JP2023513350A - がんまたは腫瘍の治療の方法 - Google Patents

Abstract

本発明は、対象におけるがんおよび／または腫瘍の増悪を治療、予防または遅延させる方法であって、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）またはこの抗原ペプチドに結合する特性を有する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾免疫応答性細胞を含む治療レジメンを対象に適用するステップを含む方法、特には、肝細胞癌（ＨＣＣ）の治療に関する。

Description

本発明は、対象におけるがんおよび／または腫瘍の増悪を治療、予防または遅延させる方法であって、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）またはこの抗原ペプチドに結合する特性を有する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾免疫応答性細胞を含む治療レジメンを対象に適用するステップを含む方法、特には、肝細胞癌（ＨＣＣ）の治療に関する。

肝細胞癌（ＨＣＣ）は、世界的に５番目に最も一般的ながんの形態であり、３番目に最も一般的ながん関連死の原因である。この疾患は、硬化性肝疾患と密接に相関することが多い。肝細胞癌は、すべての悪性疾患における５年生存率が最も低く報告されたもののうちの１つであり、世界的な年間発生率は、１２０万件であり、ＢおよびＣ型肝炎有病率と同時発生的に増加すると見られている。

外科切除は、現在、標準的な治癒的戦略であると考えられているが、硬変を有する患者において、高い再発リスクと肝臓代謝不全のさらなるリスクとを有する。切除は、単一結節、良好な肝機能を有し、硬変を基礎疾患に有しない（チャイルド・ピュークラスＡに分類される）わずかな患者のための治療選択肢として制限されており、切除は、多発性腫瘍を有する患者における選択肢としては、あまり考えられていない。高周波アブレーション（ＲＦＡ）のような代替療法は、小腫瘍のための一次治療として、目に見える利点は提供しない。経動脈化学塞栓法（ＴＡＣＥ）は、現在、中間期ＨＣＣを有する患者、代償性肝機能（チャイルドＢ最大８点）、大型の単一結節（＜５ｃｍ）、または血管浸潤もしくは肝外延展のエビデンスを有しない多巣性ＨＣＣを有する患者のための標準治療であると考えられている。これは、組織または器官への血液供給を遮断または遅延させる侵襲療法である。これを使用して腫瘍への血流を遮断することにより、がん細胞の死滅を試みることができる。ＴＡＣＥは、１５％～６２％の患者において部分奏効を達成することが報告されており、可変の腫瘍量および肝機能を有する、すなわち、チャイルド・ピュークラスＡまたは一部がＢ、ほとんどがクラスＢである患者の不均一集団を含む、中間期ＨＣＣの治療において使用されている。また、放射線塞栓療法または選択的内部放射線療法（ＳＩＲＴ）は、中間期ＨＣＣの代替治療選択肢として使用されている。

血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、上皮増殖因子、Ｒａｓマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）、インスリン様増殖因子受容体、肝細胞増殖因子／ｃ－ＭＥＴ、ＰＩ３Ｋ／ＰＴＥＮ／Ａｋｔ／ラパマイシン哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）およびＷｎｔ／βカテニン経路を含むＨＣＣ病態形成に共通する複数のシグナル伝達経路の低分子阻害剤を使用する一般的化学療法および標的全身化学療法では、進行性ＨＣＣおよび中期のＨＣＣに対する臨床試験が行われている。適切な試験治療化合物としては、スニチニブ（ＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦＲを標的とする多種キナーゼ遮断剤）、線維芽細胞増殖因子受容体およびＶＥＧＦＲの選択的阻害剤であるブリバニブ、ｍＴＯＲ阻害剤であるエベロリムス、ＭＥＴ受容体チロシンキナーゼ阻害剤であるチバンチニブ、ＶＥＧＦＲおよびＰＤＧＦＲを標的とする多種キナーゼ阻害剤であるリニファニブ、ならびにＲａｓ／ＭＡＰＫ経路および多くの細胞表面チロシン（ＶＥＧＦ受容体、血小板由来増殖因子受容体－（ＰＤＧＦＲ－）β、ＲＥＴ、ｃ－ＫＩＴおよびＦＭＳ様チロシンキナーゼ３）の阻害剤であるソラフェニブが挙げられる。ＰＤ１阻害剤を使用する免疫療法においても、ＨＣＣに対する臨床試験が行われている。加えて、レゴラフェニブでは、ＶＥＧＦＲ２－ＴＩＥ２チロシンキナーゼの二重標的化による阻害が実証され、カボザンチニブは、チロシンキナーゼｃ－ＭｅｔおよびＶＥＧＦＲ２の阻害剤であり、ＡＸＬおよびＲＥＴも阻害する。

したがって、特には、一次療法または手術後の失敗または再発がある場合、好ましくは、治療により毒性または副作用、例えば、化学療法剤の全身毒性のリスクが最小化または低下している場合であっても、がん特異的であり、中期または末期のがんまたは単発もしくは多発性固形腫瘍を治療可能であるＨＣＣの治療のような、腫瘍および／またはがん治療のための療法を提供することが望ましい。

本発明は、ＡＦＰに結合し、特には、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）に結合する特性を有する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾Ｔ細胞を含む治療レジメンを対象に適用するステップを含む、対象におけるがんおよび／または腫瘍の治療に関し、これを例証する。

ＡＦＰは、胎生期に発現し、胎児血清の主要な成分である。発生期には、タンパク質は、卵黄嚢および肝臓により非常に高いレベルで生成され、後に抑制される。ＡＦＰ発現は、肝細胞癌において頻繁に再活性化され、高レベルのタンパク質は、この疾患の診断マーカーとして使用される。ＡＦＰに由来する４つの公知のエピトープ：ＡＦＰ１５８（配列番号５１の残基１５８～１６６）、ＡＦＰ１３７（配列番号５１の残基１３７～１４５）、ＡＦＰ３２５（配列番号５１の残基３２５～３３４）およびＡＦＰ５４２（配列番号５１の残基５４２～５５０）が存在する。特には、ＨＬＡ－Ａ２拘束性ＡＦＰ１５８ペプチドＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）は、新規の免疫治療介入に適する標的となっており、このペプチドは、天然にプロセシングされ、肝癌株から単離されている。

本発明の第１の態様によれば、対象におけるがんおよび／または腫瘍の増悪を治療、予防または遅延させる方法であって、アルファ－フェトプロテインまたはこのＡＦＰ抗原ペプチドに結合する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾免疫応答性細胞を含む治療レジメンを対象に適用するステップを含む方法を提供する。

本発明によれば、ＴＣＲは、アルファ－フェトプロテインまたはこの抗原ペプチド、例えば、ヒトアルファ－フェトプロテインもしくは配列番号５１のアルファ－フェトプロテインまたはこの抗原ペプチドに結合し得る。ＴＣＲは、
（ａ）配列番号５１の残基１５８～１６６（ＡＦＰ１５８）、
（ｂ）配列番号５１の残基１３７～１４５（ＡＦＰ１３７）、
（ｃ）配列番号５１の残基３２５～３３４（ＡＦＰ３２５）、
（ｄ）配列番号５１の残基５４２～５５０（ＡＦＰ５４２）または
（ｅ）残基ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）
を含む抗原ペプチドに結合し得る。

特異的に結合するＴＣＲ
本発明によれば、異種ＴＣＲおよび異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む修飾免疫応答性細胞は、がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原、例えば、アルファ－フェトプロテインまたはこれらのペプチド抗原に結合もしくは高親和性で結合ならびに／または特異的および／もしくは選択的に結合し得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、がん症状、腫瘍および／もしくはがんと関連し、ならびに／または腫瘍もしくはがん細胞もしくは組織により提示される、アルファ－フェトプロテインまたはこれらのペプチド抗原に結合するか、または特異的および／もしくは選択的に結合し得る。

本発明によれば、がん症状、腫瘍および／またはがんは、ＡＦＰを発現するがんおよび／もしくは腫瘍であるか、またはこれらのペプチド抗原を発現する。

したがって、本発明による使用のための異種ＴＣＲは、ＡＦＰ、このペプチド抗原、または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）を含むペプチド抗原に特異的に結合し、および／または高親和性で結合し、および／または選択的に結合して、任意選択で、ペプチド提示分子、例えば、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）もしくはＨＬＡ、任意選択で、クラスＩもしくはＩＩと、例えば、ＨＬＡ－Ａ２と、またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２もしくはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７、好ましくは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１もしくはＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２から選択されるペプチド提示分子と複合体を形成することが可能である。

あるいは、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）および異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を含む修飾免疫応答性細胞は、内因的に発現する腫瘍細胞表面アルファ－フェトプロテインまたはこのペプチド抗原に結合するか、または特異的および／もしくは選択的に結合し、ならびに／または高親和性で結合してもよく、ここで、任意選択で、結合は、ペプチド提示または抗原提示分子との複合体、例えば、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）または主要組織適合複合体クラス関連タンパク質（ＭＲ）１としての細胞表面抗原の提示に非依存的である。したがって、本発明による使用のための異種ＴＣＲは、ＡＦＰ、このペプチド抗原、または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）を含むペプチド抗原に、ペプチド提示分子との複合体の形成を伴った提示なしに、特異的および／もしくは選択的に結合し、ならびに／または高親和性で結合することが可能であり得る。

特異性は、異種ＴＣＲと特異的標的がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原との間の結合の強度を説明し、特異性は、受容体－リガンド系における解離定数、Ｋｄ、結合および非結合の状態間の比により説明し得る。加えて、結合可能ながんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原、異種ＴＣＲの差異が少ないほど、これらの結合特異性は高まる。したがって、異種ＴＣＲは、１０、９、８、７、６、５、４、３、２種未満の異なるがんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原に、任意選択で、高親和性で、結合し得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、０．０１μΜ～１００μΜ、０．０１μΜ～５０μΜ、０．０１μΜ～２０μΜ、０．０５μΜ～１０μΜ、０．０５μΜ～２０μΜの解離定数、または０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１μΜ、０．１５μΜ、０．２μΜ、０．２５μΜ、０．３μΜ、０．３５μΜ、０．４μΜ、０．４５μΜ、０．５μΜ、０．５５μΜ、０．６μΜ、０．６５μΜ、０．７μΜ、０．７５μΜ、０．８μΜ、０．８５μΜ、０．９μΜ、０．９５μΜ、１．０μΜ、１．５μΜ、２．０μΜ、２．５μΜ、３．０μΜ、３．５μΜ、４．０μΜ、４．５μΜ、５．０μΜ、５．５μΜ、６．０μΜ、６．５μΜ、７．０μΜ、７．５μΜ、８．０μΜ、８．５μΜ、９．０μΜ、９．５μΜもしくは１０．０μΜの解離定数；または１０μΜ～１０００μΜ、１０μΜ～５００μΜ、５０μΜ～５００μΜ、または１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００μΜ、１５０μΜ、２００μΜ、２５０μΜ、３００μΜ、３５０μΜ、４００μΜ、４５０μΜもしくは５００μΜの解離定数で、結合するか、または特異的に結合するか、または高親和性で結合してもよく、任意選択で表面プラズモン共鳴により、任意選択で、２５℃で、任意選択で、６．５～６．９または７．０～７．５のｐＨで測定する。解離定数、Ｋ_Ｄまたはｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎは、解離速度定数ｋ_ｏｆｆおよび結合速度定数ｋ_ｏｎを実験的に測定することにより決定し得る。ＴＣＲ解離定数は、可溶型のＴＣＲを使用して測定してもよく、ここで、ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含む。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、０．０１～０．０５秒、０．０５秒～０．１秒、０．１～０．５秒、０．５～１．０秒、１～１．５秒、１．５～２秒、または２～２．５秒の半減期（Ｔ１／２）で結合するか、または特異的に結合し得る。

本発明によれば、ＴＣＲは、配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）を含むペプチド抗原とＨＬＡ－Ａ２との複合体に結合する特性を有してもよく、複合体に対して約１μΜ～約２１μΜのＫ_Ｄを有してもよく、および／または複合体に対して約０．５秒または０．５秒未満～約２秒の範囲の結合半減期（Ｔ１／２）を有し得る。ＴＣＲの親和性が倍増すると、Ｋ_Ｄが半減することが理解される。Ｔ１／２は、ｌｎ２を解離速度（ｋ_ｏｆｆ）で割ったものとして算出する。したがって、Ｔ１／２が倍増すると、ｋ_ｏｆｆが半減する。ＴＣＲのＫ_Ｄおよびｋ_ｏｆｆ値は通常、可溶型、すなわち、切断して細胞質および膜貫通ドメイン残基を除去した形態のＴＣＲに対して測定する。好ましい実施形態では、このような測定は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ社）を使用して行う。Ｋ_Ｄは、解離速度定数ｋ_ｏｆｆおよび結合速度定数ｋ_ｏｎを実験的に測定することにより決定し得る。平衡定数Ｋ_Ｄは、ｋ_ｏｆｆ／ｋ_ｏｎとして算出する。

本発明によれば、ＴＣＲ結合は、アルファ－フェトプロテインまたはこのペプチド抗原に対して、近縁のがんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原配列と比較して選択的であり得る。近縁のがんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原配列は、類似または同一の長さの配列であってもよく、および／または類似数または同一数のアミノ酸残基を有し得る。近縁のペプチド抗原配列は、５０もしくは６０もしくは７０もしくは８０もしくは９０～９５もしくは９８％の同一性、好ましくは、８０～９０％の同一性を共有してもよく、および／または１、２、３もしくは４つのアミノ酸残基が異なり得る。近縁のペプチド配列は、配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）のポリペプチド配列に由来し得る。好ましくは、ＴＣＲ結合は、アルファ－フェトプロテインまたはこのペプチド抗原に対して、近縁の抗原またはこのペプチド抗原配列と比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、２５０、５００、７５０、１０００、２５００、５０００、７５００または１００００倍強力である。

選択的結合は、異種ＴＣＲが、１種のがんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原に、別の抗原と比較してより高い親和性で結合することを表す。選択的結合は、１種のリガンド抗原による、異種ＴＣＲと複合体を形成した別のリガンド抗原の置換についての平衡定数により表す。

本発明によれば、がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原、例えば、ＡＦＰ、このペプチド抗原、または配列ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）を有するＡＦＰペプチド抗原に対して、修飾免疫応答性細胞、例えば、修飾Ｔ細胞は、異種ＴＣＲを欠くか、または別の異種ＴＣＲを有する免疫応答性細胞と比較して、さらなる特異性および／または選択性および／または親和性により結合する、異種ＴＣＲを発現するように修飾し得る。

結合親和性は、平衡方法（例えば、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）またはラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ））または動態（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ（商標）解析）により判定し得る。また、ＴＣＲ結合は、高結合活性であってもよく、ここで、結合活性は、例えば、その相互作用の結合価を考慮した、複数部位における２つの分子の相互の結合の強度の和である。本発明によれば、がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原、あるいは腫瘍またはがん細胞および／または組織により提示され、異種ＴＣＲにより認識されたがんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原に対する親和性および／または結合活性の向上を、免疫応答性細胞によって、異種ＴＣＲを欠くか、または別の異種ＴＣＲを有する免疫応答性細胞と比較して実証し得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞、例えば、修飾Ｔ細胞は、病状またはがん症状、がんおよび／または腫瘍に罹患している対象、患者またはがん患者の腫瘍細胞および／もしくは組織ならびに／またはがん細胞および／もしくは組織に結合するか、または特異的に結合する、異種ＴＣＲを発現するように修飾し得る。対象、患者またはがん患者は、本発明による修飾免疫応答性細胞または修飾Ｔ細胞またはこれらの集団により引き続き治療し得る。修飾免疫応答性細胞または修飾Ｔ細胞を用いた本発明による治療に適するがん患者は、腫瘍および／またはがんを有する個人または対象から腫瘍および／またはがん細胞の試料を得るステップと、がん細胞を、修飾免疫応答性細胞により発現するＴＣＲに結合する細胞として同定するステップとを含む方法により同定し得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、ペプチド提示分子、例えば、がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原を提示または呈するＨＬＡ、すなわち、がんおよび／または腫瘍抗原のペプチド断片（ｐＨＬＡ）に結合および／または特異的に結合および／または選択的に結合してもよく、ここで、ＨＬＡは、そのすべてがＨＬＡクラス１もしくはこの特異的アレルであるＭＨＣクラスＩ（Ａ、ＢおよびＣ）に対応するか、またはＨＬＡは、ＭＨＣクラスＩＩ（ＤＰ、ＤＭ、ＤＯ、ＤＱおよびＤＲ）もしくはこの特異的アレルに対応し、好ましくは、ＨＬＡはクラス１であり、好ましくは、アレルはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７、好ましくは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２である。あるいは、異種ＴＣＲは、ＨＬＡにより提示または呈されていない、がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原、例えば、ＡＦＰまたはこのペプチド抗原に結合および／または特異的に結合および／または選択的に結合し得る。

