におけるＡＡＶのレベルは、同じ医薬組成物が網膜下投与または静脈内投与を介して投与された後の注入部位におけるＡＡＶのレベルと比較して、医薬組成物が脈絡膜上に投与された後、同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物が脈絡膜上に投与された後の注入部位におけるＡＡＶのレベルは、参照医薬組成物が網膜下投与もしくは静脈内投与を介して、またはＳＣＳに投与された後の注入部位におけるＡＡＶのレベルと比較して、同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物よりも高いレベルのＡＡＶ凝集を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じベクターゲノム濃度を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物及び参照医薬組成物は、同じ量のゲノムコピーを有する。いくつかの実施形態では、注入部位におけるＡＡＶのレベルの増加は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％増加する。
いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位におけるＡＡＶのレベルは、同じ医薬組成物が網膜下または硝子体内投与を介して投与された後の注入部位におけるＡＡＶのレベルと比較して、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％増加する。いくつかの実施形態では、医薬組成物がＳＣＳに投与された後の注入部位におけるＡＡＶレベルは、参照医薬組成物がＳＣＳに、または網膜下もしくは硝子体内投与を介して投与された後の注入部位におけるＡＡＶレベルと比較して、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％増加する。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、参照医薬組成物と比較して、より高いレベルのＡＡＶ凝集を有する。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶレベルまたは形質導入率（感染率）は、投与から約３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１０時間、１２時間、１４時間、１５時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または最大でも約４００日後に測定される。
４．２．６ 導入遺伝子発現
いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、参照医薬組成物がＳＣＳに注入された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注入された後、少なくとも同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、参照医薬組成物が網膜下注入または硝子体内注入によって注入された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注入された後、少なくとも同等またはそれ以上である。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物の濃度は、同じ医薬組成物が網膜下注入または硝子体内注入によって注入された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注入された後、少なくとも同等またはそれ以上である。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物（例えば、導入遺伝子産物の濃度）は、参照医薬組成物がＳＣＳに注入された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注入された後、より長い期間、眼（例えば、硝子体液）で検出される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物（例えば、導入遺伝子産物の濃度）は、参照医薬組成物が網膜下注入または硝子体内投与によって注入された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注入された後、より長い期間、眼（例えば、硝子体液）で検出される。いくつかの実施形態では、導入遺伝子産物（例えば、導入遺伝子産物の濃度）は、同じ医薬組成物が網膜下注入または硝子体内注入によって注入された後と比較して、医薬組成物がＳＣＳに注入された後、より長い期間、眼（例えば、硝子体液）で検出される。
いくつかの実施形態では、より長い期間は、少なくとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日長い。いくつかの実施形態では、より長い期間は、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日長い。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、医薬組成物がＳＣＳに投与された後、投与後少なくとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日の期間、眼（例えば、硝子体液）で検出される。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、投与後（例えば、参照医薬組成物が網膜下投与もしくは硝子体内投与を介して、またはＳＣＳに投与された後；あるいは医薬組成物が網膜下または硝子体内投与を介して投与された後）最大でも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、または１００日の期間、眼（例えば、硝子体液）で検出される。
いくつかの実施形態では、眼（例えば、硝子体液）における導入遺伝子産物の濃度は、医薬組成物または参照医薬組成物が投与されてから３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、２４時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日後に測定することができる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、参照医薬組成物が、例えば、脈絡膜上投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用された後よりも、少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも１５倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも１００倍高い、少なくとも５％高い、少なくとも１０％高い、少なくとも１５％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも２５％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも３５％高い、少なくとも４０％、少なくとも４５％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも５５％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも６５％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも７５％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも８５％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも９５％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、または少なくとも２００％高い、少なくとも２５０％高い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％高い、または少なくとも５００％高い、より高濃度の導入遺伝子が得られる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、参照医薬組成物（より低いレベルのＡＡＶ凝集を含むか、または検出可能なＡＡＶ凝集を含まない）が、例えば、網膜下投与または硝子体内投与による導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶの投与に使用される場合よりも、少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも１５倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも１００倍高い、少なくとも５％高い、少なくとも１０％高い、少なくとも１５％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも２５％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも３５％高い、少なくとも４０％、少なくとも４５％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも５５％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも６５％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも７５％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも８５％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも９５％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、または少なくとも２００％高い、少なくとも２５０％高い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％高い、または少なくとも５００％高い、より高濃度の導入遺伝子が得られる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上投与により、同じ医薬組成物が、網膜下投与または硝子体内投与を介して投与される場合よりも、少なくとも２倍高い、少なくとも３倍高い、少なくとも４倍高い、少なくとも５倍高い、少なくとも６倍高い、少なくとも７倍高い、少なくとも８倍高い、少なくとも９倍高い、少なくとも１０倍高い、少なくとも１５倍高い、少なくとも２０倍高い、少なくとも５０倍高い、少なくとも１００倍高い、少なくとも５％高い、少なくとも１０％高い、少なくとも１５％高い、少なくとも２０％高い、少なくとも２５％高い、少なくとも３０％高い、少なくとも３５％高い、少なくとも４０％、少なくとも４５％高い、少なくとも５０％高い、少なくとも５５％高い、少なくとも６０％高い、少なくとも６５％高い、少なくとも７０％高い、少なくとも７５％高い、少なくとも８０％高い、少なくとも８５％高い、少なくとも９０％高い、少なくとも９５％高い、少なくとも１００％高い、少なくとも１５０％高い、または少なくとも２００％高い、少なくとも２５０％高い、または少なくとも３００％、少なくとも４００％高い、または少なくとも５００％高い、より高濃度の導入遺伝子が得られる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後の導入遺伝子の濃度は、参照医薬組成物が脈絡膜上注入によって投与された後よりも高い。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含むＡＡＶを含む医薬組成物）が脈絡膜上注入によって投与された後の導入遺伝子の濃度は、参照医薬組成物が網膜下投与によってまたは硝子体内投与を介して投与された後よりも高い。
４．２．７ その他の機能的特性
いくつかの実施形態では、本明細書に記載する医薬組成物は、脈絡膜上注入に適した所望のレベルのＡＡＶ凝集を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物（または同等の医薬組成物）中の組換えＡＡＶと少なくとも同程度に安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物（または同等の医薬組成物）中の組換えＡＡＶと比べて、少なくとも５０％安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じまたは同等の感染力レベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じまたは同等の遊離ＤＮＡレベルを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じまたは同等のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の組換えＡＡＶと少なくとも同じまたは同等のサイズレベルの変化を有する。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、凍結／解凍サイクルに対して少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍安定である。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと比べて、凍結／解凍サイクルに対して少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％安定である。特定の実施形態では、組換えＡＡＶの安定性は、セクション４．６及びセクション５に開示する１つ以上のアッセイによって特定される。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い感染力を呈する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと比べて、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の感染力を有する。特定の実施形態では、組換えＡＡＶのウイルス感染力は、本開示に開示する１つ以上のアッセイによって特定される。特定の実施形態では、組換えＡＡＶのサイズは、セクション４．６及びセクション５に開示する１つ以上のアッセイによって決定される。特定の実施形態では、サイズは、凍結／解凍サイクル前または後に測定される。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、例えば、少なくとも約または約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年、約３年、約４年の期間にわたって、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍、より安定である（例えば、－２０℃または３７℃で保管した場合）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと比べて、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％、一定期間にわたって安定である。特定の実施形態では、組換えＡＡＶの一定期間にわたる安定性は、本開示に開示する１つ以上のアッセイによって特定される。特定の実施形態では、組換えＡＡＶの一定期間にわたる安定性は、セクション４．６及びセクション５に開示する１つ以上のアッセイによって特定される。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）が少なくとも約２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い（例えば、－２０℃または３７℃で保管された場合）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶとおよそ同じｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）を有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと比べて、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％のｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）を有する。特定の実施形態では、組換えＡＡＶのｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）は、本開示に開示する１つ以上のアッセイによって決定される。特定の実施形態では、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）は、凍結／解凍サイクル前または後に測定される。特定の実施形態では、組換えＡＡＶのｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）は、セクション４．６に開示する１つ以上のアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％少ない、２分の１、３分の１、５分の１、１０分の１、１００分の１、または１０００分の１の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶとおよそ同じ量の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶのおよそ２分の１以下の量の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと比べて、約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％の量の遊離ＤＮＡを有する。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、約３分の１の遊離ＤＮＡを含む。特定の実施形態では、組換えＡＡＶの遊離ＤＮＡは、セクション４．６及びセクション５に開示する１つ以上のアッセイによって特定される。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、例えば、少なくとも約または約１週間、約２週間、約３週間、約４週間、約１ヶ月、約２ヶ月、約３ヶ月、約４ヶ月、約５ヶ月、約６ヶ月、約７ヶ月、約８ヶ月、約９ヶ月、約１０ヶ月、約１１ヶ月、約１２ヶ月、約１５ヶ月、約１８ヶ月、約２４ヶ月、約２年、約３年、及び約４年の期間にわたって、最大でも２０％、１５％、１０％、８％、５％、４％、１０％、２％、または１％のサイズの変化を有する（例えば、－２０℃または３７℃で保管される場合）。特定の実施形態では、組換えＡＡＶのサイズは、本開示に開示する１つ以上のアッセイによって決定される。特定の実施形態では、サイズは、凍結／解凍サイクル前または後に測定される。特定の実施形態では、組換えＡＡＶのサイズは、セクション４．６に開示する１つ以上のアッセイによって決定される。
特定の実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶよりも、少なくとも２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍、より安定である（例えば、－２０℃または３７℃で保管された場合）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶとほぼ同程度に安定である（例えば、－２０℃または３７℃で保管された場合）。いくつかの実施形態では、医薬組成物中の組換えＡＡＶは、参照医薬組成物中の同じ組換えＡＡＶと比べて、少なくとも約５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９９％安定である（例えば、－２０℃または３７℃で保管された場合）。特定の実施形態では、組換えＡＡＶの安定性は、セクション４．６に開示する１つ以上のアッセイによって特定される。
特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、例えば、セクション４．６に記載する１つ以上のアッセイによって測定する際に、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、４℃で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、≦６０℃で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、－８０℃で、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、－２０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１２ヶ月保管した後に、４℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。
特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、例えば、セクション４．６に開示する１つ以上のアッセイによって測定する際に、最初に－８０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間保管し、その後解凍し、かつ解凍後、２～１０℃、４～８℃、２℃、３℃、４℃、５℃、６℃、７℃、８℃または９℃でさらに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１２ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、例えば、セクション４．６または５に開示する１つ以上のアッセイによって測定する際に、最初に－８０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間保管し、その後解凍し、かつ解凍後、約４℃でさらに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１２ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。特定の実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、例えば、セクション４．６または５に開示する１つ以上のアッセイによって測定する際に、最初に≦６０℃で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、または２４ヶ月間保管し、その後解凍し、かつ解凍後、約４℃でさらに１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、または１２ヶ月間、安定性を損なうことなく保管することができる。
本明細書に記載する方法または医薬組成物の効果は、視力喪失、感染、炎症及び網膜剥離を含むその他の安全性事象の徴候を測定することによってモニタリングすることができる。いくつかの実施形態では、異なるＡＡＶ凝集レベルを有する異なる医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を使用して、ＳＣＳにベクターを送達することができる。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を使用して送達されるベクターは、参照医薬組成物を使用して送達されるベクターよりも（例えば、ＳＣＳに投与される場合に）より効果的である。いくつかの実施形態では、凝集ＡＡＶを含む製剤を使用して送達されるベクターにより、より低いレベルの凝集ＡＡＶを含むか、または検出可能なレベルの凝集ＡＡＶを含まない製剤を使用して送達されるベクターと比較して、視力が改善する。
本明細書に記載する方法または医薬組成物の効果はまた、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｖｉｓｕａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ ＱｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅのＲａｓｃｈスコアバージョン（ＮＥＩ－ＶＦＱ－２８－Ｒ）（総合スコア；活動制限領域スコア；及び社会－感情機能領域スコア）のベースラインからの変化によって測定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法の効果はまた、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｅｙｅ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ Ｖｉｓｕａｌ Ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅの２５アイテムバージョン（ＮＥＩ－ＶＦＱ－２５）（総合スコア及び精神衛生部分尺度スコア）のベースラインからの変化によって測定することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載する方法の効果はまた、Ｍａｃｕｌａｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ Ｓａｔｉｓｆａｃｔｉｏｎ Ｑｕｅｓｔｉｏｎｎａｉｒｅ（ＭａｃＴＳＱ）（総合スコア；安全性、有効性及び不快領域スコア；ならびに情報提供及び利便性領域スコア）のベースラインからの変化によって測定することができる。
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法またはベクター（ベクター製剤）の有効性は、約４週間、１２週間、６ヶ月、１２ヶ月、２４ヶ月、３６ヶ月、または他の所望の時点での視力の改善を反映したものである。ある特定の実施形態では、視力の改善は、ＢＣＶＡの改善、例えば、１文字、２文字、３文字、４文字、５文字、６文字、７文字、８文字、９文字、１０文字、１１文字、または１２文字以上の改善によって特徴付けられる。特定の実施形態では、視力の改善は、ベースラインからの５％、１０％、１５％、２０％、３０％、４０％、５０％以上の視力の改善によって特徴付けられる。
特定の実施形態では、治療後に眼の炎症が見られないか、または治療後に眼の炎症がわずかに（例えば、ベースラインから１０％、５％、２％、１％以下の炎症レベルの増加が）見られる。
４．３ 投薬量及び投与様式
一態様では、眼の病状を治療するための脈絡膜上投与の方法を本明細書で提供するが、該方法は、治療用産物をコードするヌクレオチド配列を含む組換えウイルスベクターを、治療を必要とするヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与することを含み、これにより、該治療用産物が発現し、眼の病状の治療をもたらす。特定の実施形態では、投与するステップは、脈絡膜上薬物送達デバイスを使用して組換えウイルスベクターを脈絡膜上腔に注入することによるものである。特定の実施形態では、脈絡膜上薬物送達デバイスは、マイクロインジェクターである。いくつかの実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物は、１つ、２つ以上の投与経路による投与に適している（例えば、脈絡膜上及び網膜下投与に適している）。
特定の実施形態では、医薬組成物（または参照医薬組成物）のベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３．２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６．５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、または約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである。
