JP2023519954A - 眼表面障害の処置のための臍帯生成物の使用方法 - Google Patents

Abstract

本明細書には、眼表面の疾患、障害、または創傷を処置する方法であって、下円蓋、上円蓋、および／または角膜などの、対象の眼の組織または周囲組織へ、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を適用する工程を含む方法が開示される。さらに、本明細書には、眼表面の疾患、障害、または創傷の処置のためのキットであって、臍帯シートおよび／または制御放出製剤と、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を対象の眼に送達および適用するためのデバイスとを含むキットが開示される。【選択図】２Ａ

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月３日に出願された米国仮特許出願第６３／００４，９８７号の利益を主張するものであり、その全体は、参照によって本明細書に引用される。

重鎖ヒアルロナン／ペントラキシン３（ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）複合体は、羊膜および臍帯などの胎児支持組織中で見られるものであり、抗炎症性、抗瘢痕化、および創傷治癒の特性を有する。

本明細書には、眼表面の疾患、障害、および／または創傷を処置する方法であって、眼表面の疾患、障害、および／または創傷を患う対象の眼の下円蓋、上円蓋、またはその両方へと、臍帯シートを配する工程を含む方法が開示される。いくつかの実施形態では、この方法は、臍帯シートを眼表面の疾患、障害、および／または創傷を患う対象の眼の下円蓋のみへと配することを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、臍帯シートを配する前に下円蓋、上円蓋またはその両方を露出させるために、対象の上眼瞼、下眼瞼またはその両方を開くこと（ｒｅｔｒａｃｔｉｎｇ）を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、閉じた眼にパッチを当てるか、またはテーピングを行うことを含む。いくつかの実施形態では、この方法は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物（ｆｅｔａｌ ｓｕｐｐｏｒｔ ｔｉｓｓｕｅ ｐｒｏｄｕｃｔ）を、眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を、眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、眼の下円蓋、上円蓋、もしくはその両方、眼の上円蓋、角膜表面、および／または眼の周囲組織に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、臍帯シートを配する前に投与される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、臍帯羊膜およびワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、冷凍した臍帯、または事前に冷凍された臍帯から得たものである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、代謝活性を備えた細胞を含まないか、または代謝活性を備えた細胞を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、すべて、実質的にすべて、または大半が死滅した細胞を含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、赤血球を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、凍結保存されるか、最終的に滅菌されるか、またはその両方である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは実質的に平坦状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは半円形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは円形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは矩形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、静脈または動脈を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは水和される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、対象の視神経再生を促進する。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、創傷治癒を促進する、またはそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、眼の疾患または障害は、ドライアイ疾患、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、不応性点状角膜炎、アレルギー性結膜炎、翼状片、感染症、および炎症性疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、創傷は手術創である。いくつかの実施形態では、創傷は光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、ＬＡＳＩＫ、角膜のコラーゲンクロスリンキング（ＣＸＬ）、角膜移植、白内障手術、網膜手術、および／または緑内障ドレナージデバイスもしくは濾過胞再建から生じたものである。いくつかの実施形態では、創傷は、損傷、熱傷、裂創、切開または剥離から生じたものである。

本明細書中のいくつかの実施形態では、処置を必要とする対象の眼表面の疾患、障害、または創傷を処置するためのキットであって、ａ）臍帯シートと、ｂ）対象の眼の角膜表面上に、下円蓋、上円蓋中に、または周囲組織上に臍帯シートを配するためのデバイスとを含み、デバイスは、ｉ）臍帯シートを溶液中に含有するように構成された貯蔵ユニット、およびｉｉ）貯蔵ユニットと動作可能に繋がったチャネルを含み、チャネルは、臍帯シートが貯蔵ユニットからチャネルを通過してチャネルの開口部を通過するように構成されており、この開口部は、眼の角膜表面、下円蓋、上円蓋、または周囲組織上に臍帯シートを送達するように構成されている、キットが開示される。いくつかの実施形態では、このデバイスは、チャネルと動作可能に繋がった適用部材をさらに含んでおり、この適用部材は、臍帯シートを押し進めて開口部を通過させるように構成されている。いくつかの実施形態では、前述のチャネルは、１または複数の孔を含む多孔性障壁を含んでおり、この１または複数の孔のうち少なくとも１つの孔は、臍帯シートがこの孔を通過するのを妨げるようなサイズとされる。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、代謝活性を備えた細胞を含まない、または代謝活性を備えた細胞を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、実質的に平坦状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、半円形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、円形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、矩形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、臍帯羊膜およびワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、冷凍された臍帯または事前に冷凍した臍帯から得たものである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、実質的にすべてが死滅している細胞を含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは水和される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、対象の視神経再生を促進する。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、外生の生細胞と接触すると、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、および／または創傷治癒を促進する。いくつかの実施形態では、前述のキットは、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前述のキットは、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物をさらに含む。

本明細書中のいくつかの実施形態では、処置を必要とする対象の眼表面の疾患、障害、または創傷を処置する方法であって、対象の眼の下円蓋、上円蓋、または角膜表面に、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３と、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出用の賦形剤とを含む組成物を投与する工程を含む方法が開示される。いくつかの実施形態では、制御放出用の賦形剤は、生分解性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、制御放出用の賦形剤は、コラーゲン、セルロース、キトサン、ＰＥＧ、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（乳）酸、ポリ（乳－ｃｏ－グリコール）酸、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、前述の組成物は、下円蓋、上円蓋、または角膜表面に適合する。いくつかの実施形態では、組成物は、固体または半固体である。いくつかの実施形態では、組成物は開口部を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、半円形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、円形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、矩形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、組成物は、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。いくつかの実施形態では、前述の方法は、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、前述の方法は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織は、眼の下円蓋、上円蓋、もしくは眼の角膜表面、および／または眼の周囲組織に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、前述の組成物より前に投与される。

本明細書中のいくつかの実施形態では、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体と制御放出用の賦形剤とを含む組成物であって、ヒトの眼の角膜表面に適合するか、下円蓋または上円蓋に一致する組成物が開示される。いくつかの実施形態では、この組成物は、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、創傷治癒を促進する、またはそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、制御放出用の賦形剤は、生分解性ポリマーを含む。いくつかの実施形態では、制御放出用の賦形剤は、コラーゲン、セルロース、キトサン、ＰＥＧ、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（乳）酸、ポリ（乳－ｃｏ－グリコール）酸、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、前述の組成物は透明または半透明である。いくつかの実施形態では、組成物は、固体または半固体である。いくつかの実施形態では、組成物は、平坦状または実質的に平坦状である。いくつかの実施形態では、組成物は開口部を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、半円形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、円形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、矩形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、組成物は、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

本明細書中のいくつかの実施形態では、処置を必要とする対象の眼表面の疾患、障害、または創傷を処置するためのキットであって、ａ）単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３およびＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出用の賦形剤を含む組成物と、ｂ）対象の眼の角膜表面上に、下円蓋、上円蓋中に、または周囲組織上に組成物を配するためのデバイスとを含み、デバイスは、ｉ）組成物を溶液中に含有するように構成された貯蔵ユニット、およびｉｉ）貯蔵ユニットと動作可能に繋がったチャネルを含み、チャネルは、組成物が貯蔵ユニットからチャネルを通過してチャネルの開口部を通過するように構成され、眼の角膜表面、下円蓋、上円蓋、または周囲組織上に組成物を送達するように構成されている、キットが開示される。いくつかの実施形態では、このデバイスは、チャネルに動作可能に繋がった適用部材をさらに含んでおり、この適用部材は、眼の組織および／または周囲組織上に配されるように臍帯シートを推し進めて開口部を通過させるように構成される。いくつかの実施形態では、前述のチャネルは、１または複数の孔を含む多孔性障壁を含んでおり、この１または複数の孔のうち少なくとも１つの孔は、臍帯シートがこの孔を通過するのを妨げるようなサイズとされる。いくつかの実施形態では、組成物は、固体または半固体である。いくつかの実施形態では、組成物は、半円形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、円形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、矩形状である。いくつかの実施形態では、組成物は、対象の視神経再生を促進する。いくつかの実施形態では、前述のキットは、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、点眼剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、またはそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤をさらに含む。いくつかの実施形態では、前述のキットは、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、またはそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物をさらに含む。

本明細書には、眼表面の疾患、障害、および／または創傷を処置する方法であって眼表面の疾患、障害、および／または創傷を患う対象の眼の下円蓋、上円蓋、またはその両方に、約０．７５～２．５ｃｍ×約０．０５～０．７５ｃｍの臍帯シートを配する工程を含む方法が、開示される。いくつかの実施形態では、この方法は、臍帯シートを配する前に下円蓋を露出させるために対象の上眼瞼、下眼瞼、またはその両方を開く工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、閉じた眼にパッチを当てるかテーピングを行う工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、眼の下円蓋、眼の角膜表面、および／または眼の周囲組織に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、臍帯シートを配する前に投与される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、臍帯羊膜およびワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、冷凍した臍帯または事前に冷凍した臍帯から得たものである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、代謝活性を備えた細胞を含まない、または代謝活性を備えた細胞を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、すべて、実質的にすべて、または大半が死滅している細胞を含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、生細胞を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、赤血球を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、静脈または動脈を実質的に含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、凍結保存されるか、最終的に滅菌されるか、またはその両方である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、実質的に平坦状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、半円形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、円形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、矩形状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは水和される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、対象の視神経再生を促進する。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、創傷治癒を促進する、またはそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、眼の疾患または障害は、ドライアイ疾患、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、不応性点状角膜炎、アレルギー性結膜炎、翼状片、感染症、および炎症性疾患からなる群から選択される。いくつかの実施形態では、創傷は手術創である。いくつかの実施形態では、創傷は、光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、ＬＡＳＩＫ、角膜のコラーゲンクロスリンキング（ＣＸＬ）、角膜移植、白内障手術、網膜手術、または緑内障ドレナージデバイスもしくは濾過胞再建から生じたものである。いくつかの実施形態では、創傷は、損傷、熱傷、裂創、切開、または剥離から生じたものである。

本明細書には、眼表面の疾患、障害、および／または創傷を処置する方法であって、眼表面の疾患、障害、および／または創傷を患う対象の眼の下円蓋のみに臍帯シートを配する工程を含む方法が、開示される。いくつかの実施形態では、この方法は、臍帯シートを配する前に下円蓋を露出させるために対象の上眼瞼、下眼瞼、またはその両方を開く工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、閉じた眼にパッチを当てるかテーピングを行う工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

本明細書には、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、または不応性点状角膜炎を伴うＯＳＤを処置する方法であって、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、または不応性点状角膜炎を伴うＯＳＤを患う対象の眼の下円蓋または上円蓋に臍帯シートを配する工程を含む方法が、開示される。いくつかの実施形態では、この方法は、臍帯シートを配する前に下円蓋または上円蓋を露出させるために対象の上眼瞼、下眼瞼、またはその両方を開く工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、閉じた眼にパッチを当てるかテーピングを行う工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程を含む。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、眼の下円蓋もしくは上円蓋、眼の角膜表面、および／または眼の周囲組織に投与される。いくつかの実施形態では、治療剤または胎児支持組織生成物は、臍帯シートを配する前に投与される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

参照による引用
本明細書で言及される刊行物、特許、および特許出願はすべて、あたかも個々の刊行物、特許、または特許出願がそれぞれ参照により引用されるように具体的かつ個々に指示されるのと同じ程度にまで、参照により本明細書に引用される。参照により組み込まれる刊行物および特許または特許出願が、本明細書に含まれる開示に矛盾する程度にまで、本明細書は、そのような矛盾のある題材に取って代わる、および／または、それに先行するように意図される。

発明の新規の特徴は、添付の特許請求の範囲において具体的に示されている。本発明の特徴と利点をより良く理解するには、本発明の原理が用いられる例示的実施形態を説明する以下の詳細な説明と添付図面とを参照されたい。

対象の眼の下円蓋（ｉｎｔｅｒｉｏｒ ｆｏｒｎｉｘ）、角膜表面、または周囲組織に、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を送達して配するためのデバイスの非限定的な例を表す図である。 多孔性障壁を下ってチャネルを通過する、臍帯シートおよび／または制御放出製剤の非限定的な例を表す図である。 チャネル開口部を通過して、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を送達することを補助するように構成された適用部材の非限定的な例を表す図である。 臍帯シートの調製手順の一部として、フレーム台紙の上で平坦状にされた臍帯組織の測定の非限定的な例を表す図である。 長手方向に切断された臍帯組織の非限定的な例を表す図である。 長手方向に切断した後に、さらに短く切断した後の臍帯組織の非限定的な例を表す図である。 対象の眼の下円蓋に配される臍帯シートの非限定的な例を表す図である。 配置当日に、蛍光を用いて表示された、下円蓋へ配された臍帯シートの非限定的な例を表す図である。 配置翌日に、蛍光を用いて表示された、下円蓋に位置付けた臍帯シートの非限定的な例を表す図である。 配置２日後に、蛍光を用いて表示された、下円蓋に位置付けた臍帯シートの非限定的な例を表す図である。 臍帯シートを貯蔵し、かつ臍帯シートを眼の下円蓋へ配するためのパッケージ・デザインを表す図である。 臍帯シートを貯蔵し、かつ臍帯シートを眼の下円蓋へ配するための代替パッケージ・デザインを表す図である。 図７のパッケージを用いて、眼の下円蓋へ臍帯シートを配する方法を表す図である。 臍帯シートを貯蔵し、かつ臍帯シートを眼の下円蓋へ配するための、さらに別の代替パッケージ・デザインを表す図である。 軽度／中等度または重度の適応症により、ＵＣ細片を使用した患者から得た統計データを表す図である。 軽度／中等度または重度の適応症により、ＵＣ細片を使用した患者から得た統計データを表す図である。 軽度／中等度または重度の適応症により、ＵＣ細片を使用した患者から得た統計データを表す図である。 軽度／中等度または重度の適応症により、ＵＣ細片を使用した患者から得た統計データを表す図である。 軽度／中等度または重度の適応症により、ＵＣ細片を使用した患者から得た統計データを表す図である。忍容性、挿入の容易さ、生成物の保持、臨床的利益、患者満足度、および医師満足度を統計した。