好ましくは、異種ＴＣＲは、免疫応答性細胞により天然に発現しない（すなわち、ＴＣＲは、外因性または異種性である）。異種ＴＣＲは、αβＴＣＲヘテロ二量体を含み得る。異種ＴＣＲは、組換えまたは合成または人工ＴＣＲ、すなわち、天然に存在しないＴＣＲであり得る。例えば、異種ＴＣＲは、特定のがんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原に対するこの親和性または結合活性が向上するように改変し得る（すなわち、親和性増強ＴＣＲまたは特定ペプチド増強親和性受容体（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲ）。親和性増強ＴＣＲまたは（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲは、天然に生じるＴＣＲと比較して１つまたは複数の突然変異を、例えば、ＴＣＲαおよびβ鎖の可変領域の高頻度可変相補性決定領域（ＣＤＲ）における１つまたは複数の突然変異を含み得る。このような突然変異により、任意選択で、腫瘍および／またはがん細胞により発現する場合、腫瘍抗原のペプチド断片を呈するＭＨＣに対するＴＣＲの親和性が向上し得る。親和性増強または成熟ＴＣＲを生成する、適する方法は、ファージまたは酵母ディスプレイを使用するＴＣＲ突然変異体のライブラリーのスクリーニングを含み、当技術分野において周知である（例えば、Robbins et al J Immunol (2008) 180(9):6116; San Miguel et al (2015) Cancer Cell 28 (3) 281-283; Schmitt et al (2013) Blood 122 348-256; Jiang et al (2015) Cancer Discovery 5 901を参照）。好ましい親和性増強ＴＣＲは、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）またはＡＦＰのペプチド抗原またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）またはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むＡＦＰのペプチド抗原を発現する腫瘍および／またはがん細胞に結合し得る。

親ＴＣＲ
本発明によれば、異種ＴＣＲは、配列番号２のα鎖参照アミノ酸配列もしくはこのバリアントおよび／または配列番号３のβ鎖参照アミノ酸配列もしくはこのバリアントを含み得るＡＦＰ ＴＣＲであり得る。バリアントは、参照アミノ酸配列に対する少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。ＴＣＲは、配列番号２１のα鎖参照ヌクレオチド配列またはこのバリアントおよび配列番号２２のβ鎖参照ヌクレオチド配列またはこのバリアントによりコードされ得る。バリアントは、参照ヌクレオチド配列に対する少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含んでもよく、ここで、
（ｉ）アルファ鎖可変ドメインは、次の配列
配列番号２９のＤＲＧＳＱＳ（αＣＤＲ１）もしくは配列番号２のアミノ酸２７～３２またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、
配列番号３０のＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）もしくは配列番号２のアミノ酸５０～５５またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、および
配列番号３１のＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）もしくは配列番号２のアミノ酸９０～１０１またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列
を有するＣＤＲを含み、
（ｉｉ）ベータ鎖可変ドメインは、次の配列
配列番号３２のＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）もしくは配列番号３のアミノ酸２７～３１またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、
配列番号３３のＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）もしくは配列番号３のアミノ酸４９～５４またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、および
配列番号３４のＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）もしくは配列番号３のアミノ酸９２～１０２またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列
を有するＣＤＲを含み、
任意選択で、配列同一性は、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性、任意選択で、１００％の配列同一性のいずれかであり得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含んでもよく、ここで、
（ｉ）アルファ鎖可変ドメインは、次の配列
配列番号２９のＤＲＧＳＱＳ（αＣＤＲ１）または配列番号２のアミノ酸２７～３２、
配列番号３０のＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）または配列番号２のアミノ酸５０～５５、および
配列番号３１のＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）または配列番号２のアミノ酸９０～１０１
を有するＣＤＲを含み、
（ｉｉ）ベータ鎖可変ドメインは、次の配列
配列番号３２のＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）または配列番号３のアミノ酸２７～３１、
配列番号３３のＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）または配列番号３のアミノ酸４９～５４、および
配列番号３４のＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）または配列番号３のアミノ酸９２～１０２
を有するＣＤＲを含む。

したがって、異種ＴＣＲは、アルファ鎖可変ドメインが、配列番号２のアミノ酸残基１～１１２の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、および／またはベータ鎖可変ドメインが、配列番号３のアミノ酸残基１～１１２の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含み得る。本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファおよび／またはベータ鎖を含んでもよく、ここで、任意選択で、アルファ鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸残基１～１１２の配列に対する少なくとも８０もしくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、および／またはベータ鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸残基１～１１２の配列に対する少なくとも８０もしくは９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。したがって、アルファ鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸残基１～１１２に対する少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有してもよく、および／またはベータ鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸残基１～１１２に対する少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％の配列同一性を有し得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファ鎖可変ドメインが、配列番号２のアミノ酸残基１～１１２を含み、ベータ鎖可変ドメインが、配列番号３のアミノ酸残基１～１１２を含む、ＴＣＲを含み得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファ鎖ＴＲＡＣ定常ドメイン配列および／またはベータ鎖ＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２定常ドメイン配列を含むＴＣＲを含み得る。配列番号２および３は、それぞれアルファおよびベータ鎖細胞外配列であり、これらは本明細書において「親」ＡＦＰ ＴＣＲと呼ぶ。親ＡＦＰ ＴＣＲは、次のアルファおよびベータ鎖の使用を有する：アルファ鎖：ＴＲＡＶ１２－２^＊０２／ＴＲＡＪ４１^＊０１／ＴＲＡＣ（親ＡＦＰ ＴＣＲアルファ鎖の細胞外配列は、図１の配列番号２に示す。ＣＤＲは、配列番号２のアミノ酸２７～３２（ＣＤＲ１）、５０～５５（ＣＤＲ２）および９０～１０１（ＣＤＲ３）により定義する）；ベータ鎖：ＴＲＢＶ９^＊０１／ＴＲＢＤ２／ＴＲＢＪ２－７^＊０１／ＴＲＢＣ２（親ＡＦＰ ＴＣＲベータ鎖の細胞外配列は、図２（配列番号３）に示す。ＣＤＲは、配列番号３のアミノ酸２７～３１（ＣＤＲ１）、４９～５４（ＣＤＲ２）および９２～１０２（ＣＤＲ３）により定義する）。「^＊０１」および「^＊０２」の用語は、ＩＭＧＴ命名法により名付けられているように、この配列に対して２つ以上のアレルバリアントが存在すること、および上に言及するＴＣＲクローンに存在するように^＊０１／^＊０２バリアントであることを示す。「^＊」修飾子の非存在は、唯一のアレルが関連配列であるとわかっていることを意味する。

「親ＴＣＲ」の用語は、それぞれ配列番号２および３のアミノ酸１～１１２のＡＦＰ ＴＣＲα鎖およびＡＦＰ ＴＣＲβ鎖を含むＴＣＲを指すために本明細書において使用する。ペプチド－ＨＬＡ複合体に対して、親ＴＣＲよりも等しい、等価もしくは高い親和性および／または等しい、等価もしくは遅い解離速度を有する、親ＴＣＲと比較して突然変異または修飾したＴＣＲを用意することが望ましい。本発明によれば、異種ＴＣＲは、親ＴＣＲと比較して、アルファ鎖可変ドメインおよび／またはベータ鎖可変ドメインに存在する２つ以上の突然変異を有してもよく、「改変ＴＣＲ」または「突然変異ＴＣＲ」で表し得る。このような突然変異（複数可）により、ＡＦＰまたはこのペプチド抗原に対する結合親和性および／または特異性および／または選択性および／または結合活性が向上し得る。特定の実施形態では、アルファ鎖可変ドメインにおいて１、２、３、４、５、６、７もしくは８つの突然変異、例えば、４もしくは８つの突然変異、および／またはベータ鎖可変ドメインにおいて１、２、３、４もしくは５つの突然変異、例えば、５つの突然変異が存在する。一部の実施形態では、本発明のＴＣＲのα鎖可変ドメインは、配列番号２のアミノ酸残基アミノ酸１～１１２の配列に対する少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。一部の実施形態では、本発明のＴＣＲのβ鎖可変ドメインは、配列番号３のアミノ酸１～１１２のアミノ酸残基の配列に対する少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。

本発明によれば、ＴＣＲは、アルファ鎖可変ドメインが、配列番号２のアミノ酸残基１～１１２のアミノ酸配列、あるいはそのアミノ酸残基１～２６、３３～４９、５６～８９および１０２～１１２が、配列番号２のアミノ酸残基１～２６、３３～４９、５６～８９および１０２～１１２のそれぞれの配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有し、ならびに／またはアミノ酸残基２７～３２、５０～５５、９０～１０１、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３のそれぞれが、配列番号２のアミノ酸残基２７～３２、５０～５５、９０～１０１、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３のそれぞれの配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含み得る。

本発明によれば、ＴＣＲは、アルファ鎖可変ドメインが、
（ｉ）そのアミノ酸残基１～２６が、（ａ）配列番号２のアミノ酸残基１～２６の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号２の残基１～２６と比較して挿入もしくは欠失した１、２もしくは３つのアミノ酸残基を有してもよく、
（ｉｉ）アミノ酸残基２７～３２が、αＣＤＲ１である配列番号２９のＤＲＧＳＱＳまたは配列番号２のアミノ酸２７～３２であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基３３～４９が、（ａ）配列番号２のアミノ酸残基３３～４９の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号２のアミノ酸残基３３～４９の配列と比較して挿入もしくは欠失した１、２もしくは３つのアミノ酸残基を有してもよく、
（ｉｖ）アミノ酸残基５０～５５が、αＣＤＲ２である配列番号３０のＩＹＳＮＧＤまたは配列番号２のアミノ酸５０～５５であってもよく、
（ｖ）そのアミノ酸残基５６～８９が、配列番号２のアミノ酸残基５６～８９の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号２のアミノ酸残基５６～８９の配列と比較して１、２もしくは３つの挿入、欠失もしくは置換を有してもよく、
（ｖｉ）アミノ酸９０～１０１が、αＣＤＲ３である配列番号３１のＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦまたは配列番号２のアミノ酸９０～１０１であってもよく、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１０２～１１２が、配列番号２のアミノ酸残基１０２～１１２の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号２のアミノ酸残基１０２～１１２の配列と比較して１、２もしくは３つの挿入、欠失もしくは置換を有し得る
配列を含む、ＴＣＲを含み得る。

本発明によれば、ＴＣＲは、ベータ鎖可変ドメインが、配列番号３のアミノ酸残基１～１１２のアミノ酸配列、またはそのアミノ酸残基１～２６、３２～４８、５５～９１、１０３～１１２が、配列番号３のアミノ酸残基１～２６、３２～４８、５５～９１、１０３～１１２のそれぞれの配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し、アミノ酸残基２７～３１、４９～５４および９２～１０２が、配列番号３のアミノ酸残基２７～３１、４９～５４および９２～１０２、βＣＤＲ１、βＣＤＲ２、βＣＤＲ３のそれぞれの配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含み得る。

本発明によれば、ＴＣＲは、ベータ鎖可変ドメインが、
（ｉ）そのアミノ酸残基１～２６が、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基１～２６の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するか、または（ｂ）配列番号３の残基１～２６と比較して挿入もしくは欠失した１、２もしくは３つのアミノ酸残基を有してもよく、
（ｉｉ）アミノ酸残基２７～３１が、βＣＤＲ１である配列番号３２のＳＧＤＬＳまたは配列番号３のアミノ酸２７～３１であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基３２～４８が、（ａ）配列番号３のアミノ酸残基３２～４８の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または（ｂ）配列番号３のアミノ酸残基３２～４８の配列と比較して挿入もしくは欠失した１、２もしくは３つのアミノ酸残基を有してもよく、
（ｉｖ）アミノ酸残基４９～５４が、βＣＤＲ２である配列番号３３のＹＹＮＧＥＥまたは配列番号３のアミノ酸４９～５４であってもよく、
（ｖ）そのアミノ酸残基５５～９１が、配列番号３のアミノ酸残基５５～９１の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号３のアミノ酸残基５５～９１の配列と比較して１、２もしくは３つの挿入、欠失もしくは置換を有してもよく、
（ｖｉ）アミノ酸９２～１０２が、βＣＤＲ３である配列番号３４のＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹまたは配列番号３のアミノ酸９２～１０２であってもよく、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１０３～１１２が、配列番号３のアミノ酸残基１０３～１１２の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号３のアミノ酸残基１０３～１１２の配列と比較して１、２もしくは３つの挿入、欠失もしくは置換を有し得る
配列を含む、ＴＣＲを含み得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファ鎖が、配列番号４９のアミノ酸残基を含み、ベータ鎖可変ドメインが、配列番号３または配列番号５０のアミノ酸残基を含む、ＴＣＲを含み得る。

変異ＴＣＲ
本発明の実施形態は、親ＡＦＰ ＴＣＲと比較して変異したＴＣＲを含む。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、
ａ．配列番号３５の配列ＤＲＧＳＱＡを有するαＣＤＲ１、
ｂ．配列番号３６の配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｃ．配列番号３７の配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｄ．配列番号３５の配列ＤＲＧＳＱＡを有するαＣＤＲ１および配列番号３７の配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｅ．配列番号３８の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｆ．配列番号３９の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＳＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｇ．配列番号４３の配列ＡＶＮＳＱＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｈ．配列番号３５の配列ＤＲＧＳＱＡを有するαＣＤＲ１および配列番号３８の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｉ．配列番号３９の配列ＡＶＮＳＱＳＧＶＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｊ．配列番号４０の配列ＡＶＮＳＱＮＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｋ．配列番号４１の配列ＤＲＧＳＦＳを有するαＣＤＲ１、
ｌ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１、
ｍ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１および配列番号３６の配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
ｎ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１および配列番号３６の配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、または
ｏ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１および配列番号３８の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２
を含み得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲまたは変異ＴＣＲは、配列番号２に示す付番を参照して、３１Ｑ、３２Ｓ、９４Ｄ、９５Ｓ、９６Ｇ、９７Ｙおよび９８Ａに対応するアミノ酸の１つまたは複数における変異を含むアルファ鎖可変ドメインを含み得る。例えば、アルファ鎖可変ドメインは、図１の配列番号２に示す付番に従って、次の変異：Ｑ３１Ｆ／Ｙ、Ｓ３２Ａ、Ｄ９４Ｑ、Ｓ９５Ｎ、Ｇ９６Ｓ、Ｙ９７Ｖ、Ａ９８Ｓの１つまたは複数を有し得る。

したがって、アルファ鎖可変ドメインは、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９および配列番号２０のいずれか１つの残基１～１１２に対する少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含んでもよく、ここで、任意選択で、アミノ酸配列はまた、配列番号２の残基１～１１２に対する少なくとも９０％の同一性を有する。図５における下線の配列番号６～２０のアミノ酸は、インバリアントであり得る。

