JP2023506093A - 操作された抗ｉｌ－２抗体 - Google Patents

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Abstract

本開示によれば、改変されたアミノ酸配列を有する操作された抗ＩＬ－２抗体が提供される。本開示の操作された抗ＩＬ－２抗体は、ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体との複合体に、改変された受容体結合特異性を付与し、それによって、ＩＬ－２のＣＤ２５への結合を阻害する。本開示の操作された抗ＩＬ－２抗体は、エフェクター免疫細胞のサブセットの増殖を促進し、それによって、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響を低減させる。したがって、本開示の操作された抗ＩＬ－２抗体は、癌や感染などの疾患の治療に有用であると考えられる。【選択図】図１

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は、２０２０年２月１６日出願の米国特許仮出願第６２／９７７、２９２号及び２０２１年１月２０日出願の米国特許仮出願第６３／１３９、３１５号に基づく優先権を主張するものである。上記の両出願の開示内容の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。
（配列表に関する声明）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出された配列表を含み、この配列表の全体は、参照により本明細書に組み込まれる。２０２１年２月１４日に作成されたこのＡＳＣＩＩコピーの名前は、「Ｐ－５９３０９４－ＰＣ－ＳＥＱ－１４ＦＥＢ２１＿ＳＴ２５．ｔｘｔ」であり、そのサイズは、６４．６キロバイトである。
（技術分野）
本開示は、一般に、抗体の分野に関する。一実施形態では、本開示は、ＩＬ－２に改変された受容体結合特異性を付与する、操作された抗ＩＬ－２抗体の作製及び使用に関する。
インターロイキン２（ＩＬ－２）は、４つのヘリックスバンドル構造を持つ１５．４ｋＤａのＩ型サイトカインである。ＩＬ－２が３０年以上前に発見されて以来、免疫系の調節におけるＩＬ－２の重要性が何度も説明されてきた。ＩＬ－２は、主に、抗原によって活性化されたＣＤ４＋Ｔ細胞によって産生され分泌される。比較的程度は低いが、ＩＬ－２は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、樹状細胞、及び肥満細胞によっても産生される。
ＩＬ－２シグナル伝達は、相反する２つの作用を有する。ＩＬ－２は、エフェクター細胞を活性化及び増殖させることによって、免疫応答を高めることができる。また、ＩＬ－２は、ＣＤ４＋制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞を活性化及び増殖させることによって、免疫応答を低下させることができる。これらの機能を促進するために、ＩＬ－２は、下記の（ｉ）及び（ｉｉ）の２種類のＩＬ－２受容体に結合することによって、その作用を仲介する。（ｉ）ＩＬ－２Ｒα（ＣＤ２５）、ＩＬ－２Ｒβ（ＣＤ１２２）、及びＩＬ－２Ｒγ（γｃ、ＣＤ１３２）共通鎖からなる三量体（トリマー）ＩＬ－２受容体。（ｉｉ）ＩＬ－２Ｒβ及びＩＬ－２Ｒγサブユニットのみからなる二量体（ダイマー）ＩＬ－２受容体。二量体受容体及び三量体受容体は両方とも、ＳＴＡＴ５経路を介してＩＬ－２結合シグナルを伝達することができる。しかしながら、ＩＬ－２は、αβγ三量体受容体に、βγ二量体受容体の１００倍も強固に結合する。ｈＩＬ－２は、αβγ三量体受容体への結合親和性が約１０ｐＭであり、βγ二量体受容体への結合親和性が１ｎＭであることが実証されている。
ＩＬ－２の二量体受容体と三量体受容体とに対する結合親和性の違いは、インビボでの免疫学的恒常性を維持する重要な機構の１つである。三量体受容体の活性化は、より多くのαβγ三量体受容体をその膜上に発現する、ＴｒｅｇにおけるＦｏｘＰ３介在性転写と関連している。対照的に、ＩＬ－２のβγ二量体受容体への結合は、βγ二量体受容体を比較的高レベルで発現し、αβγ三量体受容体を非常に低レベルで発現する、ＮＫ細胞及びメモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８＋細胞の活性化と関連している。正常な生理的状態ではＩＬ－２の自然レベルは比較的低いので、ＩＬ－２の主な機能は、Ｔｒｅｇの活性化及び増殖因子として作用することによって、免疫寛容を促進することであると思われる。一方、免疫系が活性化されると、ＩＬ－２レベルが上昇し、次いで、ＩＬ－２がβγ二量体受容体と結合して、メモリー表現型エフェクターＴ細胞（ＭＰ）ＣＤ８＋及びＮＫ細胞の活性化及び増殖を促進することができる。
１９９０年代初頭以来、高用量ＩＬ－２療法が、黒色腫及び転移性腎細胞癌の治療に使用されており、奏効率は１０％～１５％である。この治療方法は有効であるが、致死的となり得る血管漏出症候群（ＶＬＳ）などのＩＬ－２依存性副作用により、多くの患者がこの治療方法の対象から除外されるため、他の癌には採用されていない。投与されるＩＬ－２は、半減期が短いため、非常に頻繁な投与を必要とし、ＩＬ－２の循環レベルのスパイクが繰り返され、その結果、副作用を悪化させる。最後に、野生型ＩＬ－２は、選択的ではないので、Ｔｒｅｇ細胞の望ましくない活性化を促進する恐れがある。
特定の抗体がＩＬ－２に結合して、βγ二量体ＩＬ－２受容体またはαβγ三量体ＩＬ－２受容体への結合を調節することが発見されている。そのような特定の抗体と複合体を形成したＩＬ－２は、半減期が比較的長く、このＩＬ－２複合体は、エフェクター細胞または免疫細胞の特定のサブセットを活性化させる。例えば、Ｓ４Ｂ６抗体（マウス）とＩＬ－２との複合体は、インビボでマウスのエフェクター細胞を選択的に活性化する。また、ＪＥＳ６．１抗体（マウス）とＩＬ－２との複合体は、インビボでマウスのＴ調節細胞を選択的に活性化する。ＪＥＳ６．１抗体による調節機構は解明されている。ＪＥＳ６．１とｍＩＬ－２との複合体は、インビトロでＣＤ２５に結合するが、ＣＤ１２２には結合しないことが分かっている。
ＩＬ－２の増加は、ウイルス感染に関与していると考えられている。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２は、呼吸器系ウイルスのコロナウイルス科の陽性鎖ＲＮＡウイルスである。このウイルスは、肺及び胃腸の組織上のアンジオテンシン変換酵素２（ＡＣＥ２）に結合することによって、宿主に侵入する。感染経過は、約７～１４日間の潜伏期間と、それに続く、空咳、発熱、息切れの症状を特徴とする。有症者のうちの最大２０％が重篤な症状を呈し、平均３％が肺不全により死亡する。コロナウイルスファミリーのメンバーを対象にした先行研究では、コロナウイルス感染が制御性Ｔリンパ球の増加を引き起こし、このことがウイルス排除の遅延に寄与している可能性があることが実証されている。ＣＯＶＩＤ－１９患者に関するより最近の研究では、ＩＣＵの患者は、非ＩＣＵの患者よりもＩＬ－２、ＩＬ－７、ＩＬ－１０、ＧＳＣＦ、ＩＰ１０、ＭＣＰ１、ＭＩＰ１Ａ、及びＴＮＦ－αのレベルが高いことが分かっており、重症疾患における免疫病理学的な役割を示唆している。ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染患者の末梢血白血球の免疫学的特徴を用いた白血球の恒常性の変化の直接的な証拠に対する調査により、ＣＯＶＩＤ－１９では、いくつかの慢性感染症と同様に、ＣＤ４＋Ｔ細胞の機能の損傷が、ＣＤ８＋Ｔ細胞の過剰活性化とその後の消耗とを促進することを分かった。このようなＴ細胞サブセットの摂動は、最終的には、宿主の抗ウイルス免疫を低下させる恐れがある。したがって、ウイルス増殖を遅らせるか、または免疫応答を高めてウイルス負荷を排除するとともに、関連する免疫病理のいくつかを減少させる治療法は、大きな利益になるであろう。
ウイルスに対する免疫応答は、自然免疫系と獲得免疫系との両方からなる。自然免疫系は、Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）とレチノイン酸誘導遺伝子Ｉ（ＲＩＧ－Ｉ）タンパク質とを使用して、ウイルスのＲＮＡ／ＤＮＡを感知し、初期応答を誘導する。この初期応答には、抗ウイルス性サイトカイン（例えば、インターフェロンαなど）の産生、免疫系を感染部位に誘導するケモカインの産生、及び、マクロファージ／樹状細胞群の動員が含まれる。ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（自然リンパ球）は、ＭＨＣクラスＩ発現の非存在下で、ウイルス感染細胞を直接殺滅する。このことは、ウイルスがＭＨＣクラスＩ提示系に干渉した場合にも起こり得る。