特定の実施形態では、医薬組成物（または参照医薬組成物）のベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、４×１０９ＧＣ／ｍＬ、５×１０９ＧＣ／ｍＬ、６×１０９ＧＣ／ｍＬ、７×１０９ＧＣ／ｍＬ、８×１０９ＧＣ／ｍＬ、９×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約７×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約８×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約９×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである。
いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の容量は、強膜及び脈絡膜を分離するための最低限の力を低減できる任意の容量である。いくつかの実施形態では、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の容量は、約５０μＬ～約１０００μＬ、５０μＬ～約５００μＬ、５０μＬ～約４００μＬ、５０μＬ～約３５０μＬ、５０μＬ～約３００μＬ、約５０μＬ～約２７５μＬ、約５０μＬ～約２５０μＬ、約５０μＬ～約２２５μＬ、約５０μＬ～約２００μＬ、約５０μＬ～約１７５μＬ、約５０μＬ～約１５０μＬ、約６０μＬ～約１４０μＬ、約７０μＬ～約１３０μＬ、約８０μＬ～約１２０μＬ、約９０μＬ～約１１０μＬ、または約１００μＬである。
脈絡膜上腔（ＳＣＳ）送達のための現在利用可能な技術が存在する。前臨床では、ＳＣ注入は、強膜フラップ技術、カテーテル及び標準的な皮下注射針、ならびにマイクロニードルを用いてこれまでに実現されてきた。７５０ｕｍ長の中空マイクロニードル（Ｃｌｅａｒｓｉｄｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ，Ｉｎｃ．）は、部分的に挿入することができ、臨床試験によって有望であることが証明されている。力覚センシング技術によって設計されたマイクロニードルが、Ｃｈｉｔｎｉｓらによって説明されているようにＳＣ注入に使用可能である（Ｃｈｉｔｎｉｓ，Ｇ．Ｄ．，ｅｔ ａｌ．Ａ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ－ｓｅｎｓｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ ｉｎｊｅｃｔｏｒ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｌｉｑｕｉｄｓ ｔｏ ｔａｒｇｅｔ ｔｉｓｓｕｅ． Ｎａｔ Ｂｉｏｍｅｄ Ｅｎｇ ３，６２１－６３１ （２０１９）．ｈｔｔｐｓ：／／ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０３８／ｓ４１５５１－０１９－０３５０－２）。Ｏｘｕｌａｒ Ｌｉｍｉｔｅｄは、脈絡膜上腔内で、照明付きカニューレを前進させる送達システム（Ｏｘｕｌｕｍｉｓ）を開発している。Ｏｒｂｉｔデバイス（Ｇｙｒｏｓｃｏｐｅ）は、柔軟なカニューレを用いた脈絡膜上腔へのカニューレ挿入を可能にする特別に設計されたシステムである。目的の用量の送達を可能にするために、カニューレ内部のマイクロニードルを網膜下腔に前進させる。ＳＣＳへの眼内法による接近もまた、低侵襲緑内障手術（ＭＩＧＳ）デバイスとして機能するマイクロステントを使用して実現することができる。例としては、ＣｙＰａｓｓ（登録商標）Ｍｉｃｒｏ－Ｓｔｅｎｔ（Ａｌｃｏｎ，Ｆｏｒｔ Ｗｏｒｔｈ，Ｔｅｘａｓ，ＵＳ）及びｉＳｔｅｎｔ（登録商標）（Ｇｌａｕｋｏｓ）が挙げられ、これらは、前眼房からＳＣＳまでに導管を設け、濾過胞を形成することなく眼房水を排出するために、外科的に植設される。脈絡膜上送達向けに検討される他のデバイスとしては、英国特許公報第ＧＢ ２５３１９１０Ａ号、及び米国特許第１０，９１２，８８３ Ｂ２号に記載されているものが挙げられる。
いくつかの実施形態では、脈絡膜上薬物送達デバイスは、１ミリメートル３０ゲージニードルを有するシリンジである。いくつかの実施形態では、シリンジは、より大きな円周（例えば、２９ゲージニードル）を有する。このデバイスを使用した注入の間、ニードルは、強膜の基部を貫通し、薬物含有液体が脈絡膜上腔に入り、それにより脈絡膜上腔が拡張する。その結果、注入中に触覚的及び視覚的フィードバックがある。注入後、液体は、後方に流れ、脈絡膜及び網膜で優先的に吸収される。これにより、全ての網膜細胞層及び脈絡膜細胞から導入遺伝子タンパク質の産生がもたらされる。このタイプのデバイス及び処置を使用することで、合併症のリスクが低く、迅速かつ簡単な診療が可能となる。
いくつかの実施形態では、マイクロニードルまたはシリンジは、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）のＡＡＶ凝集のレベルに基づいて選択される。いくつかの実施形態では、マイクロニードルは、医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）が投与された場合の眼（例えば、ＳＣＳ）において生じる圧力に基づいて選択される。例えば、より高いレベルのＡＡＶ凝集を有する医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）には、より太い注入用マイクロニードルの使用が有利である場合がある。いくつかの実施形態では、ＳＣＳにおける圧力は、より太いマイクロニードルが使用された場合、より細いマイクロニードルが使用された場合に生じる圧力と比較して小さい。いくつかの実施形態では、１０ゲージニードル、１１ゲージニードル、１２ゲージニードル、１３ゲージニードル、１４ゲージニードル、１５ゲージニードル、１６ゲージニードル、１７ゲージニードル、１８ゲージニードル、１９ゲージニードル、２０ゲージニードル、２１ゲージニードル、２２ゲージニードル、２３ゲージニードル、２４ゲージニードル、２５ゲージニードル、２６ゲージニードル、２７ゲージニードル、２８ゲージニードル、２９ゲージニードル、３０ゲージニードル、３１ゲージニードル、３２ゲージニードル、３３ゲージニードル、または３４ゲージニードルが使用される。いくつかの実施形態では、２７ゲージニードルが使用される。いくつかの実施形態では、２８ゲージニードルが使用される。いくつかの実施形態では、２９ゲージニードルが使用される。いくつかの実施形態では、３０ゲージニードルが使用される。いくつかの実施形態では、３１ゲージニードルが使用される。いくつかの実施形態では、２７ゲージニードルより小さいゲージが使用される。いくつかの実施形態では、２７ゲージニードルより大きいゲージが使用される。いくつかの実施形態では、３０ゲージニードルより小さいゲージが使用される。いくつかの実施形態では、３０ゲージニードルより大きいゲージが使用される。
いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中の圧力は、約１０ＰＳＩ、１５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ、２５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ、３５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ、４５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ、５５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ、６５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ、７５ＰＳＩ、８０ＰＳＩ、８５ＰＳＩ、９０ＰＳＩ、９５ＰＳＩ、１００ＰＳＩ、１５０ＰＳＩ、または２００ＰＳＩである。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中の圧力は、約１０ＰＳＩ、１５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ、２５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ、３５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ、４５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ、５５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ、６５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ、７５ＰＳＩ、８０ＰＳＩ、８５ＰＳＩ、９０ＰＳＩ、９５ＰＳＩ、１００ＰＳＩ、１５０ＰＳＩ、または２００ＰＳＩ以下である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中のＳＣＳを開く圧力は、約１０ＰＳＩ、１５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ、２５ＰＳＩ、３０ＰＳＩ、３５ＰＳＩ、４０ＰＳＩ、４５ＰＳＩ、５０ＰＳＩ、５５ＰＳＩ、６０ＰＳＩ、６５ＰＳＩ、７０ＰＳＩ、７５ＰＳＩ、８０ＰＳＩ、８５ＰＳＩ、９０ＰＳＩ、９５ＰＳＩ、１００ＰＳＩ、１５０ＰＳＩ、または２００ＰＳＩ以下である。いくつかの実施形態では、医薬組成物の投与中の圧力（またはＳＣＳを開けるのに必要な圧力）は、２０ＰＳＩ～５０ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～７５ＰＳＩ、２０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～４０ＰＳＩ、１０ＰＳＩ～１００ＰＳＩ、または１０ＰＳＩ～８０ＰＳＩである。いくつかの実施形態では、圧力は、注入速度が低下するにつれて小さくなる（例えば、４秒の注入速度から１０秒の注入速度まで圧力は小さくなる）。いくつかの実施形態では、圧力は、ニードルのサイズが大きくなるにつれて小さくなる。いくつかの実施形態では、圧力は、ＡＡＶ凝集のレベルが増加するにつれて大きくなる。
眼（例えば、硝子体液）内で少なくとも０．３３０μｇ／ｍＬ、または眼房水（眼の前眼房）内で０．１１０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎで導入遺伝子産物の濃度を３ヶ月間維持する用量が所望され、その後１．７０～６．６０μｇ／ｍＬの範囲の導入遺伝子産物の硝子体Ｃｍｉｎ濃度及び／または０．５６７～２．２０μｇ／ｍＬの範囲の眼房Ｃｍｉｎ濃度を維持する必要がある。しかし、導入遺伝子産物は、連続的に産生される（構成的プロモーターの制御下で、または低酸素誘導性プロモーターを使用する際に低酸素状態によって誘導される）ため、低濃度の維持は、効果的である可能性がある。導入遺伝子濃度は、体液、眼液、硝子体液、もしくは前眼房から採取された液体の患者の試料において直接測定するか、または導入遺伝子産物の患者の血清濃度を測定することによって推定及び／またはモニタリングすることができる。導入遺伝子産物への全身曝露と硝子体曝露の比率は、約１：９０，０００である（例えば、Ｘｕ Ｌ，ｅｔ ａｌ．，２０１３，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５４：１６１６－１６２４，のｐ．１６２１及びｐ．１６２３のＴａｂｌｅ ５で報告されているｖｉｔｒｅｏｕｓ ｈｕｍｏｒ ａｎｄ ｓｅｒｕｍ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｒａｎｉｂｉｚｕｍａｂを参照されたく、その全体は参照により本明細書に援用される。
特定の実施形態では、投薬量は、１ｍｌごとのゲノムコピー（ＧＣ／ｍＬ）または患者の眼に投与される（例えば、脈絡膜上に投与される）ゲノムコピー数によって測定される。いくつかの実施形態では、２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ～１×１０１３ＧＣ／ｍＬが投与されるか、２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ～５×１０１１ＧＣ／ｍＬが投与されるか、５×１０１１ＧＣ／ｍＬ～１×１０１２ＧＣ／ｍＬが投与されるか、１×１０１２ＧＣ／ｍＬ～５×１０１２ＧＣ／ｍＬが投与されるか、または５×１０１２ＧＣ／ｍＬ～１×１０１３ＧＣ／ｍＬが投与される。いくつかの実施形態では、１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬ～３×１０１３ＧＣ／ｍＬが投与される。いくつかの実施形態では、約２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１３ＧＣ／ｍＬまたは約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬが投与される。いくつかの実施形態では、１×１０９～１×１０１２ゲノムコピーが投与される。いくつかの実施形態では、３×１０９～２．５×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１×１０９～２．５×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１×１０９～１×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１×１０９～５×１０９ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、６×１０９～３×１０１０ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、４×１０１０～１×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、２×１０１１～１×１０１２ゲノムコピーが投与される。ある特定の実施形態では、約３×１０９ゲノムコピーが投与される（２５０μｌの容量で約１．２×１０１０ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約１×１０１０ゲノムコピーが投与される（２５０μｌの容量で約４×１０１０ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約６×１０１０ゲノムコピーが投与される（２５０μｌの容量で約２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約６．４×１０１０ゲノムコピーが投与される（２００μｌの容量で約３．２×１０１１ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約１．３×１０１１ゲノムコピーが投与される（２００μｌの容量で約６．５×１０１１ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約２．５×１０１１ゲノムコピーが投与される（１００μｌの容量で約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約５×１０１１ゲノムコピーが投与される（２００μｌの容量で約５×１０１２ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約１．５×１０１２ゲノムコピーが投与される（１００μｌの容量で約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬに相当する）。いくつかの実施形態では、約６．４×１０１０ゲノムコピーが、１眼当たり、または１回の投与量当たり、あるいは投与経路ごとに投与される。いくつかの実施形態では、約６．４×１０１０ゲノムコピーは、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、約１．３×１０１１ゲノムコピーが、１眼当たり、または１回の投与量当たり、あるいは投与経路ごとに投与される。いくつかの実施形態では、約１．３×１０１１ゲノムコピーは、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、約２．５×１０１１ゲノムコピーが、１眼当たり、または１回の投与量当たり、あるいは投与経路ごとに投与される。いくつかの実施形態では、約２．５×１０１１ゲノムコピーは、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、約５×１０１１ゲノムコピーが、１眼当たり、または１回の投与量当たり、あるいは投与経路ごとに投与される。いくつかの実施形態では、約５×１０１１ゲノムコピーは、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、約１．５×１０１２ゲノムコピーが、１眼当たり、または１回の投与量当たり、あるいは投与経路ごとに投与される。いくつかの実施形態では、約１．５×１０１２ゲノムコピーは、投与されるゲノムコピーの総数である。いくつかの実施形態では、約３×１０１２ゲノムコピーが、１眼当たり、または１回の投与量当たり、あるいは投与経路ごとに投与される。いくつかの実施形態では、約３×１０１２ゲノムコピーは、投与されるゲノムコピーの総数である。別の特定の実施形態では、約１．６×１０１１ゲノムコピーが投与される（２５０μｌの容量で約６．２×１０１１ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約１．５５×１０１１ゲノムコピーが投与される（２５０μｌの容量で約６．２×１０１１ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約１．６×１０１１ゲノムコピーが投与される（２５０μｌの容量で約６．４×１０１１ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約２．５×１０１１ゲノムコピー（２５０μｌの容量で約１．０×１０１２に相当する）が投与される。別の特定の実施形態では、約３×１０１１ゲノムコピーが投与される（１００μｌの容量で約３×１０１２ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約６×１０１１ゲノムコピーが投与される（２００μｌの容量で約３×１０１２ＧＣ／ｍＬに相当する）。別の特定の実施形態では、約６×１０１１ゲノムコピーが投与される（１００μｌの容量で約６×１０１２ＧＣ／ｍＬに相当する）。
特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６．０×１０１０ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６．４×１０１０ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約１．３×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約１．５×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約１．６×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約２．５×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約５．０×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１２ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約１．０×１０１２ＧＣ／ｍＬが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３．０×１０１３ゲノムコピーが投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、最大３．０×１０１３ゲノムコピーが投与される。
特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約１．５×１０１１ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約２．５×１０１１ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約５．０×１０１１ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約１．５×１０１２ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１２ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１眼当たり、約２．５×１０１１ゲノムコピーが単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが、１００μｌの容量で単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが、２００μｌの容量で単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与され、この際、各注入は、５０μｌの容量である。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与され、この際、各注入は、１００μｌの容量である。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約５．０×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが、１００μｌの容量で単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが、２００μｌの容量で単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与され、この際、各注入は、５０μｌの容量である。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約６×１０１１ゲノムコピーが２回の脈絡膜上注入によって投与され、この際、各注入は、１００μｌの容量である。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、約３．０×１０１３ゲノムコピーが脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１回の投与当たりまたは１眼当たり、最大３．０×１０１３ゲノムコピーが、脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１眼当たり、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬが、１００μｌの容量で単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、１眼当たり、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬが２回の脈絡膜上注入によって投与され、この際、各注入は、１００μｌの容量である。特定の実施形態では、１眼当たり、約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬが、１００μｌの容量で単回の脈絡膜上注入によって投与される。
特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、２回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、右眼への第１の注入は、耳側上部（すなわち、１０時方向から１１時方向の間）、及び同じ眼への第２の注入は、鼻側下部（すなわち、４時方向から５時方向の間）に行われる。特定の実施形態では、右眼への第１の注入は、鼻側下部（すなわち、４時方向から５時方向の間）、及び同じ眼への第２の注入は、耳側上部（すなわち、１０時方向から１１時方向の間）に行われる。特定の実施形態では、左眼への第１の注入は、耳側上部（すなわち、１時方向から２時方向の間）、及び同じ眼への第２の注入は、鼻側下部（すなわち、７時方向から８時方向の間）に行われる。特定の実施形態では、左眼への第１の注入は、鼻側下部（すなわち、７時方向から８時方向の間）、及び同じ眼への第２の注入は、耳側上部（すなわち、１時方向から２時方向の間）に行われる。
特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、単回の脈絡膜上注入によって投与される。特定の実施形態では、右眼への単回の注入は、耳側上部（すなわち、１０時方向から１１時方向の間）に行われる。特定の実施形態では、右眼への単回の注入は、鼻側下部（すなわち、４時方向から５時方向の間）に行われる。特定の実施形態では、左眼への単回の注入は、耳側上部（すなわち、１時方向から２時方向の間）に行われる。特定の実施形態では、左眼への単回の注入は、鼻側下部（すなわち、７時方向から８時方向の間）に行われる。
いくつかの実施形態では、医薬組成物または参照医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回、ヒト対象に（例えば、脈絡膜上、網膜下、または硝子体内に）投与される。いくつかの実施形態では、医薬組成物または参照医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回、ヒト対象に投与される。いくつかの実施形態では、同じ量のＡＡＶゲノムコピーが、投与ごとに投与される。例えば、同じゲノムコピーが、脈絡膜上、網膜下、または硝子体内に投与される。いくつかの実施形態では、同じ総量のＡＡＶゲノムコピーが、投与される。例えば、同じ総量のＡＡＶゲノムコピーが、総投与の数に関係なく、脈絡膜上、網膜下、硝子体内に投与される（例えば、網膜下投与が１回行われ、脈絡膜上投与が２回行われる場合、１回の網膜下投与のゲノムコピーは、脈絡膜上投与の両方のゲノムコピーの合計と同じである）。
本明細書で使用される場合、及び別途指定されない限り、用語「約」は、所与の値または範囲の±１０％を意味する。
４．４ 構築物及び製剤
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する組換えベクターは、次の順番にて、以下の成分：ａ）構成プロモーター配列または低酸素誘導性プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子をコードする配列（例えば、治療用産物）を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えベクターは、次の順番にて、以下の成分：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成プロモーター配列または低酸素誘導性プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）介在配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子をコードする配列（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント部位）、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列、を含む。