したがって、異種ＴＣＲは、配列番号１１、配列番号１２もしくは配列番号１３のＱ１～Ｈ１１２を含むアルファ鎖可変ドメイン、および／または配列番号３のＤ１～Ｔ１１２を含むベータ鎖可変ドメインを含み得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含んでもよく、ここで、
（ｉ）アルファ鎖可変ドメインは、
配列番号３５のＤＲＧＳＱＡ（αＣＤＲ１）または配列番号４９のアミノ酸２７～３２、
配列番号３０のＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）または配列番号２のアミノ酸５０～５５、および
配列番号３８のＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）または配列番号４９のアミノ酸９０～１０１
の配列を有するＣＤＲを含み、
（ｉｉ）ベータ鎖可変ドメインは、
配列番号３２のＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）または配列番号３のアミノ酸２７～３１、
配列番号３３のＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）または配列番号３のアミノ酸４９～５４、および
配列番号３４のＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）または配列番号３のアミノ酸９２～１０２
の配列を有するＣＤＲを含む。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファ鎖可変ドメインが、配列番号４９のアミノ酸残基１～１１２を含み、ベータ鎖可変ドメインが、配列番号３または配列番号５０のアミノ酸残基１～１１２を含む、ＴＣＲを含み得る。

本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファ鎖が、配列番号４９のアミノ酸残基を含み、ベータ鎖可変ドメインが、配列番号３または配列番号５０のアミノ酸残基１～１１２を含む、ＴＣＲを含み得る。

可溶性ＴＣＲ
本発明の変異ＴＣＲの結合プロファイルを比較し得る参照ＴＣＲを提供する目的のために、図３（配列番号４）に示すＡＦＰ ＴＣＲアルファ鎖の細胞外配列および図４（配列番号５）に示すＡＦＰ ＴＣＲベータ鎖の細胞外配列を有する可溶性ＴＣＲを使用することが好都合である。このＴＣＲは、本明細書において、「参照ＴＣＲ」または「参照ＡＦＰ ＴＣＲ」と呼ぶ。配列番号４は、Ｃ１５９がＴ１５９と置換されていること（すなわち、ＴＲＡＣのＴ４８）を除いて親アルファ鎖細胞外配列である配列番号２と同一であることに留意されたい。同様に、配列番号５は、Ｃ１６９がＳ１６９と置換されており（すなわち、ＴＲＢＣ２のＳ５７）、Ａ１８７がＣ１８７と置換されており、Ｄ２０１がＮ２０１と置換されていることを除いて、親ベータ鎖細胞外配列である配列番号３と同一である。親ＡＦＰアルファおよびベータ鎖細胞外配列と比較した、このようなシステイン置換により、鎖間ジスルフィド結合の形成が可能となり、これによって、再折畳み可溶性ＴＣＲ、すなわち、細胞外アルファおよびベータ鎖を再び折り畳むことにより形成されたＴＣＲを安定化する。安定なジスルフィド結合可溶性ＴＣＲの参照ＴＣＲとしての使用により、結合親和性および半減期のさらに好都合な評価が可能となる。

したがって、本発明によれば、異種ＴＣＲは、アルファおよび／もしくはベータ鎖定常ドメイン配列（複数可）を含み、これを、切断もしくは置換してＴＲＡＣのエクソン２のＣｙｓ４とＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２のエクソン２のＣｙｓ２との間の天然ジスルフィド結合を除去することにより修飾し得るか、またはここで、アルファおよび／もしくはベータ鎖定常ドメイン配列（複数可）を、ＴＲＡＣのＴｈｒ４８およびＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２のＳｅｒ５７とのシステイン残基の置換により修飾し、このシステインによって、ＴＣＲのアルファおよびベータ定常ドメイン間にジスルフィド結合を形成させる。

バリアントＴＣＲ
また、本発明の範囲内では、任意のＴＣＲの表現型的にサイレントなバリアントを本明細書において開示する。本明細書において使用する場合、「表現型的にサイレントなバリアント」の用語は、任意選択で、ＨＬＡ－Ａ２複合体としての、ＡＦＰペプチド抗原、例えば、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）に対するＫ_Ｄおよび／または結合半減期を、上に詳述するＫ_Ｄおよび結合半減期の範囲内で有するＴＣＲを指すことが理解される。例えば、当業者に公知のように、上記のＴＣＲと比較して、その定常および／または可変ドメインに変異を組み込むＴＣＲを、任意選択で、ＨＬＡ－Ａ２複合体としての、ＡＦＰペプチド抗原、例えば、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）との相互作用に対する親和性を変更することなく生成することが可能であり得る。このような慣用的バリアントは、本発明の範囲に含まれる。また、１つまたは複数の保存的置換がなされているＴＣＲは、本発明の一部を形成する。

アミノ酸およびヌクレオチド配列の同一性は、ＧＡＰアルゴリズム（ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（商標）、Ａｃｃｅｌｒｙｓ、ＳａｎＤｉｅｇｏ ＣＡ）に準拠して一般に判定する。ＧＡＰでは、ニードルマンとブンシュのアルゴリズム（J. Mol. Biol. (48): 444-453 (1970)）を使用して２つの完全配列をアラインメントし、これにより適合数を最大化し、ギャップ数を最小化する。一般には、デフォルトのパラメータを使用し、ギャップ生成ペナルティ＝１２およびギャップ伸長ペナルティ＝４を使用する。ＧＡＰの使用が好ましいことがあり得るが、他のアルゴリズム、例えば、ＢＬＡＳＴ、ｐｓｉＢＬＡＳＴまたはＴＢＬＡＳＴＮ（Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 405-410の方法を使用する）、ＦＡＳＴＡ（Pearson and Lipman (1988) PNAS USA 85: 2444-2448の方法を使用する）またはスミス・ウォーターマンのアルゴリズム（Smith and Waterman (1981) J. Mol Biol. 147: 195-197）を使用してもよく、デフォルトパラメータを一般に利用する。

特定のアミノ酸配列バリアントは、１個のアミノ酸、２、３、４、５～１０、１０～２０または２０～３０個のアミノ酸の挿入、付加、置換または欠失により参照配列とは異なり得る。一部の実施形態では、バリアント配列は、挿入、欠失または置換した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはこれ以上の残基を有する参照配列を含み得る。例えば、最大１５、最大２０、最大３０または最大４０個の残基を挿入、欠失または置換し得る。

本発明の一部の好ましい実施形態では、バリアントＴＣＲは、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個またはこれ以上の保存的置換により参照ＴＣＲ配列とは異なり得る。保存的置換は、類似の特性を有する異なるアミノ酸とのアミノ酸の置換えを含む。例えば、脂肪族残基を別の脂肪族残基により置き換えし得るか、非極性残基を別の非極性残基により置き換えし得るか、酸性残基を別の酸性残基により置き換えし得るか、塩基性残基を別の塩基性残基により置き換えし得るか、極性残基を別の極性残基により置き換えし得るか、または芳香族残基を別の芳香族残基により置き換えし得る。保存的置換は、例えば、次の群：
（ｉ）アラニンおよびグリシン、
（ｉｉ）グルタミン酸、アスパラギン酸、グルタミンおよびアスパラギン、
（ｉｉｉ）アルギニンおよびリジン、
（ｉｖ）アスパラギン、グルタミン、グルタミン酸およびアスパラギン酸、
（ｖ）イソロイシン、ロイシンおよびバリン、
（ｖｉ）フェニルアラニン、チロシンおよびトリプトファン、
（ｖｉｉ）セリン、スレオニンおよびシステイン
におけるアミノ酸間に存在し得る。
（ｖｉｉｉ）当業者に明らかなように、提供する配列のＣ末端および／またはＮ末端において１、２、３、４、５またはこれ以上の残基を、ＴＣＲの結合特性に実質的に影響させることなく切断することが可能であり得る。このようなすべての慣用的バリアントは、本発明に包含する。天然ＴＣＲは、αβまたはγδヘテロ二量体形態で存在する。しかし、ααまたはββホモ二量体からなる組換えＴＣＲは、ＭＨＣペプチド分子に結合することがこれまでにわかっている。したがって、本発明のＴＣＲは、αβヘテロ二量体ＴＣＲであり得るか、またはααもしくはββホモ二量体ＴＣＲであり得る。
（ｉｘ）養子療法における使用のために、αβヘテロ二量体ＴＣＲは、例えば、細胞質および膜貫通の両ドメインを有する完全長鎖としてトランスフェクトし得る。特定の実施形態では、本発明のＴＣＲは、例えば、国際公開第２００６／０００８３０号パンフレットに記載のように、それぞれの定常ドメインの残基間にジスルフィド結合の導入を有し得る。
（ｘ）本発明のＴＣＲ、特には、アルファ－ベータヘテロ二量体ＴＣＲは、アルファ鎖ＴＲＡＣ定常ドメイン配列および／またはベータ鎖ＴＲＢＣ１もしくはＴＲＢＣ２定常ドメイン配列を含み得る。アルファおよびベータ鎖定常ドメイン配列は、切断または置換してＴＲＡＣのエクソン２のＣｙｓ４とＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２のエクソン２のＣｙｓ２との間の天然ジスルフィド結合を除去することにより修飾し得る。また、アルファおよび／またはベータ鎖定常ドメイン配列（複数可）は、ＴＲＡＣのＴｈｒ４８およびＴＲＢＣ１またはＴＲＢＣ２のＳｅｒ５７とのシステイン残基の置換により修飾してもよく、このシステインによって、ＴＣＲのアルファおよびベータ定常ドメイン間にジスルフィド結合を形成させる。
（ｘｉ）本発明のＴＣＲは、１本鎖の型式であってもよく、例えば、国際公開第２００４／０３３６８５号パンフレットを参照されたい。１本鎖の型式は、Ｖα－Ｌ－ｖβ、ｖβ－Ｌ－Ｖα、Ｖα－Ｃα－Ｌ－Ｖβ、Ｖα－Ｌ－Ｖβ－Ｃβ、Ｖα－Ｃα－Ｌ－Ｖβ－Ｃβ型のαβＴＣＲポリペプチドを含み、ここで、ＶαおよびＶβは、それぞれＴＣＲαおよびｐ可変領域であり、ＣαおよびＣβは、それぞれＴＣＲαおよびβ定常領域であり、Ｌは、リンカー配列である。特定の実施形態では、本発明の１本鎖ＴＣＲは、国際公開第２００４／０３３６８５号パンフレットに記載のように、それぞれの定常ドメインの残基間にジスルフィド結合の導入を有し得る。

異種ＴＣＲ
本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現し得る。抗原および／またはこの抗原ペプチド（例えば、ＡＦＰまたはこのペプチド抗原）への結合時に、修飾免疫応答性細胞は、抗原（例えば、ＡＦＰ）および／もしくはこの抗原ペプチドを有する細胞に対するＴ細胞エフェクター機能および／もしくは細胞溶解作用を示し、ならびに／または増殖および／もしくは細胞***を起こし得る。特定の実施形態では、ＴＣＲを含む修飾免疫応答性細胞は、同一のがんおよび／もしくは腫瘍抗原（例えば、ＡＦＰ）ならびに／またはこれらの抗原ペプチドを標的とするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含む細胞と比較して、同等またはより良い治療的効力を示す。ＴＣＲを含む活性化した修飾免疫応答性細胞は、それらに限定されないが、ＴＮＦアルファ、ＩＦＮγおよびＩＬ２を含み得る、抗腫瘍サイトカインを分泌し得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）をコードする、核酸、構築物もしくはベクターまたは異種核酸、構築物もしくはベクターを含み得る。任意選択で、ＴＣＲは、親和性増強ＴＣＲ、例えば、特定ペプチド増強親和性受容体（ＳＰＥＡＲ）ＴＣＲであり得る。

「異種」または「外因性」の用語は、特定の生物系、例えば、細胞または宿主細胞、例えば、免疫応答性細胞に対して外来性であり、この系には天然に存在しない、ポリペプチドまたは核酸を指し、これは、人工または組換え手段により系に導入し得る。したがってこれによって、異種性のＴＣＲの発現により、Ｔ細胞の免疫原性特異性が変更されて、これらのＴ細胞が、がんを有する個人のがん細胞の表面上に存在する１つまたは複数の腫瘍もしくはがん抗原（例えば、ＡＦＰ）および／またはこの抗原ペプチドを認識するか、あるいはこれらに対する認識の向上を呈し得る。Ｔ細胞の修飾および後続のこれらの増殖は、ｉｎ ｖｉｔｒｏおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏで実施し得る。

ＣＤ８α共受容体
本発明によれば、異種ＴＣＲを発現または提示する修飾免疫応答性細胞の集団は、異種共受容体をさらに発現または提示し得る。異種共受容体は、ＣＤ８共受容体であり得る。ＣＤ８共受容体は、ＣＤ８－αおよびＣＤ８－β鎖またはＣＤ８－αおよびＣＤ８－α鎖を含む、二量体すなわちＣＤ８鎖の対を含み得る。好ましくは、ＣＤ８共受容体は、ＣＤ８－αおよびＣＤ８－α鎖を含むＣＤ８αα共受容体である。ＣＤ８α共受容体は、配列番号４７もしくはこのバリアントに対する少なくとも８０％の同一性、または配列番号４７もしくはこのバリアントに対する１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み得る。ＣＤ８α共受容体は、ホモ二量体であり得る。

ＣＤ８共受容体は、クラス１ＭＨＣに結合し、ＴＣＲシグナル伝達を強化する。本発明によれば、ＣＤ８共受容体は、配列番号４７の参照アミノ酸配列もしくは配列番号４７のアミノ酸２２～２３５を含み得るか、またはこのバリアントであり得る。バリアントは、配列番号４７の参照アミノ酸配列もしくは配列番号４７のアミノ酸２２～２３５に対する少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し得る。ＣＤ８共受容体は、配列番号４８の参照ヌクレオチド配列によりコードされ得るか、またはこのバリアントであり得る。バリアントは、配列番号４８の参照ヌクレオチド配列に対する少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％または少なくとも９９％の配列同一性を有するヌクレオチド配列を有し得る。任意選択で、ＣＤ８共受容体は、
（ｉ）ＣＤＲ１である配列番号４４のＶＬＬＳＮＰＴＳＧもしくは配列番号４７のアミノ酸４５～５３、
（ｉｉ）ＣＤＲ２である配列番号４５のＹＬＳＱＮＫＰＫもしくは配列番号４７のアミノ酸７２～７９、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３である配列番号４６のＬＳＮＳＩＭもしくは配列番号４７のアミノ酸８０～１１７の配列、
またはこれらに対する少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を有するＣＤＲを含み得る。

本発明によれば、異種ＣＤ８共受容体は、Ｉｇ様Ｖ型ドメインが、
（ｉ）ＣＤＲ１である配列番号４４のＶＬＬＳＮＰＴＳＧもしくは配列番号４７のアミノ酸４５～５３、
（ｉｉ）ＣＤＲ２である配列番号４５のＹＬＳＱＮＫＰＫもしくは配列番号４７のアミノ酸７２～７９、
（ｉｉｉ）ＣＤＲ３である配列番号４６のＬＳＮＳＩＭもしくは配列番号４７のアミノ酸８０～１１７の配列、
またはこれに対する少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％もしくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列を有するＣＤＲを含む、ＣＤ８共受容体を含み得る。

本発明によれば、異種ＣＤ８共受容体は、配列番号４７のアミノ酸配列の残基２２～１３５、またはそのアミノ酸残基２２～４４、５４～７１、８０～１１７、１２４～１３５が、配列番号４７のアミノ酸残基２２～４４、５４～７１、８０～１１７、１２４～１３５のそれぞれの配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し、アミノ酸残基４５～５３、７２～７９および１１８～１２３が、配列番号４７のアミノ酸残基４５～５３、７２～７９および１１８～１２３のそれぞれの配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、あるいはこのＩｇ様Ｖ型ドメインが、これらの配列を含む、ＣＤ８共受容体を含み得る。