重鎖ヒアルロナン／ペントラキシン３（ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）複合体は、羊膜および臍帯などの胎児支持組織中で見られるものであり、抗炎症性、抗瘢痕化、および創傷治癒の特性を有する。本明細書には、眼の疾患、障害、または創傷を患う対象において、創傷治癒を促進するか、炎症を軽減するか、瘢痕化を軽減するか、疼痛を軽減するか、またはそれらの組合せを行うために、眼の涙膜へのＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出のための、方法とシステムが提供される。いくつかの実施形態では、この方法および制御放出システムは、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配されることで、対象の涙膜にＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出を提供する臍帯の実質的に平坦状にされたシート、細片、または片を含む。いくつかの実施形態では、この方法および制御放出システムは、対象の眼の下円蓋のみへ配されることで対象の涙膜にＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出を提供する臍帯の実質的に平坦状にされたシート、細片、または片を含む。

いくつかの実施形態では、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体および賦形剤を含む制御放出製剤を介して放出され、この製剤は眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配される。いくつかの実施形態では、賦形剤は、眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上におけるＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出を可能にする。本明細書で使用するとき、制御放出は、対象の眼の下円蓋へ、上円蓋へ、涙点上へ、角膜表面上へ、または周囲組織上へのＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の徐放を表す。徐放は、ある期間にわたってＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の一定の放出速度、または変動する放出速度とすることができる。本明細書で使用するとき、適用されるおよび配置されるという用語は交換可能である。

臍帯シートの調製
いくつかの実施形態では、臍帯シートを調製するために、臍帯組織があらゆる適切なドナーソース（例えば、病院または組織バンク）から採取される。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、またはブタなどのあらゆる哺乳動物から得られる。

処理はすべて、不純物が臍帯シートに確実に取り込まれないようＧｏｏｄ Ｔｉｓｓｕｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（ＧＴＰ）に従い行われる。いくつかの実施形態では、採取した臍帯は、ＦＤＡ認可のスクリーニング試験を使用して、ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＨＴＬＶ－１、Ｂ型肝炎とＣ型肝炎、西ナイルウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト伝達性海綿状脳症（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病）、および／またはトレポネーマ淡蒼球の試験が行われる。ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＨＴＬＶ－１、Ｂ型肝炎とＣ型肝炎、西ナイルウイルス、またはサイトメガロウイルスで組織が汚染されるというあらゆる適応症は、組織標本の即時隔離とその後の破壊をもたらす可能性がある。

いくつかの実施形態では、ドナーの医療記録は、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、またはＨＩＶ感染症の危険因子およびそれらの臨床証拠について調べられる。ＨＩＶ－１、ＨＩＶ－２、ＨＴＬＶ－１、Ｂ型肝炎とＣ型肝炎、西ナイルウイルス、サイトメガロウイルス、ヒト伝達性海綿状脳症（例えば、クロイツフェルト・ヤコブ病）、ならびに／またはトレポネーマ淡蒼球による感染症の危険因子、ならびに／あるいはそれらの臨床証拠をドナーが有しているというあらゆる適応症は、組織標本の即時隔離とその後の破壊をもたらす可能性がある。

いくつかの実施形態では、臍帯は冷凍される。いくつかの実施形態では、臍帯は冷凍されない。臍帯は、冷凍されない場合は下記のように処理することができる。

いくつかの実施形態では、実質的にすべての血液が、臍帯から取り除かれる。いくつかの実施形態では、実質的にすべての血液が、臍帯の冷凍前に臍帯から取り除かれる。いくつかの実施形態では、実質的にすべての血液が、臍帯の動脈および静脈から取り除かれる。いくつかの実施形態では、血液はＵＣから取り除かれない。いくつかの実施形態では、血液は、臍帯の冷凍前に臍帯から取り除かれない。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、過剰量の血液および組織を取り除くために緩衝液とともに撹拌しながら洗浄される。いくつかの実施形態では、撹拌での洗浄により、洗浄回数が減る。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、実質的にすべての赤血球を取り除くために緩衝液と接触される。いくつかの実施形態では、臍帯組織は凍結乾燥され、凍結保存され、粉砕され、および／または最終的に滅菌される。

いくつかの実施形態では、臍帯は、高張性の緩衝液または組織培養培地で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、低張性の緩衝液または組織培養培地で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、等張性の緩衝液または組織培養培地で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、生理食塩水で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ＰＢＳで洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ＰＢＳ １Ｘで洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ＴＲＩＳ－緩衝生理食塩水で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ＨＥＰＥＳ－緩衝生理食塩水で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、リンゲル液で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ハルトマン液溶液で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ＥＢＳＳで洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ＨＢＳＳで洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、タイロード塩類溶液で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ゲイ平衡塩類溶液で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、イーグル最小必須培地（Ｅａｇｌｅ’ｓ ｍｉｎｉｍａｌ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｍｅｄｉｕｍ）（ＤＭＥＭ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、イーグル最小必須栽培（ＥＭＥＭ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、グラスゴー最少必須培地（ＧＭＥＭ）で洗浄される。いくつかの実施形態では、臍帯は、ロズウェルパーク記念研究所（ＲＰＭＩ）１６４０培地で洗浄される。

いくつかの実施形態では、臍帯の切片は、（例えば、メスまたはハサミを使用して）長手方向に切断される。いくつかの実施形態では、臍帯の切片は、半分に切断されない。いくつかの実施形態では、臍帯の切片は、半分に切断される。

いくつかの実施形態では、切断した臍帯組織は、過剰量の血液および組織をさらに取り除くために任意選択で再び緩衝液で洗浄される。

いくつかの実施形態では、臍帯は、あらゆる適切な方法を使用して基体（例えば、発泡スチロールボード）の上に固定される（例えば、針またはピン（例えば、Ｔピン）で固定される）。いくつかの実施形態では、臍帯は、基体（例えば、吸収性タオル地、ドレープ）により安定させられる。いくつかの実施形態では、臍帯は、その内面（例えば、ワルトンゼリーを含む面）が上向きとなり、外面（すなわち、ＵＣＡＭを含む面）が基体に面するように配向される。任意選択で、いくつかの実施形態では、臍帯の一端は自由状態である（ｌｅｆｔ ｆｒｅｅ）。臍帯の一端が自由状態である場合、いくつかの実施形態では、臍帯の自由端は、（例えば、クランプ、止血鉗子、または一組の鉗子（例えば、幅広い鋸状の先端鉗子）を用いて）保持され、一方でワルトンゼリーの一部またはすべてが取り除かれる。代替的に、いくつかの実施形態では、臍帯の両端が自由状態である。

臍帯が基体に対して平らでない場合、いくつかの実施形態では、さらなる切断がワルトンゼリーに行われる。

いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーの一部またはすべてが、ＵＣＡＭから取り除かれる。シートの所望の厚みにより、どれだけのワルトンゼリーが取り除かれるかが決定される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーは、（例えば、一組の鉗子、止血鉗子を使用して）層中にある臍帯から剥離される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーは、切片中にある臍帯から切り取られる（例えば、削り取られる）。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くためにロータブレーダ（ｒｏｔｏｂｌａｔｏｒ）（すなわち、ダイヤモンドコーティングを施したバーを具備するドリルに取り付けられるカテーテル）が利用される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くために、脂肪吸引マシンが利用される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くために、高圧下液体が適用される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くために、ブラシ（例えば、高速回転する機械化ブラシ）が利用される。

臍帯は２つの動脈（臍動脈）と１つの静脈（臍静脈）を含む。いくつかの実施形態では、静脈と動脈は、臍帯から取り除かれる。いくつかの実施形態では、静脈と動脈は、後述の方法のいずれかによるワルトンゼリーの一部またはすべての除去と同時に取り除かれる。いくつかの実施形態では、静脈と動脈は、（例えば、一組の鉗子を使用して）臍帯から剥離される（または引っ張られる）。いくつかの実施形態では、静脈と動脈は、切片中にある臍帯から切り取られる（例えば、削り取られる）。いくつかの実施形態では、ロータブレーダが静脈と動脈を取り除く。いくつかの実施形態では、静脈と動脈を取り除くために、脂肪吸引マシンが利用される。いくつかの実施形態では、静脈と動脈を取り除くために、静脈ストリッパが利用される。いくつかの実施形態では、高圧下液体が、静脈と動脈を同時に取り除く。いくつかの実施形態では、ブラシが静脈と動脈を取り除く。いくつかの実施形態では、外科用皮膚切開器（ｓｕｒｇｉｃａｌ ｄｅｒｍａｔｏｍｅ）が静脈と動脈を取り除く。

いくつかの実施形態では、臍帯は平坦状にされ、基体（例えば、フレーム台紙）に広げられる。いくつかの実施形態では、基体は、耐水性のコーティングまたは材料を含む。いくつかの実施形態では、この材料はポリエステルである。いくつかの実施形態では、臍帯は、その内面（例えば、ワルトンゼリーを含む面）が上向きとなり、外面（すなわち、羊膜を含む面）が基体に接触するように配向される。いくつかの実施形態では、臍帯は、鉗子を用いて配向される。

いくつかの実施形態では、臍帯が基体に対して平らでない場合、さらなる切断がワルトンゼリーに行われる。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーの一部またはすべてが、臍帯から取り除かれる。いくつかの実施形態では、組織移植片の所望の厚みにより、どれだけのワルトンゼリーが取り除かれるかが決定される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーは、（例えば、一組の鉗子、止血鉗子を使用して）層中にある臍帯から剥離される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーは、切片中にある臍帯から切り取られる（例えば、削り取られる）。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くためにロータブレーダ（すなわち、ダイヤモンドコーティングを施したバーを具備するドリルに取り付けられるカテーテル）が利用される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くために、脂肪吸引マシンが利用される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くために、高圧下液体が適用される。いくつかの実施形態では、ワルトンゼリーを取り除くために、ブラシ（例えば、高速回転する機械化ブラシ）が利用される。

いくつかの実施形態では、臍帯は、臍帯シートを形成するために切断かつ調製される。いくつかの実施形態では、臍帯は、（例えば、メスを使用して）複数の切片へと切断される。いくつかの実施形態では、臍帯の切片は、（例えば、メスまたはハサミを使用して）長手方向に切断される。いくつかの実施形態では、臍帯の切片は、半分に切断されない。いくつかの実施形態では、臍帯の切片は、半分に切断される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、細片または糸状に切断される。

臍帯は、ラミナー・フロー・フードの下で無菌技術を実施しながら切断することができる。いくつかの実施形態では、臍帯は、ガイドとしてルーラを使用しながらメスにより所望の形状とサイズへと切断される。いくつかの実施形態では、臍帯は、メスおよびグリッド付きのルーラを使用して約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍに切断される。いくつかの実施形態では、臍帯は、約０．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、０．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約１ｃｍ、約０．５ｃｍ×約２ｃｍ、約０．５ｃｍ×約３ｃｍ、約０．５ｃｍ×約４ｃｍ、約０．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズに切断される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１ｃｍ×約０．１ｃｍ、１ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１ｃｍ×約１ｃｍ、約１ｃｍ×約２ｃｍ、約１ｃｍ×約３ｃｍ、約１ｃｍ×約４ｃｍ、約１ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、メスおよびグリッド付きのルーラを使用して、約１．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、１．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約１ｃｍ、約１．５ｃｍ×約２ｃｍ、約１．５ｃｍ×約３ｃｍ、約１．５ｃｍ×約４ｃｍ、約１．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズに切断される。

いくつかの実施形態では、切断された臍帯は、－２０℃で保管される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、γ線照射、電子線照射、Ｘ線照射、およびＵＶ照射を含むがこれらに限定されないあらゆる適切な（例えば、医学的に容認可能な）方法により、最終滅菌に晒される。いくつかの実施形態では、照射は、ドライアイスとともに使用される。いくつかの実施形態では、照射は、ドライアイスを用いることなく使用される。いくつかの実施形態では、臍帯は、第１の期間にわたりドライアイスありの照射に晒され、第２の期間にわたりドライアイスなしの照射に晒される。いくつかの実施形態では、臍帯は、臍帯を滅菌するのに十分な期間にわたりγ線照射に晒される。いくつかの実施形態では、臍帯は、臍帯を滅菌するのに十分な期間にわたり電子ビーム（Ｅ－ビーム）滅菌に晒される。いくつかの実施形態では、臍帯は、臍帯を滅菌するのに十分な期間にわたり電子ビーム（Ｅ－ビーム）滅菌に晒される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、約２５～約４３ｋＧｙのγ線照射により滅菌される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、約１０～約７５ｋＧｙのγ線照射により滅菌される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０ｋＧｙ以上のγ線照射により滅菌される。いくつかの実施形態では、臍帯は、臍帯を滅菌するのに十分な期間にわたり電子ビーム（Ｅ－ビーム）滅菌に晒される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、約２５～約４３ｋＧｙのＥ－ビーム照射により滅菌される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、約１０～約７５ｋＧｙのＥ－ビーム照射により滅菌される。いくつかの実施形態では、臍帯はさらに、約１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０ｋＧｙ以上のＥ－ビーム照射により滅菌される。いくつかの実施形態では、切断した臍帯組織は、過剰量の血液および組織をさらに取り除くために任意選択で再び緩衝液で洗浄される。

いくつかの実施形態では、臍帯シートは、すべて、実質的にすべて、または大半が死滅している細胞を含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、代謝活性を備えた細胞を欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、臍帯羊膜および／またはワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、部分的または全体的にワルトンゼリーを含まない。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、部分的または全体的に静脈または動脈を欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯シートは水和される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、冷凍された臍帯または事前に冷凍した臍帯から得られる。

いくつかの実施形態では、臍帯シートは、実質的に平坦状にされる。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、半円形状、円形状、矩形状、または管状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、糸状である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、細片である。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、下円蓋に位置付けられて留まるように構成される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、上円蓋に位置付けられて留まるように構成される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、下円蓋および上円蓋に位置付けられて留まるように構成される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、経時的に溶解するように構成される。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１０日、約２週間、約３週間、約１か月、または約２か月の期間をかけて溶解する。

いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約０．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、０．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約１ｃｍ、約０．５ｃｍ×約２ｃｍ、約０．５ｃｍ×約３ｃｍ、約０．５ｃｍ×約４ｃｍ、約０．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１ｃｍ×約０．１ｃｍ、１ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１ｃｍ×約１ｃｍ、約１ｃｍ×約２ｃｍ、約１ｃｍ×約３ｃｍ、約１ｃｍ×約４ｃｍ、約１ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、１．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約１ｃｍ、約１．５ｃｍ×約２ｃｍ、約１．５ｃｍ×約３ｃｍ、約１．５ｃｍ×約４ｃｍ、約１．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約２ｃｍ×約０．１ｃｍ、２ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２ｃｍ×約１ｃｍ、約２ｃｍ×約２ｃｍ、約２ｃｍ×約３ｃｍ、約２ｃｍ×約４ｃｍ、約２ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約２．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、２．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約１ｃｍ、約２．５ｃｍ×約２ｃｍ、約２．５ｃｍ×約３ｃｍ、約２．５ｃｍ×約４ｃｍ、約２．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約３ｃｍ×約０．１ｃｍ、３ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約３ｃｍ×約１ｃｍ、約３ｃｍ×約２ｃｍ、約３ｃｍ×約３ｃｍ、約３ｃｍ×約４ｃｍ、約３ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