特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えベクターは、次の順番にて、以下の成分：ａ）第１のＩＴＲ配列、ｂ）第１のリンカー配列、ｃ）構成プロモーター配列または低酸素誘導性プロモーター配列、ｄ）第２のリンカー配列、ｅ）介在配列、ｆ）第３のリンカー配列、ｇ）第１のＵＴＲ配列、ｈ）導入遺伝子をコードする配列（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント部位）、ｉ）第２のＵＴＲ配列、ｊ）第４のリンカー配列、ｋ）ポリＡ配列、ｌ）第５のリンカー配列、及びｍ）第２のＩＴＲ配列、を含み、ここで、該導入遺伝子は、ＶＥＧＦのシグナルペプチド（配列番号５）を含み、かつ該導入遺伝子は、切断可能なＦ／Ｆ２Ａ配列によって分離された軽鎖及び重鎖配列をコードする。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶ（ＡＡＶウイルスベクター）は、次の順番にて、以下の成分：ａ）構成プロモーター配列または低酸素誘導性プロモーター配列、及びｂ）導入遺伝子をコードする配列（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント部位）を含む。いくつかの実施形態では、導入遺伝子は、ＶＥＧＦに対抗する完全なヒト翻訳後修飾（ＨｕＰＴＭ）抗体である。いくつかの実施形態では、ＶＥＧＦに対抗する完全なヒト翻訳後修飾抗体は、ＶＥＧＦに対抗するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）の完全なヒト翻訳後修飾抗原結合フラグメント（「ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉ」）である。いくつかの実施形態では、ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉは、抗ＶＥＧＦ ｍＡｂの完全なヒトグリコシル化抗原結合フラグメント（「ＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉ」）である。代替的実施形態では、完全長ｍＡｂが使用され得る。いくつかの実施形態では、導入遺伝子を送達するために使用されるＡＡＶは、ヒト網膜細胞または光受容細胞に対する向性を有していなければならない。そのようなＡＡＶは、非複製組換えアデノ随伴ウイルスベクター（「ｒＡＡＶ」）を含むことができ、特にＡＡＶ８カプシドを含有するものが好ましい。ある特定の実施形態では、本明細書に記載するウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現構築物は、構築物Ｉであり、ここで、該構築物Ｉは、以下の成分：（１）発現カセットを挟むＡＡＶ８逆位末端反復；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリβ－アクチンプロモーターを含むＣＢ７プロモーター、ｂ）ニワトリβ－アクチン介在配列、及びｃ）ウサギβ－グロビンポリＡシグナル含む制御要素；ならびに（３）自己切断フーリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーによって分離され、確実に同量の重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドを発現する、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントの重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列、を含む。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、シグナルペプチドを含む。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（配列番号５５）である。いくつかの実施形態では、シグナルペプチドは、ＩＬ－２シグナル配列に由来する。いくつかの実施形態では、ウイルスベクターは、表１に記載する任意のシグナルペプチドからのシグナルペプチド、例えば、ＭＮＦＬＬＳＷＶＨＷ ＳＬＡＬＬＬＹＬＨＨ ＡＫＷＳＱＡ（ＶＥＧＦ－Ａシグナルペプチド）（配列番号５）；ＭＥＲＡＡＰＳＲＲＶ ＰＬＰＬＬＬＬＧＧＬ ＡＬＬＡＡＧＶＤＡ（フィブリン－１シグナルペプチド）（配列番号６）；ＭＡＰＬＲＰＬＬＩＬ ＡＬＬＡＷＶＡＬＡ（ビトロネクチンシグナルペプチド）（配列番号７）；ＭＲＬＬＡＫＩＩＣＬＭＬＷＡＩＣＶＡ（補体因子Ｈシグナルペプチド）（配列番号８）；ＭＲＬＬＡＦＬＳＬＬ ＡＬＶＬＱＥＴＧＴ（オプティシンシグナルペプチド）（配列番号９）；ＭＫＷＶＴＦＩＳＬＬＦＬＦＳＳＡＹＳ（アルブミンシグナルペプチド）（配列番号２２）；ＭＡＦＬＷＬＬＳＣＷＡＬＬＧＴＴＦＧ（キモトリプシノゲンシグナルペプチド）（配列番号２３）；ＭＹＲＭＱＬＬＳＣＩＡＬＩＬＡＬＶＴＮＳ（インターロイキン－２シグナルペプチド）（配列番号２４）；ＭＮＬＬＬＩＬＴＦＶＡＡＡＶＡ（トリプシノーゲン－２シグナルペプチド）（配列番号２５）；またはＭＹＲＭＱＬＬＬＬＩＡＬＳＬＡＬＶＴＮＳ（変異体インターロイキン－２シグナルペプチド）（配列番号５５）を含む。別の特定の実施形態では、本明細書に記載するウイルスベクターまたはその他のＤＮＡ発現構築物は、構築物ＩＩであり、ここで、該構築物ＩＩは、以下の成分：（１）発現カセットを挟むＡＡＶ２逆位末端反復；（２）ａ）ＣＭＶエンハンサー／ニワトリβ－アクチンプロモーターを含むＣＢ７プロモーター、ｂ）ニワトリβ－アクチン介在配列、及びｃ）ウサギβ－グロビンポリＡシグナル含む制御要素；ならびに（３）自己切断フーリン（Ｆ）／Ｆ２Ａリンカーによって分離され、確実に同量の重鎖ポリペプチド及び軽鎖ポリペプチドを発現する、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントの重鎖及び軽鎖をコードする核酸配列、を含む。いくつかの実施形態では、抗ｈＶＥＧＦ抗体は、配列番号２または配列番号４のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１または配列番号３のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの実施形態では、ＡＡＶカプシドのパッケージングに適したウイルスベクターまたはその他の発現構築物は、（１）発現カセットを挟むＡＡＶ逆位末端反復（ＩＴＲ）；（２）１つ以上のエンハンサー及び／またはプロモーター、ｄ）ポリＡシグナル、及びｅ）任意選択で介在配列から本質的になる調節制御要素；ならびに（３）目的の１つ以上のＲＮＡまたはタンパク質産物を与える（例えば、それらをコードする）導入遺伝子を含む。
いくつかの態様では、本開示は、使用のための核酸であって、本明細書に記載のプロモーターまたはエンハンサープロモーターに機能的に連結された治療用産物をコードする核酸を提供する。
いくつかの態様では、本開示は、使用のための核酸であって、ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉ、例えば、ＣＢ７プロモーター（ニワトリβ－アクチンプロモーター及びＣＭＶエンハンサー）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーター、ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）プロモーター、ＭＭＴプロモーター、ＥＦ－１αプロモーター、ＵＢ６プロモーター、ニワトリβ－アクチンプロモーター、ＣＡＧプロモーター、ＲＰＥ６５プロモーター及びオプシンプロモーターからなる群から選択されるプロモーターに機能的に連結されたＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉをコードする核酸を提供する。ある特定の実施形態では、ＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉは、ＣＢ７プロモーターに機能的に連結される。
特定の実施形態において、１つ以上の核酸（例えば、ポリヌクレオチド）を含む組換えベクターを本明細書で提供する。核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはＤＮＡ及びＲＮＡの組み合わせを含み得る。特定の実施形態では、ＤＮＡは、プロモーター配列、目的の治療用産物（導入遺伝子、例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント）をコードする配列、非翻訳領域、及び終止配列からなる群から選択される配列のうち１つ以上を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えベクターは、目的の治療用産物をコードする配列に操作可能に連結されたプロモーターを含む。
特定の実施形態では、本明細書にて開示する核酸（例えば、ポリヌクレオチド）及び核酸配列は、例えば、当業者に既知のコドン最適化技法を介して、コドン最適化されている場合がある（例えば、Ｑｕａｘ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ ５９：１４９－１６１による論評を参照されたい）。
特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えベクターは、目的の治療用産物（例えば、導入遺伝子、例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント部位）をコードする修飾ｍＲＮＡを含む。特定の実施形態において、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント部位をコードする修飾ｍＲＮＡを本明細書で提供する。特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えベクターは、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡまたはｍｉＲＮＡである、治療用産物をコードするヌクレオチド配列を含む。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、タンパク質送達を調節する成分を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、１つ以上のシグナルペプチドを含む。シグナルペプチドの例としては、限定はされないが、ＶＥＧＦ－Ａシグナルペプチド（配列番号５）、フィブリン－１シグナルペプチド（配列番号６）、ビトロネクチンシグナルペプチド（配列番号７）、補体因子Ｈシグナルペプチド（配列番号８）、オプティシンシグナルペプチド（配列番号９）、アルブミンシグナルペプチド（配列番号２２）、キモトリプシノゲンシグナルペプチド（配列番号２３）、インターロイキン－２シグナルペプチド（配列番号２４）、及びトリプシノーゲン－２シグナルペプチド（配列番号２５）、変異体インターロイキン－２シグナルペプチド（配列番号５５）が挙げられる。
（ａ） ウイルスベクター
いくつかの実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶベースのウイルスベクターである。好ましい実施形態では、本明細書で提供するウイルスベクターは、ＡＡＶ８ベースのウイルスベクターである。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶ８ベースのウイルスベクターは、網膜細胞への向性を保持する。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶｒｅｐ遺伝子（複製に必要な）及び／またはＡＡＶｃａｐ遺伝子（カプシドタンパク質の合成に必要な）をコードする。複数のＡＡＶ血清型が同定されている。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶの１つ以上の血清型由来の成分を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６のうち１つ以上由来のカプシド成分を含む。好ましい実施形態では、本明細書で提供するＡＡＶベースのベクターは、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、またはＡＡＶｒｈ１０血清型のうち１つ以上由来の成分を含む。特定の実施形態では、本明細書で提供する組換えウイルスベクターは、ヒトにおいて複製欠損であるように改変される。特定の実施形態では、組換えウイルスベクターは、ハイブリッドベクター、例えば、「無力（ｈｅｌｐｌｅｓｓ）」のアデノウイルスベクター内に配置されるＡＡＶベクターである。特定の実施形態において、第１のウイルス由来のウイルスカプシド及び第２のウイルス由来のウイルスエンベロープタンパク質を含む組換えウイルスベクターを本明細書で提供する。特定の実施形態では、第２のウイルスは、水疱性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）である。さらなる特定の実施形態では、エンベロープタンパク質は、ＶＳＶ－Ｇタンパク質である。
特定の実施形態において、調節要素の制御下で、ＩＴＲによって挟まれた、導入遺伝子の発現のための発現カセットを含むウイルスゲノム、及びＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸配列を有するか、またはＡＡＶ８カプシドの生物学的機能を保持しながらＡＡＶ８カプシドタンパク質のアミノ酸配列（配列番号４８）と少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または９９．９％同一であるウイルスカプシド、を含むＡＡＶ８ベクターを提供する。特定の実施形態では、コードが書き込まれたＡＡＶ８カプシドは、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、１８個、１９個、２０個、２１個、２２個、２３個、２４個、２５個、２６個、２７個、２８個、２９個または３０個のアミノ酸置換を含む配列番号４８の配列を有し、かつＡＡＶ８カプシドの生物学的機能を保持している。
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるＡＡＶは、Ａｎｃ８０またはＡｎｃ８０Ｌ６５であり、これらについては、その全体が参照により援用されるＺｉｎｎ ｅｔ ａｌ．，２０１５，Ｃｅｌｌ Ｒｅｐ．１２（６）：１０５６－１０６８に記載されている。特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるＡＡＶは、以下のアミノ酸挿入：米国特許第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号、及び同第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載されているようなＬＧＥＴＴＲＰまたはＬＡＬＧＥＴＴＲＰのうち１つを含み、これら特許及び特許出願のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるＡＡＶは、米国特許第９，１９３，９５６号、同第９，４５８，５１７号、及び同第９，５８７，２８２号、ならびに米国特許出願公開第２０１６／０３７６３２３号に記載されているようなＡＡＶ．７ｍ８であり、これら特許及び特許出願のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるＡＡＶは、米国特許第９，５８５，９７１号に開示されるような、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂなどの任意のＡＡＶである。特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるＡＡＶは、以下の特許及び特許出願：米国特許第７，９０６，１１１号、同第８，５２４，４４６号、同第８，９９９，６７８号、同第８，６２８，９６６号、同第８，９２７，５１４号、同第８，７３４，８０９号、同第ＵＳ９，２８４，３５７号、同第９，４０９，９５３号、同第９，１６９，２９９号、同第９，１９３，９５６号、同第９４５８５１７号、及び同第９，５８７，２８２号、米国特許出願公開第２０１５／０３７４８０３号、同第２０１５／０１２６５８８号、同第２０１７／００６７９０８号、同第２０１３／０２２４８３６号、同第２０１６／０２１５０２４号、同第２０１７／００５１２５７号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２０１５／０３４７９９号、同第ＰＣＴ／ＥＰ２０１５／０５３３３５号のうちいずれかに開示されているＡＡＶであり、これら特許及び特許出願のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。
ＡＡＶ８ベースのウイルスベクターは、本明細書記載の特定の方法で使用される。ＡＡＶベースのウイルスベクターの核酸配列及び組換えＡＡＶ及びＡＡＶカプシドの作成方法は、例えば、米国特許第７，２８２，１９９ Ｂ２号、米国特許第７，７９０，４４９ Ｂ２号、米国特許第８，３１８，４８０ Ｂ２号、米国特許第８，９６２，３３２ Ｂ２号、及び国際特許出願第ＰＣＴ／ＥＰ２０１４／０７６４６６号にて教示されており、これら特許及び特許出願のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。一態様では、導入遺伝子（例えば、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント）をコードするＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８）ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。特定の実施形態において、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントをコードするＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。さらなる特定の実施形態において、ラニビズマブをコードするＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。
特定の実施形態では、上記において一本鎖ＡＡＶ（ｓｓＡＡＶ）を用いてよい。特定の実施形態では、自己相補型ベクター、例えばｓｃＡＡＶを用いてもよい（例えば、Ｗｕ，２００７，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，１８（２）：１７１－８２、ＭｃＣａｒｔｙ ｅｔ ａｌ，２００１，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｖｏｌ ８，Ｎｕｍｂｅｒ １６，Ｐａｇｅｓ１２４８－１２５４、ならびに米国特許第６，５９６，５３５号、同第７，１２５，７１７号及び同第７，４５６，６８３号（これらの文献はそれぞれ、参照により、その全体が本明細書に援用される）を参照されたい）。
特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるウイルスベクターは、アデノウイルスベースのウイルスベクターである。組換えアデノウイルスベクターは、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントの導入に使用することができる。組換えアデノウイルスは、Ｅ１欠失を含み、Ｅ３欠失を含有または非含有で、及び欠失領域のいずれかに挿入される発現カセットを含む第１世代ベクターであり得る。組換えアデノウイルスは、Ｅ２及びＥ４領域の完全欠失または部分欠失を含む第２世代ベクターであり得る。ヘルパー依存性アデノウイルスは、アデノウイルス逆位末端反復及びパッケージングシグナル（φ）のみを保持する。導入遺伝子は、ゲノムをおよそ３６ｋｂの野生型サイズに近づけて維持するために、スタッファー配列を含有または非含有で、パッケージングシグナルと３’ＩＴＲとの間に挿入される。アデノウイルスベクターを生成するための例示的なプロトコルについては、Ａｌｂａ ｅｔ ａｌ．，２００５，“Ｇｕｔｌｅｓｓ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ：ｌａｓｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ ｆｏｒ ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ，”Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ １２：Ｓ１８－Ｓ２７で確認することができ、この文献は、その全体が参照により本明細書に援用される。
ある特定の実施形態では、本明細書に記載する方法で使用されるベクターは、そのベクターが関連する細胞（例えば、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏにおける網膜細胞）に導入されると、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントのグリコシル化及び／またはチロシン硫酸化多様体が細胞で発現するように、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント（例えば、ラニビズマブ）をコードするものである。ある特定の実施形態では、発現する抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントは、グリコシル化及び／またはチロシン硫酸化パターンを含む。
（ｂ）治療用産物または導入遺伝子
治療用産物は、例えば、治療用タンパク質（例えば、抗体）、治療用ＲＮＡ（例えば、ｓｈＲＮＡ、ｓｉＲＮＡ、及びｍｉＲＮＡ）、または治療用アプタマーであり得る。
特定の実施形態において、本開示は、導入遺伝子をコードする組換えＡＡＶを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂまたは抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂまたは抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ラニビズマブをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＩＤＳをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＬＤＬＲをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）タンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＴＰＰ１をコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、マイクロジストロフィンタンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、抗カリクレイン（抗ｐＫａｌ）タンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ラナデルマブＦａｂまたは完全長抗体をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ｈｕＦｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ３４４をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ｈｕＦｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ３４４をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。
特定の実施形態において、アフリベルセプト（抗ＶＥＧＦ融合タンパク質）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。特定の実施形態において、エタネルセプト（抗ＴＮＦ融合タンパク質）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。特定の実施形態において、アダリムマブ（抗ＴＮＦａｂ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。
特定の実施形態では、治療用産物（例えば、導入遺伝子）は、（１）抗ヒト血管内皮成長因子（ｈＶＥＧＦ）抗体またはアプタマー、（２）抗ｈＶＥＧＦ抗原結合フラグメント、（３）抗ｈＶＥＧＦ抗原結合フラグメントであるＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、または単鎖可変フラグメント（ｓｃＦｖ）、（４）パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、（５）トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、（６）Ｂａｔｔｅｎｉｎ（ＣＬＮ３）、及び（７）ＣＬＮ６膜貫通ＥＲタンパク質（ＣＬＮ６）である。
特定の実施形態において、本開示は、導入遺伝子をコードする組換えＡＡＶを含む医薬組成物を提供する。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂまたは抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂまたは抗ＶＥＧＦ抗体をコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。さらなる実施形態において、ラニビズマブをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＩＤＵＡをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、イズロン酸２－スルファターゼ（ＩＤＳ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＩＤＳをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、低密度リポタンパク質受容体（ＬＤＬＲ）をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＬＤＬＲをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）タンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＴＰＰ１をコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、マイクロジストロフィンタンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ８ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、マイクロジストロフィンをコードするｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、抗カリクレイン（抗ｐＫａｌ）タンパク質をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ラナデルマブＦａｂまたは完全長抗体をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ｈｕＦｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ３４４をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ｈｕＦｏｌｌｉｓｔａｔｉｎ３４４をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ヒト－α－サルコグリカン－γ－サルコグリカンをコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ２をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ３をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。いくつかの実施形態において、ＣＬＮ６をコードするｒＡＡＶ８ベースのまたはｒＡＡＶ９ベースのウイルスベクターを本明細書で提供する。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、（１）バッテン病ＣＬＮ１に関連する眼の病状に対して使用でき、かつ治療用産物は、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）であり；（２）バッテン病ＣＬＮ２に関連する眼の病状に対して使用でき、かつ治療用産物は、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）であり；（３）バッテン病ＣＬＮ３に関連する眼の病状に対して使用でき、かつ治療用産物は、Ｂａｔｔｅｎｉｎ（ＣＬＮ３）であり；（４）バッテン病ＣＬＮ６に関連する眼の病状に対して使用でき、かつ治療用産物は、ＣＬＮ６膜貫通ＥＲタンパク質（ＣＬＮ６）であり、（５）バッテン病ＣＬＮ７に関連する眼の病状に対して使用でき、かつ治療用産物は、主要ファシリテータースーパーファミリードメイン含有８（ＭＦＳＤ８）であり；ならびに（６）バッテン病ＣＬＮ１に関連する眼の病状に対して使用でき、かつ治療用産物は、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）である。
