JP2023509442A - Ｃｄ７３阻害剤とａ２ａ／ａ２ｂアデノシン受容体阻害剤の併用療法 - Google Patents

Ｃｄ７３阻害剤とａ２ａ／ａ２ｂアデノシン受容体阻害剤の併用療法 Download PDF

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Abstract

ＣＤ７３阻害剤及びアデノシンＡ２ＡまたはＡ２Ｂ受容体阻害剤を投与することを含む併用療法を開示する。開示する併用療法は、例えば、がん、炎症性疾患、心血管疾患、及び神経変性疾患を含む、アデノシン受容体及び／またはＣＤ７３の活性に関連する疾患の治療に有用である。抗ＣＤ７３抗体及びＡ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤も開示する。

Description

関連出願
本出願は、２０２０年１月３日に出願された米国仮出願第６２／９５６，８４０号の利益を主張し、その全体が参照により本明細書に援用される。
配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子的に提出された配列表を含み、その全体が参照により本明細書に援用される。２０２０年１２月２３日に作成された上記のＡＳＣＩＩコピーは、２０４４３－０６４５ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔという名前で、サイズは１１２，０５８バイトである。
ＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を投与することを含む併用療法を開示する。開示する併用療法は、例えば、がん、炎症性疾患、心血管疾患、及び神経変性疾患を含む、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体及び／またはＣＤ７３の活性に関連する疾患の治療に有用である。抗ＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ／Ａ２Ｂアデノシン受容体阻害剤も開示する。
表面抗原分類７３（ＣＤ７３）は、細胞外アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）からアデノシンへの変換を触媒するグリコシルホスファチジルイノシトール－（ＧＰＩ－）結合膜タンパク質である。それはホモ二量体として機能し、脱落する可能性があり、循環中の可溶性タンパク質として活性を有する。ＣＤ７３は、その酵素機能に加えて、細胞接着分子でもあり、白血球の輸送を調節する役割を果たす。ＣＤ７３レベルは、組織損傷または低酸素状態のために上方制御されることが知られており、多くの固形腫瘍ではＣＤ７３レベルが上昇している。腫瘍内のＣＤ７３の上方制御は、アデノシンが豊富な腫瘍微小環境に寄与し、これには、多数の腫瘍促進効果と免疫抑制効果がある。
アデノシンは、多くの免疫細胞型を介して免疫応答を調節することができる細胞外シグナル伝達分子である。アデノシンは、Ｄｒｕｒｙ及びＳｚｅｎｔ－Ｇｙoｒｇｙｕ（Ｓａｃｈｄｅｖａ，Ｓ．ａｎｄ Ｇｕｐｔａ，Ｍ．Ｓａｕｄｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｊｏｕｒｎａｌ，２０１３，２１，２４５－２５３）によって冠状血管緊張の生理学的調節因子として最初に認識されたが、アデノシンが細胞表面の特定の受容体の占有を介して細胞機能を調節することを、Ｓａｔｔｉｎ及びＲａｌｌが示した１９７０年まで認識されていなかった（Ｓａｔｔｉｎ，Ａ．，ａｎｄ Ｒａｌｌ，Ｔ．Ｗ．，１９７０．Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．６，１３－２３；Ｈａｓｋｏ，Ｇ．，ａｔ ａｌ．，２００７，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．１１３，２６４－２７５）。
アデノシンは、他の様々な生理学的機能において重要な役割を果たしている。アデノシンは、３つのリン酸基に結合すると、核酸の合成に関与し；アデノシンは、細胞エネルギー系の不可欠な構成要素であるＡＴＰを形成する。アデノシンは、細胞外ＡＴＰの酵素分解によって生成され得るか、または損傷したニューロン及びグリア細胞から、損傷した原形質膜を通過することによって放出され得る（Ｔａｕｔｅｎｈａｈｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１２，６２，１７５６－１７６６）。アデノシンは、細胞膜に局在する特定の受容体に対する作用を通じて、末梢神経系と中枢神経系の両方で様々な薬理学的効果を生み出す（Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ，Ｔ．ｅｔ ａｌ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｓ．，２０１２，６５，８１－９０）。細胞外アデノシン生成のための代替経路が記載された。これらの経路は、ＣＤ３８、ＣＤ２０３ａ、及びＣＤ７３の協調作用により、ＡＴＰの代わりにニコチンアミドジヌクレオチド（ＮＡＤ）からアデノシンを産生することを含んでいる。ＣＤ７３非依存的なアデノシンの産生は、アルカリホスファターゼまたは前立腺特異的ホスファターゼなどの他のリン酸によっても生じ得る。
ヒトのアデノシン受容体には、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ及びＡ３受容体を含む４つの既知のサブタイプが存在する。Ａ１とＡ２Ａは高親和性受容体であるが、Ａ２ＢとＡ３は低親和性受容体である。アデノシンとそのアゴニストは、これらの受容体の１つ以上を介して作用することができ、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の増加に関与する酵素であるアデニル酸シクラーゼの活性を調節することができる。異なる受容体は、この酵素に対して異なる刺激効果と抑制効果を有する。ｃＡＭＰの細胞内濃度の増加は、免疫細胞及び炎症細胞の活動を抑制し得る（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，２００４，５３，１７１－１７８）。
Ａ２Ａアデノシン受容体は、末梢及びＣＮＳ（中枢神経系）でシグナルを伝達することができ、アゴニストは抗炎症薬として探索され、アンタゴニストは神経変性疾患について探索される（Ｃａｒｌｓｓｏｎ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２０１０，５３，３７４８－３７５５）。ほとんどの細胞型では、Ａ２Ａサブタイプは細胞内カルシウムレベルを阻害するが、Ａ２Ｂはそれらを増強する。Ａ２Ａ受容体は一般に、免疫細胞由来の炎症反応を阻害すると考えられる（Ｂｏｒｒｍａｎｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００９，５２（１３），３９９４－４００６）。
Ａ２Ｂ受容体は、消化管、膀胱、肺、及び肥満細胞で高度に発現している（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。Ａ２Ｂ受容体は、構造的にＡ２Ａ受容体と密接に関連しており、アデニル酸シクラーゼを活性化することができるが、機能的に異なる。このサブタイプは、アデニル酸シクラーゼ以外のシグナル伝達系を利用する場合があると仮定されている（Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，２００４，５３，１７１－１７８）。すべてのアデノシン受容体の中で、Ａ２Ｂアデノシン受容体は低親和性受容体であり、生理学的条件下ではサイレントなままであり、細胞外アデノシンレベルの増加の結果として活性化されると考えられている（Ｒｙｚｈｏｖ，Ｓ．ｅｔ ａｌ． Ｎｅｏｐｌａｓｉａ，２００８，１０，９８７－９９５）。Ａ２Ｂアデノシン受容体の活性化は、それぞれ、Ｇｓ及びＧｑタンパク質の活性化を通じて、アデニル酸シクラーゼ及びホスホリパーゼＣを刺激することができる。マイトジェン活性化プロテインキナーゼへのカップリングも記載されている（Ｂｏｒｒｍａｎｎ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００９，５２（１３），３９９４－４００６）。
免疫系では、アデノシンシグナル伝達の関与は、過剰な免疫反応から組織を保護する重要な調節メカニズムであり得る。アデノシンは、Ｔ細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、樹状細胞、肥満細胞及び骨髄由来抑制細胞など、多くの免疫細胞型を介して免疫応答を負に調節することができる（Ａｌｌａｒｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ．Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１６，２９，７－１６）。
腫瘍では、この経路は腫瘍の微小環境によって乗っ取られ、免疫系の抗腫瘍能力を妨害し、がんの進行を促進する。腫瘍の微小環境では、アデノシンは主に２つのエクトヌクレオチダーゼＣＤ３９とＣＤ７３によって細胞外ＡＴＰから生成される。複数の細胞型がＣＤ３９及びＣＤ７３を発現することによりアデノシンを生成することができる。これは、腫瘍細胞、Ｔエフェクター細胞、Ｔ制御性細胞、腫瘍関連マクロファージ、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、内皮細胞、がん関連線維芽細胞（ＣＡＦ）及び間葉系間質／幹細胞（ＭＳＣ）の場合にあてはまる。さらに、腫瘍の微小環境に共通する状態である低酸素症及び炎症は、ＣＤ３９及びＣＤ７３の発現を誘導し、アデノシン産生の増加をもたらす。その結果、固形腫瘍のアデノシンレベルは通常の生理学的状態と比較して高くなる。
Ａ２Ａは主に、Ｔエフェクター細胞、Ｔ制御性細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ系由来細胞上に発現する。Ａ２Ａ受容体を遮断すると、Ｔ細胞を一時的に不活性化する下流の免疫抑制シグナルを防ぐことができる。Ａ２Ｂ受容体は主に、樹状細胞、腫瘍随伴マクロファージ、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、及び間葉系間質／幹細胞（ＭＳＣ）などの単球由来細胞上に発現する。前臨床モデルでＡ２Ｂ受容体を遮断すると、腫瘍の成長を抑制し、転移を遮断し、腫瘍抗原の提示を増やすことができる。
ＡＤＯＲＡ２Ａ／ＡＤＯＲＡ２Ｂ（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）遮断の安全特性に関して、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂ受容体ノックアウト（ＫＯ）マウスはすべて生存可能であり、成長異常を示さず、繁殖力がある（Ａｌｌａｒｄ，Ｂ．ｅｔ ａｌ． Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１６，２９，７－１６）。Ａ２Ａ ＫＯマウスは、リポ多糖（ＬＰＳ）でチャレンジした場合にのみ炎症性サイトカインのレベルの上昇を示し、ベースラインでは炎症のエビデンスはなかった（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。Ａ２Ｂ ＫＯマウスは、正常な血小板、赤血球、及び白血球カウント数を示したが、ＴＮＦ－α及びＩＬ－６などのベースラインで炎症が増加していた）（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。ＬＰＳ処理後、ＴＮＦ－アルファ及びＩＬ－６の産生のさらなる増加が検出された。Ａ２Ｂ ＫＯマウスはまた、炎症及び白血球接着／ローリングを媒介する血管接着分子の増加；肥満細胞活性化の増強；ＩｇＥ媒介性アナフィラキシーに対する感受性の増加ならびに低酸素下での血管漏出及び好中球流入の増加を示した（Ａｎｔｏｎｉｏｌｉ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ Ｃａｎｃｅｒ，２０１３，１３，８４２－８５７）。
第一の態様では、本開示は、有効量のヒトＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤をヒト対象に投与することを含む、治療を必要とするヒト対象におけるがんの治療方法を提供する。
いくつかの実施形態では、（１）ヒトＣＤ７３阻害剤は：
（ａ）可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）
を含む抗体；
（ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；または
（ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）を含む抗体；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）を含む抗体；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｈ）１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体；または
（ｉ）ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される阻害剤
を含む。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）の阻害剤は、化合物：
（ａ）式（Ｉ）：
Figure 2023509442000001
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員のヘテロアリールまたは４－７員のヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の５－６員のヘテロアリールまたは４－７員のヘテロシクロアルキルは、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２からそれぞれ独立して選択される１、２、または３基で、それぞれ任意選択で置換され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ独立して選択される１、２、または３個のＲＣ置換基で、任意選択で置換され；
Ｒａ２は、任意選択で、独立して選択される１つまたは２つのＲＣ置換基で置換される（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；
（ｂ）式（ＩＩ）：
Figure 2023509442000002
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｌは、Ｃ１－３アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
各Ｒ８は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８のＣ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
各Ｒ８Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８ＡのＣ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１のＣ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒ８Ｂは、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
各Ｒ８Ｄは、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）；
（ｃ）式（ＩＩＩ）：
Figure 2023509442000003
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｒ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ２Ａは、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
各Ｒ４Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；あるいは
（ｄ）式（ＩＶ）：
Figure 2023509442000004
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
各Ｒ６は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
各Ｒ２Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）
またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は：
（ａ）可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）を含み；ならびに
可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）を含む抗体；
（ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；または
（ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）を含む抗体；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｈ）１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体；または
（ｉ）ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される阻害剤を含み；そして
Ａ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）の阻害剤は、化合物：
（ａ）式（Ｉ）：
Figure 2023509442000005
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２からそれぞれ独立して選択される１、２、または３基で、それぞれ任意選択で置換され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲＣ置換基で置換され；
Ｒａ２は、任意選択で１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換された（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）
（ｂ）式（ＩＩ）：
Figure 2023509442000006
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
ＬはＣ１－３アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
各Ｒ８は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８のＣ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
各Ｒ８Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８ＡのＣ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１のＣ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒ８Ｂは、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
各Ｒ８Ｄは、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）；
（ｃ）式（ＩＩＩ）：
Figure 2023509442000007
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｒ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ２Ａは、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
各Ｒ４Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；あるいは
（ｄ）式（ＩＶ）：
Figure 2023509442000008
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
各Ｒ６は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
各Ｒ２Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）
またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、式（Ｉ）の化合物：
Figure 2023509442000009
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２から選択される１、２、または３個の基で、それぞれ任意選択で置換され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲＣ置換基で置換され；
Ｒａ２は、任意選択で１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換される（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される。いくつかの場合では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物：
Figure 2023509442000010
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
ＬはＣ１－３アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
各Ｒ８は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８のＣ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
各Ｒ８Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８ＡのＣ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１のＣ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒ８Ｂは、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
各Ｒ８Ｄは、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される。いくつかの場合では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、式（ＩＩＩ）の化合物：
Figure 2023509442000011
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｒ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ２Ａは、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
各Ｒ４Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される。いくつかの場合では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル；３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、式（ＩＶ）の化合物：
Figure 2023509442000012
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
各Ｒ６は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
各Ｒ２Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの場合では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は：
ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）を含む抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は：
ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）を含む抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含み、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、重鎖及び軽鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含み、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、重鎖及び軽鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含み、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は、重鎖及び軽鎖を含む抗体を含み、重鎖は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
第２の態様において、本開示は、有効量の、ヒトＣＤ７３に結合する抗体ならびにＡ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤をヒト対象に投与することを含む、治療を必要とするヒト対象におけるがんの治療方法を提供し、抗体は：
（ａ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）；
（ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合し；
（ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合し；
（ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合し；
（ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合し；または
（ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含み；ならびに
抗体は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ＶＬドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＶＬドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
抗体は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
抗体は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は、重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
抗体は、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である。いくつかの場合では、ＶＨドメインは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む。いくつかの場合では、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、抗体は、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する。
いくつかの実施形態では、阻害剤は、７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－［［６－［［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシメチル］ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン；３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル；３－［２－アミノ－６－［１－［［６－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾール－４－イル］ピリミジン－４－イル］－２－メチルベンゾニトリル；６－（２－クロロ－６－メチルピリジン－４－イル）－５－（４－フルオロフェニル）－１，２，４－トリアジン－３－アミン、５－ブロモ－２，６－ジ（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ピリミジン－４－アミン；及びＥＯＳ１００８５０からなる群から選択される。
いくつかの実施形態では、阻害剤は：７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－［［６－［［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシメチル］ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン；３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル；３－［２－アミノ－６－［１－［［６－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾール－４－イル］ピリミジン－４－イル］－２－メチルベンゾニトリル；６－（２－クロロ－６－メチルピリジン－４－イル）－５－（４－フルオロフェニル）－１，２，４－トリアジン－３－アミン、５－ブロモ－２，６－ジ（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ピリミジン－４－アミン；及びＥＯＳ１００８５０からなる群から選択される。
前述の方法のいくつかの実施形態では、がんは、高いアデノシンシグネチャーを有する。前述の方法のいくつかの実施形態では、がんは、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌である。
ヒト化ＣＬ２５抗体ＣＬ＿ｈｕ１０－４、ＨｚＣＬ２５、ＣＬ２５＿ｈｕ＿１０－６、及びＣＬ２５＿ｈｕ＿１１－４の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）のアミノ酸配列を示す。 ヒト化ＣＬ２５抗体ＣＬ２５＿ｈｕ＿１１－５、ＣＬ２５＿ｈｕ＿１１－６、ＣＬ２５＿ｈｕ＿８－４、及びＣＬ２５＿ｈｕ＿８－５のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ヒト化ＣＬ２５抗体ＣＬ２５＿ｈｕ＿８－６、ＣＬ２５＿ｈｕ＿９－４、ＣＬ２５＿ｈｕ＿９－５、及びＣＬ２５＿ｈｕ＿９－６のＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ＣＬ２５抗体及びヒト化ＣＬ２５抗体のＶＨのアラインメントを示す。ＩＭＧＴ定義に従うＣＤＲ配列に下線が引いてある。 ＣＬ２５抗体及びヒト化ＣＬ２５抗体のＶＬのアラインメントを示す。ＩＭＧＴ定義に従うＣＤＲ配列に下線が引いてある。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の示された濃度での示された抗体の細胞結合（幾何平均蛍光強度［ＧＭＦＩ］によって測定される）を示すグラフである。 Ａ３７５細胞上の示された濃度でのＣＬ２５、またはアイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）の細胞結合（ＧＭＦＩによって測定される）を示すグラフである。 示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＡ３７５細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。 示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。 示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。 示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理した組換えＣＤ７３の阻害を示すグラフである。 ヒトＣＤ７３（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）の結晶構造のマップであり、ＣＬ２５抗体エピトープを濃い灰色（矢印付き）で示す。 直接コンジュゲートした非競合抗体で測定した、示された抗体またはアイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）の存在下で、または未処理（ＮＴ）での２４時間のインキュベーション後の表面ＣＤ７３レベルを示すグラフである。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の示された濃度での抗体３－Ｆ０３の細胞結合（ＧＭＦＩ）を示すグラフである。 Ａ３７５細胞における示された濃度での３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏ ｃｔｒｌ）の細胞結合（ＧＭＦＩによって測定）を示すグラフである。 ３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏ ｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＡ３７５細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。 ３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏ ｃｔｒｌ）により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。 ３－Ｆ０３またはアイソタイプ対照（Ｉｓｏ対照）により、示された濃度で処理した組換えＣＤ７３の阻害を示すグラフである。 ヒトＣＤ７３（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）の結晶構造のマップであり、３－Ｆ０３抗体エピトープを濃い灰色（矢印付き）で示す。 直接コンジュゲートした非競合抗体ＣＬ４３－Ｄｙ６５０で測定した、３－Ｆ０３、アイソタイプ対照（ｉｓｏ ｃｔｒｌ）の存在下、または未処理（ＮＴ）での２４時間のインキュベーション後のＣＤ７３表面レベルを示すグラフである。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ３－Ｆ０３及び例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬアミノ酸配列を示す。 ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における示された濃度での示された抗体の細胞結合（ＧＭＦＩ）を示すグラフである。 示された抗体またはアイソタイプ対照により、示された濃度で処理したＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞における細胞のＣＤ７３阻害を示すグラフである。 Ｎ２９７Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（配列番号７３）、Ｃ末端リジンを伴うＮ２９７Ａ変異を有するヒトＩｇＧ１重鎖ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３（配列番号７５）、及びヒトκ軽鎖定常領域（配列番号７４）の例示的なアミノ酸配列を示す。 （ｉ）滴定したＨｚＣＬ２５、（ｉｉ）滴定した化合物９、または（ｉｉｉ）滴定したＨｚＣＬ２５及び０．５μＭの化合物９で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ均一時間分解蛍光（ＨＴＲＦ）シグナル比を示すグラフである。 （ｉ）滴定した抗体Ａ、（ｉｉ）滴定した化合物９、または（ｉｉｉ）滴定した抗体Ａ及び０．５μＭの化合物９で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ ＨＴＲＦシグナル比を示すグラフである。 （ｉ）滴定した抗体Ｂ、（ｉｉ）滴定した化合物９、または（ｉｉｉ）滴定した抗体Ｂ及び０．５μＭの化合物９で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ ＨＴＲＦシグナル比を示すグラフである。 （ｉ）滴定したＨｚＣＬ２５、（ｉｉ）滴定した化合物９、または（ｉｉｉ）滴定した化合物９及び１μｇ／ｍＬのＨｚＣＬ２５で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ ＨＴＲＦシグナル比を示すグラフである。 （ｉ）滴定したＨｚＣＬ２５、（ｉｉ）滴定した化合物Ａ、または（ｉｉｉ）滴定した化合物Ａ及び１μｇ／ｍＬのＨｚＣＬ２５で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ ＨＴＲＦシグナル比を示すグラフである。 （ｉ）滴定したＨｚＣＬ２５、（ｉｉ）滴定した化合物Ｂ、または（ｉｉｉ）滴定した化合物Ｂ及び１μｇ／ｍＬのＨｚＣＬ２５で処理したＣＤ４＋Ｔ細胞におけるＩＦＮγ ＨＴＲＦシグナル比を示すグラフである。 （ｉ）滴定した化合物９、（ｉｉ）滴定したＨｚＣＬ２５、または（ｉｉｉ）滴定したＨｚＣＬ２５及び０．５μＭの化合物９で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の割合を示すグラフである。 （ｉ）滴定した化合物９、（ｉｉ）滴定した抗体Ａ、または（ｉｉｉ）滴定した抗体Ａ及び０．５μＭの化合物９で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の割合を示すグラフである。 （ｉ）滴定した化合物９、（ｉｉ）滴定した抗体Ｂ、または（ｉｉｉ）滴定した抗体Ｂ及び０．５μＭの化合物９で処理したドナー細胞におけるＣＤ４＋Ｔ細胞増殖の割合を示すグラフである。 （ｉ）ヒトＩｇＧ１及びビヒクル（丸）、または（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５及び化合物９（四角）を投与したマウスにおける腫瘍体積を示すグラフである。 （ｉ）ヒトＩｇＧ１及びビヒクル（丸）、または（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１３及び化合物９（四角）を投与したマウスにおける腫瘍体積を示すグラフである。 ＨｚＣＬ２５重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列を示す。 ３－Ｆ０３＿４１１重鎖をコードするＤＮＡ配列を示す。 ３－Ｆ０３＿４１１及び３－Ｆ０３＿４１３軽鎖ならびに３－Ｆ０３＿４１３重鎖をコードするＤＮＡ配列を示す。
本明細書において、ＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤の投与を含む併用療法を提供する。開示する併用療法は、例えば、がん、炎症性疾患、心血管疾患、及び神経変性疾患を含む、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体及び／またはＣＤ７３の活性に関連する疾患の治療に有用である。ＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ／Ａ２Ｂアデノシン受容体阻害剤も開示する。
ＣＤ７３
ＣＤ７３（「５’－ヌクレオチダーゼ」及び「エクト－５’－ヌクレオチダーゼ」としても知られる）は、原形質膜の外面へのＧＰＩ結合によって結合されるホモ二量体として機能する二量体酵素（ＥＣ：３．１．３．５）である。ＣＤ７３は、脱落することができ、循環中の可溶性タンパク質として活性を有する。ＣＤ７３は、細胞外ＡＭＰのアデノシンへの変換を触媒する。ＣＤ７３酵素活性には、ＣＤ７３の開構造での基質結合が必要である。基質結合後、ＣＤ７３は、開構造から閉構造への大きな構造変化を経て、ＡＭＰをアデノシンに変換する（例えば、Ｋｎａｐｐ ｅｔ ａｌ．，２０１２，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，２０（１２）：２１６１－７３を参照のこと）。ＣＤ７３は、細胞接着分子としても機能し、白血球の輸送を調節する役割を果たす。
ＣＤ７３酵素活性は、がんの促進と転移に役割を果たす（例えば、Ｓｔａｇｇ ａｎｄ Ｓｍｙｔｈ，２０１０，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２９：５３４６－５３５８；Ｓａｌｍｉ ａｎｄ Ｊａｌｋａｎｅｎ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：２４７－２４８，２０１２；Ｓｔａｇｇ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：２１７－２１８；Ｚｈａｎｇ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６７－７０を参照のこと）。がん細胞におけるＣＤ７３の過剰発現は、適応性抗腫瘍免疫応答を損なわせ、腫瘍の成長及び転移を増強する（例えば、Ｎｉｅｍｅｌａ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７２：１６４６－１６５３；Ｓａｄｅｊ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２５：１１１９－１１２３；Ｂｒａｇａｎｈｏｌ ｅｔ ａｌ．，２００７，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．，１７７０：１３５２－１３５９；Ｚｈａｎｇ，２０１０，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，７０：６４０７－６４１１；Ｚｈａｎｇ，２０１２，ＯｎｃｏＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１：６７－７０を参照のこと）。
成熟ヒトＣＤ７３タンパク質の例示的なアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００２５１７のアミノ酸２７～５４９）は以下のとおりである：
ＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＥＤＳＳＫＣＶＮＡＳＲＣＭＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬＬＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＡＥＶＡＨＦＭＮＡＬＲＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＥＰＬＬＫＥＡＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＫＧＰＬＡＳＱＩＳＧＬＹＬＰＹＫＶＬＰＶＧＤＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＴＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＭＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＶＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＩＥＦＤＥＲＧＮＶＩＳＳＨＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＰＳＩＫＡＤＩＮＫＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＫＴＩＶＹＬＤＧＳＳＱＳＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＴＤＥＭＦＷＮＨＶＳＭＣＩＬＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＲＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＬＳＲＫＰＧＤＲＶＶＫＬＤＶＬＣＴＫＣＲＶＰＳＹＤＰＬＫＭＤＥＶＹＫＶＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＲＨＤＳＧＤＱＤＩＮＶＶＳＴＹＩＳＫＭＫＶＩＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳ （配列番号７０）。
成熟マウスＣＤ７３タンパク質の例示的なアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０３５９８１のアミノ酸２９～５５１）は、以下のとおりである：
ＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＤＤＳＴＫＣＬＮＡＳＬＣＶＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＫＥＥＰＮＶＬＦＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＬＥＶＡＨＦＭＮＩＬＧＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＤＰＬＬＲＮＶＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＲＧＰＬＡＨＱＩＳＧＬＦＬＰＳＫＶＬＳＶＧＧＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＳＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＭＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＩＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＡＤＤＧＲＱＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＶＥＦＤＤＫＧＮＶＩＴＳＹＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＡＴＩＫＡＤＩＮＱＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＲＴＩＶＹＬＤＧＳＴＱＴＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＰＤＥＭＦＷＮＨＶＳＭＣＩＶＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＫＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＩＮＲＫＰＷＮＲＶＶＱＬＥＶＬＣＴＫＣＲＶＰＩＹＥＰＬＥＭＤＫＶＹＫＶＴＬＰＳＹＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＫＨＤＳＧＤＱＤＩＳＶＶＳＥＹＩＳＫＭＫＶＶＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳ （配列番号７１）。
成熟カニクイザルＣＤ７３タンパク質の例示的なアミノ酸配列は、以下のとおりである：
ＷＥＬＴＩＬＨＴＮＤＶＨＳＲＬＥＱＴＳＥＤＳＳＫＣＶＮＡＳＲＣＭＧＧＶＡＲＬＦＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬＬＬＤＡＧＤＱＹＱＧＴＩＷＦＴＶＹＫＧＡＥＶＡＨＦＭＮＡＬＲＹＤＡＭＡＬＧＮＨＥＦＤＮＧＶＥＧＬＩＥＰＬＬＫＥＡＫＦＰＩＬＳＡＮＩＫＡＫＧＰＬＡＳＱＩＳＧＬＹＬＰＹＫＶＬＰＶＧＤＥＶＶＧＩＶＧＹＴＳＫＥＴＰＦＬＳＮＰＧＴＮＬＶＦＥＤＥＩＴＡＬＱＰＥＶＤＫＬＫＴＬＮＶＮＫＩＩＡＬＧＨＳＧＦＥＴＤＫＬＩＡＱＫＶＲＧＶＤＶＶＶＧＧＨＳＮＴＦＬＹＴＧＮＰＰＳＫＥＶＰＡＧＫＹＰＦＩＶＴＳＤＤＧＲＫＶＰＶＶＱＡＹＡＦＧＫＹＬＧＹＬＫＩＥＦＤＥＲＧＮＶＩＳＳＨＧＮＰＩＬＬＮＳＳＩＰＥＤＰＳＩＫＡＤＩＮＫＷＲＩＫＬＤＮＹＳＴＱＥＬＧＫＴＩＶＹＬＤＧＳＳＱＳＣＲＦＲＥＣＮＭＧＮＬＩＣＤＡＭＩＮＮＮＬＲＨＡＤＥＭＦＷＮＨＶＳＭＣＩＬＮＧＧＧＩＲＳＰＩＤＥＲＮＮＧＴＩＴＷＥＮＬＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱＬＫＧＳＴＬＫＫＡＦＥＨＳＶＨＲＹＧＱＳＴＧＥＦＬＱＶＧＧＩＨＶＶＹＤＬＳＲＫＰＧＤＲＶＶＫＬＤＶＬＣＴＫＣＲＶＰＳＹＤＰＬＫＭＤＥＩＹＫＶＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬＬＲＨＤＳＧＤＱＤＩＮＶＶＳＴＹＩＳＫＭＫＶＩＹＰＡＶＥＧＲＩＫＦＳ （配列番号７２）。
抗ＣＤ７３抗体
本開示は、疾患、例えば、がんの治療において、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤との併用において有用である抗ＣＤ７３抗体を提供する。これらの抗ＣＤ７３抗体は、ヒトＣＤ７３に結合することができる。
いくつかの場合では、これらの抗体は、ヒトＣＤ７３及びカニクイザルＣＤ７３に結合する。いくつかの場合では、これらの抗体は、ヒトＣＤ７３及びカニクイザルＣＤ７３に結合し、マウスＣＤ７３には結合しない。そのような抗ＣＤ７３抗体は、抗ＣＤ７３モノクローナル抗体ＣＬ２５、及びそのヒト化バージョンであるＨｚＣＬ２５の配列を含み、そのヒト化バージョンは、ヒト及びカニクイザルＣＤ７３の両方に高い親和性で結合し、マウスＣＤ７３に対しては、検出限界以下の結合を有する。
いくつかの場合では、これらの抗体は、ヒトＣＤ７３、カニクイザルＣＤ７３、及びマウスＣＤ７３に結合する。そのような抗ＣＤ７３抗体は、ヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３のそれぞれの開構造に高い親和性で結合するヒト抗ＣＤ７３モノクローナル抗体３－Ｆ０３の配列を含む。
抗体ＨｚＣＬ２５
抗体ＨｚＣＬ２５は、エフェクター機能を低下させるために重鎖定常領域のアスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）の位置にアラニンを有するヒト化ＩｇＧ１／κモノクローナル抗体である。この抗体は、ヒト及びカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（ＫＤ≦０．５ｎＭ）で特異的に結合し、エフェクター機能は低い。
ＨｚＣＬ２５は、ＣＬ２５抗体のキメラバージョンから構築された。ＣＬ２５マウス重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）は、ＨＩＳタグを含む組換えヒトＣＤ７３（配列番号７０）で免疫化されたマウスから得られた。Ｂ細胞の抗体配列を決定し、マウス重鎖可変ドメイン（ＶＨ）（配列番号２６）及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）（配列番号２７）を、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号７３のアミノ酸配列を含む重鎖定常領域及び配列番号７４のアミノ酸配列を含むκ軽鎖定常領域）とのキメラとして発現させた。以下の表１は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＣＬ２５相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列を示す。以下の表１はまた、ＣＬ２５成熟ＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列も示す。
Figure 2023509442000013
ＨｚＣＬ２５を構築するために、ＣＬ２５のＶＨ及びＶＬ配列をヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子のデータベースにアラインメントした。マウスＣＬ２５抗体のＣＤＲ（表１）を、ヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子に移植した。
以下の表２は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＨｚＣＬ２５ ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表２はまた、ＨｚＣＬ２５成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列も示す。