本発明によれば、ＣＤ８共受容体は、
（ｉ）そのアミノ酸残基２２～４４が、（ａ）配列番号４７のアミノ酸残基２２～４４の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するか、または（ｂ）配列番号４７の残基２２～４４と比較して挿入もしくは欠失した１、２もしくは３つのアミノ酸残基を有してもよく、
（ｉｉ）アミノ酸残基４５～５３が、ＣＤＲ１である配列番号４４のＶＬＬＳＮＰＴＳＧまたは配列番号４７のアミノ酸４５～５３であり、
（ｉｉｉ）そのアミノ酸残基５４～７１が、（ａ）配列番号４７のアミノ酸残基５４～７１の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するか、または（ｂ）配列番号４７のアミノ酸残基５４～７１の配列と比較して挿入もしくは欠失した１、２もしくは３つのアミノ酸残基を有してもよく、
（ｉｖ）アミノ酸残基７２～７９が、ＣＤＲ２である配列番号４５のＹＬＳＱＮＫＰＫまたは配列番号４７のアミノ酸７２～７９であってもよく、
（ｖ）そのアミノ酸残基８０～１１７が、配列番号４７のアミノ酸残基８０～１１７の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有するか、または配列番号４７のアミノ酸残基８０～１１７の配列と比較して１、２もしくは３つの挿入、欠失もしくは置換を有してもよく、
（ｖｉ）アミノ酸１１８～１２３が、ＣＤＲ３である配列番号４６のＬＳＮＳＩＭまたは配列番号４７のアミノ酸８０～１１７であってもよく、
（ｖｉｉ）そのアミノ酸残基１２４～１３５が、配列番号４７のアミノ酸残基１２４～１３５の配列に対する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％もしくは９５％の同一性を有し得るか、または配列番号４７のアミノ酸残基１２４～１３５の配列と比較して１、２もしくは３つの挿入、欠失もしくは置換を有し得る
配列を含むか、あるいはこのＩｇ様Ｖ型ドメインが、これらの配列を含む、ＣＤ８共受容体を含み得る。

異種ＣＤ８共受容体を発現する修飾免疫応答性細胞により、任意選択で、ＨＬＡ上に提示される場合、抗原ペプチド、腫瘍またはがん抗原による刺激に関するか、またはこれに対する、本明細書に開示するアッセイにより判定可能であるものとして、親和性および／もしくは結合活性の向上ならびに／またはＴ細胞活性化の向上を、異種ＣＤ８共受容体を発現しない修飾免疫応答性細胞と比較して実証し得る。修飾免疫応答性細胞の異種ＣＤ８は、ＭＨＣと相互作用または特異的に結合してもよく、ＭＨＣは、クラスＩまたはクラスＩＩ、好ましくは、クラスＩ主要組織適合複合体（ＭＨＣ）、ＨＬＡ－Ｉ分子またはＭＨＣクラスＩ ＨＬＡ－Ａ／Ｂ２Ｍ二量体であってもよく、好ましくは、ＣＤ８－αは、クラスＩ ＭＨＣのα_３部分（残基２２３～２２９）と、好ましくは、ＣＤ８のＩｇＶ様ドメインを介して相互作用する。したがって、異種ＣＤ８により、任意選択で、抗原提示細胞、樹状細胞および／または腫瘍もしくはがん細胞、腫瘍もしくはがん組織の表面上における、ＨＬＡｐＭＨＣＩまたはｐＨＬＡにより結合または提示されるＨＬＡおよび／または抗原ペプチドへの免疫応答性細胞のＴＣＲ結合が、異種ＣＤ８を欠く免疫応答性細胞と比較して向上する。したがって、異種ＣＤ８により、任意選択で、抗原提示細胞、樹状細胞および／あるいは腫瘍もしくはがん細胞、または腫瘍もしくはがん組織の表面上における、免疫応答性細胞の細胞（ＴＣＲ）／ペプチド－主要組織適合複合体クラスＩ（ｐＭＨＣＩ）相互作用の解離速度（ｋ_ｏｆｆ）が、異種ＣＤ８を欠く細胞と比較して向上または増大し得ることにより、この半減期も向上または増大し、これによって、ライゲーション親和性および／または結合活性の向上ももたらされ得る。異種ＣＤ８により、免疫応答性細胞表面上のＴＣＲの組織化が向上して、ｐＨＬＡ結合における協同作用が可能となることがあり、治療的結合活性の向上がもたらされ得る。したがって、異種ＣＤ８共受容体修飾免疫応答性細胞は、ＬＣＫ（リンパ球特異的タンパク質チロシンキナーゼ）に亜鉛依存的に結合または相互作用して、ＮＦＡＴ、ＮＦ－κＢおよびＡＰ－１のような転写因子の活性化を生じ得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞により、ＣＤ４０Ｌの発現、サイトカイン産生、細胞傷害活性、樹状細胞成熟の誘導または樹状細胞サイトカイン産生の誘導が、任意選択で、腫瘍またはがん細胞または組織により提示される場合、任意選択で、がんおよび／もしくは腫瘍抗原またはこれらのペプチド抗原に応答して、異種ＣＤ８共受容体を欠く免疫応答性細胞と比較して向上または増大し得る。

共刺激リガンド
本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、少なくとも１つ、任意選択で、１、２、３または４つの外因性または組換え（例えば、この共刺激リガンドを細胞に形質導入する）共刺激リガンドをさらに含み得る。修飾免疫応答性細胞は、異種ＴＣＲおよび少なくとも１つの外因性共刺激リガンドを共発現し得る。異種ＴＣＲと少なくとも１つの外因性共刺激リガンドとの間の相互作用により、非抗原特異的シグナルおよび細胞の活性化がもたらされ得る。共刺激リガンドは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）スーパーファミリーのメンバーおよび免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーリガンドを含むが、これらに限定されない。ＴＮＦは、全身性炎症に関与するサイトカインであり、急性期反応を刺激する。ＴＮＦスーパーファミリーメンバーは、神経成長因子（ＮＧＦ）、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ４０Ｌ）／ＣＤｌ５４、ＣＤ１３７Ｌ／４－１ＢＢＬ、ＴＮＦ－アルファ、ＣＤ１３４Ｌ／ＯＸ４０Ｌ／ＣＤ２５２、ＣＤ２７Ｌ／ＣＤ７０、Ｆａｓリガンド（ＦａｓＬ）、ＣＤ３０Ｌ／ＣＤ１５３、腫瘍壊死因子ベータ（ＴＮＦＰ）／リンホトキシン－アルファ（ＬＴａ）、リンホトキシン－ベータ（ＴＴｂ）、ＣＤ２５７／Ｂ細胞活性化因子（ＢＡＦＦ）／Ｂｌｙｓ／ＴＨＡＮＫ／Ｔａｌｌ－Ｉ、グルココルチコイド誘導性ＴＮＦ受容体リガンド（ＧＩＴＲＬ）およびＴＮＦ関連アポトーシス誘導リガンド（ＴＲＡＩＬ）、ＬＩＧＨＴ（ＴＮＦＳＦ１４）を含むが、これらに限定されない。免疫グロブリン（Ｉｇ）スーパーファミリーは、細胞の認識、結合または接着プロセスに関与する、細胞表面および可溶性タンパク質の大群である。このようなタンパク質は、免疫グロブリンと構造的特徴を共有し、これらは、免疫グロブリンドメイン（フォールド）を有する。免疫グロブリンスーパーファミリーリガンドは、ともにＣＤ２８のリガンドであるＣＤ８０およびＣＤ８６を含むが、これらに限定されない。特定の実施形態では、少なくとも１つの共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬ、ＣＤ２７５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ７０、ＯＸ４０Ｌ、ＣＤ４８、ＴＮＦＲＳＦ１４およびこれらの組合せからなる群から選択される。少なくとも１つの外因性または組換え共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬまたはＣＤ８０であってもよく、好ましくは、少なくとも１つの外因性または組換え共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬである。修飾免疫応答性細胞は、２つの外因性組換え共刺激リガンドを含んでもよく、好ましくは、２つの外因性または組換え共刺激リガンドは、４－１ＢＢＬおよびＣＤ８０である。

修飾免疫応答性細胞は、免疫抑制性腫瘍微小環境を克服する、少なくとも１つの外因性または組換え（例えば、この構築物を細胞に形質導入する）構築物を含み得る。このような構築物は、環状ＡＭＰホスホジエステラーゼおよびドミナントネガティブ形質転換成長因子ベータ（ＴＧＦベータ）受容体ＩＩであり得るが、これらに限定されない。修飾免疫応答性細胞、修飾Ｔ細胞または修飾免疫応答性細胞、例えば、Ｔ細胞の集団は、これらの細胞の細胞溶解活性に対して正の作用を有するサイトカインを放出するように改変し得る。このようなサイトカインは、インターロイキン７、インターロイキン１５およびインターロイキン２１を含むが、これらに限定されない。

免疫応答性細胞
本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、Ｂ、Ｔまたはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む、リンパ球系細胞であり得る。修飾免疫応答性細胞は、Ｔ細胞、ナチュラルキラーＴ（ＮＫＴ）細胞、ならびに胚性幹細胞および多能性幹細胞を含むこれらの前駆体（例えば、リンパ球系細胞に分化し得るもの）を含む、リンパ球系細胞であり得る。Ｔ細胞は、胸腺において成熟し、細胞媒介免疫の主な原因となり、適応免疫系にも関与するリンパ球であり得る。本発明によれば、Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞、メモリーＴ細胞（セントラルメモリーＴ細胞、幹細胞様メモリーＴ細胞（または幹様メモリーＴ細胞）および２種類のエフェクターメモリーＴ細胞、例えば、ＴＥＭ細胞およびＴＥＭＲＡ細胞を含む）、調節性Ｔ細胞（抑制性Ｔ細胞としても知られる）、ナチュラルキラーＴ細胞、粘膜関連インバリアントＴ細胞およびガンマ－デルタＴ細胞を含み得るが、これらに限定されない。細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬまたはキラーＴ細胞）は、感染した体細胞または腫瘍細胞の死滅を誘導することが可能なＴリンパ球のサブセットである。対象自身のＴ細胞は、異種ＴＣＲの導入を介して特定の抗原を標的とするように遺伝子修飾し得る。好ましくは、修飾免疫応答性細胞は、Ｔ細胞、任意選択で、ＣＤ４^＋Ｔ細胞またはＣＤ８^＋Ｔ細胞である。したがって、修飾免疫応答性細胞は、Ｔ細胞、任意選択で、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞であり得るか、あるいは修飾免疫応答性細胞は、修飾Ｔ細胞、任意選択で、ＣＤ４＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の集団、またはＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の混合集団であり得る。

治療
血清におけるＡＦＰ発現
本発明ならびに本発明の方法、治療および使用によれば、治療前血清ＡＦＰ発現もしくは濃度と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、血清ＡＦＰ発現または濃度の低下がもたらされる。

ベースライン（治療前）からの血清ＡＦＰレベルの変化は、治療に対する応答と相関し、組織生検の腫瘍ＡＦＰ発現に対応し、がんおよび／または腫瘍治療の治療有効性ならびに成功を示す。

したがって、本発明ならびに本発明の方法、治療および使用によれば、プラセボ治療と比較して、または無治療と比較して、または治療前と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、血清ＡＦＰ発現または濃度の低下がもたらされ、ここで、任意選択で、標準治療は、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択される。

血清サイトカインおよび可溶性因子の解析ならびにＴ細胞の腫瘍浸潤
本発明ならびに本発明の方法、治療および使用によれば、上に記載のように、治療前血清サイトカインおよび／もしくはインターフェロンのレベルもしくは濃度と比較して、または無治療もしくは標準治療を含む治療と比較して、血清サイトカインおよび／またはインターフェロンのレベルまたは濃度の上昇がもたらされる。

したがって、本発明によって、例えば、腫瘍または腫瘍抗原に応答して免疫応答を誘発する能力により測定する場合、がんおよび／または腫瘍免疫原性の向上または増強がもたらされ、例えば、サイトカインおよび／またはインターフェロンの分泌の増加、Ｔ細胞増殖の増加、抗原応答性の向上、標的細胞殺傷、Ｔ細胞活性化、ＣＤ２８シグナル伝達、Ｔ細胞の腫瘍浸潤、樹状細胞提示抗原に対する認識および結合力により判断する場合、治療もしくは介入前のレベルと比較して、またはプラセボと比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、例えば、少なくとも１０％、あるいは２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％またはこれ以上増強される。

がん免疫療法の有効性は、活性化腫瘍特異的Ｔ細胞による腫瘍浸潤により条件づけられる。次いで、このようなＴ細胞の活性は、免疫抑制環境（例えば、調節性Ｔ細胞）の腫瘍における存在により影響される。したがって、腫瘍内の「免疫景観」の直接的評価は、Ｔ細胞免疫療法の有効性を監視するのに大きな価値を有するため、腫瘍生検により定量してＴ細胞注入前後の腫瘍の免疫状態を評価し得る。

したがって、本発明によって、例えば、Ｔ－ｒｅｇ、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、ＰＤ－Ｌ１タンパク質発現のレベル、ＣＣＬ３、ＩＬ８、ＩＬ１β、ＣＸＣＬ１０もしくはｓＩＬ２Ｒαから選択される血清サイトカインレベル、またはＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＭ－３、ＬＡＧ－３、ＢＴＬＡもしくはＴＩＧＩＴから選択される阻害性受容体のレベルの低下により判定する場合、治療前（例えば、治療前または本発明による治療の前）もしくは無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、Ｔ細胞の腫瘍浸潤の向上および／またはＴ細胞抑制因子の低下がもたらされる。あるいは、インターフェロンγ、インターロイキン６、インターロイキン１０のレベルの上昇により判定する場合、サイトカイン、例えば、ＩＬ－２、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γおよびグランザイムＢもしくは自然免疫細胞、例えば、ＮＫ細胞、適応免疫細胞（ＣＤ４^＋およびＣＤ８^＋）の産生、または例えば、Ｋｉ６７発現レベルにより判断する場合、Ｔ細胞の増殖の向上が、本明細書に記載のように、治療前もしくは無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較してもたらされる。

前述のように、標準治療は、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択され得る。

腫瘍サイズおよび腫瘍量
本発明ならびに本発明の方法、治療および使用によれば、腫瘍の増殖もしくは腫瘍増殖率の減少、または治療中止後の腫瘍サイズの維持、または腫瘍数もしくは腫瘍量のレベルまたは応答の向上または増強が、治療前または無治療または標準治療を含む治療と比較してもたらされ、例えば、腫瘍サイズまたは腫瘍数の測定により判定する場合、好ましくは、治療前または無治療または標準治療を含む治療と比較して少なくとも１０％、あるいは２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％またはこれ以上、向上または増強される。好ましくは、レベルもしくは応答の向上もしくは増強は、持続的なレベルもしくは応答の向上もしくは増強であってもよく、および／または治療持続時間と少なくとも同一の持続時間、少なくとも１．５、２．０、２．５、３．０倍またはこれ以上の長さの治療持続時間を有し得る。このようなレベルまたは応答の向上または増強は、ＲＥＣＩＳＴ１．１測定[E.A. Eisenhauer., et.al., EUROPEAN JOURNAL OF CANCER 45 (2009) 228 -247]により、または腫瘍生検もしくは液体生検（末梢血由来の血漿）により判断して、セルフリーＤＮＡ（ｃｆＤＮＡ）またはエクソソーム（安定なｍＲＮＡソース）を判定し得る。エクソソーム（腫瘍細胞および免疫細胞を含むあらゆる細胞により生成）およびｃｆＤＮＡ（瀕死の腫瘍細胞により生成）を使用して、腫瘍量および免疫応答の両方を監視し得る。エクソソームおよびｃｆＤＮＡの解析により、（ａ）エクソソームおよびｃｆＤＮＡによる全般的腫瘍量の推定および遺伝的プロファイリング（ＡＦＰ ｍＲＮＡの発現および変異プロファイリングを含む）、（ｂ）エクソソームによる免疫応答（細胞傷害性および調節性免疫細胞による遺伝子発現）の全身的評価が可能となり得る。