いくつかの実施形態では、導入遺伝子によってコードされるＨｕＰＴＭＦａｂＶＥＧＦｉ、例えば、ＨｕＧｌｙＦａｂＶＥＧＦｉとしては、限定はされないが、ベバシズマブなどの、ＶＥＧＦに結合する抗体の抗原結合フラグメント；ラニビズマブなどの抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ部位；またはＦａｂドメインに追加のグリコシル化部位を含めるために操作された、かかるベバシズマブもしくはラニビズマブＦａｂ部位が挙げられる（例えば、完全長抗体のＦａｂドメインで過剰グリコシル化されたベバシズマブの誘導体を説明している、Ｃｏｕｒｔｏｉｓ ｅｔ ａｌ．，２０１６，ｍＡｂｓ ８：９９－１１２を参照されたく、この文献は、その全体が参照により本明細書に援用される）。
特定の実施形態では、本明細書で提供するベクターは、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子をコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、網膜細胞における発現のための適切な発現制御要素によって制御される。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１０及び１１）のベバシズマブＦａｂ部分を含む。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ラニビズマブ軽鎖及び重鎖ｃＤＮＡ配列（それぞれ、配列番号１２及び１３）を含む。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、それぞれ、配列番号３及び４の軽鎖及び重鎖を含むベバシズマブＦａｂをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号３に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号４に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号３に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号４に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、それぞれ、配列番号１及び２の軽鎖及び重鎖を含む過剰グリコシル化ラニビズマブをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号２に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む軽鎖、及び配列番号２に記載されている配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９１０％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％同一のアミノ酸配列を含む重鎖を含む抗原結合フラグメントをコードする。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、Ｅ１９５Ｎ（軽鎖）またはＱ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）の変異のうち１つ以上を伴う、配列番号３及び４の軽鎖及び重鎖を含む、過剰グリコシル化ベバシズマブＦａｂをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、Ｌ１１８Ｎ（重鎖）、Ｅ１９５Ｎ（軽鎖）またはＱ１６０ＮもしくはＱ１６０Ｓ（軽鎖）の変異のうち１つ以上を伴う、配列番号１及び２の軽鎖及び重鎖を含む、過剰グリコシル化ラニビズマブをコードする。抗原結合フラグメント導入遺伝子ｃＤＮＡの配列については、例えば、表１で確認することができる。特定の実施形態では、抗原結合フラグメント導入遺伝子ｃＤＮＡの配列は、配列番号１０及び１１または配列番号１２及び１３のシグナル配列を、１つ以上のシグナル配列と置き換えることによって得られる。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、抗原結合フラグメントをコードし、かつ６個のベバシズマブＣＤＲのヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、抗原結合フラグメントをコードし、かつ６個のラニビズマブＣＤＲのヌクレオチド配列を含む。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ラニビズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号２０、１８、及び２１）を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ラニビズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ベバシズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１７～１９）を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ベバシズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ラニビズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号２０、１８、及び２１）を含む重鎖可変領域、及びラニビズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードする。特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、ベバシズマブの重鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１７～１９）を含む重鎖可変領域、及びベバシズマブの軽鎖ＣＤＲ１～３（配列番号１４～１６）を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードする。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。好ましい実施形態では、本明細書に記載する化学修飾（複数可）または化学修飾（複数可）の欠如（場合によっては）は、質量分析によって決定される。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）の中のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）の中のＮ）は、アセチル化されない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ （配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、アセチル化されない。好ましい実施形態では、本明細書に記載する化学修飾（複数可）または化学修飾（複数可）の欠如（場合によっては）は、質量分析によって決定される。
特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域、及び配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有しておらず、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域、及び配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有しておらず、さらに（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント導入遺伝子は、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３を含む軽鎖可変領域、及び配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む重鎖可変領域を含む抗原結合フラグメントをコードし、ここで、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中のＱ）は、アセチル化されず、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、アセチル化されない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号２０の重鎖ＣＤＲ１を含み、ここで、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、アセチル化されず、さらに（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。好ましい実施形態では、本明細書に記載する化学修飾（複数可）または化学修飾（複数可）の欠如（場合によっては）は、質量分析によって決定される。
特定の態様では、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント、ならびにかかる抗原ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントをコードする導入遺伝子を本明細書で提供するが、ここで、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。本明細書で提供する抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント及び導入遺伝子は、本明細書に記載の本発明による任意の方法で使用することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載する化学修飾（複数可）または化学修飾（複数可）の欠如（場合によっては）は、質量分析によって決定される。
特定の態様では、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント、ならびにかかる抗原ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントをコードする導入遺伝子を本明細書で提供するが、ここで、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）の中のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ （配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）の中のＮ）は、アセチル化されない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、アセチル化されない。本明細書で提供する抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント及び導入遺伝子は、本明細書に記載の本発明による任意の方法で使用することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載する化学修飾（複数可）または化学修飾（複数可）の欠如（場合によっては）は、質量分析によって決定される。
特定の態様では、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含む抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント、ならびにかかる抗原ＶＥＧＦ抗原結合フラグメントをコードする導入遺伝子を本明細書で提供するが、ここで、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有しておらず、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有しておらず、さらに（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有していない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）の中のＮ）は、アセチル化されず、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。ある特定の実施形態では、抗原結合フラグメントは、配列番号１４～１６の軽鎖ＣＤＲ１～３ならびに配列番号２０、１８、及び２１の重鎖ＣＤＲ１～３を含み、ここで、（１）重鎖ＣＤＲ１の９番目のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＭ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、重鎖ＣＤＲ２の３番目のアミノ酸残基（すなわち、ＷＩＮＴＹＴＧＥＰＴＹＡＡＤＦＫＲ（配列番号１８）のＮ）は、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ重鎖ＣＤＲ１の最後のアミノ酸残基（すなわち、ＧＹＤＦＴＨＹＧＭＮ（配列番号２０）のＮ）は、アセチル化されず、さらに（２）軽鎖ＣＤＲ１の８番目及び１１番目のアミノ酸残基（すなわち、ＳＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮ（配列番号１４）の中の２つのＮ）のそれぞれは、酸化、アセチル化、脱アミド化、及びピログルタミル化（ｐｙｒｏ Ｇｌｕ）の化学修飾のうち１つ以上を有し、かつ軽鎖ＣＤＲ３の２番目のアミノ酸残基（すなわち、ＱＱＹＳＴＶＰＷＴＦ（配列番号１６）の中の２番目のＱ）は、アセチル化されない。本明細書で提供する抗ＶＥＧＦ抗原結合フラグメント及び導入遺伝子は、本明細書に記載の本発明による任意の方法で使用することができる。好ましい実施形態では、本明細書に記載する化学修飾（複数可）または化学修飾（複数可）の欠如（場合によっては）は、質量分析によって決定される。
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４．５ 疾患
本明細書で提供する医薬組成物または参照医薬組成物（セクション４．１）は、ｎＡＭＤ（ウェット型ＡＭＤ）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）またはバッテン病であると診断された対象に投与され得る。
いくつかの実施形態において、ｎＡＭＤ（ウェット型ＡＭＤ）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、糖尿病性網膜症（ＤＲ）またはバッテン病であると診断された対象を治療する方法を本明細書にて開示するが、この方法は、治療に有効な量の医薬組成物を脈絡膜上注入によって（例えば、マイクロニードルを備えたマイクロインジェクターなどの脈絡膜上薬物送達デバイスを介して）対象に投与することによるものである。
いくつかの実施形態では、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む医薬組成物の約２．５×１０１１ＧＣ／眼、約５×１０１１ＧＣ／眼、または約１．５×１０１２ＧＣ／眼の構築物ＩＩを含有する医薬組成物が、脈絡膜上投与を介して患者に投与される。いくつかの実施形態では、患者は、糖尿病性網膜症を患っている。
いくつかの実施形態では、１０％ｗ／ｖのショ糖を含む医薬組成物の約２．５×１０１１ＧＣ／眼、約５×１０１１ＧＣ／眼、または約１．５×１０１２ＧＣ／眼の構築物ＩＩを含有する医薬組成物が、脈絡膜上投与を介して患者に投与される。いくつかの実施形態では、患者は、糖尿病性網膜症を患っている。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ以上の等張性／重量オスモル濃度を有する。
いくつかの態様では、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管性疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び散発性封入体筋炎、またはカリクレイン関連疾患であると診断されている対象の治療に適した医薬組成物または治療する方法を本明細書にて開示するするが、該方法は、治療に有効な量の医薬組成物を対象に投与することを含む。いくつかの実施形態では、医薬組成物は、ＳＣＳに投与される。
いくつかの実施形態では、本明細書で提供する医薬組成物または参照医薬組成物（セクション４．１）は、（１）バッテン病ＣＬＮ２であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がトリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）であり；（２）アッシャー症候群１型であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がミオシンＶＩＩＡ（ＭＹＯ７Ａ）であり；（３）アッシャー症候群１型であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がカドヘリン関連２３（ＣＤＨ２３）であり；（４）アッシャー症候群２型であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がプロトカドヘリン関連１５（ＰＣＤＨ１５）であり；（５）アッシャー症候群２型であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がウシェリン（ＵＳＨ２Ａ）であり；（６）アッシャー症候群３型であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がクラリン１（ＣＬＲＮ１）であり；（７）シュタルガルト病であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＡＴＰ結合カセットサブファミリーＡメンバー４（ＡＢＣＡ４）であり；（８）シュタルガルト病であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＥＬＯＶＬ脂肪酸エロンガーゼ４（ＥＬＯＶＬ４）であり；（９）赤緑色色覚異常であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＬオプシン（ＯＰＮ１ＬＷ）であり；（１０）赤緑色色覚異常であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＭオプシン（ＯＰＮ１ＭＷ）であり；（１１）青錐体全色覚異常であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＭオプシン（ＯＰＮ１ＭＷ）であり；（１２）レーベル先天黒内障１（ＬＣＡ１）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がグアニル酸シクラーゼ２Ｄレチナール（ＧＵＣＹ２Ｄ）であり；（１３）レーベル先天黒内障２（ＬＣＡ２）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がレチノイドイソメロヒドロラーゼＲＰＥ６５（ＲＰＥ６５）であり；（１４）レーベル先天黒内障４（ＬＣＡ４）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がアリール炭化水素受容体相互作用タンパク質様１（ＡＩＰＬ１）であり；（１５）レーベル先天黒内障７（ＬＣＡ７）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物が錐体－ロッドホメオボックス（ＣＲＸ）であり；（１６）レーベル先天黒内障８（ＬＣＡ８）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がクラム細胞極性複合体成分１（ＣＲＢ１）であり；（１７）レーベル先天黒内障９（ＬＣＡ９）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がニコチンアミドヌクレオチドアデニリルトランスフェラーゼ１（ＮＭＮＡＴ１）であり；（１８）レーベル先天黒内障１０（ＬＣＡ１０）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物が中心体タンパク質２９０（ＣＥＰ２９０）であり；（１９）レーベル先天黒内障１１（ＬＣＡ１１）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がイノシン一リン酸デヒドロゲナーゼ１（ＩＭＰＤＨ１）であり；（２０）レーベル先天黒内障１５（ＬＣＡ１５）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＴｕｂｂｙ類似タンパク質１（ＴＵＬＰ１）であり；（２１）ＬＨＯＮであると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がミトコンドリアにコードされたＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ４（ＭＴ－ＮＤ４）であり；（２２）ＬＨＯＮであると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がミトコンドリアにコードされたＮＡＤＨデヒドロゲナーゼ６（ＭＴ－ＮＤ６）であり；（２３）脈絡膜欠損症であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＲａｂエスコートタンパク質１（ＣＨＭ）であり；（２４）Ｘ連鎖性網膜分離症（ＸＬＲＳ）であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がレチノスキシン（ＲＳ１）であり；（２５）バルデー－ビードル症候群１であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がバルデー－ビードル症候群１（ＢＢＳ１）であり；（２６）バルデー－ビードル症候群６であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がマキュージック－コーフマン症候群１（ＭＫＫＳ）であり；（２７）バルデー－ビードル症候群１０であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がバルデー－ビードル症候群１０（ＢＢＳ１０）であり；（２８）錐体ジストロフィーであると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がグアニル酸シクラーゼ活性化因子１Ａ（ＧＵＣＡ１Ａ）であり；（２９）視神経萎縮症であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＯＰＡ１ミトコンドリアダイナミン様ＧＴＰａｓｅ（ＯＰＡ１）であり；（３０）網膜色素変性症１であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＲＰ１軸糸微小管関連（ＲＰ１）であり；（３１）網膜色素変性症２であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＡＲＬ３ ＧＴＰａｓｅのＲＰ２活性化因子（ＲＰ２）であり；（３２）網膜色素変性症７であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がペリフェリン２（ＰＲＰＨ２）であり；（３３）網膜色素変性症１１であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がｍＲＮＡ前駆体プロセシング因子３１（ＰＲＰＦ３１）であり；（３４）網膜色素変性症１３であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がｍＲＮＡ前駆体プロセシング因子８（ＰＲＰＦ８）であり；（３５）網膜色素変性症３７であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物が核受容体サブファミリー２グループＥメンバー３（ＮＲ２Ｅ３）であり；（３６）網膜色素変性症３８であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がＭＥＲ癌原遺伝子チロシンキナーゼ（ＭＥＲＴＫ）であり；（３７）網膜色素変性症４０であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がホスホジエステラーゼ６Ｂ（ＰＤＥ６Ｂ）であり；（３８）網膜色素変性症４１であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がプロミニン１（ＰＲＯＭ１）であり；（３９）網膜色素変性症５６であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物が光受容体間マトリックスプロテオグリカン２（ＩＭＰＧ２）であり；（４０）網膜色素変性症６２であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物が男性生殖細胞関連キナーゼ（ＭＡＫ）であり；（４１）網膜色素変性症８０であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物が鞭毛内輸送１４０（ＩＦＴ１４０）であり；または（４２）ベスト病であると診断された対象に投与され得、かつ治療用産物がベストロフィン１（ＢＥＳＴ１）である。
４．６ アッセイ
当業者は、本明細書に記載の及び／または当技術分野で公知のアッセイを使用して、本明細書に記載の組成物及び方法を試験する、例えば、本明細書で提供する製剤を試験することができる。セクション５に詳細を記載されているように、以下のアッセイもまた本明細書で提供する。
４．６．１ 超音波Ｂスキャン
高周波超音波（Ｕ／Ｓ）プローブ（ＵＢＭ Ｐｌｕｓ；Ａｃｃｕｔｏｍｅ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ，ＵＳＡ）を使用して、様々なレベルのＡＡＶ凝集の異なる容量を注入した後、ｅｘ ｖｉｖｏでの動物の眼内のＳＣＳの２Ｄ断面画像を作成することによってＳＣＳの厚さを測定することができる。異なる量のＡＡＶ凝集を注入することができる。Ｕ／Ｓプローブカバー（Ｃｌｅａｒｓｃａｎ，Ｅｙｅ－Ｓｕｒｇｉｃａｌ－Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，ＭＮ）を、ＵＢＭ Ｐｌｕｓに取り付けて、Ｕ／Ｓ画像取得を促進することが可能である。Ｕ／Ｓプローブを使用して、眼の周囲の矢状方向視点（例えば、８つの矢状方向視点）を取得することができる。Ｕ／Ｓ Ｂスキャンの後処理を実施して、強膜の外側から網膜の内側の厚さ、例えば、強膜岬の後方１、５、及び９ｍｍの厚さを見つけることができる。各眼の平均、中央値、及び標準偏差を計算することができる。
４．６．２ 液体の体積に基づくＳＣＳの厚さの測定
３Ｄクライオ再構成イメージングを使用して、ＳＣＳの厚さを測定することができる。例えば、赤色蛍光粒子を含有する２５μＬ～５００μＬを注入された動物の眼は、注入後数分（例えば、３～５分）で凍結し、凍結切片作成向けに準備される。デジタルカメラを使用することで、クライオスタットを用いて試料をスライスすることによって、組織の凍結ブロックの１個の赤色蛍光画像を３００μｍごとに取得することができる。赤色蛍光画像を含む画像スタックを分析して、ＳＣＳの厚さを測定する。
４．６．３ 製剤に基づくＳＣＳの厚さの測定
Ｕ／Ｓ Ｂスキャンを使用して、様々なレベルのＡＡＶ凝集を含む医薬組成物を動物のＳＣＳへ注入した後、ＳＣＳの厚さを測定することができる。高周波超音波Ｂスキャンを使用して、ＳＣＳの崩壊率を決定することができる。毛様体扁平部の８つの矢状方向視点、（ａ）注射部位の上鼻側、（ｂ）上方、（ｃ）鼻側、（ｄ）上耳側、（ｅ）耳側、（ｆ）下耳側、（ｇ）下方、及び（ｈ）下鼻側を取得することができる。
ＳＣＳの厚さを測定するために、オフラインの後処理を、Ｕ／Ｓ視点で実施することができる。Ｕ／Ｓプローブの最小軸分解能は１５μｍとすることができる。Ｕ／Ｓ視点ごとに、強膜岬の後方及び強膜に対して垂直な５ｍｍの線分を作成することができる。線は、強膜の外側表面から始まり、網膜の内側表面に至るものであり得る。確実に線を垂直とするために、強膜及び網脈絡膜を測定に含めてもよい。次に、ＳＣＳの厚さを、測定された線の長さから組織の厚さを減算して計算する。曲線適合を実施して、ＳＣＳの崩壊率を決定する。
Ｕ／Ｓ Ｂスキャンを使用して、複数個所における経時的なＳＣＳの厚さを測定することができ、かつＳＣＳの崩壊率を計算することができる。注入した蛍光材料のＳＣＳからのおおよそのクリアランス時間は、蛍光が検出されなくなるまで、経時的に（例えば、様々な時点で）ｉｎ ｖｉｖｏでの動物の眼の蛍光眼底画像を撮像することによって確認することができる。