加えて、感染応答時に、ＮＫ細胞がインターフェロン－γ（ＩＦＮ－γ）を産生し、それによって、細胞上のＭＨＣクラスＩの発現を増加させて、獲得免疫系の応答能力を高める。獲得免疫系は、Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８）とＢ細胞とからなる。ＣＤ４＋Ｔ細胞は、抗原提示細胞上のＭＨＣ－ＩＩとの関連でウイルス抗原を認識し、（サイトカインを介して）免疫応答を増幅し、Ｂ細胞のクラススイッチと、その後の抗ウイルス抗体の産生を誘導する。ＣＤ４細胞、特にＴｈ１細胞の活性化により、ＩＦＮ－γを放出し、それによって、ウイルス抗原の提示を促進する。ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＭＨＣ－Ｉとの関連でウイルスペプチドを提示しているウイルス感染細胞に対して、直接的な溶解効果を示す。免疫応答の初期誘導期は、一般的に、７～１０日かけてＴ細胞集団を増殖させて、ウイルスを排除するのに必要な細胞を産生する。
ＩＬ－２は、Ｔ細胞及びＮＫ細胞の増殖及び活性化における重要なメディエータである。ＩＬ－２は、一般的に、Ｔ細胞の活性化に必要な二次シグナルにおいて主要な役割を果たすと考えられている。二量体（βγ）ＩＬ－２受容体複合体及び三量体（αβγ）ＩＬ－２受容体複合体の発現では、ＣＤ２５（αサブユニット）を含む三量体受容体は、制御性Ｔ細胞、及び、活性化短寿命細胞傷害性エフェクターＴ細胞のサブセット上で高度に発現しており、一方、二量体受容体は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、及びＮＫ細胞上に見られるという点で、系統選択性を示す。したがって、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、及びＮＫ細胞は、二量体受容体に結合したＩＬ－２を介してシグナルを受け取ることができる。制御性Ｔ細胞は、高親和性三量体受容体複合体に依存してその機能を強化し、これには、メモリーＴ細胞やナイーブＴ細胞への結合からＩＬ－２を隔離することが含まれ、それによって、これらの細胞集団の機能を低下させる。ＩＬ－２の作用機序を図１に示す。
また、エフェクターＴ細胞サブセットも、三量体ＩＬ－２受容体複合体を発現する。これらの細胞は極めて活性に富むが、エフェクターＴ細胞のサブセットにＩＬ－２が結合すると、活性化誘導性細胞死（ＡＩＣＤ）が誘導される。さらに、ＣＤ２５は、肺内皮や血管内皮に発現することが分かっている。この発現は、高用量ＩＬ－２療法を用いたマウスモデルにおける、肺水腫及び血管漏出と相関している。肺細胞におけるＣＤ２５の発現が、高用量ＩＬ－２療法の肺毒性の原因であることが示唆されている。加えて、肺内皮細胞は定常状態条件下でＣＤ２５を発現するが、肺内皮細胞上のＣＤ２５の発現レベルは、マウスにＩＬ－２を注射するとインビボで増加する。ＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体（ＩＬ－２／ｍＡｂ）との免疫複合体を用いて、非免疫細胞上のＣＤ２５をノックアウトするか、または、ＩＬ－２のＣＤ２５結合エピトープを阻害することによって、ＩＬ－２誘導性の肺水腫や血管漏出症候群を予防できることが分かっている。また、遺伝的操作によってＴ細胞及びＢ細胞を欠失させた後、残存する免疫細胞（ＮＫ、単球、ＤＣ、及び顆粒球）を除去するために亜致死的に放射線照射したマウスに高用量ＩＬ－２を投与すると、免疫成分の不在を示す、重篤な肺水腫が生じることが実証されている。
肺のウイルス感染を除去する能力におけるＩＬ－２の二重の役割について、多くの研究がなされてきた。ＩＬ－２は、ウイルス排除のためのＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖に必要であることが分かっている。また、ＩＬ－２が肺水腫を媒介することも分かっている。例えば、インフルエンザウイルス肺感染のマウスインフルエンザモデルにおいて、メモリーＣＤ４＋Ｔ細胞が高レベルのＩＬ－２を産生し、このＩＬ－２の存在が疾患を悪化させることが実証されている。制御性Ｔ細胞は、ウイルス感染における肺組織への病理学的損傷を低減するために重要である。ＴｒｅｇによってＣＤ８＋エフェクター細胞を制御する機序の１つは、Ｔｒｅｇ上のＣＤ２５三量体受容体を介したＩＬ－２の高親和性消費によるものであると仮定され、実証されている。これは、実際には、増殖するエフェクター細胞からＩＬ－２を除去し、次いで、エフェクター細胞の有効性を制限し、ウイルス排除を低下させる恐れがある。Ｔｒｅｇはまた、ＣＤ２５＋内皮細胞からＩＬ－２を隔離することによって、肺内皮に対するＩＬ－２の作用を制限するようである。転帰は、Ｔｅｆｆ／Ｔｒｅｇの比率に依存する。Ｔｅｆｆ（エフェクターＴ細胞）のレベルが高くなるとウイルス排除がもたらされるが、その一方で、免疫活性化した細胞によってＩＬ－２が過剰レベルで分泌されて、肺水腫を引き起こす恐れがある。対照的に、Ｔｒｅｇが大きく増殖すると、肺水腫の病状を軽減するが、その一方で、ウイルス排除が低下して、ウイルス感染の長期化をもたらす恐れがある。
ＣＯＶＩＤ－１９患者からの最近のデータは、ウイルス負荷が高くなると、転帰がより不良となることを示唆している。したがって、ウイルス排除の低下は、転帰の悪化に関連すると考えられる。マウスモデルでは、ウイルス排除の低下におけるＴｒｅｇの役割を、インフルエンザＡウイルス（ＩＡＶ）感染モデルを使用して実証した。ＩＡＶに感染したマウスは、肺、脾臓、及びリンパ節でのＴｒｅｇのレベルがより高く、かつ、肺組織でのウイルス負荷がより高かった。このことは、感染開始の６週間後でも観察された。インフルエンザＡは、免疫応答によるウイルス排除を回避するためにＴｒｅｇの増殖を誘導することが示唆された。免疫応答を高めると、肺におけるＩＡＶ感染の排除が増加するかどうかを評価するために、研究者らは、ＩＡＶ感染マウスに、活発な細胞傷害性Ｔリンパ球応答を誘導するリンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）を感染させた。また、ＩＡＶ感染肺における広範な免疫応答は、肺水腫と広範な肺組織損傷を引き起こした。一方、ＬＣＭＶの投与前に、抗ＣＤ２５遮断抗体でＩＡＶ感染マウスを処置した場合には、重篤な肺水腫からの保護が達成された。これらのデータは、Ｔｒｅｇによりウイルス排除を遅延させた状況で免疫応答を高めると、ウイルス排除を誘導できることを実証している。加えて、ＣＤ２５＋細胞へのＩＬ－２結合を阻害すると、ウイルス排除中の免疫介在性肺水腫のリスクが低下することも実証されている。
単剤療法として投与されたＩＬ－２は、抗ウイルス免疫応答を高めることが示されている。ＬＣＭＶ感染マウスのＴ細胞の増殖期、収縮期、及びメモリー期におけるＩＬ－２療法の効果を調べたところ、増殖期におけるＩＬ－２療法は、ＣＤ２５の発現を一過性に上方制御する急速に***するエフェクターＴ細胞の生存にとって有害であることが分かった。これらのエフェクターＴ細胞は、その後、活性化誘導性細胞死（ＡＩＣＤ）に誘導された。対照的に、ＩＬ－２療法は、収縮期には非常に有効であり、ウイルス特異的Ｔ細胞の生存及び活性化をもたらした。ＩＬ－２療法は、静止メモリーＴ細胞の活性化及び増殖を促進することが観察された。しかしながら、ＩＬ－２療法には欠点がある。ＩＬ－２は、半減期が短いため、複数回投与が必要であり、例えば、毎日の負荷投与と、それに続く週１回の投与が必要であり、このことは、関連する有害事象が生じたり、免疫原性が増加したりするリスクにつながる。加えて、高用量ＩＬ－２の外因性投与は、ＣＤ２５陽性内皮細胞に結合することが予想される。実際、肺水腫及び血管漏出症候群は、腫瘍学における高用量ＩＬ－２療法の主要な重篤な有害事象である。これらの問題点を克服する技術の開発が、ＩＬ－２を治療薬として使用する上で非常に重要である。
当業者であれば、ＩＬ－２及びウイルス感染症の治療に関して上述した原理が、ＩＬ－２及び細菌感染症の治療または癌の治療にも等しく適用可能であることを認識できるであろう。
生体分子工学の分野における進歩により、研究者は、分子設計戦略を適用して、天然に存在するタンパク質を改変し、標的疾患治療のための新しい分子を生成するための前例のない機会を得ることができるようになった。或る分野では、サイトカインをベースにした薬剤や、抗体をベースにした薬剤などの免疫療法薬の開発は、進歩した技術及びタンパク質工学からの知見によって後押しされている。したがって、特定の疾患状態、これに限定しないが、例えば、ウイルス感染、細菌感染、及び癌におけるＩＬ－２の機能を調節するために使用することができる操作された抗ＩＬ－２抗体の開発が求められている。