前述のように、標準治療は、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択され得る。

７．５．５．ＡＦＰ ＴＣＲ＋細胞の持続性
本発明ならびに本発明の方法、治療および使用によれば、例えば、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する、注入した改変および修飾免疫応答性細胞の持続性の測定により判定する場合、対象におけるがんおよび／または腫瘍の増悪における、治療作用の向上および治療、予防または遅延の向上が、治療前または無治療または標準治療を含む治療と比較してもたらされる。注入した改変および修飾免疫応答性細胞の持続性は、治療作用と相関し、これはまた、長期的な安全性の尺度である。細胞持続性は、ｑＰＣＲまたはフローサイトメトリー（ＦＣＭ）により判定することができる。例えば、凍結ＰＢＭＣから抽出したＤＮＡによる導入遺伝子のＰＣＲを用いたＡＦＰ ＴＣＲ＋細胞の定量は、凍結ＰＢＭＣによるＦＣＭを用いたＡＦＰ ＴＣＲ発現細胞の定量と同様に、尺度として使用し得る。Ｔ細胞表現型および活性は、さまざまなアッセイ、例えば、
－ 細胞産物および注入後の血液におけるＴ細胞系列の判定のための表現型解析、
－ ＰＢＭＣ由来Ｔ細胞の老化および活性化状態の定量、
－ 注入したＴ細胞、例えば、ＡＦＰ ＴＣＲ＋Ｔ細胞のｉｎ ｖｉｖｏでの機能を反映する可溶性因子の定量、
－ このような細胞の潜在的機能性を評価する種々の時点における形質導入細胞のｅｘ ｖｉｖｏでの活性
により判定し得る。

Ｔ細胞機能
本発明ならびに本発明の方法、治療および使用によれば、治療前と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、Ｔ細胞機能の増強がもたらされる。好ましくは、Ｔ細胞機能は、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞によるγインターフェロンの分泌の増加、Ｔ細胞増殖の増加、内部シグナル伝達の増加、抗原応答性の向上、サイトカインおよび／もしくはインターフェロンの分泌の増加、標的細胞殺傷の増加、Ｔ細胞活性化の向上、ＣＤ２８シグナル伝達の増加、Ｔ細胞の腫瘍浸潤力の向上、または樹状細胞提示抗原に対する認識および結合力の向上により判断する場合、少なくとも１０％、あるいは２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％またはこれ以上増強される。

本発明ならびに本発明の方法および使用によれば、例えば、腫瘍結合、腫瘍の縮小および腫瘍の除去により測定する場合、腫瘍免疫または腫瘍による免疫認識の回避が減弱され、免疫系による腫瘍認識および攻撃の向上が生じ、これによって、腫瘍免疫を治療し得る。したがって、本発明では、腫瘍免疫の治療を提供し、ならびに／または例えば、腫瘍結合、腫瘍の縮小および腫瘍の除去により測定する場合、本明細書に記載のように、治療前（例えば、治療前または本発明による治療の前）と比較して、もしくは無治療と比較して、もしくは標準治療を含む治療と比較して、少なくとも１０％、あるいは２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、１００％、１２０％、１５０％、２００％またはこれ以上増強される腫瘍免疫の治療を提供する。

Ｔ細胞活性の文脈では、「機能障害」の用語は、抗原刺激に対する免疫応答性が低下した状態を指し、Ｔ細胞疲弊および／またはアネルギーを含み、これにより、Ｔ細胞が抗原を認識および結合し得るが、免疫応答の増悪または腫瘍増殖との闘いにおいて有効性が低下することを示す。機能障害Ｔ細胞は、抗原認識を下流Ｔ細胞エフェクター機能、例えば、増殖、サイトカインおよびインターフェロン産生もしくは標的細胞殺傷に変換する能力が損なわれていることを実証し、ならびに／またはＴ細胞機能障害疾患に特徴的であるように、抗原認識に対して不応性もしくは無応答性であると思われる。「Ｔ細胞機能障害疾患」は、ＰＤ－１を介するＴ細胞シグナル伝達の不適切な増加、増殖し、ならびに／またはサイトカインおよび／もしくは細胞溶解活性をもたらす能力が低下したＴ細胞、Ｔ細胞アネルギー、腫瘍免疫と関連するか、あるいはこれらとして検出され得る。

「Ｔ細胞疲弊」は、がんに対する応答の一部としての持続的ＴＣＲシグナル伝達によるＴ細胞機能障害の状態を含み、腫瘍に対する至適応答を防ぐ。疲弊により、細胞内因性の負の調節（共刺激）経路（例えば、ＰＤ－１、ＰＤ－１軸、Ｂ７－Ｈ３、Ｂ７－Ｈ４）を介するか、または細胞外因性の負の調節経路（免疫調節性サイトカイン）のいずれかを介する作用が見出され得る。Ｔ細胞疲弊は、不十分なエフェクター機能、阻害性受容体の持続的発現、および機能性エフェクターまたはメモリーＴ細胞のそれとは異なる、転写活性の変化により特徴づけられる。Ｔ細胞アネルギーは、共刺激の文脈においても頻繁に、Ｔ細胞受容体を介するシグナル伝達不全および抗原刺激に対する無応答状態の発生により生じ、結果的にこのようなＴ細胞は、クローン増殖を起こさず、および／またはエフェクター機能を得られない。

治療適用
本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、任意選択で、単回用量として、または２回以上の用量として、連続的または断続的に投与し得る。

したがって、修飾免疫応答性細胞は、単回用量または２回以上の用量（複数回用量）として投与し得る。修飾免疫応答性細胞は、約５億から約１０億細胞、約２０億細胞、約３０億細胞、約４０億細胞、約５０億細胞、約６０億細胞、約７０億細胞、約８０億細胞、約９０億細胞、約１００億細胞、約１１０億細胞、約１２０億細胞、約１３０億細胞、約１４０億細胞、約１５０億細胞、約１６０億細胞、約１７０億細胞、約１８０億細胞、約１９０億細胞、約２００億細胞または約２１０億細胞のいずれか１つの用量で投与し得る。修飾免疫応答性細胞は、約１億～約２億細胞、約３億～約４億細胞、約５億～約６億細胞、約７億～約８億細胞または約９億～約１０億細胞、任意選択で、約５億～約１０億細胞、約２０億～約５０億細胞または約６０億～約１００億細胞の用量で投与し得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、静脈内、筋肉内、皮下、局所的、経口的、経皮的、腹腔内、眼窩内に、移植により、吸入により、くも膜下腔内、脳室内もしくは鼻腔内に、または静脈内注入により投与し得る。好ましくは、修飾免疫応答性細胞は、静脈内に、すなわち静脈内注入により投与し得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、
（ａ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける単回用量、
（ｂ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける１または複数回の用量、
（ｃ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれの１日目における単回用量、
（ｄ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれの１日目における用量を含む、１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける１または複数回の用量、
（ｅ）少なくとも１回の用量が各サイクルの１日目である、１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける１または複数回の用量、
（ｆ）単回用量
として投与することができる。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、投与サイクルにおいて投与することができ、ここで、投与サイクルは、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８週間のいずれか、または１カ月、２カ月、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月もしくは１２カ月のいずれかであり得る。したがって、投与サイクルは、１０～１２週間、１１～１３週間、１４～１７週間、１４～１７週間、１８～２１週間、２２～２４週間、２４～２７週間、２８～３０週間、３カ月、４カ月、５カ月、６カ月のいずれかであり得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、投与サイクルにおいて投与することができ、ここで、投与サイクルは、
（ａ）それまでの修飾免疫応答性細胞投与後の疾患増悪、および／または
（ｂ）それまでの修飾免疫応答性細胞投与後１２週間以上
の時点におけるものであるか、またはこの時点に開始するか、もしくはこの時点に再開することができ、ここで、
（ｃ）腫瘍および／もしくはがんがＡＦＰを発現し、ならびに／または
（ｄ）対象の血清ＡＦＰが、正常範囲を上回る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、投与サイクルにおいて投与することができ、ここで、投与サイクルは、
（ａ）それまでの修飾免疫応答性細胞投与後の奏効確認もしくは完全奏効もしくは部分奏効、または
（ｂ）２、３もしくは４カ月以上の期間の疾患安定の後、それまでの修飾免疫応答性細胞投与後の疾患増悪、および／あるいは
（ｃ）それまでの修飾免疫応答性細胞投与後１２週間以上
の時点におけるものであるか、またはこの時点に開始するか、もしくはこの時点に再開することができ、ここで、
（ｃ）腫瘍および／もしくはがんがＡＦＰを発現し、ならびに／または
（ｄ）対象の血清ＡＦＰが、正常範囲を上回る。

腫瘍および／またはがんは、免疫組織化学的検査により判定する場合、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０％以上、好ましくは、２０％以上の腫瘍および／またはがん細胞において１＋の強度以上のレベルでＡＦＰを発現し得る。正常範囲を上回る対象の血清ＡＦＰは、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０または５００ｎｇ／ｍＬ以上、好ましくは、１００ｎｇ／ｍＬ以上であり得る。

本発明によれば、用量は、固定用量または可変用量であり得る。例えば、２回以上の用量、すなわち、複数回用量を投与する場合、用量は、固定であり得るか、または可変であってもよく、例えば、２回以上の用量を投与する場合、用量は、例えば、投与サイクルのそれぞれにおいて、段階的に増大または上昇してもよく、すなわち、例えば、次第に、上昇レベル、例えば、１億～５億、～１０億、～５０億、～１００億細胞の用量であり得る。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、好ましくは、約５０億～約１００億細胞の単回用量として投与する。

本発明によれば、修飾免疫応答性細胞は、特定の期間、投与することができ、これは、修飾免疫応答性細胞投与サイクルでは、特定の期間、投与することができることを意味する。特定の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８カ月のいずれか、好ましくは、２４カ月であり得る。

本発明によれば、方法は、
（ａ）修飾免疫応答性細胞を単回用量として投与するステップと、
（ｂ）疾患状態を修飾免疫応答性細胞投与後の期間で判定し、修飾免疫応答性細胞投与前の状態と比較するステップと、疾患の増悪が判定される場合、
（ｃ）修飾免疫応答性細胞を単回用量として投与し、ここで、任意選択で、腫瘍および／もしくはがんが、ＡＦＰを発現し、ならびに／または対象の血清ＡＦＰが、これまでに記載する正常範囲を上回るステップとを含み得る。好ましくは、期間は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８週間のいずれか１つの期間以上、好ましくは、１２週間以上である。

本発明によれば、方法は、
（ａ）修飾免疫応答性細胞を単回用量として投与するステップと、
（ｂ）疾患状態を修飾免疫応答性細胞投与後の第１および後の第２の期間で判定し、修飾免疫応答性細胞投与前の状態と比較するステップと、第１の期間後に疾患の安定が判定され、第２の期間後に疾患の増悪が判定される場合、
（ｃ）修飾免疫応答性細胞を単回用量として投与し、ここで、任意選択で、腫瘍および／もしくはがんが、ＡＦＰを発現し、ならびに／または対象の血清ＡＦＰが、これまでに記載する正常範囲を上回るステップとを含み得る。好ましくは、第１の期間は、１、２、３、４、５、６、７、８カ月のいずれか１つの期間以上、好ましくは、４カ月以上である。

本発明によれば、「完全奏効」（ＣＲ）は、すべての標的病変または腫瘍を消滅したものとして評価または測定した場合に判定される。「部分奏効」（ＰＲ）は、例えば、対照または処置前比較に対して比較したとき、標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の和の測定値が少なくとも３０％低下する場合に判定される。「疾患の増悪」（ＰＤ）は、例えば、治療開始または１つもしくは複数の新たな病変の存在以来、対照または処置前比較に対して比較したとき、標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の和の測定値が少なくとも２０％上昇する場合に判定される。「疾患安定」（ＳＤ）は、治療開始以来、最小ＳＬＤに対して比較したとき、標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の和が、ＰＲであると認定するのに十分に減少または低下もせず、ＰＤであると認定するのに十分に上昇もしないことが判定される場合に判定される。

本発明によれば、治療前の対象は、免疫組織化学的検査により判定する場合、１０、１５、２０、２５、３０％以上、好ましくは、２０％以上の腫瘍および／またはがん細胞において１＋の強度以上の腫瘍および／またはがん細胞でのＡＦＰ発現を含んでもよく、非がん性ＡＦＰ発現は、免疫組織化学的検査による任意の強度において非がん性または非腫瘍性組織の細胞の３、５、７、９、１０％以下、好ましくは、５％以下である。

本発明によれば、治療前の対象は、５０、１００、２００、３００または４００ｎｇ／ｍＬ以上、好ましくは、１００ｎｇ／ｍｌ以上の血清レベルＡＦＰを含んでもよく、ＡＦＰ発現は、免疫組織化学的検査による任意の強度において非がん性または非腫瘍性組織の細胞の３、５、７、９、１０％以下、好ましくは、５％以下である。

本発明によれば、治療前の対象は、０～１の米国東海岸癌臨床試験グループ指標（ＥＣＯＧ）および／または１、２、３、４、５もしくは６のいずれか１つのチャイルド・ピュースコアおよび／または固形がんの効果判定規準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１により測定可能な疾患を含み得る。

本発明によれば、治療前に対象が
（ａ）１００ｎｇ／ｍＬ未満または１０ｎｇ／ｍＬ以下である正常範囲内の血清ＡＦＰレベル、
（ｂ）肝臓移植、
（ｃ）ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストリガンドによる免疫療法および／または細胞傷害性化学療法、
（ｄ）ＨＬＡ－Ｃ^＊０４：０４陽性またはＨＬＡ－Ｂ^＊５１：０３陽性の状態、あるいは
（ｅ）局所領域療法
のいずれか１つまたは複数を有する場合、対象は、本発明による治療から除外される。

本発明によれば、対象は、例えば、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２もしくはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７、好ましくは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１もしくはＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２から選択されるＨＬＡ－Ａ２に対して陽性であってもよく、ならびに／またはがんおよび／もしくは腫瘍は、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）またはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原を発現する。

本発明によれば、対象は、標準治療に対して不耐性であることがあり、加えて、またはあるいは、対象ならびに／またはがんおよび／もしくは腫瘍に対して、標準治療による治療がそれまでに失敗しているか、または任意選択で、化学および／もしくは経皮的熱アブレーションおよび動脈内化学塞栓療法から選択される局所領域療法による治療がそれまでに失敗していることがある。標準治療は、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択することができる。

本発明によれば、がんは、原発がん、二次がん、再燃性のがん、または不応性のがん、または再発性のがん、または局所再発性のがん、または転移性のがん、切除不能もしくは局所限定のがん、手術もしくは放射線治療の選択肢を有しないがん、または手術不能のがん、移植もしくは局所領域療法が適しないがん、あるいはこれらの任意の組合せであり得る。対象は、再燃性のがん、または不応性のがん、または再発性のがん、または局所再発性のがん、または転移性のがん、または局所限定もしくは手術不能のがん、あるいはこれらの任意の組合せを有し得る。

本発明によれば、がんは、肺がん、非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、転移性または進行性ＮＳＣＬＣ、扁平上皮ＮＳＣＬＣ、腺癌ＮＳＣＬＣ、腺扁平上皮ＮＳＣＬＣ、大細胞ＮＳＣＬＣ、卵巣がん、胃がん、尿路上皮がん、食道がん、食道胃接合部がん（ＥＧＪ）、メラノーマ、膀胱がん、頭頸部がん、頭頸部扁平上皮癌（ＨＮＳＣＣ）、口腔がん、中咽頭がん、下咽頭がん、咽喉がん、喉頭がん、扁桃がん、舌がん、軟口蓋がん、咽頭がん、滑膜肉腫、粘液性円形細胞脂肪肉腫（ＭＲＣＬＳ）から選択してもよく、ここで、任意選択で、がんまたは腫瘍は、ＡＦＰまたはこのペプチド抗原を発現し、任意選択で、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原は、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）またはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含む。

本発明によれば、がんは、乳がん、転移性乳がん、肝臓がん、腎細胞癌、滑膜肉腫、尿路上皮がんまたは腫瘍、膵臓がん、結腸直腸がん、転移性胃（stomach）がん、転移性胃（gastric）がん、転移性肝臓がん、転移性卵巣がん、転移性膵臓がん、転移性結腸直腸がん、転移性肺がん、結腸直腸癌または腺癌、肺癌または腺癌、膵臓癌または腺癌、粘液腺腫、膵臓の腺管癌、血液系悪性腫瘍のいずれか１つから選択してもよく、ここで、任意選択で、がんまたは腫瘍は、ＡＦＰまたはこのペプチド抗原を発現し、任意選択で、アルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原は、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）またはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含む。