４．６．４ 眼底画像によるＳＣＳクリアランス動態
ＳＣＳ内の移動に関するＡＡＶ凝集の影響を試験するために、様々なＡＡＶ凝集レベルを含み、フルオレセインを含有する異なる医薬組成物を、ＳＣＳに注入することができる。注入した蛍光材料のＳＣＳからのおおよそのクリアランス速度またはクリアランス時間は、経時的にｉｎ ｖｉｖｏでの動物の眼の蛍光眼底画像を撮像することによって確認することができる。場合によっては、クリアランス速度は、経時的な総蛍光シグナルの正規化された濃度から導出される曲線適合を使用して計算された総クリアランス時間及びクリアランス時間定数（ｔｃｌｅａｒａｎｃｅ）を特定することによって決定することができる。眼を拡張させるために、トロピカミド及びフェニレフリン（Ａｋｏｒｎ，Ｌａｋｅ Ｆｏｒｅｓｔ，ＩＬ）などの局所点眼薬を各イメージングセッションの前に投与することができる。１３０°レンズアタッチメント及びビルトイン蛍光眼底血管撮影モジュールを備えたＲｅｔＣａｍ ＩＩ（Ｃｌａｒｉｔｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ，ＣＡ）を使用して、画像を取得することができる。ＲｅｔＣａｍ ＩＩからの青色光出力を、例えば、０．０００９、１．６、及び２．４Ｗ／ｍ２に設定して複数の画像を撮像することができる。眼球の内側表面全体を取り込もうとする場合、９つの画像：中心、上鼻側、上方、上耳側、耳側、下耳側、下方、下鼻側、及び鼻側を取り込むことができる。これにより、遠位周辺部へのイメージングが可能になる。イメージングは、注入の直後、注入の１時間後、注入後３時間ごとに１２時間、及び注入後２日ごとに行うことができる。注入後の最初の時点、つまり、蛍光が視覚的観察で検出されなくなる時点と定義され得る総クリアランス時間を、注入された全ての眼で測定する。フルオレセインイソチオシアネート結合ＡＡＶ（ＦＩＴＣ－ＡＡＶ）、またはＦＩＴＣ結合ＡＡＶカプシドタンパク質特異的モノクローナル抗体を類似の実験で使用して、ＳＣＳ内のＡＡＶ粒子の移動及びクリアランスを追跡することができる。ＡＡＶの蛍光標識の方法は、当技術分野において既知である（Ｓｈｉ，ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ．Ａｄｖ．２０２０；６：ｅａａｚ３６２１；及びＴｓｕｉ，Ｔ．Ｙ．，ｅｔ ａｌ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ４２，３３５－３４２（２００５））。多数のＡＡＶ血清型を認識する抗体（ＦＩＴＣ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）が市販されている。
４．６．５ ２Ｄの周辺への拡散の特性を決定するフラットマウント
フルオレセインまたは蛍光標識されたＡＡＶを含有する本開示の医薬組成物を、ＳＣＳに注入する。ＳＣＳ注入及び凍結処理後、粒子及びフルオレセインの２Ｄ拡散を評価するために、眼を整えることができる。縁から後極に向かって凍結した眼をスライスして、等距離の強膜フラップを作成する。得られた強膜フラップを開き、凍結した硝子体液、レンズ、及び房水を取り除く。
１００ｍｍレンズ（Ｃａｎｏｎ）を備えたデジタルＳＬＲカメラ（Ｃａｎｏｎ ６０Ｄ，Ｃａｎｏｎ，Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｙ．）を使用して、明視野画像及び蛍光画像を取得することができる。カメラパラメーターを一定に保つ。フルオレセイン拡散の領域を取得するために、緑色光学バンドパスフィルター（５２０±１０ｎｍ；Ｅｄｍｕｎｄｓ Ｏｐｔｉｃｓ，Ｂａｒｒｉｎｇｔｏｎ，Ｎ．Ｊ．）をレンズに設置することができ、かつ多色ＬＥＤバルブのバイオレット設定のランプによって試料に照明を当てることができる（Ｓ Ｓｅｒｉｅｓ ＲＧＢ ＭＲ１６／Ｅ２６． ＨｉｔＬｉｇｈｔｓ，Ｂａｔｏｎ Ｒｏｕｇｅ，Ｌａ．）。赤色蛍光粒子の位置を視覚化するために、赤色フィルター（６１０±１０ｎｍ；Ｅｄｍｕｎｄｓ Ｏｐｔｉｃｓ）をレンズに設置することができ、かつ同じランプを緑色の光に変えて試料に照明を当てることができる。各眼の閾値を超える緑色及び赤色蛍光の面積は、ＩｍａｇｅＪ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）を使用して算出することができる。閾値は、バックグラウンドシグナルの目視検査に基づいて手動で設定することができる。
４．６．６ 眼圧測定
圧力測定システムを使用して、ＳＣＳ注入後のＳＣＳ内の圧力を測定することができる。ケタミン／キシラジンカクテルの皮下注射によって動物に末期的に麻酔をかけることができる。ＳＣＳ注入後（Ｎ＝４）、ＳＣＳ内の圧力は、数分ごとに測定することができる。注入前の元のベースライン値（つまり約１５ｍｍＨｇ）に達するまで、圧力をモニタリングする。測定後、動物に致死量のペントバルビタールを静脈内注射することによって安楽死させる。動物の死後、ＳＣＳ注入の２番目のセットを行うことができる。死後の測定では、注入が行われた組織空間（すなわち、ＳＣＳ）でのみ圧力を測定する。
４．６．７ 温度ストレスアッセイ
温度ストレス開発安定性試験を、１．０×１０１２ＧＣ／ｍＬで、３７℃、４日間にわたって実施して、本明細書で提供する製剤の相対的安定性を評価することができる。安定性を評価するために使用され得るアッセイとしては、ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）、ベクターゲノム濃度（ｄｄＰＣＲによるＶＧＣ）、染料蛍光による遊離ＤＮＡ、動的光散乱法、外観、及びｐＨが挙げられるが、これらに限定されない。本明細書で提供する製剤において－８０℃（≦－６０℃）及び－２０℃（－２５℃～－１５℃）でｉｎ－ｖｉｔｒｏ相対力価及びその他の品質が維持されることを実証するために、長期間の開発安定性試験を１２ヶ月間行う場合がある。
４．６．８ ｉｎ ｖｉｔｒｏ相対力価（ＩＶＲＰ）アッセイ
ｄｄＰＣＲ ＧＣ力価を遺伝子発現に関連付けるために、ＨＥＫ２９３細胞を形質導入し、細胞培養上清を抗ＶＥＧＦ Ｆａｂタンパク質レベルについてアッセイすることにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイを実施してもよい。ＨＥＫ２９３細胞を３枚のポリ－Ｄ－リジンでコーティングした９６ウェル組織培養プレートに一晩プレーティングする。次いで、細胞を野生型ヒトＡｄ５ウイルスに事前感染させた後、ＡＡＶベクター参照標準及び被験物質の３つの独立して調製した段階希釈液で形質導入し、各調製物を別々のプレートの異なる位置にプレーティングする。形質導入の３日後に、細胞培養培地をプレートから回収し、ＥＬＩＳＡを介してＶＥＧＦ結合Ｆａｂタンパク質レベルを測定する。ＥＬＩＳＡの場合、ＶＥＧＦでコーティングされた９６ウェルＥＬＩＳＡプレートをブロックし、次いで回収した細胞培養培地と共にインキュベートして、ＨＥＫ２９３細胞によって産生された抗ＶＥＧＦ Ｆａｂを捕捉する。Ｆａｂ特異的抗ヒトＩｇＧ抗体を使用して、ＶＥＧＦで捕捉されたＦａｂタンパク質を検出する。洗浄後、西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）基質溶液を添加し、発色させ、停止緩衝液で停止させ、プレートリーダーでプレートを読み取る。ＨＲＰ産物の吸光度またはＯＤを対数希釈に対してプロットし、各被験物質の相対力価を、平行類似性試験に合格した後の４パラメーターロジスティック回帰モデルでフィッティングした同じプレート上の参照標準に対して、式：ＥＣ５０参照÷ＥＣ５０被験物質を使用して計算する。被験物質の力価は、３枚のプレートの加重平均から計算した、参照標準力価の割合として報告される。
ｄｄＰＣＲ ＧＣ力価を機能的遺伝子発現に関連付けるために、ＨＥＫ２９３細胞に形質導入し、導入遺伝子（酵素など）の活性をアッセイすることにより、ｉｎ ｖｉｔｒｏバイオアッセイを実施してもよい。ＨＥＫ２９３細胞を、３枚の９６ウェル組織培養プレートに一晩プレーティングする。次いで、細胞を野生型ヒトアデノウイルス血清型５型ウイルスに事前感染させた後、酵素参照標準と被験物質の３つの独立して調製した段階希釈液で形質導入し、各調製物を別々のプレートの異なる位置にプレーティングする。形質導入の２日後に、細胞を溶解し、低ｐＨで処理して酵素を活性化し、導入遺伝子（酵素）による切断時に蛍光シグナルを増加させるペプチド基質を使用して酵素活性をアッセイする。ＲＦＵの蛍光を対数希釈に対してプロットし、各被験物質の相対力価を、平行類似性試験に合格した後の４パラメーターロジスティック回帰モデルでフィッティングした同じプレート上の参照標準に対して、式：ＥＣ５０参照÷ＥＣ５０被験物質を使用して計算する。被験物質の力価は、３枚のプレートの加重平均から計算した、参照標準力価の割合として報告される。
４．６．９ ベクターゲノム濃度アッセイ
ｄｄＰＣＲを使用して、ベクターゲノム濃度（ＧＣ）を評価することもできる。注入後、異なる時点で、何匹かのマウスを屠殺し、眼組織に対して、総ＤＮＡ抽出及びベクターコピー数のｄｄＰＣＲアッセイを行う。一連の時点での種々の組織切片で識別された組織１グラム当たりのベクターゲノム（導入遺伝子）のコピーにより、眼内のＡＡＶの拡散が明らかとなるであろう。
採取した眼組織切片からの総ＤＮＡを、ＤＮｅａｓｙ Ｂｌｏｏｄ ＆ Ｔｉｓｓｕｅ Ｋｉｔを用いて抽出し、かつＮａｎｏｄｒｏｐ分光光度計を使用してＤＮＡ濃度を測定する。組織切片中のベクターコピー数を決定するために、Ｎａｉｃａ Ｃｒｙｓｔａｌ Ｄｉｇｉｔａｌ ＰＣＲシステム（Ｓｔｉｌｌａ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてデジタルＰＣＲを実行した。この際、導入遺伝子ＡＡＶ及び内因性コントロール遺伝子を同時に測定するために、２色多重システムを適用した。手短に言えば、ＦＡＭ（６－カルボキシフルオレスセイン）染料で導入遺伝子プローブを標識することができ、それと同時に、ＶＩＣ蛍光染料で内因性コントロールプローブを標識することができる。二倍体細胞当たりの特定の組織切片に送達されたベクターのコピー数は、（ベクターコピー数）／（内因性コントロール）×２と計算する。ＲＰＥ細胞などの特定の細胞型のベクターコピーは、網膜への持続的な送達を明らかにする可能性がある。
４．６．１０ 染料蛍光アッセイを使用した遊離ＤＮＡ分析
ＤＮＡに結合したＳＹＢＲ（登録商標）Ｇｏｌｄ核酸ゲル染色（「ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ色素」）の蛍光によって、遊離ＤＮＡを測定することができる。マイクロプレートリーダーを使用して蛍光を測定し、ＤＮＡ標準で定量することができる。ｎｇ／μＬでの結果を報告することができる。
測定したｎｇ／μＬでの遊離ＤＮＡを、遊離ＤＮＡの割合に変換するために、２つのアプローチを使用して総ＤＮＡを推定することができる。第１のアプローチでは、ＵＶ－可視分光法によって測定したＧＣ／ｍＬ（ＯＤ）を使用して、試料中の総ＤＮＡを推定した（式中、ＭはＤＮＡの分子量、１Ｅ６は単位変換係数である）：
推定総ＤＮＡ（ｎｇ／μＬ）＝１Ｅ６×ＧＣ／ｍＬ（ＯＤ）×Ｍ（ｇ／ｍｏｌ）／６．０２Ｅ２３
第２のアプローチでは、試料を０．０５％ポロキサマー１８８と共に８５℃に２０分間加熱することができ、加熱した試料中でＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ色素アッセイによって測定した実際のＤＮＡを総量として使用することができる。したがって、これは全てのＤＮＡを回収し、定量化したという仮定を有する。トレンド分析には、生のｎｇ／μＬを使用することができ、または一貫した方法で測定した割合を使用することができる。
４．６．１１ サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）
ＳＥＣは、Ｗａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ Ａｒｃ機器ＩＤ０４４７（Ｃ３ＰＯ）で、パス長２５ｍｍのフローセルを用いて、Ｓｅｐａｘ ＳＲＴ ＳＥＣ－１０００ピークカラム（ＰＮ２１５９５０Ｐ－４６３０、ＳＮ：８Ａ１１９８２、ＬＮ：ＢＴ０９０、５μｍ １０００Ａ、４．６×３００ｍｍ）を使用して実施することができる。移動相は、例えば、２０ｍＭリン酸ナトリウム、３００ｍＭ ＮａＣｌ、０．００５％ポロキサマー１８８、ｐＨ６．５とすることができ、流速は０．３５ｍＬ／分で２０分間、カラムは周囲温度とする。データ収集は、２ポイント／秒のサンプリングレートと１．２ｎｍの解像度で実施することができ、２１４、２６０、及び２８０ｎｍで２５ポイントの平均平滑化を行う。理想的な標的負荷は１．５Ｅ１１ＧＣであり得る。試料には、理想的な標的の約１／３である５０μＬを注入するか、５μＬを注入することができる。
４．６．１２ 動的光散乱（ＤＬＳ）アッセイ
動的光散乱（ＤＬＳ）は、試料量３０μＬのＣｏｒｎｉｎｇ３５４０ ３８４ウェルプレートを使用してＷｙａｔｔ ＤｙｎａＰｒｏＩＩＩで実施することができる。反復ごとに１０秒間にそれぞれ１０回の取得結果を取得することができ、試料ごとに３回の反復測定を実施することができる。溶媒は、例えば、ｄＰＢＳ中のＡＡＶベクターの場合は「ＰＢＳ」といったように、試料に使用される溶媒に応じて設定することができる。データ品質基準（ベースライン、ＳＯＳ、ノイズ、適合）を満たさない結果を「マーク」して、分析から除外することができる。
４．６．１３ 粘度測定
粘度は、当技術分野で公知の方法、例えば、２０１９年に公開されたＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ＵＳＰ）及びそれ以前のバージョン（その全体が参照により本明細書に援用される）で提供されている方法を使用して測定することができる。低剪断での粘度を、細管粘度計を使用して、ＵＳＰ＜９１１＞に記載されている方法を使用して測定した。
粘度対剪断速度は、円錐－平板型回転検流計を使用して測定することができる。流動測定についてはＵｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ（ＵＳＰ）ＵＳＰ＜１９１１＞に記載されており、回転粘度測定についてはＵＳＰ＜９１２＞に記載されている。回転流動測定粘度測定値は、６０ｍｍ、１°の角度のアルミニウム円錐付属品を備えたＰｅｌｔｉｅｒ温度制御プレートを装着したＡＲ－Ｇ２検流計（ＴＡ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｎｅｗ Ｃａｓｔｌｅ，ＤＥ）によって収集することができる。粘度対剪断速度のスイープを、基本値の１０倍ごとに５つのポイントが収集される状態で、＜０．３ｓ－１から開始して最大５０００ｓ－１まで上昇させて行うことができる。粘度対剪断速度を２０℃で収集した。１０，０００及び２０，０００ｓ－１での粘度を、データから外挿した。場合によっては、０、０．１ｓ－１、１ｓ－１、１０００ｓ－１、５０００ｓ－１、１０，０００ｓ－１、２０，０００ｓ－１、または２０，０００ｓ－１超で、医薬組成物または参照医薬組成物の粘度を測定することができる。
４．６．１４ ウイルス感染力アッセイ
Ｆｒａｎｃｏｉｓ，ｅｔ ａｌ． Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｔｈｅｒａｐｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ＆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（２０１８）Ｖｏｌ．１０，ｐｐ．２２３－２３６（その全体が参照により本明細書に組み込まれる）に記載されているようにＴＣＩＤ５０感染力価アッセイを使用することができる。２０１８年１０月１５日に提出された仮出願第６２／７４５８５９号に記載されている相対感染力アッセイを使用することができる。
４．６．１５ 示差走査蛍光定量法
タンパク質及びタンパク質で構成されるウイルスカプシドの熱安定性は、示差走査蛍光定量法（ＤＳＦ）によって特定することができる。ＤＳＦは、温度の関数としてのタンパク質の内在性トリプトファン及びチロシンの放出を測定する。Ｔｒｐ及びＴｙｒ残基の局所環境は、タンパク質が展開するにつれて変化し、その結果、蛍光が大幅に増加する。タンパク質の５０％が展開する温度が、融解温度（Ｔｍ）と定義されている。蛍光分光法については、ＵＳＰ＜８５３＞及びＵＳＰ＜１８５３＞に記載されている。
Ｐｒｏｍｅｔｈｉｕｓ ＮＴＰｌｅｘ Ｎａｎｏ ＤＳＦ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（ＮａｎｏＴｅｍｐｅｒ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｍｕｎｉｃｈ，Ｇｅｒｍａｎｙ）を使用して、ＤＳＦデータを収集することができる。試料を２０℃でキャピラリーセルに置き、温度を１℃／分の速度で９５℃まで上昇させることができる。３５０ｎｍ（展開）及び３３０ｎｍ（展開）での発光のシグナル出力比を使用して、Ｔｍを決定することができる。
４．６．１６ 注入圧力測定
Ｆｌｏｗ Ｓｃｒｅｅｎ及びＦｌｕｉｄ Ｓｅｎｓｏｒ（Ｖｉｓｃｏｔｅｃ Ａｍｅｒｉｃａ，Ｋｅｎｎｅｓａｗ，ＧＡ）または使い捨て圧力センサーＳ－Ｎ－０００を備えたＰｒｅｓｓｕｒｅＭＡＴ－ＤＰＧ（ＰｅｎｄｏＴＥＣＨ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）を使用して、注入圧力を測定した。
均一な流量を適用するために、空気への注入を手動で行うか、またはＬｅｇａｔｏ－１００シリンジポンプ（Ｋｄ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｈｏｌｌｉｓｔｏｎ，ＭＡ）を使用して行った。摘出したブタの眼への注入では、眼の眼圧を調節するために吸引を適用して、眼をＭａｎｄｅｌｌアイマウント（Ｍａｓｔｅｌ）上に取り付けた。
４．６．１７ 参照組成物
本明細書で提供する組成物のＡＡＶ凝集レベルは、組成物と参照医薬組成物とを比較することによって評価することができる。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、リン酸緩衝生理食塩水中で評価される組成物と同じ組換えＡＡＶを同じ濃度で含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、０．００１％ポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水中で評価される組成物と同じ組換えＡＡＶを同じ濃度で含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、４％ショ糖及び０．００１％ポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水中で評価される組成物と同じ組換えＡＡＶを同じ濃度で含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液中で評価される組成物と同じ組換えＡＡＶを同じ濃度で含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、４％ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ製剤中で評価される組成物と同じ組換えＡＡＶを同じ濃度で含む医薬組成物である。いくつかの実施形態では、参照医薬組成物は、０．００１％Ｐ１８８を含むＤＰＢＳ生理食塩水中で評価される組成物と同じ組換えＡＡＶを同じ濃度で含む医薬組成物である。
５．実施例
このセクション（すなわち、セクション５）の実施例は、例示として提示するものであり、限定するために示すものではない。
５．１ 実施例１：ＡＡＶのクラスター形成を誘導するのに適した希釈液の調製
導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂまたは構築物ＩＩ）を含有するショ糖を含む改質ＤＰＢＳ溶液（表２）を、リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液（表３）で希釈して、より低いイオン強度溶液を得た。リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液は、改質ＤＰＢＳと同じ賦形剤及び緩衝能を有するが、所望の範囲の等張性／重量オスモル濃度（２４０ｍＯｓｍ／ｋｇ以上）に維持しながら、イオン性賦形剤の塩化ナトリウムを減らし、非イオン性賦形剤のショ糖を増やしてイオン強度を低下させる。ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ及びリン酸緩衝１０％ショ糖希釈液の特性の概要については表４に示す。
Figure 2023544799000022
Figure 2023544799000023
Figure 2023544799000024
Figure 2023544799000025
Figure 2023544799000026
５．２ 実施例２：ＡＡＶクラスター形成
本実施例では、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含有する対照溶液を使用した。手短に言えば、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂまたは構築物ＩＩ）を含有するショ糖を含む改質ＤＰＢＳ溶液（表２）を、リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液（表３）で希釈して、より低いイオン強度及び塩類含有量を有するＡＡＶ溶液を得た（図１）。希釈により、２倍、４倍、または８倍希釈ＡＡＶ溶液を得た。
次に、対照溶液中、及び２倍、４倍、または８倍希釈溶液中のＡＡＶの分子直径（ｎｍ）を測定した。本実験により、イオン強度が低下するにつれて、ＡＡＶの分子直径（ｎｍ）が増大することが明らかとなった（図４及び図５）。この結果は、ＡＡＶ溶液のイオン強度が低下するにつれて、ＡＡＶが凝集したという事実と相互に関連する（図３Ａ～３Ｂ）。本実験により、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含有する液体医薬組成物を、減少させたイオン性賦形剤塩化ナトリウムの溶液の存在下で希釈して、ＡＡＶクラスター形成を誘導できることが明らかとなった（図２及び図３Ａ～３Ｂ）。クラスターは、２５℃で少なくとも２１時間、安定であった。表５は＜２５ｍＭの塩化ナトリウム（＜５１ｍＭのイオン強度に相当）への希釈により、２．６ｎｍの平均（平均直径）サイズの増加を伴うＡＡＶクラスター形成が誘導され、かつ１２．５ｍＭの塩化ナトリウム（＜３８ｍＭのイオン強度に相当）への希釈により、さらに大きなクラスター形成、及び６．５ｎｍの平均サイズの増加がもたらされた（表５の試料Ａ４及びＡ５を参照されたい）。
さらに、本実験により、ＡＡＶの分子直径及び凝集が可逆的であることが明らかとなった。約２１時間後、ＮａＣｌを含有する溶液（例えば、１モル生理食塩水逆転溶液、図４）を、ＡＡＶ対照溶液に、及び２倍、４倍、または８倍希釈溶液に加え、１５０ｍＭ以上のイオン強度を得た（図６）。ＮａＣｌを加えてから、約５時間、ＡＡＶクラスターの逆転をモニタリングした。データにより、ＮａＣｌ溶液をＡＡＶ対照溶液に、ならびに２倍、４倍、及び８倍希釈溶液に加えた後、イオン強度が直ちに（５分未満で）増大することが明らかとなった（図４）。イオン強度の増大の結果としてＡＡＶクラスターが可逆的であることが明らかとなった（図４及び図６）。したがって、ＡＡＶカプシドの構造及び機能は、誘導されたクラスター形成によって不可逆的に変化することはない。データにより、イオン強度に基づいてＡＡＶ凝集が可逆的であり、かつ凝集ＡＡＶを含有する溶液の脈絡膜上投与により、体液（例えば、眼液またはＳＣＳ液）と接触すると、ＡＡＶが脱凝集し始めるか、または凝集が少なくなり得ることが明らかとなった。
クラスター形成したＡＡＶを含有する溶液は、対象の眼の脈絡膜上腔に投与することができ、その結果、注入部位における局在化時間が増加し（図１）、それにより、クリアランス速度及び全体的なクリアランス時間が遅くなる。脈絡膜上腔におけるｉｎ ｖｉｖｏでのボーラス／ブレブ溶液組成物交換の実際の速度を遅くすることができるため、注入部位におけるクラスターの持続時間を延長し、それにより有効性を増大させることができる。クラスター形成したＡＡＶを含有する溶液の投与により、ＳＣＳからのＡＡＶのクリアランス時間を遅延させ、かつＡＡＶが注入部位に留まる期間を延長させることができる。ＡＡＶの凝集により、一定期間にわたるＳＣＳにおけるＡＡＶ粒子の徐放が可能になる。
Figure 2023544799000027
５．３ 実施例３：最適化したｉｎ ｖｉｔｒｏ試験
ＡＡＶのショ糖を含む改質ＤＰＢＳ中及び１０倍希釈溶液中の導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター（例えば、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂ、または構築物ＩＩ）の加重平均見かけ直径をキュムラント動的光散乱法（ＤＬＳ）によって特定した（図７）。ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ溶液中のＡＡＶを、リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液を加えることによって１０倍に希釈した（表４）。本実験はまた、１０倍希釈溶液をＮａＣｌでスパイクした（例えば、０．００１％Ｐ１８８を含むＤＰＢＳ生理食塩水逆転溶液を１０倍希釈溶液に加えることによる）後の加重平均見せかけ直径も試験した（表４及び図７）。
次に、クラスターのサイズを２５℃で４５分間評価し、投与準備処置（例えば、脈絡膜上投与）をシミュレートした。温度を３７℃まで昇温させて、投与後の温度上昇をシミュレートし（例えば、体温と相関させるために）、かつクラスターのサイズを、合計８７分間モニタリングした。塩（塩化ナトリウム）レベル、イオン強度、重量オスモル濃度、平均キュムラント径、ｄｄＰＣＲによるベクターゲノム濃度、及び試料のｉｎ ｖｉｔｒｏ効力の影響を表６に示す。本実験により、ショ糖を含む対照改質ＤＰＢＳ中のＡＡＶと比較して、１０倍希釈溶液（リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液で希釈した）中のＡＡＶの場合、直径が約５ｎｍ増加することが明らかとなった（表６中の試料１及び試料２の平均キュムラント径を参照）。このＡＡＶの直径の増加は、脈絡膜上投与後の注入部位におけるＡＡＶの持続時間に影響を与え、ゆえに治療の有効性を高める可能性がある。重量オスモル濃度で測定した際の１０倍希釈溶液の等張性は、３５７ｍＯｓｍ／ｋｇであり、かつ脈絡膜上腔への投与に対して許容可能な範囲内（２４０＜重量オスモル濃度＜６００ｍＯｓｍ／ｋｇ）であった（表６の試料２を参照）。本実験により、１０倍希釈溶液（リン酸緩衝１０％ショ糖希釈液で希釈した）と、ショ糖を含む対照改質ＤＰＢＳとの間でベクターゲノム濃度に著しい低下は観察されなかったことが明らかとなった（表６の試料１及び試料２のベクターゲノム濃度を参照）。加えて、試料間の効力は著しく低下しないことが予想される（データは示さず）。このデータは、ＡＡＶの凝集またはクラスター形成がＡＡＶの効力を低下させることを予測しているこれまでに公開されている文献（Ｗｒｉｇｈｔ ｅｔ． ａｌ．，２００５）と矛盾する。
本実験により明らかとなったＡＡＶクラスター形成が効力に影響を与えないという事実は、予想外であった。本実験により、短時間での誘導されたＡＡＶクラスター形成が可逆的であるため、効力の不可逆的損失をもたらさないことが明らかとなった。ゆえに、ＡＡＶ溶液を希釈することで、脈絡膜上投与の直前にクラスター形成を誘導することができる（図１）。例えば、ＡＡＶ溶液を希釈して、脈絡膜上投与と同日（または脈絡膜上投与の約２１時間前）にＡＡＶクラスター形成を誘導することができる。あるいは、クラスター形成したＡＡＶを含有する希釈溶液を、将来の使用のために（例えば、急速冷凍で、または室温で、または２０℃で、または４℃で、または－８０℃で）保管できる。
場合によっては、あるバイアルでＡＡＶ溶液、及び別のバイアルで希釈溶液が、開業医に提供される。その後、開業医は、明記されている容量の希釈液をＡＡＶ溶液に加えることによって（例えば、１０倍希釈液を得るために）投与の準備を行うことができる。例えば、３×１０１３ＧＣ／ｍＬの５０μＬのＡＡＶ溶液を、４５０μＬのリン酸緩衝１０％ショ糖希釈液で３×１０１２ＧＣ／ｍＬに１０倍希釈して、クラスター形成を誘導することができ、次いで、１００μＬの１０倍希釈ＡＡＶ溶液を、１眼当たり３×１０１１ＧＣの総用量で脈絡膜上腔に投与することができる。最終的な投与準備容量及び用量は、前臨床及び臨床研究に基づいて変化し得る。あるいは、凝集ＡＡＶを含有する希釈ＡＡＶ溶液（例えば、１０倍希釈液）は、直接使用向けに１つのバイアルで開業医に提供され得る。このように、開業医が使用前にＡＡＶ溶液を希釈液と混合する必要はない。