本開示の一態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む単離抗ＩＬ－２抗体であって、
重鎖可変領域（ＶＨ）は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
軽鎖可変領域（ＶＬ）は、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）のアミノ酸配列は、
（ａ）ＨＣＤＲ１が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号４２のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号４３のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）ＨＣＤＲ１が配列番号４４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号４９のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）ＨＣＤＲ１が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５４のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号５５のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）ＨＣＤＲ１が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、または、
（ｅ）ＨＣＤＲ１が配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号６７のアミノ酸配列を含む、抗体が提供される。
関連する別の態様では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列は、
（ａ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、
（ｂ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、
（ｃ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、
（ｄ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、
（ｅ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、
（ｆ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、
（ｇ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、
（ｈ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、
（ｉ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、
（ｊ）重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号３６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号３７のアミノ酸配列を含む。
関連する別の態様では、本開示の抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体を含む。
関連する別の態様では、本開示の抗体は、Ｆｃγ受容体への結合を減少させる突然変異を有する重鎖を含む。関連するさらに別の態様では、本開示の抗体は、重鎖配列と、軽鎖配列とを含み、重鎖配列及び軽鎖配列は、（ａ）配列番号６８に記載の重鎖配列及び配列番号６９に記載の軽鎖配列、（ｂ）配列番号７０に記載の重鎖配列及び配列番号７１に記載の軽鎖配列、または、（ｃ）配列番号７２に記載の重鎖配列及び配列番号７３に記載の軽鎖配列、を含む。
本開示の一態様では、上記の本開示の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物が提供される。関連する別の態様では、本開示の組成物は、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、ヒスチジン緩衝液及びクエン酸緩衝液から選択される緩衝液を含む。関連するさらに別の態様では、本開示の組成物は、スクロース、メチオニン、またはＰＳ８０のうちの少なくとも１つ、または、それらの任意の組み合わせをさらに含む。関連するさらに別の態様では、本開示の組成物は、ＩＬ－２をさらに含む。
本開示の一態様では、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列が、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６に記載されたアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列が提供される。関連する別の態様では、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターであって、重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列が、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６に記載されたアミノ酸配列を含む、ベクターが提供される。関連するさらに別の態様では、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む宿主細胞であって、重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列が、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６に記載されたアミノ酸配列を含む、宿主細胞が提供される。
本開示の一態様では、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、 軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列が、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７に記載されたアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列が提供される。関連する別の態様では、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターであって、軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列が、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７に記載されたアミノ酸配列を含む、ベクターが提供される。関連するさらに別の態様では、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む宿主細胞であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列が、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７に記載されたアミノ酸配列を含む、宿主細胞が提供される。
本開示の一態様では、抗ＩＬ－２抗体ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている、単離ポリヌクレオチド配列が提供される。関連する別の態様では、抗ＩＬ－２抗体ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターであって、単離ポリヌクレオチド配列が配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている、ベクターが提供される。関連するさらに別の態様では、抗ＩＬ－２抗体ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む宿主細胞であって、単離ポリヌクレオチド配列が配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている、宿主細胞が提供される。