Figure 2023509442000014
抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を包含することができる。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表２を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表２を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ（表２を参照のこと）、ならびにＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ（表２を参照のこと）を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表１を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表１を参照のこと）。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ（表１を参照のこと）、ならびにＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ（表１を参照のこと）を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５の６つのＣＤＲのうちの１つ以上（すなわち、１、２、３、４、５、または６つ）に、例えば、１、２、または３つの置換を有し得る。いくつかの場合では、抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例３に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例４に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、ＫＤ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の開構造のＣＤ７３に有意に結合せず（例えば、実施例５に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、ＫＤ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の閉構造のＣＤ７３に有意に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内の（すなわち、ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）内の）エピトープに結合し（例えば、実施例５に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例１６に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させ（例えば、実施例１７に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させ）；及び／または（ｉｘ）細胞上の遊離表面ＣＤ７３を減少させる（例えば、がん細胞、例えば、黒色腫癌で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。
抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ ＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含み得る。これらの抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１及び／またはＶＨ ＣＤＲ２及び／またはＶＨ ＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ ＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３をさらに含む。これらの抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５またはＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１及び／またはＶＬ ＣＤＲ２及び／またはＶＬ ＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１、２、及び３に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４、５、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号７、８、及び９に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１２、１３、及び９に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１４、１５、及び９に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、１１、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１６、１７、及び１８に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１９、２０、及び２１に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号７、８、及び９に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、２９、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１２、１３、及び９に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、２９、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１４、１５、及び９に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１０、２９、及び６に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号１６、２８、及び１８に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号１９、２０、及び２１に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの場合では、これらの抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例３に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例４に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、ＫＤ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の開構造のＣＤ７３に有意に結合せず（例えば、実施例５に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒトまたはカニクイザルＣＤ７３に高い親和性（例えば、ＫＤ≦０．５ｎＭ）で結合するが、マウス由来の閉構造のＣＤ７３に有意に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内の（すなわち、ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）内の）エピトープに結合し（例えば、実施例５に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例１６に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させ（例えば、実施例１７に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させ）；及び／または（ｉｘ）細胞上の遊離表面ＣＤ７３を減少させる（例えば、がん細胞、例えば、黒色腫癌で、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む重鎖を含み、この重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２３、２７、８０、及び８１のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含み、このＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む軽鎖を含み、この軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む重鎖（重鎖は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含む軽鎖（軽鎖は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号２３、２７、８０、及び８１に記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ、配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖を含み、ＶＨは、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、重鎖は、ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖を含み、ＶＬは、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、軽鎖は、ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、ＨｚＣＬ２５のＶＨ（すなわち、配列番号２２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、ＨｚＣＬ２５のＶＬ（すなわち、配列番号２３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号１～３に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖（重鎖は、ＨｚＣＬ２５の重鎖（すなわち、配列番号２４に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）ＨｚＣＬ２５のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号４～６に記載のアミノ酸配列、表１を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖（軽鎖は、ＨｚＣＬ２５の軽鎖（すなわち、配列番号２５に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｉｉ）配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
ＨｚＣＬ２５のＣＤ７３結合エピトープは、アミノ酸配列ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）（すなわち、配列番号７０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸４０～５３）内にある。本開示は、配列ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）内でＣＤ７３に結合する抗体を特徴とする。この開示は、ＨｚＣＬ２５と同じエピトープに結合する抗体を特徴とする。この開示はまた、ヒトＣＤ７３へのＨｚＣＬ２５の結合を競合的に阻害する抗体を特徴とする。
いくつかの実施形態では、ＨｚＣＬ２５のＶＨを、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ＨｚＣＬ２５のＶＨを、ＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、ＨｚＣＬ２５のＶＨを、ヒトＩｇＧ１由来のＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、そのような抗体は、抗体の安定性を増加させる重鎖定常領域における１つ以上の追加の変異を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、抗体の特性を改変する置換（例えば、Ｆｃ受容体結合の減少、抗体グリコシル化の増加または減少、Ｃ１ｑへの結合の減少）を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、エフェクター機能を低下させるために、重鎖定常領域の位置アスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）にアラニンを含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩｇＧ抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。別の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、野生型重鎖定常領域と比較して、１つ以上のリジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠く重鎖定常領域を含む。例えば、特定の実施形態では、抗体は、重鎖定常領域のＣＨ３ドメインのＣ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠く重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。
抗体３－Ｆ０３
抗体３－Ｆ０３は、エフェクター機能を低下させるために重鎖定常領域のアスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）の位置にアラニンを有するヒトＩｇＧ１／κモノクローナル抗体である。３－Ｆ０３は、ヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３に高い親和性（ＫＤ≦２ｎＭ）で特異的に結合し、エフェクター機能が低下している。
３－Ｆ０３は、単一ドナーライブラリーの複数の選択ラウンドによって得られた配列からエンジニアリングした。次いで、このプールに由来するｓｃＦｖカセットを酵母ディスプレイベクターライブラリーに再結合し、マウスＣＤ７３（配列番号７１）を用いたＦＡＣ選択に供した。酵母３－Ｆ０３ ｓｃＦｖカセットのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号７７及び６５に記載する：
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＤＭＨＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＶＭＳＹＤＧＳＮＫＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ （配列番号７７）；及び
ＡＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＮＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＡＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＳＹＳＴＰＨＦＧＱＧＴＲＬＥＩＫ （配列番号６５）。
３－Ｆ０３抗体を構築するために、酵母３－Ｆ０３ ＶＨ及びＶＬを以下のように改変し、ヒトＩｇＧ１／κ骨格にクローニングした。ＶＨについては、酵母３－Ｆ０３ ＶＨ（配列番号７７）のＮ末端グルタミン酸（Ｅ）を除去し、配列番号７７のＫａｂａｔ位置Ｈ７７（すなわち、配列番号７７の位置７８）のスレオニン（Ｔ）をアラニン（Ａ）に置換した。ＶＬについては、配列番号６５のＮ末端アラニン（Ａ）を除去した。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、それぞれ配列番号６０及び６１のアミノ酸配列に記載のＶＨ及びＶＬを含む。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、本明細書中では「３－Ｆ０３」と称される。以下の表３は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによる３－Ｆ０３ ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表３はまた、３－Ｆ０３成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列も示す。
Figure 2023509442000015
３－Ｆ０３のバリアントもまた、本明細書に記載する。３－Ｆ０３＿４１１は３－Ｆ０３と同じであるが、３－Ｆ０３＿４１１重鎖は、（ｉ）３－Ｆ０３では欠失しているＮ末端グルタミン酸（Ｅ）を含み、（ｉｉ）３－Ｆ０３には存在するＣ末端リジンを含まない点が異なる。以下の表４は、３－Ｆ０３＿４１１成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。３－Ｆ０３＿４１３は３－Ｆ０３＿４１１と同じであるが、アスパラギン酸（Ｄ）の代わりにＶＨのＫａｂａｔ位置Ｈ５３（配列番号６０の５４位）にグルタミン酸（Ｅ）を含む点が異なる。以下の表５は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによる３－Ｆ０３＿４１３ ＣＤＲのアミノ酸配列を示す。以下の表５はまた、３－Ｆ０３＿４１３成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列も示す。さらなるバリアントを、以下の実施例に記載する（図１２Ａ～図１２Ｊを参照のこと）。
Figure 2023509442000016
Figure 2023509442000017
抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３、ならびにＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を包含することができる。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表３を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表３を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ（表３を参照のこと）、ならびに３－Ｆ０３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ（表３を参照のこと）を含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む（表５を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む（表５を参照のこと）。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ（表５を参照のこと）、ならびに３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬ（表５を参照のこと）を含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３の６つのＣＤＲのうちの１つ以上（すなわち、１、２、３、４、５、または６つ）に、例えば、１、２、または３つの置換を有し得る。いくつかの例では、これらの抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１０に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１１に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に高い親和性（例えば、ＫＤ≦２ｎＭ）で結合し（例えば、実施例１２に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９内（すなわち、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）内）及び配列番号７０のアミノ酸４７０～４８９内（すなわち、ＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）内）のエピトープに結合し（例えば、実施例１２に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例１６に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させる（例えば、実施例１７に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。
抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ ＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含み得る。これらの抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１及び／またはＶＨ ＣＤＲ２及び／またはＶＨ ＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩＭＧＴ定義、またはＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ ＣＤＲ定義、もしくはｃｏｎｔａｃｔ定義などであるがこれらに限定されない代替ＣＤＲ定義による、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３をさらに含む。これらの抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１及び／またはＶＬ ＣＤＲ２及び／またはＶＬ ＣＤＲ３に、０、１、２、または３つの置換を含み得る。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号３４、３５、及び３６に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号３７、３８、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４１、４２、及び５２に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４６、４７、及び５２に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４９、５０、及び５２に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号５３、５４、及び５６に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号５７、５８、及び５９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号３７、３８、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４１、４３、及び５２に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４６、４８、及び５２に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号４９、５１、及び５２に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号４４、４５、及び３９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、それぞれ配列番号５３、５５、及び５６に記載のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにそれぞれ配列番号５７、５８、及び５９に記載のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの例では、これらの抗体は（ｉ）細胞ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１０に記載のアッセイによる測定で、細胞ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉ）可溶性ＣＤ７３を阻害し（例えば、実施例１１に記載のアッセイによる測定で、可溶性ＣＤ７３活性を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｉｉｉ）開構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に高い親和性（例えば、ＫＤ≦２ｎＭ）で結合し（例えば、実施例１２に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｉｖ）閉構造のヒト、カニクイザルまたはマウスＣＤ７３に結合せず；及び／または（ｖ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９内（すなわち、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）内）及び配列番号７０のアミノ酸４７０～４８９内（すなわち、ＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）内）のエピトープに結合し（例えば、実施例１２に記載の結合アッセイによる測定で）；及び／または（ｖｉ）ＡＭＰを介したＴ細胞増殖の抑制を低減し（例えば、実施例１６に記載のアッセイによる測定で、Ｔ細胞増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低減し）；及び／または（ｖｉｉ）細胞表面ＣＤ７３のレベルを低下させ（アイソタイプ対照と比較して、例えば、がん細胞上で、例えば、黒色腫癌細胞上で、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％低下させ）；及び／または（ｖｉｉｉ）腫瘍増殖を減少させる（例えば、実施例１７に記載のアッセイによる測定で、例えば、黒色腫腫瘍の増殖を、アイソタイプ対照と比較して、例えば、少なくとも１０％；少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、少なくとも９９％、または１００％減少させる）。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む重鎖を含み、重鎖は、配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６１、６４、及び６５のうちのいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列；ならびに（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む重鎖（重鎖は、配列番号３０、３３、及び６６に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含む軽鎖（軽鎖は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、またはそれぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び配列番号６１、６４、及び６５に記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３４～３６、または配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のＶＨに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、例えば、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、例えば、表３及び表５を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のＶＬに対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、それぞれ配列番号６２または６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、３－Ｆ０３＿４１１のＶＨ（すなわち、配列番号６２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨを含み、ＶＨは、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、配列番号６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿Ｆ１３の重鎖（すなわち、それぞれ配列番号３０または３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、３－Ｆ０３＿４１１の重鎖（すなわち、配列番号３０に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖を含み、重鎖は、３－Ｆ０３＿４１３の重鎖（すなわち、配列番号３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＬを含み、ＶＬは、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖を含み、軽鎖は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、それぞれ配列番号６２または６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、３－Ｆ０３のＶＨ（すなわち、配列番号６２に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、３－Ｆ０３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨ（ＶＨは、３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ（すなわち、配列番号６３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＬ（ＶＬは、３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ（すなわち、配列番号６１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ
、及び（ｉｉ）配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び（ｉｉ）配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の重鎖（すなわち、配列番号３０または３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列、及び３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４～３６に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖（重鎖は、３－Ｆ０３＿４１１の重鎖（すなわち、配列番号３０に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１１のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表３を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖（軽鎖は、３－Ｆ０３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴ定義による、すなわち、それぞれ配列番号３４、４０、及び３６に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＨを含む重鎖（重鎖は、３－Ｆ０３の重鎖（すなわち、配列番号３３に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）３－Ｆ０３＿４１３のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３（例えば、ＩＭＧＴの定義による、すなわち、それぞれ配列番号３７～３９に記載のアミノ酸配列、表５を参照のこと）を含むＶＬを含む軽鎖（軽鎖は、３－Ｆ０３＿４１３の軽鎖（すなわち、配列番号３１に記載のアミノ酸配列）に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は：（ｉ）配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び（ｉｉ）配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
３－Ｆ０３（及びそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１及び３－Ｆ０３＿４１３）のＣＤ７３結合エピトープは、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）（すなわち、配列番号７０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸３８６～３９９）及びＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）（すなわち、配列番号７０に記載のアミノ酸配列のアミノ酸４７０～４８９）を含む。本開示は、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）及びＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）内でエピトープをＣＤ７３に結合する抗体を特徴とする。本開示は、３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）と同じエピトープに結合する抗体を特徴とする。本開示はまた、ヒトＣＤ７３への３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の結合を競合的に阻害する抗体を特徴とする。
いくつかの実施形態では、３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨを、ＣＨ１ドメイン及びヒンジ領域を含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、３－Ｆ０３（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨを、ＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、３－Ｆ０３のＶＨ（またはそのバリアント、例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）を、ヒトＩｇＧ１由来のＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域、ＣＨ２ドメイン、及びＣＨ３ドメインを含む重鎖定常領域に連結する。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠いている。いくつかの実施形態では、ヒトＩｇＧ１由来ＣＨ３ドメインは、Ｃ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を含んでいる。特定の実施形態では、そのような抗体は、抗体の安定性を増加させる重鎖定常領域における１つ以上の追加の変異を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、抗体の特性を改変する置換（例えば、Ｆｃ受容体結合の減少、抗体グリコシル化の増加または減少、Ｃ１ｑへの結合の減少）を含む。特定の実施形態では、重鎖定常領域は、エフェクター機能を低下させるために、重鎖定常領域の位置アスパラギン－２９７（ＥＵナンバリングによるＮ２９７）にアラニン（Ａ）を含む。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、ＩｇＧ抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ１抗体である。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体である。別の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２抗体である。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、野生型重鎖定常領域と比較して、１つ以上のリジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠く重鎖定常領域を含む。例えば、特定の実施形態では、抗体は、重鎖定常領域のＣＨ３ドメインのＣ末端リジン（Ｋ）アミノ酸残基を欠く重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７３に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号７５に記載のアミノ酸配列を有する重鎖定常領域及び配列番号７４に記載のアミノ酸配列を有する軽鎖定常領域を含む。
追加の抗ＣＤ７３抗体及び阻害剤
本開示は、疾患、例えば、がんの治療において、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤との併用において有用である追加の抗ＣＤ７３抗体及びＣＤ７３阻害剤を提供する。
本明細書に記載の方法において、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤との併用において有用な他の抗ＣＤ７３抗体は、当技術分野で公知である。例えば、米国特許第９，０９０，６９７号、第９，３８８，２４９号、第９，６０５，０８０号、第９，９３８，３５６号、第１０，１００，１２９号、及び第１０，２８７，３６２号、米国特許出願公開第２００４／０１４２３４２号、第２００７／０００９５１８号、第２０１１／０３００１３６号、第２０１８／０００９８９９号、第２０１８／００３０１４４号、第２０１８／０２３７５３６号、第２０１８／０２６４１０７号、第２０１９／００３１７６６号、第２０１９／０２２５７０３号、第２０１９／００７７８７３号、及び第２０１９／０２５６５９８号、ならびに国際特許出願公開第ＷＯ２００４／０７９０１３号、第ＷＯ２０１１／０８９００４号、第ＷＯ２０１４／１５３４２４号、第ＷＯ２０１７／１００６７０号、第ＷＯ２００１／０８０８８４号、第ＷＯ２０１８／１１０５５５号、第ＷＯ２０１８／１３７５９８号、第ＷＯ２０１８／１８７５１２号、第ＷＯ２０１８／２１５５３５号、第ＷＯ２０１８／２３７１７３号、第ＷＯ２０１９／１７０１３１号、第ＷＯ２０１９／１７３６９２号、及び第ＷＯ２０１９／１７３２９１号を参照されたい（これらの各々は、その全体が参照により本明細書に援用される）。
いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、アミノ酸配列ＥＩＱＬＱＱＳＧＰＥＬＶＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＡＦＴＳＹＮＭＹＷＶＫＱＳＨＧＫＳＬＥＷＩＧＹＩＤＰＹＮＧＧＴＳＹＮＱＫＦＫＧＫＡＴＬＴＶＤＫＳＳＳＴＡＹＭＨＬＮＳＬＴＳＥＤＳＡＶＹＹＣＡＲＧＹＧＮＹＫＡＷＦＡＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＡ（配列番号１００）を含むＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにアミノ酸配列ＤＡＶＭＴＱＴＰＫＦＬＬＶＳＡＧＤＲＶＴＩＴＣＫＡＳＱＳＶＴＮＤＶＡＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＫＬＬＩＹＹＡＳＮＲＹＴＧＶＰＤＲＦＴＧＳＧＹＧＴＤＦＴＦＴＩＳＴＶＱＡＥＤＬＡＶＹＦＣＱＱＤＹＳＳＬＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１０１）を含むＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１００に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号１０１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は１１Ｅ１である（米国特許出願公開第２０１８／０２３７５３６号を参照のこと（その全体が参照により本明細書に援用される））。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号１０２に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号１０３に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、アミノ酸配列ＥＶＱＬＬＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＡＩＳＧＳＧＧＲＴＹＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＬＧＹＧＲＶＤＥＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号９６）を含むＶＨのＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨ、ならびにアミノ酸配列ＱＳＶＬＴＱＰＰＳＡＳＧＴＰＧＱＲＶＴＩＳＣＳＧＳＬＳＮＩＧＲＮＰＶＮＷＹＱＱＬＰＧＴＡＰＫＬＬＩＹＬＤＮＬＲＬＳＧＶＰＤＲＦＳＧＳＫＳＧＴＳＡＳＬＡＩＳＧＬＱＳＥＤＥＡＤＹＹＣＡＴＷＤＤＳＨＰＧＷＴＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ（配列番号９７）を含むＶＬのＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号９６に記載のアミノ酸配列を含むＶＨ、及び配列番号９７に記載のアミノ酸配列を含むＶＬを含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体はＭｅｄｉ９４４７である（米国特許第１０，２８７，３６２号を参照のこと（その全体が参照により本明細書に援用される））。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。いくつかの場合では、抗ＣＤ７３抗体は、配列番号９８に記載のアミノ酸配列を含む重鎖、及び配列番号９９に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む。
いくつかの場合では、ＣＤ７３阻害剤はＣＰＩ－００６（Ｃｏｒｖｕｓ；米国特許出願公開第ＵＳ２０１８／０００９８９９Ａ１号及び国際特許出願公開第ＷＯ２０１７／１００６７０Ａｌ号を参照のこと（これらの各々はその全体が参照により本明細書に援用される））である。
いくつかの場合では、ＣＤ７３阻害剤はＣＢ－７０８ＳＭ（Ｃａｌｉｔｈｅｒａ）である。
いくつかの場合では、ＣＤ７３阻害剤はＡＢ６８０（Ａｒｃｕｓ）である。
いくつかの場合では、ＣＤ７３阻害剤はＢＭＳ－９８６１７９（ＢＭＳ）である。
抗体断片
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、抗体断片である。本明細書に記載の抗体の断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆａｃｂ、及びＦｖ）は、インタクトな抗体のタンパク質分解によって調製され得る。例えば、抗体断片は、全抗体を、パパイン、ペプシン、またはプラスミンなどの酵素で処理することによって得ることができる。全抗体をパパイン消化することにより、Ｆ（ａｂ）２またはＦａｂフラグメントが生成され、全抗体をペプシン消化することにより、Ｆ（ａｂ’）２またはＦａｂ’が生成され、全抗体をプラスミン消化することにより、Ｆａｃｂ断片が生成される。
あるいは、抗体断片を、組換え産生することができる。例えば、目的の抗体断片をコードする核酸を構築し、発現ベクターに導入し、好適な宿主細胞で発現させることができる。例えば、Ｃｏ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：２９６８－２９７６（１９９４）、Ｂｅｔｔｅｒ，Ｍ．ａｎｄ Ｈｏｒｗｉｔｚ，Ａ．Ｈ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，Ａ．ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，Ａ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１７８：４７６－４９６（１９８９）、Ｌａｍｏｙｉ，Ｅ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：６５２－６６３（１９８９）、Ｒｏｕｓｓｅａｕｘ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，（１９８９）１２１：６６３－６６９（１９８９）、及びＢｉｒｄ，Ｒ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．，ＴＩＢＴＥＣＨ，９：１３２－１３７（１９９１）を参照されたい）。抗体断片はすべて、Ｅ．ｃｏｌｉ中で発現させ、分泌させることができるため、これらの断片を容易に大量に産生することができる。抗体断片は、抗体ファージライブラリから単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’－ＳＨ断片を、Ｅ．ｃｏｌｉから直接回収し、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １０：１６３－１６７（１９９２））。別のアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２断片を、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期が増加したＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２断片については、米国特許第５，８６９，０４６号に記載されている。
ミニボディ
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、ミニボディである。抗ＣＤ７３抗体のミニボディには、ダイアボディ、一本鎖（ｓｃＦｖ）、及び一本鎖（Ｆｖ）２（ｓｃ（Ｆｖ）２）が含まれる。
「ダイアボディ」は、遺伝子融合によって構築される二価のミニボディである（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ，Ｐ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９０：６４４４－６４４８（１９９３）、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ９３／１１１６１を参照されたい）。ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖からなる二量体である。ダイアボディの各ポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、リンカーによって結合される。リンカーを構成するアミノ酸残基の数は、２～１２個の残基（例えば、３～１０個の残基、または５個もしくは約５個の残基）であり得る。ダイアボディ中のポリペプチドのリンカーは、一般的には、短すぎるため、ＶＬとＶＨが互いに結合することはできない。したがって、同じポリペプチド鎖にコードされるＶＬ及びＶＨは、一本鎖可変領域断片を形成することはできないが、代わりに、異なる一本鎖可変領域断片を有する二量体を形成する。その結果、ダイアボディは２つの抗原結合部位を有する。
ｓｃＦｖは、ＶＨ及びＶＬをリンカーと連結することによって得られる一本鎖ポリペプチド抗体である（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５：５８７９－５８８３（１９８８）、及びＰｌｉｃｋｔｈｕｎ，“ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｖｏｌ．１１３，Ｅｄ Ｒｅｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９－３１５，（１９９４）を参照されたい）。連結されるＶＨ及びＶＬの順序は特に限定されず、任意の順序で配置され得る。配置の例として、［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］；または［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］が挙げられる。ｓｃＦｖにおける重鎖可変ドメイン及び軽鎖可変ドメインは、本明細書に記載の任意の抗ＣＤ７３抗体に由来し得る。
ｓｃ（Ｆｖ）２は、２つのＶＨ及び２つのＶＬがリンカーによって連結されて、一本鎖を形成するミニボディである（Ｈｕｄｓｏｎ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，（１９９９）２３１：１７７－１８９（１９９９））。ｓｃ（Ｆｖ）２は、例えば、ｓｃＦｖをリンカーと接続することによって調製することができる。本発明のｓｃ（Ｆｖ）２は、好ましくは２つのＶＨ及び２つのＶＬが以下の順序で配置されている抗体を含む：一本鎖ポリペプチドのＮ末端から開始して、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ、及びＶＬ（［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］リンカー［ＶＨ］リンカー［ＶＬ］）；ただし、２つのＶＨ及び２つのＶＬの順序は、上記の配置に限定されず、それらは任意の順序で配置され得る。
二重特異性抗体
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、二重特異性抗体である。二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、ＣＤ７３タンパク質の２つの異なるエピトープに結合し得る。他のそのような抗体は、ＣＤ７３結合部位を、別のタンパク質の結合部位と組み合わせ得る。二重特異性抗体は、全長抗体またはその低分子量形態（例えば、Ｆ（ａｂ’）２二重特異性抗体、ｓｃ（Ｆｖ）２二重特異性抗体、ダイアボディ二重特異性抗体）として調製することができる。
全長二重特異性抗体の伝統的な産生は、２つの免疫グロブリン重鎖－軽鎖対の共発現に基づき、これらの２つの鎖は、異なる特異性を有する（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７－５３９（１９８３））。異なるアプローチによると、所望の結合特異性を有する抗体可変ドメインを、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合する。免疫グロブリン重鎖融合体、また所望の場合は免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを、別個の発現ベクターに挿入し、好適な宿主細胞に共トランスフェクトする。これにより、３つのポリペプチド断片の比率を調整する際に、より大きな自由度が得られる。しかしながら、少なくとも２つのポリペプチド鎖を均等な比率で発現させることにより高収率が得られる場合、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖のコード配列を１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチに従って、一対の抗体分子間の界面を改変して、組換え細胞培養物から回収されるヘテロ二量体の割合を最大化することができる。好ましい界面は、ＣＨ３ドメインの少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さいアミノ酸側鎖を、より大きい側鎖（例えば、チロシンまたはトリプトファン）で置き換える。大きいアミノ酸側鎖をより小さいアミノ酸側鎖（例えば、アラニンまたはスレオニン）で置き換えることによって、大きい側鎖（複数可）と同一または同様のサイズの補償「空洞」が第２の抗体分子の界面上に作製される。これにより、ホモ二量体などの他の望ましくない最終産物よりもヘテロ二量体の収率を増加させるための機序が提供される。