いくつかの実施形態では、臍帯シートは、メスを使用して所定のサイズに切断される。いくつかの実施形態では、メスは使い捨て式である。いくつかの実施形態では、メスは再利用可能である。いくつかの実施形態では、臍帯を直線状に切断するために、メスはルーラと組み合わされる。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、台紙（例えば、ＰＥＳ台紙）の上に配置され、それにより、臍帯の切断中に臍帯が滑る傾向を減少させる。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、ハサミで切断される。いくつかの実施形態では、ハサミは再利用可能である。いくつかの実施形態では、ハサミは使い捨て式である。

ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体の調製
いくつかの実施形態では、制御放出システムは、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体と、対象の眼の下円蓋、上円蓋の中、角膜表面の上、涙点の上、または周囲組織の上に配されることで対象の涙膜へＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出を行う制御放出用の賦形剤とを含む。いくつかの実施形態では、制御放出システムは、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体と、対象の眼の下円蓋にのみ配されることで対象の涙膜へのＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出を行う制御放出用の賦形剤とを含む。

いくつかの実施形態では、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、胎児支持組織から精製される生来のＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３である。いくつかの実施形態では、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、その成分からｉｎ ｖｉｔｒｏで再構成される（再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ２またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３と称される）。いくつかの実施形態では、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、生来のＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３（ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）および再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３（ｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）を含む。

単離されたｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を産生する方法
いくつかの実施形態では、単離された生来のＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３（ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）複合体は、本明細書で提供される方法に使用される。

いくつかの実施形態では、単離されたｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、羊膜組織から単離される。いくつかの実施形態では、単離されたｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、羊膜または臍帯から単離される。いくつかの実施形態では、単離されたｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、新鮮な、冷凍した、または事前に冷凍した胎盤羊膜（ＰＡＭ）、新鮮な、冷凍した、または事前に冷凍した臍帯羊膜（ＵＣＡＭ）、新鮮な、冷凍した、または事前に冷凍した胎盤、新鮮な、冷凍した、または事前に冷凍した臍帯、新鮮な、冷凍した、または事前に冷凍した絨毛膜、新鮮な、冷凍した、または事前に冷凍した羊膜絨毛膜、あるいはこれらのあらゆる組合せから単離される。このような組織は、あらゆる哺乳動物、例えば、限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、またはブタなどから得ることができる。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、あらゆる適切な方法により精製される。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、遠心分離（例えば、超遠心分離、勾配遠心分離）、クロマトグラフィ（例えば、イオン交換、親和性、サイズ排除、およびヒドロキシアパタイトのクロマトグラフィ）、タンジェンシャルフロー濾過（ＴＦＦ）、ゲル濾過、または差溶解度、エタノール沈殿、あるいはタンパク質精製に利用可能な他の技法により精製される（例えば、すべて参照により本明細書に引用される、Ｓｃｏｐｅｓ，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７、Ｈｉｇｇｉｎｓ，Ｓ．Ｊ．ａｎｄ Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．（ｅｄｓ．），Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ Ｐｒｅｓｓ，１９９９、およびＤｅｕｔｓｃｈｅｒ，Ｍ．Ｐ．，Ｓｉｍｏｎ，Ｍ．Ｉ．，Ａｂｅｌｓｏｎ，Ｊ．Ｎ．（ｅｄｓ．），Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ Ｓｅｒｉｅｓ，Ｖｏｌ １８２），Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，１９９７を参照）。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、抽出物から単離される。いくつかの実施形態では、抽出物は、羊膜抽出物から調製される。いくつかの実施形態では、抽出物は、臍帯抽出物から調製される。いくつかの実施形態では、臍帯抽出物は、臍帯間質および／またはワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、超遠心分離により調製される抽出物に含有される。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、ＣｓＣｌ／４－６ＭのグアニジンＨＣｌ勾配を用いた超遠心分離により調製される抽出物に含有される。いくつかの実施形態では、抽出物は、少なくとも２回の超遠心分離により調製される。いくつかの実施形態では、抽出物は、２回より多くの超遠心分離（すなわち、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３ ２^ｎｄ）により調製される。いくつかの実施形態では、抽出物は、少なくとも４回の超遠心分離（すなわち、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３ ４^ｔｈ）により調製される。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、ＨＣ１、ＨＡ、ＰＴＸ３、および／または小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。

いくつかの実施形態では、超遠心分離は、等張液中での抽出により調製される抽出物に対して行われる。いくつかの実施形態では、等張液はＰＢＳである。例えば、いくつかの実施形態では、組織をＰＢＳ中で均質化することで、均質化された試料が産生される。次いで、均質化された試料は、遠心分離により可溶性部分と不溶性部分とに分離される。いくつかの実施形態では、超遠心分離は、ＰＢＳで抽出された組織の可溶性部分に対して行われる。かかる実施形態では、ＰＢＳで抽出された組織の超遠心分離により精製されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３可溶性複合体と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ可溶性複合体は、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３可溶性複合体は、ＨＣ１、ＨＡ、ＰＴＸ３、および／または小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。

いくつかの実施形態では、超遠心分離は、羊膜および／または臍帯の組織の直接グアニジンＨＣｌ抽出（例えば、４～６ＭのＧｎＨＣｌ）により調製される抽出物に対して行われる。いくつかの実施形態では、次いでＧｎＨＣｌ抽出組織は、ＧｎＨＣｌ可溶性部分とＧｎＨＣｌ不溶性部分を産生するために遠心分離される。いくつかの実施形態では、超遠心分離がＧｎＨＣｌ可溶性部分に対して行われる。かかる実施形態では、グアニジンＨＣｌで抽出された組織の超遠心分離により精製されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３不溶性複合体と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ不溶性複合体は、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３不溶性複合体は、ＨＣ１、ＨＡ、ＰＴＸ３、および／または小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。

いくつかの実施形態では、超遠心分離は、ＰＢＳで抽出された組織の不溶性部分に対するさらなるグアニジンＨＣｌ抽出により調製される抽出物に対して行われる。例えば、いくつかの実施形態では、組織は、均質化された試料を産生するためにＰＢＳ中で均質化される。次いで、均質化された試料は、遠心分離により可溶性部分と不溶性部分とに分離される。次いで、不溶性部分は、グアニジンＨＣｌ（例えば、４～６ＭのＧｎＨＣｌ）中で抽出され、グアニジンＨＣｌの可溶性部分と不溶性部分とを産生するために遠心分離される。いくつかの実施形態では、超遠心分離は、グアニジンＨＣｌ可溶性部分に対して行われる。かかる実施形態では、グアニジンＨＣｌで抽出された組織の超遠心分離により精製されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３は、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３不溶性複合体と呼ばれる。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ不溶性複合体は、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３不溶性複合体は、ＨＣ１、ＨＡ、ＰＴＸ３、および／または小分子ロイシンリッチプロテオグリカンを含む。

いくつかの実施形態では、単離されたｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３抽出物を精製する方法は、（ａ）１．３５ｇ／ｍｌの初期密度でＣｓＣｌ／４～６ＭグアニジンＨＣｌに（例えば、本明細書に記載の可溶性または不溶性の方法により調製される）単離した抽出物を溶解してＣｓＣｌ混合物を生成する工程と、（ｂ）ＣｓＣｌ混合物を１２５，０００ｘｇ、１５℃で４８時間遠心分離して第１の精製抽出物を生成し、１２５，０００ｘｇ、１５℃で４８時間の遠心分離ためにＨＡ含有画分を１．４０ｇ／ｍｌの初期密度にプール／調整する工程と、（ｃ）精製画分をプールして蒸留水に対して透析を行うことで、ＣｓＣｌグアニジンＨＣｌを取り除き透析物を生成する工程とを含む。いくつかの実施形態では、単離された抽出物を精製する方法は、（ｄ）先の透析物を、１．３％（ｗ／ｖ）酢酸カリウムを含有する３体積の９５％（ｖ／ｖ）エタノールと０℃で１時間かけて混合することで第１の透析物／エタノール混合物を生成する工程と、（ｅ）第１の透析物／エタノール混合物を１５，０００ｘｇで遠心分離にかけることで第２の精製抽出物を生成する工程と、（ｆ）第２の精製抽出物を抽出する工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、単離された抽出物を精製する方法は、（ｇ）第２の精製抽出物をエタノール（例えば、７０％エタノール）で洗浄することで第２の精製抽出物／エタノール混合物を生成する工程と、（ｈ）第２の精製抽出物／エタノール混合物を遠心分離にかけることで第３の精製抽出物を生成する工程と、（ｉ）第３の精製抽出物を抽出する工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、単離された抽出物を精製する方法は、（ｊ）第３の精製抽出物をエタノール（例えば、７０％エタノール）で洗浄することで第３の精製抽出物／エタノール混合物を生成する工程と、（ｋ）第３の精製された抽出物／エタノール混合物を遠心分離にかけることで第４の精製抽出物を生成する工程と、（ｌ）第４の精製抽出物を抽出する工程とをさらに含む。いくつかの実施形態では、精製抽出物は、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を含む。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、免疫親和性クロマトグラフィにより精製される。いくつかの実施形態では、抗ＨＣ１抗体、抗ＨＣ２抗体、またはその両方が生成され、定常支持体に付けられる。いくつかの実施形態では、未精製のＨＣ－ＨＡ複合体（すなわち、移動相）は、支持体の上を通過される。ある例では、ＨＣ－ＨＡの複合体は、（例えば、（ａ）抗ＨＣ１抗体とＨＣ１、（ｂ）抗ＨＣ２抗体とＨＣ２、（ｃ）抗ＰＴＸ抗体とＰＴＸ３、（ｄ）抗ＳＬＲＰ抗体とＳＬＲＰ、または（ｅ）それらのあらゆる組合せの相互作用を介して）抗体に結合する。いくつかの実施形態では、あらゆる未結合または結合の緩い分子を取り除くために、支持体は（例えばＰＢＳで）洗浄される。いくつかの実施形態では、次いで支持体は、支持体からのｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体の溶離を可能にする溶液（例えば、１％ＳＤＳ、６Ｍグアニジン－ＨＣｌ、または８Ｍ尿素）で洗浄される。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、親和性クロマトグラフィにより精製される。いくつかの実施形態では、ＨＡＢＰは生成されて定常支持体に付けられる。いくつかの実施形態では、未精製のｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体（すなわち、移動相）は、支持体の上を通過される。ある例では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、ＨＡＢＰに結合する。いくつかの実施形態では、あらゆる未結合または結合の緩い分子を取り除くために、支持体は（例えばＰＢＳで）洗浄される。いくつかの実施形態では、次いで支持体は、支持体からのＨＣ－ＨＡ複合体の溶離を可能にする溶液で洗浄される。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、ＨＡＢＰ親和性クロマトグラフィと、抗ＨＣ１抗体、抗ＨＣ２抗体、抗ＰＴＸ３抗体、ＳＬＲＰまたはＳＬＲＰの組合せに対する抗体、あるいはこれら抗体のあらゆる組合せを用いた免疫親和性クロマトグラフィとの組合せにより精製される。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、１または複数の抗体を用いて本明細書に記載される不溶性画分から精製される。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、抗ＳＬＲＰ抗体を用いて本明細書に記載される不溶性画分から精製される。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、本明細書に記載される可溶性画分から精製される。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、抗ＰＴＸ３抗体を用いて本明細書に記載される可溶性画分から精製される。

いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、小分子ロイシンリッチプロテオグリカン（ＳＬＲＰ）を含む。いくつかの実施形態では、ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、クラスＩ、クラスＩＩ、またはクラスＩＩＩのＳＬＲＰを含む。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、デコリンやバイグリカンなどのクラスＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、フィブロモジュリン、ルミカン、ＰＲＥＬＰ（プロリンアルギニンリッチのエンドロイシンリッチタンパク質）、ケラトカン、およびオステオアドへリンなどのクラスＩＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、エピピカンやオステオグリシンなどのクラスＩＩＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、ビクニン、デコリン、バイグリカン、およびオステオアドへリンの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチタンパク質は、グリコサミノグリカンを含む。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、硫酸ケラタンを含む。

再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を産生する方法
いくつかの実施形態では、ｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、本明細書で提供される方法に使用される。このような再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、ＳＬＲＰを備えるか、または備えていない可能性がある。

いくつかの実施形態では、再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を生成する方法は、（ａ）高分子量ヒアルロナン（ＨＭＷ ＨＡ）をＩαＩおよびＴＳＧ－６に接触させることで、ＴＳＧ－６にあらかじめ結合させたＨＣ－ＨＡ複合体を形成する工程と、（ｂ）適切な条件下でＨＣ－ＨＡ複合体をペントラキシン３（ＰＴＸ３）と接触させることでｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を形成する工程とを含む。本明細書には、このような方法により産生されるｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体が提供される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、ＨＡとの共有結合を形成する。いくつかの実施形態では、前述の方法の工程（ａ）と（ｂ）は、順番に連続して行われる。いくつかの実施形態では、この方法は、ＴＳＧ－６にあらかじめ結合させたＨＣ－ＨＡ複合体を、ＰＴＸ３に接触させる工程を含む。

いくつかの実施形態では、ＩαＩタンパク質とＴＳＧ－６タンパク質は、約１：１、２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１、１０：１、１５：１、または２０：１（ＩαＩ：ＴＳＧ－６）のモル比でＨＭＷ ＨＡと接触される。いくつかの実施形態では、ＩαＩ：ＴＳＧ－６の比は、約１：１～約２０：１、例えば、約１：１～約１０：１、例えば、約１：１～約５：１、例えば、約１：１～約３：１の範囲である。いくつかの実施形態では、ＩαＩ：ＴＳＧ－６の比は、３：１以上である。いくつかの実施形態では、ＩαＩ：ＴＳＧ－６の比は、３：１である。