本開示の一態様では、対象における疾患または状態を治療する方法であって、上記の本開示の抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を対象に投与するステップを含み、抗体が、免疫細胞のサブセットの分化成長を促進し、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響を低減させ、それによって、対象における疾患または状態を治療する、方法が提供される。
関連する別の態様では、本開示の組成物は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。
関連する別の態様では、疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を含む。関連するさらに別の態様では、ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２；ノロウイルス；ロタウイルス；Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはＥ型の肝炎ウイルス；狂犬病ウイルス；西ナイルウイルス；エンテロウイルス；エコーウイルス；コクサッキーウイルス；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）；ＨＳＶ－２；水痘帯状疱疹ウイルス；蚊媒介ウイルス；アルボウイルス；セントルイス脳炎ウイルス；カリフォルニア脳炎ウイルス；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；ポリオウイルス；ジカウイルス；風疹ウイルス；サイトメガロウイルス；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）；エンテロウイルスＤ６８；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス；中東呼吸器症候群コロナウイルス；エプスタイン・バー・ウイルス；インフルエンザウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；ＪＣウイルスを含むポリオーマウイルス；ＢＫウイルス；エボラウイルス；デングウイルス；またはそれらの任意の組み合わせによって引き起こされる。
関連する別の態様では、状態は、免疫系が弱った状態を含み、状態の治療は、免疫系を予防的に高めることを含む。関連するさらに別の態様では、状態は、ＩＬ－２誘導性肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出を含む。
関連する別の態様では、状態は、対象における癌の可能性を増加させる遺伝的素因を含む。関連するさらに別の態様では、遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、遺伝子は、腫瘍抑制遺伝子、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）遺伝子、またはそれらの組み合わせを含む。関連するさらに別の態様では、遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＴＰ５３、ＣＨＥＫ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
関連する別の態様では、免疫細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１以上を含む。
関連するさらに別の態様では、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響は、制御性Ｔ細胞の活性化、ＣＤ２５＋Ｔエフェクター細胞のアポトーシス、ＩＬ－２誘導性肺水腫、ＩＬ－２誘導性肺炎、またはＩＬ－２誘導性血管漏出のうちの１以上を含む。
関連するさらに別の態様では、抗ＩＬ－２抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ－２の結合を阻害する。
関連するさらに別の態様では、対象は、１以上の免疫チェックポイントを標的とする１以上の免疫チェックポイント阻害剤でさらに治療される。関連するさらに別の態様では、対象は、抗ＩＬ－２抗体による治療と同時に、抗ＩＬ－２抗体による治療の前に、または、抗ＩＬ－２抗体による治療の後に、免疫チェックポイント阻害剤で治療される。関連するさらに別の態様では、免疫チェックポイントは、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ７３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）、ＣＤ３９、ＩＬＤＲ２、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＶＴＣＮ－１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本開示の一態様では、対象を免疫化する方法であって、アジュバントを含むワクチンを投与するステップを含み、アジュバントは、ＩＬ－２抗体アジュバントを含み、ＩＬ－２抗体アジュバントは、請求項１に記載の抗ＩＬ－２抗体を含む、方法が提供される。関連する別の態様では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。関連するさらに別の態様では、対象は、免疫系が弱っている。
関連する別の態様では、対象は、該対象における癌の可能性を増加させる遺伝的素因を有する。関連するさらに別の態様では、遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、遺伝子は、腫瘍抑制遺伝子、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）遺伝子、またはそれらの組み合わせを含む。関連するさらに別の態様では、遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＴＰ５３、ＣＨＥＫ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本特許または本出願は、少なくとも１つのカラー図面を含んでいる。カラー図面を含むこの特許または特許出願公開の写しは、請求し必要な手数料を支払うことで、特許商標庁から提供される。
本開示の操作された抗ＩＬ－２抗体は、その作製及び使用方法との両方に関して、その目的、特徴、及び利点と共に、以下の詳細な説明を参照することによって、最もよく理解することができるであろう。
図１は、ＩＬ－２の作用機序と、免疫応答の制御におけるＩＬ－２の２つの役割を示す概略図である。 図２は、抗ＩＬ－２抗体指向免疫療法を示す概略図である。 図３Ａ及び図３Ｂは、ＣＯＶＩＤ－１９感染の進行と、アジュバント介入としての潜在的な抗ＩＬ－２療法を示す概略図である。図３Ａは、「Shi Y et al., (2020) COVID-19 infection: the perspectives on immune responses. Cell Death & Differentiation volume 27, pages1451-1454 (doi:10.1038/s41418-020-0530-3), Fig. 1.」から引用した。 図３Ａ及び図３Ｂは、ＣＯＶＩＤ－１９感染の進行と、アジュバント介入としての潜在的な抗ＩＬ－２療法を示す概略図である。 図４Ａは、ヒトＩＬ－２に結合するＪＥＳ６．１抗体の代表的なＳＰＲセンサグラムを示す。 図４Ｂは、マウスＩＬ－２に結合するＪＥＳ６．１抗体の代表的なＳＰＲセンサグラムを示す。 図４Ｃは、ヒトＩＬ－２に結合するＪＥＳ６．１ＲＭＣ抗体の代表的なＳＰＲセンサグラムを示す。 図４Ｄは、マウスＩＬ－２に結合するＪＥＳ６．１ＲＭＣ抗体の代表的なＳＰＲセンサグラムを示す。 図５Ａ～図５Ｃは、ｓｃＦｖフォーマットでＪＥＳ６．１抗体を発現するＹＳＤクローンのＩＬ－２結合の結果を示す。Ｘ軸の蛍光レベルはＪｅｓ６．１のｓｃＦｖ発現レベルに対応し、Ｙ軸の蛍光レベルはヒトまたはマウスのＩＬ－２の結合に対応する。図５Ａは、ＩＬ－２を含まない陰性対照を示す。 図５Ｂは、１０００ｎＭのヒトＩＬ－２を含むＪＥＳ６．１ＹＳＤクローンを示す。 図５Ｃは、１００ｎＭの標識ＪＥＳ６．１と共にインキュベートされ、マウスＩＬ－２を発現するＹＳＤを示す。 図６Ａは、単離された酵母表面ディスプレイクローンのＩＬ－２（０．１ｎＭ）への結合を示す。平均蛍光強度（Ｅｍ ６５５ｎＭ）を酵母表面発現量に対して正規化した。陰性ＹＳＤクローンを５００ｎＭのｈＩＬ－２で標識した。 図６Ｂは、ＹＳＤクローンのＯＸ４０／ＰＤ－１／ＴＮＦＲ２の混合物への非特異的結合を示す。クローンを５００ｎＭの混合物で標識した。ＴＮＦＲ２結合酵母クローンを陽性対照として用いた。 