二重特異性抗体としては、架橋または「ヘテロコンジュゲート」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロコンジュゲートにおける抗体のうちの一方をアビジンにカップリングさせ、他方をビオチンにカップリングさせることができる。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の簡便な架橋方法を使用して作製され得る。
「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体断片を作製するための代替機序を提供する。これらの断片は、同じ鎖上の２つのドメイン間の対合を可能にするには短すぎるリンカーによってＶＬに接続されたＶＨを含む。したがって、１つの断片のＶＨ及びＶＬドメインが別の断片の相補的ＶＬ及びＶＨドメインと対合させられ、それにより２つの抗原結合部位が形成される。
多価抗体
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、多価抗体である。多価抗体は、その抗体が結合する抗原を発現する細胞によって、二価抗体よりも速く内部移行（及び／または異化）され得る。本明細書に記載される抗体は、３つ以上の抗原結合部位を有する多価抗体（例えば、四価抗体）であってもよく、これは、抗体のポリペプチド鎖をコードする核酸の組換え発現によって容易に産生され得る。多価抗体は、二量体化ドメイン、及び３つ以上の抗原結合部位を含むことができる。例示的な二量体化ドメインは、Ｆｃ領域またはヒンジ領域を含む（またはそれらからなる）。多価抗体は、３～約８個（例えば、４個）の抗原結合部位を含む（またはそれらからなる）ことができる。多価抗体は、任意選択で少なくとも１つのポリペプチド鎖（例えば、少なくとも２つのポリペプチド鎖）を含み、このポリペプチド鎖（複数可）は、２つ以上の可変ドメインを含む。例えば、ポリペプチド鎖（複数可）は、ＶＤ１－（Ｘ１）ｎ－ＶＤ２－（Ｘ２）ｎ－Ｆｃを含み得、ＶＤ１は第１の可変ドメインであり、ＶＤ２は第２の可変ドメインであり、ＦｃはＦｃ領域のポリペプチド鎖であり、Ｘ１及びＸ２はアミノ酸またはペプチドスペーサーを表し、ｎは０または１である。
コンジュゲート抗体
いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、コンジュゲート抗体である。本明細書に開示される抗体は、ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ＰＥＧで修飾されたポリエチレンイミン（ＰＥＩ）（ＰＥＩ－ＰＥＧ）、ポリグルタミン酸（ＰＧＡ）（Ｎ－（２－ヒドロキシプロピル）メタクリルアミド（ＨＰＭＡ）コポリマー）、ヒアルロン酸、放射性物質（例えば、９０Ｙ、１３１Ｉ）、蛍光物質、発光物質、ハプテン、酵素、金属キレート剤、薬物、及び毒素（例えば、カルケアマイシン、シュードモナス外毒素Ａ、リシン（例えば、デグリコシル化リシンＡ鎖））などの巨大分子物質を含む様々な分子に結合されるコンジュゲート抗体であってもよい。
一実施形態では、抗ＣＤ７３抗体の細胞傷害作用を向上させ、それにより、それらの治療効果を向上させるために、抗体を、放射性同位体及び細胞傷害剤を含む強毒性物質とコンジュゲートさせる。これらのコンジュゲートは、標的部位（すなわち、抗体によって認識される抗原を発現する細胞）に選択的に毒性負荷を送達することができ、一方で、抗体によって認識されない細胞は、免除される。毒性を最小限に抑えるために、コンジュゲートは、一般に、血清半減期が短い分子（したがって、マウス配列、及びＩｇＧ３またはＩｇＧ４アイソタイプの使用）に基づいて改変される。
特定の実施形態では、抗ＣＤ７３抗体を、循環中で、例えば、血液、血清、もしくは他の組織中で、その安定化及び／または保持を、例えば、少なくとも１．５、２、５、１０、または５０倍向上させる部分で修飾する。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、ポリマー、例えば、ポリアルキレンオキシドまたはポリエチレンオキシドなどの実質的に非抗原性ポリマーと会合させる（例えば、コンジュゲートする）ことができる。好適なポリマーは、重量によって実質的に変化する。約２００～約３５，０００ダルトン（または約１，０００～約１５，０００、及び２，０００～約１２，５００）の範囲の分子数平均重量を有するポリマーを使用することができる。例えば、抗ＣＤ７３抗体を、水溶性ポリマー、例えば、親水性ポリビニルポリマー、例えば、ポリビニルアルコールまたはポリビニルピロリドンにコンジュゲートすることができる。そのようなポリマーの例として、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロピレングリコールなどのポリアルキレンオキシドホモポリマー、ポリオキシエチレン化ポリオール、これらのコポリマー及びこれらのブロックコポリマー（ブロックコポリマーの水溶性が維持されることを条件とする）が挙げられる。さらなる有用なポリマーとして、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンなどのポリオキシアルキレン、ならびにポリオキシエチレン及びポリオキシプロピレンのブロックコポリマー；ポリメタクリレート；カルボマー；ならびに分枝または非分枝の多糖類が挙げられる。
上述のコンジュゲート抗体は、それぞれ、本明細書に記載の抗体またはその低分子量形態に対して化学修飾を行うことによって調製することができる。抗体を修飾するための方法は、当技術分野で周知である（例えば、ＵＳ５，０５７，３１３及びＵＳ５，１５６，８４０）。
抗体の産生方法
抗体は、細菌または真核細胞において産生され得る。いくつかの抗体、例えば、Ｆａｂは、細菌細胞、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞において産生され得る。抗体はまた、形質転換細胞株（例えば、ＣＨＯ、２９３Ｅ、ＣＯＳ）などの真核細胞において産生され得る。さらに、抗体（例えば、ｓｃＦｖ’）は、Ｐｉｃｈｉａ（例えば、Ｐｏｗｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２５１：１２３－３５（２００１））、Ｈａｎｓｅｕｌａ、またはＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓなどの酵母細胞内で発現させることができる。目的の抗体を産生するために、抗体をコードするポリヌクレオチドを構築し、発現ベクターに導入し、次いで、好適な宿主細胞に発現させる。標準的な分子生物学的技術を使用して、組換え発現ベクターを調製し、宿主細胞をトランスフェクトし、形質転換体を選択し、宿主細胞を培養し、抗体を回収する。
抗体を細菌細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）で発現させる場合、発現ベクターは、細菌細胞内でそのベクターが増幅可能である特徴を有するべきである。さらに、ＪＭ１０９、ＤＨ５α、ＨＢ１０１、またはＸＬ１－ＢｌｕｅなどのＥ．ｃｏｌｉを宿主として使用する場合、ベクターは、例えば、ｌａｃＺプロモーター（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，３４１：５４４－５４６（１９８９）、ａｒａＢプロモーター（Ｂｅｔｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４０：１０４１－１０４３（１９８８））、またはＴ７プロモーターなどのＥ．ｃｏｌｉにおいて効率的な発現を可能にすることができるプロモーターを有さなければならない。そのようなベクターの例として、例えば、Ｍ１３シリーズベクター、ｐＵＣシリーズベクター、ｐＢＲ３２２、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ、ｐＣＲ－Ｓｃｒｉｐｔ、ｐＧＥＸ－５Ｘ－１（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）、「ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ ｓｙｓｔｅｍ」（ＱＩＡＧＥＮ）、ｐＥＧＦＰ、及びｐＥＴ（この発現ベクターが使用する場合、宿主は好ましくはＴ７ ＲＮＡポリメラーゼを発現するＢＬ２１である）が挙げられる。発現ベクターは、抗体分泌のためのシグナル配列を含有し得る。Ｅ．ｃｏｌｉの周辺質への産生のために、ｐｅｌＢシグナル配列（Ｌｅｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．，１６９：４３７９（１９８７））を、抗体分泌のシグナル配列として使用してもよい。細菌の発現については、塩化カルシウム法またはエレクトロポレーション法を使用して、発現ベクターを細菌細胞に導入してもよい。
抗体を、ＣＨＯ、ＣＯＳ、及びＮＩＨ３Ｔ３細胞などの動物細胞内で発現させる場合、発現ベクターは、これらの細胞内での発現に必要なプロモーター、例えば、ＳＶ４０プロモーター（Ｍｕｌｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ，２７７：１０８（１９７９））、ＭＭＬＶ－ＬＴＲプロモーター、ＥＦ１αプロモーター（Ｍｉｚｕｓｈｉｍａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１８：５３２２（１９９０））、またはＣＭＶプロモーターを含む。免疫グロブリンまたはそのドメインをコードする核酸配列に加えて、追加の配列、例えば、宿主細胞内でのベクターの複製を調節する配列（例えば、複製起点）及び選択マーカー遺伝子を、組換え発現ベクターに保有させることができる。選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞の選択を促進することができる（例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，６３４，６６５号、及び同第５，１７９，０１７号を参照されたい）。例えば、通常、選択マーカー遺伝子は、ベクターを導入した宿主細胞に、Ｇ４１８、ハイグロマイシン、メトトレキサートなどの薬物に対する耐性を付与する。選択マーカーを有するベクターの例として、ｐＭＡＭ、ｐＤＲ２、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＯＰＲＳＶ、及びｐＯＰ１３が挙げられる。
一実施形態では、抗体を、哺乳動物細胞で産生する。抗体を発現するための例示的な哺乳動物宿主細胞として、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ細胞）（Ｕｒｌａｕｂ ａｎｄ Ｃｈａｓｉｎ（１９８０）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６－４２２０に記載されるｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞を含み、例えば、Ｋａｕｆｍａｎ ａｎｄ Ｓｈａｒｐ（１９８２）Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５９：６０１ ６２１に記載されるように、ＤＨＦＲ選択マーカーと共に使用される）、ヒト胚性腎臓２９３細胞（例えば、２９３、２９３Ｅ、２９３Ｔ）、ＣＯＳ細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞、リンパ球細胞株、例えば、ＮＳ０骨髄腫細胞及びＳＰ２細胞、ならびにトランスジェニック動物、例えば、トランスジェニック哺乳動物に由来する細胞が挙げられる。例えば、細胞は、哺乳動物内皮細胞である。
抗体発現の例示的な系では、抗ＣＤ７３抗体の抗体重鎖及び抗体軽鎖の両方をコードする組換え発現ベクター（例えば、ＣＬ２５、ＨｚＣＬ２５、３－Ｆ０３、３－Ｆ０３＿４１１、または３－Ｆ０３＿４１３）を、リン酸カルシウムを介したトランスフェクションによりｄｈｆｒ－ＣＨＯ細胞に導入する。組換え発現ベクター内で、抗体重鎖及び軽鎖遺伝子はそれぞれ、エンハンサー／プロモーター調節エレメント（例えば、ＣＭＶエンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントまたはＳＶ４０エンハンサー／ＡｄＭＬＰプロモーター調節エレメントなどのＳＶ４０、ＣＭＶ、アデノウイルスなどに由来する）に作用可能に連結され、遺伝子の高レベルの転写を駆動する。組換え発現ベクターはまた、メトトレキサート選択／増幅を使用して、ベクターでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞の選択を可能にするＤＨＦＲ遺伝子を保有する。選択された形質転換宿主細胞を、抗体重鎖及び軽鎖が発現できるように培養し、抗体を培養培地から回収する。
抗体は、遺伝子改変動物によって産生することもできる。例えば、米国特許第５，８４９，９９２号は、トランスジェニック哺乳動物の乳腺において抗体を発現させる方法を記載している。乳液特異的プロモーターと目的の抗体をコードする核酸及び分泌用のシグナル配列を含む導入遺伝子を構築する。そのようなトランスジェニック哺乳動物の雌によって産生される乳液は、その内部に分泌される、目的の抗体を含む。抗体は、乳液から精製するか、またはいくつかの用途のために直接使用することができる。本明細書に記載される核酸のうちの１つ以上を含む動物も提供する。
本開示の抗体を、宿主細胞の内部または外部（培地など）から単離し、実質的に純粋で均質な抗体として精製することができる。抗体精製のために一般的に使用される単離方法及び精製方法を、抗体の単離及び精製のために使用してもよく、これらは任意の特定の方法に限定されない。抗体は、例えば、カラムクロマトグラフィー、濾過、限外濾過、塩析、溶媒沈殿、溶媒抽出、蒸留、免疫沈降、ＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動、等電点電気泳動、透析、及び再結晶化を適切に選択し、組み合わせることによって単離し、精製してもよい。クロマトグラフィーとして、例えば、アフィニティークロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィー、ゲル濾過、逆相クロマトグラフィー、及び吸着クロマトグラフィーが挙げられる（Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ ｆｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｃｏｕｒｓｅ Ｍａｎｕａｌ． Ｅｄ Ｄａｎｉｅｌ Ｒ． Ｍａｒｓｈａｋ ｅｔ ａｌ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，１９９６）。クロマトグラフィーは、ＨＰＬＣ及びＦＰＬＣなどの液相クロマトグラフィーを使用して実施することができる。アフィニティークロマトグラフィーに使用するカラムとして、プロテインＡカラム及びプロテインＧカラムが挙げられる。プロテインＡカラムを使用するカラムの例として、Ｈｙｐｅｒ Ｄ、ＰＯＲＯＳ、及びＳｅｐｈａｒｏｓｅ ＦＦ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）が挙げられる。本開示はまた、これらの精製方法を使用して高度に精製される抗体も含む。
ポリヌクレオチド、発現ベクター、及び細胞
本開示はまた、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体またはその一部（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、またはＬＣ）をコードするポリヌクレオチド及びベクターを提供する。本開示のポリヌクレオチドは、ＲＮＡの形態またはＤＮＡの形態であり得る。いくつかの例では、ポリヌクレオチドはＤＮＡである。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）である。いくつかの例では、ポリヌクレオチドはＲＮＡである。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨをコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬをコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む重鎖をコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む軽鎖をコードする（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと）。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨを含む重鎖を含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、本明細書に記載の任意の抗体のＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬを含む軽鎖を含む（例えば、表１、２、３、及び５を参照のこと））を含む。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＨをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＬをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＨを含む）；及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）のＶＬを含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号２２、２６、及び８２～８４のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号２３、２７、８０、及び８１のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号２３に記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の重鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号８９に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９０に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、ＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の重鎖及びＣＬ２５またはそのバリアント（例えば、そのヒト化バージョン、例えば、ＨｚＣＬ２５）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号８９に記載の配列を含む第１の核酸、及び（ｉｉ）配列番号９０に記載の配列を含む第２の核酸を含む。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＨを含む）；及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）のＶＬを含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸配列（第１のポリペプチドは、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸配列（第２のポリペプチドは、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号３２、６０、６２、６３、６７～６９、７７、及び８５～８８のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号６１、６４、及び６５のいずれか１つに記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列をコードし、第２の核酸は、配列番号６１に記載のアミノ酸配列をコードする。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の重鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９１に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９３に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、配列番号９２に記載の配列を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドをプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの例では、ポリヌクレオチドは、３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の重鎖及び３－Ｆ０３またはそのバリアント（例えば、３－Ｆ０３＿４１１または３－Ｆ０３＿４１３）の軽鎖をコードする。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０、３３，及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）、ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９７％、または１００％の同一性を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）；ならびに（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列に対して、１つ以上（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０個）のアミノ酸の置換、付加、及び／または欠失を有するアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０、３３、及び６６のいずれか１つに記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）第１のポリペプチドをコードする第１の核酸（第１のポリペプチドは、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む）、及び（ｉｉ）第２のポリペプチドをコードする第２の核酸（第２のポリペプチドは、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む）を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号９１に記載の配列を含む第１の核酸、及び（ｉｉ）配列番号９２に記載の配列を含む第２の核酸を含む。いくつかの例では、ポリヌクレオチドは：（ｉ）配列番号９３に記載の配列を含む第１の核酸、及び（ｉｉ）配列番号９２に記載の配列を含む第２の核酸を含む。いくつかの例では、第１の核酸を第１のプロモーターに作動可能に連結し、第２の核酸を第２のプロモーターに作動可能に連結する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載のポリヌクレオチドは単離されている。
本明細書ではまた、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体またはその一部（例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＨＣ、及び／またはＬＣ）をコードする発現ベクターも提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の１つ以上のポリヌクレオチドを含む発現ベクターも提供する。様々なタイプの発現ベクターが当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている（例えば、上記の「抗体の産生方法」の節を参照されたい）。
本明細書ではまた、本明細書に記載の抗ＣＤ７３抗体を含む細胞も提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の１つ以上のポリヌクレオチドを含む細胞も提供する。本明細書ではまた、本明細書に記載の１つ以上の発現ベクターを含む細胞も提供する。様々なタイプの細胞が当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている（例えば、上記の「抗体の産生方法」の節を参照されたい）。
グリコシル化を改変した抗ＣＤ７３抗体
異なる糖形態は、薬物動態、薬力学、受容体相互作用、及び組織特異的標的化を含む、治療薬の特性に深く影響を及ぼし得る（Ｇｒａｄｄｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｃｕｒｒ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：２８５－２９７）。特に、抗体について、オリゴ糖構造は、抗体のエフェクター機能（例えば、ＣＤＣを誘導する補体複合体Ｃ１への結合、及びＡＤＣＣ経路の調節を担うＦｃγＲ受容体への結合）に加えて、プロテアーゼ耐性、ＦｃＲｎ受容体によって媒介される抗体の血清半減期、食作用、及び抗体フィードバックに関連する特性に影響を及ぼし得る（Ｎｏｓｅ ａｎｄ Ｗｉｇｚｅｌｌ，１９８３、Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ ａｎｄ Ｄｗｅｋ，１９８３；Ｌｅａｔｈｅｒｂａｒｒｏｗ ｅｔ ａｌ．，１９８５、Ｗａｌｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９９２，ＰＮＡＳ，８９：４２８５－４２８９）。
したがって、抗体のエフェクター機能を調節する別の手段は、抗体定常領域のグリコシル化を改変することを含む。グリコシル化の改変には、例えば、グリコシル化残基の数の減少または増加、グリコシル化残基のパターンまたは位置の変化、及び糖構造（複数可）の変化が含まれる。ヒトＩｇＧに見出されるオリゴ糖は、それらのエフェクター機能の程度に影響を及ぼし（Ｒａｊｕ，Ｔ．Ｓ．ＢｉｏＰｒｏｃｅｓｓ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ａｐｒｉｌ ２００３．４４－５３）；ヒトＩｇＧオリゴ糖の微小不均一性は、ＣＤＣ及びＡＤＣＣなどの生物学的機能、様々なＦｃ受容体への結合、ならびにＣｌｑタンパク質への結合に影響を及ぼし得る（Ｗｒｉｇｈｔ Ａ．＆ Ｍｏｒｒｉｓｏｎ ＳＬ．ＴＩＢＴＥＣＨ １９９７，１５ ２６－３２；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００１ ２７６（９）：６５９１－６０４；Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００２；２７７（３０）：２６７３３－４０；Ｓｈｉｎｋａｗａ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ．２００３ ２７８（５）：３４６６－７３；Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１９９９ Ｆｅｂ；１７（２）：１７６－８０）。例えば、Ｃ１ｑに結合し、補体カスケードを活性化するＩｇＧの能力は、２つのＣＨ２ドメインの間に位置付けられた炭水化物部分（通常Ａｓｎ２９７に固定されている）の存在、非存在、または修飾に依存し得る（Ｗａｒｄ ａｎｄ Ｇｈｅｔｉｅ，Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２：７７－９４（１９９５））。したがって、いくつかの例では、抗ＣＤ７３抗体は、野生型定常領域に対して、Ａｓｎ２９７Ａｌａ置換を含む。
Ｆｃ含有ポリペプチド内、例えば、ＩｇＧ抗体などの抗体内のグリコシル化部位は、標準的な技術によって同定され得る。グリコシル化部位の同定は、実験により、または配列解析もしくはモデリングデータに基づくことができる。コンセンサスモチーフ、すなわち、様々なグリコシルトランスフェラーゼによって認識されるアミノ酸配列が記載されている。例えば、Ｎ結合グリコシル化モチーフのコンセンサスモチーフは、高頻度でＮＸＴまたはＮＸＳであり、式中、Ｘは、プロリンを除く任意のアミノ酸であり得る。潜在的なグリコシル化モチーフを見つけるためのいくつかのアルゴリズムも記載されている。したがって、抗体またはＦｃ含有断片内の潜在的なグリコシル化部位を同定するために、公開データベース、例えば、Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓによって提供されるウェブサイトを使用して、抗体の配列を調べる（Ｎ結合グリコシル化部位を予測するためのＮｅｔＮＧｌｙｃサービス及びＯ結合グリコシル化部位を予測するためのＮｅｔＯＧｌｙｃサービスを参照されたい）。
ｉｎ ｖｉｖｏ研究により、アグリコシル抗体のエフェクター機能が低減していることが確認されている。例えば、アグリコシル抗ＣＤ８抗体は、マウスにおけるＣＤ８保有細胞を枯渇させることができず（Ｉｓａａｃｓ，１９９２ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：３０６２）、アグリコシル抗ＣＤ３抗体は、マウスまたはヒトにおいてサイトカイン放出症候群を誘導しない（Ｂｏｙｄ，１９９５（上記）；Ｆｒｉｅｎｄ，１９９９ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６８：１６３２）。抗ＣＤ７３抗体のアグリコシル化形態もまた、エフェクター機能が低減している。
重要なことに、ＣＨ２ドメイン内のグリカンの除去は、エフェクター機能に有意な影響を及ぼすように見えるが、抗体の他の機能的特性及び物理的特性は、変化しないままである。具体的には、グリカンの除去は、血清半減期及び抗原への結合にほとんどまたは全く影響を及ぼさないことが示されている（Ｎｏｓｅ，１９８３（上記）；Ｔａｏ，１９８９（上記）；Ｄｏｒａｉ，１９９１（上記）；Ｈａｎｄ，１９９２（上記）；Ｈｏｂｂｓ，１９９２ Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９：９４９）。
本発明の抗ＣＤ７３抗体を、（第２のＣＤ７３特異的抗体と比較して）エフェクター機能（複数可）の増加または低下を誘発するように修飾または改変してもよい。抗体のグリコシル化部位を改変するための方法は、例えば、ＵＳ６，３５０，８６１及びＵＳ５，７１４，３５０、ＷＯ０５／１８５７２及びＷＯ０５／０３１７５に記載されており；これらの方法を使用して、改変された、低減された、またはグリコシル化されていない本発明の抗ＣＤ７３抗体を産生することができる。
Ａ２Ａ／Ａ２Ｂアデノシン受容体
Ａ２Ａアデノシン受容体は高親和性受容体であり、一方、Ａ２Ｂは低親和性受容体である。アデノシンとそのアゴニストは、これらの受容体の一方または両方を介して作用し、サイクリックＡＭＰ（ｃＡＭＰ）の増加に関与する酵素であるアデニル酸シクラーゼの活性を調節することができる。異なる受容体は、この酵素に対して異なる刺激効果と抑制効果を有する。ｃＡＭＰの細胞内濃度が上昇すると、免疫細胞及び炎症細胞の活動を抑制することができる。
Ａ２Ａアデノシン受容体は、末梢及びＣＮＳでシグナル伝達することができ、アゴニストは抗炎症薬として探索され、アンタゴニストは神経変性疾患について探索される。ほとんどの細胞型では、Ａ２Ａサブタイプは細胞内カルシウムレベルを阻害し、一方、Ａ２Ｂはそれらを増強する。Ａ２Ａ受容体は一般に、免疫細胞からの炎症反応を阻害すると思われる。Ａ２Ａは主に、Ｔエフェクター細胞、Ｔ制御性細胞、自然死細胞（ｎａｔｕｒｅ ｋｉｌｌｉｎｇ ｃｅｌｌ）などのリンパ系由来細胞に発現している。
Ａ２Ｂアデノシン受容体は低親和性受容体である。Ａ２Ｂ受容体は、消化管、膀胱、肺及び肥満細胞で高度に発現している。Ａ２Ｂ受容体は、構造的にＡ２Ａ受容体と密接に関連しており、アデニル酸シクラーゼを活性化することができるが、機能的には異なる。このサブタイプは、アデニル酸シクラーゼ以外のシグナル伝達系を利用している可能性があると仮定されている。すべてのアデノシン受容体の中で、Ａ２Ｂアデノシン受容体は、生理学的条件下ではサイレントのままであり、細胞外アデノシンレベルの増加の結果として活性化されると考えられている低親和性受容体である。Ａ２Ｂアデノシン受容体の活性化は、それぞれＧｓ及びＧｑタンパク質の活性化を通じて、アデニル酸シクラーゼ及びホスホリパーゼＣを刺激することができる。マイトジェン活性化プロテインキナーゼへのカップリングも記載されている。Ａ２Ｂ受容体は主に、樹状細胞、腫瘍随伴マクロファージ、骨髄由来抑制細胞（ＭＤＳＣ）、及び間葉系間質／幹細胞（ＭＳＣ）などの単球由来細胞に発現している。
ヒトＡ２Ａアデノシン受容体タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿００１２６５４２８）の例示的なアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＭＰＩＭＧＳＳＶＹＩＴＶＥＬＡＩＡＶＬＡＩＬＧＮＶＬＶＣＷＡＶＷＬＮＳＮＬＱＮＶＴＮＹＦＶＶＳＬＡＡＡＤＩＡＶＧＶＬＡＩＰＦＡＩＴＩＳＴＧＦＣＡＡＣＨＧＣＬＦＩＡＣＦＶＬＶＬＴＱＳＳＩＦＳＬＬＡＩＡＩＤＲＹＩＡＩＲＩＰＬＲＹＮＧＬＶＴＧＴＲＡＫＧＩＩＡＩＣＷＶＬＳＦＡＩＧＬＴＰＭＬＧＷＮＮＣＧＱＰＫＥＧＫＮＨＳＱＧＣＧＥＧＱＶＡＣＬＦＥＤＶＶＰＭＮＹＭＶＹＦＮＦＦＡＣＶＬＶＰＬＬＬＭＬＧＶＹＬＲＩＦＬＡＡＲＲＱＬＫＱＭＥＳＱＰＬＰＧＥＲＡＲＳＴＬＱＫＥＶＨＡＡＫＳＬＡＩＩＶＧＬＦＡＬＣＷＬＰＬＨＩＩＮＣＦＴＦＦＣＰＤＣＳＨＡＰＬＷＬＭＹＬＡＩＶＬＳＨＴＮＳＶＶＮＰＦＩＹＡＹＲＩＲＥＦＲＱＴＦＲＫＩＩＲＳＨＶＬＲＱＱＥＰＦＫＡＡＧＴＳＡＲＶＬＡＡＨＧＳＤＧＥＱＶＳＬＲＬＮＧＨＰＰＧＶＷＡＮＧＳＡＰＨＰＥＲＲＰＮＧＹＡＬＧＬＶＳＧＧＳＡＱＥＳＱＧＮＴＧＬＰＤＶＥＬＬＳＨＥＬＫＧＶＣＰＥＰＰＧＬＤＤＰＬＡＱＤＧＡＧＶＳ（配列番号９４）
ヒトＡ２Ｂアデノシン受容体タンパク質（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０００６６７）の例示的なアミノ酸配列は以下のとおりである：
ＭＬＬＥＴＱＤＡＬＹＶＡＬＥＬＶＩＡＡＬＳＶＡＧＮＶＬＶＣＡＡＶＧＴＡＮＴＬＱＴＰＴＮＹＦＬＶＳＬＡＡＡＤＶＡＶＧＬＦＡＩＰＦＡＩＴＩＳＬＧＦＣＴＤＦＹＧＣＬＦＬＡＣＦＶＬＶＬＴＱＳＳＩＦＳＬＬＡＶＡＶＤＲＹＬＡＩＣＶＰＬＲＹＫＳＬＶＴＧＴＲＡＲＧＶＩＡＶＬＷＶＬＡＦＧＩＧＬＴＰＦＬＧＷＮＳＫＤＳＡＴＮＮＣＴＥＰＷＤＧＴＴＮＥＳＣＣＬＶＫＣＬＦＥＮＶＶＰＭＳＹＭＶＹＦＮＦＦＧＣＶＬＰＰＬＬＩＭＬＶＩＹＩＫＩＦＬＶＡＣＲＱＬＱＲＴＥＬＭＤＨＳＲＴＴＬＱＲＥＩＨＡＡＫＳＬＡＭＩＶＧＩＦＡＬＣＷＬＰＶＨＡＶＮＣＶＴＬＦＱＰＡＱＧＫＮＫＰＫＷＡＭＮＭＡＩＬＬＳＨＡＮＳＶＶＮＰＩＶＹＡＹＲＮＲＤＦＲＹＴＦＨＫＩＩＳＲＹＬＬＣＱＡＤＶＫＳＧＮＧＱＡＧＶＱＰＡＬＧＶＧＬ（配列番号９５）
Ａ２Ａ／Ａ２Ｂアデノシン受容体阻害剤
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、表６から選択される化合物、またはその薬学的に許容される塩である。
Figure 2023509442000018
Figure 2023509442000019
Figure 2023509442000020
Figure 2023509442000021
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（Ｉ）の化合物：
Figure 2023509442000022
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２からそれぞれ独立して選択される１、２、または３基で置換され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換され；
Ｒａ２は、任意選択で、１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換された（５－７員のヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；及び
各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される。
式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｃｙ２はピリミジニルである。
式（Ｉ）の化合物のいくつかの実施形態では、Ｒ２は、ピリジン－２－イルメチル、（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル、（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル、（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ、及び（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチルから選択される。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物２、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物３Ａ、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物３Ｂ、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物４、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物２１Ａ、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｉ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物２１Ｂ、表６を参照のこと）。
式（Ｉ）の化合物の合成及び特徴決定は、ＷＯ２０１９／１６８８４７及びＵＳ６２／８９１，６８５に見出すことができ、これらは両方とも、その全体が参照により本明細書に援用される。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（ＩＩ）の化合物：
Figure 2023509442000023
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
ＬはＣ１－３アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３つの置換基で置換され；
Ｒ８は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８のＣ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
各Ｒ８Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８ＡのＣ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１のＣ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒ８Ｂは、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；及び
Ｒ８Ｄは、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物５、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物６、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物７、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物８、表６を参照のこと）。
式（ＩＩ）の化合物の合成及び特徴決定は、ＷＯ２０１９／２２２６７７（その全体が参照により本明細書に援用される）に見出すことができる。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（ＩＩＩ）の化合物：
Figure 2023509442000024
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｒ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ２Ａは、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
各Ｒ４Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；及び
各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物９、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１０、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１１、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＩＩ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１２、表６を参照のこと）。
式（ＩＩＩ）の化合物の合成及び特徴決定は、ＰＣＴ／ＵＳ２０１９／０４０４９６（その全体が参照により本明細書に援用される）に見出すことができる。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（ＩＶ）の化合物：
Figure 2023509442000025
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｃｙ１はフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
各Ｒ６は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－はそれぞれ、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；及び
各Ｒ２Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される。
いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１３、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１４、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１５、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（ＩＶ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１６、表６を参照のこと）。
式（ＩＶ）の化合物の合成及び特徴決定は、ＵＳ６２／７９８，１８０に見出すことができる（その全体が参照により本明細書に援用される）。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は、式（Ｖ）の化合物：
Figure 2023509442000026
 またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
Ｒ２は、Ｈ、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル及びＣ１－６ハロアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから選択され；
Ｒ５は、Ｈ、ハロ、ＣＮ、Ｃ１－６アルキルから選択され；
Ｒ６は、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－７員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ６の前記フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－７員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、任意選択で、１、２、または３つの独立して選択されるＲＡ置換基で置換され；
各ＲＡは、（５－１０員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－及び（４－１０員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－から独立して選択され、ＲＡの（５－１０員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－及び（４－１０員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１つまたは２つの独立して選択されるＲＢ置換基で置換され；
各ＲＢは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ（Ｏ）Ｒｂ２６から独立して選択され；
Ｒｂ２６は、Ｈ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒｂ２６のＣ１－３アルキルは、任意選択で、１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換され；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、ＣＮ、ＯＲａ３６、及びＮＲｃ３６Ｒｄ３６から独立して選択され；及び
各Ｒａ３６、Ｒｃ３６、及びＲｄ３６は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される。
いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、７－（１－（（５－クロロピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１７、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－メチル－７－（１－（（５－メチルピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１８、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－６－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩である（化合物１９、表６を参照のこと）。
いくつかの実施形態では、式（Ｖ）の化合物、またはその薬学的に許容される塩は、７－（１－（（２－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン、またはその薬学的に許容される塩である（化合物２０、表６を参照のこと）。
式（Ｖ）の化合物の合成及び特徴決定は、ＵＳ－２０１９－０３３７９５７（その全体が参照により本明細書に援用される）に見出すことができる。
本明細書中で使用する場合、量、用量、持続時間などの測定可能な値を指す場合の「約」とは、±１０％の変動を包含することを意味する。特定の実施形態では、「約」は、指定された値からの±５％、±１％、または±０．１％の変動、及びその間の任意の変動を含み得、そのような変動は、開示する方法を実行するのに適切である。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示する化合物は、化合物の（Ｓ）－エナンチオマー、またはその薬学的に許容される塩である。いくつかの実施形態では、化合物は、化合物の（Ｒ）－エナンチオマー、またはその薬学的に許容される塩である。
明確にするために、別個の実施形態の文脈で記載される本発明の特定の特徴はまた、単一の実施形態において組み合わせて提供することもできることがさらに理解される。逆に、簡潔にするために、単一の実施形態の文脈で記載される本発明の様々な特徴はまた、別個にまたは任意の好適なで部分組み合わせで提供することもできる。
ｎが整数である場合の用語「ｎ員」とは、一般的に、環形成原子の数がｎである部分における環形成原子の数を表す。例えば、ピペリジニルは６員ヘテロシクロアルキル環の一例であり、ピラゾリルは５員ヘテロアリール環の一例であり、ピリジルは６員ヘテロアリール環の一例であり、１，２，３，４－テトラヒドロ－ナフタレンは１０員のシクロアルキル基の一例である。
本明細書中で使用する場合、語句「任意選択で置換された」とは、非置換または置換を意味する。置換基は独立して選択され、置換は化学的にアクセス可能な任意の位置にあり得る。本明細書中で使用する場合、用語「置換」とは、水素原子が除去され、置換基によって置き換えられることを意味する。単一の二価置換基、例えば、オキソは、２つの水素原子を置き換えることができる。所与の原子での置換は原子価によって制限されることを理解されたい。
本明細書中で使用する場合、語句「各「変数」が、独立して～から選択される」とは、「各々の存在する「変数」が、～から選択される」と実質的に同じことを意味する。
定義全体を通して、用語「Ｃｎ－ｍ」とは、端点を含む範囲を示し、式中、ｎ及びｍは整数であり、炭素の数を示す。例として、Ｃ１－３、Ｃ１－４、Ｃ１－６などが挙げられる。
本明細書中で使用する場合、単独で、または他の用語と組み合わせて使用される用語「Ｃｎ－ｍアルキル」とは、ｎ～ｍ個の炭素を有する直鎖または分枝状であり得る飽和炭化水素基を指す。アルキル部分の例として、メチル（Ｍｅ）、エチル（Ｅｔ）、ｎ－プロピル（ｎ－Ｐｒ）、イソプロピル（ｉＰｒ）、ｎ－ブチル、ｔｅｒｔ－ブチル、イソブチル、ｓｅｃ－ブチル；２－メチル－１－ブチル、ｎ－ペンチル、３－ペンチル、ｎ－ヘキシル、１，２，２－トリメチルプロピルなどのより高次の同族体などの化学基が挙げられるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１～６個の炭素原子、１～４個の炭素原子、１～３個の炭素原子、または１～２個の炭素原子を含む。
本明細書中で使用する場合、単独で、または他の用語と組み合わせて使用される用語「Ｃｎ－ｍアルコキシ」とは、アルキル基がｎ～ｍ個の炭素を有する式－Ｏ－アルキルの基を指す。例示的なアルコキシ基として、限定されないが、メトキシ、エトキシ、プロポキシ（例えば、ｎ－プロポキシ及びイソプロポキシ）、ブトキシ（例えば、ｎ－ブトキシ及びｔｅｒｔ－ブトキシ）などが挙げられる。
本明細書中で使用する場合、単独でまたは他の用語と組み合わせて使用される用語「アリール」とは、単環式または多環式（例えば、２、３または４つの縮合環を有する）であり得る芳香族炭化水素基を指す。用語「Ｃｎ－ｍアリール」とは、ｎ～ｍ個の環炭素原子を有するアリール基を指す。アリール基として、例えば、フェニル、ナフチル、アントラセニル、フェナントレニル、インダニル、インデニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態では、アリール基は、５～１０個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、アリール基は、フェニルまたはナフチルである。いくつかの実施形態では、アリールはフェニル（すなわち、Ｃ６アリール）である。
本明細書中で使用する場合、「ハロ」または「ハロゲン」とは、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを指す。いくつかの実施形態では、ハロは、Ｆ、Ｃｌ、またはＢｒである。いくつかの実施形態では、ハロは、ＦまたはＣｌである。いくつかの実施形態では、ハロはＦである。いくつかの実施形態では、ハロはＣｌである。
本明細書中で使用する場合、単独で、または他の用語と組み合わせて使用される用語「Ｃｎ－ｍハロアルキル」とは、１個のハロゲン原子～２ｓ＋１個のハロゲン原子（同じか、または異なっていてもよい）を有するアルキル基を指し、式中、ｓは、アルキル基の炭素原子の数であり、その場合、アルキル基は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有する。いくつかの実施形態では、ハロアルキル基はフッ素化のみされている。いくつかの実施形態では、アルキル基は、１～６、１～４、または１～３個の炭素原子を有する。ハロアルキル基の例として、ＣＦ３、Ｃ２Ｆ５、ＣＨＦ２、ＣＨ２Ｆ、ＣＣｌ３、ＣＨＣｌ２、Ｃ２Ｃｌ５などが挙げられる。