本発明によれば、がんは、肝臓がんであり得るか、または胆管細胞癌、肝臓血管肉腫、肝芽腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）のいずれかから選択される肝臓がんであってもよく、ここで、任意選択で、がんは、移植または切除が適さず、好ましくは、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。加えて、肝臓がんは、糖尿病、肥満、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、硬変のいずれか１つまたは複数と同時発生的であり得る。

対象が、がんおよび／もしくは腫瘍ための事前治療を受けていないか、あるいは、対象が、がんおよび／もしくは腫瘍ための事前治療を受けており、ならびに／またはがんおよび／もしくは腫瘍のための事前がん治療に応答できなかった、本発明による治療方法または使用をさらに提供する。

本発明によれば、事前治療は、全身および／または局所療法、例えば、手術、放射線療法、寒冷療法、レーザー療法、外用療法、化学療法、ホルモン療法、標的薬物または免疫療法のいずれか１つまたは複数を含み得る。したがって、事前治療は、局所的治療、例えば、手術、放射線療法、寒冷療法、レーザー療法、外用療法のいずれか１つもしくは複数、および／または全身療法、例えば、化学療法、ホルモン療法、標的薬物もしくは免疫療法のいずれか１つもしくは複数を含み得る。

本発明によれば、事前治療は、ＰＤ－１軸結合アンタゴニスト、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストまたはＰＤ－１結合アンタゴニストを含み得る。したがって、事前治療は、
（ａ）ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間および／またはＰＤ－Ｌ１とＢ７－１との間の結合を阻害する抗ＰＤ－Ｌ１抗体、
（ｂ）がん細胞表面上のＰＤ－Ｌ１が細胞内経路へシグナルを伝達するのを阻害する抗ＰＤ－Ｌ１抗体、
（ｃ）ＰＤ－Ｌ１とＰＤ－１との間および／またはＰＤ－Ｌ２とＰＤ－１との間の結合を阻害する抗ＰＤ－１抗体、
（ｄ）Ｔ細胞表面上のＰＤ－１が細胞内経路へシグナルを伝達するのを阻害する抗ＰＤ－１抗体、
（ｅ）（ｉ）デュルバルマブ、イミフィンジまたはＭＥＤＩ４７３６、
（ｉｉ）アテゾリズマブ、テセントリクまたはＭＰＤＬ３２８０Ａ、
（ｉｉｉ）アベルマブ、バベンチオまたはＭＳＢ００１０７１８Ｃ、
（ｉｖ）ＭＤＸ－１１０５、ＢＭＳ－９３６５５９
から選択されるＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニスト、
（ｆ）（ｉ）ペムブロリズマブ、キイトルーダ、ラムブロリズマブまたはＭＫ－３４７５、
（ｉｉ）セミプリマブ、リブタヨまたはＲＥＧＮ－２８１０、
（ｉｉｉ）ＢＭＳ／ＯＮＯ、ニボルマブ、オプジーボ、ＯＮＯ－４５３８、ＢＭＳ－９３６５５８またはＭＤＸ１１０６
から選択されるＰＤ－１結合アンタゴニスト
のいずれかを含み得る。

本発明によれば、事前治療は、上皮成長因子受容体アンタゴニスト、任意選択で、セツキシマブを含み得る。本発明によれば、事前治療が化学療法を含む場合、これは、１つまたは複数の白金化合物を含んでもよく、任意選択で、リポプラチン（Lipoplatin）、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、トリプラチン（Triplatin）四硝酸塩、フェナントリプラチン（Phenanthriplatin）、サトラプラチン、ピコプラチンから選択される。加えて、またはあるいは、事前治療が化学療法を含む場合、これは、メトトレキセート、カペシタビン、タキサン、アントラサイクリン、パクリタキセル、ドセタキセル、パクリタキセルタンパク質結合粒子、ドキソルビシン、エピルビシン、５－フルオロウラシル、シクロホスファミド、アファチニブ、ビンクリスチン、エトポシドまたはこれらの組合せから選択される１つまたは複数の化学療法剤を含み得る。加えて、またはあるいは、事前治療が化学療法を含む場合、これは、ＦＥＣ：５－フルオロウラシル、エピルビシン、シクロホスファミド、ＦＡＣ：５－フルオロウラシル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ＡＣ：ドキソルビシン、シクロホスファミド、ＥＣ：エピルビシン、シクロホスファミドから選択される１つまたは複数の化学療法剤を含み得る。

本発明によれば、事前治療は、ソラフェニブ、ＰＤ１もしくはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストもしくは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つもしくは複数、または任意選択で、化学および／もしくは経皮的熱アブレーションおよび動脈内化学塞栓療法から選択される、局所領域療法を含み得る。

本発明によれば、対象は、最後の治療以来１２カ月以下または最後の治療以来６カ月以下において、反復して、事前治療を受けていなくてもよい。本発明によれば、対象は、最後の治療以来１２カ月以下において、反復して、または最後の治療以来６カ月以下において、反復して、いかなる事前アジュバント療法（手術後の放射線および／または化学療法）も受けていなくてよい。

本発明によれば、治療により、
（ａ）無増悪生存、
（ｂ）増悪までの期間、
（ｃ）奏効期間、
（ｄ）全生存、
（ｅ）客観奏効もしくは客観奏効率、
（ｆ）全奏効もしくは全奏効率、
（ｇ）部分奏効もしくは部分奏効率、
（ｈ）完全奏効もしくは完全奏効率、
（ｉ）疾患安定率もしくは疾患安定中央値、
（ｊ）無増悪生存中央値、
（ｋ）増悪までの期間の中央値、
（ｌ）奏効期間中央値、または
（ｍ）全生存中央値、
（ｎ）客観奏効中央値もしくは客観奏効率中央値、
（ｏ）全奏効中央値もしくは全奏効率中央値、
（ｐ）部分奏効中央値もしくは部分奏効率中央値、
（ｑ）完全奏効中央値もしくは完全奏効中央値、
（ｒ）疾患安定率中央値もしくは疾患安定中央値
のいずれかが、プラセボ治療と比較して、または治療前と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、延長もしくは向上または効果的に延長もしくは効果的に向上し、ここで、任意選択で、標準治療が、ソラフェニブ、ＰＤ１もしくはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストもしくは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択される。

「無増悪生存」（ＰＦＳ）は、治療（またはランダム化）から最初の疾患増悪または死亡までの時間を指す。「増悪までの期間」（ＴＴＰ）は、治療するがんまたは腫瘍以外の原因により死亡した患者を数えないが、さもなければＰＦＳと等価である。「奏効期間」（ＤｏＲ）は、がん、腫瘍または病変が増殖または伝播することなく治療に応答し続ける時間の長さである。本発明によれば、ＤｏＲ、ＴＴＰおよびＰＦＳは、固形がんの効果判定規準（ＲＥＣＩＳＴ）により評価可能であるか、またはＣＡ－１２５レベル（がん抗原１２５）により増悪の判定として評価可能である。

本発明によれば、ＰＦＳおよび／もしくはＴＴＰおよび／もしくはＤｏＲ、またはこれらの中央値は、プラセボ治療と比較して、または治療前と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療、例えば、本明細書に記載する治療（「対照」）と比較して、少なくとも１カ月、２カ月、２．３カ月、２．５カ月、２．９カ月、３カ月、３．５カ月、３．８カ月、４カ月、４．５カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月、１６カ月、１８カ月、２０カ月、２２カ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年または１０年延長または向上させることができる。

一実施形態では、ＰＦＳおよび／もしくはＴＴＰおよび／もしくはＤｏＲまたはこれらの中央値は、対照と比較して約２．９カ月～３．８カ月延長する。一実施形態では、ＰＦＳおよび／もしくはＴＴＰおよび／もしくはＤｏＲまたはこれらの中央値は、対照と比較して少なくとも約３．８カ月延長する。別の実施形態では、ＰＦＳおよび／もしくはＴＴＰおよび／もしくはＤｏＲまたはこれらの中央値は、約２．３カ月延長し、一実施形態では、ＰＦＳおよび／もしくはＴＴＰおよび／もしくはＤｏＲまたはこれらの中央値は、「対照」と比較して約６カ月延長する。

「全生存」は、所定の期間、生命を維持する対象を指す。本発明によれば、全生存またはこの中央値は、本発明の方法もしくは治療の開始から、または最初の診断から約６カ月、約１年、約１．５年、約２年、約３年、約４年、約５年、約６年、約７年、約８年、約９年、約１０年向上または延長し、任意選択で、生存解析に使用するイベントは、任意の原因による死亡であり得る。「生存」は、生命を維持する対象を指し、無増悪生存（ＰＦＳ）および全生存（ＯＳ）を含む。「全生存」は、その疾患であると診断された対象がなお生存している疾患、腫瘍および／またはがんの診断日または治療開始のいずれかからの時間の長さである。生存は、カプラン・マイヤー法により推定することができ、生存における任意の差は、層別ログランク検定を使用して計算し、「生存延長」または「生存の可能性の上昇」は、プラセボ治療と比較するか、または治療前と比較するか、または無治療と比較するか、または標準治療を含む治療（「対照」）と比較した、治療した対象におけるＰＦＳおよび／またはＯＳの上昇を意味する。本発明によれば、全生存または生存は、プラセボ治療と比較して、または治療前と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療（「対照」）と比較して、少なくとも１カ月、２カ月、２．３カ月、２．５カ月、２．９カ月、３カ月、３．５カ月、３．８カ月、４カ月、４．５カ月、５カ月、６カ月、７カ月、８カ月、９カ月、１０カ月、１１カ月、１２カ月、１６カ月、１８カ月、２０カ月、２２カ月、２年、３年、４年、５年、６年、７年、８年、９年、１０年延長または向上させることができる。

「客観奏効率」（ＯｂＲＲ）は、所定量の腫瘍サイズ縮小を有する対象の割合であり、任意選択で、標的病変または腫瘍の最長径（ＳＬＤ）の和により、最短期間で決定する。「全奏効率」（ＯＲＲ）は、治療に対する部分または完全奏効を有する対象の割合として定義し、疾患安定を含まない。ＯＲＲは、特定の期間にわたる完全奏効（ＣＲ）および部分奏効（ＰＲ）の和として一般に定義する。本発明によれば、ＯｂＲＲおよび／またはＯＲＲおよび／またはＰＲおよび／またはＣＲおよび／またはＳＤは、プラセボ治療と比較して、または治療前と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療（「対照」）と比較して、少なくとも５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％延長または向上させることができる。

本発明によれば、方法は、対象由来の試料中のバイオマーカーの発現レベルを判定するステップをさらに含んでもよく、ここで、バイオマーカーのレベルは、基準レベルと比較して、治療に対して応答する対象の可能性を判定するか、または治療に対する対象の応答レベルを判定し、ここで、試料は、治療前、治療中または治療後のいずれかに得られる。基準レベルは、対象の治療前のレベルであり得るか、またはがんの存在もしくはがんの非存在と関連するレベルであり得る。バイオマーカーは、Ｔエフェクター関連遺伝子、例えば、ＣＤ８Ａ、パーフォリン（ＰＲＦ１）、グランザイムＡ（ＧＺＭＡ）、グランザイムＢ（ＧＺＭＢ）、インターフェロンγ（ＩＦＮ－γ）、ＣＸＣＬ９またはＣＸＣＬ１０であり得る。バイオマーカーは、活性化間質関連遺伝子、例えば、形質転換成長因子β（ＴＧＦ－β）、線維芽細胞活性化タンパク質（ＦＡＰ）、ポドプラニン（ＰＤＰＮ）、コラーゲン遺伝子またはバイグリカン（ＢＧＮ）であり得る。バイオマーカーは、骨髄由来抑制細胞関連遺伝子、例えば、ＣＤ６８、ＣＤ１６３、ＦＯＸＰ３またはアンドロゲン調節遺伝子１であり得る。あるいは、バイオマーカーは、ＰＤ－Ｌ１、ＣＤ８またはアンドロゲン受容体（ＡＲ）遺伝子であり得る。

本発明によれば、対象は、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する修飾免疫応答性細胞の投与前にリンパ球枯渇化学療法を受ける。リンパ球枯渇化学療法は、シクロホスファミドおよび／またはフルダラビンの投与を含み得る。好ましくは、シクロホスファミドは、約１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、５５０、６００、６５０、７００、７５０、８００または８５０ｍｇ／ｍ^２／ｄ［ｄ＝日］、好ましくは、約５００または６００ｍｇ／ｍ^２／ｄの用量で投与し、ここで、好ましくは、投与は、１日、２日（×２ｄ）、３日（×３ｄ）、４日（×４ｄ）または５日（×５ｄ）間である。好ましくは、フルダラビンは、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５０、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０または８５ｍｇ／ｍ^２／ｄの用量で投与し、ここで、好ましくは、投与は、１日、２日（×２ｄ）、３日（×３ｄ）、４日（×４ｄ）または５日（×５ｄ）間である。好ましくは、リンパ球枯渇化学療法は、任意選択で、シクロホスファミド５００ｍｇ／ｍ^２／ｄ×３ｄおよびフルダラビン２０ｍｇ／ｍ２／ｄ×３ｄの用量またはシクロホスファミド６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ×３ｄおよびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ２／ｄ×４ｄの用量のシクロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含む。

本発明によれば、リンパ球枯渇化学療法は、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する修飾免疫応答性細胞の投与の３、４、５、６、７、８、９、１０日、好ましくは、７～５または７～４日前に適用することができる。シクロホスファミドおよびフルダラビンの投与は、連続的、別々または同時であってもよく、投与は、静脈内に、または静脈内注入により投与し得る。

本発明では、がんおよび／または腫瘍を有する対象において
（ａ）血清ＡＦＰの発現または濃度を低下させる方法、
（ｂ）免疫機能を増強する方法、
（ｃ）腫瘍の増殖もしくは腫瘍増殖率を低下させるか、または治療中止後の腫瘍サイズを維持するか、または腫瘍数もしくは腫瘍量を減少させる方法、
（ｄ）血清サイトカインおよび／またはインターフェロンのレベルまたは濃度を上昇させる方法、
（ｅ）Ｔ細胞の持続性を向上させる方法、あるいは
（ｆ）Ｔ細胞の腫瘍浸潤を向上させる方法
であって、治療の方法ならびにこれに関する態様および実施形態および特徴に関連して、任意選択で、本明細書に記載のように治療前または無治療または標準治療を含む治療と比較して、これまでに記載のように、ＡＦＰまたはＡＦＰのペプチド抗原またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）もしくはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むＡＦＰのペプチド抗原に結合する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する、有効量の修飾免疫応答性細胞を含む治療レジメンを対象に適用するステップを含む方法をさらに提供する。標準治療は、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択され得る。

したがって、本発明では、免疫機能を増強させる方法であって、それぞれに、かつ任意選択で、これまでに記載のように治療前または無治療または標準治療を含む治療と比較して、
（ａ）個人におけるＣＤ８Ｔ細胞のプライミング、活性化、増殖および／もしくは細胞溶解活性が増強されるか、
（ｂ）ＣＤ８Ｔ細胞の数が増加するか、
（ｃ）対象におけるがんおよび／もしくは腫瘍細胞により、ＭＨＣクラスＩ抗原の発現が選択的に増加し、ここで、任意選択で、対象のＰＢＭＣ細胞により、ＭＨＣクラスＩ抗原の発現が増加しないか、
（ｄ）対象における抗原提示細胞により、成熟および活性が増強され、ここで、任意選択で、抗原提示細胞が樹状細胞であるか、
（ｅ）個人におけるＩＬ－１０および／もしくはＩＬ－８の血清レベルが低下するか、
（ｆ）対象のがんおよび／もしくは腫瘍により、Ｔ細胞浸潤のレベルが上昇するか、または
（ｇ）対象のＴ細胞により、Ｔ細胞ＰＤ－１発現のレベルが低下する
方法を提供する。