図７は、ＢＤＧ１７．０２３ＩｇＧの精製を示す。抗体を、ＧＥ Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ １０／３００増加（ＣＶ＝２５ｍｌ）で、ＰＢＳ緩衝液中で０．５ｍｌ／分で実行した。１番目のピーク（０．３８ＣＶ）は典型的な凝集体に相当し、約１２．９ｍｌの保持を有する２番目のピーク（０．５１ＣＶ）は通常のヒトＩｇＧに特有のものである。 図８Ａは、ＢＤＧ１７．０２３ＩｇＧのｈＩＬ－２への結合キネティクスを示す。 図８Ｂは、ＢＤＧ１７．０２３ＩｇＧのｍＩＬ－２への結合キネティクスを示す。 図９は、ＢＤＧ１７．０２３／ＩＬ－２複合体による受容体識別のＳＰＲ応答のトレースを示す。ＢＤＧ１７．０２３をＣＭ５チップに固定し、ｈＩＬ－２（６０ＲＵ）、ＣＤ１２２（２０ＲＵ）、及びＣＤ２５（０ＲＵ）を矢印で示すように流した。 図１０Ａ～図１０Ｄは、ＪＥＳ６．１／ｍＩＬ－２複合体及びＢＤＧ１７．０２３／ｈＩＬ－２複合体で処理したマウスの脾臓免疫細胞集団を示す。図１０Ａは、ＪＥＳ６．１／ｍＩＬ－２複合体で処理したマウス由来の免疫細胞集団のパーセンテージを示す。 図１０Ｂは、ＪＥＳ６．１／ｍＩＬ－２複合体で処理したマウスのメモリー表現型エフェクターＴ細胞（ＭＰ）ＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比を示す。 図１０Ｃは、ＢＤＧ１７．０２３／ｈＩＬ－２複合体で処理したマウス由来の免疫細胞集団のパーセンテージを示す。 図１０Ｄは、ＢＤＧ１７．０２３／ｈＩＬ－２複合体で処理したマウスのＭＰＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比を示す。 図１１は、ＪＥＳ６．１のクローン１（１７．０２１）、クローン２（１７．０２２）、クローン４（１７．０２３）、クローン５（１７．０３０）、及びクローン６（１７．０３５）の重鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメントを示す。 図１２は、ＪＥＳ６．１のクローン１（１７．０２１）、クローン２（１７．０２２）、クローン４（１７．０２３）、クローン５（１７．０３０）、及びクローン６（１７．０３５）の軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメントを示す。 図１３Ａは、ヒト化クローン１７．０１４、クローン１７．０３８、クローン１７．０４３、クローン１７．０５３、及びクローン１７．０５４の重鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメントを示す。黒色の三角形はＩＭＧＴ ＣＤＲの位置を示す。太字／斜体は、それぞれＡＢＲ／ＣＤＲの位置を示す。 図１３Ｂは、ヒト化クローン１７．０１４、クローン１７．０３８、クローン１７．０４３、クローン１７．０５３、及びクローン１７．０５４の軽鎖可変領域のアミノ酸配列のアライメントを示す。黒色の三角形はＩＭＧＴ ＣＤＲの位置を示す。太字／斜体は、それぞれＡＢＲ／ＣＤＲの位置を示す。 図１４Ａ～図１４Ｇは、ヒトＩＬ－２に対する各抗体の結合キネティクスを示す。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０３８の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０３８の結合キネティクスは、マルチサイクル法によって測定した。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０４３の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０４３の結合キネティクスは、マルチサイクル法によって測定した。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０５３の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０５３の結合キネティクスは、単回サイクル法によって測定した。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０５４の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０５４の結合キネティクスは、単回サイクル法によって測定した。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０６６の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０６６の結合キネティクスは、マルチサイクル法によって測定した。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０６７の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０６７の結合キネティクスは、マルチサイクル法によって測定した。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、ヒトＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０６９の結合キネティクスをトレースした。ＢＤＧ１７．０６９の結合キネティクスは、マルチサイクル法によって測定した。 図１５Ａ及び図１５Ｂは、カニクイザルＩＬ－２に対する各抗体の結合キネティクスを示す。表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、カニクイザルＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０６７の結合キネティクスをトレースした。 表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）センサグラムは、カニクイザルＩＬ－２に対する抗ＩＬ－２抗体クローンであるＢＤＧ１７．０６９の結合キネティクスをトレースした。 図１６Ａ～図１６Ｇは、各ＩｇＧの融点の示差走査蛍光分析（ＤＳＦ）の分析結果を示す。薄緑色の破線はＴｏｎｓｅｔを示し、緑色の太い破線はＴｍ１を示し、該当する場合にはＴｍ２を示す。分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０３８である。 分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０４３である。 分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０５３である。 分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０５４である。 分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０６６である。 分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０６７である。 分析した抗ＩＬ－２クローンは、ＢＤＧ１７．０６９である。 図１７Ａ及び図１７Ｂは、ＳＰＲ応答のトレースによる各抗体／ＩＬ－２複合体の受容体識別を示す。抗体をＣＭ５チップに固定化し、ｈＩＬ－２、ＣＤ１２２、及びＣＤ２５を矢印で示すようにストリーミングした。図１７Ａは、ＳＰＲチップへの化合物の注入の概略的な順序を示し、ＣＤ１２２に結合するが、ＣＤ２５には結合しない、ヒトＩＬ－２（ｈＩＬ２）と複合体を形成した連続的な抗ＩＬ－２抗体を表す。 図１７Ｇは、ＢＤＧ１７．０３８のＳＰＲ応答を示す。 図１７Ｃは、ＢＤＧ１７．０４３のＳＰＲ応答を示す。 図１７Ｄは、ＢＤＧ１７．０５４のＳＰＲ応答を示す。 図１７Ｅは、ＢＤＧ１７．０６６のＳＰＲ応答を示す。 図１７Ｆは、ＢＤＧ１７．０６７のＳＰＲ応答を示す。 図１７Ｇは、ＢＤＧ１７．０６９のＳＰＲ応答を示す。 図１８Ａは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで強力な免疫刺激効果を示すことを表す。抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体はエフェクター細胞集団を増加させるが、制御性Ｔ細胞に対する影響は認められない。図１８Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０．５μｇのｈＩＬ－２と予め複合体化した抗ＩＬ－２抗体（１０μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。