ある例では、ＴＳＧ－６は、ＩαＩと相互に作用して、ＩαＩのＨＣ１とＨＣ２との共有結合複合体（例えば、ＨＣ１・ＴＳＧ－６およびＨＣ２・ＴＳＧ－６）を形成する。ある例では、ＨＡの存在下、ＨＣはＨＡに送られてｒｃＨＣ－ＨＡを形成する。

いくつかの実施形態では、高分子量ヒアルロナン（ＨＭＷ ＨＡ）をＩαＩおよびＴＳＧ－６と接触させる工程は、少なくとも１０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間以上行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡをＩαＩおよびＴＳＧ－６と接触させる工程は、少なくとも２時間以上行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡをＩαＩおよびＴＳＧ－６と接触させる工程は、少なくとも２時間行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡをＩαＩおよびＴＳＧ－６と接触させる工程は、３７℃で行われる。いくつかの実施形態では、固定化されたＨＭＷ ＨＡをＩαＩおよびＴＳＧ－６と接触させる工程は、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＭｇＣｌ_２において行われる。

いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３をＨＣ－ＨＡ複合体に接触させる工程は、少なくとも１０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間以上行われる。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３をＨＣ－ＨＡ複合体に接触させる工程は、少なくとも２時間以上行われる。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３をＨＣ－ＨＡ複合体に接触させる工程は、少なくとも２時間行われる。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３をＨＣ－ＨＡ複合体に接触させる工程は、３７℃で行われる。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３をＨＣ－ＨＡ複合体に接触させる工程は、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＭｇＣｌ_２において行われる。

いくつかの実施形態では、上記方法は、高分子量ヒアルロナン（ＨＭＷ ＨＡ）を、ペントラキシン３（ＰＴＸ３）タンパク質、重鎖１（ＨＣ１）および重鎖２（ＨＣ２）を含むインター－α－阻害剤（ＩαＩ）タンパク質、ならびに腫瘍壊死因子αで刺激した遺伝子６（ＴＳＧ－６）と、適切な条件下で同時に接触させることで、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を形成する工程を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡを、ＰＴＸ３、ＩαＩ、およびＴＳＧ－６と接触させる工程は、少なくとも１０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間以上行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡを、ＰＴＸ３、ＩαＩ、およびＴＳＧ－６に接触させる工程は、３７℃で行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡを、ＰＴＸ３、ＩαＩ、およびＴＳＧ－６に接触させる工程は、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＭｇＣｌ_２において行われる。

いくつかの実施形態では、上記方法は、高分子量ヒアルロナン（ＨＭＷ ＨＡ）を、ペントラキシン３（ＰＴＸ３）タンパク質、重鎖１（ＨＣ１）および重鎖２（ＨＣ２）を含むインター－α－阻害剤（ＩαＩ）タンパク質、ならびに腫瘍壊死因子αで刺激した遺伝子６（ＴＳＧ－６）と、適切な条件下、あらゆる順序で連続して接触させることで、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を形成する工程を含む。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡを、ＰＴＸ３、ＩαＩ、およびＴＳＧ－６と接触させる工程は、少なくとも１０分間、少なくとも３０分間、少なくとも１時間、少なくとも２時間、少なくとも３時間、少なくとも４時間、少なくとも５時間、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、または少なくとも２４時間以上行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡを、ＰＴＸ３、ＩαＩ、およびＴＳＧ－６に接触させる工程は、３７℃で行われる。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡを、ＰＴＸ３、ＩαＩ、およびＴＳＧ－６に接触させる工程は、ＰＢＳ中の５ｍＭ ＭｇＣｌ_２において行われる。

いくつかの実施形態では、ｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体の産生のための方法は、１または複数の小分子ロイシンリッチプロテオグリカン（ＳＬＲＰ）の添加をさらに含む。いくつかの実施形態では、再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を生成する方法は、（ａ）高分子量ヒアルロナン（ＨＭＷ ＨＡ）をＩαＩおよびＴＳＧ－６と接触させることで、ＴＳＧ－６にあらかじめ結合させたＨＣ－ＨＡ複合体を形成する工程と、（ｂ）ＨＣ－ＨＡ複合体をペントラキシン３（ＰＴＸ３）に接触させる工程と、（ｃ）ＨＣ－ＨＡ複合体を１または複数のＳＬＲＰＳと適切な条件下で接触させることでｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を形成する工程とを含む。本明細書には、このような方法により産生されるｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体が提供される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、ＨＡとの共有結合を形成する。いくつかの実施形態では、この方法は、ＴＳＧ－６にあらかじめ結合させたＨＣ－ＨＡ複合体を、ＰＴＸ３に接触させる工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法の工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）は、順番に連続して行われる。いくつかの実施形態では、この方法の工程（ａ）、（ｂ）、および（ｃ）は、同時に行われる。いくつかの実施形態では、この方法の工程（ａ）が行われ、次いで方法の工程（ｂ）と（ｃ）が順番に連続して行われる。いくつかの実施形態では、この方法の工程（ａ）が行われ、次いで方法の工程（ｂ）と（ｃ）が同時に行われる。

いくつかの実施形態では、ＳＬＲＰは、クラスＩ、クラスＩＩ、またはクラスＩＩＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、ＳＬＲＰは、デコリンやバイグリカンなどのクラスＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、フィブロモジュリン、ルミカン、ＰＲＥＬＰ（プロリンアルギニンリッチのエンドロイシンリッチタンパク質）、ケラトカン、およびオステオアドへリンなどのクラスＩＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、エピピカンやオステオグリシンなどのクラスＩＩＩのＳＬＲＰの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、ビクニン、デコリン、バイグリカン、およびオステオアドへリンの中から選択される。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチタンパク質は、グリコサミノグリカンを含む。いくつかの実施形態では、小分子ロイシンリッチプロテオグリカンは、硫酸ケラタンを含む。

ＰＴＸ３
いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、１つの細胞または複数の細胞（例えば、組織抽出物）から単離される。ＰＴＸ３の発現に適した例示的な細胞として、哺乳動物細胞、霊長類細胞、ヒト細胞、げっ歯類細胞、昆虫細胞、細菌、および酵母菌を含むがこれらに限定されない動物細胞、ならびに藻類、被子植物、裸子植物、シダ植物、およびコケ植物を含むがこれらに限定されない植物細胞が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、ヒト細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするために１または複数の炎症性サイトカインで刺激される細胞から単離される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、羊膜細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、臍帯由来の羊膜細胞から単離される。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、臍帯細胞から単離される。いくつかの実施形態では、臍帯細胞は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、羊膜上皮細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、臍帯上皮細胞から単離される。いくつかの実施形態では、羊膜上皮細胞または臍帯上皮細胞は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、羊膜間質細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、臍帯間質細胞から単離される。いくつかの実施形態では、羊膜間質細胞または臍帯間質細胞は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３は、細胞から単離された生来ＰＴＸ３タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、組換え技法により調製される。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、組換え発現ベクターから発現される。いくつかの実施形態では、核酸をコードするＰＴＸ３は、構成的プロモータに動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、核酸をコードするＰＴＸ３は、誘導性プロモータに動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、遺伝子導入動物において発現される。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は組換えタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、細胞から単離した組換えタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、無細胞抽出物において産生される組換えタンパク質である。

いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、羊膜、臍帯、臍帯羊膜、絨毛膜、羊水、またはそれらの組合せから精製される。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は羊膜細胞から精製される。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は羊膜上皮細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は臍帯上皮細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は羊膜間質細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は臍帯間質細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は、ＰＴＸ３発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、１つの細胞または複数の細胞（例えば、組織抽出物）から単離されない。

いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３は、ｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体の形成を促進するのに十分なＰＴＸ３のフラグメントを含む。提供される方法で使用されるＰＴＸ３の変異体として、アミノ酸の交換（置換）、欠失、または挿入であるアミノ酸修飾を伴う変異体が挙げられる。いくつかの実施形態では、このような修飾は、ｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体の１または複数の治療特性（例えば、抗炎症性、抗免疫性、抗血管新生性、抗瘢痕化性、抗接着性、再生性、または本明細書に記載されるような他の治療活性）を改善するなど、ＰＴＸ３ポリペプチドの１または複数の特性を改善する。

いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３タンパク質は商用供給源から得られる。ＰＴＸ３の例示的な商用供給源は、ＰＴＸ３（Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ．１８２６－ＴＳ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）であるが、これに限定されるものではない。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３タンパク質は、多量体タンパク質である。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＰＴＸ３タンパク質は、ホモ多量体である。いくつかの実施形態では、ホモ多量体は、二量体、三量体、四量体、六量体、五量体、または八量体である。いくつかの実施形態では、ＰＴＸ３ホモ多量体は、三量体、四量体、または八量体である。特定の実施形態では、ＰＴＸ３ホモ多量体は、八量体である。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、ＰＴＸ３タンパク質の多量体化を改善するために修飾される。いくつかの実施形態では、多量体化ドメインは、ＰＴＸ３に融合するとＰＴＸ３の多量体化を改善する不均一な多量体化ドメイン（例えば、Ｆｃ多量体化ドメインまたはロイシンジッパー）と置き換えられる。

ＴＳＧ－６
いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、１つの細胞または複数の細胞（例えば、組織抽出物）から単離される。ＴＳＧ－６の発現に適した例示的な細胞として、哺乳動物細胞、霊長類細胞、ヒト細胞、げっ歯類細胞、昆虫細胞、細菌、および酵母菌を含むがこれらに限定されない動物細胞、ならびに藻類、被子植物、裸子植物、シダ植物、およびコケ植物を含むがこれらに限定されない植物細胞が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、ヒト細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするために１または複数の炎症性サイトカインで刺激される細胞から単離される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、羊膜細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、臍帯由来の羊膜細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするために１または複数の炎症性サイトカインで刺激される羊膜細胞から単離される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、臍帯細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするために１または複数の炎症性サイトカインで刺激される臍帯細胞から単離される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、羊膜上皮細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、臍帯上皮細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするために１または複数の炎症性サイトカインで刺激される羊膜上皮細胞または臍帯上皮細胞から単離される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、羊膜間質細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、臍帯間質細胞から単離される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするために１または複数の炎症性サイトカインで刺激される羊膜間質細胞または臍帯間質細胞から単離される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＴＳＧ－６は、細胞から単離された生来ＴＳＧ－６タンパク質である。いくつかの実施形態では、細胞は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするためにより多くの（ｏｒ ｍｏｒｅ）炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、組換え技法により調製される。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は組換え発現ベクターから発現される。いくつかの実施形態では、核酸をコードするＴＳＧ－６は、構成的プロモータに動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、核酸をコードするＴＳＧ－６は、誘導性プロモータに動作可能に結合される。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、遺伝子導入動物において発現される。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は組換えタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、細胞から単離される組換えタンパク質である。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、無細胞抽出物において産生される組換えタンパク質である。

いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、羊膜、羊膜、絨毛膜、羊水、またはそれらの組合せから精製される。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は羊膜細胞から精製される。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は羊膜上皮細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜上皮細胞は臍帯上皮細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は羊膜間質細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は臍帯間質細胞である。いくつかの実施形態では、羊膜細胞は、ＴＳＧ－６発現をアップレギュレートするためにより多くの炎症性サイトカインで刺激される。いくつかの実施形態では、炎症性サイトカインは、ＩＬ－１またはＴＮＦ－αである。

いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、１つの細胞または複数の細胞（例えば、組織抽出物）から単離されない。

いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、ＩαＩのＨＣ１がＨＡに移るのを助長するか触媒するのに十分なＴＳＧ－６のフラグメントを含む。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は、ＴＳＧ－６のリンクモジュールを含む。

いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は親和性タグを含む。例示的な親和性タグとして、ヘマグルチニンタグ、ポリ－ヒスチジンタグ、ｍｙｃタグ、ＦＬＡＧタグ、グルタチオン－Ｓ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグが挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような親和性タグは、精製での使用において当該技術分野で周知である。いくつかの実施形態では、このような親和性タグは、融合タンパク質として、または化学リンカーによりＴＳＧ－６ポリペプチドに組み込まれる。いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６は親和性タグを含み、未結合のＴＳＧ－６は、親和性精製によりｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体から取り除かれる。

いくつかの実施形態では、ＴＳＧ－６タンパク質は商用供給源から得られる。ＴＳＧ－６の例示的な商用供給源として、ＴＳＧ－６（Ｃａｔａｌｏｇ Ｎｏ．２１０４－ＴＳ Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）が挙げられるが、これに限定されるものではない。

ＩαＩ
いくつかの実施形態では、ＩαＩはＨＣ１鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＩαＩは、ＨＣ１鎖とＨＣ２鎖を含む。いくつかの実施形態では、ＩαＩは、ＨＣ１鎖、ＨＣ２鎖、およびビクニンを含む。いくつかの実施形態では、ＩαＩは、コンドロイチン硫酸鎖により結合されるＨＣ１鎖、ＨＣ２鎖、およびビクニンを含む。

いくつかの実施形態では、ＩαＩは生体試料から単離される。いくつかの実施形態では、生体試料は、哺乳動物から得た生体試料である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、血漿、肝臓、羊膜、絨毛膜、または羊水の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、または血漿の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血液試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血清試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血漿試料である。いくつかの実施形態では、ＩαＩは、ヒトの血液、血漿、または血清から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩはヒトの血清から単離される。いくつかの実施形態では、ＩαＩは血清から単離されない。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、羊膜細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、臍帯細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、臍帯から得た羊膜細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、羊膜上皮細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、臍帯上皮細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、羊膜間質細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、臍帯間質細胞において産生される。いくつかの実施形態では、上記方法で使用されるＩαＩは、肝細胞において産生される。いくつかの実施形態では、ＩαＩは、組換え技法により調製される。

いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、生体試料から単離される。いくつかの実施形態では、生体試料は、哺乳動物から得た生体試料である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、血漿、肝臓、羊膜、絨毛膜、または羊水の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、または血漿の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血液試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血清試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血漿試料である。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、ヒトの血液、血漿、または血清から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩはヒトの血清から単離される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は血清から精製されない。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、組換え技法により調製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、肝細胞から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、羊膜細胞から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、羊膜上皮細胞または臍帯上皮細胞から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ１は、羊膜間質細胞または臍帯間質細胞から精製される。

いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、生体試料から単離される。いくつかの実施形態では、生体試料は、哺乳動物から得た生体試料である。いくつかの実施形態では、哺乳動物はヒトである。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、血漿、肝臓、羊膜、絨毛膜、または羊水の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清、または血漿の試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血液試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血清試料である。いくつかの実施形態では、生体試料は血漿試料である。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、ヒトの血液、血漿、または血清から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２はヒトの血清から単離される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２はヒトの血清から単離される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は血清から単離されない。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、組換え技法により調製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、肝細胞から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、羊膜細胞から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、羊膜上皮細胞または臍帯上皮細胞から精製される。いくつかの実施形態では、ＩαＩのＨＣ２は、羊膜間質細胞または臍帯間質細胞から精製される。

ＨＡ
いくつかの実施形態では、ＨＡは、細胞、組織、または流体の試料から精製される。いくつかの実施形態では、ＨＡは、商用供給源（例えば、Ｓｉｇｍａ ＡｌｄｒｉｃｈまたはＡｄｖａｎｃｅｄ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｏｐｔｉｃｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ（例えば、Ｈｅａｌｏｎ））から得られる。いくつかの実施形態では、ＨＡは、粉末として商用供給源から得られる。いくつかの実施形態では、ＨＡは、細胞において発現される。ＨＡの発現に適した例示的な細胞として、哺乳動物細胞、霊長類細胞、ヒト細胞、げっ歯類細胞、昆虫細胞、細菌、および酵母菌を含むがこれらに限定されない動物細胞、ならびに藻類、被子植物、裸子植物、シダ植物、およびコケ植物を含むがこれらに限定されない植物細胞が挙げられるが、これに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、ＨＡは、ヒト細胞において発現される。いくつかの実施形態では、ＨＡは、遺伝子導入動物において発現される。いくつかの実施形態では、ＨＡは、ヒアルロナン・シンターゼ（例えば、ＨＡＳ１、ＨＡＳ２、およびＨＡＳ３）を発現する細胞から得られる。いくつかの実施形態では、細胞は、ＨＡシンターゼを発現する組換え発現ベクターを含有する。特定の例では、ＨＡシンターゼは、ヒアルロナンが細胞膜を通って細胞外空間へと押し出されるように、発生期の多糖類にグルクロン酸とＮ－アセチルグルコサミンを繰り返し添加することによりヒアルロナンを長くする。

上記方法で使用されるＨＡは、典型的に高分子量（ＨＭＷ）ＨＡである。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡの重量平均分子量は、約５００キロダルトン（ｋＤａ）超、例えば、約５００ｋＤａ～約１０，０００ｋＤａの間、約８００ｋＤａ～約８，５００ｋＤａの間、約１，１００ｋＤａ～約５，０００ｋＤａの間、または約１，４００ｋＤａ～約３，５００ｋＤａの間である。いくつかの実施形態では、ＨＭＷ ＨＡの重量平均分子量は、約３，０００ｋＤａである。

単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を含む制御放出製剤の調製
いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の徐放用の賦形剤と混合される、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を含む。いくつかの実施形態では、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体は、生来のＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３（ｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）および／または再構成されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３（ｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３）を含む。いくつかの実施形態では、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の徐放用の賦形剤は、ポリマーである。いくつかの実施形態では、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の徐放用の賦形剤は、生分解性ポリマーである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤用の賦形剤は、コラーゲン、セルロース、キトサン、ＰＥＧ、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（乳）酸、ポリ（乳－ｃｏ－グリコール）酸、またはそれらの組合せを含む。いくつかの実施形態では、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の徐放用の賦形剤は、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体を徐々に、および／または制御された形で経時的に放出するように構成される。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、１または複数の天然ポリマーで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニン、ケラチン、フィブリン、フィブリノゲン、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、またはそれらの組合せである天然ポリマーで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、天然ポリマーから製剤化されるポリマーゲルで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、フィブロネクチン、コラーゲン、ラミニン、ケラチン、フィブリン、フィブリノゲン、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸、コンドロイチン硫酸、およびそれらの組合せなどであるがこれらに限定されない天然ポリマーから製剤化されるポリマーゲルで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、架橋ポリマーで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、非架橋ポリマーで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、非架橋ポリマーと架橋ポリマーとで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、架橋ヒアルロナンゲルで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、不溶性の架橋ＨＡヒドロゲルで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、非架橋ヒアルロナンゲルで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、コラーゲンマトリクスで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、フィブリンマトリクスで製剤化される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、フィブリン／コラーゲンマトリクスで製剤化される。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、眼またはこれに関連する組織への投与のために製剤化される。眼への投与に適した製剤として、溶液、懸濁液（例えば、水性懸濁液）、軟膏、ゲル、クリーム、リポソーム、ニオソーム（ｎｉｏｓｏｍｅｓ）、ファーマコソーム（ｐｈａｒｍａｃｏｓｏｍｅｓ）、ナノ粒子、またはそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、眼への局所投与のための本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、噴霧、洗浄、またはそれらの組合せで投与される。

いくつかの実施形態では、本明細書に開示される製剤は、ある投与形態にある。いくつかの実施形態では、投与形態は、液体、固体、半固体、またはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、半固体の投与形態は、例えば、クリーム、ゲル、軟膏、ローション、バーム、坐薬、局所形態、またはそれらの組合せである。いくつかの実施形態では、固体の投与形態は、例えば、錠剤、カプセル、顆粒剤、粉末、サシェ、再構成可能な粉末、チュアブル錠（ｃｈｅｗａｂｌｅ）、ロゼンジ、またはそれらのあらゆる組合せである。

いくつかの実施では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体のマイクロカプセル化マトリクス（マイクロカプセル化マトリクスとしても知られる）は、生分解性ポリマーにおいて形成される。いくつかの実施形態では、本明細書に開示されるｎＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３またはｒｃＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の複合体は、リポソームまたはマイクロエマルジョンに封入される。

眼への投与のための製剤は、眼に許容可能な張度を有する。ある例では、涙液の等張度値は、０．９％塩化ナトリウム溶液のものと同等である。いくつかの実施形態では、約０．６％～約１．８％塩化ナトリウムの等張度値が、眼への局所投与に適している。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される眼への投与のための製剤のモル浸透圧濃度は、約２００～約６００ｍＯｓｍ／Ｌである。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される眼への投与のための製剤は低浸透圧性であり、このため、適切な張度範囲を達成するのに適したあらゆるものの添加を必要とする。張度を調節する眼に許容可能な物質として、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、および硫酸アンモニウムが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

眼への投与のための製剤は、眼に許容可能な透明度を有する。眼に許容可能な清澄剤の例として、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、またはそれらの組合せが挙げられるが、これらに限定されるものではない。

いくつかの実施形態では、眼への投与のための製剤は、眼に許容可能な粘度増強剤を含む。いくつかの実施形態では、粘度増強剤は、本明細書に開示される製剤が眼に留まる時間を延ばす。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される製剤が眼に留まる時間を延ばすことで、より大きな薬物吸収と薬物効果が可能となる。粘膜付着性ポリマーの非限定的な例として、カルボキシメチルセルロース、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリメチルメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリカルボフィル、アクリル酸／アクリル酸ブチルコポリマー、アルギン酸ナトリウム、およびデキストランが挙げられる。

いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配されるように構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、対象の眼の下円蓋のみに配されるように構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、フィルムおよび／またはコーティングとして構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、平坦状または実質的に平坦状である。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、角膜表面の形状に適合するように構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、角膜表面と結合したまま留まるように構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、下円蓋、上円蓋、またはその両方に位置づけられて留まるように構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、経時的に溶解するように構成される。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、透明または半透明であることで、制御放出製剤が角膜の上に配されているのを患者が確認できるように構成される。

いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、半円形状、円形状、矩形状、または管状である。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約０．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、０．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約１ｃｍ、約０．５ｃｍ×約２ｃｍ、約０．５ｃｍ×約３ｃｍ、約０．５ｃｍ×約４ｃｍ、約０．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約１ｃｍ×約０．１ｃｍ、１ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１ｃｍ×約１ｃｍ、約１ｃｍ×約２ｃｍ、約１ｃｍ×約３ｃｍ、約１ｃｍ×約４ｃｍ、約１ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約１．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、１．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約１ｃｍ、約１．５ｃｍ×約２ｃｍ、約１．５ｃｍ×約３ｃｍ、約１．５ｃｍ×約４ｃｍ、約１．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約２ｃｍ×約０．１ｃｍ、２ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２ｃｍ×約１ｃｍ、約２ｃｍ×約２ｃｍ、約２ｃｍ×約３ｃｍ、約２ｃｍ×約４ｃｍ、約２ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約２．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、２．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約１ｃｍ、約２．５ｃｍ×約２ｃｍ、約２．５ｃｍ×約３ｃｍ、約２．５ｃｍ×約４ｃｍ、約２．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約３ｃｍ×約０．１ｃｍ、３ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約３ｃｍ×約１ｃｍ、約３ｃｍ×約２ｃｍ、約３ｃｍ×約３ｃｍ、約３ｃｍ×約４ｃｍ、約３ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、制御放出製剤は、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

使用方法
本明細書中のいくつかの実施形態では、眼表面疾患、眼障害、眼創傷、またはそれらのあらゆる組合せを処置する方法が開示される。いくつかの実施形態では、この方法は、眼表面の疾患、障害、または創傷を患う対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に臍帯シートを配する工程を含む。いくつかの実施形態では、この方法は、眼表面の疾患、障害、または創傷を患う対象の眼の下円蓋のみに臍帯シートを配する工程を含む。さらに本明細書中のいくつかの実施形態では、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、または不応性点状角膜炎を伴うＯＳＤを処置する方法が開示される。本明細書に開示されるように、配するおよび適用するという用語は、交換可能である。いくつかの実施形態では、前述の方法は、眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に本明細書に開示される制御放出製剤を配する工程を含む。いくつかの実施形態では、前述の方法は、眼の下円蓋のみに本明細書に記載される制御放出製剤を配する工程を含む。いくつかの実施形態では、前述の方法は、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を配する前に下円蓋、上円蓋、またはその両方を露出させるために対象の下眼瞼を開く工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、前述の方法は、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を配する前に下円蓋、上円蓋、またはその両方を露出させるために対象の上眼瞼を開く工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、前述の方法は、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を配する前に下円蓋、上円蓋、またはその両方を露出させるために対象の上眼瞼と下眼瞼を開く工程をさらに含む。図４を参照されたい。いくつかの実施形態では、前述の方法は、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を適用した後に閉じた眼にパッチを当てる、および／またはテーピングを行う工程を含む。本明細書に開示されるいずれの方法でも、臍帯細片、臍帯シート、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３と混合した賦形剤を含む制御放出製剤、またはそれらのあらゆる組合せは、眼表面の疾患、障害、または創傷を処置するために、下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配される。

いくつかの実施形態では、眼表面の疾患または障害は、ドライアイ疾患、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、不応性点状角膜炎、アレルギー性結膜炎、眼の充血、翼状片、炎症性疾患、感染症、またはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、眼創傷は手術創である。いくつかの実施形態では、眼創傷は、光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、レーザー角膜切削形成術（ＬＡＳＩＫ）、角膜のクロスリンキング（ＣＸＬ）、角膜移植、白内障手術、網膜手術、および／または緑内障ドレナージデバイスもしくは濾過胞再建から生じたものである。いくつかの実施形態では、眼創傷は、損傷、熱傷、および／または裂創から生じたものである。

いくつかの実施形態では、眼表面の疾患または障害は、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、軽度もしくは中等度のドライアイ疾患（ＤＥＤ）、慢性眼表面崩壊、上皮治癒、持続性角膜炎、角膜炎、重度ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、全層角膜移植術（ＰＫＰ）、類天疱瘡、角膜縁幹細胞欠損症（ＬＳＣＤ）、スティーヴンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、角膜擦過傷、神経組織栄養角膜、上皮基底膜ジストロフィ（ＥＢＭＤ）を伴う角膜表層切除術、角膜潰瘍、再発性角膜びらん、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糸状角膜炎、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、角膜持続性上皮欠損症（ＰＥＤ）、再発性上皮欠損症、または炎症性間質性炎症である。いくつかの実施形態では、眼表面の疾患または障害は、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、軽度もしくは中等度のドライアイ疾患（ＤＥＤ）、慢性眼表面崩壊、上皮治癒、持続性角膜炎、または角膜炎である。いくつかの実施形態では、眼の疾患または障害は、重度ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、全層角膜移植術（ＰＫＰ）、類天疱瘡、角膜縁幹細胞欠損症（ＬＳＣＤ）、スティーヴンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、角膜擦過傷、神経組織栄養角膜、上皮基底膜ジストロフィ（ＥＢＭＤ）を伴う角膜表層切除術、角膜潰瘍、再発性角膜びらん、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糸状角膜炎、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、角膜持続性上皮欠損症（ＰＥＤ）、再発性上皮欠損症、または炎症性間質性炎症である。

いくつかの実施形態では、臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、あらゆる適切な方法を用いて眼に保持される。いくつかの実施形態では、臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、あらゆる適切な方法を用いて眼の下円蓋、上円蓋、またはその両方に保持される。いくつかの実施形態では、臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、縫合糸、のり、接着剤、またはそれらの組合せを用いて保持される。いくつかの実施形態では、接着剤は、シアノアクリレート、フィブリン、ポリエチレン（ｐｏｌｙｅｔｈｙｅｌｅｎｅ）グリコール、修飾コンドロイチン硫酸、アクリルコポリマー、バイオデンドリマー、またはそれらの組合せを含む。

いくつかの実施形態では、臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出を介して、対象の視神経再生を促進する。いくつかの実施形態では、臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、および／または創傷治癒を促進する。

いくつかの実施形態では、上記方法は、１もしくは複数の追加の治療剤および／または胎児支持組織生成物を、対象の眼の下円蓋、上円蓋、もしくはその両方、角膜表面、および／または周囲組織に適用する工程をさらに含む。いくつかの実施形態では、追加の治療剤は、ステロイド、抗緑内障剤、抗菌物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、あらゆる点眼薬、ドライアイ処置に用いられる薬剤（例えば、シクロスポリン）、またはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、治療薬は、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を眼の組織および／または周囲組織、例えば下円蓋および／または角膜表面に配する前に、眼、例えば、眼の下円蓋、上円蓋、涙点、角膜表面、および／または周囲組織に適用される。いくつかの実施形態では、追加の胎児支持組織生成物は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、またはそれらのあらゆる組合せから得られる。いくつかの実施形態では、追加の胎児支持組織生成物は、シート、細片、糸、ゲル、ホモジネート、抽出物、再構成粉末、またはそれらのあらゆる組合せである。いくつかの実施形態では、眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配される臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、治療用生物学的製剤を涙膜に長期間保持するのを可能にするように構成される。