したがって、（ａ）ＣＤ８Ｔ細胞活性化は、ガンマＩＦＮ^＋ＣＤ８Ｔ細胞の頻度の上昇および／もしくは細胞溶解性の増強により特徴づけられることがあり、（ｂ）抗原提示細胞の成熟は、ＣＤ８３^＋樹状細胞の頻度の上昇により特徴づけられることがあり、（ｃ）抗原提示細胞の活性化は、樹状細胞上のＣＤ８０およびＣＤ８６の発現の増加により特徴づけられることがあり、または（ｄ）ＣＤ８Ｔ細胞は、抗原特異的ＣＤ８Ｔ細胞であり得る。

本発明によれば、
（ａ）ＡＦＰまたはＡＦＰのペプチド抗原またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）もしくはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むＡＦＰのペプチド抗原に結合する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾免疫応答性細胞、ならびに修飾免疫応答性細胞を使用して対象におけるがんおよび／または腫瘍の増悪を治療または遅延させるための指示を含む添付文書を含むキット、
（ｂ）ＡＦＰまたはＡＦＰのペプチド抗原またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）もしくはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むＡＦＰのペプチド抗原に結合する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾免疫応答性細胞、ならびにこれまでに記載のように、がんおよび／または腫瘍を有する対象における
（ｉ）血清ＡＦＰの発現または濃度を低下させる方法、
（ｉｉ）免疫機能を増強する方法、
（ｉｉｉ）腫瘍の増殖もしくは腫瘍増殖率を低下させるか、または治療中止後の腫瘍サイズを維持するか、または腫瘍数もしくは腫瘍量を減少させる方法、
（ｉｖ）血清サイトカインおよび／またはインターフェロンのレベルまたは濃度を上昇させる方法、
（ｖ）Ｔ細胞の持続性を向上させる方法、あるいは
（ｖｉ）Ｔ細胞の腫瘍浸潤を向上させる方法
において修飾免疫応答性細胞を使用するための指示を含む添付文書を含むキット
を提供する。

本発明は、以下の図および実施例への参照によってさらに記載する。

（配列番号２）遺伝子使用ＴＲＡＶ１２－２^＊０２／ＴＲＡＪ４１^＊０１／ＴＲＡＣによる親ＡＦＰ特異的ＴＣＲのアルファ鎖の細胞外部分のアミノ酸配列を示す図である。 （配列番号３）遺伝子使用ＴＲＢＶ９^＊０１／ＴＲＢＤ２／ＴＲＢＪ２－７^＊０１／ＴＲＢＣ２による親ＡＦＰ特異的ＴＣＲのベータ鎖の細胞外部分のアミノ酸倍列を示す図である。 （配列番号４）可溶性ＴＣＲ（本明細書において「参照ＴＣＲ」と呼ぶ）のアルファ鎖のアミノ酸配列を示す図である。この配列は、システイン（太字および下線）が配列番号２のＴ１５９と置換されていること（すなわち、ＴＲＡＣ定常領域のＴ４８）を除いて図１の配列（配列番号２）と同一である。 （配列番号５）可溶性ＴＣＲ（本明細書において「参照ＴＣＲ」と呼ぶ）のベータ鎖のアミノ酸配列を示す図である。この配列は、システイン（太字および下線）が配列番号３のＳ１６９と置換されており（すなわち、ＴＲＢＣ２定常領域のＳ５７）、Ａ１８７がＣ１８７と置換されており、Ｄ２０１がＮ２０１と置換されていることを除いて、図２の配列（配列番号３）と同一である。 （配列番号６～２０）本発明のＴＣＲに存在し得る変異アルファ鎖のアミノ酸配列を示す図である。ＣＤＲ領域には下線を引き、親ＡＦＰ ＴＣＲと比較したアミノ酸の変異には影をつけた。 （上記の通り。） （配列番号２１）および（配列番号２２）図３および４にそれぞれ示すＴＣＲアルファおよびベータ鎖をコードするＤＮＡ配列を示す図である。 （配列番号２３）Ｔ細胞の形質導入のための親ＡＦＰ ＴＣＲ遺伝子（太字および下線のブタテッショウウイルス－１ ２Ａ配列を有するアルファ鎖－２Ａ－ベータ鎖構築物）のＤＮＡ配列を示す図である。 （配列番号２４）図７のＤＮＡ配列から生成した、Ｔ細胞形質導入のための親ＡＦＰ ＴＣＲのアミノ酸配列を示す図である。ブタテッショウウイルス－１ ２Ａ配列は、太字および下線とした。 （上記の通り。） （配列番号２５～４３）ＡＦＰ ＴＣＲの生成のためのクローニングプライマーのＤＮＡ配列およびバリアントＴＣＲのアルファ鎖のアミノ酸配列を示す図である。 （配列番号４４～４８）ＣＤ８のアミノ酸およびＤＮＡ配列を示す図である。 （配列番号４９および５０）ＡＦＰ ＴＣＲバリアントのアルファおよびベータ鎖アミノ酸配列を示す図である。 （配列番号５１）ヒトアルファ－フェトプロテインのアミノ酸配列を示す図である。 ５０億細胞用量の標的および（Ｃｙ：６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（Ｆｌｕ：３０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×４ｄを用いたＡＤＰ－Ａ２ＡＦＰ（ＡＦＰｃ３３２Ｔ）改変Ｔ細胞治療による、治療直前（ベースライン）および治療開始から８週間後の対象の肝臓のＣＴスキャンであり、標的病変（矢印で示す）が１００％減少する完全奏効を示す図である。 ５０億細胞用量の標的および（Ｃｙ：６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（Ｆｌｕ：３０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×４ｄを用いたＡＤＰ－Ａ２ＡＦＰ（ＡＦＰｃ３３２Ｔ）改変Ｔ細胞治療による、治療開始後８週間にわたる血清ＡＦＰレベルを示す図である。 ５０億細胞用量の標的および（Ｃｙ：６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（Ｆｌｕ：３０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×４ｄを用いたＡＤＰ－Ａ２ＡＦＰ（ＡＦＰｃ３３２Ｔ）改変Ｔ細胞治療による、ＡＦＰｃ３３２Ｔベクターコピー数により測定した場合のＡＦＰｃ３３２Ｔ改変Ｔ細胞の血清レベル持続性を示す図である。 ５０億細胞用量の標的および（Ｃｙ：６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（Ｆｌｕ：３０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×４ｄを用いたＡＤＰ－Ａ２ＡＦＰ（ＡＦＰｃ３３２Ｔ）改変Ｔ細胞治療による、ＡＦＰｃ３３２Ｔ形質導入Ｔ細胞数により測定した場合のＡＦＰｃ３３２Ｔ改変Ｔ細胞の血清レベル持続性を示す図である。

本発明は、以下の非制限的実施例によってさらに記載する。

[実施例１]
進行性肝細胞癌（ＨＣＣ）または他のＡＦＰ発現腫瘍型を有するＨＬＡ－Ａ２陽性対象における、アルファ－フェトプロテインに特異的な増強ＴＣＲを発現する自家Ｔ細胞（ＡＦＰｃ３３２Ｔ）の安全性および抗腫瘍活性を評価する非盲検の第Ｉ相臨床試験
方法
以下は、進行性ＨＣＣまたは他のＡＦＰ発現腫瘍型を有するＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１Ｐ群陽性対象における遺伝子改変ＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞のヒト試験を示す。疾患は、組織学的もしくは細胞遺伝学的に確認し、および／またはＲＥＣＩＳＴｖ１．１により測定可能な疾患であり得る。ＨＬＡ型に基づいて適格であり、ＡＦＰ規準を満たした対象は、健康全般、活動状態および病期についてスクリーニングした。対象は、非がん性肝臓組織においてＡＦＰ発現が比較的欠損しているはずである。スクリーニング後、すべての適格性規準を満たす対象に白血球除去を行って、自家ＡＦＰ ＴＣＲを有するＴ細胞作製のための細胞を得た。その後、細胞に、ＡＦＰ抗原（特には、特異的ＡＦＰ抗原ペプチドである配列番号１）に特異的なＡＤＰ－Ａ２ＡＦＰであるＡＦＰｃ３３２Ｔ ＴＣＲ（配列番号４９、５０）を形質導入し、細胞を増殖させて後の使用のために凍結保存した。ＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞が利用可能となると、－７～－５日目または－７～－４日目に、対象にシクロホスファミドおよびフルダラビンによるリンパ球枯渇化学療法を行った後、１日目に、形質導入細胞を注入した。

３つの対象コホートは、１億～５０億の形質導入細胞の投与によって用量の段階的増大はせずに、それぞれ治療した。
１００ｍｎ細胞用量、（シクロホスファミド：５００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（フルダラビン：２０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ
１ｂｎ細胞用量、（シクロホスファミド：５００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（フルダラビン：２０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ
５ｂｎ細胞用量、（シクロホスファミド：６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×３ｄ；（フルダラビン：３０ｍｇ／ｍ^２／ｄ）×４ｄ

対象は、注入後７日間入院させ、安全性、Ｔ細胞持続性、サイトカイン産生を監視して、４、８、１６、２４週目およびその後は３カ月に１回、ＣＴおよびＭＲＩを実施し、疾患増悪または早期介入中止まで、毎年の長期経過観察を１５年間計画する。

対象は、Ｔ細胞注入を受け、次いで、増悪または増悪前に死亡した場合、試験の介入期を完了するものと考える。任意選択で、第２のＴ細胞注入を行ってもよく、対象は、疾患のさらなる増悪を有するまで試験の介入期に留まる。増悪が確立されると、全生存以外のさらなる有効性評価は実施しない。試験の介入部分を完了するすべての対象は、ＦＤＡおよびＥＭＡ規制に従って、注入後１５年における有害事象（ＡＥ）の遅延の観察のための長期経過観察（ＬＴＦＵ）期に入る。この試験は、生存する最後の対象がＬＴＦＵを完了した場合、完了であると考える。試験は、肝細胞癌およびＡＦＰを発現する他の腫瘍を含むＡＦＰ発現腫瘍の治療を包含する。

ＡＦＰｃ３３２Ｔの安全性および忍容性を評価するために、用量制限毒性（ＤＬＴ）の発生率を監視し、最適に許容される用量範囲、有害事象（ＡＥ）および重篤有害事象（ＳＡＥ）；化学、血液学および凝固を含む臨床検査評価；ＥＣＧおよび心筋トロポニンを含む心臓評価を判定する。

試験では、血清ＡＦＰは、腫瘍ＡＦＰ発現および抗腫瘍活性のバイオマーカーとして評価する。これは、ベースラインおよびＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞注入後の腫瘍における抗原発現レベルと血清ＡＦＰレベルとの相互関係を示すために実施する。これにより、治療に応答するベースラインの血清ＡＦＰにおける変化の相関性を評価する。腫瘍における経時的な治療後ＡＦＰ発現を評価して、腫瘍免疫またはＡＦＰｃ３３２Ｔに対する耐性を判定する。加えて、循環するサイトカインを測定して、サイトカイン放出症候群（ＣＲＳ）および他の有害事象（ＡＥ）との関連性について評価した。加えてＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞注入後に、形質導入細胞持続性を、ＡＦＰｃ３３２Ｔベクターコピー数およびＡＦＰｃ３３２Ｔ形質導入Ｔ細胞数により測定した場合のＡＦＰｃ３３２Ｔ改変Ｔ細胞の血清レベル持続性の判定により評価する。

対象の鍵となる選択規準は、次を含む。
１．移植または切除が適しない、ＡＦＰ発現ＨＣＣの組織学的確認または別のＡＦＰ発現腫瘍診断の組織学的確認。
２．固形腫瘍の効果判定規準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１の規準により、リンパ球枯渇前に測定可能な疾患。
３．標準治療全身療法後の、またはこれに不耐性の、またはこれを拒絶する、リンパ球枯渇前の疾患の増悪。
４．ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１（または任意のＡ^＊０２：０１Ｐ群アレル）に対する陽性。
５．免疫組織化学的検査による２０％以上の腫瘍細胞における１＋以上のＡＦＰ発現、または非がん性肝臓組織が、免疫組織化学的検査による任意の強度のＡＦＰ染色細胞を５％以下有する。
６．１００ｎｇ／ｍＬ以上の血清ＡＦＰレベル、および非がん性肝臓組織が、免疫組織化学的検査による任意の強度のＡＦＰ染色細胞を５％以下有する。
７．４カ月を超える平均余命。
８．６以下のチャイルド・ピュースコア。
９．０～１の米国東海岸癌臨床試験グループ指標（ＥＣＯＧ）。
１０．妊娠の可能性を有する女性対象（ＦＣＢＰ）は、血清妊娠検査が陰性でなければならない。

対象の鍵となる除外規準は、（ａ）次のアレル：ＨＬＡ－Ｃ^＊０４：０４またはＨＬＡ－Ｂ^＊５１：０３に対する陽性、（ｂ）肝臓移植前であること、（ｃ）次：ｉ）３週間以内の細胞傷害性化学療法、免疫療法および生物学的療法、ｉｉ）２週間以内のコルチコステロイドまたは他の任意の免疫抑制療法を白血球除去前に受けていることを含む。

ＡＦＰｃ３３２Ｔの抗腫瘍活性を評価するために、次のエンドポイントをＲＥＣＩＳＴｖ１．１により監視する：完全奏効（ＣＲ）または部分奏効（ＰＲ）が確認された対象の割合として定義する全奏効率（ＯＲＲ）。さらなるエンドポイントは、奏効期間（ＤｏＲ）、疾患安定期間（ＳＤ）、無増悪生存（ＰＦＳ）、全生存（ＯＳ）について監視する。

結果
図１３に示すデータは、５０億細胞の注入を受けているコホートに対するＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞注入後８週間における標的病変の１００％の減少を実証する。図１４は、これが、治療に対する測定可能な応答および腫瘍のＡＦＰ発現を意味する血清ＡＦＰレベルの激減と同時発生的であることを示す。このバイオマーカーの変化は、コホート対象におけるＨＣＣに対するがんおよび腫瘍治療の治療有効性を示す。注入から最大８週間のＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞血清ベクターおよび形質導入Ｔ細胞の測定により、５０億細胞を投与したＨＣＣコホート対象について、改変ＡＦＰｃ３３２Ｔ細胞が、改変ＴＣＲを保持する対象において良好に持続することが示される。

Claims (51)