５日目に脾細胞を単離し、免疫細胞集団をフローサイトメトリーで分析した。各実験群の平均値を示した（各群のｎ＝６）。リンパ球は、側方散乱及び前方散乱のパラメータにしたがってゲート制御され、その後の免疫細胞亜集団は、以下のようにゲート制御された：Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１２２＋、ＣＤ２５－）、ＮＫＴ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）。 図１８Ａは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで強力な免疫刺激作用を示すことを表す。抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体はエフェクター細胞集団を増加させるが、制御性Ｔ細胞に対する影響は認められない。図１８Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、０．５μｇのｈＩＬ－２と予め複合体化した抗ＩＬ－２抗体（１０μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。５日目に脾細胞を単離し、免疫細胞集団をフローサイトメトリーで分析した。各実験群の平均値を示した（各群のｎ＝６）。リンパ球は、側方散乱及び前方散乱のパラメータにしたがってゲート制御され、その後の免疫細胞亜集団は、以下のようにゲート制御された：Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１２２＋、ＣＤ２５－）、ＮＫＴ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）。 図１８Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで強力な免疫刺激効果を示すことを表す。抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体はエフェクター細胞集団を増加させるが、制御性Ｔ細胞に対する影響は認められない。図１８Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１．２５μｇのｈＩＬ－２と予め複合体化した抗ＩＬ－２抗体（２５μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。５日目に脾細胞を単離し、免疫細胞集団をフローサイトメトリーで分析した。各実験群の平均値を示した（各群のｎ＝６）。リンパ球は、側方散乱及び前方散乱のパラメータにしたがってゲート制御され、その後の免疫細胞亜集団は、以下のようにゲート制御された：Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１２２＋、ＣＤ２５－）、ＮＫＴ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）。 図１８Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで強力な免疫刺激効果を示すことを表す。抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体はエフェクター細胞集団を増加させるが、制御性Ｔ細胞に対する影響は認められない。図１８Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに、１．２５μｇのｈＩＬ－２と予め複合体化した抗ＩＬ－２抗体（２５μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。５日目に脾細胞を単離し、免疫細胞集団をフローサイトメトリーで分析した。各実験群（各群ｎ＝６）の平均値を示した。リンパ球は、側方散乱及び前方散乱のパラメータにしたがってゲート制御され、その後の免疫細胞亜集団は、以下のようにゲート制御された：Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１２２＋、ＣＤ２５－）、ＮＫＴ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）。 図１９Ａ及び図１９Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで強力な用量依存性免疫刺激作用を示すことを表す。図１９Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６健康マウスに、抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体（それぞれ２５μｇ／１．２５μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。５日目に脾細胞を単離し、免疫細胞集団をフローサイトメトリーで分析した。リンパ球は、側方散乱及び前方散乱パラメータにしたがってゲート制御され、その後の免疫細胞亜集団は、以下のようにゲート制御された：Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１２２＋、ＣＤ２５－）、ＮＫＴ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）。 図１９Ａ及び図１９Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで強力な用量依存性免疫刺激作用を示すことを表す。図１９Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体が、用量依存性様式で強力なインビボ免疫刺激効果を示すことを表す。Ｃ５７ＢＬ／６健常マウスに、抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体の用量を適宜増加させながら毎日投与した。５日目に、脾細胞を単離し、免疫細胞集団をフローサイトメトリーで分析した。リンパ球は、側方散乱及び前方散乱パラメータにしたがってゲート制御され、その後の免疫細胞亜集団は、以下のようにゲート制御された：Ｔｒｅｇ（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ２５＋、ＦｏｘＰ３＋）、ＣＤ８Ｔ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ８＋、ＣＤ１２２＋、ＣＤ２５－）、ＮＫＴ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３＋、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）、ＮＫ細胞（ＣＤ４５＋、ＣＤ３－、ＣＤ４９ｂ＋、ＮＫ１．１＋）。 図２０Ａ及び図２０Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで安全な投与レジメンを示すことを表す。図２０Ａは、Ｃ５７ＢＬ／６健康マウスに、抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体（それぞれ１０μｇ／０．５μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。実験終了後、マウスの体重を測定し、試験開始時の各マウスの体重に対する体重変化率をそれぞれ算出した。各実験群（各群ｎ＝６）の体重（ＢＷ）変化の平均パーセントを示した。 図２０Ａ及び図２０Ｂは、抗ヒトＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）がインビボで安全な投与レジメンを示すことを表す。図２０Ｂは、Ｃ５７ＢＬ／６健康マウスに、抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体（それぞれ２５μｇ／１．２５μｇ）を４日間毎日投与した例を示す。実験終了後、マウスの体重を測定し、試験開始時の各マウスの体重に対する体重変化率をそれぞれ算出した。各実験群（各群ｎ＝６）の体重（ＢＷ）変化の平均パーセントを示した。 図２１Ａ及び図２１Ｂは、抗ＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）が、許容可能な安全性プロファイルでＩ／Ｏ耐性腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を阻害することを示す。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６健常マウスにＢ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞を接種した。