本明細書中で使用する場合、「シクロアルキル」とは、環化アルキル及びアルケニル基を含む非芳香族環状炭化水素を指す。シクロアルキル基は、単環式または多環式（例えば、２つの縮合環を有する）基、スピロ環、及び架橋環（例えば、架橋ビシクロアルキル基）を含み得る。シクロアルキル基の環形成炭素原子は、任意選択で、オキソまたはスルフィド（例えば、Ｃ（Ｏ）またはＣ（Ｓ））で置換され得る。シクロアルキルの定義には、例えば、シクロペンタン、シクロヘキサンなどのベンゾまたはチエニル誘導体など、シクロアルキル環に縮合した（すなわち、共通の結合を有する）１つ以上の芳香族環を有する部分も含まれる。縮合芳香環を含むシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合することができる。シクロアルキル基は、３、４、５、６、７、８、９、または１０個の環形成炭素（すなわち、Ｃ３－１０）を有し得る。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ３－１０単環式または二環式シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ３－７単環式シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ４－７単環式シクロアルキルである。いくつかの実施形態では、シクロアルキルは、Ｃ４－１０スピロ環または架橋シクロアルキル（例えば、架橋ビシクロアルキル基）である。シクロアルキル基の例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘキサジエニル、シクロヘプタトリエニル、ノルボルニル、ノルピニル、ノルカルニル、キュバン、アダマンタン、ビシクロ［１．１．１］ペンチル、ビシクロ［２．１．１］ヘキシル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、ビシクロ［２．２．２］オクタニル、スピロ［３．３］ヘプタニルなどが挙げられる。いくつかの実施形態において、シクロアルキルは、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、またはシクロヘキシルである。
本明細書中で使用する場合、「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＢから選択される少なくとも１つのヘテロ原子環員を有する単環式または多環式（例えば、２つの縮合環を有する）芳香族複素環を指す。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール環は、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＢから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール部分における任意の環形成Ｎは、Ｎ－オキシドであり得る。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する５－１０員の単環式または二環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子環員を有する５－１０員の単環式または二環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子環員を有する５～６の単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリールは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択される１つまたは２つのヘテロ原子環員を有する５～６の単環式ヘテロアリールである。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、３～１０、４～１０、５～１０、５～７、３～７、または５～６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロアリール基は、１～４個の環形成ヘテロ原子、１～３個の環形成ヘテロ原子、１～２個の環形成ヘテロ原子、または１個の環形成ヘテロ原子を有する。ヘテロアリール基が複数のヘテロ原子環員を含む場合、それらのヘテロ原子は、同じであっても異なっていてもよい。ヘテロアリール基の例として、チエニル（またはチオフェニル）、フリル（またはフラニル）、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、１，２，３－トリアゾリル、テトラゾリル、１，２，３－チアジアゾリル、１，２，３－オキサジアゾリル、１，２，４－トリアゾリル、１，２，４－チアジアゾリル、１，２，４－オキサジアゾリル、１，３，４－トリアゾリル、１，３，４－チアジアゾリル、１，３，４－オキサジアゾリル及び１，２－ジヒドロ－１，２－アザボリン、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、アゾリル、トリアゾリル、チアジアゾリル、キノリニル、イソキノリニル、インドリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾフラニル、ベンズイソキサゾリル［１，２－ｂ］チアゾリル、プリニル、トリアジニル、チエノ［３，２－ｂ］ピリジニル、イミダゾ［１，２－ａ］ピリジニル、１，５－ナフチリジニル、１Ｈ－ピラゾロ［４，３－ｂ］ピリジニル、トリアゾロ［４，３－ａ］ピリジニル、１Ｈ－ピロロ［３，２－ｂ］ピリジニル、１Ｈ－ピロロ［２，３－ｂ］ピリジニル、ピラゾロ［１，５－ａ］ピリジニル、インダゾリルなどが挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書中で使用する場合、「ヘテロシクロアルキル」とは、少なくとも１つの非芳香族環（飽和または部分不飽和環）を有する単環式または多環式複素環を指し、ヘテロシクロアルキルの環形成炭素原子の１つ以上が、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから選択されるヘテロ原子によって置換されており、ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子及びヘテロ原子は、任意選択で、１つ以上のオキソまたはスルフィド（例えば、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、またはＳ（Ｏ）２など）で置換され得る。ヘテロシクロアルキル基の環形成炭素原子またはヘテロ原子が任意選択で１つ以上のオキソまたはスルフィドで置換される場合、前記基のＯまたはＳは、本明細書中で指定される環形成原子の数に追加される（例えば、１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イルは６員ヘテロシクロアルキル基であり、環形成炭素原子がオキソ基で置換されており、６員ヘテロシクロアルキル基がメチル基でさらに置換されている）。ヘテロシクロアルキル基には、単環式及び多環式（例えば、２つの縮合環を有する）系が含まれる。ヘテロシクロアルキルには、単環式及び多環式の３－１０、４－１０、５－１０、４－７、５－７、または５－６員ヘテロシクロアルキル基が含まれる。ヘテロシクロアルキル基はまた、スピロ環及び架橋環（例えば、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択されるヘテロ原子によって置換される１つ以上の環形成炭素原子を有する５－１０員の架橋ビヘテロシクロアルキル環）を含み得る。ヘテロシクロアルキル基は、環形成炭素原子または環形成ヘテロ原子を介して結合され得る。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～３個の二重結合を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、０～２個の二重結合を含む。
ヘテロシクロアルキルの定義には、非芳香族複素環に縮合した（すなわち、共通の結合を有する）１つ以上の芳香環を有する部分、例えば、ピペリジン、モルホリン、アゼピンなどのベンゾまたはチエニル誘導体も含まれる。縮合芳香環を含むヘテロシクロアルキル基は、縮合芳香環の環形成原子を含む任意の環形成原子を介して結合することができる。
いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、３～１０個の環形成原子、４～１０個の環形成原子、３～７個の環形成原子、または５～６個の環形成原子を含む。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキル基は、１～４個のヘテロ原子、１～３個のヘテロ原子、１～２個のヘテロ原子、または１個のヘテロ原子を有する。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＢから独立して選択され、１つ以上の酸化環員を有する１つまたは２つのヘテロ原子を有する単環式４－６員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、Ｓ、及びＢから独立して選択され、１つ以上の酸化環員を有する１、２、３、または４個のヘテロ原子を有する単環式または二環式の５－１０員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択され、１つ以上の酸化環員を有する１、２、３、または４個のヘテロ原子を有する単環式または二環式の５－１０員ヘテロシクロアルキルである。いくつかの実施形態では、ヘテロシクロアルキルは、Ｎ、Ｏ、及びＳから独立して選択され、１つ以上の酸化環員を有する１、２、３、または４個のヘテロ原子を有する単環式５－６員ヘテロシクロアルキルである。
ヘテロシクロアルキル基の例として、ピロリジン－２－オン（または２－オキソピロリジニル）、１，３－イソキサゾリジン－２－オン、ピラニル、テトラヒドロピラン、オキセタニル、アゼチジニル、モルホリノ、チオモルホリノ、ピペラジニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、ピペリジニル、ピロリジニル、イソキサゾリジニル、イソチアゾリジニル、ピラゾリジニル、オキサゾリジニル、チアゾリジニル、イミダゾリジニル、アゼパニル、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン、ベンズアザペン、アザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、ジアザビシクロ［３．１．０］ヘキサニル、オキソビシクロ［２．１．１］ヘキサニル、アザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、ジアザビシクロ［２．２．１］ヘプタニル、アザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、ジアザビシクロ［３．１．１］ヘプタニル、アザビシクロ［３．２．１］オクタニル、ジアザビシクロ［３．２．１］オクタニル、オキソビシクロ［２．２．２］オクタニル、アザビシクロ［２．２．２］オクタニル、アザアダマンタニル、ジアザアダマンタニル、オキソ－アダマンタニル、アザスピロ［３．３］ヘプタニル、ジアザスピロ［３．３］ヘプタニル、オキソ－アザスピロ［３．３］ヘプタニル、アザスピロ［３．４］オクタニル、ジアザスピロ［３．４］オクタニル、オキソ－アザスピロ［３．４］オクタニル、アザスピロ［２．５］オクタニル、ジアザスピロ［２．５］オクタニル、アザスピロ［４．４］ノナニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、オキソ－アザスピロ［４．４］ノナニル、アザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．５］デカニル、ジアザスピロ［４．４］ノナニル、オキソ－ジアザスピロ［４．４］ノナニル、オキソ－ジヒドロピリダジニル、オキソ－２，６－ジアザスピロ［３．４］オクタニル、オキソヘキサヒドロピロロ［１，２－ａ］ピラジニル、３－オキソピペラジニル、オキソ－ピロリジニル、オキソ－ピリジニルなどが挙げられる。例えば、ヘテロシクロアルキル基には、以下の基（Ｎ－メチル置換あり及びなし）が含まれる：
Figure 2023509442000027
本明細書中で使用する場合、「Ｃｏ－ｐシクロアルキル－Ｃｎ－ｍアルキル－」は、式シクロアルキル－アルキレン－の基を指し、式中、シクロアルキルは、ｏ～ｐの炭素原子を有し、アルキレン結合基は、ｎ～ｍの炭素原子を有する。
本明細書中で使用する場合、「Ｃｏ－ｐアリール－Ｃｎ－ｍアルキル－」は、式アリール－アルキレン－の基を指し、式中、アリールは、ｏ～ｐの炭素原子を有し、アルキレン結合基は、ｎ～ｍの炭素原子を有する。
本明細書中で使用する場合、「ヘテロアリール－Ｃｎ－ｍアルキル－」は、式ヘテロアリール－アルキレン－の基を指し、式中、アルキレン結合基は、ｎ～ｍ個の炭素原子を有する。
本明細書中で使用する場合、「ヘテロシクロアルキル－Ｃｎ－ｍアルキル－」は、式ヘテロシクロアルキル－アルキレン－の基を指し、式中、アルキレン結合基は、ｎ～ｍの炭素原子を有する。
特定の場所では、定義または実施形態は、特定の環（例えば、アゼチジン環、ピリジン環など）を指す。特に明記しない限り、これらの環は、原子の原子価を超えない限り、任意の環員に結合することができる。例えば、アゼチジン環は、環の任意の位置に結合することができ、一方、ピリジン－３－イル環は３位で結合する。
本明細書中で使用する場合、用語「オキソ」とは、炭素に結合した場合にカルボニル基を形成する（例えば、Ｃ＝ＯもしくはＣ（Ｏ））か、またはニトロソ、スルフィニルもしくはスルホニル基を形成する窒素または硫黄ヘテロ原子に結合する、二価置換基としての酸素原子（すなわち、＝Ｏ）を指す。
本明細書中で使用する場合、用語「独立して選択される」とは、変数または置換基の各存在が、各存在において適用可能なリストから独立して選択されることを意味する。
本明細書に記載の化合物は、非対称であり得る（例えば、１つ以上の立体中心を有する）。特に明記されていない限り、エナンチオマー及びジアステレオマーなどのすべての立体異性体が意図される。非対称に置換された炭素原子を含む本開示の化合物は、光学活性またはラセミ形態で単離することができる。ラセミ混合物の分割または立体選択的合成などによって、光学的に不活性な出発物質から光学的に活性な形態を調製する方法は、当技術分野で公知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体もまた、本明細書に記載の化合物に存在することができ、そのようなすべての安定な異性体が本発明で企図される。本開示の化合物のシス及びトランス幾何異性体が記載されており、異性体の混合物として、または分離された異性体形態として単離してもよい。いくつかの実施形態では、化合物は（Ｒ）配置を有する。いくつかの実施形態では、化合物は（Ｓ）配置を有する。本明細書中で提供する式（例えば、式（Ｉ）、（ＩＩ）など）は、化合物の立体異性体を含む。
化合物のラセミ混合物の分解は、当技術分野で公知の多くの方法のいずれかによって実施することができる。例示的な方法は、光学活性な塩形成有機酸であるキラル分解酸を使用する分別再結晶化を含む。分別再結晶法に適した分解剤は、例えば、Ｄ型及びＬ型の酒石酸、ジアセチル酒石酸、ジベンゾイル酒石酸、マンデル酸、リンゴ酸、乳酸などの光学活性酸、または様々な光学活性カンファースルホン酸、例えば、β－カンファースルホン酸である。分別結晶法に適した他の分解剤として、立体異性的に純粋な形態のα－メチルベンジルアミン（例えば、Ｓ及びＲ形態、またはジアステレオマー的に純粋な形態）、２－フェニルグリシノール、ノルエフェドリン、エフェドリン、Ｎ－メチルエフェドリン、シクロヘキシルエチルアミン、１，２－ジアミノシクロヘキサンなどが挙げられる。
ラセミ混合物の分離はまた、光学活性分離剤（例えば、ジニトロベンゾイルフェニルグリシン）が充填されたカラムでの溶出によって実施することもできる。当業者であれば、好適な溶出溶媒組成を決定することができる。
本明細書中で提供する化合物はまた、互変異性型を含む。互変異性型は、プロトンの同時移動とともに、隣接する二重結合との単結合の交換から生じる。互変異性型には、同じ実験式と総電荷を有する異性体のプロトン化状態であるプロトン性互変異性型が含まれる。プロトン性互変異性型の例として、ケトン－エノール対、アミド－イミド酸対、ラクタム－ラクチム対、エナミン－イミン対、及びプロトンが複素環系の２つ以上の位置（例えば、１Ｈ－及び３Ｈ－イミダゾール、１Ｈ－、２Ｈ－及び４Ｈ－１，２，４－トリアゾール、１Ｈ－及び２Ｈ－イソインドール、２－ヒドロキシピリジン及び２－ピリドン、ならびに１Ｈ－及び２Ｈ－ピラゾール）を占めることができる環状形態が挙げられる。互変異性型は、平衡状態にあるか、または適切な置換によって１つの型に立体的に固定され得る。
すべての化合物、及びその薬学的に許容される塩は、水及び溶媒などの他の物質と一緒に見出され得るか（例えば、水和物及び溶媒和物）、または単離され得る。
いくつかの実施形態では、化合物の調製は、例えば、所望の反応の触媒作用または酸付加塩などの塩形態の形成に影響を与えるための酸または塩基の付加を含み得る。
いくつかの実施形態では、本明細書中で提供する化合物またはその塩は、実質的に単離されている。「実質的に単離された」とは、化合物が、それが形成または検出された環境から少なくとも部分的または実質的に分離されていることを意味する。部分分離には、例えば、本明細書中で提供する化合物が豊富な組成物が含まれ得る。実質的な分離には、本明細書中で提供する化合物またはその塩を、少なくとも約５０重量％、少なくとも約６０重量％、少なくとも約７０重量％、少なくとも約８０重量％、少なくとも約９０重量％、少なくとも約９５重量％、少なくとも約９７重量％、または少なくとも約９９重量％含有する組成物が含まれ得る。化合物及びそれらの塩の単離方法は、当技術分野では日常的である。
本明細書中で使用する用語「化合物」とは、描写される構造のすべての立体異性体、幾何異性体、互変異性体、及び同位体を含むことを意味する。１つの特定の互変異性型として名称または構造によって本明細書中で識別される化合物は、特に明記されない限り、他の互変異性型を含むことを意図している。
語句「薬学的に許容される」とは、本明細書中では、健全な医学的判断の範囲内で、ヒト及び動物の組織との接触に使用するのに好適であり、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を引き起こすことなく、合理的なベネフィット／リスク比に見合った化合物、材料、組成物、及び／または剤形を指すために用いられる。
本出願はまた、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩を含む。本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容される塩」は、親化合物が既存の酸または塩基部分をその塩形態に変換することによって修飾される、開示する化合物の誘導体を指す。薬学的に許容される塩の例として、アミンなどの塩基性残基の無機または有機酸性塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機塩などが挙げられるが、これらに限定されない。本開示の薬学的に許容される塩には、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成された親化合物の従来の非毒性の塩が含まれる。本開示の薬学的に許容される塩は、従来の化学的方法によって、塩基性または酸性部分を含む親化合物から合成することができる。一般的に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸もしくは塩基形態を、水中もしくは有機溶媒中、または２つの混合物中の化学量論量の適切な塩基もしくは酸と反応させることによって調製することができ；一般的に、エーテル、酢酸エチル、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、イソプロパノール、もしくはブタノール）またはアセトニトリル（ＡＣＮ）のような非水性媒体が好ましい。好適な塩のリストは、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５，ｐ．１４１８及びＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２（１９７７）に見出され、これらの各々は、その全体が参照により本明細書に援用される。
塩を含む本明細書に記載の化合物は、既知の有機合成技術を使用して調製することができ、多くの可能な合成経路のいずれかに従って合成することができる。
本明細書に記載の化合物を調製するための反応は、有機合成の当業者によって容易に選択することができる適切な溶媒中で実施することができる。好適な溶媒は、反応を実施する温度、例えば、溶媒の凍結温度から溶媒の沸騰温度までの範囲の温度で、出発物質（反応物）、中間体、または生成物と実質的に非反応性であり得る。所与の反応は、１つの溶媒または複数の溶媒の混合物中で実施することができる。特定の反応工程に応じて、特定の反応工程に適した溶媒を当業者が選択することができる。
本明細書に記載の化合物の調製は、様々な化学基の保護及び脱保護を含み得る。保護及び脱保護の必要性、ならびに適切な保護基の選択は、当業者によって容易に決定され得る。保護基の化学的性質は、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ ａｎｄ Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄＥｄ．，Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９９９）に見出すことができ、その全体が参照により本明細書に援用される。
反応は、当技術分野で公知の任意の好適な方法に従ってモニタリングすることができる。例えば、生成物の形成は、核磁気共鳴分光法（例えば、１Ｈまたは１３Ｃ）、赤外線分光法、分光光度法（例えば、ＵＶ－可視）、質量分析などの分光学的手段によって、または高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）、液体クロマトグラフィー－質量分析（ＬＣＭＳ）、または薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）などのクロマトグラフィー方法によってモニタリングすることができる。化合物は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）（“Ｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ＬＣ－ＭＳ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｍｅｔｈｏｄ Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ” Ｋａｒｌ Ｆ．Ｂｌｏｍ，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｃｏｍｂｉ．Ｃｈｅｍ．２００４，６（６），８７４－８８３（その全体が参照により本明細書に援用される））及び順相シリカクロマトグラフィーを含む、様々な方法によって、当業者によって精製することができる。
本明細書に記載の化合物は、例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを含む様々なＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）のうちの１つ以上の活性を調節することができる。用語「調節する」とは、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂファミリーの１つ以上のメンバーの活性を増加または減少させる能力を指すことを意味する。したがって、本明細書に記載の化合物は、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを、本明細書に記載の化合物または組成物のいずれか１つ以上と接触させることによって、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを調節する方法において使用することができる。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂの一方または両方の阻害剤として作用することができる。さらなる実施形態では、本明細書に記載の化合物は、調節量の本明細書に記載の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することにより、受容体の調節を必要とする個体においてＡ２Ａ／Ａ２Ｂの活性を調節するために使用することができる。いくつかの実施形態では、調節は阻害である。
がん細胞の成長及び生存が複数のシグナル伝達経路によって影響を受けることを考えると、本発明は、薬剤耐性変異体によって特徴付けられる疾患状態を治療するために有用である。さらに、それらが活性を調節するＧＰＣＲにおいて異なる選好を示す異なるＧＰＣＲ阻害剤を組み合わせて使用してもよい。このアプローチは、複数のシグナル伝達経路を標的とすることにより、疾患状態の治療に非常に効率的であることを示し、細胞内で薬剤耐性が生じる可能性を減らし、疾患の治療の毒性を減らすことができる。
本化合物が結合及び／または調節する（例えば、阻害する）ＧＰＣＲには、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂファミリーの任意のメンバーが含まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の化合物を使用して、１つのＧＰＣＲ（例えば、Ａ２Ａ）の活性を阻害する。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の２つ以上の化合物を使用して、複数のＧＰＣＲ、例えば、少なくとも２つのＧＰＣＲ（例えば、Ａ２Ａ及びＡ２Ｂ）を阻害する。
いくつかの実施形態では、１つ以上の化合物を、別のＧＰＣＲアンタゴニストと併用して、１つのＧＰＣＲ（例えば、Ａ２ＡまたはＡ２Ｂ）の活性を阻害する。
本明細書に記載のＡ２Ａ／Ａ２Ｂの阻害剤は選択的であり得る。「選択的」とは、化合物が、少なくとも１つの他のＧＰＣＲと比較して、それぞれ、より高い親和性または効力でＧＰＣＲに結合または阻害することを意味する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、Ａ２ＡまたはＡ２Ｂの選択的阻害剤である。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、Ａ２Ａの選択的阻害剤である（例えば、Ａ２Ｂよりも）。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物は、Ａ２Ｂの選択的阻害剤である（例えば、Ａ２Ａよりも）。いくつかの実施形態では、選択性は、少なくとも約２倍、５倍、１０倍、少なくとも約２０倍、少なくとも約５０倍、少なくとも約１００倍、少なくとも約２００倍、少なくとも約５００倍または少なくとも約１０００倍であり得る。選択性は、当技術分野で日常的な方法によって測定することができる。いくつかの実施形態では、選択性は、各ＧＰＣＲに対する生化学的親和性で試験することができる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物の選択性は、特定のＡ２Ａ／Ａ２Ｂ活性に関連する細胞アッセイによって決定することができる。
本明細書中で使用する場合、用語「接触する」とは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系またはｉｎ ｖｉｖｏ系において示された部分を一緒にすることを指す。例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを本明細書に記載の化合物と「接触」させることは、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを有する個体または患者、例えばヒトに本発明の化合物を投与すること、ならびに例えば、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂを含有する細胞調製物または精製調製物を含有する試料中に本明細書に記載の化合物を導入することを含む。
Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の追加の阻害剤
本明細書に記載の方法においてＣＤ７３阻害剤との併用において有用なＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の他の阻害剤は当技術分野で公知である。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤はＣＰＩ－４４４（本明細書中では「化合物Ｂ」；７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－［［６－［［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシメチル］ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミンとも呼ばれる）である。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤はＡＢ９２８（３－［２－アミノ－６－［１－［［６－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾール－４－イル］ピリミジン－４－イル］－２－メチルベンゾニトリル）である。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤はＡＺＤ４６３５（６－（２－クロロ－６－メチルピリジン－４－イル）－５－（４－フルオロフェニル）－１，２，４－トリアジン－３－アミン）である。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤はＮＩＲ－１７８（５－ブロモ－２，６－ジ（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ピリミジン－４－アミン）である。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤はＥＯＳ１００８５０である。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、米国特許出願公開第２０１９／０２９２１８８号に記載されている化合物、その薬学的に許容される塩、またはその立体異性体である（その全体が参照により本明細書に援用される）。いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、
Figure 2023509442000028
 （３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル）、またはその薬学的に許容される塩もしくはその立体異性体を含むか、またはそれらからなる。
いくつかの場合では、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、
Figure 2023509442000029
 （３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル）、またはその薬学的に許容される塩もしくはその立体異性体を含むか、またはそれらからなる。
標識された薬剤及びアッセイ方法
本開示の別の態様は、本開示の標識された薬剤（すなわち、標識されたＣＤ７３阻害剤ならびにＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤）（放射性標識、蛍光標識など）に関し、これらは、画像化技術だけでなく、ヒトを含む組織試料中のＣＤ７３またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂ受容体を局在化及び定量するための、ならびに標識された化合物の阻害結合によってＣＤ７３またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアンタゴニストを同定するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏの両方のアッセイにおいて有用であろう。本開示の化合物の原子の１つ以上の置換は、差異化されたＡＤＭＥ（吸着、分布、代謝及び***）の生成にも有用であり得る。したがって、本開示は、そのような標識または置換化合物を含むアデノシン受容体（例えば、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂ）アッセイを含む。
本開示は、本開示の同位体標識された薬剤をさらに含む。「同位体（ｉｓｏｔｏｐｉｃａｌｌｙ）」または「放射性標識」薬剤とは、１つ以上の原子が、一般的に自然界に見出される（すなわち、天然の）原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子によって置き換えられた、すなわち置換された本開示の薬剤である。本開示の薬剤に組み込んでもよい好適な放射性核種として、２Ｈ（重水素をＤと表記することもある）、３Ｈ（トリチウムをＴと表記することもある）、１１Ｃ、１３Ｃ、１４Ｃ、１３Ｎ、１５Ｎ、１５Ｏ、１７Ｏ、１８Ｏ、１８Ｆ、３５Ｓ、３６Ｃｌ、８２Ｂｒ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、７７Ｂｒ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１２５Ｉ及び１３１Ｉが挙げられるがこれらに限定されない。例えば、本開示の化合物中の１つ以上の水素原子を、重水素原子で置換することができる（例えば、式（Ｉ）のＣ１－６アルキル基の１つ以上の水素原子を、任意選択で重水素原子に置換する（例えば、－ＣＨ３を－ＣＤ３に置換する）ことができる）。いくつかの実施形態では、開示する式、例えば式（Ｉ）のいずれかにおけるアルキル基を過重水素化することができる。
本明細書に提示する薬剤の１つ以上の構成原子を、天然または非天然存在量の原子の同位体で置き換える、すなわち置換することができる。いくつかの実施形態では、化合物は、少なくとも１つの重水素原子を含む。例えば、本明細書に提示する化合物中の１つ以上の水素原子を、重水素によって置き換える、すなわち置換することができる（例えば、Ｃ１－６アルキル基の１つ以上の水素原子を重水素原子に置換する（例えば、－ＣＨ３を－ＣＤ３に置換する）ことができる。いくつかの実施形態では、薬剤は、２つ以上の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、薬剤は、１～２個、１～３個、１～４個、１～５個、または１～６個の重水素原子を含む。いくつかの実施形態では、薬剤中の水素原子のすべてを重水素原子に置き換える、すなわち置換することができる。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載されているように、任意の「アルキル」、「アルケニル」、「アルキニル」、「アリール」、「フェニル」、「シクロアルキル」、「ヘテロシクロアルキル」、または「ヘテロアリール」置換基、または「－Ｃ１－６アルキル－」、「アルキレン」、「アルケニレン」及び「アルキニレン」連結基の炭素原子に結合した１、２、３、４、５、６、７、または８個の水素原子が、それぞれ、任意選択で、重水素原子に置換される。
同位体を有機化合物に含めるための合成方法は、当技術分野で公知である（Ｄｅｕｔｅｒｉｕｍ Ｌａｂｅｌｉｎｇ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｂｙ Ａｌａｎ Ｆ．Ｔｈｏｍａｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ａｐｐｌｅｔｏｎ－Ｃｅｎｔｕｒｙ－Ｃｒｏｆｔｓ，１９７１；Ｔｈｅ Ｒｅｎａｉｓｓａｎｃｅ ｏｆ Ｈ／Ｄ Ｅｘｃｈａｎｇｅ ｂｙ Ｊｅｎｓ Ａｔｚｒｏｄｔ，Ｖｏｌｋｅｒ Ｄｅｒｄａｕ，Ｔｈｏｒｓｔｅｎ Ｆｅｙ ａｎｄ Ｊｏｃｈｅｎ Ｚｉｍｍｅｒｍａｎｎ，Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．Ｅｄ．２００７，７７４４－７７６５；Ｔｈｅ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｉｓｏｔｏｐｉｃ Ｌａｂｅｌｌｉｎｇ ｂｙ Ｊａｍｅｓ Ｒ．Ｈａｎｓｏｎ，Ｒｏｙａｌ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２０１１）。同位体標識された薬剤は、ＮＭＲ分光法、代謝実験、及び／またはアッセイなどの様々な研究において使用することができる。
重水素などのより重い同位体による置換は、より大きな代謝安定性から生じる特定の治療上の利点、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ半減期の増加または必要用量の減少をもたらす可能性があり、したがって、いくつかの状況では好ましい場合がある（例えば、Ａ．Ｋｅｒｅｋｅｓ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０１１，５４，２０１－２１０；Ｒ．Ｘｕ ｅｔ．ａｌ．Ｊ．Ｌａｂｅｌ Ｃｏｍｐｄ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．２０１５，５８，３０８－３１２を参照のこと）。特に、１つ以上の代謝部位での置換は、１つ以上の治療上の利点をもたらし得る。
放射性標識された本薬剤に組み込む放射性核種は、その放射性標識された薬剤の特定の用途に依存する。例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏアデノシン受容体標識及び競合アッセイでは、３Ｈ、１４Ｃ、８２Ｂｒ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、または３５Ｓを組み込んだ薬剤が有用であり得る。放射線イメージングの用途では、１１Ｃ、１８Ｆ、１２５Ｉ、１２３Ｉ、１２４Ｉ、１３１Ｉ、７５Ｂｒ、７６Ｂｒ、または７７Ｂｒが有用であり得る。
「放射性標識された」または「標識された薬剤」とは、少なくとも１つの放射性核種を組み込んだ薬剤であることが理解される。いくつかの実施形態では、放射性核種は、３Ｈ、１４Ｃ、１２５Ｉ、３５Ｓ及び８２Ｂｒからなる群から選択される。
本開示は、放射性同位元素を本開示の薬剤に組み込むための合成方法をさらに含み得る。放射性同位体を有機化合物及び抗体に組み込むための合成方法は、当技術分野で周知であり、当業者は、開示の化合物及び抗体に適用可能な方法を容易に認識するであろう。
本開示の標識された薬剤は、薬剤を同定／評価するためのスクリーニングアッセイにおいて使用することができる。例えば、標識された新たに合成または同定された薬剤（すなわち、被験薬剤）は、アデノシン受容体またはＣＤ７３とそれぞれ接触する際の濃度変化を、その標識を追跡することによってモニタリングすることにより、アデノシン受容体またはＣＤ７３に結合する能力について評価することができる。例えば、被験薬剤（標識された）を、アデノシン受容体またはＣＤ７３に結合することが知られている別の薬剤（すなわち、標準薬剤）の結合を減少させるその能力について評価することができる。したがって、アデノシン受容体またはＣＤ７３への結合について標準薬剤と競合する被験薬剤の能力は、その結合親和性と直接相関する。逆に、他のいくつかのスクリーニングアッセイでは、標準薬剤が標識され、被験薬剤は標識されない。したがって、標識された標準薬剤の濃度を、標準薬剤と被験薬剤との間の競合を評価するためにモニタリングし、したがって、被験薬剤の相対的な結合親和性が確認される。
併用療法及び適応症
本開示のＣＤ７３阻害剤は、ＣＤ７３の活性を調節することができる。したがって、本明細書に記載のＣＤ７３阻害剤は、ＣＤ７３を、本明細書に記載の抗体またはその組成物のいずれか１つ以上に接触させることによってＣＤ７３を阻害する方法において使用することができる。同様に、本開示のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂ阻害剤は、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の活性を調節することができる。したがって、本明細書に記載のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤、塩または立体異性体は、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体を、本明細書に記載のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤またはその組成物のいずれか１つ以上にそれぞれ接触させることによって、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体を阻害する方法において使用することができる。本開示のＣＤ７３阻害剤ならびに本開示のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤を、相乗的に機能させて、例えばがんなどの疾患または障害を治療することができる。したがって、ＣＤ７３を、本明細書に記載のＣＤ７３阻害剤またはその組成物のいずれか１つ以上に接触させ、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体を、本明細書に記載のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤またはその組成物のいずれか１つ以上に接触させることによって、ＣＤ７３ならびにＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体を阻害する方法において、本明細書に記載のＣＤ７３阻害剤を、本明細書に記載のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤と併用することができる。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤は：有効量の本明細書に記載のＣＤ７３阻害剤及び本明細書に記載のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤を投与することにより、（ｉ）阻害を必要とする個体／患者におけるＣＤ７３の活性、及び（ｉｉ）阻害を必要とする個体／患者におけるＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の活性を阻害する方法において、併用することができる。いくつかの実施形態では、調節は阻害である。いくつかの実施形態では、接触はｉｎ ｖｉｖｏである。いくつかの実施形態では、接触はｅｘ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏである。
本開示の別の態様は、個体（例えば、患者）におけるＣＤ７３及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体関連疾患または障害を、治療を必要とする個体に、治療有効量または治療有効用量の本開示の１つ以上のＣＤ７３阻害剤またはその医薬組成物、ならびに治療有効量または治療有効用量の本開示の１つ以上のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤またはその医薬組成物を投与することによって治療する方法に関する。ＣＤ７３関連疾患または障害には、過剰発現及び／または異常な活性レベルを含む、ＣＤ７３の発現または活性に直接的または間接的に関連する任意の疾患、障害または病態が含まれ得る。Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体関連の疾患または障害には、過剰発現及び／または異常な活性レベルを含む、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の発現または活性に直接的または間接的に関連する任意の疾患、障害または病態が含まれ得る。ＣＤ７３及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体関連疾患または障害には、ＣＤ７３及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の過剰発現及び／または異常な活性レベルを含む、ＣＤ７３及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の発現または活性に直接的または間接的に関連する任意の疾患、障害または病態が含まれ得る。
本開示の別の態様は、治療有効量または治療有効用量の本開示の１つ以上のＣＤ７３阻害剤またはその医薬組成物、ならびに治療有効量または治療有効用量の本開示の１つ以上のＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤またはその医薬組成物を、治療を必要とする個体に投与することにより、個体（例えば、患者）における疾患または障害（例えば、がん）を治療する方法に関し、その場合、疾患または障害は、高いアデノシンシグネチャーを有する。疾患または障害が高いアデノシンシグネチャーを有することを判定する方法は、当技術分野で公知である。例えば、腫瘍組織の遺伝子発現分析を、定義されたアデノシン応答性遺伝子のパネルを使用して実施してもよい。
本開示のＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤は、例えば、がん、炎症性疾患、心血管疾患、神経変性疾患、免疫調節障害、中枢神経系疾患、及び糖尿病を含む、ＣＤ７３及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の活性に関連する疾患の治療における併用において有用である。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は：
（ａ）可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）；
（ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；または
（ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含む抗体：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｈ）１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体；または
（ｉ）ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される阻害剤
を含む。
いくつかの実施形態では、Ａ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）の阻害剤は、以下の化合物：
（ａ）式（Ｉ）：
Figure 2023509442000030
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２からそれぞれ独立して選択される１、２、または３個の基で置換され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、独立して選択される１、２、または３個のＲＣ置換基で置換され；
Ｒａ２は、任意選択で１または２個の独立して選択されるＲＣ置換基で置換された（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；
（ｂ）式（ＩＩ）：
Figure 2023509442000031
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｌは、Ｃ１－３アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
各Ｒ８は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８のＣ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
各Ｒ８Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８ＡのＣ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１のＣ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒ８Ｂは、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
各Ｒ８Ｄは、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）；
（ｃ）式（ＩＩＩ）：
Figure 2023509442000032
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｒ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ２Ａは、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
各Ｒ４Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；あるいは
（ｄ）式（ＩＶ）：
Figure 2023509442000033
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
各Ｒ６は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
各Ｒ２Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）、
またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態では、ヒトＣＤ７３阻害剤は：
（ａ）可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）；
（ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；または
（ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
（ＶＨ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
ＶＨ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
ＶＨ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体：
（ＶＬ ＣＤＲ１は、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
ＶＬ ＣＤＲ２は、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
ＶＬ ＣＤＲ３は、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）；
（ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
（ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
（ｈ）１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体；あるいは
（ｉ）ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される阻害剤を含み；ならびに
Ａ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）の阻害剤は化合物：
（ａ）式（Ｉ）：
Figure 2023509442000034
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２からそれぞれ独立して選択される１、２、または３個の基で置換され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、独立して選択される１、２、または３個のＲＣ置換基で置換され；
Ｒａ２は、任意選択で、１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換された（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
各ＲＣは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；
（ｂ）式（ＩＩ）：
Figure 2023509442000035
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｒ２は、Ｈ及びＣＮから選択され；
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
ＬはＣ１－３アルキレンであり、前記アルキレンは、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
Ｃｙ４は、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルは、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
各Ｒ８は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８のＣ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
各Ｒ８Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８ＡのＣ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１は、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１のＣ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