1. 対象におけるがんおよび／または腫瘍の増悪を治療、予防または遅延させる方法であって、ＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）またはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原に結合する異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する有効量の修飾免疫応答性細胞を含む治療レジメンを前記対象に適用するステップを含む方法。
2. 前記異種ＴＣＲが、前記ペプチド抗原に特異的および／または選択的に結合する、請求項１に記載の方法。
3. 前記ペプチド抗原が、がん症状、がんおよび／もしくは腫瘍と関連し、ならびに／または腫瘍もしくはがん細胞もしくは組織により提示される、請求項２に記載の方法。
4. 前記がんおよび／または腫瘍が、ＡＦＰを発現するがんおよび／または腫瘍であり、ならびに／あるいはアルファフェトプロテインまたはこのペプチド抗原またはＦＭＮＫＦＩＹＥＩ（配列番号１）もしくはアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）配列番号５１に由来する残基１５８～１６６を含むアルファフェトプロテイン（ＡＦＰ）のペプチド抗原を発現する、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
5. ペプチド抗原が、ペプチド提示分子、任意選択で、主要組織適合複合体（ＭＨＣ）またはヒト白血球抗原（ＨＬＡ）、任意選択で、クラスＩまたはクラスＩＩと複合体を形成する、請求項１から４のいずれか１項に記載の方法。
6. 前記ペプチド提示分子が、ＨＬＡ－Ａ^＊０２であり、任意選択で、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０２、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０３、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０４、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０５、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０６、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：０７、好ましくは、ＨＬＡ－Ａ^＊０２：０１またはＨＬＡ－Ａ^＊０２：６４２から選択される、請求項５に記載の方法。
7. 前記異種ＴＣＲが、前記ペプチド抗原および／もしくは前記ペプチド提示分子ならびに／またはこれらの複合体に特異的および／または選択的に結合する、請求項１から６のいずれか１項に記載の方法。
8. 前記異種ＴＣＲが、ＴＣＲアルファ鎖可変ドメインおよびＴＣＲベータ鎖可変ドメインを含み、
   （ｉ）前記アルファ鎖可変ドメインが、次の配列
   配列番号２９のＤＲＧＳＱＳ（αＣＤＲ１）もしくは配列番号２のアミノ酸２７～３２またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、
   配列番号３０のＩＹＳＮＧＤ（αＣＤＲ２）もしくは配列番号２のアミノ酸５０～５５またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、および
   配列番号３１のＡＶＮＳＤＳＧＹＡＬＮＦ（αＣＤＲ３）もしくは配列番号２のアミノ酸９０～１０１またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列
   を有するＣＤＲを含み、
   （ｉｉ）前記ベータ鎖可変ドメインが、次の配列
   配列番号３２のＳＧＤＬＳ（βＣＤＲ１）もしくは配列番号３のアミノ酸２７～３１またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、
   配列番号３３のＹＹＮＧＥＥ（βＣＤＲ２）もしくは配列番号３のアミノ酸４９～５４またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列、および
   配列番号３４のＡＳＳＬＧＧＥＳＥＱＹ（βＣＤＲ３）もしくは配列番号３のアミノ酸９２～１０２またはこれらに対する少なくとも５０％の配列同一性を有する配列
   を有するＣＤＲを含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
9. 前記異種ＴＣＲが、前記アルファ鎖可変ドメインが、配列番号２のアミノ酸残基１～１１２の配列に対する少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、および／または前記ベータ鎖可変ドメインが、配列番号３のアミノ酸残基１～１１２の配列に対する少なくとも８０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ＴＣＲを含む、前記請求項のいずれかに記載の方法。
10. 前記異種ＴＣＲが、
    ａ．配列番号３５の配列ＤＲＧＳＱＡを有するαＣＤＲ１、
    ｂ．配列番号３６の配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｃ．配列番号３７の配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｄ．配列番号３５の配列ＤＲＧＳＱＡを有するαＣＤＲ１および配列番号３７の配列ＡＶＮＳＤＳＧＶＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｅ．配列番号３８の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｆ．配列番号３９の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＳＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｇ．配列番号４３の配列ＡＶＮＳＱＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｈ．配列番号３５の配列ＤＲＧＳＱＡを有するαＣＤＲ１および配列番号３８の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｉ．配列番号３９の配列ＡＶＮＳＱＳＧＶＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｊ．配列番号４０の配列ＡＶＮＳＱＮＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｋ．配列番号４１の配列ＤＲＧＳＦＳを有するαＣＤＲ１、
    ｌ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１、
    ｍ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１および配列番号３６の配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、
    ｎ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１および配列番号３６の配列ＡＶＮＳＤＳＳＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２、または
    ｏ．配列番号４２の配列ＤＲＧＳＹＳを有するαＣＤＲ１および配列番号３８の配列ＡＶＮＳＱＳＧＹＡＬＮＦを有するαＣＤＲ２
    を含む、請求項８または９に記載の方法。
11. 異種ＴＣＲを発現または提示する修飾免疫応答性細胞の集団が、異種共受容体をさらに発現または提示し、任意選択で、前記共受容体がＣＤ８共受容体である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
12. 前記異種ＣＤ８共受容体が、ヘテロ二量体またはホモ二量体、ＣＤ８αβヘテロ二量体またはＣＤ８ααホモ二量体である、請求項１１に記載の方法。
13. 前記異種ＣＤ８共受容体が、
    （ａ）配列番号４４のアミノ酸配列ＶＬＬＳＮＰＴＳＧに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列ＹＬＳＱＮＫＰＫに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列ＬＳＮＳＩＭに対して少なくとも８０％の配列同一性を有するＣＤＲ３、
    （ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列ＶＬＬＳＮＰＴＳＧであるＣＤＲ１、配列番号４５のアミノ酸配列ＹＬＳＱＮＫＰＫであるＣＤＲ２、および配列番号４６のアミノ酸配列ＬＳＮＳＩＭであるＣＤＲ３、
    （ｃ）配列番号４７のアミノ酸番号２２～２３５もしくは配列番号４７の２２～１３５に対する少なくとも８０％の配列同一性を有するアミノ酸配列、または
    （ｄ）配列番号４７の配列のアミノ酸番号２２～２３５もしくは配列番号４７の２２～１３５に対する１００％の配列同一性を有するアミノ酸配列
    を含む、請求項１１または１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 異種ＴＣＲを発現または提示する修飾免疫応答性細胞の前記集団が、異種共刺激リガンド、任意選択で、４－１ＢＢＬまたはＣＤ８０をさらに発現または提示する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
15. 前記修飾免疫応答性細胞が、（ａ）Ｂ細胞、Ｔ細胞もしくはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、または（ｂ）Ｔ細胞、任意選択で、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８^＋Ｔ細胞である、請求項１から１４のいずれか１項に記載の方法。
16. 前記修飾免疫応答性細胞が、ＣＤ４^＋Ｔ細胞もしくはＣＤ８^＋Ｔ細胞の集団、またはＣＤ４^＋Ｔ細胞およびＣＤ８^＋Ｔ細胞の混合集団である、請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
17. 前記修飾免疫応答性細胞を連続的または断続的に投与する、請求項１から１６のいずれか１項に記載の方法。
18. 前記修飾免疫応答性細胞を複数回用量として投与するか、または単回用量として投与する、請求項１から１７のいずれか１項に記載の方法。
19. 単回または複数回の前記用量を１または複数回の投与サイクルにおいて投与し、任意選択で、前記用量は、固定用量または可変用量であり得る、請求項１８に記載の方法。
20. 前記修飾免疫応答性細胞を約５億～約１０億細胞、約２０億～約５０億細胞または約６０億～約１００億細胞の用量で投与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
21. 前記修飾免疫応答性細胞を
    （ａ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける単回用量、
    （ｂ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける１または複数回の用量、
    （ｃ）１または複数回の投与サイクルのそれぞれの１日目における単回用量、
    （ｄ）少なくとも１回の用量が各サイクルの１日目である、１または複数回の投与サイクルのそれぞれにおける１または複数回の用量、
    （ｆ）単回用量
    として投与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
22. 前記投与サイクルが、２～６カ月または疾患増悪の時点におけるものである、請求項１９から２１のいずれか１項に記載の方法。
23. 前記投与サイクルが、
    （ａ）それまでの修飾免疫応答性細胞投与後の疾患増悪の時点、かつそれまでの修飾免疫応答性細胞投与後１２週間以上の時点におけるものであり、
    （ｂ）前記腫瘍および／もしくはがんがＡＦＰを発現し、ならびに／または対象の血清ＡＦＰが、１００ｎｇ／ｍＬ以上である、請求項１９から２１のいずれか１項に記載の方法。
24. 前記投与サイクルが、
    （ａ）それまでの修飾免疫応答性細胞投与後の完全もしくは部分奏効の時点、または
    （ｂ）４カ月以上の期間の疾患安定の後、それまでの修飾免疫応答性細胞投与後の疾患増悪の時点、かつそれまでの修飾免疫応答性細胞投与後１２週間以上の時点
    におけるものであり、
    （ｃ）前記腫瘍および／もしくはがんがＡＦＰを発現し、ならびに／または対象の血清ＡＦＰが、１００ｎｇ／ｍＬ以上である、請求項１９から２１のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記修飾免疫応答性細胞を静脈内に、または静脈内注入により投与する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
26. 治療前に、前記対象の前記腫瘍および／またはがん細胞でのＡＦＰ発現が、免疫組織化学的検査により判定する場合、２０％以上の腫瘍および／またはがん細胞において１＋の強度以上であり、非がん性ＡＦＰ発現が、免疫組織化学的検査による任意の強度において非がん性または非腫瘍性組織の細胞の５％以下である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
27. 治療前に、前記対象の血清レベルＡＦＰが、１００ｎｇ／ｍＬ以上であり、ＡＦＰ発現が、免疫組織化学的検査による任意の強度において非がん性または非腫瘍性組織の細胞の５％以下である、前記請求項のいずれかに記載の方法。
28. 治療前に、前記対象が、０～１の米国東海岸癌臨床試験グループ指標（ＥＣＯＧ）および／または１、２、３、４、５もしくは６のいずれか１つのチャイルド・ピュースコアおよび／または固形がんの効果判定規準（ＲＥＣＩＳＴ）１．１により測定可能な疾患を有する、前記請求項のいずれかに記載の方法。
29. 治療前に、前記対象が、
    （ａ）１００ｎｇ／ｍＬ未満または１０ｎｇ／ｍＬ以下である正常範囲内の血清ＡＦＰレベル、
    （ｂ）肝臓移植、
    （ｃ）ＰＤ－１もしくはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストリガンドによる免疫療法および／または細胞傷害性化学療法、
    （ｄ）ＨＬＡ－Ｃ^＊０４：０４陽性またはＨＬＡ－Ｂ＊５１：０３陽性の状態、あるいは
    （ｅ）局所領域療法
    のいずれか１つまたは複数を有する場合、前記対象が、前記治療から除外される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
30. 前記対象が、標準治療に対して不耐性であり、任意選択で、前記標準治療が、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
31. 前記がんおよび／または腫瘍に対して、標準治療による治療がそれまでに失敗しており、任意選択で、前記標準治療が、ソラフェニブ、ＰＤ１またはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストまたは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
32. 前記がんおよび／または腫瘍に対して、任意選択で、化学および／もしくは経皮的熱アブレーションおよび動脈内化学塞栓療法から選択される局所領域療法による治療がそれまでに失敗している、前記請求項のいずれかに記載の方法。
33. 前記対象が、原発がん、二次がん、再燃性のがん、または不応性のがん、または再発性のがん、または局所再発性のがん、または転移性のがん、切除不能もしくは局所限定のがん、手術もしくは放射線治療の選択肢を有しないがん、または手術不能のがんを有するか、あるいは前記がんおよび／または腫瘍がこれらであり、任意選択で、前記がんは、移植または局所領域療法が適しない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
34. 前記がんおよび／または腫瘍が、肝臓がんであるか、または胆管細胞癌、肝臓血管肉腫、肝芽腫、肝細胞癌（ＨＣＣ）から選択される肝臓がんであり、任意選択で、前記がんは、移植または切除が適しない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
35. 前記がんおよび／または腫瘍が、肝細胞癌（ＨＣＣ）である、請求項３４に記載の方法。
36. 前記肝臓がんが、糖尿病、肥満、Ｂ型肝炎、Ｃ型肝炎、硬変のいずれか１つまたは複数と同時発生的である、請求項３４または３５に記載の方法。
37. 異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する前記修飾免疫応答性細胞の投与前に、前記対象が、リンパ球枯渇化学療法を受ける、前記請求項のいずれかに記載の方法。
38. 前記リンパ球枯渇化学療法が、任意選択で、シクロホスファミド５００ｍｇ／ｍ^２／ｄ×３ｄおよびフルダラビン２０ｍｇ／ｍ２／ｄ×３ｄの用量またはシクロホスファミド６００ｍｇ／ｍ^２／ｄ×３ｄおよびフルダラビン３０ｍｇ／ｍ２／ｄ×４ｄの用量の、シクロホスファミドおよびフルダラビンの投与を含む、請求項３７に記載の方法。
39. 前記リンパ球枯渇化学療法を、異種Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）を発現または提示する前記修飾免疫応答性細胞の投与の７～５または７～４日前に適用する、請求項３７または３８に記載の方法。
40. 前記対象が、がんおよび／または腫瘍ための事前治療を受けていない、前記請求項のいずれかに記載の方法。
41. 前記対象が、がんおよび／もしくは腫瘍の事前治療を受けており、ならびに／または、がんおよび／もしくは腫瘍の事前治療に応答できなかった、請求項１から３９のいずれか１項に記載の方法。
42. 前記事前治療が、局所療法、任意選択で、手術、放射線療法、寒冷療法、レーザー療法、外用療法のいずれか１つもしくは複数、および／または全身療法、例えば、化学療法、ホルモン療法、標的薬物、標的化学療法もしくは免疫療法のいずれか１つもしくは複数を含む、請求項４１に記載の方法。
43. 前記事前治療が、ＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストまたはＰＤ－１結合アンタゴニストを含み、任意選択で、ＰＤ－１軸結合アンタゴニストまたはＰＤ－Ｌ１結合アンタゴニストが抗体である、請求項４２に記載の方法。
44. 前記事前治療が、上皮成長因子受容体アンタゴニスト、任意選択で、セツキシマブを含む、請求項４２に記載の方法。
45. 前記事前治療が、任意選択で、リポプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチン、ネダプラチン、トリプラチン四硝酸塩、フェナントリプラチン、サトラプラチン、ピコプラチンから選択される、白金化合物を含む化学療法を含む、請求項４２に記載の方法。
46. 前記事前治療が、メトトレキセート、カペシタビン、タキサン、アントラサイクリン、パクリタキセル、ドセタキセル、パクリタキセルタンパク質結合粒子、ドキソルビシン、エピルビシン、５－フルオロウラシル、シクロホスファミド、アファチニブ、ビンクリスチン、エトポシドまたはこれらの組合せから選択される化学療法剤を含む化学療法を含む、請求項４２に記載の方法。
47. 前記事前治療が、ＦＥＣ：５－フルオロウラシル、エピルビシン、シクロホスファミド、ＦＡＣ：５－フルオロウラシル、ドキソルビシン、シクロホスファミド、ＡＣ：ドキソルビシン、シクロホスファミド、ＥＣ：エピルビシン、シクロホスファミドから選択される化学療法剤を含む化学療法を含む、請求項４２に記載の方法。
48. 前記事前治療が、ソラフェニブ、ＰＤ１もしくはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストもしくは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つ、または任意選択で、化学および／もしくは経皮的熱アブレーションおよび動脈内化学塞栓療法から選択される局所領域療法を含む、請求項４２に記載の方法。
49. 前記対象が、最後の治療以来１２カ月以下または最後の治療以来６カ月以下において、反復して、事前治療を受けていない、請求項４２から４８のいずれか１項に記載の方法。
50. 前記対象が、最後の治療以来１２カ月以下において、反復して、または最後の治療以来６カ月以下において、反復して、いかなる事前アジュバント療法（例えば、手術後の放射線および／または化学療法）も局所領域療法も受けていない、請求項４２から４８のいずれか１項に記載の方法。
51. 前記治療により、
    （ａ）無増悪生存、
    （ｂ）増悪までの期間、
    （ｃ）奏効期間、
    （ｄ）全生存、
    （ｅ）客観奏効もしくは客観奏効率、
    （ｆ）全奏効もしくは全奏効率、
    （ｇ）部分奏効もしくは部分奏効率、
    （ｈ）完全奏効もしくは完全奏効率、
    （ｉ）疾患安定率もしくは疾患安定中央値、
    （ｊ）無増悪生存中央値、
    （ｋ）増悪までの期間の中央値、
    （ｌ）奏効期間中央値、または
    （ｍ）全生存中央値、
    （ｎ）客観奏効中央値もしくは客観奏効率中央値、
    （ｏ）全奏効中央値もしくは全奏効率中央値、
    （ｐ）部分奏効中央値もしくは部分奏効率中央値、
    （ｑ）完全奏効中央値もしくは完全奏効中央値、
    （ｒ）疾患安定率中央値もしくは疾患安定中央値
    が、プラセボ治療と比較して、または治療前と比較して、または無治療と比較して、または標準治療を含む治療と比較して、効果的に延長または向上し、任意選択で、前記標準治療が、ソラフェニブ、ＰＤ１もしくはＰＤ－Ｌ１アンタゴニストもしくは阻害剤、レゴラフェニブ、カボザンチニブ、スニチニブ、ブリバニブ、エベロリムス、チバンチニブ、リニファニブのいずれか１つから選択される、前記請求項のいずれかに記載の方法。
    

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