いくつかの実施形態では、上記方法は、本明細書に開示されるあらゆるサイズ、形状、構成を含む、本明細書に開示される臍帯シートおよび／または制御放出製剤を利用する工程を含む。

いくつかの実施形態では、臍帯シートは、すべて、実質的にすべて、または大半が死滅している細胞を含む。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、代謝活性を備えた細胞を含まない。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、臍帯羊膜および／またはワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、部分的または全体的にワルトンゼリーを欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、部分的または全体的に静脈または動脈を欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯細片は水和される。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、冷凍された臍帯または事前に冷凍した臍帯から得られる。

いくつかの実施形態では、臍帯細片および／または制御放出製剤は、実質的に平坦化される。いくつかの実施形態では、臍帯細片および／または制御放出製剤は、あらゆる形状である。いくつかの実施形態では、臍帯細片および／または制御放出製剤は、半円形状、円形状、矩形状、または管状である。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、糸状である。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、シートである。

いくつかの実施形態では、臍帯細片および／または制御放出製剤は、約０．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、０．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約１ｃｍ、約０．５ｃｍ×約２ｃｍ、約０．５ｃｍ×約３ｃｍ、約０．５ｃｍ×約４ｃｍ、約０．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約１ｃｍ×約０．１ｃｍ、１ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１ｃｍ×約１ｃｍ、約１ｃｍ×約２ｃｍ、約１ｃｍ×約３ｃｍ、約１ｃｍ×約４ｃｍ、約１ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約１．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、１．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約１ｃｍ、約１．５ｃｍ×約２ｃｍ、約１．５ｃｍ×約３ｃｍ、約１．５ｃｍ×約４ｃｍ、約１．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約２ｃｍ×約０．１ｃｍ、２ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２ｃｍ×約１ｃｍ、約２ｃｍ×約２ｃｍ、約２ｃｍ×約３ｃｍ、約２ｃｍ×約４ｃｍ、約２ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約２．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、２．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約１ｃｍ、約２．５ｃｍ×約２ｃｍ、約２．５ｃｍ×約３ｃｍ、約２．５ｃｍ×約４ｃｍ、約２．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約３ｃｍ×約０．１ｃｍ、３ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約３ｃｍ×約１ｃｍ、約３ｃｍ×約２ｃｍ、約３ｃｍ×約３ｃｍ、約３ｃｍ×約４ｃｍ、約３ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯細片は、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

本明細書中のいくつかの実施形態では、眼表面の疾患、障害、または創傷を患う対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に本明細書に記載の臍帯シートを配することにより、眼表面疾患、眼障害、眼創傷、またはそれらのあらゆる組合せを処置する方法が、開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の臍帯シートを用いる本明細書に記載の方法は、利益の改善をもたらす。いくつかの実施形態では、忍容性、臨床的利益、患者の快適性、またはそれらの組合せが改善される。いくつかの実施形態では、忍容性、臨床的利益、患者の快適性、またはそれらの組合せは、少なくともまたは約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または９５％より多く改善される。いくつかの実施形態では、臨床的利益として、視力増加、症状の減少、徴候の減少、および快適性の改善が挙げられるが、これらに限定されるものではない。いくつかの実施形態では、忍容性、臨床的利益、患者の快適性、またはそれらの組合せは、軽度適応症、中等度適応症、または重度適応症において改善される。

眼表面の疾患、障害、および／または創傷を処置するためのキット
本明細書中のいくつかの実施形態では、眼表面疾患、眼障害、および／または眼創傷の処置のためのキットが開示される。いくつかの実施形態では、このキットは、臍帯シートと、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配されることとなる臍帯シートを送達するためのデバイスとを含む。いくつかの実施形態では、キットは、臍帯シートと、および対象の眼の下円蓋のみに配されることとなる臍帯シートを送達するためのデバイスとを含む。いくつかの実施形態では、キットは、制御放出製剤と、対象の眼の下円蓋、上円蓋に、角膜表面上に、または周囲組織上に配されることとなる制御放出製剤を送達するためのデバイスとを含む。いくつかの実施形態では、キットは、臍帯シートと制御放出製剤の両方を含み、ここで、眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配されることとなる臍帯シートと制御放出製剤を送達するために、１または複数のデバイスが使用される。いくつかの実施形態では、キットとともに含まれるデバイスは、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を含有するように構成された少なくとも１つの貯蔵ユニットを含む。いくつかの実施形態では、臍帯シートおよび／または制御放出製剤は、貯蔵ユニット内の溶液中に貯蔵される。

いくつかの実施形態では、上記デバイスは、少なくとも１つの貯蔵ユニットに動作可能に繋がった少なくとも１つのチャネルを含み、このチャネルは、臍帯シートまたは制御放出製剤が、少なくとも１つの貯蔵ユニットからチャネルを通過するように構成される。いくつかの実施形態では、チャネルはそれぞれ開口部を含んでおり、その結果、臍帯シートまたは制御放出製剤、チャネルを通過して開口部を通過し、続いて対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に配される。いくつかの実施形態では、チャネルはそれぞれ開口部を含んでおり、その結果、臍帯シートまたは制御放出製剤は、チャネルを通過して開口部を通過し、続いて対象の眼の下円蓋のみに配される。いくつかの実施形態では、臍帯シートまたは制御放出製剤は、溶液とともに開口部を通過する。いくつかの実施形態では、臍帯シートまたは制御放出製剤は、それぞれの溶液から実質的に分離されてから、開口部を通過する（詳細は後述する）。

いくつかの実施形態では、臍帯シートもしくは制御放出製剤を貯蔵かつ適用するためのデバイスまたはパッケージは、図６に明記するとおりである。図６に示すように、パッケージは、２つのパッケージ材料層（例えば、上層と下層）を含んでおり、この２層の間の空間に、臍帯シートまたは制御放出製剤が配置される。いくつかの実施形態では、生理食塩水などの溶液が組織を適所に保持する。いくつかの実施形態では、パッケージの１つの層は窪みを含む。いくつかの実施形態では、上層が取り除かれると臍帯シートが露出され、パッケージの下層にある窪みが、パッケージが指先に適合するように下層の真下から押されると、臍帯シートが指先上に露出される。次いで、臍帯シートは、指先により円蓋に適用される。

いくつかの実施形態では、臍帯シートもしくは制御放出製剤を貯蔵かつ適用するためのデバイスまたはパッケージは、図７に明記するとおりである。図７に示すように、パッケージは、臍帯シートを適所に保持するマイクロ構造、突起部、または柱（ｐｏｓｔ）を備えたシリコーン台座を含む。シリコーン台座は、下円蓋に直接適用可能な臍帯シートを露出させるように折り重ねることができる（図８）。

いくつかの実施形態では、臍帯シートもしくは制御放出製剤を貯蔵かつ適用するためのデバイスまたはパッケージは、図９に明記するとおりである。図９に示すように、パッケージは、貯蔵溶液の浅いウェルに臍帯シートを含む。パッケージは、パッケージが開くと、下円蓋および組織の一部に適用され得る臍帯シートのうちパッケージに残っている一端が押し出され得るように、流涙設計または穿孔部を含む。

いくつかの実施形態では、パッケージは、臍帯シートを貯蔵し、別のツールを必要とすることなく医師により下円蓋、上円蓋、またはその両方に直接臍帯シートを送達する役割を果たす。いくつかの実施形態では、パッケージは、透明／半透明で、非生物分解性で、丈夫で、非浸出性で、γ線照射により滅菌可能で、生体適合性であり、かつ、それぞれ１．５×０．３ｃｍ寸法の１または２つの臍帯細片を、およそ２００μｌの生理食塩水とともに（密封機構により）包装して室温または低冷凍温度で保管するためのＵＳＰ８７および／またはＩＳＯ１０９９３を満たすものである。いくつかの実施形態では、パッケージは、以下：（１）包装と密封を可能にする開口部、（２）賦形剤でなく臍帯細片が出口を通って貯蔵区画から出るのを可能にする圧搾可能部または操作可能部を設けるように設計される。

いくつかの実施形態では、上記キットは追加の治療剤をさらに含み、ここで、眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、もしくは周囲組織上に臍帯シート、制御放出製剤、および／または追加の治療剤を配するために、１または複数のデバイスが使用される。いくつかの実施形態では、このデバイスは、眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、または周囲組織上に治療剤を配してから、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を適用するように構成される。いくつかの実施形態では、治療剤は、ステロイド、抗緑内障剤、抗菌物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗炎症剤、あらゆる点眼薬、ドライアイ処置に用いられる薬剤（例えば、シクロスポリン）、またはそれらのあらゆる組合せである。

図１は、キットの一部として、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点、角膜表面、または周囲組織に、臍帯シートまたは制御放出製剤を送達するためのデバイス（１００）の実施形態の非限定的な例を表している。いくつかの実施形態では、デバイス（１００）は、臍帯シートまたは制御放出製剤を貯蔵するための貯蔵ユニット（１０１）を含む。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、チャネル（１０３）に動作可能に繋がれることによって、臍帯シートまたは制御放出製剤が、貯蔵ユニット（１０１）からチャネル（１０３）へ進入し通過することが可能になる。いくつかの実施形態では、チャネル（１０３）は開口部（１０５）を有し、この開口部は、臍帯シートまたは制御放出製剤が開口部（１０５）を通過し、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点へ、角膜表面上、または周囲組織上への配置のために送達されるように構成される。いくつかの実施形態では、臍帯シートまたは制御放出製剤は開口部（１０５）から滑り出る。いくつかの実施形態では、臍帯シートまたは制御放出製剤は開口部（１０５）から流出する。

いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）はパウチである。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、その内容物の視認を可能にするため透明である。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）には、穴、裂け目、折り目、または貯蔵ユニット（１０１）の完全性を損なうその他の欠陥がない。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）はポリカプロラクトン、ポリグリコール酸、ポリ（Ｌ－ラクチド）、ポリ乳酸、エチレンプロピレン、オレフィン系熱可塑性エラストマー、ポリアミド熱可塑性エラストマー、シリコーン、ポリスチレン、ポリウレタン、クロロトリフルオロエチレン、フッ素化エチレンプロピレン、パーフルオロアルコキシ、テトラフロオルエチレン、ポリフッ化ビニル、ポリフッ化ビニリデン、ポリスルホン、ポリエステル、ポリブチレンテレフタレート、および／またはポリエチレンテレフタレートを含む。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は末端γ線照射に適合する材料を含む。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は規定された量の緩衝液と、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を保持するようなサイズとされる。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、約１００μＬから約１０００μＬの間の緩衝液と、本明細書に開示される寸法に切断された臍帯シートを保持するようなサイズとされる。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、約１５０μＬから約５００μＬの間の緩衝液と、本明細書に開示される寸法に切断された臍帯シートを保持するようなサイズとされる。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、約２００μＬから約３００μＬの間の緩衝液と、本明細書に開示される寸法に切断された臍帯シートを保持するようなサイズとされる。

いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、臍帯シートもしくは制御放出製剤の移動を容易にするため、および／または臍帯シートもしくは制御放出製剤の乾燥を防ぐために、等張の緩衝剤および／または培地を含む。いくつかの実施形態では、緩衝剤は生理食塩水である。いくつかの実施形態では、緩衝剤および／または培地は、ＰＢＳ、TＲＩＳ－緩衝生理食塩水、ＨＥＰＥＳ－緩衝生理食塩水、リンゲル液、ハルトマン液溶液、ＥＢＳＳ、ＨＢＳＳ、タイロード塩類溶液、ゲイ平衡塩類溶液、ＤＭＥＭ、ＥＭＥＭ、またはＧＭＥＭである。いくつかの実施形態では、培地は保存培地である。

いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、臍帯シートまたは制御放出製剤がチャネルおよび開口部を通過するように配向される。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、臍帯シートまたは制御放出製剤がチャネル開口部を通過して、眼の下円蓋、上円蓋、涙点へ、角膜表面上へ、または周囲組織上へと向かうように、対象の眼の周囲に位置決めされる。いくつかの実施形態では、貯蔵ユニット（１０１）は、臍帯シートまたは制御放出製剤が眼の下円蓋、上円蓋、涙点の中に、角膜表面上へ、または周囲組織上へ正確に位置決めされるように、眼の端から端へ横方向に動かされる。

いくつかの実施形態では、このデバイスはチャネルに動作可能に接続された適用部材をさらに含み、この適用部材は、臍帯シートまたは制御放出製剤を対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点、角膜表面、または周囲組織へ送達するために、臍帯シートまたは制御放出製剤を動かすか、あるいは押すことで、チャネル開口部を通過するように構成される。いくつかの実施形態では、チャネルは、臍帯シートまたは制御放出製剤ならびに対応する緩衝剤および／または培地の眼への送達を制限するために、臍帯シートまたは制御放出製剤の移動を制限するように構成される。いくつかの実施形態では、チャネルは、対応する臍帯シートまたは制御放出製剤から緩衝剤および／または培地を部分的に、または完全に分離するように構成される。いくつかの実施形態では、チャネルは、眼の下円蓋、上円蓋、涙点、角膜表面、または周囲組織への臍帯シートまたは制御放出製剤の送達前、またはその間に、臍帯シートまたは制御放出製剤から緩衝剤および／または培地を分離するように構成される。いくつかの実施形態では、チャネルの中には、多孔性障壁、例えば、緩衝剤および／または培地を通過させるが、臍帯シートまたは制御放出製剤の通過を阻害するように構成されるフィルターを含む。いくつかの実施形態では、多孔性障壁に置かれた孔の１または複数の孔径は、臍帯シートまたは制御放出製剤に予想される最小のサイズよりも小さくなるよう選択される。

いくつかの実施形態では、上記デバイスは、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、もしくは周囲組織上に臍帯シートまたは制御放出製剤を送達するようにチャネルを挿通されるように構成される適用部材を含む。図２Ａは、上記デバイスをより容易に取り扱うためのフィンガーリング（２０１）を備えたチャネル（２０２）の非限定的な例を表している。チャネル（２０２）は、臍帯シートまたは制御放出製剤および対応する緩衝液および／または媒体がチャネルと開口部（２０７）を通過する動作を制限かつ制御するように構成される１または複数の孔（２０３）を有する障壁を含む。いくつかの実施形態では、１または複数の孔（２０３）のうち少なくとも１つは、臍帯シートまたは制御放出製剤がその孔を通過するのを阻害または防止するように構成かつ／あるいはサイズ調整される。いくつかの実施形態では、１または複数の孔は、臍帯シートまたは制御放出製剤がチャネルを通過するのを阻害する。図２Ｂは、チャネル（２０２）を挿通されるとともに、対象の眼（図示せず）の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、もしくは周囲組織上に送達して配するために臍帯シートまたは制御放出製剤（２０５）を開口部（２０７）から押し出すように構成される、適用部材（２０９）の非限定的な例を表している。いくつかの実施形態では、適用部材は、臍帯シートまたは制御放出製剤をチャネル内のあらゆる孔から押し出し、それにより臍帯シートまたは制御放出製剤がチャネル開口部を通過するのを可能にするように構成される。