各Ｒ８Ｂは、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
各Ｒ８Ｄは、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）；
（ｃ）式（ＩＩＩ）：
Figure 2023509442000036
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｒ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
各Ｒ２Ａは、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ４は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４のフェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
各Ｒ４Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１は、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；あるいは
（ｄ）式（ＩＶ）：
Figure 2023509442000037
 またはその薬学的に許容される塩（式中、
Ｃｙ１は、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基によって置換されたフェニルであり；
Ｃｙ２は、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルは、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
各Ｒ６は、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
Ｒ２は、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２のフェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－は、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
各Ｒ２Ａは、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）、
またはその薬学的に許容される塩を含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含み、Ａ２ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、化合物３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含み、Ａ２ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、化合物３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含み、Ａ２ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、化合物３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含み、Ａ２ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、化合物３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を含み、Ａ２ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、化合物３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
いくつかの実施形態では、ＣＤ７３阻害剤は、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む軽鎖を含む抗体を含み、Ａ２ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤は、化合物３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む。
複数の免疫抑制メカニズムにおけるＣＤ７３及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の重要な役割に基づいて、併用療法は免疫系を強化して腫瘍の進行を抑制することができる。ＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を併用し、任意選択で他の治療法とさらに組み合わせて、膀胱癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、肺転移性）、黒色腫（例えば、転移性黒色腫）、乳癌、子宮頸癌、卵巣癌、結腸直腸癌、膵臓癌、食道癌、前立腺癌、腎臓癌、皮膚癌、甲状腺癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、子宮癌、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、及び腎細胞癌を治療することができる。いくつかの実施形態では、前立腺癌は、転移性去勢抵抗性前立腺癌（ｍＣＲＰＣ）である。いくつかの実施形態では、結腸直腸癌は結腸直腸癌腫（ＣＲＣ）である。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌）、黒色腫、膵臓癌、乳癌、頭頸部扁平上皮細胞癌、前立腺癌、肝臓癌、結腸癌、子宮内膜癌、膀胱癌、皮膚癌、子宮癌、腎臓癌、胃癌、または肉腫である。いくつかの実施形態では、肉腫は、アスキン腫瘍、ブドウ状肉腫、軟骨肉腫、ユーイング肉腫、悪性血管内皮腫、悪性シュワン腫、骨肉腫、胞巣状軟部肉腫、血管肉腫、葉状嚢肉腫、***性皮膚線維肉腫、類腱腫、線維形成性小円形細胞腫瘍、類上皮肉腫、骨外性軟骨肉腫、骨外性骨肉腫、線維肉腫、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、血管周囲細胞腫、血管肉腫、カポジ肉腫、平滑筋肉腫、脂肪肉腫、リンパ管肉腫、リンパ肉腫、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、神経線維肉腫、横紋筋肉腫、滑膜肉腫、または未分化多形肉腫である。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、頭頸部癌（例えば、頭頸部扁平上皮癌）、結腸直腸癌、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌（例えば、肝細胞癌）、または腎細胞癌である。
いくつかの実施形態では、疾患または障害は、中皮腫または副腎癌である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は中皮腫である。いくつかの実施形態では、疾患または障害は副腎癌である。
ＭＤＳＣ（骨髄系由来抑制細胞）は、骨髄系列（骨髄幹細胞を起源とする細胞のファミリー）由来の不均一な免疫細胞の群である。ＭＤＳＣは、造血の変化の結果として、慢性感染症及びがんなどの病理学的状況で強力に増殖する。ＭＤＳＣは、免疫刺激特性ではなく強力な免疫抑制活性を有することで、他の骨髄細胞型とは区別される。他の骨髄系細胞と同様に、ＭＤＳＣは、Ｔ細胞、樹状細胞、マクロファージ及びナチュラルキラー細胞を含む他の免疫細胞型と相互作用して、それらの機能を調節する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の化合物などは、マクロファージ及び／またはＭＤＳＣ浸潤の高い基礎レベルを伴う固形腫瘍を含む、ＭＤＳＣの高い浸潤を伴うがん組織（例えば、腫瘍）に関連する方法に使用され得る。
いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を、ブレオマイシン誘発性肺線維症及びアデノシンデアミナーゼ欠損症に関連する傷害を含む肺炎の治療において併用することができる。
いくつかの実施形態では、アレルギー反応（例えば、ＣＤ７３依存性及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体依存性アレルギー反応）ならびに他のＣＤ７３免疫反応及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体免疫反応などの炎症性疾患の治療として、本開示のＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を併用することができる。本開示のＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤との併用によって治療することができるさらなる炎症性疾患には、呼吸障害、敗血症、再灌流傷害、及び血栓症が含まれる。
いくつかの実施形態では、心血管疾患、例えば、冠状動脈疾患（心筋梗塞、狭心症、心不全）、脳血管疾患（脳卒中、一過性脳虚血性発作）、末梢動脈疾患、ならびにアテローム性動脈硬化症及び動脈瘤の治療薬として、本開示のＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を併用することができる。アテローム性動脈硬化症は、多くの種類の心血管疾患の根本的な病因である。アテローム性動脈硬化症は、青年期に脂肪線条で始まり、成人期にプラークに進行し、最終的に血管の閉塞を引き起こす血栓性事象を引き起こし、臨床的に有意な罹患率と死亡率をもたらす。
いくつかの実施形態では、運動活動における障害；線条体黒質ドーパミン系の変性によって引き起こされる欠損症；及びパーキンソン病；うつ病の動機付け症状のいくつかの治療薬として、本開示のＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を併用することができる。
いくつかの実施形態では、糖尿病及びインスリン抵抗性などの関連する障害の治療薬として、本開示のＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を併用することができる。糖尿病は、アデノシンの産生ならびにＩＬ－６及びＣＲＰの産生を刺激するＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２ＢＲ）の発現、インスリン抵抗性、ならびにＡ２ＢＲ遺伝子一塩基多型（ＡＤＯＲＡ２Ｂ ＳＮＰ）と炎症マーカーとの関連性に影響を及ぼす。糖尿病におけるＡ２ＢＲシグナル伝達の増加は、炎症誘発性メディエーターを上昇させることにより、インスリン抵抗性を部分的に増加させ得る。選択的ＣＤ７３阻害剤は、インスリン抵抗性の治療に有用であり得る。
同じ意味で使用される用語「個体」または「患者」または「対象」とは、哺乳動物、好ましくはマウス、ラット、他のげっ歯類、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、または霊長類、最も好ましくはヒト（すなわち、ヒト対象）を含む任意の動物を指す。
語句「治療有効量」とは、研究者、獣医、医師、または他の臨床医が、組織、系、動物、個体またはヒトにおいて求めている生物学的または医薬的応答を引き出す、活性抗体または医薬品の量を指す。
本明細書中で使用する場合、用語「治療する」または「治療」とは、（１）疾患を阻害すること；例えば、疾患、病態または障害の病理または症候を経験しているか、または示している個体における疾患、病態または障害を阻害すること（すなわち、病理及び／または症候のさらなる進展を阻止すること）；及び（２）疾患を改善すること；例えば、疾患、病態または障害の病理または症候を経験しているか、または示している個体における疾患、病態または障害を改善すること（すなわち、病理及び／または症候を逆転させること）、例えば、疾患の重症度を低下させること、のうちの１つ以上を指す。
いくつかの実施形態では、本開示のＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤は、本明細書中で言及する疾患のいずれかの予防または発症リスクの低減；例えば、疾患、病態または障害に罹患しやすい可能性があるが、疾患の病理または症状をまだ経験していないか、または呈していない個体における疾患、病態または障害の予防または発症リスクの低減における併用において有用である。
医薬組成物
本明細書に記載のＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を、対象に投与するための医薬組成物として製剤化して、例えば、本明細書に記載の障害を治療することができる。いくつかの場合では、医薬組成物は、ＣＤ７３阻害剤を単剤として含む。いくつかの場合では、医薬組成物は、Ａ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤を単剤として含む。いくつかの場合では、医薬組成物は、ＣＤ７３阻害剤、ならびにＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を含む。
通常、医薬組成物は、薬学的に許容される担体を含む。本明細書中で使用する場合、「薬学的に許容される担体」には、生理学的に適合するあらゆる溶媒、分散媒体、コーティング、抗菌剤及び抗真菌剤、等張剤ならびに吸収遅延剤などが含まれる。組成物は、薬学的に許容される塩、例えば、酸付加塩または塩基付加塩を含み得る（例えば、Ｂｅｒｇｅ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ ａｌ．（１９７７）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．６６：１－１９を参照のこと）。
医薬製剤は十分に確立された技術であり、例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（ｅｄ．），Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ（２０００）（ＩＳＢＮ：０６８３３０６４７２）；Ａｎｓｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ ａｎｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，７ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ（１９９９）（ＩＳＢＮ：０６８３３０５７２７）；及びＫｉｂｂｅ（ｅｄ．），Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，３ｒｄ ｅｄ．（２０００）（ＩＳＢＮ：０９１７３３０９６Ｘ）にさらに記載されている。
医薬組成物は、様々な形態であり得る。これらには、例えば、液体溶液（例えば、注射溶液及び注入溶液）、分散剤または懸濁剤、錠剤、丸剤、散剤、リポソーム及び坐剤などの液体、半固体及び固体剤形が含まれる。好ましい形態は、意図される投与様式及び治療的用途に依存し得る。一般的には、本明細書に記載の薬剤のための組成物は、注射可能溶液または注入可能溶液の形態である。
組成物は、溶液、マイクロエマルション、分散液、リポソーム、または高濃度での安定な保存に好適な他の秩序ある構造として、製剤化することができる。滅菌注射溶液は、必要な量の本明細書に記載の薬剤を、上に列挙された成分のうちの１つまたは組み合わせと共に、適切な溶媒に組み込み、続いて必要に応じて、濾過滅菌することによって調製することができる。一般的に、本明細書に記載の薬剤を、基本の分散媒、及び上で列挙された成分由来の必要とされる他の成分を含有する滅菌ビヒクル中に組み込むことによって、分散液を調製する。滅菌注射溶液の調製のための滅菌粉末の場合、好ましい調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥であり、これにより、その事前に滅菌濾過された溶液から、本明細書に記載の薬剤の粉末に加えて、任意の追加の所望の成分が得られる。例えば、レシチンなどのコーティングの使用によって、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持によって、及び界面活性剤の使用によって、溶液の適切な流動性が維持され得る。組成物中に、吸収を遅延させる薬剤、例えばモノステアリン酸塩及びゼラチンを含ませることによって、注射用組成物の持続的吸収をもたらすことができる。
特定の実施形態では、ＣＤ７３阻害剤及び／またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を、インプラントを含む徐放性製剤及びマイクロカプセル化送達系など、急速放出から化合物を保護する担体を用いて調製してもよい。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、及びポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製のための多くの方法は、特許取得されているか、または一般的に知られている。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７８）を参照されたい。
投与
ＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤は、様々な方法によって、対象、例えば、それを必要とする対象、例えば、ヒト対象に投与することができる。いくつかの場合では、ＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を、同じ経路で対象に投与する。いくつかの場合では、ＣＤ７３阻害剤とＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤を、異なる経路で対象に投与する。多くの用途で、投与経路は：静脈内注射または注入（ＩＶ）、皮下注射（ＳＣ）、腹腔内（ＩＰ）、または筋肉内注射のうちの１つである。関節内送達を使用することも可能である。非経口投与の他の様式も使用することができる。そのような様式の例として：動脈内、くも膜下腔内、嚢内、眼窩内、心臓内、皮内、経気管、皮下、関節内、嚢下、くも膜下、脊髄内、ならびに硬膜外及び胸骨内注射が挙げられる。いくつかの場合では、投与は経口であり得る。
ＣＤ７３阻害剤またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤の投与経路及び／または投与様式はまた、例えば、腫瘍を視覚化するために、例えば、断層撮像を使用して、例えば、対象をモニタリングすることによって、個々の症例に合わせて調整することができる。
ＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤のそれぞれは、固定用量として、またはｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で投与することができる。用量はまた、ＣＤ７３阻害剤またはＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤に対する抗体の産生を低減または回避するように選択され得る。投薬レジメンは、所望の応答、例えば、治療応答、または組み合わせ治療効果を提供するように調整される。一般的に、対象に薬剤を生体利用可能な量で提供するために、ＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａ及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体阻害剤の用量を使用することができる。
本明細書中で使用する投薬単位形態または「固定用量」または「均一用量」は、対象を治療するための単位投薬量として適した、物理的に別々の単位を指し；各単位は、必要な医薬担体に関連して、及び任意選択で他の薬剤に関連して、所望の治療効果をもたらすように算出された、既定量の活性化合物を含有する。単回または複数回の投薬を行ってもよい。あるいは、またはさらに、抗体及び／または阻害剤を、連続注入により投与してもよい。
以下は、本発明の実施例である。これらの実施例は、いかなる意味でも本発明の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
以下の実施例は、特許請求される発明をよりよく例示するために提供され、本発明の範囲を限定するものとは意図されない。特定の材料が言及される範囲では、それは単に例示の目的のためのものであり、本発明を限定するようには意図されない。当業者は、発明の能力を働かせることなく、かつ本発明の範囲から逸脱することなく、等価な手段または反応物を開発することができる。
実施例Ａ：Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤の活性
Ｉ．Ａ２Ａ Ｔａｇ－ｌｉｔｅ（登録商標）ＨＴＲＦアッセイ
アッセイは、黒色の低容量３８４ウェルポリスチレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ ７８４０７６－２５）にて最終容量１０μＬで実施した。被験化合物を、最初にＤＭＳＯで段階希釈し、１００ｎｌをプレートウェルに添加してから、他の反応成分を添加した。ＤＭＳＯの最終濃度は１％であった。Ｔａｇ－ｌｉｔｅ（登録商標）アデノシンＡ２Ａ標識細胞（ＣｉｓＢｉｏ Ｃ１ＴＴ１Ａ２Ａ）をＴａｇ－ｌｉｔｅ緩衝液（ＣｉｓＢｉｏ ＬＡＢＭＥＤ）中に１：５で希釈し、１２００ｇで５分間遠心分離した。ペレットを最初の細胞懸濁液体積の１０．４倍の体積でＴａｇ－ｌｉｔｅ緩衝液に再懸濁し、アデノシンＡ２Ａ受容体レッドアンタゴニスト蛍光リガンド（ＣｉｓＢｉｏ Ｌ００５８ＲＥＤ）を１２．５ｎＭの最終濃度で添加した。１０μｌの細胞及びリガンド混合物をアッセイウェルに添加し、室温で４５分間インキュベートした後、ＨＴＲＦ３３７／６２０／６６５光学モジュールを備えたＰＨＥＲＡｓｔａｒ ＦＳプレートリーダー（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取った。蛍光リガンドの結合率を計算した；（１００ｎＭのＡ２Ａアンタゴニスト対照ＺＭ２４１３８５（Ｔｏｃｒｉｓ １０３６）はリガンドを１００％置換し、１％ＤＭＳＯは０％置換である）。阻害剤濃度の対数に対する結合率（％）データを、１部位競合結合モデル（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍバージョン７．０２）に当てはめた（リガンド定数＝１２．５ｎＭ及びリガンドＫｄ＝１．８５ｎＭ）。この方法で得られたＫｉデータを表７に示す。
ＩＩ．アデノシンＡ２Ｂ受容体サイクリックＡＭＰ ＧＳアッセイ
ヒトアデノシンＡ２Ｂ受容体（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を発現する安定的にトランスフェクトされたＨＥＫ－２９３細胞を、１０％ＦＢＳ及び１００μｇ／ｍｌジェネティシン（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を含有するＭＥＭ培地で維持した。アッセイの１８～２４時間前に、ジェネティシンを培養液から除去した。ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー移動）技術を利用したｃｉｓｂｉｏ ｃＡＭＰ－ＧＳ Ｄｙｎａｍｉｃキットを使用して、細胞内のｃＡＭＰ蓄積を測定した。適切な濃度の本開示の化合物を、白色９６ウェルハーフエリアプレート（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）中の１００００細胞／ウェルと共に室温で３０分間、穏やかに振盪しながら混合した。１２ｎＭのアゴニストＮＥＣＡ（Ｒ＆Ｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を各ウェルに添加し、室温で６０分間穏やかに振盪した。検出試薬ｄ２標識ｃＡＭＰ（アクセプター）及び抗ｃＡＭＰクリプテート（ドナー）を各ウェルに加え、室温で６０分間、穏やかに振盪した。プレートをＰｈｅｒａｓｔａｒ（ＢＭＧ Ｌａｂｔｅｃｈ）で読み取り、蛍光比６６５／６２０を計算し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍを使用して、化合物濃度の対数に対する対照の割合の曲線を当てはめることによってＥＣ５０決定を行った。この方法で得られたＥＣ５０データを表７に示す。
Figure 2023509442000038
実施例Ａ１：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物１）の合成
Figure 2023509442000039
 ステップ１：３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000040
 １，４－ジオキサン（６０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）中の４，６－ジクロロピリミジン－２－アミン（２．５ｇ、１５．２ｍｍｏｌ）、（３－シアノフェニル）ボロン酸（２．０２ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．０６ｇ、０．９２ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（３．２３ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で脱気し、その後、得られた混合物を６０℃で２日間、加熱撹拌した。室温（ｒ．ｔ．）に冷却した後、混合物を濃縮し、水で希釈し、ＤＣＭ（３０ｍＬ×３）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物を、ジクロロメタン中の８％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。Ｃ１１Ｈ８ＣｌＮ４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：２３１．０。実測値：２３１．０。
ステップ２：２－（ピリジン－２－イル）アセトヒドラジド
Figure 2023509442000041
 ヒドラジン（４．１５ｍＬ、１３２ｍｍｏｌ）を２－（ピリジン－２－イル）酢酸メチル（１０ｇ、６６．２ｍｍｏｌ）のエタノール（６６ｍＬ）溶液に室温で加えた。混合物を８５℃で４時間加熱撹拌した後、室温まで冷却した。静置すると白色の固体が形成され、これを濾過により回収し、さらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ７Ｈ１０Ｎ３Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：１５２．１。実測値：１５２．０。
ステップ３：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000042
 ２－（ピリジン－２－イル）アセトヒドラジド（２．６２ｇ、１７．３４ｍｍｏｌ）を３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル（４．００ｇ、１７．３４ｍｍｏｌ）のエタノール（３５ｍＬ）溶液に室温で加えた。還流で２時間加熱撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。得られた残留物をＮ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（２０ｍＬ）に取り、１２０℃で７時間撹拌した。次いで混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過により回収し、２０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ溶液に取った。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濾過し、水層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加により中和した。得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させて所望の生成物を褐色の固体として得た。Ｃ１８Ｈ１４Ｎ７（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：３２８．１；実測値３２８．１。
ステップ４：３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000043
 ＤＭＦ（１２ｍＬ）中の３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（２ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）の混合物に、－３０℃でＮＢＳ（１．０９ｇ、６．１１ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応混合物を０℃までゆっくり温めると、均質な溶液が得られた。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、得られた固体を濾過により回収した。次いで、固体を、ＤＣＭ中の０～１０％ＭｅＯＨで溶出するシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を得た。Ｃ１８Ｈ１３ＢｒＮ７（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ 計算値：４０６．０；実測値４０６．０。
ステップ５：３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Ｐｄ（Ｐｈ３Ｐ）４（２８４ｍｇ、０．２４６ｍｍｏｌ）を１，４－ジオキサン（１２ｍＬ）中の４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（１０９０ｍｇ、２．９５ｍｍｏｌ）、３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１０００ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）、及び塩化銅（Ｉ）（２４４ｍｇ、２．４６ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物をＮ２でパージし、８０℃で７時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＤＣＭ（５０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮＨ４ＯＨ溶液で洗浄した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）によって精製して、生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２２Ｈ１６Ｎ９（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４０６．２；実測値４０６．２。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．９５ （ｓ， １Ｈ）， ８．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５９ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９６ （ｍ， １Ｈ）， ７．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８２ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７６ （ｓ， １Ｈ）， ７．６０ － ７．５３ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５３ － ７．４８ （ｍ， １Ｈ）， ７．４８ － ７．４２ （ｍ， １Ｈ）， ４．４９ （ｓ， ２Ｈ）。
実施例Ａ２：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物２）の合成
Figure 2023509442000044
 ステップ１：２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル
Figure 2023509442000045
 濃硫酸（１．４２ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を２，６－ジフルオロマンデル酸（５ｇ，２７ｍｍｏｌ）のメタノール（４５ｍＬ）溶液に０℃で加えた。混合物を濃縮する前に室温で４時間撹拌した。得られたスラリーに飽和ＮａＨＣＯ３溶液（３０ｍＬ）を添加した。得られた混合物をＤＣＭ（３×２０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、Ｍｇ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ１１Ｈ１２Ｆ２ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋ＭｅＣＮ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝２４４．１；実測値２４４．２。
ステップ２：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
この化合物は、実施例Ａ１に記載の手順と同様の手順を使用して調製したが、ステップ２において２－（ピリジン－２－イル）酢酸メチルを２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチルに置き換えた。ＣＯ２中の２５％ＭｅＯＨの均一濃度の移動相で流速８０ｍＬ／分にて溶出する、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－１カラム（２１．２×２５０ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）を使用したキラルＳＦＣによって、２つのエナンチオマーを分離した。ピーク１を単離し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを含むＭｅＣＮ／水）によってさらに精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２３Ｈ１５Ｆ２Ｎ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４５７．１；実測値４５７．１。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．９４ （ｄ， Ｊ ＝ １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８１ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８５ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．３， １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８１ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．４， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７６ （ｔ， Ｊ ＝ １．７ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５５ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．８， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４９ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４４ （ｔｔ， Ｊ ＝ ８．４， ６．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．０９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．３ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．２７ （ｓ， １Ｈ）。
実施例Ａ３：３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ａ）及び３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ｂ）の合成
Figure 2023509442000046
 ステップ１：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
２－ヒドロキシアセトヒドラジド（２．３４ｇ、２６．０１ｍｍｏｌ）を３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル（４．００ｇ、１７．３４ｍｍｏｌ）（実施例Ａ１、ステップ１）のエタノール（３５ｍＬ）溶液に室温で加えた。還流で２時間加熱撹拌した後、反応混合物を室温に冷却し、濃縮した。得られた残留物をＮ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（２０ｍＬ）に取り、１２０℃で７時間撹拌した。次いで混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、室温で１時間撹拌した。得られた固体を濾過により回収し、２０ｍＬの１Ｎ ＨＣｌ溶液に取った。得られた混合物を室温で１時間撹拌し、濾過し、水層を飽和ＮａＨＣＯ３溶液の添加により中和した。得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させて所望の生成物を褐色の固体として得た。Ｃ１３Ｈ１１Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：２６７．１；実測値２６７．１。
ステップ２：３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
ＤＭＦ（１２ｍＬ）中の３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１．０ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）の混合物に、－３０℃でＮＢＳ（０．６７ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）を少しずつ加えた。反応混合物を０℃までゆっくり温めると、均質な溶液が得られた。０℃で１時間撹拌した後、反応混合物を飽和ＮａＨＣＯ３溶液で希釈し、所望の生成物を濾過により回収して乾燥させた。Ｃ１３Ｈ１０ＢｒＮ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：３４５．０；実測値３４５．０。
ステップ３：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０６７ｇ、０．０５８ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（５．０ｍＬ）中の４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（０．３２１ｇ、０．８６９ｍｍｏｌ）、３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（ヒドロキシメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（０．２０ｇ、０．５７９ｍｍｏｌ）、ＣｓＦ（０．１７６ｇ、１．１５９ｍｍｏｌ）、及びヨウ化銅（Ｉ）（０．０２２ｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。反応混合物をＮ２でパージし、８０℃で７時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＤＣＭ中の０％～１０％のメタノールで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、生成物を得た。Ｃ１７Ｈ１３Ｎ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：３４５．１；実測値３４５．１。
ステップ４：３－（５－アミノ－２－（クロロメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000047
 アセトニトリル（１０ｍｌ）中の３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（０．１ｇ、０．２９０ｍｍｏｌ）の混合物に、塩化チオニル（０．２１２ｍｌ、２．９０ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を室温で５時間撹拌し、濃縮し、ＤＣＭ中の０％～５％のメタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製して、生成物を得た。Ｃ１７Ｈ１２ＣｌＮ８（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：３６３．１；実測値３６３．１。
ステップ５：３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ａ）及び３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物３Ｂ）の混合物
ＤＭＦ（１ｍＬ）中の３－（５－アミノ－２－（クロロメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１０ｍｇ、０．０２８ｍｍｏｌ）、２－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ピリジン（８．１ｍｇ、０．０５５ｍｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（２０．７ｍｇ、０．０６４ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１０分間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、メタノール（４ｍＬ）で希釈し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）により精製して、生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２３Ｈ１６Ｎ１３（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４７４．２；実測値４７４．２。
化合物３Ａ：１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．９９ （ｄ， Ｊ ＝ １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８５ （ｄ， Ｊ ＝ ５．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８０ － ８．７１ （ｍ， １Ｈ）， ８．７１ － ８．３９ （ｂ， ２Ｈ）， ８．１８ （ｄ， Ｊ ＝ ７．７， １．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０４ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８， １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．８０ － ７．７６ （ｍ， １Ｈ）， ７．６２ － ７．５５ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ６．３９ （ｓ， ２Ｈ）。
実施例Ａ４：３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物４）の合成
Figure 2023509442000048
 ステップ１：６－クロロ－Ｎ２，Ｎ２－ビス（４－メトキシベンジル）ピリミジン－２，４－ジアミン
Figure 2023509442000049
 ２－プロパノール（３１ｍＬ）中の２，６－ジクロロピリミジン－４－アミン（５．０ｇ、３１ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（６．４ｍｌ、３７ｍｍｏｌ）及びビス（４－メトキシベンジル）アミン（７．９ｇ、３１ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を１００℃で１６時間撹拌し、室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）で抽出した。有機層を水及びブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して粗生成物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ２０Ｈ２２ＣｌＮ４Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：３８５．１；実測値３８５．１。
ステップ２：７－クロロ－Ｎ５，Ｎ５－ビス（４－メトキシベンジル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－２，５－ジアミン
Figure 2023509442000050
 Ｏ－エチルカルボイソチオシアナチデート（３．１ｍＬ、２６ｍｍｏｌ）を、６－クロロ－Ｎ２，Ｎ２－ビス（４－メトキシベンジル）ピリミジン－２，４－ジアミン（１．０ｇ、２．６ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン（５．０ｍＬ）溶液に室温で加えた。次いで、反応混合物を９０℃で一晩撹拌し、室温まで冷却し、濃縮した。得られた物質をメタノール（１２ｍＬ）及びエタノール（１２ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（０．９１ｍＬ、５．２ｍｍｏｌ）、続いてヒドロキシルアミン塩酸塩（０．５４ｇ、７．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を４５℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、濃縮した。得られた物質をＥｔＯＡｃに取り、水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。次いで、粗製物質を、ヘキサン中の０％～５０％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーによって精製して、生成物を得た。Ｃ２１Ｈ２２ＣｌＮ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：４２５．１；実測値４２５．２。
ステップ３：３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000051
 クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリ－ｉ－プロピル－１，１’－ビフェニル）（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル－２－イル）パラジウム（ＩＩ）（３３０ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（８．８ｍＬ）及び水（１．８ｍＬ）中の（３－シアノフェニル）ボロン酸（４６０ｍｇ、３．２ｍｍｏｌ）、７－クロロ－Ｎ５，Ｎ５－ビス（４－メトキシベンジル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－２，５－ジアミン（８９０ｍｇ、２．１ｍｍｏｌ）、及び炭酸ナトリウム（８９０ｍｇ、８．４ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。混合物をＮ２でパージし、９５℃で一晩撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＤＣＭ中の０％～５０％ＥｔＯＡｃで溶出するシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。Ｃ２８Ｈ２６Ｎ７Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：４９２．２；実測値４９２．２。
ステップ４：３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000052
 ＤＭＦ（１．４ｍＬ）中の３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（３３０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（１２０ｍｇ、０．６６ｍｍｏｌ）を０℃でゆっくりと添加した。次いで、反応混合物を室温で３０分間撹拌した後、水（１０ｍＬ）を添加した。得られた固体を濾過により回収し、乾燥させて所望の生成物を得た。Ｃ２８Ｈ２５ＢｒＮ７Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５７０．１；実測値５７０．２。
ステップ５：３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］）ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000053
 ジオキサン（４．７ｍＬ）中の３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（３５０ｍｇ、０．６１ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（２１０μＬ、０．６７ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７０ｍｇ、０．０６０ｍｍｏｌ）、ヨウ化銅（Ｉ）（２３ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、フッ化セシウム（１８０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の混合物をマイクロ波反応器内で１４０℃にて３０分間加熱撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、セライトプラグ（ＤＣＭで洗浄）に通して濾過し、濃縮した。得られた物質を、０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。Ｃ３２Ｈ２８Ｎ９Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５７０．２；実測値５７０．３。
ステップ６：３－（５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000054
 アセトニトリル（３ｍＬ）中の臭化銅（ＩＩ）（９１ｍｇ、０．４０７ｍｍｏｌ）と亜硝酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．０５４ｍｌ、０．４０７ｍｍｏｌ）の混合物に、窒素下、５０℃で、アセトニトリル（３ｍＬ）中の３－（２－アミノ－５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．２０３ｍｍｏｌ）を滴下した。混合物を５０℃で２時間撹拌した。室温まで冷却した後、１Ｎ ＮＨ４ＯＨ水溶液（２０ｍＬ）を加え、混合物をＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質を、５０～１００％酢酸エチル／ヘキサンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。Ｃ３２Ｈ２６ＢｒＮ８Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝６３３．１；実測値６３３．２。
ステップ７：３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