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ＡＡＶクラスター形成に対する閾値、希釈液のイオン強度、及び希釈比は、他のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ２及びＡＡＶ９）についても類似の方式で最適化することができる。例えば、クラスター形成を阻止する場合のＡＡＶ８閾値は、約６０ｍＭのイオン強度であった。本実験により、好適な誘導されるクラスター形成の投与準備は、ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ（イオン強度＝１２６ｍＭ）中のＡＡＶを、リン酸緩衝ショ糖（イオン強度＝２６ｍＭ）で希釈（１０倍）して、約３６ｍＭのイオン強度（ＡＡＶクラスター形成を阻止する場合に必要な閾値イオン強度（すなわち６０ｍＭ）のおよそ半分から３分の２）にすることによって実現できることが明らかとなった。ＡＡＶ９の場合、誘導されるクラスター形成に対する確固たる目標は、クラスター形成を阻止する場合のＡＡＶ９の３０ｍＭの閾値の半分から３分の２であり、これは約１５ｍＭ～２０ｍＭのイオン強度である。したがって、ＡＡＶ９の場合、ＡＡＶ８よりも、より低いイオン強度が望ましい場合がある。これを達成するための一方法は、リン酸塩緩衝液１０％ショ糖希釈液の緩衝液含量を５分の１に減らして、イオン強度を２６ｍＭから５．２ｍＭに低下させることである。したがって、５．２ｍＭのイオン強度希釈液によるＡＡＶ溶液（イオン強度＝１２６ｍＭ）の１０倍希釈により、必要なクラスター形成閾値を下回る約１７ｍＭの総イオン強度の溶液が得られる。同様に、ＡＡＶ２のクラスター形成は、そのイオン強度を低下させることによって実現することができる。ＡＡＶ２が２００ｍＭ～６００ｍＭのイオン強度で製剤化されていると仮定すると、リン酸緩衝１０％ショ糖による１０倍希釈により、クラスター形成に対する閾値を著しく下回る４３ｍＭ～８３ｍＭのイオン強度が得られる。
異なる希釈比及び／または異なる希釈液を使用して所望の臨床クラスター形成投与準備（例えば、特定のクラスター形成閾値の半分から３分の２のイオン強度）を実現することができる。ＡＡＶ８の場合、クラスター形成閾値は、約６０ｍＭであるため、＜４０ｍＭの溶液目標を、クラスター形成の誘導に用いることができる。ＡＡＶ９の場合、閾値は、約３０ｍＭであるため、＜２０ｍＭのイオン強度の溶液目標を、クラスター形成の誘導に用いることができる。ＡＡＶ２の場合、クラスター形成に対する閾値は、２００ｍＭであるため、＜１３３ｍＭの溶液目標を、クラスター形成の誘導に用いることができる。
５．４ 実施例４：血管新生加齢性黄斑変性（ｎＡＭＤ）を患う被験者の脈絡膜上腔に施される遺伝子治療
５．４．１ 試験の概要：
本実施例は、血管新生（ウェット型）加齢性黄斑変性（ｎＡＭＤ）を患う患者に対する遺伝子治療に関する。本実施例では、可溶性抗ＶＥＧＦ Ｆａｂタンパク質のコード配列を持つ構築物ＩＩまたは複製欠損アデノ随伴ウイルス８（ＡＡＶ８）を、異なるＡＡＶ凝集レベルを有する異なる溶液または異なるイオン強度（低いイオン強度から非常に高いイオン強度までの範囲）を有する異なる溶液を使用して、ｎＡＭＤを患う患者に投与する。遺伝子治療の目標は、網膜変性の進行を遅らせるか、または防ぐことであり、かつ最小限の介入／侵襲的な処置で視力低下を遅らせるか、または防ぐことである。現在の抗ＶＥＧＦ療法は、ウェット型ＡＭＤの治療の状況を大きく変え、大多数の患者の視力喪失の進行を防ぐ能力があるため、標準治療となりつつある。しかし、これらの療法には、有効性を維持するために、典型的には、４～１２週間ごとの頻度で繰り返される生涯にわたる眼内注入が必要である。治療の負担に起因して、患者はしばしば、時間の経過とともに治療の頻度が減り、視力の低下を経験する。脈絡膜上腔に施される遺伝子治療は、ウェット型ＡＭＤまたは任意のその他の眼疾患に対する潜在的な１回限りの治療として開発されている。
試験の詳細な説明：この用量漸増試験は、ｎＡＭＤを患う被験者における構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ遺伝子治療の有効性、安全性、及び忍容性を評価するように設計されている。有効性は、試験の主な焦点である。試験の全体を通して、構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂの安全性及び忍容性について、被験者を評価する。選択／除外基準を満たすおよそ４０人の被験者を、２つの用量コホートのうち１つにランダムに分ける。一部の被験者には、対照治療剤としてラニビズマブ（ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標））を投与し、一部の被験者には、脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への単回注入を介して、構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを投与し、さらに一部の被験者には、脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への２回の注入を介して構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを投与する。本実施例を使用して、種々のＡＡＶ凝集レベルを有するか、または異なるイオン強度もしくは塩類含有量を有する異なる溶液中に存在する遺伝子療法剤を送達することができる。例えば、一部の溶液は、ＡＡＶ凝集を有する場合があり、その一方で、他の溶液は、検出可能なレベルのＡＡＶ凝集を有していない場合がある。構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ（または任意のその他の遺伝子療法剤）の有効性、安全性、及び忍容性もまた、送達溶液のＡＡＶ凝集またはイオン強度に関連して分析することができる。
本試験の主要評価項目は、毎月（４０週間の期間にわたって）、構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂに対する最大矯正視力（ＢＣＶＡ）の平均変化をラニビズマブと比較して評価することである。使用するスケールは、０～１００の早期治療糖尿病性網膜症試験（ＥＴＤＲＳ）文字スコアである（スコアが高いほど、視力が良好である）。
本試験の副次評価項目には、１）５２週間の期間にわたる眼及び非眼の有害事象（ＡＥ）及び重篤な有害事象（ＳＡＥ）の発現率を検出することによる、構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂの安全性及び忍容性の評価；２）４０週目及び５２週目での蛍光眼底血管撮影（ＦＡ）に基づいてＣＮＶ病変サイズ及び漏出領域のベースラインからの平均変化を分析することによる、５２週間の期間にわたる脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）病変の増殖及び漏出に対する構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂの効果の評価；３）５２週目までのＢＣＶＡのベースラインからの平均変化を分析することによる、５２週間の期間にわたるＢＣＶＡに対する構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂの効果の評価；４）４０週目及び５２週目までのスペクトル領域光干渉断層法（ＳＤ－ＯＣＴ）により測定した際のＣＲＴのベースラインからの平均変化を分析することによる、５２週間の期間にわたる中心網膜厚さ（ＣＲＴ）に対する構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂの効果の評価；及び５）５２週間の期間にわたる構築物ＩＩまたはＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ治療を受ける参加者に対する補助的な抗血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）療法の必要性の評価（例えば、４０週目及び５２週目までの年率換算した補助的な抗ＶＥＧＦ注入率を確認することによる）が含まれる。
５．４．２ 適格基準：
本試験に以下の適格基準を適用する：
最低年齢：５０歳
最高年齢：８９歳
性別：全て
性別ベース：なし
健康なボランティアの受け入れ：なし
５．４．３ 選択基準：
試験眼が加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）に続発する傍中心窩ＣＮＶと診断された≧５０歳から≦８９歳までの患者。
参加者は、抗ＶＥＧＦ療法に対して有意な反応を示している必要がある。
５．４．４ 除外基準：
ＡＭＤ以外のなんらかの原因に続発する試験眼のＣＮＶまたは黄斑浮腫がある場合。
試験眼の傍中心窩繊維症または萎縮がある場合。
硝子体切除を以前に受けたことがある被験者。
試験眼の視力（ＶＡ）改善を制限する可能性があると、治験責任医師が判断した任意の状態がある場合。
試験眼における網膜剥離の活動性または既往がある場合。
試験眼の緑内障が制御されない場合。
なんらかの遺伝子治療を受けている場合。
眼底の視覚化または試験眼のＶＡ改善を妨げる状態、例えば、白内障、硝子体混濁、繊維症、萎縮、または中心窩の中心において網膜上皮裂離がある場合。
試験眼に眼内手術の既往がある場合。
２回目の訪問の３０日以内になんらかの治験薬の投与を受けている場合。
試験参加から６ヶ月以内に心筋梗塞、脳血管障害、または一過性虚血性発作があった場合。
５．５ 実施例５：動物モデルにおけるＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂ）の脈絡膜上注入と網膜下注入との比較
５．５．１ 試験の概要
ＡＡＶ（例えば、可溶性抗ＶＥＧＦ Ｆａｂタンパク質のコード配列を持つ複製欠損アデノ随伴ウイルス８（ＡＡＶ８））を含有する種々の医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）の脈絡膜上注入と網膜下注入とによって実現される発現を比較するために、以下の試験を行う。凝集ＡＡＶを有するかまたは低イオン強度もしくは塩類含有量を有する溶液中のＡＡＶ（例えば、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂ）の脈絡膜上注入が、ＡＡＶ凝集を有していないか、または通常用いられるイオン強度及び塩類含有量を有する溶液中のＡＡＶの網膜下注入または脈絡膜上注入による送達と比較して、眼におけるＶＥＧＦ誘導漏出及び血管新生を低減できるかどうか、かつ抗ＶＥＧＦを増加させることができるかどうかを測定するためにも、本実験を使用する。異なるＡＡＶ凝集レベルまたは異なるイオン強度または異なる塩濃度を有するいくつかの医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を試験する。
結果は、溶液のＡＡＶ凝集のレベルまたはイオン強度または塩類含有量が、脈絡膜上または網膜下にＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを注入された眼で検出されたａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂに影響を及ぼし、網膜対脈絡膜中の抗ＶＥＧＦタンパク質分布に影響を及ぼし、かつ中和ＶＥＧＦ誘導漏出及び血管新生に影響を及ぼすことを示している。ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂタンパク質の濃度を、凝集ＡＡＶまたはより低いイオン強度またはより低い塩濃度（ＰＢＳと比較して、またはＡＡＶ網膜下注入に通常使用される溶液と比較して、または参照と比較して）を含む溶液の存在下で送達されたＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂにより、参照溶液（例えば、ＤＰＢＳ、またはＡＡＶ網膜下注入に通常使用される溶液）の存在下で送達されるＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂと比較して、溶液をＳＣＳに注入した（脈絡膜上注入の）場合に、眼で検出されるａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂのレベルが高くなることを実証すためにＥＬＩＳＡによって測定する。また、本実験は、参照溶液中（例えば、ＡＡＶ網膜下注入に通常使用される溶液、または凝集ＡＡＶを含んでいないか、または検出可能なＡＡＶ凝集レベルを含まない溶液）のＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂの網膜下注入と比較して、ＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有し、かつ凝集ＡＡＶまたはより低いイオン強度またはより低い塩濃度を含む溶液が脈絡膜上注入を介して注入された場合に、より高いレベルのａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂが眼で検出されることを示している。また、本実験は、同じ医薬組成物が網膜下注入によって投与される場合と比較して、ＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有し、かつ凝集ＡＡＶまたはより低いイオン強度またはより低い塩濃度を有する医薬組成物が脈絡膜上注入を介して注入された場合に、より高いレベルのａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂが眼で検出されることも示している。同じ濃度のウイルスゲノムをＳＣＳ及び網膜下投与に使用する。同じ量のゲノムコピーをＳＣＳ及び網膜下投与に使用する。
ＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有する同じ溶液の網膜下注入と比較して、ＡＡＶ－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有し、かつ凝集ＡＡＶを含む溶液の脈絡膜上注入が、ＶＥＧＦ誘導漏出及び血管新生を中和する際により有効であることを実証するために、ＥＬＩＳＡによる硝子体試料のアルブミンの測定によって、血管漏出を評価する。
５．５．２ 方法
動物（例えば、Ｎｏｒｗａｙ Ｂｒｏｗｎラット）に、例えば、一方の眼にＡＡＶ８－ＣＢ７－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂの１眼当たり２．８５×１０１０ゲノムコピー（ＧＣ）を含有する（４×１０１０ＧＣ／ｍｌの濃度）３μＬの脈絡膜上または網膜下注入を行い、もう片方の眼にＡＡＶ８－ＣＢ７－ＧＦＰの７．２×１０８ＧＣを含有する３μＬの脈絡膜上または網膜下注入を行う。数週間後（例えば、２週間後）、ＶＥＧＦ（例えば、２００ｎｇ）を両眼に注入する。動物のサブセットに、異なる量のＶＥＧＦ（例えば、１００ｎｇ）を注入する。
５．５．３ 結果
ＶＥＧＦ注入から２４時間後に撮像した眼底写真（例えば、２週間目）は、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを注入した眼において標準的な網膜及び網膜血管口径を示しているが、ＡＡＶ８－ＧＦＰを注入した眼は、膨張した血管、浮腫のエビデンス、視神経円板の境界のぼやけ、及び網膜の乳光を示している。
ＥＬＩＳＡによる硝子体試料におけるアルブミンの測定によって血管漏出を評価する。同じ医薬組成物が同じ濃度のウイルスゲノムまたは同じ数のゲノムコピーを使用して網膜下投与を介して注入された場合と比較して、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有し、かつ凝集ＡＡＶを含む溶液をＳＣＳに注入した眼でより高いレベルのａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂが検出される。また、ＳＣＳに注入されるか、または網膜下送達を介して注入されるＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有する参照溶液（例えば、ＡＡＶ網膜下注入に通常使用される溶液）と比較して、ＡＡＶ８－ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂを含有し、かつ凝集ＡＡＶを含む溶液をＳＣＳに注入した眼でより高いレベルのａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂが検出される。ＡＡＶ ａｎｔｉＶＥＧＦｆａｂは、参照溶液（例えば、ＡＡＶ網膜下注入に通常使用される溶液）がＳＣＳへの、または網膜下送達を介したＡＡＶの注入に使用される場合と比較して、凝集ＡＡＶを含む溶液がＳＣＳへのＡＡＶの注入に使用される場合に注入部位に留まり（拡散が少なく）、かつより局在化する。
５．６ 実施例６：脈絡膜上腔（ＳＣＳ）の厚さに対する液体製剤の効果
経時的なＳＣＳの厚さ及びＳＣＳ崩壊率に対する液体製剤の効果を、生きている動物（例えば、ウサギ、マウス、またはサル）で測定する。異なるＡＡＶ凝集レベルまたはイオン強度または塩濃度を有する異なる溶液を使用する。本実験で使用することができる溶液の例については本開示にて開示する。注射部位の初期のＳＣＳの厚さを、例えば、超音波イメージングを使用することによって種々の医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）に対して計算する（セクション４．６を参照）。ＳＣＳの厚さ（例えば、注入前、及び注入後に測定したＳＣＳの厚さ）は、溶液のＡＡＶ凝集のレベルに応じて変化する。ＳＣＳの厚さは、注入前及び注入後の異なる時点など、異なる時点で測定することができる。例えば、ＡＡＶ凝集を含む溶液は、参照溶液またはわずかな量のＡＡＶ凝集を含む溶液と比較して、より増加したＳＣＳの厚さを示す。また、ＳＣＳの厚さを、眼の異なる位置で経時的に測定する。溶液のＡＡＶ凝集のレベルは、経時的なＳＣＳの厚さに影響を及ぼす。例えば、凝集ＡＡＶを含む溶液は、経時的に測定した場合であっても注入部位近くのＳＣＳの厚さを増加させるが、その一方で、参照溶液を使用した場合、注入部位のＳＣＳの厚さは経時的に減少する。ＰＢＳまたは参照溶液を使用する場合の経時的な注入部位におけるＳＣＳの厚さの減少は、ＳＣＳにおける隣接する部位のＳＣＳの厚さの付随する増加に伴うものである。溶液のＡＡＶ凝集のレベルまたはイオン強度または塩濃度は、ＳＣＳの厚さの持続、及びＳＣＳの厚さの局在化に影響を及ぼす。溶液のＡＡＶ凝集またはイオン強度または塩濃度はまた、ＳＣＳから溶液が除去されるのにかかる時間量に影響を及ぼす。例えば、ＡＡＶ凝集を有する溶液は、参照溶液と比較して、ＳＣＳ（または眼）により長い期間留まる。
５．７ 実施例７：脈絡膜上腔（ＳＣＳ）の厚さを測定するための超音波イメージング
高周波超音波（Ｕ／Ｓ）プローブ（例えば、ＵＢＭ Ｐｌｕｓ，Ａｃｃｕｔｏｍｅ，Ｍａｌｖｅｒｎ，ＰＡ）を使用して、ｅｘ ｖｉｖｏでの眼（例えば、動物の眼）のＳＣＳの２Ｄ断面画像を作成する（セクション４．６を参照されたい）。眼に溶液を用いて注入した後、断面画像を生成する。溶液のＡＡＶ凝集、イオン強度、塩濃度、及び容量の範囲は変動し得る。例えば、容量は、１μＬ～５００μＬの範囲で変動し得る。場合によっては、容量は、１μＬ未満または５００μＬ超である場合がある。溶液は、水溶液（例えば、水）、ＰＢＳ、ハンクス平衡塩類溶液（ＨＢＳＳ）、ＤＰＢＳ、または本開示の任意の他の溶液とすることができる。溶液は、染料（例えば、蛍光染料、赤色蛍光、青色蛍光、青色染料、または任意のその他の染料）をさらに含んでいる場合がある。溶液はまた、本開示と共に使用可能な任意の組成物、薬物、薬剤、またはウイルス（例えば、ＡＡＶ）も含んでいる場合がある。Ｕ／Ｓプローブカバー（Ｃｌｅａｒｓｃａｎ，Ｅｙｅ－Ｓｕｒｇｉｃａｌ－Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｐｌｙｍｏｕｔｈ，ＭＮ）を、ＵＢＭ Ｐｌｕｓに取り付けて、Ｕ／Ｓ画像取得を促進する。注入の数分後、Ｕ／Ｓプローブを使用して、眼の周囲の矢状方向視点（例えば、１２時方向、１時３０分方向、３時方向、４時３０分方向、６時方向、７時３０分方向、９時方向、及び１０時３０分方向）を取得する。Ｕ／Ｓ Ｂスキャンの画像後処理を実施して、強膜岬の後方の強膜の外側から網膜の内側の厚さ（例えば、１、５、及び９ｍｍ）を見つける。各眼の平均、中央値、及び標準偏差を計算する。例えば、強膜の外側から網膜の内側までの、強膜及び脈絡膜に対して垂直な線分を見つけることによって、超音波ＢスキャンでのＳＣＳの厚さを計算することができる。結膜は測定から除外する。組織の厚さを検出し、減算し、ＳＣＳの厚さを算出する。
５．８ 実施例８：脈絡膜上注入によるバッテン病ＣＬＮ１またはＣＬＮ２関連視力喪失の治療
バッテン病ＣＬＮ１関連視力喪失を示している対象に、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１をコードするＡＡＶ８またはＡＡＶ９を、３ヶ月間、眼（例えば、硝子体液）において治療に有効な濃度の導入遺伝子産物を産生するのに十分な用量で投与する。バッテン病ＣＬＮ２関連視力喪失を示している対象に、トリペプチジルペプチダーゼ１をコードするＡＡＶ８またはＡＡＶ９を、３ヶ月間、眼（例えば、硝子体液）において治療に有効な濃度の導入遺伝子産物を産生するのに十分な用量で投与する。投与は、脈絡膜上腔への投与によって行う。異なるＡＡＶ凝集レベルを有するいくつかの医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を使用する。医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）のＡＡＶ凝集のレベル、イオン強度、または塩濃度は、バッテン病ＣＬＮ２またはＣＬＮ１関連視力喪失及び治療の有効性に影響を与える。治療後、バッテン病ＣＬＮ２関連視力喪失の改善について対象を評価する。治療後、バッテン病ＣＬＮ１関連視力喪失の改善について対象を評価する。凝集ＡＡＶを含む医薬組成物が使用された場合のＳＣＳにＡＡＶが投与された対象は、同じ医薬組成物が網膜下注入によって投与された対象と比較して、バッテン病ＣＬＮ１またはＣＬＮ２関連視力喪失のより良好な改善が見られる。凝集ＡＡＶを含む医薬組成物が使用された場合のＳＣＳにＡＡＶが投与された対象は、参照医薬組成物が網膜下注入によって、硝子体内投与によって、またはＳＣＳへ投与された対象と比較して、バッテン病ＣＬＮ１またはＣＬＮ２関連視力喪失のより良好な改善が見られる。
視覚障害に対する本明細書に記載する方法の効果を、視線運動性眼振（ＯＫＮ）を含む１つ以上の視力スクリーニングによって測定する。ＯＫＮ視力スクリーニングは、ＯＫＮ不随意反射の原理を用いて、患者の眼が動いているターゲットを追うことができるかどうかを客観的に評価する。上記治療の前後のＯＫＮスクリーニング結果のパーセンテージの変化を計算する。
５．９ 実施例９：ヒト患者への注入をモニタリングするための赤外線サーマルカメラの使用
ウェット型ＡＭＤを示している対象に、ラニビズマブＦａｂをコードするＡＡＶ８を、３ヶ月間、眼（例えば、硝子体液）において少なくとも０．３３０μｇ／ｍＬのＣｍｉｎの導入遺伝子産物の濃度を生み出すのに十分な用量で投与する（例えば、網膜下投与、脈絡膜上投与、または硝子体内によって）。異なるＡＡＶ凝集レベルを有するいくつかの医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を使用して脈絡膜上投与によって、ラニビズマブＦａｂをコードするＡＡＶ８を投与することができる。凝集ＡＡＶを含む溶液（参照溶液と比較して、またはＡＡＶ網膜下注入に通常使用される溶液と比較して）で、ラニビズマブＦａｂをコードするＡＡＶ８を投与された対象は、参照溶液で脈絡膜上投与、網膜下投与、または硝子体内投与によって、ラニビズマブＦａｂをコードするＡＡＶ８を投与された対象における導入遺伝子の濃度と比較して、より高濃度の導入遺伝子を示す（例えば、投与から１週間後、２週間後、３週間後、４週間後、８週間後、または１２週間後に測定した際に）。導入遺伝子の濃度は、ラニビズマブＦａｂをコードするＡＡＶ８の投与後いつでも測定することができる。例えば、凝集ＡＡＶを含む溶液を使用して、ＡＡＶ８をＳＣＳに投与された対象は、参照溶液を使用して、ＳＣＳに、または網膜下を介して、または硝子体内投与を介してＡＡＶ８を投与された対象と比較して、ＡＡＶの投与から１週間後、４週間後、２ヶ月後、または３ヶ月後に測定した際に、眼においてより高濃度の導入遺伝子を示す。同様に、凝集ＡＡＶを含む溶液を使用して、ＡＡＶ８をＳＣＳに投与された対象は、網膜下投与を介して同じ医薬組成物を投与された対象と比較して、より高濃度の導入遺伝子を示す。本実験で使用する全ての溶液は、同じ量のゲノムコピーを有する。
ＦＬＩＲ Ｔ５３０赤外線サーマルカメラを使用して、処置中の注入を評価し、かつ投与が正常に完了したかどうか、または投与に誤りがあったかどうかのいずれかを確認するために注入後評価することができる。あるいは、ＦＬＩＲ Ｔ４２０、ＦＬＩＲ Ｔ４４０、Ｆｌｕｋｅ Ｔｉ４００、またはＦＬＩＲＥ６０赤外線サーマルカメラを使用する。治療後、臨床効果の徴候ならびにウェット型ＡＭＤの徴候及び症状の改善について、対象を臨床的に評価する。
５．１０ 実施例１０：製剤Ａ及び製剤Ｂの成分
本実施例では、≦－６０℃で保管される製剤Ａ（０．００１％ポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水）、及び－２０℃で保管される製剤Ｂ（「４％ショ糖及び０．００１％ポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４の改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水」）の成分を示す。２つの製剤の比較及び影響分析を表７に提示する。製剤Ｂは、２年間の保管後、現在までに観察されているＡＡＶ産物に影響を及ぼすことなく、保管の実現可能性が改善した。異なるＡＡＶ凝集レベルまたはイオン強度または塩濃度を有するその他の医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を試験する。本開示の医薬組成物は、例えば、製剤Ｂの１つ以上の成分を含むことができる。本開示の医薬組成物（例えば、ＡＡＶ凝集を含む）は、ＡＡＶ産物に影響を及ぼすことなく（２年間の保管後）、保管の実現可能性が改善した。
Figure 2023544799000029
製剤Ｂ（ショ糖を含む改質ＤＰＢＳ）は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、０．００１％（０．０１ｍｇ／ｍＬ）のポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４である（表８）。モル単位では、製剤Ｂは、２．７０ｍＭの塩化カリウム、１．４７ｍＭの一塩基性リン酸カリウム、１００ｍＭの塩化ナトリウム、８．１ｍＭの無水二塩基性リン酸ナトリウム、１１７ｍＭのショ糖、０．００１％（０．０１ｍｇ／ｍＬ）のポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４である。製剤Ｂの密度は、１．０１８８ｇ／ｍＬであり得、製剤Ｂの重量オスモル濃度は、およそ３４５（３３１～３５４）であり得る。
Figure 2023544799000030
Figure 2023544799000031
５．１１ 実施例１１：製剤Ａ及び製剤Ｂの長期間の安定性の比較
本実施例では、製剤Ａ及び製剤Ｂの長期間の安定性の比較を示す。製剤Ａ及びＢは、－８０℃で類似の長期間凍結安定性を有しており、かつ製剤Ｂは、－２０℃でも安定であった。「４％ショ糖を含む改質ｄＰＢＳ」製剤Ｂは、－２０℃、及び－８０℃で１２ヶ月間効力を維持した。異なるＡＡＶ凝集レベルを有するその他の医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を試験する。本開示の医薬組成物（例えば、凝集ＡＡＶを含む）は、－２０℃及び－８０℃で安定である。ＡＡＶ凝集を含む医薬組成物は、－２０℃、及び－８０℃で１２ヶ月間効力を維持する。本開示の医薬組成物（例えば、凝集ＡＡＶを含む）は、例えば、製剤Ｂの１つ以上の成分を含むことができる。