いくつかの実施形態では、上記デバイスは、蒸気針を含む注射器である。いくつかの実施形態では、注射器は、臍帯シートおよび／または制御放出製剤を含有するためのハウジングを含む。いくつかの実施形態では、上記デバイスは、注射器塗布用具、グラフトシリンジ器機、および／または圧搾可能チューブである。いくつかの実施形態では、グラフト・インプラント・シリンジは、歯科用の骨移植器機である。いくつかの実施形態では、上記デバイスは、対象の眼の下円蓋、上円蓋、涙点に、角膜表面上に、もしくは周囲組織上に臍帯シートおよび／または制御放出製剤を配するための鉗子を含む。

いくつかの実施形態では、本開示のキットは、本明細書に開示されるあらゆるサイズ、形状、構成などを含む、本明細書に開示される臍帯シートおよび／または制御放出製剤を含む。いくつかの実施形態では、このキットは、胎児支持組織の粉末製剤またはゲル製剤を含む。

いくつかの実施形態では、臍帯組織は、すべて、実質的にすべて、または大半が死滅している細胞を含む。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、代謝活性を備えた細胞を欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、臍帯羊膜および／またはワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、部分的または全体的にワルトンゼリーを欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、静脈または動脈を実質的に欠いている。いくつかの実施形態では、臍帯組織は水和される。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、冷凍された臍帯または事前に冷凍した臍帯から得られる。

いくつかの実施形態では、臍帯組織および／または制御放出製剤は、実質的に平坦化される。いくつかの実施形態では、臍帯組織および／または制御放出製剤は、あらゆる形状である。いくつかの実施形態では、臍帯組織および／または制御放出製剤は、半円形状、円形状、矩形状、または管状である。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、細片である。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、糸状である。いくつかの実施形態では、臍帯組織は、シートである。

いくつかの実施形態では、臍帯組織および／または制御放出製剤は、約０．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、０．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約０．５ｃｍ×約１ｃｍ、約０．５ｃｍ×約２ｃｍ、約０．５ｃｍ×約３ｃｍ、約０．５ｃｍ×約４ｃｍ、約０．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１ｃｍ×約０．１ｃｍ、１ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１ｃｍ×約１ｃｍ、約１ｃｍ×約２ｃｍ、約１ｃｍ×約３ｃｍ、約１ｃｍ×約４ｃｍ、約１ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、１．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約１．５ｃｍ×約１ｃｍ、約１．５ｃｍ×約２ｃｍ、約１．５ｃｍ×約３ｃｍ、約１．５ｃｍ×約４ｃｍ、約１．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約２ｃｍ×約０．１ｃｍ、２ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２ｃｍ×約１ｃｍ、約２ｃｍ×約２ｃｍ、約２ｃｍ×約３ｃｍ、約２ｃｍ×約４ｃｍ、約２ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約２．５ｃｍ×約０．１ｃｍ、２．５ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約２．５ｃｍ×約１ｃｍ、約２．５ｃｍ×約２ｃｍ、約２．５ｃｍ×約３ｃｍ、約２．５ｃｍ×約４ｃｍ、約２．５ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約３ｃｍ×約０．１ｃｍ、３ｃｍ×約０．２５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．５ｃｍ、約３ｃｍ×約０．７５ｃｍ、約３ｃｍ×約１ｃｍ、約３ｃｍ×約２ｃｍ、約３ｃｍ×約３ｃｍ、約３ｃｍ×約４ｃｍ、約３ｃｍ×約５ｃｍ、またはこれらよりも大きなサイズである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである。

臍帯を含むキットは、対象の眼表面の疾患、障害、または創傷を処置するために使用できる。眼表面の疾患または障害は、ドライアイ疾患、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、不応性点状角膜炎、アレルギー性結膜炎、眼の充血、翼状片、および炎症性疾患からなる群から選択することができる。創傷は、手術創の可能性がある。創傷は、手術創の可能性がある。いくつかの実施形態では、創傷は、光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、レーザー角膜切削形成術（ＬＡＳＩＫ）、角膜のクロスリンキング（ＣＸＬ）、または緑内障ドレナージデバイスおよび／もしくは濾過胞再建から生じた可能性がある。いくつかの実施形態では、創傷は、損傷、熱傷、および／または裂創から生じたものである。いくつかの実施形態では、眼表面の疾患または障害は、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、軽度もしくは中等度のドライアイ疾患（ＤＥＤ）、慢性眼表面崩壊、上皮治癒、持続性角膜炎、角膜炎、重度ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、全層角膜移植術（ＰＫＰ）、類天疱瘡、角膜縁幹細胞欠損症（ＬＳＣＤ）、スティーヴンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、角膜擦過傷、神経組織栄養角膜、上皮基底膜ジストロフィ（ＥＢＭＤ）を伴う角膜表層切除術、角膜潰瘍、再発性角膜びらん、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糸状角膜炎、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、角膜持続性上皮欠損症（ＰＥＤ）、再発性上皮欠損症、または炎症性間質性炎症である。いくつかの実施形態では、眼表面の疾患または障害は、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、軽度もしくは中等度のドライアイ疾患（ＤＥＤ）、慢性眼表面崩壊、上皮治癒、持続性角膜炎、または角膜炎である。いくつかの実施形態では、眼の疾患または障害は、重度ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、全層角膜移植術（ＰＫＰ）、類天疱瘡、角膜縁幹細胞欠損症（ＬＳＣＤ）、スティーヴンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、角膜擦過傷、神経組織栄養角膜、上皮基底膜ジストロフィ（ＥＢＭＤ）を伴う角膜表層切除術、角膜潰瘍、再発性角膜びらん、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糸状角膜炎、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、角膜持続性上皮欠損症（ＰＥＤ）、再発性上皮欠損症、または炎症性間質性炎症である。

いくつかの実施形態では、臍帯シートは、対象の視神経再生を促進することができる。いくつかの実施形態では、臍帯シートは、外生の生細胞と接触すると、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛を軽減し、および／または創傷治癒を促進する。いくつかの実施形態では、臍帯シートは相同利用（ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ ｕｓｅ）を有する。

いくつかの実施形態では、臍帯生成物キットは、１もしくは複数の治療剤および／または胎児支持組織生成物をさらに含む。治療剤は、ステロイド、抗緑内障剤、抗菌物質、抗真菌剤、抗ウイルス剤、および／または抗炎症剤とすることができる。胎児支持組織生成物は、胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、またはそれらのあらゆる組合せから得ることができる。胎児支持組織生成物は、シート、細片、または糸とすることができる。

特定の用語
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用するとき、単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」は、前後関係から明らかでない限り、複数の指示対象を含む。

また、「および」の使用は、特に明記しない限り、「および／または」を意味する。同様に、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅ）」、「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」、および「含んでいる（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」は互換的であり、限定的なものとして意図されていない。

本明細書で使用するとき、用語「約」は、明示された量に近い量、例えば、その増分を含めて１０％、５％、または１％近い量を表す。

用語「対象」および「個体」は、互換的に使用される。本明細書で使用される場合、この２つの用語は、あらゆる動物、好ましくは、ヒトまたは非ヒトを含む哺乳動物を意味する。患者、対象、および個体という用語は互換的に使用される。これらの用語のいずれも、医療専門家（例えば、医者、看護師、医師助手、看護助手、ホスピスワーカー）の監督を必要とするものと解釈されるべきではない。

本明細書で使用するとき、「胎盤羊膜」（ＰＡＭ）は、胎盤由来の羊膜を意味する。いくつかの実施形態では、ＰＡＭは実質的に単離される。

用語「処置する（ｔｒｅａｔ）」、「処置している（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」、および「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」は、本明細書で使用するとき、疾患もしくは疾病の症状を軽減、減少、または軽快すること、更なる症状を予防すること、症状の根底にある代謝性原因を軽快または予防すること、疾患または疾病を阻害すること、例えば疾患または疾病の進行を停止すること、疾患または疾病を緩和すること、疾患または疾病を退行させること、疾患または疾病により生じる状態を緩和すること、あるいは予防上および／または医療上、疾患または疾病を止めることを含む。

本明細書で使用するとき、「臍帯羊膜」（ＵＣＡＭ）は、臍帯由来の羊膜を意味する。ＵＣＡＭは半透明の膜である。ＵＣＡＭは、多数の層として、上皮層、基底膜、緻密層、繊維芽細胞層、および海綿層を有する。ＵＣＡＭは血管がない、または血液が直接供給されない。いくつかの実施形態では、ＵＣＡＭは実質的に単離される。いくつかの実施形態では、ＵＣＡＭはワルトンゼリーを含む。いくつかの実施形態では、ＵＣＡＭは血管および／または動脈を含む。いくつかの実施形態では、ＵＣＡＭは、ワルトンゼリーならびに、血管および／または動脈を含む。

実施例１：臍帯細片の調製
臍帯組織の冷凍片を入手し、周囲温度で約５分かけて解凍した。臍帯組織は、ラミナー・フロー・フード下、滅菌トレーに移した。臍帯の間質側を下向きにフレーム台紙上に配置して、平坦状にした。１本の鉗子を使用して、組織を取り扱った。無菌技術を実施し、測定ガイドとしてルーラと共にメスを使用して、組織を切断することで、臍帯シートを形成した。図３Ａ～図３Ｃを参照されたい。臍帯シートを、ドライアイスを用いて２５～４３ｋＧｙのγ線照射により滅菌した。

実施例２：臍帯細片を用いたＰＲＫ後処置
約１．５ｃｍ×０．２５ｃｍの臍帯シートを調製する。光学的角膜切除術（ＰＲＫ）を受けた対象の下眼瞼を開き、臍帯シートを下円蓋に配する。臍帯細片は、対象の眼の中に１８日間入れたままにした後、取り除いた。角膜の治癒の経過は、医師によって検査する。

実施例３：臍帯細片を用いたＰＲＫ後の眼の処置に対する研究事例
５月３０日に、患者にレーザー屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）を行った。ＰＲＫの後、神経再生の促進、およびＰＲＫを受けた患者によくみられるドライアイ疾患の予防を補助するために、臍帯シートを両眼の下円蓋に配した。具体的には、０日目に、滅菌技術を用いて臍帯シート（ＮＥＯＸ ＣＯＲＤ ＲＴ生成物）を、長さおよそ１．５ｃｍ×０．２５ｃｍの細片へと切断した。まず、局所麻酔剤を患者の眼に投与した。次に、臍帯細片を患者の両目それぞれの下円蓋に配した。患者は不快感と痛み、異物感のいずれも示さなかった。１日目、臍帯細片が患者の右眼から外れた。次に、２つの臍帯細片を、Ｓｍｉｔｈの右眼の下円蓋に配した。２日目、患者は眼に配した臍帯細片による、痛み、不快感、または異物感のいずれも示さなかったが、左眼の中の１つの細片と、右眼の中の２つの細片との差異を主観的に感じることが可能であると示した。１５日目、患者の眼を評価すると、角膜の外観には何のかすみもなく透明であったこと、眼がＰＲＫ手術から回復したことが認められた。スリットランプ写真およびフルオレセイン染色を使用して、上皮化および角膜表面の完全性を測定した。図５Ａ～図５Ｃは、蛍光を用いて０～２日目に観察した、下円蓋に配した臍帯シートを表す。

実施例４：ドライアイ疾患（ＤＥＤ）に対するＵＣ細片の使用
ＵＣ細片を、難治性ＤＥＤを患った患者の片眼の下円蓋に適用する。１か月間、医師が眼を評価し、未処置の眼と比較した。

実施例５：眼疾患に対するＵＣ細片の使用
ＵＣ細片を、表在点状角膜炎（ＳＰＫ）、軽度もしくは中等度のドライアイ疾患（ＤＥＤ）、慢性眼表面崩壊、上皮治癒、持続性角膜炎、角膜炎、重度ドライアイ疾患（ＤＥＤ）、全層角膜移植術（ＰＫＰ）、類天疱瘡、角膜縁幹細胞欠損症（ＬＳＣＤ）、スティーヴンス・ジョンソン症候群（ＳＪＳ）、角膜擦過傷、神経組織栄養角膜、上皮基底膜ジストロフィ（ＥＢＭＤ）を伴う角膜表層切除術、角膜潰瘍、再発性角膜びらん、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）、糸状角膜炎、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）、角膜持続性上皮欠損症（ＰＥＤ）、再発性上皮欠損症、または炎症性間質性炎症を含む、軽度／中等度および重度の適応症を患った対象に使用した。

実施例３と同様に、ＵＣ細片を調製して用いた。ＵＣ細片を、軽度／中等度および重度の適応症における、忍容性、臨床的利益、使用の容易さ、保持、患者満足度、および医師満足度で評価した。ＵＣ細片を使用した患者から得た統計データは、図１０Ａ～図１０Ｅにおいて確認される。軽度／中等度のドライアイ疾患に関しては、ＵＣ細片は、臨床的に有効であること、挿入が容易であること、眼に忍容性があること、患者／医師満足度が高いこと、患者が示す全ての重要な特質（視力低下、症状、徴候）を改善することが認められた（図１０Ａ～図１０Ｂ）。ＵＣ細片は、２９％の症例において、眼の中に１日未満しか残らないことが認められた（図１０Ａ）。同様の結果を、重度の適応症に対して観察した（図１０Ｃ～図１０Ｅ）。

この実施例によって、ＵＣ細片は使用が容易であり、臨床的に有効であることが示された。

本発明の好ましい実施形態が本明細書中で示され、記載されてきたが、このような実施形態はほんの一例として提供されているに過ぎないことは当業者に明らかであろう。多数の変形、変更、および置換えは、本発明から逸脱することなく、当業者によって現在想到されるものである。本明細書に記載される、本発明の実施形態の様々な代案は、本発明の実施に利用可能であることを理解されたい。以下の特許請求の範囲は、本発明の範囲を定義するものであり、この特許請求の範囲およびその等価物の範囲内の方法と構造は、それにより包含されることが、意図されている。