１，４－ジオキサン（１ｍＬ）中の水素化ナトリウム（鉱油中６０％、３．８ｍｇ、０．０９５ｍｍｏｌ）、３－（５－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（２０ｍｇ、０．０３２ｍｍｏｌ）及び（３－メチルピリジン－２－イル）メタノール（９．１μＬ、０．０９５ｍｍｏｌ）の懸濁液を、窒素下、１１０℃で一晩加熱撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＴＦＡ（１．０ｍＬ）を添加した。次いで、得られた混合物を１１０℃で３０分間撹拌し、室温に冷却し、アセトニトリルで希釈し、濾過し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）により精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２３Ｈ１８Ｎ９Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４３６．２；実測値４３６．２。１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．９７ （ｄ， Ｊ ＝ １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．８８ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．５８ － ８．５２ （ｍ， １Ｈ）， ７．９７ （ｄ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８８ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．４， １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８５ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．５， １．５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７８ （ｔ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６０ － ７．５４ （ｍ， ２Ｈ）， ７．５３ （ｔ， Ｊ ＝ ７．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ５．６９ （ｓ， ２Ｈ）， ２．４８ （ｓ， ３Ｈ）。
実施例Ａ５：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物５）の合成
Figure 2023509442000055
 ステップ１：３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000056
 １，４－ジオキサン（６０ｍＬ）及び水（５ｍＬ）中の４，６－ジクロロピリミジン－２－アミン（２．５ｇ、１５．２４ｍｍｏｌ）、（３－シアノフェニル）ボロン酸（２．０１６ｇ、１３．７２ｍｍｏｌ）、テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（１．０５７ｇ、０．９１５ｍｍｏｌ）及び炭酸ナトリウム（３．２３ｇ、３０．５ｍｍｏｌ）の混合物を窒素で脱気し、次いで得られた混合物を６０℃で２日間加熱した。室温（ＲＴ）に冷却した後、混合物を濃縮し、次いで水で希釈し、ジクロロメタン（ＤＣＭ、３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物を、ジクロロメタン中の８％酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）を用いたシリカゲルカラムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、所望の生成物を得た。Ｃ１１Ｈ８ＣｌＮ４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：２３１．０。実測値：２３１．０。
ステップ２：３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル
エタノール（２ｍｌ）中の３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリル（１００ｍｇ、０．４３４ｍｍｏｌ）及び２－ヒドロキシ－２－フェニルアセトヒドラジド（１０８ｍｇ、０．６５０ｍｍｏｌ）の溶液を、９５℃で３時間加熱撹拌した。室温に冷却した後、反応混合物を濃縮乾固し、Ｎ，Ｏ－ビス（トリメチルシリル）アセトアミド（１ｍＬ）に取り、１２０℃で７時間撹拌した。得られた混合物を室温に冷却し、氷に注ぎ、１時間撹拌した。得られた懸濁液をＤＣＭで３回抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。残留物をメタノール（ＭｅＯＨ）に溶解し、分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）によって精製して、生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ１９Ｈ１５Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：３４３．１；実測値３４３．１。
実施例Ａ６：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（化合物６）の合成
Figure 2023509442000057
 ステップ１：３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
Figure 2023509442000058
 ０℃に冷却したＴＨＦ（６０ｍＬ）中の３－ブロモ－２－フルオロベンゾニトリル（１８．３ｇ、９１ｍｍｏｌ）の溶液に、ＴＨＦ（１．３Ｍ）中のｉ－ＰｒＭｇＣｌ ＬｉＣｌ錯体（７０．４ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を２０分かけて加えた。混合物を０℃で５０分間撹拌し、次いで２－ＭｅＴＨＦ（１．９Ｍ）中の塩化亜鉛（４８．１ｍＬ、９１ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。反応物を室温で２５分間撹拌し、この時点で、４，６－ジクロロピリミジン－２－アミン（１０ｇ、６１．０ｍｍｏｌ）を一度に加えた。溶液を１０分間撹拌した。テトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．４１ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）を混合物に加え、反応物を室温で１６時間撹拌した。反応終了後、反応液に２，４，６－トリメルカプトトリアジンシリカゲル（２ｇ）を加えた。混合物を１時間撹拌し、濾過した。所望の生成物が完全に溶出するまで（ＬＣＭＳによって検出されるように）、固体を酢酸エチルで洗浄した。濾液を飽和塩化アンモニウム溶液及び水で洗浄した。有機物を濃縮して粗生成物を得た。粗製物質に水を加え、得られた沈殿物を濾過により回収し、窒素流下で乾燥させた。粗製物質をさらに精製することなく持ち越した。Ｃ１１Ｈ７ＣｌＦＮ４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝２４９．０；実測値２４９．０。
ステップ２：２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル
Figure 2023509442000059
 ２，６－ジフルオロマンデル酸（５．０ｇ、２７ｍｍｏｌ）のメタノール（４５ｍＬ）溶液に、濃硫酸（１．４ｍＬ、２７ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。混合物を濃縮する前に室温で４時間撹拌した。得られたスラリーに飽和ＮａＨＣＯ３溶液を添加した。得られた混合物をＤＣＭで抽出した。合わせた有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮して粗生成物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ１１Ｈ１２Ｆ２ＮＯ３（Ｍ＋Ｈ＋ＭｅＣＮ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝２４４．１；実測値２４４．２。
ステップ３：２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジド
Figure 2023509442000060
 メチル２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセテート（１０．８ｇ、５３ｍｍｏｌ）のエタノール（９０ｍＬ）溶液にヒドラジン（３．０ｍＬ、９６ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応混合物を１００℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、濃縮し、さらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ８Ｈ９Ｆ２Ｎ２Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：２０３．１；実測値２０３．２。
ステップ４：３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
実施例Ａ５のステップ２に記載の手順と同様の手順を用いて、３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）ベンゾニトリルを３－（２－アミノ－６－クロロピリミジン－４－イル）－２－フルオロベンゾニトリルに置き換えて、及び２－ヒドロキシ－２－フェニルアセトヒドラジドを２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジドに置き換えて、表題化合物を調製した。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（Ｒ，Ｒ）－Ｗｈｅｌｋ－Ｏ１カラム（２１．２×２５０ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）を使用し、ＣＯ２中１５％ＭｅＯＨの均一濃度の移動相で８５ｍＬ／分の流速で溶出するキラルＳＦＣにより２つのエナンチオマーを分離した。ピーク１とピーク２の保持時間は、それぞれ３．８分と５．３分であった。濃縮後、ピーク２を分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを含むＭｅＣＮ／水）により精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ１９Ｈ１２Ｆ３Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：３９７．１；実測値３９７．１。
実施例Ａ７：５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル（化合物７）の合成
Figure 2023509442000061
 ステップ１：３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
Figure 2023509442000062
 この化合物は、実施例Ａ１のステップ４に記載の手順と同様の手順を用いて、３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリルを３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（実施例Ａ６由来）に置き換えて調製した。Ｃ１９Ｈ１１ＢｒＦ３Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４７５．０；実測値４７５．０。
ステップ２：５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル
１，４－ジオキサン（０．６３ｍＬ）及び水（０．６３ｍＬ）中の３－（５－アミノ－８－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（０．１２ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）、ＺｎＣＮ２（０．０６０ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）及びｔＢｕＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ３（０．０２０ｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）の混合物を、Ｎ２でパージし、１００℃で１時間撹拌した。室温に冷却した後、反応物を飽和ＮａＨＣＯ３で希釈し、有機物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。２つのエナンチオマーを、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ｃｅｌｌｕｏｓｅ－４カラム（２１．２×２５０ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）を使用し、均一濃度の移動相ヘキサン中６０％ＥｔＯＨで２０ｍＬ／分の流速で溶出するキラルＨＰＬＣによって分離した。ピーク１とピーク２の保持時間は、それぞれ４．９分と７．２分であった。濃縮後、ピーク１を分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）により精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２０Ｈ１１Ｆ３Ｎ７Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：４２２．１；実測値４２２．１。
実施例Ａ８：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（化合物８）の合成
Figure 2023509442000063
 ステップ１：２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）酢酸メチル
Figure 2023509442000064
 ２－（２－ブロモ－６－フルオロフェニル）酢酸メチル（６．０ｇ、２４ｍｍｏｌ）、三塩基性リン酸カリウム（１５．５ｇ、７３ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（ＩＩ）（０．５５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）、及びＳＰｈｏｓ（１．０ｇ、２．４ｍｍｏｌ）の混合物を５００ｍＬの圧力容器に加えた。次に、ジオキサン（１５０ｍＬ）及び水（１５ｍＬ）中の４，４，５，５－テトラメチル－２－ビニル－１，３，２－ジオキサボロラン（６．４ｍｌ、３６ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物をＮ２でパージし、８０℃で１６時間撹拌した。次いで反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮し、カラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０～５０％のＥｔＯＡｃ）によって精製した。Ｃ１１Ｈ１２ＦＯ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：１９５．１；実測値１９５．１。
ステップ２：２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチル
Figure 2023509442000065
 ２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）酢酸メチル（２．５ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（１３０ｍＬ）に溶解し、－７８℃に冷却した。ＴＨＦ（１．０Ｍ）中のＬＤＡ（１６．７ｍＬ、１６．７ｍｍｏｌ）を滴下し、得られた溶液を－７８℃で３０分間撹拌した。次いで、９，９－ジメチルテトラヒドロ－４Ｈ－４ａ，７－メタノベンゾ［ｃ］［１，２］オキサジレノ［２，３－ｂ］イソチアゾール３，３－ジオキシド（４．７ｇ、２０．６ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（０．５Ｍ）中に滴下した。－７８℃にて３０分後、反応混合物を０℃に温め、１時間撹拌した。反応を飽和ＮＨ４Ｃｌでクエンチした。水層をＤＣＭ（３×）で抽出した。合わせた有機物を無水Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を、ヘキサン中の０～５０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。Ｃ１１Ｈ１１ＦＯ３Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ）＋のＬＣＭＳ計算値：２３３．１；実測値２３３．１。
ステップ３：２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジド
Figure 2023509442000066
 この化合物は、実施例Ａ６のステップ３に記載の手順と同様の手順を用いて、２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチルを２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシ酢酸メチルに置き換えて調製した。Ｃ１０Ｈ１２ＦＮ２Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：２１１．１；実測値２１１．１。
ステップ４：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
Figure 2023509442000067
 この化合物は、実施例Ａ６のステップ４に記載の手順と同様の手順を用いて、２－（２，６－ジフルオロフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジドを２－（２－フルオロ－６－ビニルフェニル）－２－ヒドロキシアセトヒドラジドに置き換えて調製した。Ｃ２１Ｈ１５Ｆ２Ｎ６Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４０５．１；実測値４０５．１。
ステップ５：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－ホルミルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
Figure 2023509442000068
 水中の四酸化オスミウム（４％ ｗ／ｗ、０．３６ｍＬ、０．１２ｍｍｏｌ）を、３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６）－ビニルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（９３０ｍｇ、２．３０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１８ｍＬ）及び水（４．６ｍＬ）溶液に加えた。反応混合物を室温で５分間撹拌し、次いで過ヨウ素酸ナトリウム（２．５ｇ、１１．５ｍｍｏｌ）を加えた。１時間撹拌した後、混合物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液中のメタ重亜硫酸ナトリウム（５％ ｗ／ｗ、２０ｍＬ）に希釈し、ＥｔＯＡｃ（×３）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧下で濃縮した。粗製物質を、ヘキサン中の０～１００％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を得た。Ｃ２０Ｈ１３Ｆ２Ｎ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４０７．１；実測値４０７．１。
ステップ６：３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
３－アミノ－１－メチルピロリジン－２－オン（６３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）と３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－ホルミルフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（１５０ｍｇ、０．３７ｍｍｏｌ）の溶液を、１，２－ジクロロエタン（１．９ｍＬ）中、４０℃で２時間撹拌した。次いで、トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（１６０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で１６時間撹拌した。反応物を飽和ＮａＨＣＯ３で希釈し、有機物をＥｔＯＡｃ（３×）で抽出した。合わせた有機物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。ジアステレオマーを、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ｃｅｌｌｕｏｓｅ－４カラム（２１．２×２５０ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）を使用して、均一濃度の移動相であるヘキサン中の４５％ＥｔＯＨで２０ｍＬ／分の流速にて溶出するキラルＨＰＬＣによって分離した。ピーク１とピーク２の保持時間は、それぞれ１４．９分と１７．５分であった。濃縮後、ピーク２を、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ Ｃｅｌｌｕｏｓｅ－１カラム（２１．２×２５０ｍｍ、粒子サイズ５μｍ）を使用して、均一濃度の移動相であるヘキサン中の３０％ＥｔＯＨで２０ｍＬ／分の流速にて溶出するキラルＨＰＬＣによってさらに分離した。ピーク１とピーク２の保持時間は、それぞれ１１．０分と１５．５分であった。濃縮後、ピーク１を分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを含むＭｅＣＮ／水）により精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２５Ｈ２３Ｆ２Ｎ８Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：５０５．２；実測値５０５．２。
実施例Ａ９：３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物９）の合成
Figure 2023509442000069
 ステップ１：３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル
Figure 2023509442000070
 ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の３－ブロモ－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（５．０ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）、３－（２－ブロモアセチル）ベンゾニトリル（５．４４ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（３．３５ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。次いで、反応混合物を水及びＤＣＭで希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物を白色の固体として得た（５．２ｇ、６１％）。Ｃ１３Ｈ１０ＢｒＮ４Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３４９．０；実測値３４９．０。
ステップ２：３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000071
 ３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（１０．５ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）を酢酸（１００ｍＬ）に溶解し、酢酸アンモニウム（２３．１８ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１１０℃で１２時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、生成物（８．４ｇ、８８％）を得た。Ｃ１２Ｈ７ＢｒＮ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３１６．０；実測値３１６．０。
ステップ３：３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000072
 ３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．４ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）とＰＯＣｌ３（４９．５ｍＬ、５３１ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を氷と重炭酸ナトリウムを含むフラスコにゆっくりと加えた。得られた沈殿物を回収し、水で洗浄し、乾燥させて、生成物を得た（８．８ｇ、９９％）。Ｃ１２Ｈ６ＢｒＣｌＮ５（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３３３．９；実測値３３４．０。
ステップ４．３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000073
 ＤＭＦ（１３４ｍＬ）中の３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．９９ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）、ビス（４－メトキシベンジル）アミン（１０．３７ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．４ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）の混合物を、８５℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させて生成物を得た（１４．１ｇ、９４％）。Ｃ２８Ｈ２４ＢｒＮ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５５５．１；実測値５５５．１。
ステップ５：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000074
 ＴＨＦ（０．５ｍＬ）中の２－メチルピリジン（０．０５０ｇ、０．５４０ｍｍｏｌ）の溶液に、－７８℃で２．５Ｍのｎ－ブチルリチウム（０．２１６ｍＬ、０．５４０ｍｍｏｌ）を加えた。得られた溶液を同じ温度で１時間撹拌した後、２－メチルテトラヒドロフラン中の１．９Ｍ塩化亜鉛（０．２８４ｍＬ、０．５４０ｍｍｏｌ）を加え、得られた混合物を室温で１０分間撹拌した。
３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（０．１５ｇ、０．２７０ｍｍｏｌ）、酢酸パラジウム（１．１ｍｇ、４．７μｍｏｌ）、及び２’－（ジシクロヘキシルホスフィノ）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルビフェニル－２，６－ジアミン（４．１ｍｇ、９．５μｍｏｌ）を入れたマイクロ波バイアルを、高真空下で排気させ、窒素を注入して戻した。次いで、ＴＨＦ（２．０ｍＬ）及びトルエン（０．５ｍＬ）を反応バイアルに加えた。混合物を０℃に冷却し、前のステップで調製した亜鉛試薬を注射器でゆっくりと加えた。次いで、反応混合物を６０℃で一晩撹拌し、室温まで冷却し、酢酸エチルと飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液との間で分配した。層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、生成物を得た（０．１１ｇ、７１％）。Ｃ３４Ｈ３０Ｎ７Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５６８．２；実測値５６８．３。
ステップ６．３－（８－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000075
 ３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１１０ｍｇ、０．１９４ｍｍｏｌ）及びＴＦＡ（７４６μＬ、９．６９ｍｍｏｌ）の混合物を、８０℃で３０分間撹拌し、室温に冷却し、濃縮した。得られた残留物を分取ＬＣＭＳ（ｐＨ２）によって精製して、生成物を白色の固体（ＴＦＡ塩）として得た（５７ｍｇ、９０％）。Ｃ１８Ｈ１４Ｎ７（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３２８．１；実測値３２８．１。
ステップ７．３－（８－アミノ－５－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000076
 ＤＭＦ（０．５ｍＬ）／ＤＣＭ（０．５ｍＬ）中の３－（８－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（ＴＦＡ塩）（３５ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（１４．１ｍｇ、０．０７９ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮して粗生成物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ１８Ｈ１３ＢｒＮ７（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４０６．０；実測値４０６．０。
ステップ８．３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
１，４－ジオキサン（１ｍＬ）中の６－クロロ－２－メチルピリダジン－３（２Ｈ）－オン（３０ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、ビス（ピナコラト）ジボロン（５３ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（１５．７ｍｇ、０．０２ｍｍｏｌ）（ＸＰｈｏｓ Ｐｄ Ｇ２）及び酢酸カリウム（６１．７ｍｇ、０．６３ｍｍｏｌ）の混合物を、１００℃で１時間撹拌した。次いで、３－（８－アミノ－５－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１０ｍｇ、０．０２５ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（３７．６ｍｇ、０．１１６ｍｍｏｌ）及び水（０．２ｍＬ）を反応混合物に加えた。得られた混合物を９０℃で１時間加熱した。混合物を濃縮し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）によって精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２３Ｈ１８Ｎ９Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４３６．２；実測値４３６．２。
１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ） δ ８．６６ － ８．６２ （ｄ， Ｊ ＝ ５．１ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．０９ － ８．０２ （ｄ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８８ － ７．８５ （ｔ， Ｊ ＝ １．８ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８５ － ７．８１ （ｍ， ３Ｈ）， ７．７８ － ７．７２ （ｄ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．６６ － ７．５１ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１０ － ７．０６ （ｄ， Ｊ ＝ ９．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ４．５９ － ４．４８ （ｓ， ２Ｈ）， ３．５３ － ３．４３ （ｓ， ３Ｈ）。
実施例Ａ１０：３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１０）の合成
Figure 2023509442000077
 ステップ１：３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル
Figure 2023509442000078
 ＤＭＦ（１００ｍＬ）中の３－ブロモ－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（５．０ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）、３－（２－ブロモアセチル）ベンゾニトリル（５．４４ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）の溶液に、炭酸カリウム（３．３５ｇ、２４．３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を周囲温度で２時間撹拌した。次いで、反応混合物を水及びＤＣＭで希釈した。有機層を分離し、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーで精製して、所望の生成物を白色の固体として得た（５．２ｇ、６１％）。Ｃ１３Ｈ１０ＢｒＮ４Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３４９．０；実測値３４９．０。
ステップ２：３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000079
 ３－ブロモ－１－（２－（３－シアノフェニル）－２－オキソエチル）－１Ｈ－１，２，４－トリアゾール－５－カルボン酸メチル（１０．５ｇ、３０．１ｍｍｏｌ）を酢酸（１００ｍＬ）に溶解し、酢酸アンモニウム（２３．１８ｇ、３０１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１１０℃で１２時間撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、生成物（８．４ｇ、８８％）を得た。Ｃ１２Ｈ７ＢｒＮ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３１６．０；実測値３１６．０。
ステップ３：３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000080
 ３－（２－ブロモ－８－オキソ－７，８－ジヒドロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．４ｇ、２６．６ｍｍｏｌ）とＰＯＣｌ３（４９．５ｍＬ、５３１ｍｍｏｌ）の混合物を１１０℃で一晩撹拌した。室温まで冷却した後、反応混合物を氷と重炭酸ナトリウムを含むフラスコにゆっくりと加えた。得られた沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥させて生成物を得た（８．８ｇ、９９％）。Ｃ１２Ｈ６ＢｒＣｌＮ５（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３３６．０；実測値３３６．０。
ステップ４：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000081
 ＤＭＦ（１３４ｍＬ）中の３－（２－ブロモ－８－クロロ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（８．９９ｇ、２６．９ｍｍｏｌ）、ビス（４－メトキシベンジル）アミン（１０．３７ｇ、４０．３ｍｍｏｌ）、及びＤＩＰＥＡ（９．４ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）の混合物を、６５℃で一晩撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、水で希釈した。得られた沈殿物を濾過により回収し、乾燥させて生成物を得た（１４．１ｇ、９４％）。Ｃ２８Ｈ２４ＢｒＮ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５５５．１；実測値５５５．１。
ステップ５：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000082
 １，４－ジオキサン（２００ｍＬ）及び水（５０ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ブロモ－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１０．０ｇ、１８．０ｍｍｏｌ）、４，４，５，５－テトラメチル－２－ビニル－１，３，２－ジオキサボロラン（３．８８ｇ、２５．２ｍｍｏｌ）、三塩基性リン酸カリウム（９．５５ｇ、４５．０ｍｍｏｌ）及びクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（５６７ｍｇ、０．７２ｍｍｏｌ）の混合物を、８５℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、１，４－ジオキサンの大部分を除去した。得られた沈殿物を濾過により回収し、水で洗浄し、乾燥させて粗生成物（９．１ｇ）を得、これを次のステップで直接使用した。Ｃ３０Ｈ２７Ｎ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５０３．２；実測値５０３．１。
ステップ６．３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000083
 １０ｍＬのジクロロメタン中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（７１７ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）の溶液に、１－ブロモピロリジン－２，５－ジオン（２５４ｍｇ、１．４３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。得られた混合物を４時間撹拌し、シリカゲルカラムによって直接精製して、所望の生成物（７８０ｍｇ、９４％）を得た。Ｃ３０Ｈ２６ＢｒＮ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５８１．１；実測値５８１．２。
ステップ７：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－（ピリミジン－４－イル）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000084
 ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（２６０ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（２１５ｍｇ、０．５８ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２８．４ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、塩化銅（Ｉ）（６７ｍｇ、０．６７ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５２ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の混合物を９０℃で４５分間撹拌した。反応混合物を水でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１７６ｍｇ、６７％）を得た。Ｃ３４Ｈ２９Ｎ８Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５８１．２；実測値５８１．１。
ステップ８：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ホルミル－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］）ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000085
 ＴＨＦ／水（１：１、６ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－（ピリミジン－４－イル）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１７６ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、酸化オスミウム（ＶＩＩＩ）（０．３ｍＬの水中で３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（２９２ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）の混合物を、６５℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１３０ｍｇ、７４％）を得た。Ｃ３３Ｈ２７Ｎ８Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５８３．２；実測値５８３．２。
ステップ９：３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
グリニャール試薬の調製：テトラヒドロフラン（１ｍＬ）中の１，３－ジフルオロ－２－ヨードベンゼン（１４２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化イソプロピルマグネシウム溶液（２９６μｌ、２Ｍ）を－１０℃で加えた。得られた混合物を１時間撹拌し、次のステップで直接使用した。
ＴＨＦ（２ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ホルミル－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、前のステップで新たに調製したグリニャール試薬を－１０℃で加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、塩化アンモニウム溶液（４ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を真空下で濃縮した。得られた物質をＴＦＡ（５ｍＬ）に溶解し、８０℃で２０分間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＮａＨＣＯ３水溶液を添加することにより塩基性化した。
粗製物質をシリカゲルカラムによって直接精製して、所望の生成物（６０ｍｇ、６４％）をラセミ混合物として得た。次いで、キラルカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ ５μｍ セルロース－４、２１．２×２５０ｍｍ）及びヘキサン中の７５％ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／分）溶媒系を使用するキラルＨＰＬＣで生成物を分離した。
ピーク２を単離し、分取ＬＣ／ＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）によってさらに精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２３Ｈ１５Ｆ２Ｎ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４５７．１；実測値４５７．０。
１Ｈ ＮＭＲ （６００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ９．１４ （ｄ， Ｊ ＝ １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．９５ （ｄ， Ｊ ＝ ５．２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９０ （ｄｄ， Ｊ ＝ ５．２， １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．８８ （ｓ， １Ｈ）， ７．７８ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．６， １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．７４ （ｔ， Ｊ ＝ １．４ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５４ （ｄｔ， Ｊ ＝ ７．９， １．３ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５１ － ７．４０ （ｍ， ２Ｈ）， ７．０９ （ｔ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．２７ （ｓ， １Ｈ）。
実施例Ａ１１：３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１１）の合成
Figure 2023509442000086
 ステップ１：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000087
 ＤＣＭ（５ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（実施例Ａ１０、ステップ５；２４１ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）の溶液に、ＮＢＳ（８４．６ｍｇ、０．４８ｍｍｏｌ）を加えた。次いで、反応混合物を室温で１時間撹拌し、濃縮して粗生成物を得、これをさらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ３０Ｈ２６ＢｒＮ６Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５８１．１；実測値５８１．１。
ステップ２：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ホルミル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000088
 ＴＨＦ／水（１：１、６ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ビニル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１７４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）、酸化オスミウム（ＶＩＩＩ）（０．３ｍＬの水中で３ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、及び過ヨウ素酸ナトリウム（２９２ｍｇ、１．３６ｍｍｏｌ）の混合物を６５℃で１時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を濃縮し、シリカゲルカラムで精製して、所望の生成物を得た。Ｃ２９Ｈ２４Ｎ６Ｏ３Ｂｒ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５８３．１；実測値５８３．１。
ステップ３：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000089
 グリニャール試薬の調製：テトラヒドロフラン（１ｍＬ）中の１，３－ジフルオロ－２－ヨードベンゼン（１４２ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化イソプロピルマグネシウム溶液（２９６μｌ、２Ｍ）を－１０℃で加えた。得られた混合物を１時間撹拌し、次のステップで直接使用した。
ＴＨＦ（２ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－ホルミル－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（１２０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）の溶液に、前のステップで新たに調製したグリニャール試薬を－１０℃で加えた。反応混合物を３０分間撹拌し、塩化アンモニウム溶液（４ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機層を真空下で濃縮し、シリカゲルカラムによって精製して、所望の生成物をラセミ混合物として得た。Ｃ３５Ｈ２８Ｎ６Ｏ３ＢｒＦ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝６９７．１；実測値６９７．１。
ステップ４：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000090
 １，４－ジオキサン（２ｍＬ）及び水（２００μｌ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（３８２ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）、４－メチル－５－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）オキサゾール（１３７ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）、ジシクロヘキシル（２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル－２－イル）ホスフィン－（２’－アミノビフェニル－２－イル）（クロロ）パラジウム（１：１）（１７ｍｇ、２１．６μｍｏｌ）及びＣｓ２ＣＯ３（３５６ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）の混合物をＮ２でパージし、９５℃で７時間加熱した。混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィーにより精製して、所望の生成物を無色の油状物として得た。Ｃ３９Ｈ３２Ｎ７Ｏ４Ｆ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：７００．２；実測値７００．２。
ステップ５：３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（クロロ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000091
 ２ｍＬのジクロロメタン中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（２０１ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化チオニル（１０５μｌ、１．４３５ｍｍｏｌ）を室温で加えた。得られた混合物を４時間撹拌し、濃縮し、さらに精製することなく次のステップで使用した。Ｃ３９Ｈ３１Ｎ７Ｏ３ＣｌＦ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝７１８．２；実測値７１８．２。
ステップ６：３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル
１ｍＬのＤＭＳＯ中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－２－（クロロ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（４０ｍｇ、０．０８４ｍｍｏｌ）の溶液に、アンモニア溶液（１ｍＬ）を加えた。混合物をマイクロ波条件で１００℃にて１０時間加熱した後、水で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した。合わせた有機層を水及びブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濃縮した。得られた残留物をＴＦＡ（１ｍＬ）に溶解し、８０℃で２０分間撹拌した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＮａＨＣＯ３水溶液を加えることにより塩基性化した。粗製物質をシリカゲルカラムで直接精製して、所望の生成物をラセミ混合物として得た。次いで、生成物を、キラルカラム（ＡＭ－１）及びヘキサン中の４５％ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／分）溶媒系を使用するキラルＨＰＬＣで分離した。ピーク１を単離し、分取ＬＣ／ＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）によりさらに精製して、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２３Ｈ１７Ｆ２Ｎ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４５９．１；実測値４５９．０。