５．１２ 実施例１２：製剤Ａ及び製剤Ｃのｉｎ－ｖｉｔｒｏ効力の比較
本実施例では、製剤Ａ及び製剤Ｃの長期間の安定性の比較を示す。製剤Ｃは、６０ｍＭのＮａＣｌ及び６％ショ糖を含む「ショ糖を含む改質ｄＰＢＳ」の変形形態である。製剤Ｃは、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、３．５０ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、６０．０ｍｇ／ｍＬ（６％ｗ／ｖ）のショ糖、０．００１％（０．０１ｍｇ／ｍＬ）のポロキサマー１８８を含み、ｐＨ７．４である。
製剤Ｃは、－２０℃で２年間安定であった。参照製剤Ａ（ｄＰＢＳ）は、－２０℃で不安定であった。製剤Ｂ及びＣは、同等、かつ－２０℃で長期間の安定性が優れている可能性がある。異なるＡＡＶ凝集レベルを有するその他の医薬組成物（例えば、希釈された製剤またはより低いイオン強度の製剤）を試験する。本開示の医薬組成物（例えば、ＡＡＶ凝集を含む）は、例えば、製剤Ｂまたは製剤Ｃの１つ以上の成分を含むことができる。本開示の医薬組成物（例えば、ＡＡＶ凝集を含む）は、－２０℃で２年間安定である。
５．１３ 実施例１３：異なる脈絡膜上製剤を使用したカニクイザルにおける薬力学的研究、生体内分布研究、及び忍容性研究
本研究の目的は、カニクイザルに脈絡膜上注入を介して単回投与を行った場合の、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含む異なる製剤の生体内分布、薬力学的特性（導入遺伝子濃度）、及び忍容性を評価することである。投与後、少なくとも４週間、動物の投与後観察を行う。また、１つの群には、高容量の製剤を投与する。製剤の一部は、低凝集から高凝集まで、様々なＡＡＶ凝集レベルを有する。製剤の一部は、低イオン強度から高イオン強度まで、様々なイオン強度レベルを有する。例えば、製剤１は、低ＡＡＶ凝集レベルを有し、製剤２は、中程度のＡＡＶ凝集レベルを有し、かつ製剤３は高ＡＡＶ凝集レベルを有する。群の割り付け及び用量レベルを表９に示す。被験物質は、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂである。対照物質は、プラセボである。製剤及び対照を、－６０℃～－８０℃の冷凍庫で保管し、使用日に室温で解凍するか、または製剤がその日に使用される場合は室温で保管するか、または２℃～８℃の冷蔵庫で保管した。
Figure 2023544799000032
動物の供給業者での抗体事前スクリーニング：およそ９０匹の雌サルからの血液（少なくとも１ｍＬ）を、大腿静脈を介して各動物から採取し、抗凝固薬を含んでいないチューブに入れる。必要に応じて、別の静脈を使用して採取することもできる。事前スクリーニングの結果に基づいて、動物を研究候補として選択する。血液を室温で凝固させ、１時間以内に遠心分離にかけ、血清を得る。血清を２つのアリコートに分けて、クライオバイアルに入れ、およそ－７０℃の保管の前にドライアイス上で維持する。試料を分析のためにドライアイス上で一晩輸送する。次に、許容される任意の方法によって、抗ＡＡＶ８中和抗体（ＮＡｂｓ）に関して試料を分析する。抗ＡＡＶ８ Ｎａｂの結果に基づいて動物を輸送のために選択する。
投与：動物を一晩絶食させて、脈絡膜上注入の前に、ケタミン及びデクスメデトミジンを用いて麻酔をかける。手短に言えば、１００μＬの単回の脈絡膜上注入（または５０μＬずつの２回の注入）を５～１０秒にわたって各眼（縁から３～４ｍｍ）に行う。高容量製剤の場合、１眼当たり２００μＬを投与する。製剤はＣｌｅａｒｓｉｄｅ ＳＣＳ Ｍｉｃｒｏｉｎｊｅｃｔｏｒを用いて投与する。マイクロニードルのサイズは製剤の粘度に応じて変更することができる。場合によっては、３０ゲージマイクロニードルを使用する。右眼への注入を、耳側上部（すなわち、１０時方向から１１時方向の間）に行う。左眼への注入を、耳側上部（すなわち、１時方向から２時方向の間）に行う。注入後、ニードルを引き抜く前におよそ５秒間眼の中で維持する。マイクロニードルを引き抜いた後、先端が綿のアプリケーター（ドーズワイプ）をおよそ１０秒間注入部位に置く。局所抗生物質（例えば、Ｔｏｂｒｅｘ（登録商標）または適切な代替物）を、投与後、各眼に点眼する。各投与時間を、各注入の完了時間として記録する。最初に右眼に投与し、続いて、左眼に投与する。
眼科処置：眼科検査を行う（例えば、投与後４、８、１５、及び２９日目）。細隙灯生体顕微鏡及び倒像鏡を用いて動物を検査する。細隙灯生体顕微鏡を使用して、両眼の付属器及び前部分を検査する。倒像鏡を使用して両眼の眼底を検査する（目に見える場合）。倒像鏡による検査前に、瞳孔を散瞳薬（例えば、１％トロピカミド）で拡張する。投与日（投与前１０分以内）、及び例えば、４、８、１５，及び２９日目に、眼圧を測定する。リバウンド眼圧測定（ＴｏｎｏＶｅｔ）を使用して、眼圧を評価することができる。およそ４週間目に眼の写真撮影を行う。デジタル眼底カメラで写真撮影を行う。各眼のカラー写真を撮影して、後極の立体的な写真及び２つの中間周辺領域（耳側及び鼻側）の非立体的な写真を撮像する。周辺部の写真撮影も行う。さらに、インドシアニングリーンを用いる自己蛍光イメージングを行い、投与の拡散を（例えば、１日目及び２日目に）記録する。
抗ＡＡＶ８中和抗体分析：異なる時点で（例えば、投与前、投与日、及び投与後）各動物の大腿静脈から採取した血液試料を、室温で保持し、少なくとも３０分凝固させ、その後遠心分離にかける。試料を、採取の１時間以内に遠心分離にかけ、血清を回収する。回収後、試料を－６０℃～－８０℃で保管するまでドライアイス上に置く。次に、ＡＡＶ８抗体に対する血清分析を認定されている中和抗体アッセイを使用して行う。
抗ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ導入遺伝子産物抗体分析：上述のように血液試料を採取し、本開示のアッセイのいずれかまたは任意の許容されるアッセイを使用して、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂに対する抗体に関して血清試料を分析する。ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂ導入遺伝子分析では、上述のように血液試料を、投与の少なくとも２週間前、１５日目、動物屠殺の日（２９日目）に採取する。投与前に前眼房から５０μＬを採取する。房水及び硝子体液からの試料は、最後の剖検の際に採取することができる。血清試料は、投与前、１５日目、及び剖検前に採取することができる。続いて、本開示の任意のアッセイまたは任意の許容されるアッセイもしくは方法（例えば、導入遺伝子濃度に関する）によって、試料を分析する。
房水採取：投与の少なくとも２週間前、１５日目、及び動物を屠殺する日に、各眼からおよそ５０μＬを採取する。各眼からの房水試料を、Ｗａｔｓｏｎバーコードラベルの付いた別々のチューブに入れ、液体窒素で瞬間凍結し、－６０℃～－８０℃で保管するまで、ドライアイス上に置く。
房水採取処置後の投薬レジメン：この治療レジメンの目的は、房水採取処置に関連した緩和的治療を提供することである。採取日の後の治療目標は、有害事象（例えば、不快感）の適切な一時的軽減を提供することである。眼痛及び副作用について動物を試験する。
Figure 2023544799000033
研究の終了：ナトリウムペントバルビタールを用いて動物に麻酔をかけ、２９日目に瀉血する。
房水及び硝子体液の剖検採取：房水及び硝子体液からそれぞれ、１眼あたり最大５０μＬ及び１眼あたり最大１００μＬを採取する。瀉血後、眼を摘出し、各眼から房水及び硝子体液試料を採取する。硝子体液試料をほぼ等しい２つのアリコートに分け、房水試料を１つのアリコートとして保管する。それぞれの採取後、動物の右眼に、膨張するまで改質デーヴィッドソン固定液を注入する。眼を改質デーヴィッドソン固定液中で４８～９６時間保管し、続いて、１０％中性緩衝ホルマリンに移す。試料を急速冷凍して、－６０℃～－８０℃で保管する。導入遺伝子濃度について房水及び硝子体試料を分析する。
生体内分布研究に向けた眼組織採取：瀉血後、種々の製剤群の全ての動物から左眼及び２匹の動物から右眼（生存に依存する）を摘出し、組織を採取する。Ｗａｔｓｏｎバーコードラベルの付いた別々のチューブに組織を採取する。採取する組織には、網膜色素上皮、角膜、虹彩－睫毛体、視交叉、視神経、網膜、強膜、及び後眼杯を伴う脈絡膜が含まれる。眼を４つのほぼ等しい部分（投与部位の領域を含む上耳側、投与部位の領域を含む上鼻側、下耳側、及び下鼻側）に分割する。各部分から、８ｍｍ生検パンチを使用して１つの試料を採取する。試料を－６０℃～－８０℃で保管する。ｑＰＣＲまたはｑＲＴ－ＰＣＲ法を使用してベクターＤＮＡまたはＲＮＡについて試料を分析する。
生体内分布研究に向けた非眼組織採取：およそ５ｍｍ×５ｍｍ×５ｍｍの２つの試料を、右脳半球（例えば、小脳（外側）、小脳（背側）、前頭皮質（ブロートマン野４）、前頭皮質（ブロートマン野６）、後頭皮質（皮質表面）、後頭皮質（実質）、卵巣、心臓、腎臓、涙腺（左）、肝臓（左側葉）、肺（左尾葉）、リンパ節（耳下腺）、リンパ節（下顎）、下垂体、唾液腺（下顎）、脾臓、胸腺、後根神経節（頸部、左）、後根神経節（腰部部、左）、及び後根神経節（胸部、左）から採取する。試料を－６０℃～－８０℃で保管する。
組織学研究：動物の右眼及び右視神経から公称５μｍの切片を作成し、ヘマトキシリン・エオジンで染色する。眼組織の切片を作成し、中心窩、注入部位領域、黄斑、視神経円板、及び視神経の検査を促進する。下方帽子様組織片のほぼ中心を通る単一の垂直断面を取る。これにより、１つのスライド／ブロック／眼（眼ごとに合計３つのスライド）が作成される。さらに、デジタルスキャン（仮想スライド）を選択した微視的スライドから準備することができる。
データ評価及び統計的解析：平均及び標準偏差を使用して統計的データ解析値を計算する。絶対体重、体重変化、及び眼圧測定値について、平均及び標準偏差を計算する。
５．１４ 実施例１４：異なる脈絡膜上製剤を使用したカニクイザルにおける薬力学的研究、生体内分布研究、及び忍容性研究
本研究の目的は、カニクイザルに脈絡膜上注入を介して単回投与を行った場合の、ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含むクラスター形成製剤の生体内分布（ＤＮＡ及びｍＲＮＡ）、薬力学的特性（導入遺伝子濃度）、及び忍容性を評価することであった。投与後、少なくとも４週間、動物の投与後観察を行った。各群に同じ投与容量を実現するように２回の注入を行った。群の割り付け及び用量レベルを表１１に示した。被験物質はＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂであった。対照物質は、プラセボであった。
Figure 2023544799000034
投与：被験物質及び対照物質の調製を表１２に示す。被験物質及び対照物質を－６０℃～－８０℃の冷凍庫で保管し、使用日に室温で解凍した。製剤を室温で解凍し、ストック濃度を希釈して調製し、シリンジに充填するまで室温で保管した。脈絡膜上注入の前に、ケタミン及びデクスメデトミジンを用いて動物に麻酔をかけた。投与の際、５０μＬの２回の脈絡膜上注入（群１及び２）を１０～１５秒にわたって各眼（縁から３～４ｍｍ）に投与した。シリンジ及びマイクロニードルのサイズを表１２に示す。右眼への第１の注入を、耳側上部（すなわち、１０時方向から１１時方向の間）、及び右眼への第２の注入（必要に応じて）を、鼻側下部（すなわち、４時方向から５時方向の間）に行った。左眼への第１の注入を、耳側上部（すなわち、１時方向から２時方向の間）、及び左眼への第２の注入（必要に応じて）を、鼻側下部（すなわち、７時方向から８時方向の間）に行った。注入後、ニードルを引き抜く前におよそ３０秒間眼の中で維持した。マイクロニードルを引き抜いた後、先端が綿のアプリケーター（ドーズワイプ）をおよそ１０秒間注入部位に置いた。
Figure 2023544799000035
房水採取：投与の少なくとも２週間前、１５日目、及び予定された屠殺の日（２９日目）に、各眼からおよそ５０μＬを採取した。各眼からの房水試料を、Ｗａｔｓｏｎバーコードラベルの付いた別々のチューブに入れ、液体窒素で瞬間凍結し、－６０℃～－８０℃で保管するまで、ドライアイス上に置いた。バリデートされた方法によって抗ＶＥＧＦ濃度について試料を分析した。
研究の終了：ナトリウムペントバルビタールを用いて動物に麻酔をかけ、２９日目に瀉血した。
房水及び硝子体液の剖検採取：瀉血後、眼を摘出し、両眼から房水及び硝子体液試料を採取した。採取後、試料を急速冷凍して、－６０℃～－８０℃で保管した。バリデートされた方法によって導入遺伝子濃度について房水及び硝子体試料を分析した。
生体内分布研究に向けた眼組織採取：瀉血後、群２の各動物から右眼及び最後の２匹の動物から左眼（生存に依存する）を摘出し、組織を採取した。採取した組織には、網膜色素上皮、網膜、及び強膜を伴う脈絡膜が含まれた。上述のように超清浄処置を使用して組織を採取して、生理食塩水ですすぎ、ブロットドライした。試料を急速冷凍して、－６０℃～－８０℃で保管した。ｑＰＣＲまたはｑＲＴ－ＰＣＲ法を使用してベクターＤＮＡまたはＲＮＡについて試料を分析した。
比較試験：本実施例に記載する手順と類似するカニクイザル試験を行い、対照製剤（対照物質３．５）を各眼のＳＣＳに注入した（マイクロインジェクターによる耳側上方及び鼻側下方注入）。対照製剤は、ＡＡＶクラスター形成を含んでいない。
Figure 2023544799000036
対照製剤もＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含み、１００μＬ／眼／容量（２回の５０μＬ注入）中３×１０１１ｇｃ／眼で投与した。
データ評価及び統計的解析：平均及び標準偏差を使用して統計的データ解析値を計算した。房水内の導入遺伝子産物（タンパク質）を、１５日目及び２９日目に評価し、他の点では、硝子体液内のＴＰ、ＤＮＡ及びＲＮＡを２９日目に評価した。
結果
Figure 2023544799000037
眼の耳側上方及び鼻側下方位置でＳＣＳに注入した被験物質３（クラスター形成製剤）により、対照製剤と比較して、房水における導入遺伝子産物（ＴＰ）が増加した。
Figure 2023544799000038
耳側上方及び鼻側下方位置でＳＣＳに注入した被験物質３により、対照製剤と比較して、ＶＨにおける導入遺伝子産物の濃度が上昇した。硝子体液導入遺伝子産物濃度は、注入から２９日後に房水で見られたＴＰよりも全体的に高かった。
Figure 2023544799000039
ＡＡＶ８－抗ＶＥＧＦ－ａｂを含有する被験物質３または対照製剤をＳＣＳに注入したところ、血清において導入遺伝子産物（抗ＶＥＧＦ）の力価は最小限であった。
Figure 2023544799000040
対照製剤と比較して、被験物質３（クラスター形成製剤）は、網膜及び脈絡膜への送達に影響を及ぼした。
等価物
本発明の特定の実施形態を参照しながら、本発明について詳細に説明しているが、機能的に等価である変形形態が、本発明の範囲内であることを理解されよう。実際に、本明細書に示し、かつ記載したものに加えて本発明の様々な修正が、前述の説明及び添付図面から当業者には明らかであろう。そのような修正は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されている。当業者は、ほんの日常的な実験を使用して、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識するか、または確認することができるであろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって網羅されることが意図される。
本明細書に記述される全ての刊行物、特許及び特許出願は、各個別の刊行物、特許及び特許出願が明確かつ個別にその全体が参照により援用されることが示されているのと同程度に、本明細書に対する参照により本明細書に援用される。

Claims (94)

  1. ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む、前記医薬組成物。
  2. ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に少なくとも約３％の凝集組換えＡＡＶを含む、前記医薬組成物。
  3. ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、前記導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体であり、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に最大でも約２００ｍＭのイオン強度を含む、前記医薬組成物。
  4. ヒト対象の眼の脈絡膜上腔（ＳＣＳ）への投与に適した医薬組成物であって、前記医薬組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、前記導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体であり、かつ、前記医薬組成物は、脈絡膜上投与の前に少なくとも約３％の凝集組換えＡＡＶを含む、前記医薬組成物。
  5. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のクリアランス時間と同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  6. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散が、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の周辺への拡散と比較して小さく、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  7. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さが、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位の厚さと比較した場合に同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  8. 前記導入遺伝子の発現レベルは、前記導入遺伝子の発現レベルが参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される期間と比較して、前記医薬組成物の脈絡膜上投与後、より長い期間、眼で検出され、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  9. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における前記導入遺伝子の濃度は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における前記導入遺伝子の濃度と比較した場合に同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  10. 脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率は、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位における形質導入率と比較した場合に同等またはそれ以上であり、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項１～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  11. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較した場合に同等またはそれより低く、前記参照医薬組成物は、前記導入遺伝子をコードする前記発現カセットを含む前記組換えＡＡＶを含み、前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記医薬組成物または前記参照医薬組成物が脈絡膜上腔に投与されるときに同じ量であり、かつ前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、請求項３～４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  12. 前記組換えＡＡＶは、構築物ＩＩである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  13. 前記導入遺伝子は、抗ヒト血管内皮成長因子（抗ＶＥＧＦ）抗体である、請求項１、２、５～１０及び１２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  14. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６からなる群から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む、請求項１～１３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  15. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  16. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９である、請求項１、２、５～１０、及び１２～１４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  17. 前記医薬組成物は、約または最大でも約５ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、５５ｍＭ、６０ｍＭ、６５ｍＭ、７０ｍＭ、７５ｍＭ、８０ｍＭ、８５ｍＭ、９０ｍＭ、９５ｍＭ、１００ｍＭ、１０５ｍＭ、１１０ｍＭ、１１５ｍＭ、１２０ｍＭ、１２５ｍＭ、１３０ｍＭ、１３５ｍＭ、１４０ｍＭ、１４５ｍＭ、１５０ｍＭ、１５５ｍＭ、１６０ｍＭ、１６５ｍＭ、１７０ｍＭ、１７５ｍＭ、１８０ｍＭ、１８５ｍＭ、１９０ｍＭ、１９５ｍＭ、２００ｍＭのイオン強度を有する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  18. 前記医薬組成物は、少なくとも約または約３％、４％、５％、６％、７％、８％、９％、１０％、１１％、１２％、１３％、１４％、１５％、１６％、１７％、１８％、１９％、２０％、２１％、２２％、２３％、２４％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、または９５％の凝集組換えＡＡＶを含む、請求項１～１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  19. 前記医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  20. 前記医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  21. 前記医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する、請求項１～１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  22. 前記医薬組成物は、約または少なくとも約１０ｎｍ、１５ｎｍ、２０ｎｍ、２５ｎｍ、２６ｎｍ、２７ｎｍ、２８ｎｍ、２９ｎｍ、３０ｎｍ、３１ｎｍ、３２ｎｍ、３３ｎｍ、３４ｎｍ、３５ｎｍ、３６ｎｍ、３７ｎｍ、３８ｎｍ、３９ｎｍ、４０ｎｍ、４５ｎｍ、５０ｎｍ、５５ｎｍ、６０ｎｍ、６５ｎｍ、７０ｎｍ、７５ｎｍ、８０ｎｍ、８５ｎｍ、９０ｎｍ、９５ｎｍ、または約もしくは少なくとも約１００ｎｍの平均組換えＡＡＶ直径を有する、請求項１～２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  23. 前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物における平均組換えＡＡＶ直径よりも、少なくとも２倍大きい、少なくとも３倍大きい、少なくとも４倍大きい、少なくとも５倍大きい、少なくとも６倍大きい、少なくとも７倍大きい、少なくとも８倍大きい、少なくとも９倍大きい、少なくとも１０倍大きい、少なくとも１５倍大きい、少なくとも２０倍大きい、少なくとも５０倍大きい、少なくとも１００倍大きい、少なくとも５％大きい、少なくとも１０％大きい、少なくとも１５％大きい、少なくとも２０％大きい、少なくとも２５％大きい、少なくとも３０％大きい、少なくとも３５％大きい、少なくとも４０％、少なくとも４５％大きい、少なくとも５０％大きい、少なくとも５５％大きい、少なくとも６０％大きい、少なくとも６５％大きい、少なくとも７０％大きい、少なくとも７５％大きい、少なくとも８０％大きい、少なくとも８５％大きい、少なくとも９０％大きい、少なくとも９５％大きい、少なくとも１００％大きい、少なくとも１５０％大きい、または少なくとも２００％大きい、少なくとも２５０％大きい、または少なくとも３００％、少なくとも４００％大きい、または少なくとも５００％大きい平均組換えＡＡＶ直径を有する、請求項５～２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  24. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記周辺への拡散は、少なくとも２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％小さい、請求項６及び１２～２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  25. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％長い、請求項５及び１２～２４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  26. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、約３０分～約２０時間、約２時間～約２０時間、約３０分～約２４時間、約１時間～約２時間、約３０分～約９０日、約３０分～約６０日、約３０分～約３０日、約３０分～約２１日、約３０分～約１４日、約３０分～約７日、約３０分～約３日、約３０分～約２日、約３０分～約１日、約４時間～約９０日、約４時間～約６０日、約４時間～約３０日、約４時間～約２１日、約４時間～約１４日、約４時間～約７日、約４時間～約３日、約４時間～約２日、約４時間～約１日、約４時間～約８時間、約４時間～約１６時間、約４時間～約２０時間、約１日～約９０日、約１日～約６０日、約１日～約３０日、約１日～約２１日、約１日～約１４日、約１日～約７日、約１日～約３日、約２日～約９０日、約３日～約９０日、約３日～約６０日、約３日～約３０日、約３日～約２１日、約３日～約１４日、または約３日～約７日である、請求項１～２５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  27. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より前ではない、請求項１～２６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  28. 前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記クリアランス時間は、最大でも約１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、または１４日である、請求項５～２７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  29. 前記クリアランス時間は、ＳＣＳからまたは眼からのものである、請求項１～２８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  30. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％大きい、請求項７及び１２～２９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  31. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、約５００μｍ～約３．０ｍｍ、７５０μｍ～約２．８ｍｍ、約７５０μｍ～約２．