５日目に、マウスを実験群にランダム化し（各群ｎ＝１０）、抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体（それぞれ２０μｇ／１μｇ）またはＰＢＳを４日間毎日投与した。図２１Ａは、各実験群の腫瘍体積の変化を示す。試験開始時の各マウスの体重に対する体重変化率を算出した。 図２１Ａ及び図２１Ｂは、抗ＩＬ－２抗体（クローン１７．０４３及びクローン１７．０５４）が、許容可能な安全性プロファイルでＩ／Ｏ耐性腫瘍モデルにおける腫瘍増殖を阻害することを示す。０日目に、Ｃ５７ＢＬ／６健常マウスにＢ１６Ｆ１０メラノーマ腫瘍細胞を接種した。５日目に、マウスを実験群にランダム化し（各群ｎ＝１０）、抗ＩＬ－２抗体／ｈＩＬ－２複合体（それぞれ２０μｇ／１μｇ）またはＰＢＳを４日間毎日投与した。図２１Ｂは、各実験群の体重の変化を示す。試験開始時の各マウスの体重に対する体重変化率を算出した。 図２２Ａ～図２２Ｇは、抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０６９の異なる製剤を分析した結果を示す。図２２Ａは、Ｔ＝０におけるＢＤＧ１７．０６９パラメータを示す。 図２２Ｂは、Ｔ＝０及び４０°Ｃで１週間及び２週間インキュベーションした後の、ＢＤＧ１７．０６９の外観、ｐＨ、タンパク質濃度、及び亜視覚的粒子形成を示す。 図２２Ｃは、Ｔ＝０及び４０°Ｃで１週間及び２週間インキュベーションした後の、ＢＤＧ１７．０６９のＳＥＣ、キャリパーＳＤＳ、及びキャピラリー等電点電気泳動分析を示す。 図２２Ｄは、Ｔ＝０、及び、３００ｒｐｍでの３日間の撹拌後での、ＢＤＧ１７．０６９の外観、ｐＨ、タンパク質濃度、及び準可視粒子の形成を示す。 図２２Ｅは、Ｔ＝０、及び、３００ｒｐｍでの３日間の撹拌後での、ＢＤＧ１７．０６９のＳＥＣ、キャリパーＳＤＳ、及びキャピラリー等電点電気泳動分析を示す。 図２２Ｆは、Ｔ＝０、及び、凍結／融解の５サイクル後の、ＢＤＧ１７．０６９の外観、ｐＨ、タンパク質濃度、及び準可視粒子の形成を示す。 図２２Ｇは、Ｔ＝０、及び、凍結／融解の５サイクル後の、ＢＤＧ１７．０６９のＳＥＣ、キャリパーＳＤＳ、及びキャピラリー等電点電気泳動分析を示す。
本開示は、予め定義された結合エピトープに対し高い親和性（例えば、１２．７ｐＭ－４８ｐＭ）をもってヒトＩＬ－２に結合する、操作された抗ヒトＩＬ－２抗体を提供する。抗体は、ＣＤ２５の結合を完全に阻止しながらも、ＣＤ１２２へのＩＬ－２の結合を残すようにＩＬ－２に結合し、それによって、ＣＤ２５発現細胞（例えば、制御性Ｔ細胞、短命細胞障害性Ｔ細胞、肺内皮細胞、及び血管内皮細胞）と相互作用することなくエフェクター細胞を直接活性化して増殖させることにより、免疫刺激に対する免疫反応を調節する。このように、抗体／ＩＬ－２複合体は、ＮＫ細胞、セントラルメモリーＴ細胞（メモリーＴ細胞）、及びウイルスまたは腫瘍特異的Ｔ細胞などのエフェクター細胞を増殖及び活性化させることによって、ウイルス負荷または腫瘍を排除する強固な免疫応答を促進する一方で、ウイルス／腫瘍の排除にとって重要な短寿命ＣＤ２５＋細胞障害性Ｔ細胞のＩＬ－２活性化誘導細胞死を抑制する。また、抗体／ＩＬ－２複合体は、免疫系の調節機構によって引き起こされる免疫抑制を低減させるであろう。さらに、抗体／ＩＬ－２複合体は、ＩＬ－２と血管及び肺のＣＤ２５発現細胞との望ましくない相互作用を阻止し、それによって、ウイルス性肺感染症のモデルにおいて頻繁に見られるＩＬ－２誘導性血管漏出及びＩＬ－２誘導性肺水腫という重症症候群を予防するであろう。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の操作された抗ＩＬ－２抗体の活性は、それが結合するように設計された、予め定義されたエピトープに依存する。
当業者は、特定の実施形態において、本明細書で使用される「抗ＩＬ－２抗体」なる用語が「抗ヒトＩＬ－２抗体」なる用語と交換可能であり、すべて同一の性質及び意味を有することを理解するであろう。同様に、全体を通して使用されるように、特定の実施形態において、「ＩＬ－２」なる用語は、「ヒトＩＬ－２」用語と交換可能であり、すべて同一の性質及び意味を有する。
一部の実施形態では、本明細書に記載の抗ヒトＩＬ－２抗体は、ＩＬ－２受容体α（ＩＬ－２Ｒα、すなわち、ＣＤ２５）サブユニットとのＩＬ－２の結合を阻害し、したがって、三量体（トリマー）ＩＬ－２Ｒαβγ受容体への結合を阻害する。或る実施形態では、三量体ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒαβγ）とのＩＬ－２の結合を阻害する抗ＩＬ－２抗体は、二量体（ダイマー）ＩＬ－２受容体（ＩＬ－２Ｒβγ）とのＩＬ－２の結合を阻害しない。
図２は、抗ＩＬ－２抗体指向型の免疫療法の概略図である。様々な細胞集団に対するＩＬ－２の標的化は、免疫抑制または免疫活性化に向けた免疫応答の調節に使用することができる。本明細書に開示される抗ヒトＩＬ－２抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ－２の結合を阻害するＩＬ－２エピトープに、高い親和性をもって結合するように設計されている。結果として、ＩＬ－２は、高レベルのＣＤ２５を発現する制御性Ｔ細胞または短寿命ＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞への結合が妨げられるが、エフェクターＴ細胞に優先的に結合することにより、ウイルスまたは細菌の排除を改善するための免疫反応を高める。さらに、ＣＤ２５を発現する内皮細胞へのＩＬ－２の結合も阻害されるので、ＩＬ－２誘導性肺水腫及びＩＬ－２誘導性血管漏出も予防されるであろう。
一実施形態では、本開示は、Ｔ細胞免疫応答を高め、かつＩＬ－２によって誘導される急性肺炎の重度の水腫症候群を予防するように設計された抗ＩＬ－２抗体によって、疾患（例えば、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌）または状態（例えば、これに限定しないが肺水腫などのＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない状態）を治療する方法を提供する。抗ＩＬ－２抗体は、ＩＬ－２受容体のα鎖（ＣＤ２５）へのＩＬ－２の結合を阻害する予め定義されたエピトープにおいて、高い親和性をもってヒトＩＬ－２に特異的に結合する一方で、受容体の主要なシグナル伝達のβ鎖及びγ鎖複合体（ＣＤ１２２／ＣＤ１３２）への結合を温存する。その結果、このような抗体の存在下では、ＩＬ－２は、ウイルス／腫瘍の排除を担う免疫細胞に導かれ、かつ、免疫反応を鈍らせ、または、浮腫を生じさせる細胞から遠ざけられる。このＩＬ－２／抗体免疫複合体の形成により、ＩＬ－２はナイーブＴリンパ球、メモリーＴリンパ球、ＮＫ細胞、ナチュラルキラーＴリンパ球に特異的に結合し、活性化する一方で、制御性Ｔ細胞の活性化、短寿命ＣＤ２５＋細胞障害性Ｔエフェクター細胞のアポトーシスを抑制する。全体として、例えばウイルスまたは腫瘍の排除などの効果的な免疫反応が最終的に得られる。さらに、この治療は、内皮ＣＤ２５発現細胞へのＩＬ－２結合によって引き起こされる毒性を予防することができる。したがって、一実施形態では、ＩＬ－２を、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体の標的とすることは、ウイルスまたは細菌感染症によって引き起こされる呼吸器疾患の有効な治療となるであろう。別の実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体による治療は、内皮ＣＤ２５発現細胞へのＩＬ－２結合によって引き起こされる毒性、例えば肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出を予防するのに有効であろう。さらに重要なことに、特定の病原体（例えば、ウイルス抗原）に依存しない免疫エフェクター細胞の一般的な免疫活性化及び増殖に向けて、ＩＬ－２免疫刺激を強化することは、未知の病原体による将来のウイルスまたは細菌のパンデミックに対して有効な戦略である（図３Ａ及び図３Ｂ）。
一実施形態では、本明細書に開示される方法は、ＳＡＲＳ Ｃｏ－Ｖ２によって引き起こされる感染に対して有用であろう。ＳＡＲＳ Ｃｏ－Ｖ２は、肺細胞のアンジオテンシン変換酵素２に結合して、ウイルスの侵入及び複製を可能にする。肺のウイルス感染に対する免疫応答は、免疫系の自然免疫と獲得免疫との両方から構成されている。多くの呼吸器系ウイルスと同様に、肺からのＳＡＲＳ－ＣｏＶ２の排除は、Ｔ細胞免疫反応に依存すると予想される。サイトカインＩＬ－２はＴ細胞の増殖にとって重要であり、ウイルスに対する免疫反応において重要な役割を果たしている。しかし、ＩＬ－２は、内皮ＣＤ２５発現細胞に結合することにより、刺激促進性（pro-stimulatory）だけでなく、肺水腫及び血管漏出症候群などの副作用を誘発する。