実施例Ａ１２：３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１２）の合成
Figure 2023509442000092
 ジオキサン（３．０ｍＬ）及び水（０．６０ｍＬ）中の３－（８－（ビス（４－メトキシベンジル）アミノ）－５－ブロモ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル（実施例Ａ１１、ステップ３；０．５１８ｇ、０．６３８ｍｍｏｌ）、２，６－ジメチル－４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）ピリジン（０．３４６ｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、及びジシクロヘキシル（２’，４’，６’－トリイソプロピルビフェニル－２－イル）ホスフィン－（２’－アミノビフェニル－２－イル）（クロロ）パラジウム（１：１）（０．０５８ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）の溶液に、三塩基性リン酸カリウム（０．４７２ｇ、２．２３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。次いで、反応混合物を水及びＤＣＭで希釈した。層を分離し、水層をＤＣＭで抽出し、合わせた有機画分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をＴＦＡ（５ｍＬ）に溶解し、８０℃に２０分間加熱した。次いで、反応混合物を室温に冷却し、濃縮し、ＮａＨＣＯ３水溶液を加えることにより塩基性化した。粗製物質をシリカゲルカラムで直接精製して、所望の生成物（２５７ｍｇ、７２％）をラセミ混合物として得た。
次いで、生成物を、キラルカラム（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｘ ５ｕｍ セルロース－２、２１．１×２５０ｍｍ）及びヘキサン中の３５％ＥｔＯＨ（２０ｍＬ／分）溶媒系を使用するキラルＨＰＬＣで分離した。ピーク２を単離し、分取ＬＣ／ＭＳ（ｐＨ＝２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）を使用してさらに精製し、所望の生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２６Ｈ２０Ｆ２Ｎ７Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４８４．２；実測値４８４．２。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） δ ７．９２ （ｓ， ２Ｈ）， ７．８５ （ｓ， １Ｈ）， ７．８３ （ｄ， Ｊ ＝ ７．６ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５６ （ｄ， Ｊ ＝ ８．０ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．５３ － ７．４０ （ｍ， ４Ｈ）， ７．１０ （ｔ， Ｊ ＝ ８．４ Ｈｚ， ２Ｈ）， ６．２７ （ｓ， １Ｈ）， ２．５１ （ｓ， ６Ｈ）。
実施例Ａ１３：３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１３）の合成
Figure 2023509442000093
 ステップ１．４，６－ジクロロ－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン
Figure 2023509442000094
 水（３ｍＬ）中のＮａＮＯ２（３．８８ｇ、５６．２ｍｍｏｌ）の溶液を、３７％塩酸（５ｍＬ）中の２，６－ジクロロピリジン－３，４－ジアミン（１０ｇ、５６ｍｍｏｌ）の溶液に０℃で加えた。溶液を３０分間撹拌した。水（２０ｍＬ）を加え、白色の沈殿物を濾過し、水で洗浄し、乾燥させて、所望の生成物を得た。Ｃ５Ｈ３Ｃｌ２Ｎ４のＬＣ－ＭＳ計算値：１８９．０（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：１８９．０（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ２．６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン
Figure 2023509442000095
 １，４－ジオキサン（１０ｍＬ）中の４，６－ジクロロ－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン（６００ｍｇ、３．１７ｍｍｏｌ）、（２，４－ジメトキシフェニル）メタンアミン（０．５３ｍＬ、３．４９ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（０．５３ｍＬ、３．８１ｍｍｏｌ）の混合物を、１１０℃で３日間撹拌した。シリカゲルカラムで直接精製して、所望の生成物を得た（８７５ｍｇ、８６％）。Ｃ１４Ｈ１５ＣｌＮ５Ｏ２のＬＣ－ＭＳ計算値：３２０．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３２０．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ３．６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン
Figure 2023509442000096
 ＤＣＭ（２０ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（８７５ｍｇ、２．７４ｍｍｏｌ）、ピリジン－２－イルメタノール（０．３１７ｍＬ、３．２８ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（１４３６ｍｇ、５．４７ｍｍｏｌ）の混合物に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（０．６４７ｍＬ、３．２８ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。得られた混合物を０℃で１時間撹拌した。シリカゲルカラムで直接精製して、所望の生成物を得た（３７５ｍｇ、収率３３．４％）。Ｃ２０Ｈ２０ＣｌＮ６Ｏ２のＬＣ－ＭＳ計算値：４１１．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４１１．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ４．３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000097
 １，４－ジオキサン（１０ｍＬ）及び水（１．００ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（３７５ｍｇ、０．９１３ｍｍｏｌ）及び（３－シアノフェニル）ボロン酸（２６８ｍｇ、１．８２５ｍｍｏｌ）の混合物に、炭酸セシウム（５９５ｍｇ、１．８２５ｍｍｏｌ）を加えた。得られた混合物をＮ２でパージし、次いでクロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（７１．８ｍｇ、０．０９１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で９０分間撹拌した。反応物を２０ｍＬの酢酸エチル及び２０ｍＬの水でクエンチした。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（３００ｍｇ、６８．９％）を得た。Ｃ２７Ｈ２４Ｎ７Ｏ２のＬＣ－ＭＳ計算値：４７８．２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４７８．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ５．３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000098
 ＴＦＡ（５ｍＬ）中の３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（３００．３ｍｇ、０．６２９ｍｍｏｌ）の溶液を１００℃で３０分間撹拌した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させ、次いで２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び２０ｍＬの酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１７５ｍｇ、８５％）を得た。Ｃ１８Ｈ１４Ｎ７のＬＣ－ＭＳ計算値：３２８．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３２８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ６．３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000099
 ＴＨＦ（１０ｍＬ）中の３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（１７５ｍｇ、０．５３５ｍｍｏｌ）及び１－ブロモピロリジン－２，５－ジオン（１００ｍｇ、０．５６１ｍｍｏｌ）の混合物を、０℃で３０分間撹拌し、次いで飽和ＮａＨＣＯ３水溶液でクエンチした。有機相を分離し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。得られた残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（１３５ｍｇ、６２．２％）を得た。Ｃ１８Ｈ１３ＢｒＮ７のＬＣ－ＭＳ計算値：４０６．０（Ｍ＋Ｈ）＋及び４０８．０（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４０６．１（Ｍ＋Ｈ）＋及び４０８．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ７．３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000100
 ＴＨＦ（１ｍｌ）中の３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（１８２ｍｇ、０．４４８ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタニル）ピリミジン（４９６ｍｇ、１．３４４ｍｍｏｌ）、及び塩化銅（Ｉ）（５３．２ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２２．７９ｍｇ、０．５３８ｍｍｏｌ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５１．８ｍｇ、０．０４５ｍｍｏｌ）の混合物を、最初にＮ２でパージし、次いで９０℃で２時間加熱撹拌した。反応物をメタノールで希釈し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２）で精製して、所望の生成物を得た。Ｃ２２Ｈ１６Ｎ９のＬＣ－ＭＳ計算値：４０６．２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４０６．２（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ａ１４：３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１４）の合成
Figure 2023509442000101
 ステップ１．６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン
Figure 2023509442000102
 ＤＣＭ（１．７ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－３Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（実施例Ａ１３、ステップ２；１０００ｍｇ、３．１３ｍｍｏｌ）、（３－フルオロピリジン－２－イル）メタノール（４７７ｍｇ、３．７５ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（１６４１ｍｇ、６．２５ｍｍｏｌ）の混合物に、アゾジカルボン酸ジイソプロピル（７３９μｌ、３．７５ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で１時間撹拌した。シリカゲルカラムで直接精製して、所望の生成物を得た（４３３ｍｇ、３２％）。Ｃ２０Ｈ１９ＣｌＦＮ６Ｏ２のＬＣ－ＭＳ計算値：４２９．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２９．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ２．３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000103
 炭酸セシウム（６５８ｍｇ、２．０１９ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（１０．０ｍＬ）及び水（１．０ｍＬ）中の６－クロロ－Ｎ－（２，４－ジメトキシベンジル）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－４－アミン（４３３ｍｇ、１．０１０ｍｍｏｌ）及び（３－シアノフェニル）ボロン酸（２９７ｍｇ、２．０１９ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物にＮ２を２分間注入し、（ＳＰ－４－４）－［２’－アミノ［１，１’－ビフェニル］－２－イル］クロロ［ジシクロヘキシル［２’，４’，６’－トリス（１－メチルエチル）［１，１’－ビフェニル］－２－イル］ホスフィン］パラジウム（７９ｍｇ、０．１０１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で１．５時間撹拌した。反応物を２０ｍＬの酢酸エチル及び２０ｍＬの水でクエンチした。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（３５７ｍｇ、７１％）を得た。Ｃ２７Ｈ２３ＦＮ７Ｏ２のＬＣ－ＭＳ計算値：４９６．２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４９６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ３．３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000104
 ＴＦＡ（５ｍＬ）中の３－（４－（（２，４－ジメトキシベンジル）アミノ）－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（３５７．３ｍｇ、０．７２１ｍｍｏｌ）の溶液を、１００℃で１時間撹拌した。ＴＦＡを減圧下で蒸発させ、次いで２０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３水溶液及び２０ｍＬの酢酸エチルを加えた。有機相を分離し、水溶液を酢酸エチルで２回抽出した。合わせた抽出物をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルカラムで精製して、所望の生成物（２１３ｍｇ、６１％）を得た。Ｃ１８Ｈ１３ＦＮ７のＬＣ－ＭＳ ｍ／ｚ計算値：３４６．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：３４６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ４．３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000105
 ＴＨＦ（５ｍＬ）中の３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（２１３ｍｇ、０．６１７ｍｍｏｌ）及び１－ブロモピロリジン－２，５－ジオン（２２０ｍｇ、１．２３４ｍｍｏｌ）の混合物を０℃で１時間撹拌した。シリカゲルで直接精製して、所望の生成物を得た（１７５ｍｇ、６７％）。Ｃ１８Ｈ１２ＢｒＦＮ７のＬＣ－ＭＳ計算値：４２４．０（Ｍ＋Ｈ）＋及び４２６．０（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２４．３（Ｍ＋Ｈ）＋及び４２６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ５．３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル
Figure 2023509442000106
 ＴＨＦ（１ｍｌ）中の３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（２２０ｍｇ、０．５１９ｍｍｏｌ）、４－（トリブチルスタンニル）ピリミジン（３８３ｍｇ、１．０３７ｍｍｏｌ）、及び塩化銅（Ｉ）（６１．６ｍｇ、０．６２２ｍｍｏｌ）、塩化リチウム（２６．４ｍｇ、０．６２２ｍｍｏｌ）、及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５９．９ｍｇ、０．０５２ｍｍｏｌ）の混合物を、最初にＮ２でパージし、次いで９０℃で２時間加熱撹拌した。反応物をメタノールで希釈し、分取ＬＣＭＳ（ｐＨ＝２）で精製して、所望の生成物を得た。Ｃ２２Ｈ１５ＦＮ９のＬＣ－ＭＳ計算値：４２４．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２４．３（Ｍ＋Ｈ）＋。１Ｈ ＮＭＲ （５００ ＭＨｚ， ＤＭＳＯ－ｄ６） ｐｐｍ ８．９８ （ｓ， １Ｈ）， ８．７７ （ｄ， Ｊ ＝ ５．０２ Ｈｚ， １Ｈ）， ８．３８ （ｄｄ， Ｊ１ ＝ ４．６０ Ｈｚ， Ｊ２ ＝ １．３２ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．９０－８．３０ （ｂｓ， ２Ｈ）， ７．７６－７．８９ （ｍ， ３Ｈ）， ７．６６ （ｄｄ， Ｊ１ ＝ ５．２５ Ｈｚ， Ｊ２ ＝ １．２５ Ｈｚ， １Ｈ）， ７．４５－７．５８ （ｍ， ３Ｈ）， ６．２５ （ｓ， ２Ｈ）。
実施例Ａ１５：３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（化合物１５）の合成
Figure 2023509442000107
 炭酸セシウム（４６．１ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）を、１，４－ジオキサン（２ｍＬ）及び水（０．２ｍＬ）中の３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル（３０ｍｇ、０．０７１ｍｍｏｌ）及びピリジン－４－イルボロン酸（１７．３８ｍｇ、０．１４１ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。得られた混合物にＮ２を２分間注入し、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル））］パラジウム（ＩＩ）（５．５６ｍｇ、７．０７μｍｏｌ）を加えた。反応混合物をマイクロ波照射下、１２０℃で１．５時間撹拌した。反応混合物をメタノールで希釈した。分取ＨＰＬＣにより直接精製して、所望の生成物を得た。Ｃ２３Ｈ１６ＦＮ８のＬＣ－ＭＳ計算値：４２３．１（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２３．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ａ１６：３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル（化合物１６）の合成
Figure 2023509442000108
 ステップ１．３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
Figure 2023509442000109
 この化合物は、実施例Ａ１３のステップ１～ステップ６と同様の手順に従って、ステップ４の（３－シアノフェニル）ボロン酸を（３－シアノ－２－フルオロフェニル）ボロン酸に置き換えて調製した。Ｃ１８Ｈ１２ＢｒＦＮ７のＬＣ－ＭＳ計算値：４２４．０（Ｍ＋Ｈ）＋及び４２６．０（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２４．３（Ｍ＋Ｈ）＋及び４２６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
ステップ２．３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル
Figure 2023509442000110
 この化合物は、実施例Ａ１５と同様の手順に従って、ピリジン－４－イルボロン酸を（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）ボロン酸に置き換え、３－（４－アミノ－７－ブロモ－２）－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリルを３－（４－アミノ－７－ブロモ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリルに置き換えて調製した。Ｃ２２Ｈ１７ＦＮ９のＬＣ－ＭＳ計算値：４２６．２（Ｍ＋Ｈ）＋；実測値：４２６．３（Ｍ＋Ｈ）＋。
実施例Ａ１７：７－（１－（（５－クロロピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物１７）の合成
Figure 2023509442000111
 ステップ１：３－（ペンチルアミノ）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル
Figure 2023509442000112
 ３－アミノ－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル（５ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）、ペンタナール（３．７９ｍｌ、３５．７ｍｍｏｌ）、及びシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２．０３８ｇ、３２．４ｍｍｏｌ）を、メタノール（６４．９ｍｌ）中で室温にて一晩混合した。反応混合物を減圧下で濃縮した。粗製残留物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン中の０～１００％のＥｔＯＡｃ）によって精製して、所望の生成物（４．４ｇ、６１％）を得た。Ｃ１２Ｈ２１Ｎ２Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：２２５．２。実測値：２２５．１。
ステップ２：３－（３－（エトキシカルボニル）－１－ペンチルチオウレイド）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル
Figure 2023509442000113
 バイアルに、３－（ペンチルアミノ）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル（４．４ｇ、１９．６２ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（３９．２ｍｌ）、及びエトキシカルボニルイソチオシアネート（２．７８ｍｌ、２３．５４ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で一晩撹拌した。反応混合物を水（４０ｍｌ）でクエンチし、層を分離した。水層をジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機画分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をさらに精製せずに次の工程で使用した（７．３ｇ、定量的）。Ｃ１６Ｈ２６Ｎ３Ｏ４Ｓ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：３５６．２。実測値：３５６．１。
ステップ３：１－ペンチル－２－チオキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン
Figure 2023509442000114
 マイクロ波バイアルに、３－（３－（エトキシカルボニル）－１－ペンチルチオウレイド）－１Ｈ－ピロール－２－カルボン酸エチル（７．３１ｇ、２０．５７ｍｍｏｌ）及びナトリウムエトキシド（２１％ ｗ／ｗ、８．４５ｍｌ、２２．６２ｍｍｏｌ）溶液を入れた。バイアルに蓋をして、マイクロ波反応器内で１２０℃にて１０分間加熱した。１Ｍ ＨＣｌ溶液を添加して反応混合物を中性ｐＨにし、固体生成物を濾過し、乾燥させた（３．１ｇ、６４％）。Ｃ１１Ｈ１６Ｎ３ＯＳ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：２３８．１。実測値：２３８．１。
ステップ４：２－ヒドラゾノ－１－ペンチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン
Figure 2023509442000115
 バイアルに、１－ペンチル－２－チオキソ－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン（３．１３ｇ、１３．１９ｍｍｏｌ）及びヒドラジン水和物（２０ｍＬ）を入れた。反応混合物を１００℃で一晩撹拌した。形成された固体を濾過し、水で洗浄して、所望の生成物（２．２ｇ、７０％）を得た。Ｃ１１Ｈ１８Ｎ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：２３６．１。実測値：２３６．１。
ステップ５：３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
Figure 2023509442000116
 バイアルに、（Ｅ）－２－ヒドラゾノ－１－ペンチル－２，３－ジヒドロ－１Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］ピリミジン－４（５Ｈ）－オン（４．８ｇ、２０．４０ｍｍｏｌ）、一滴のトリフルオロ酢酸、及びオルト酢酸トリエチル（２０ｍＬ）を入れた。反応混合物を１１０℃で３時間加熱した。懸濁液を濾過し、ヘキサンで洗浄し、乾燥させた（４．０ｇ、７６％）。Ｃ１３Ｈ１８Ｎ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：２６０．１。実測値：２６０．２。
ステップ６：３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
Figure 2023509442000117
 バイアルに、３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（ステップ１より）（４ｇ、１５．４３ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（４０ｍＬ）、ジメチルアミノピリジン（０．１８８ｇ、１．５４３ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（３．２３ｍｌ、２３．１４ｍｍｏｌ）、及び塩化ベンゼンスルホニル（２．１８７ｍｌ、１６．９７ｍｍｏｌ）を入れた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を水でクエンチし、層を分離した。水層をジクロロメタン（３×４０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機画分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製物質をさらに精製することなく次のステップで使用した（６．１ｇ、定量的）。Ｃ１９Ｈ２２Ｎ５Ｏ３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：４００．１。実測値：４００．１。
ステップ７：７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
Figure 2023509442000118
 バイアルに、３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（１ｇ、２．５０３ｍｍｏｌ）、乾燥ＴＨＦ（３０ｍＬ）を入れ、混合物を－７８℃に冷却した。リチウムジイソプロピルアミド溶液（ヘキサン／ＴＨＦ中で１Ｍ、３．１３ｍｌ、３．１３ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を－７８℃で１．５時間維持した。乾燥ＴＨＦ（３ｍｌ）中の１，２－ジブロモ－１，１，２，２－テトラクロロエタン（１．２２３ｇ、３．７５ｍｍｏｌ）の溶液を、反応混合物に滴下し、反応混合物をさらに１．５時間、－７８℃に維持した。反応混合物を飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（３０ｍＬ）でクエンチし、ジクロロメタン（３０ｍＬ）で希釈した。層を分離し、水層をＤＣＭ（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機画分をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。粗製残留物を自動フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０～１００％のＥｔＯＡｃ）によって精製して、所望の生成物（０．８４ｇ、７０％）を得た。Ｃ１９Ｈ２１ＢｒＮ５Ｏ３Ｓ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：４７８．１。実測値：４７８．１。
ステップ８：３－クロロ－５－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）ピリジン
Figure 2023509442000119
 バイアルに、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（０．５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、３－（ブロモメチル）－５－クロロピリジン臭化水素酸塩（０．７４１ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、炭酸セシウム（２．５２ｇ、７．７３ｍｍｏｌ）、及びＤＭＦ（６．４４ｍｌ）を入れた。反応混合物を６０℃で１時間撹拌した。反応混合物を水（１０ｍｌ）でクエンチし、ジクロロメタン（１０ｍｌ）で希釈した。層を分離し、水層をジクロロメタン（３×１０ｍＬ）で抽出した。合わせたジクロロメタン抽出物をＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、濃縮した。自動フラッシュクロマトグラフィー（ＤＣＭ中の０～１００％ＥｔＯＡｃ）による精製により、生成物（０．５４８ｇ、６７％）を得た。Ｃ１５Ｈ２０ＢＣｌＮ３Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：３２０．１、３２２．１。実測値：３２０．１、３２２．１
ステップ９：７－（１－（（５－クロロピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
バイアルに、７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（０．０１ｇ、０．０２１ｍｍｏｌ）、３－クロロ－５－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）ピリジン（０．０１３ｇ、０．０４２ｍｍｏｌ）、クロロ（２－ジシクロヘキシルホスフィノ－２’，４’，６’－トリイソプロピル－１，１’－ビフェニル）［２－（２’－アミノ－１，１’－ビフェニル）］パラジウム（ＩＩ）（５．００ｍｇ、０．００６ｍｍｏｌ）及び三塩基性リン酸カリウム（０．０１６ｇ、０．０７４ｍｍｏｌ）を入れた。１，４－ジオキサン（０．３５ｍｌ）及び水（０．０７ｍｌ）を加え、反応混合物に窒素ガスを５分間注入し、９０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、水酸化ナトリウム（１０ｍｇ）を添加した。反応混合物を４０℃で６０分間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ＤＭＦ（５ｍｌ）で希釈した。分取ＨＰＬＣ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）による精製により、生成物をＴＦＡ塩として得た（２ｍｇ、２１％）。Ｃ２２Ｈ２４ＣｌＮ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：４５１．２、４５３．２。実測値：４５１．２、４５３．２。
実施例Ａ１８：３－メチル－７－（１－（（５－メチルピリジン－３－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物１８）の合成
Figure 2023509442000120
 この化合物は、ステップ８の３－（ブロモメチル）－５－クロロピリジン臭化水素酸塩の代わりに３－（ブロモメチル）－５－メチルピリジンを使用して、実施例Ａ１７に記載の手順と同様の手順を使用して調製した。Ｃ２３Ｈ２７Ｎ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：４３１．２。実測値：４３１．３。
実施例Ａ１９：３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（チエノ［３，２－ｂ］ピリジン－６－イルメチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物１９）の合成
Figure 2023509442000121
 この化合物は、ステップ８の３－（ブロモメチル）－５－クロロピリジン臭化水素酸塩の代わりに６－（ブロモメチル）チエノ［３，２－ｂ］ピリジンを使用して、実施例Ａ１７に記載の手順と同様の手順を使用して調製した。Ｃ２４Ｈ２５Ｎ８ＯＳ（Ｍ＋Ｈ）のＬＣＭＳ計算値：４７３．２。実測値：４７３．３。
実施例Ａ２０：７－（１－（（２－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（化合物２０）
Figure 2023509442000122
 ステップ１：６－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
Figure 2023509442000123
 フラスコに、４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール（．５ｇ、２．５８ｍｍｏｌ）、６－（ヒドロキシメチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．３３９ｇ、１．２８８ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン（０．７４３ｇ、２．８３ｍｍｏｌ）、及びＴＨＦ（１２ｍｌ）を入れた。溶液を０℃に冷却し、ＤＩＡＤ（０．６０１ｍｌ、３．０９ｍｍｏｌ）を滴下した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。生成物を、ヘキサン／ＥｔＯＡｃ（最大ＥｔＯＡｃ６０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーによって精製して、生成物を得た。Ｃ２４Ｈ３５ＢＮ３Ｏ４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４４０．３；実測値４４０．３。
ステップ２：７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
Figure 2023509442000124
 ＴＢＡＦ（ＴＨＦ中で１．０Ｍ）（２．０ｍｌ、２．０ｍｍｏｌ）を、ＴＨＦ（４．０ｍｌ）中の７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６－（フェニルスルホニル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（０．３６０ｇ、０．７５３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、次いで反応物を５０℃で１時間撹拌した。溶媒を除去し、生成物をＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（最大ＭｅＯＨ１０％）で溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。Ｃ１３Ｈ１７ＢｒＮ５Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝３３８．１；実測値３３８．１。
ステップ３：６－（（４－（３－メチル－５－オキソ－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル
Figure 2023509442000125
 ｔ－ＢｕＯＨ（１．５ｍｌ）／水（０．６ｍｌ）中の７－ブロモ－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（実施例Ａ２０、ステップ２より）（０．０４０ｇ、０．１１８ｍｍｏｌ）、６－（（４－（４，４，５，５－テトラメチル－１，３，２－ジオキサボロラン－２－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（０．０６２ｇ、０．１４２ｍｍｏｌ）、ジクロロ［１，１’－ビス（ジシクロヘキシルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）、ジクロロメタン付加物（Ｐｄ－１２７）（８．９４ｍｇ、０．０１２ｍｍｏｌ）及びフッ化セシウム（０．０９０ｇ、０．５９１ｍｍｏｌ）の混合物を、真空にし、Ｎ２で３回置換した。次いで、反応物を１０５℃で２時間撹拌し、室温に冷却し、酢酸エチルで希釈し、水で洗浄し、乾燥させ、濃縮した。生成物を、ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（最大ＭｅＯＨ１０％）で溶出するカラムによって精製した。Ｃ３１Ｈ３９Ｎ８Ｏ３（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５７１．３；実測値５７１．５。
ステップ４：３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（（１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
Figure 2023509442000126
 ＴＦＡ（０．５ｍｌ、６．４９ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（０．５ｍｌ）中の６－（（４－（３－メチル－５－オキソ－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－７－イル）－１Ｈ－ピラゾール－１－イル）メチル）－３，４－ジヒドロイソキノリン－２（１Ｈ）－カルボン酸ｔｅｒｔ－ブチル（５０．０ｍｇ、０．０８８ｍｍｏｌ）の溶液に加え、次いで反応物を室温で３０分間撹拌した。次いで、溶媒を除去して粗生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２６Ｈ３１Ｎ８Ｏ（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝４７１．３；実測値４７１．２。
ステップ５：７－（１－（（２－（２－（ジメチルアミノ）アセチル）－１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－３－メチル－９－ペンチル－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン
塩化ジメチルグリシノイル（３．１０ｍｇ、０．０２６ｍｍｏｌ）を、ＣＨ２Ｃｌ２（０．８ｍｌ）中の３－メチル－９－ペンチル－７－（１－（（１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－６－イル）メチル）－１Ｈ－ピラゾール－４－イル）－６，９－ジヒドロ－５Ｈ－ピロロ［３，２－ｄ］［１，２，４］トリアゾロ［４，３－ａ］ピリミジン－５－オン（６．０ｍｇ、０．０１３ｍｍｏｌ）及びトリエチルアミン（８．８９μｌ、０．０６４ｍｍｏｌ）の溶液に室温で加え、３０分間撹拌した。溶媒を除去し、混合物をアセトニトリル／水で希釈し、分取ＨＰＬＣ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）により精製して、所望の化合物をそのＴＦＡ塩として得た。Ｃ３０Ｈ３８Ｎ９Ｏ２（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣ－ＭＳ計算値：ｍ／ｚ＝５５６．３；実測値５５６．３。
実施例Ａ２１．３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物２１Ａ）及び３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル（化合物２１Ｂ）
Figure 2023509442000127
 実施例Ａ３に記載の手順と同様の手順を用いて、２－（１Ｈ－テトラゾール－５－イル）ピリジンを５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾールに置き換えて、表題化合物の混合物を調製した。化合物２１Ａを分取ＬＣ－ＭＳ（ｐＨ２、ＴＦＡを含むアセトニトリル／水）によって精製して、生成物をＴＦＡ塩として得た。Ｃ２１Ｈ１５Ｎ１４（Ｍ＋Ｈ）＋のＬＣＭＳ計算値：４６３．２；実測値４６３．２。
実施例１：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体の生成
抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を生成するために、マウスをＣ末端ＨＩＳタグを含む組換えヒトＣＤ７３（配列番号７０）タンパク質で免疫し、Ｂ細胞をマウスの脾臓及びリンパ節から単離した。Ｂ細胞の抗体配列を、１０×Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ＶＨ／ＶＬペアＢ細胞配列決定法を使用して決定した。マウスＶＨ／ＶＬペアを、ｈｕＩｇＧ１ Ｆｃ（配列番号７３及び７４）とのキメラとして発現させ、結合及び機能性について試験した。このプロセスによってＣＬ２５と称される抗体を産生した。上記の表１は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＣＬ２５ ＣＤＲ、ならびに成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。
キメラ抗体ＣＬ２５（配列番号２６のマウスＶＨ及び配列番号２７のマウスＶＬを含む）をヒト化して、特異的活性を維持しながら抗体フレームワークの免疫原性を最小化した。ＶＨ及びＶＬ配列をヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子のデータベースにアラインメントすることによって、ヒト化を実施した。マウスＣＬ２５抗体のＣＤＲ（表１）を、いくつかの上位ヒトＶＨ及びＶＫ遺伝子に移植した。例示的なヒト化ＣＬ２５抗体のＶＨ及びＶＬ配列を図１Ａ～図１Ｃに示す。ＣＬ２５及び例示的なヒト化ＣＬ２５抗体のＶＨ及びＶＬのアラインメントをそれぞれ図１Ｄ及び図１Ｅに示す。マウスＣＬ２５に存在するいくつかのフレームワーク変異も、マウスＣＤＲとともに試験した（図１Ａ～図１Ｅ）。配列番号２２のＶＨ及び配列番号２３のＶＬを有するＣＬ２５のヒト化バージョン（本明細書中では「ＨｚＣＬ２５」と称される）を、さらなる研究のために選択した。上記の表２は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによるＨｚＣＬ２５ ＣＤＲ、ならびに成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。
実施例２：細胞表面ＣＤ７３への抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体の結合
ヒト化及び非ヒト化ＣＬ２５クローンの細胞表面ＣＤ７３への結合を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１またはＡ３７５細胞を洗浄し、５×１０４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに添加した。細胞を、示された濃度の抗体で氷上で３０分間染色した（図２Ａ及び図２Ｂ）。次に、細胞を洗浄し、フィコエリトリン（ＰＥ）にコンジュゲートしたヤギ抗マウス二次抗体を使用して氷上で３０分間染色した。次いで細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ７３染色の幾何平均蛍光強度（ＧＭＦＩ）をグラフ化した（図２Ａ及び図２Ｂ）。ＣＬ２５とＨｚＣＬ２５はどちらも、高レベルの表面ＣＤ７３（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞）と中レベルの表面ＣＤ７３（Ａ３７５細胞で試験）を有する細胞に高い効力の結合を示した。
実施例３：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を介した細胞ＣＤ７３阻害
細胞上のＣＤ７３活性を阻害する抗ＣＤ７３抗体の能力を測定するために、Ａ３７５細胞及びＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を無血清ＲＰＭＩ培地（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）で洗浄し、９６ウェルプレートに、Ａ３７５については８×１０４細胞／ウェル、またはＭＤＡ－ＭＢ－２３１については１×１０４細胞／ウェルの濃度で播種した。細胞を、示された濃度の抗体またはＡＰＣＰと共に３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートした（図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃ）。次に、アデノシン一リン酸（ＡＭＰ）を最終濃度が１００μＭになるように添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２にてさらに３時間インキュベートした。プレートを３００ｇで１～２分間遠心分離し、２５μＬの上清を新しい９６ウェルプレートに移した。製造元の指示（Ｐｒｏｍｅｇａ）に従ってＡＭＰ－Ｇｌｏアッセイを使用した。相対発光単位（ＲＬＵ）は、このアッセイのＡＭＰ濃度と直接相関している。結果を図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃに示す。
ＣＬ２５とＨｚＣＬ２５はどちらも、試験した両方の細胞型において細胞ＣＤ７３を阻害するのに良好な効力を有していた（図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃ）。ＨｚＣＬ２５は、ＣＬ２５と同様の細胞ＣＤ７３阻害能力を有していた（図３Ａ、図３Ｂ、及び図３Ｃ）。
実施例４：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を介した可溶性ＣＤ７３阻害
組換えタンパク質のＣＤ７３活性を阻害するＣＤ７３抗体の能力を測定するために、組換えヒトＣＤ７３（ｒｈｕＣＤ７３）（配列番号７０）を最終濃度０．００８μｇ／ｍＬで、示された濃度の抗体（図４）またはアデノシン５’－［α，β－メチレン］二リン酸（ＡＰＣＰ）と共に９６ウェルプレートに添加し、３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートした。３０分間のインキュベーション後、ＡＭＰを最終濃度１００μＭになるように添加し、反応物を３７℃、５％ＣＯ２にてさらに３時間インキュベートした。２５μＬの上清を新しい９６ウェルプレートに移した。製造元の指示に従ってＡＭＰ－Ｇｌｏアッセイを使用した。ＲＬＵは、このアッセイのＡＭＰ濃度と直接相関している。結果を図４に示す。ＣＬ２５とＨｚＣＬ２５はどちらも高い効力を示し、フック効果はなかった（図４）。ＨｚＣＬ２５は、ＣＬ２５と同様の細胞ＣＤ７３阻害能力を有していた（図４）。
実施例５：結合親和性
ＣＤ７３酵素活性には、開構造での基質結合が必要である。基質結合後、ＣＤ７３は、ＡＭＰをアデノシンに変換するために、開構造から閉構造への大きな構造変化を経る必要がある。この構造変化を阻害または調節する抗体結合は、ＡＭＰからアデノシンへの変換率を低下させる可能性がある。
ＨｚＣＬ２５の結合親和性を評価するために、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）をＢｉａｃｏｒｅ ８Ｋ機器（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して２５℃で実行した。ＳＰＲランニング緩衝液（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、３ｍＭ ＥＤＴＡ及び０．０５％ｖ／ｖ界面活性剤Ｐ２０、ｐＨ７．４）を、１０×ＨＢＳ－ＥＰ緩衝液（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）から調製した。抗ヒトＦｃ抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を、ＳシリーズセンサーチップＣＭ５（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）の１６個のフローセルすべてにアミンカップリングを介して固定化した。固定化レベルは、すべてのフローセルで約９０００ＲＵであった。抗ＣＤ７３抗体の望ましい捕捉レベルは、各チャネルのアクティブフローセルに適切な濃度の抗ＣＤ７３抗体を流すことによって達成した。Ｚｎ２＋が存在する切断不可能なＡＤＰ類似体ＡＰＣＰ（アデノシン－５’－（α，β－メチレン）二リン酸）を使用して、ＣＤ７３の構造平衡を開状態から閉状態にシフトさせることができる。したがって、組換えＣＤ７３を、１００μＭ ＡＰＣＰ及び１０μＭ ＺｎＣｌ２（閉鎖ＳＰＲランニング緩衝液）の存在下でＳＰＲランニング緩衝液と共にインキュベートし、閉構造でのＣＤ７３への抗ＣＤ７３抗体の結合を調べた。これを実現するために、Ｂｉａｃｏｒｅ ８ＫのＡＢＡインジェクション機能を使用した。開構造の場合、ＡＢＡ注入シーケンスは、ランニング緩衝液の６０秒注入から開始した。次いで、ＣＤ７３ストック（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）とランニング緩衝液から調製したＣＤ７３の３倍段階希釈濃度シリーズを１８０秒間注入した直後に、ランニング緩衝液を２４０秒間注入した。閉構造の場合、通常のＳＰＲランニング緩衝液を閉鎖ＳＰＲランニング緩衝液に置き換えた。３Ｍ ＭｇＣｌ２を３０秒間注入すると、表面が再生された。結合速度及び親和性パラメーターは、１対１の結合モデルへのデータのグローバルフィットから得られた。開構造または閉構造のいずれかでのヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３への結合親和性ならびに速度論的結合及び解離速度定数を以下の表８に示す。表８の結果から、カニクイザルの薬物動態データがヒトの薬物動態データを反映することが保証される。
Figure 2023509442000128
実施例６：エピトープマッピング