５ｍｍ、約７５０μｍ～約２ｍｍ、または約１ｍｍ～約２ｍｍである、請求項１～３０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  32. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、少なくとも約５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、１０００μｍ、１ｍｍ、１．５ｍｍ、２ｍｍ、２．５ｍｍ、３ｍｍ、３．５ｍｍ、４ｍｍ、４．５ｍｍ、５ｍｍ、５．５ｍｍ、６ｍｍ、６．５ｍｍ、７ｍｍ、７．５ｍｍ、８ｍｍ、８．５ｍｍ、９ｍｍ、９．５ｍｍ、または１０ｍｍである、請求項１～３１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  33. 前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、最大でも約１ｎｍ、５ｎｍ、１０ｎｍ、２５ｎｍ、５０ｎｍ、１００ｎｍ、２００ｎｍ、３００ｎｍ、４００ｎｍ、５００ｎｍ、６００ｎｍ、７００ｎｍ、８００ｎｍ、９００ｎｍ、１μｍ、５μｍ、１０μｍ、１５μｍ、２０μｍ、２５μｍ、３０μｍ、３５μｍ、４０μｍ、５０μｍ、１００μｍ、２００μｍ、３００μｍ、４００μｍ、５００μｍ、６００μｍ、７００μｍ、８００μｍ、９００μｍ、または１０００μｍである、請求項７及び１２～３２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  34. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記注入部位の厚さは、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも７時間、少なくとも８時間、少なくとも１０時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、少なくとも２日間、少なくとも３日間、少なくとも５日間、少なくとも１０日間、少なくとも２１日間、少なくとも１ヶ月間、少なくとも６週間、少なくとも２ヶ月間、少なくとも３ヶ月間、少なくとも４ヶ月間、少なくとも５ヶ月間、少なくとも６ヶ月間、少なくとも９ヶ月間、少なくとも１年間、少なくとも３年間、または少なくとも５年間持続する、請求項１～３３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  35. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の眼における前記導入遺伝子の濃度は、少なくとも２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％高い、請求項９及び１２～３４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  36. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記より長い期間は、少なくとも３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日より長い、請求項８及び１２～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  37. 前記導入遺伝子は、少なくとも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日間、前記医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される、請求項１～３６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  38. 前記導入遺伝子は、最大でも約３０分、１時間、２時間、３時間、４時間、５時間、６時間、７時間、８時間、９時間、１０時間、１２時間、１４時間、１６時間、１８時間、２０時間、２２時間、１日、２日、３日、４日、５日、６日、７日、８日、９日、１０日、１１日、１２日、１３日、１４日、１５日、１６日、１７日、１８日、１９日、２０日、２１日、２３日、２５日、２７日、３０日、３５日、４０日、５０日、５５日、６０日、６５日、７０日、７５日、８０日、８５日、９０日、９５日、１００日、１２０日、１４０日、１６０日、１８０日、２００日、２２０日、２４０日、２６０日、２８０日、３００日、３２０日、３４０日、３６０日、３８０日、または４００日間、前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後に眼で検出される、請求項５～３７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  39. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、前記参照医薬組成物の脈絡膜上投与後のＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルと比較した場合に同等またはそれより低い、請求項１３に記載の医薬組成物。
  40. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の前記ＶＥＧＦ誘発性の血管拡張及び／または血管漏出のレベルは、少なくとも約２分の１、少なくとも３分の１、少なくとも４分の１、少なくとも５分の１、少なくとも６分の１、少なくとも７分の１、少なくとも８分の１、少なくとも９分の１、少なくとも１０分の１、少なくとも１５分の１、少なくとも２０分の１、少なくとも５０分の１、少なくとも１００分の１であるか、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％低い、請求項１１及び１３～３９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  41. 前記医薬組成物の脈絡膜上投与後の注入部位における前記形質導入率は、少なくとも約２倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍、少なくとも６倍、少なくとも７倍、少なくとも８倍、少なくとも９倍、少なくとも１０倍、少なくとも１５倍、少なくとも２０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも１００％、少なくとも１５０％、または少なくとも２００％、少なくとも２５０％、または少なくとも３００％、少なくとも４００％、または少なくとも５００％高い、請求項１０及び１２～４０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  42. 前記医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの安定性は、前記参照医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの安定性の少なくとも約５０％である、請求項１～４１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  43. 前記組換えＡＡＶの安定性は、前記組換えＡＡＶの感染力によって特定される、請求項４２に記載の医薬組成物。
  44. 前記組換えＡＡＶの安定性は、前記組換えＡＡＶによって放出される遊離ＤＮＡのレベルによって特定される、請求項４２に記載の医薬組成物。
  45. 前記医薬組成物は、前記参照医薬組成物中の遊離ＤＮＡのレベルと比較して、少なくとも約５０％多い、約２５％多い、約１５％多い、約１０％多い、約５％多い、約４％多い、約３％多い、約２％多い、約１％多い、約０％多い、約１％少ない、約２％少ない、約５％少ない、約７％少ない、約１０％少ない、約２倍多い、約３倍多い、約２分の１、約３分の１の遊離ＤＮＡを含む、請求項４４に記載の医薬組成物。
  46. 前記医薬組成物中の前記組換えＡＡＶは、前記参照医薬組成物中の前記組換えＡＡＶの感染力と比較して、約５０％低い、およそ同じ、または少なくとも約２％、５％、７％、１０％、１２％、１５％、１７％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、１００％、２倍、３倍、５倍、１０倍、１００倍、または１０００倍高い感染力を有する、請求項４３に記載の医薬組成物。
  47. 前記導入遺伝子は、目的の疾患の治療、または目的の疾患の進行の緩和、予防、もしくは遅延に適切な導入遺伝子である、請求項１～４６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  48. 前記ヒト対象は、ｎＡＭＤ（ウェット型ＡＭＤ）、ドライ型ＡＭＤ、網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）、または糖尿病性網膜症（ＤＲ）、バッテン病、緑内障、または非感染性ブドウ膜炎であると診断されている、請求項１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  49. 前記ヒト対象は、ムコ多糖症ＩＶＡ型（ＭＰＳ ＩＶＡ）、ムコ多糖症Ｉ型（ＭＰＳ Ｉ）、ムコ多糖症ＩＩ型（ＭＰＳ ＩＩ）、家族性高コレステロール血症（ＦＨ）、ホモ接合性家族性高コレステロール血症（ＨｏＦＨ）、冠状動脈疾患、脳血管性疾患、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、肢帯型筋ジストロフィー、ベッカー型筋ジストロフィー及び散発性封入体筋炎、またはカリクレイン関連疾患であると診断されている、請求項１～４７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  50. 前記ＡＡＶは、パルミトイルタンパク質チオエステラーゼ１（ＰＰＴ１）、トリペプチジルペプチダーゼ１（ＴＰＰ１）、抗ＶＥＧＦ融合タンパク質、抗ＴＮＦ融合タンパク質、抗ＶＥＧＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗カリクレイン抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗ＴＮＦ抗体もしくはその抗原結合フラグメント、抗Ｃ３抗体もしくはその抗原結合フラグメント、または抗Ｃ５抗体もしくはその抗原結合フラグメントをコードする、請求項１～２、５～１０、及び１２～４９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  51. 前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、ベクターゲノム濃度に基づく、請求項５～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  52. 前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、１回の投与当たりのゲノムコピーに基づく、請求項５～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  53. 前記組換えＡＡＶゲノムコピーの量は、前記ヒト対象に投与される総ゲノムコピーに基づく、請求項５～５０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  54. 前記１回の投与当たりのゲノムコピーは、脈絡膜上投与１回当たりの前記組換えＡＡＶのゲノムコピーである、請求項５２に記載の医薬組成物。
  55. 前記投与される総ゲノムコピーは、脈絡膜上投与される前記組換えＡＡＶの総ゲノムコピーである、請求項５３に記載の医薬組成物。
  56. 前記ベクターゲノム濃度（ＶＧＣ）は、約３×１０９ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．２×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約１．６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約４×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１０ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．４×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約６．２×１０１１ＧＣ／ｍＬ、約１×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約２．５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約３×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約５×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約６×１０１２ＧＣ／ｍＬ、約１．５×１０１３ＧＣ／ｍＬ、約２×１０１３ＧＣ／ｍＬ、または約３×１０１３ＧＣ／ｍＬである、請求項５１に記載の医薬組成物。
  57. 前記投与されるゲノムコピーの総数は、約６．０×１０１０ゲノムコピー、約１．６×１０１１ゲノムコピー、約２．５×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１１ゲノムコピー、約５．０×１０１１ゲノムコピー、約６×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１２ゲノムコピー、約１．０×１０１２ゲノムコピー、約１．５×１０１２ゲノムコピー、約２．５×１０１２ゲノムコピー、または約３．０×１０１３ゲノムコピーである、請求項５３及び５５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  58. 前記１回の投与当たりのゲノムコピーの総数は、約６．０×１０１０ゲノムコピー、約１．６×１０１１ゲノムコピー、約２．５×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１１ゲノムコピー、約５．０×１０１１ゲノムコピー、約６×１０１１ゲノムコピー、約３×１０１２ゲノムコピー、約１．０×１０１２ゲノムコピー、約１．５×１０１２ゲノムコピー、約２．５×１０１２ゲノムコピー、または約３．０×１０１３ゲノムコピーである、請求項５２及び５４のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  59. 前記医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回投与される、請求項１～５８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  60. 前記参照医薬組成物は、１回、２回、３回、４回、５回、６回、７回、８回、９回、１０回、１５回、２０回、２５回、または３０回投与される、請求項５～５９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  61. 前記医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回投与される、請求項１～６０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  62. 前記参照医薬組成物は、１日に１回、１日に２回、１日に３回、１日に４回、１日に５回、１日に６回、または１日に７回投与される、請求項５～６０のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  63. 前記参照医薬組成物は、ＤＰＢＳ及びショ糖を含む、請求項１～６２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  64. 医薬組成物を調製する方法であって、
    （ｉ）リン酸緩衝生理食塩水、ショ糖、及び導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を調製することと、
    （ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を前記組成物に混合することと、を含み、
    前記医薬組成物は、前記組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、前記方法。
  65. 医薬組成物を調製する方法であって、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液を組成物に混合することを含み、前記組成物は、導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含み、かつ前記医薬組成物は、前記組成物よりも、より低いイオン強度及び／またはより高いレベルの凝集組換えＡＡＶを有する、前記方法。
  66. （ｉ）導入遺伝子をコードする発現カセットを含む組換えアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物と、
    （ｉｉ）リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む溶液と、を含む、キット。
  67. 前記キットは、前記組成物と前記溶液とを混合することに関する指示書をさらに含む、請求項６６に記載のキット。
  68. 前記組成物は、リン酸緩衝生理食塩水及びショ糖を含む、請求項６５に記載の方法または請求項６６に記載のキット。
  69. 前記組成物は、４％ショ糖を含む、請求項６４及び６８のいずれか１項に記載の方法または請求項６６及び６８のいずれか１項に記載のキット。
  70. 前記溶液は、１０％ショ糖を含む、請求項６４、６５、６８及び６９のいずれか１項に記載の方法または請求項６６～６９のいずれか１項に記載のキット。
  71. 前記医薬組成物は、約または最大でも約１３５ｍＭのイオン強度を有する、請求項６４、６５、及び６８～７０のいずれか１項に記載の方法または請求項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  72. 前記医薬組成物は、約または最大でも約４０ｍＭのイオン強度を有する、請求項６４、６５、及び６８～７１のいずれか１項に記載の方法または請求項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  73. 前記医薬組成物は、約または最大でも約２０ｍＭのイオン強度を有する、請求項６４、６５、及び６８～７２のいずれか１項に記載の方法または請求項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  74. 前記医薬組成物は、前記組成物と実質的に同じ等張性または重量オスモル濃度を有する、請求項６４、６５、及び６８～７３のいずれか１項に記載の方法または請求項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  75. 前記医薬組成物中の前記凝集組換えＡＡＶの少なくとも一部は、前記医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与された後に脱凝集する、請求項６４、６５、及び６８～７４のいずれか１項に記載の方法または請求項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  76. 前記組換えＡＡＶの凝集体は、前記医薬組成物の脈絡膜上投与を受けて、非凝集ＡＡＶまたは単量体に逆転する、請求項６４、６５、及び６８～７５のいずれか１項に記載の方法または請求項１～６３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  77. 前記組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項６４、６５、及び６８～７６のいずれか１項に記載の方法または請求項６６～６９のいずれか１項に記載のキット。
  78. 前記組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項６４、６５、及び６８～７７のいずれか１項に記載の方法または請求項６６～６９及び７７のいずれか１項に記載のキット。
  79. 前記組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び界面活性剤を含む、請求項６４、６５、及び６８～７８のいずれか１項に記載の方法または請求項６６～６９及び７７～７８のいずれか１項に記載のキット。
  80. 前記溶液は、リン酸緩衝塩化ナトリウム及びショ糖を含む、請求項６４、６５、及び６８～７９のいずれか１項に記載の方法または請求項６６～６９及び７７～７９のいずれか１項に記載のキット。
  81. 前記指示書は、前記溶液と前記組成物とを混合して医薬組成物を得ることに関する指示を含む、請求項６７に記載のキット。
  82. 前記溶液と前記組成物との前記混合により、約または少なくとも約２倍、３倍、４倍、５倍、６倍、７倍、８倍、９倍、または１０倍に前記組成物を希釈する、請求項６４、６５、及び６８～８０のいずれか１項に記載の方法または請求項８１に記載のキット。
  83. 前記溶液と前記組成物とを前記混合することは、前記医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与されるのと同じ日に行われる、請求項６４、６５、６８～８０及び８２のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８２のいずれか１項に記載のキット。
  84. 前記溶液と前記組成物とを前記混合することは、前記医薬組成物がヒト対象の眼の脈絡膜上腔に投与される２４時間以内に行われる、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８３のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８３のいずれか１項に記載のキット。
  85. 前記医薬組成物は、ヒト対象への投与前に保管される、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８４のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８４のいずれか１項に記載のキットまたは請求項１～６３及び７１～７６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  86. 前記医薬組成物は、ほぼ室温、２０℃、４℃、または－８０℃で保管される、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８５のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８５のいずれか１項に記載のキットまたは請求項１～６３、７１～７６及び８５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  87. 前記医薬組成物は、前記組換えＡＡＶの約１．０×１０１２～約３．０×１０１２ゲノムコピーを含む、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８６のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８６のいずれか１項に記載のキットまたは請求項１～６３、７１～７６、及び８５～８６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  88. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ１、ＡＡＶ２、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３、ＡＡＶ４、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ９、ＡＡＶ１０、ＡＡＶ１１、ＡＡＶｒｈ１０、ＡＡＶ．ｒｈ２０、ＡＡＶ．ｒｈ３９、ＡＡＶ．Ｒｈ７４、ＡＡＶ．ＲＨＭ４－１、ＡＡＶ．ｈｕ３７、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０、ＡＡＶ．Ａｎｃ８０Ｌ６５、ｒＡＡＶ．７ｍ８、ＡＡＶ．ＰＨＰ．Ｂ、ＡＡＶ．ＰＨＰ．ｅＢ、ＡＡＶ２．５、ＡＡＶ２ｔＹＦ、ＡＡＶ３Ｂ、ＡＡＶ．ＬＫ０３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１、ＡＡＶ．ＨＳＣ２、ＡＡＶ．ＨＳＣ３、ＡＡＶ．ＨＳＣ４、ＡＡＶ．ＨＳＣ５、ＡＡＶ．ＨＳＣ６、ＡＡＶ．ＨＳＣ７、ＡＡＶ．ＨＳＣ８、ＡＡＶ．ＨＳＣ９、ＡＡＶ．ＨＳＣ１０、ＡＡＶ．ＨＳＣ１１、ＡＡＶ．ＨＳＣ１２、ＡＡＶ．ＨＳＣ１３、ＡＡＶ．ＨＳＣ１４、ＡＡＶ．ＨＳＣ１５、及びＡＡＶ．ＨＳＣ１６から選択される１つ以上のアデノ随伴ウイルス血清型由来の成分を含む、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８７のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８７のいずれか１項に記載のキット。
  89. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ８由来の成分を含み、かつ前記医薬組成物は、約３０ｍＭ～約６０ｍＭのイオン強度を有する、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８８のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８８のいずれか１項に記載のキットまたは請求項１～６３、７１～７６、及び８５～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  90. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ９由来の成分を含み、かつ前記医薬組成物は、約１５ｍＭ～約３０ｍＭのイオン強度を有する、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８８のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８８のいずれか１項に記載のキットまたは請求項１～６３、７１～７６、及び８５～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  91. 前記組換えＡＡＶは、ＡＡＶ２由来の成分を含み、かつ前記医薬組成物は、約１００ｍＭ～約２００ｍＭのイオン強度を有する、請求項６４、６５、６８～８０、及び８２～８８のいずれか１項に記載の方法または請求項８１～８８のいずれか１項に記載のキットまたは請求項１～６３、７１～７６、及び８５～８７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  92. 前記医薬組成物は、改質ダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項１～６３、７１～７６、及び８５～９１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  93. 前記医薬組成物は、塩化カリウム、一塩基性リン酸カリウム、塩化ナトリウム、無水二塩基性リン酸ナトリウム、ショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項１～６３、７１～７６、及び８５～９２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  94. 前記医薬組成物は、０．２ｍｇ／ｍＬの塩化カリウム、０．２ｍｇ／ｍＬの一塩基性リン酸カリウム、５．８４ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、１．１５ｍｇ／ｍＬの無水二塩基性リン酸ナトリウム、４０．０ｍｇ／ｍＬ（４％ｗ／ｖ）のショ糖、及び任意選択で界面活性剤を含む、請求項１～６３、７１～７６、及び８５～９３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
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