Claims (98)

1. 眼表面の疾患、障害、および／または創傷を処置する方法であって、
   眼表面の疾患、障害、および／または創傷を患う対象の眼の下円蓋、上円蓋、またはその両方に、約０．７５～２．５ｃｍ×約０．０５～０．７５ｃｍの臍帯シートを配する工程
   を含む方法。
2. 前記臍帯シートを配する前に前記下円蓋、前記上円蓋、またはその両方を露出させるために対象の上眼瞼、下眼瞼、またはその両方を開く工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
3. 閉じた眼にパッチを当てるかテーピングを行う工程をさらに含む、請求項１または２に記載の方法。
4. 胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を、前記眼に投与する工程をさらに含む、請求項１から３のいずれか一項に記載の方法。
5. ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組み合わせからなる群から選択される治療剤を、前記眼に投与する工程をさらに含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の方法。
6. 前記治療剤または前記胎児支持組織生成物が、前記眼の下円蓋、前記眼の角膜表面、および／または前記眼の周囲組織に投与される、請求項４または５に記載の方法。
7. 前記治療剤または前記胎児支持組織生成物が、前記臍帯シートを配する前に投与される、請求項４または５に記載の方法。
8. 前記臍帯シートが臍帯羊膜およびワルトンゼリーを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の方法。
9. 前記臍帯シートが、冷凍された、または事前に冷凍された臍帯から得られる、請求項１から８のいずれか一項に記載の方法。
10. 前記臍帯シートが、代謝活性を備えた細胞を含まない、または代謝活性を備えた細胞を実質的に含まない、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
11. 前記臍帯シートが、すべて、実質的にすべて、または大半が死滅している細胞を含む、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
12. 前記臍帯シートが生細胞を実質的に含まない、請求項１から９のいずれか一項に記載の方法。
13. 前記臍帯シートが赤血球を実質的に含まない、請求項１から１２のいずれか一項に記載の方法。
14. 前記臍帯シートが静脈または動脈を実質的に含まない、請求項１から１３のいずれか一項に記載の方法。
15. 前記臍帯シートが、凍結保存されるか、最終的に滅菌されるか、またはその両方である、請求項１から１４のいずれか一項に記載の方法。
16. 前記臍帯シートが実質的に平坦状である、請求項１から１５のいずれか一項に記載の方法。
17. 前記臍帯シートが半円形状である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
18. 前記臍帯シートが円形状である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
19. 前記臍帯シートが矩形状である、請求項１から１６のいずれか一項に記載の方法。
20. 前記臍帯シートが約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
21. 前記臍帯シートが約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである、請求項１から１９のいずれか一項に記載の方法。
22. 前記臍帯シートが水和される、請求項１から２１のいずれか一項に記載の方法。
23. 前記臍帯シートが、対象の視神経再生を促進する、請求項１から２２のいずれか一項に記載の方法。
24. 前記臍帯シートが、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、創傷治癒を促進する、またはそれらの組合せである、請求項１から２３のいずれか一項に記載の方法。
25. 前記眼の疾患または障害が、ドライアイ疾患、再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、不応性点状角膜炎、アレルギー性結膜炎、翼状片、感染症、および炎症性疾患からなる群から選択される、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
26. 前記創傷が手術創である、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
27. 前記創傷が、光学的角膜切除術（ＰＲＫ）、ＬＡＳＩＫ、角膜のコラーゲンクロスリンキング（ＣＸＬ）、角膜移植、白内障手術、網膜手術、または緑内障ドレナージデバイスもしくは濾過胞再建から生じたものである、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
28. 前記創傷が、損傷、熱傷、裂創、切開、または剥離から生じたものである、請求項１から２４のいずれか一項に記載の方法。
29. 処置を必要とする対象の眼表面の疾患、障害、または創傷の処置のためのキットであって、
    臍帯シートと、
    前記対象の眼の角膜表面上に、下円蓋、上円蓋に、または周囲組織上に前記臍帯シートを配するためのデバイスと
    を含み、前記デバイスは、
    前記臍帯シートを溶液中に含有するように構成された貯蔵ユニット、および
    前記貯蔵ユニットと動作可能に繋がったチャネル
    を含み、前記チャネルは、前記臍帯シートが前記貯蔵ユニットから前記チャネルを通過して前記チャネルの開口部を通過するように構成されており、前記開口部は、前記眼の角膜表面、下円蓋、上円蓋、または周囲組織上に前記臍帯シートを送達するように構成されている、キット。
30. 前記デバイスが、前記チャネルと動作可能に繋がった適用部材をさらに含んでおり、該適用部材は、前記臍帯シートを押し進めて前記開口部を通過させるように構成されている、請求項２９に記載のキット。
31. 前記チャネルが、１または複数の孔を含む多孔性の障壁を含み、該１または複数の孔のうち少なくとも１つの孔は、前記臍帯シートが孔を通過するのを妨げるようなサイズとされる、請求項２９から３０のいずれか一項に記載のキット。
32. 前記臍帯シートが、代謝活性を備えた細胞を含まない、または該代謝活性を備えた細胞を実質的に含まない、請求項２９から３１のいずれか一項に記載のキット。
33. 前記臍帯シートが、実質的にすべて死滅している細胞を含む、請求項２９から３２のいずれか一項に記載のキット。
34. 前記臍帯シートが実質的に平坦状である、請求項２９から３３のいずれか一項に記載のキット。
35. 前記臍帯シートが半円形状である、請求項２９から３４のいずれか一項に記載のキット。
36. 前記臍帯シートが円形状である、請求項２９から３４のいずれか一項に記載のキット。
37. 前記臍帯シートが矩形状である、請求項２９から３４のいずれか一項に記載のキット。
38. 前記臍帯シートが臍帯羊膜およびワルトンゼリーを含む、請求項２９から３７のいずれか一項に記載のキット。
39. 前記臍帯シートが、冷凍された、または事前に冷凍された臍帯から得られる、請求項２９から３８のいずれか一項に記載のキット。
40. 前記臍帯シートが水和される、請求項２９から３９のいずれか一項に記載のキット。
41. 前記臍帯シートが対象の視神経再生を促進する、請求項２９から４０のいずれか一項に記載のキット。
42. 前記臍帯シートが、抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、創傷治癒を促進する、またはそれらの組合せである、請求項２９から４１のいずれか一項に記載のキット。
43. ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤をさらに含む、請求項２９から４２のいずれか一項に記載のキット。
44. 胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物をさらに含む、請求項４３に記載のキット。
45. 処置を必要とする対象の眼表面の疾患、障害、または創傷を処置する方法であって、
    前記対象の眼の下円蓋、上円蓋、角膜表面に、単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３と、ＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出用の賦形剤とを含む組成物を投与する工程
    を含む方法。
46. 前記制御放出用の賦形剤が生分解性ポリマーを含む、請求項４５に記載の方法。
47. 前記制御放出用の賦形剤が、コラーゲン、セルロース、キトサン、ＰＥＧ、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（乳）酸、ポリ（乳－ｃｏ－グリコール）酸、またはそれらの組合せを含む、請求項４６に記載の方法。
48. 前記組成物が、下円蓋、上円蓋、または角膜表面に適合する、請求項４５から４７のいずれか一項に記載の方法。
49. 前記組成物が透明または半透明である、請求項４５から４８のいずれか一項に記載の方法。
50. 前記組成物が固形または半固形である、請求項４５から４９のいずれか一項に記載の方法。
51. 前記組成物が開口部を含む、請求項５０に記載の方法。
52. 前記組成物が半円形状である、請求項５０または５１に記載の方法。
53. 前記組成物が円形状である、請求項５０または５１に記載の方法。
54. 前記組成物が矩形状である、請求項５０または５１に記載の方法。
55. 前記組成物が、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである、請求項５０から５４のいずれか一項に記載の方法。
56. 前記組成物が約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである、請求項５０から５４のいずれか一項に記載の方法。
57. ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程をさらに含む、請求項４５から５６のいずれか一項に記載の方法。
58. 胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程をさらに含む、請求項４５から５６のいずれか一項に記載の方法。
59. 前記治療剤または胎児支持組織が、眼の下円蓋、眼の上円蓋、眼の角膜表面、および／または眼の周囲組織に投与される、請求項５７または５８に記載の方法。
60. 前記治療剤または前記胎児支持組織が前記組成物より前に投与される、請求項５７から５９のいずれか一項に記載の方法。
61. 単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３複合体と制御放出用の賦形剤とを含む組成物であって、角膜表面に適合するか、またはヒトの眼の下円蓋、上円蓋、もしくはその両方に合うように構成される、組成物。
62. 抗炎症性であり、抗瘢痕化性であり、抗血管新生性であり、抗接着性であり、疼痛軽減性であり、創傷治癒を促進する、またはそれらの組合せである、請求項６１に記載の組成物。
63. 前記制御放出用の賦形剤が生分解性ポリマーを含む、請求項６１または６２に記載の組成物。
64. 前記制御放出用の賦形剤が、コラーゲン、セルロース、キトサン、ＰＥＧ、ポリ（Ｎ－イソプロピルアクリルアミド）、ポリ（乳）酸、ポリ（乳－ｃｏ－グリコール）酸、またはそれらの組合せを含む、請求項６３に記載の組成物。
65. 前記組成物が透明または半透明である、請求項６１から６４のいずれか一項に記載の組成物。
66. 前記組成物が固形または半固形である、請求項６１から６５のいずれか一項に記載の組成物。
67. 平坦状または実質的に平坦状である、請求項６６に記載の組成物。
68. 開口部を含む、請求項６６または６７に記載の組成物。
69. 半円形状である、請求項６６から６８のいずれか一項に記載の組成物。
70. 円形状である、請求項６６から６８のいずれか一項に記載の組成物。
71. 矩形状である、請求項６６から６８のいずれか一項に記載の組成物。
72. 約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである、請求項６６から７１のいずれか一項に記載の組成物。
73. 約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである、請求項６６から７１のいずれか一項に記載の組成物。
74. 対象の眼表面の疾患、障害、または創傷の処置のためのキットであって、
    単離されたＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３およびＨＣ－ＨＡ／ＰＴＸ３の制御放出用の賦形剤を含む組成物と、
    対象の眼の角膜表面上に、下円蓋、上円蓋に、または周囲組織上に組成物を配するためのデバイスと
    を含み、前記デバイスは、
    組成物を溶液中に含有するように構成された貯蔵ユニット、および
    前記貯蔵ユニットと動作可能に繋がったチャネル
    を含み、前記チャネルは、組成物が貯蔵ユニットからチャネルを通過してチャネルの開口部を通過するように構成され、該開口部は、眼の角膜表面、下円蓋、上円蓋、または周囲組織上に組成物を送達するように構成されている、キット。
75. 前記デバイスが、前記チャネルに動作可能に繋がれた適用部材をさらに含み、該適用部材は、眼の角膜表面、下円蓋、上円蓋、または周囲組織上に配されるように臍帯シートを押し進めて前記開口部を通過するように構成される、請求項７４に記載のキット。
76. 前記チャネルが、１または複数の孔を含む多孔性の障壁を含み、該１または複数の孔のうち少なくとも１つの孔は、前記臍帯シートが孔を通過するのを妨げるようなサイズとされる、請求項７４または７５に記載のキット。
77. 前記組成物が固形または半固形である、請求項７４から７６のいずれか一項に記載のキット。
78. 前記組成物が半円形状である、請求項７７に記載のキット。
79. 前記組成物が円形状である、請求項７７に記載のキット。
80. 前記組成物が矩形状である、請求項７７に記載のキット。
81. 前記組成物が対象の視神経再生を促進する、請求項７４から８０のいずれか一項に記載のキット。
82. ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤をさらに含む、請求項７４から８１のいずれか一項に記載のキット。
83. 胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物をさらに含む、請求項７４から８２のいずれか一項に記載のキット。
84. 眼表面の疾患、障害、および／または創傷を処置する方法であって、
    眼表面の疾患、障害、および／または創傷を患う対象の眼の下円蓋のみに、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍの臍帯シートを配する工程
    を含む方法。
85. 前記臍帯シートを配する前に前記下円蓋を露出させるために前記対象の上眼瞼、下眼瞼、またはその両方を開く工程をさらに含む、請求項８４に記載の方法。
86. 閉じた眼にパッチを当てるかテーピングを行う工程をさらに含む、請求項８４または８５に記載の方法。
87. 胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程さらに含む、請求項８４から８６のいずれか一項に記載の方法。
88. ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程をさらに含む、請求項８４から８７のいずれか一項に記載の方法。
89. 前記臍帯シートが約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである、請求項８４から８８のいずれか一項に記載の方法。
90. 再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、または不応性点状角膜炎を伴うＯＳＤを処置する方法であって、
    再発性角膜びらん（ＲＣＥ）、角膜潰瘍、単純ヘルペス角膜炎（ＨＳＫ）、または不応性点状角膜炎を伴うＯＳＤを患う対象の眼の下円蓋、上円蓋、またはその両方に臍帯シートを配する工程
    を含む方法。
91. 前記臍帯シートを配する前に前記下円蓋、前記上円蓋、またはその両方を露出させるために前記対象の上眼瞼、下眼瞼、またはその両方を開く工程をさらに含む、請求項９０に記載の方法。
92. 閉じた眼にパッチを当てるかテーピングを行う工程をさらに含む、請求項９０または９１に記載の方法。
93. 胎盤羊膜、胎盤、絨毛膜、臍帯、臍帯羊膜、およびそれらの組合せからなる群から選択される胎児支持組織生成物を眼に投与する工程さらに含む、請求項９０から９２のいずれか一項に記載の方法。
94. ステロイド、抗菌物質、抗炎症剤、ドライアイ処置剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、抗緑内障剤、およびそれらのあらゆる組合せからなる群から選択される治療剤を眼に投与する工程をさらに含む、請求項９０から９３のいずれか一項に記載の方法。
95. 前記治療剤または前記胎児支持組織生成物が、眼の下円蓋、上円蓋、眼の角膜表面、および／または眼の周囲組織に投与される、請求項９３または９４に記載の方法。
96. 前記治療剤または前記胎児支持組織生成物が、臍帯シートを配する前に投与される、請求項９３または９４に記載の方法。
97. 前記臍帯シートが、約１．０～２．０ｃｍ×約０．１～０．５ｃｍである、請求項９０から９６のいずれか一項に記載の方法。
98. 前記臍帯シートが約１．５ｃｍ×約０．３ｃｍである、請求項９０から９６のいずれか一項に記載の方法。

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