ＣＬ２５のエピトープをマッピングするために、水素－重水素交換質量分析（ＨＤＸ）を実施した。ＣＤ７３を、単独またはＣＬ２５ Ｆａｂとの複合体のいずれかで重水素酸化物中でインキュベートした。重水素交換を、２０℃で０秒、６０秒、６００秒、または３６００秒実行した。交換反応物を低ｐＨでクエンチし、タンパク質をペプシン／プロテアーゼＶＩＩＩで消化した。同定されたペプチドの重水素レベルを、ＬＣ－ＭＳの質量シフトからモニタリングした。すべてのペプチドの交換時間にわたる重水素蓄積曲線を時間に対してプロットした。Ｆａｂに結合すると重水素の取り込みが有意に減少するペプチドを、各抗体のエピトープとして割り当てた。ＣＬ２５についてＨＤＸ－ＭＳによって決定したエピトープを、ヒトＣＤ７３（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）の結晶構造にマッピングし（図５）、ＴＫＶＱＱＩＲＲＡＥＰＮＶＬ（配列番号７６）（すなわち、配列番号７０のアミノ酸４０～５３）である。
実施例７：ＣＤ７３細胞表面レベル
抗体処理後の細胞表面上のＣＤ７３の量を測定するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を培地（１０％ＦＢＳ ＲＰＭＩ－１６４０）に再懸濁し、９６ウェルプレートに１×１０５細胞／ウェルで播種した。示された抗体を最終濃度１０μｇ／ｍＬで添加し、プレートを３７℃、５％ＣＯ２にて２４時間インキュベートした。Ｖｅｒｓｅｎｅを使用して細胞を回収し、新しい９６ウェルプレートに移した。細胞を洗浄し、Ｄｙ６５０に直接コンジュゲートした１０μｇ／ｍＬの非競合抗体で氷上にて３０分間染色した。細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ７３細胞表面受容体密度を、Ｑｕａｎｔｕｍ Ｓｉｍｐｌｙ Ｃｅｌｌｕｌａｒビーズを使用した抗体結合能（ＡＢＣ）によって決定した。細胞をＣＬ２５で２４時間処理すると、細胞表面ＣＤ７３のレベルが低下した（図６）。
実施例８：抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体３－Ｆ０３の生成
さらなる抗ヒトＣＤ７３モノクローナル抗体を生成するために、単一のドナーライブラリーの複数の選択ラウンドを実行した。およそ１．５Ｅ１２ファージ粒子のライブラリーを、２００ｎＭのビオチン化ヒトＣＤ７３（配列番号７０）を使用して、３ラウンドのパニングで濃縮した。次いで、このプールに由来するｓｃＦｖカセットを酵母ディスプレイベクターに再結合し、およそ５．４Ｅ７のライブラリーを作成した。このライブラリーを、１００ｎＭのビオチン化マウスＣＤ７３（配列番号７１）を使用して、３ラウンドにわたってＦＡＣＳによって選択した。酵母コロニーのサンガーシーケンシングによる最終的なソーティング出力から、固有の配列を取得した。酵母３－Ｆ０３ ｓｃＦｖ配列はこのプールから同定され、配列番号７７に記載のアミノ酸配列のＶＨ及び配列番号６５に記載のアミノ酸配列のＶＬを含んでいた。
全長のヒト３－Ｆ０３抗体を構築するために、配列番号７５に記載のヒトＩｇＧ１定常領域及び配列番号７４に記載のヒトκ軽鎖定常領域を含むヒトＩｇＧ１骨格にクローニングする前に、酵母３－Ｆ０３ ｓｃＦｖ配列を改変した。ＶＨについては、配列番号７７のＮ末端グルタミン酸（Ｅ）を除去し、配列番号７７のＫａｂａｔ位置Ｈ７７（すなわち、配列番号７７の位置７８）のスレオニン（Ｔ）をアラニン（Ａ）に置換した。ＶＬについては、配列番号６５のＮ末端アラニン（Ａ）を除去した。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、それぞれ配列番号６０及び６１のアミノ酸配列に記載のＶＨ及びＶＬを含む。得られた全長ヒト３－Ｆ０３抗体は、それぞれ配列番号６６及び３１のアミノ酸配列に記載の重鎖及び軽鎖を含む。この抗体は、本明細書中では「３－Ｆ０３」と称される。上記の表３は、ＩＭＧＴ、Ｃｈｏｔｈｉａ、ＡｂＭ、Ｋａｂａｔ、及びＣｏｎｔａｃｔナンバリングによる３－Ｆ０３ ＣＤＲ、ならびに成熟ＶＨ、ＶＬ、重鎖、及び軽鎖のアミノ酸配列を示す。
実施例９：細胞表面ＣＤ７３への３－Ｆ０３の結合
細胞表面ＣＤ７３への３－Ｆ０３の結合を、上記の実施例２に記載されているように実施した。３－Ｆ０３は、高レベルの表面ＣＤ７３（ＭＤＡ－ＭＢ－２３１）及び中レベルのＣＤ７３（Ａ３７５細胞）を有する細胞への高い効力の結合を示す（図７Ａ及び図７Ｂ）。
実施例１０：３－Ｆ０３を介した細胞ＣＤ７３阻害
細胞上のＣＤ７３活性を阻害する３－Ｆ０３の能力を、上記の実施例３に記載されているように評価した。結果を図８Ａ及び図８Ｂに示す。
クローン３－Ｆ０３は、ＣＤ７３の小分子阻害剤であるＡＰＣＰと比較して、試験した両方の細胞型で細胞ＣＤ７３の最大阻害を示した（図８Ａ及び図８Ｂ）。
実施例１１：３－Ｆ０３を介した可溶性ＣＤ７３阻害
組換えタンパク質のＣＤ７３活性を阻害する３－Ｆ０３の能力を、０．０２５ｕｇ／ｍＬのｒｈｕＣＤ７３を使用したこと以外は、上記の実施例４に記載したように評価した。結果を図９に示す。抗体３－Ｆ０３は良好な効力を示した（図９）。抗体３－Ｆ０３はフック効果を示さなかった。
実施例１２：抗ＣＤ７３抗体の結合親和性
３－Ｆ０３の結合親和性を、上記の実施例５に記載されているように評価した。開構造または閉構造でのヒト、カニクイザル、及びマウスＣＤ７３への結合親和性ならびに速度論的結合及び解離速度定数を以下の表９に示す。
Figure 2023509442000129
実施例１３：３－Ｆ０３のエピトープマッピング
３－Ｆ０３のエピトープを、上記の実施例６に記載されているようにマッピングした。３－Ｆ０３についてＨＤＸ－ＭＳによって決定したエピトープを、ヒトＣＤ７３の結晶構造（４Ｈ２Ｆ．ｐｄｂ）にマッピングし（図１０）、それらは、ＡＡＶＬＰＦＧＧＴＦＤＬＶＱ（配列番号７８）（すなわち、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９）及びＩＬＰＮＦＬＡＮＧＧＤＧＦＱＭＩＫＤＥＬ（配列番号７９）（すなわち、配列番号７０のアミノ酸４７０～４８９）であった。
実施例１４：ＣＤ７３細胞表面レベルに対する３－Ｆ０３の効果
３－Ｆ０３で処置した後の細胞表面上のＣＤ７３の量を、上記の実施例７に記載されているように評価した。３－Ｆ０３は、アイソタイプ対照抗体または未処置の細胞と比較して、細胞表面で検出可能なＣＤ７３のレベルを劇的に低下させた（図１１）。
実施例１５：３－Ｆ０３バリアント
３－Ｆ０３軽鎖（ＬＣ、配列番号６６）及び重鎖（ＨＣ、配列番号３１）の配列を使用して、相同性モデルを構築した。図１２Ａ～図１２Ｊは、例示的な３－Ｆ０３バリアントのＶＨ及びＶＬのアミノ酸配列を示す。これらのＶＨ及びＶＬ配列を含む抗体は、配列番号７３に記載の重鎖定常領域及び配列番号７４に記載の軽鎖定常領域を含んでいた。表１０は、例示的な３－Ｆ０３バリアントの結合親和性及び結合速度を示す。試験した変異はいずれも、ＢｉａｃｏｒｅによるＣＤ７３への結合に劇的な影響を及ぼさなかった。試験したすべての変異は、３－Ｆ０３抗体の１０倍以内の親和性を有し、大部分は３－Ｆ０３の２倍以内であった。
Figure 2023509442000130
Figure 2023509442000131
改変された３－Ｆ０３バリアントの細胞表面ＣＤ７３への結合を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を洗浄し、５×１０４細胞／ウェルで９６ウェルプレートに添加した。細胞を、示された濃度の抗体で氷上にて１時間染色した。次いで、細胞を洗浄し、ＰＥにコンジュゲートしたヤギ抗マウス二次抗体で氷上にて３０分間染色した。次いで細胞を洗浄し、フローサイトメトリーにより分析した。ＣＤ７３染色のＧＭＦＩをグラフ化している（図１３）。わずかに高いＹｍａｘを示した３－Ｆ０３＿４１７を除いて、３－Ｆ０３バリアントのそれぞれは同様の結合特性を有していた（図１３）。これらのデータは、Ｂｉａｃｏｒｅの研究を裏付けており（表１０）：これらの変異は、これらのバリアントのクローンに対するヒトＣＤ７３の結合を劇的に変化させなかった。
細胞上のＣＤ７３活性を阻害する３－Ｆ０３バリアントの能力を試験するために、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を無血清ＲＰＭＩ培地で洗浄し、９６ウェルプレートに１×１０４細胞／ウェルで播種した。細胞を、示された濃度の抗体またはＡＰＣＰと共に３７℃、５％ＣＯ２にて３０分間インキュベートした。次に、ＡＭＰを最終濃度が１００μＭになるように添加し、細胞を３７℃、５％ＣＯ２にてさらに３時間インキュベートした。プレートを３００ｇで１～２分間遠心分離し、２５μＬの上清を新しい９６ウェルプレートに移した。製造元の指示に従ってＡＭＰ－Ｇｌｏアッセイを使用した。ＲＬＵは、このアッセイにおけるＡＭＰ濃度と直接相関している。３－Ｆ０３は、３－Ｆ０３バリアントの中で最大の阻害を示した（図１４）。バリアント３－Ｆ０３＿４１７、３－Ｆ０３＿４１１、及び３－Ｆ０３＿４１３は、３－Ｆ０３と比較してわずかに低い効力を示した（図１４）。バリアント３－Ｆ０３＿４１２は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞上の膜結合ＣＤ７３を阻害しなかった（図１４）。
実施例１６：抗ＣＤ７３抗体はＡ２Ａ阻害剤と協同する
Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制を逆転させる抗ＣＤ７３抗体及びＡ２Ａ阻害剤の能力を測定するために、ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞分離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）から初代ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞を精製した。単離されたＣＤ４＋Ｔ細胞を、製造元のプロトコルに従って、１μＭのカルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル（ＣＦＳＥ）（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）で標識した。ＣＦＳＥ標識細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩに再懸濁した。丸底９６ウェルプレートにおよそ５０，０００細胞／ウェルを加えた。ＤｙｎａｂｅａｄｓヒトＴ活性化因子ＣＤ３／ＣＤ２８ビーズを、ビーズ：細胞比１：１で細胞懸濁液に添加し、３７℃で１時間インキュベートした。０．５μＭのＡ２Ａ阻害剤（化合物９）の存在下または非存在下での抗ＣＤ７３抗体（ＨｚＣＬ２５、抗体Ａ、または抗体Ｂ）の段階希釈物を、指定されたウェルに添加し、３７℃で３０分間インキュベートし；Ａ２Ａ阻害剤の段階希釈物を対照として、指定されたウェルに添加した（図１６Ａ～図１６Ｃ及び図１８Ａ～図１８Ｃ）。あるいは、１μｇ／ｍＬの抗ＣＤ７３抗体（ＨｚＣＬ２５）の存在下または非存在下でのＡ２Ａ阻害剤（化合物９、化合物Ａ、または化合物Ｂ）の段階希釈物を、指定されたウェルに加え、３７℃で３０分間インキュベートし；ＣＤ７３抗体の段階希釈物を対照として、指定されたウェルに添加した（図１７Ａ～図１７Ｃ）。最後に、ＡＭＰを最終濃度６００μＭで添加し、全培養物をインキュベーター内で３７℃にて４日間インキュベートした。４日後、ＩＦＮγ産生を測定し（図１６Ａ～図１６Ｃ及び図１７Ａ～図１７Ｃ）、ＬＳＲＦＯＲＴＥＳＳＡ Ｘ－２０分析器（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を用いたＣＦＳＥベースのフローサイトメトリー分析によって、ＣＤ４＋Ｔ細胞増殖を測定した（図１８Ａ～図１８Ｃ）。
抗体Ａ重鎖（ＶＨ イタリック体）：
Figure 2023509442000132
 抗体Ａ軽鎖（ＶＬ イタリック体）：
Figure 2023509442000133
 抗体Ｂ重鎖（ＶＨ イタリック体）：
Figure 2023509442000134
 抗体Ｂ軽鎖（ＶＬ イタリック体）：
Figure 2023509442000135
 化合物Ａ：
Figure 2023509442000136
 （３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル）。
化合物Ｂ：
Figure 2023509442000137
 （７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－［［６－［［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシメチル］ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン）
抗ＣＤ７３抗体と組み合わせると、Ａ２Ａ阻害剤は、ＩＦＮγ産生を有意に増加させた（図１６Ａ～図１６Ｃ及び図１７Ａ～図１７Ｃ）。
抗ＣＤ７３抗体と組み合わせると、Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤は、複数の異なるヒトドナーにおいて濃度依存的にＣＤ４＋Ｔ細胞増殖のＡＭＰ媒介抑制を逆転させた（図１８Ａ～図１８Ｃ）。
実施例１７：抗ＣＤ７３抗体とＡ２Ａ阻害剤のｉｎ ｖｉｖｏ併用は腫瘍体積を縮小させる
Ａ２Ａ阻害剤と併用した抗ＣＤ７３抗体のｉｎ ｖｉｖｏ効力を試験した。ｈｕ－ＣＤ３４ ＮＳＧマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の腹腔内投与のために、抗ＣＤ７３抗体ＨｚＣＬ２５または３－Ｆ０３＿４１３を１×リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）に懸濁した。１×ＰＢＳ及び１×ＰＢＳに懸濁したＦｃ無効化ヒトＩｇＧ１を、対照としてこの研究に含めた。ヒト化免疫系を有するマウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ Ｌａｂｓ（Ｂａｒ Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ）から購入した。簡潔に述べると、３週齢の雌ＮＳＧ／ＮＯＤ ＳＣＩＤマウスに、免疫細胞前駆細胞に対して毒性を有する放射線を単回照射し、次いでヒト臍帯血、ＣＤ３４＋選択細胞の注射によって「レスキュー」した。マウスは、免疫応答の個人差をよりよく表すために、３人の異なるヒト免疫ドナーのレシピエントで構成された。
マトリゲル（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｔｅｗｋｓｂｕｒｙ，Ｍａｓｓ）に懸濁したヒト乳癌株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ Ｖｉｒｇｉｎｉａ）の５×１０６細胞を接種する前日に、マウスの左側腹部を剃毛した。７日目に、腫瘍の寸法をノギスで測定し、体積を式体積（Ｖｏｌｕｍｅ）＝［Ｌ（長寸）×Ｗ２（短寸）］／２で推定した。マウスは、おおよその平均体積（約２００ｍｍ３）とドナー表現による５匹または６匹のマウスの４つの群に無作為化した。研究期間中、腫瘍を５日ごとに測定した。
８日目から、５日ごとに（ｉ）１０ｍｇ／ｋｇのヒトＩｇＧ１及び１０ｍｇ／ｋｇのビヒクル；（ｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇのＨｚＣＬ２５；または（ｉｉｉ）１０ｍｇ／ｋｇの３－Ｆ０３＿４１３を、マウスに腹腔内投与した。処置群（ｉｉ）及び（ｉｉｉ）については、化合物９をマウスに１日２回（ＢＩＤ）投与した。合計８回の抗体投与を行った（すなわち、抗体を、８、１３、１８、２３、２９、３４、３９、及び４４日目に投与し、化合物９を、８日目から最終日まで、８時間及び１６時間間隔で１日２回投与した）。
Ａ２Ａ阻害剤と併用して抗ＣＤ７３抗体を投与したマウスは、統計学的に有意に遅い腫瘍増殖を示した（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。
他の実施形態
本発明をその詳細な説明に関連して記載してきたが、前述の記載は、本発明の範囲を限定するものではなく、それを示すことを意図し、本発明の範囲は添付の特許請求の範囲で定義される。他の態様、利点、及び変更は、以下の特許請求の範囲内である。

Claims (60)

  1. 有効量のヒトＣＤ７３阻害剤及びＡ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤をヒト対象に投与することを含む、治療を必要とする前記ヒト対象におけるがんの治療方法であって：
    （１）前記ヒトＣＤ７３阻害剤が：
    （ａ）可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
    可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）抗体；
    （ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
    （ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；または
    （ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含む抗体
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
    ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含む抗体
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）；
    （ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体；
    （ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
    （ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体；
    （ｈ）１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体；または
    （ｉ）ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される阻害剤を含み；そして
    （２）前記Ａ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体（Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ）の阻害剤が、以下の化合物：
    （ａ）式（Ｉ）：
    Figure 2023509442000138
     またはその薬学的に許容される塩（式中、
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｃｙ２が、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の前記５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルが、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２からそれぞれ独立して選択される１、２、または３基で、それぞれ任意選択で置換され；
    Ｒ２が、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２の前記フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－が、任意選択で、それぞれ独立して選択される１、２、または３個のＲＣ置換基で置換され；
    Ｒａ２が、任意選択で、１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換された（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
    各ＲＣが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
    各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４が、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；
    （ｂ）式（ＩＩ）：
    Figure 2023509442000139
     またはその薬学的に許容される塩（式中、
    Ｒ２が、Ｈ及びＣＮから選択され；
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｌが、Ｃ１－３アルキレンであり、前記アルキレンが、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
    Ｃｙ４が、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、前記フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルが、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
    各Ｒ８が、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８の前記Ｃ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
    各Ｒ８Ａが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８Ａの前記Ｃ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
    各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１が、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１の前記Ｃ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
    各Ｒ８Ｂが、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
    各Ｒ８Ｄが、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）；
    （ｃ）式（ＩＩＩ）：
    Figure 2023509442000140
     またはその薬学的に許容される塩（式中、
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｒ２が、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の前記５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
    各Ｒ２Ａが、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
    Ｒ４が、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４の前記フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－が、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
    各Ｒ４Ａが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
    各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１が、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される）；あるいは
    （ｄ）式（ＩＶ）：
    Figure 2023509442000141
     またはその薬学的に許容される塩（式中、
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｃｙ２が、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の前記５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
    各Ｒ６が、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
    Ｒ２が、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２の前記フェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－が、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
    各Ｒ２Ａが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される）；
    またはその薬学的に許容される塩を含む、前記治療方法。
  2. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、式（Ｉ）の化合物：
    Figure 2023509442000142
     またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｃｙ２が、５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルであり、Ｃｙ２の前記５－６員ヘテロアリールまたは４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、独立して、Ｃ１－３アルキル、Ｃ１－３アルコキシ、ＮＨ２、ＮＨ（Ｃ１－３アルキル）及びＮ（Ｃ１－３アルキル）２から選択される１、２、または３個の基で、それぞれ任意選択で置換され；
    Ｒ２が、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、及びＯＲａ２から選択され、Ｒ２の前記フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－が、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲＣ置換基で置換され；
    Ｒａ２が、任意選択で、１つまたは２つの独立して選択されるＲＣ置換基で置換された（５－７員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり；
    各ＲＣが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ６アリール、５－７員ヘテロアリール、（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－、ＯＲａ４、及びＮＲｃ４Ｒｄ４から独立して選択され；ならびに
    各Ｒａ４、Ｒｃ４、及びＲｄ４が、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される、
    請求項１に記載の方法。
  3. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が：
    ３－（５－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（５－アミノ－２－（（３－メチルピリジン－２－イル）メトキシ）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
    ３－（２－（（５－（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）－１Ｈ－テトラゾール－１－イル）メチル）－５－アミノ－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
    から選択される、請求項２に記載の方法。
  4. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、式（ＩＩ）の化合物：
    Figure 2023509442000143
     またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
    Ｒ２が、Ｈ及びＣＮから選択され；
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    ＬがＣ１－３アルキレンであり、前記アルキレンが、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｄ置換基で置換され；
    Ｃｙ４が、フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルから選択され、前記フェニル、シクロヘキシル、ピリジル、ピロリジノニル、及びイミダゾリルが、それぞれ、任意選択で、Ｒ８Ｄ及びＲ８から独立して選択される１、２、または３個の置換基で置換され；
    各Ｒ８が、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから独立して選択され、Ｒ８の前記Ｃ１－６アルキル、Ｃ２－４アルケニル、Ｃ２－４アルキニル、フェニル、Ｃ３－７シクロアルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、フェニル－Ｃ１－３アルキル、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ａ置換基で置換され；
    各Ｒ８Ａが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、５－６員ヘテロアリール、４－７員ヘテロシクロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ８１、及びＮＲｃ８１Ｒｄ８１から独立して選択され、Ｒ８Ａの前記Ｃ１－３アルキル、５－６員ヘテロアリール、及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
    各Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１が、Ｈ、Ｃ１－６アルキル、及び４－７員ヘテロシクロアルキルから独立して選択され、Ｒａ８１、Ｒｃ８１、及びＲｄ８１の前記Ｃ１－６アルキル及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ８Ｂ置換基で置換され；
    各Ｒ８Ｂが、ハロ及びＣ１－３アルキルから独立して選択され；ならびに
    各Ｒ８Ｄが、ＯＨ、ＣＮ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択される、
    請求項１に記載の方法。
  5. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が：
    ３－（５－アミノ－２－（ヒドロキシ（フェニル）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（５－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ５－アミノ－７－（３－シアノ－２－フルオロフェニル）－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－８－カルボニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
    ３－（５－アミノ－２－（（２－フルオロ－６－（（（１－メチル－２－オキソピロリジン－３－イル）アミノ）メチル）フェニル）（ヒドロキシ）メチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩
    から選択される、請求項４に記載の方法。
  6. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、式（ＩＩＩ）の化合物：
    Figure 2023509442000144
     またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｒ２が、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ２の前記５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；
    各Ｒ２Ａが、Ｄ、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
    Ｒ４が、フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキルから選択され、Ｒ４の前記フェニル－Ｃ１－３アルキル－、Ｃ３－７シクロアルキル－Ｃ１－３アルキル－、（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－、及び（４－７員ヘテロシクロアルキル）－Ｃ１－３アルキル－が、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ４Ａ置換基で置換され；
    各Ｒ４Ａが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、Ｃ１－６ハロアルキル、ＣＮ、ＯＲａ４１、及びＮＲｃ４１Ｒｄ４１から独立して選択され；ならびに
    各Ｒａ４１、Ｒｃ４１、及びＲｄ４１が、Ｈ及びＣ１－６アルキルから独立して選択される、
    請求項１に記載の方法。
  7. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が：
    ３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル；
    ３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（８－アミノ－２－（アミノ（２，６－ジフルオロフェニル）メチル）－５－（４－メチルオキサゾール－５－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
    ３－（８－アミノ－２－（（２，６－ジフルオロフェニル）（ヒドロキシ）メチル）－５－（２，６－ジメチルピリジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される、
    請求項６に記載の方法。
  8. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、式（ＩＶ）の化合物：
    Figure 2023509442000145
     またはその薬学的に許容される塩であり、式中、
    Ｃｙ１がフェニルであり、ハロ及びＣＮから独立して選択される１つまたは２つの置換基で置換され；
    Ｃｙ２が、５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｃｙ２の前記５－６員ヘテロアリール及び４－７員ヘテロシクロアルキルが、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ６置換基で置換され；
    各Ｒ６が、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
    Ｒ２が、フェニル－Ｃ１－３アルキル－または（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－であり、Ｒ２の前記フェニル－Ｃ１－３アルキル－及び（５－６員ヘテロアリール）－Ｃ１－３アルキル－が、それぞれ、任意選択で、１、２、または３個の独立して選択されるＲ２Ａ置換基で置換され；ならびに
    各Ｒ２Ａが、ハロ、Ｃ１－６アルキル、及びＣ１－６ハロアルキルから独立して選択され；
    またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
  9. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が：
    ３－（４－アミノ－２－（ピリジン－２－イルメチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリミジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；
    ３－（４－アミノ－２－（（３－フルオロピリジン－２－イル）メチル）－７－（ピリジン－４－イル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩；及び
    ３－（４－アミノ－７－（１－メチル－１Ｈ－ピラゾール－５－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－２Ｈ－［１，２，３］トリアゾロ［４，５－ｃ］ピリジン－６－イル）－２－フルオロベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩から選択される、
    請求項８に記載の方法。
  10. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
  11. 前記Ａ２Ａ／Ａ２Ｂ阻害剤が、３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル、またはその薬学的に許容される塩である、請求項１に記載の方法。
  12. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が：
    ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
    ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）
    を含む抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  14. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  15. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が：
    ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
    ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）
    を含む抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  16. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  17. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  18. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  19. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、１１Ｅ１、Ｍｅｄｉ９４４７、ＣＰＩ－００６、及びＢＭＳ－９８６１７９からなる群から選択される抗体を含む、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  20. 前記ヒトＣＤ７３阻害剤が、ＣＢ－７０８及びＡＢ６８０からなる群から選択される、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  21. 前記ＶＨドメインが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含み、前記化合物が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む、請求項１２に記載の方法。
  22. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含み、前記化合物が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む、請求項１２に記載の方法。
  23. 前記ＶＨドメインが、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含み、前記化合物が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む、請求項１５に記載の方法。
  24. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、前記化合物が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む、請求項１５に記載の方法。
  25. 前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含み、前記化合物が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む、請求項１５に記載の方法。
  26. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含み、前記化合物が、３－（８－アミノ－５－（１－メチル－６－オキソ－１，６－ジヒドロピリダジン－３－イル）－２－（ピリジン－２－イルメチル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ａ］ピラジン－６－イル）ベンゾニトリルを含む、請求項１５に記載の方法。
  27. ヒトＣＤ７３に結合する有効量の抗体及びＡ２Ａアデノシン受容体及び／またはＡ２Ｂアデノシン受容体の阻害剤をヒト対象に投与することを含む、治療を必要とする前記ヒト対象におけるがんの治療方法であって、前記抗体が：
    （ａ）可変重鎖（ＶＨ）相補性決定領域（ＣＤＲ）１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
    可変軽鎖（ＶＬ）ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）を含み；
    （ｂ）配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合し；
    （ｃ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合し；
    （ｄ）ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含む）；ならびに
    ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む）を含み；
    （ｅ）配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合し；
    （ｆ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合し；または
    （ｇ）ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、前記治療方法。
  28. 前記抗体が、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメイン
    （前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＹＴＦＴＳＹＧ（配列番号１）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＩＹＰＧＳＧＮＴ（配列番号２）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＲＹＤＹＬＧＳＳＹＧＦＤＹ（配列番号３）を含む）；ならびに
    ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメイン
    （前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＤＶＳＴＡ（配列番号４）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＳＡＳ（配列番号５）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＨＹＮＴＰＹＴ（配列番号６）を含む）を含む、請求項２７に記載の方法。
  29. 前記ＶＨドメインが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  30. 前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  31. 前記ＶＬドメインが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  32. 前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  33. 前記ＶＨドメインが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬドメインが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である、請求項２８に記載の方法。
  34. 前記ＶＨドメインが、配列番号２２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号２３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  35. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号２４に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号２５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項２８に記載の方法。
  36. 前記抗体が、配列番号７０のアミノ酸４０～５３内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する、請求項２７に記載の方法。
  37. 前記抗体が、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号２４のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号２５のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、請求項２７に記載の方法。
  38. 前記抗体が、ＶＨ ＣＤＲ１、ＶＨ ＣＤＲ２、及びＶＨ ＣＤＲ３を含むＶＨドメインを含み：
    前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）またはＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；及び
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
    前記抗体が、ＶＬ ＣＤＲ１、ＶＬ ＣＤＲ２、及びＶＬ ＣＤＲ３を含むＶＬドメインを含み：
    前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む、請求項２７に記載の方法。
  39. 前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＤＧＳＮＫ（配列番号３５）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；ならびに
    前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む、請求項３８に記載の方法。
  40. 前記ＶＨドメインが、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。
  42. 前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。
  43. 前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。
  44. 前記ＶＨドメインが、配列番号６２に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である、請求項３９に記載の方法。
  45. 前記ＶＨドメインが、配列番号６２に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。
  46. 前記抗体が、重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３０に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項３９に記載の方法。
  47. 前記ＶＨ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＧＦＴＦＳＳＹＤ（配列番号３４）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＭＳＹＥＧＳＮＫ（配列番号４０）を含み；
    前記ＶＨ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＡＴＥＩＡＡＫＧＤＹ（配列番号３６）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ１が、アミノ酸配列ＱＧＩＳＮＹ（配列番号３７）を含み；
    前記ＶＬ ＣＤＲ２が、アミノ酸配列ＡＡＳ（配列番号３８）を含み；及び
    前記ＶＬ ＣＤＲ３が、アミノ酸配列ＱＱＳＹＳＴＰＨ（配列番号３９）を含む、請求項３８に記載の方法。
  48. 前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  49. 前記抗体が重鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  50. 前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  51. 前記抗体が軽鎖を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  52. 前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一であり、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列と少なくとも８０％同一である、請求項４７に記載の方法。
  53. 前記ＶＨドメインが、配列番号６３に記載のアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインが、配列番号６１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  54. 前記抗体が重鎖及び軽鎖を含み、前記重鎖が、配列番号３３に記載のアミノ酸配列を含み、前記軽鎖が、配列番号３１に記載のアミノ酸配列を含む、請求項４７に記載の方法。
  55. 前記抗体が、配列番号７０のアミノ酸３８６～３９９及び４７０～４８９内のエピトープでヒトＣＤ７３に結合する、請求項２７に記載の方法。
  56. 前記抗体が、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３０のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、請求項２７に記載の方法。
  57. 前記抗体が、ヒトＣＤ７３に結合し、ヒトＣＤ７３への結合について、配列番号３３のアミノ酸配列を含む重鎖及び配列番号３１のアミノ酸配列を含む軽鎖を有する抗体と競合する、請求項２７に記載の方法。
  58. 前記阻害剤が：
    ７－（５－メチルフラン－２－イル）－３－［［６－［［（３Ｓ）－オキソラン－３－イル］オキシメチル］ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾロ［４，５－ｄ］ピリミジン－５－アミン；
    ３－（５－アミノ－２－（（５－（ピリジン－２－イル）－２Ｈ－テトラゾール－２－イル）メチル）－８－（ピリミジン－４－イル）－［１，２，４］トリアゾロ［１，５－ｃ］ピリミジン－７－イル）ベンゾニトリル；
    ３－［２－アミノ－６－［１－［［６－（２－ヒドロキシプロパン－２－イル）ピリジン－２－イル］メチル］トリアゾール－４－イル］ピリミジン－４－イル］－２－メチルベンゾニトリル；
    ６－（２－クロロ－６－メチルピリジン－４－イル）－５－（４－フルオロフェニル）－１，２，４－トリアジン－３－アミン、５－ブロモ－２，６－ジ（１Ｈ－ピラゾール－１－イル）ピリミジン－４－アミン；及び
    ＥＯＳ１００８５０からなる群から選択される、請求項２７～５７のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記がんが、高いアデノシンシグネチャーを有する、請求項１～５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記がんが、頭頸部癌、結腸直腸癌、肺癌、黒色腫、卵巣癌、膀胱癌、肝臓癌、または腎細胞癌である、請求項１～５９のいずれか１項に記載の方法。
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