図３Ａ及び３Ｂは、ＣＯＶＩＤ－１９感染の進行と、アジュバント介入としての抗ＩＬ－２療法の可能性とを示す模式図である。図３Ａは、侵入したＳＡＲＳ Ｃｏ－Ｖ２が非重症症状を引き起こし、潜伏期間後に防御免疫反応を誘発することを示している。感染の排除の成功は、感染者の健康状態に依存する。ウイルスに対する免疫反応が弱い人はウイルスの排除が難しいが、一方で、免疫反応が強すぎる人は肺水腫及びサイトカインによるその他の副作用を生じ得る。したがって、免疫反応を高め、肺水腫を予防する戦略が望まれている。高濃度のＩＬ－２は、特に初期のウイルス排除にとって有益であるが、高濃度のＩＬ－２は、ＩＬ－２とＣＤ２５発現内皮細胞との相互作用により、ＩＬ－２誘発性肺水腫及びＩＬ－２誘発性血管漏出を引き起こす可能性がある。図３Ｂは、結合してＣＤ２５／ＩＬ－２相互作用を阻害するように設計された抗ヒトＩＬ－２抗体が、免疫エフェクター細胞の増殖を促進することによりウイルス排除を改善し、内皮細胞上に発現したＣＤ２５へのＩＬ－２結合の負の影響を低減させ、それによって、ＩＬ－２誘導性肺水腫及びＩＬ－２誘導性血管漏出を予防することが予測されることを示している。
図１は、ＩＬ－２の作用機序と免疫反応の制御におけるその二重の役割についての概略図を示している。左のパネルは、ＩＬ－２が、親和性の異なる複数の形態のＩＬ２－Ｒ（ＣＤ２５、ＣＤ１２２、及びＣＤ１３２）と相互作用する３つの結合エピトープ部位（α、β、γ）から構成されていることを示している。右のパネルは、異なるＩＬ－２Ｒ複合体が異なるＴ細胞集団に発現しており、ＩＬ２に対するそれらの親和性の違いにより、ＩＬ－２の局所濃度が低い条件下では免疫抑制が可能になり、ＩＬ－２の局所濃度が上昇すると免疫刺激が可能になることを示している。
以下の詳細な説明では、本明細書に開示される抗体の完全な理解を提供するために、多数の具体的な内容を記載する。しかしながら、本明細書に開示される抗体の調製及び使用は、或る場合には、これらの具体的な内容なしに実施され得ることが、当業者には理解されよう。他の例では、本明細書に示される開示を不明瞭にしないように、周知の方法、手順、及び構成要素について詳細には説明していない。
本出願にわたって、様々な参考文献または出版物が引用されている。これらの文献または刊行物の開示は、本発明が属する技術の状態をより完全に説明するために、その全体が、参照により本願に組み込まれる。
本明細書で使用するとき、「抗体」なる用語は、「免疫グロブリン」なる用語と互換的に使用され、すべて同一の性質及び意味を有する。抗体結合ドメインまたは抗原結合部位は、抗体の断片、または、抗体の１以上の断片の遺伝子的に操作された産物であり得、この断片は、標的抗原との特異的結合に関与する。「特異的結合」とは、目的の抗原に対して選択的に結合し、不要な相互作用や非特異的な相互作用と区別できることを意味する。例えば、平衡解離定数が１０－５Ｍ以下、１０－６Ｍ以下、または１０－７Ｍ以下（平衡解離定数≦１０－５、１０－６、または１０－７Ｍ）である場合、抗体はＩＬ－２エピトープと特異的に結合すると言われている。いくつかの実施形態では、平衡解離定数は、１０－８Ｍ以下または１０－９Ｍ以下（平衡解離定数≦１０－８、または１０－９Ｍ）であってよい。いくつかのさらなる実施形態では、平衡解離定数は、１０－１０Ｍ以下、１０－１１Ｍ以下、または１０－１２Ｍ以下（平衡解離定数≦１０－１０、１０－１１、または１０－１２Ｍ）であってよい。いくつかの実施形態では、平衡解離定数は、１０－５Ｍ～１０－１２Ｍ以下（平衡解離定数≦１０－５Ｍ～１０－１２Ｍ）の範囲内であってもよい。
本明細書で使用するとき、「抗体」なる用語は、これに限定しないが、例えばＩｇＧ、重鎖可変領域（ＶＨ）、軽鎖可変領域（ＶＬ）、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ´）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片、ナノボディ、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及び単一ドメイン抗体を含む、結合特異性を保持する抗体断片を包含する（例えば、Hudson and Souriau, Nature Med. 9: 129-134 (2003)を参照）。また、これらの用語が当該技術分野で一般的に理解されているように、ヒト化抗体、霊長類化抗体、及びキメラ抗体も包含される。
本明細書で使用するとき、「重鎖可変領域（ＶＨ）」なる用語は、「ＶＨドメイン」または「ＶＨ」なる用語と互換的に使用され、すべて同一の意味及び性質を有する。本明細書で使用するとき、「軽鎖可変領域（ＶＬ）」なる用語は、「ＶＬドメイン」または「ＶＬ」なる用語と互換的に使用され、すべて同一の意味及び品質を有する。当業者は、抗体についての「重鎖可変領域（ＶＨ）」すなわち「ＶＨ」が、フレームワーク領域としても知られる隣接するストレッチの間に介在する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む重鎖の断片を包含することを認識するであろう。フレームワーク領域は相補性決定領域（ＣＤＲ）よりも高度に保存されており、相補性決定領域（ＣＤＲ）を支持するための足場を形成する。同様に、当業者は、抗体についての「軽鎖可変領域（ＶＬ）」すなわち「ＶＬ」が、フレームワーク領域の間に介在する３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む軽鎖の断片を包含することも認識するであろう。
本明細書で使用するとき、「相補性決定領域」すなわち「ＣＤＲ」なる用語は、重鎖可変領域（ＶＨ）または軽鎖可変領域（ＶＬ）の超可変領域を意味する。Ｎ末端から順に、重鎖または軽鎖ポリペプチドの各々は、「ＣＤＲ１」、「ＣＤＲ２」、及び「ＣＤＲ３」と表記される３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を有する。多くの抗原－抗体複合体の結晶構造解析により、相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸残基が、結合した抗原との広範な接触を形成し、その中で最も広範な抗原接触は重鎖のＣＤＲ３との接触であることが明らかにされている。このように、相補性決定領域（ＣＤＲ）領域は、抗原結合部位の特異性の主たる要因である。一実施形態では、抗原結合部位は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のそれぞれからの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む、６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
本明細書では、「フレームワーク領域」すなわち「ＦＲ」なる用語は、重鎖可変領域（ＶＨ）または軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ）を形作る４つの隣接したアミノ酸配列を指す。ＦＲ残基の一部は結合した抗原に接触するが、ＦＲ残基は主に、可変領域を抗原結合部位に折り畳む役割を担う。いくつかの実施形態では、可変領域を折り畳む役割を担うＦＲ残基は、相補性決定領域（ＣＤＲ）に対して直接隣接する残基を含む。ＦＲ内では、特定のアミノ残基及び特定の構造的特徴が、非常に高度に保存されている。この点に関して、すべての可変領域配列は、約９０個のアミノ酸残基の内部ジスルフィドループを包含している。可変領域が抗原結合部位に折り畳まれると、相補性決定領域（ＣＤＲ）は、抗原結合面を形成する突出したループモチーフとして表される。一般に、ＦＲには、正確な相補性決定領域（ＣＤＲ）のアミノ酸配列とは関係なく、相補性決定領域（ＣＤＲ）ループの折り畳まれた形状を、特定の「標準的な」構造にする保存構造領域が存在することが認識されている。さらに、或るＦＲ残基は、抗体の重鎖と軽鎖との相互作用を安定化させる非共有結合のドメイン間接触に関与することが知られている。
Ｗｕ及びＫａｂａｔ(Tai Te Wu, Elvin A. Kabat. "An analysis of the sequences of the variable regions of bence jones proteins and myeloma light chains and their implications for antibody complementarity", Journal of Experimental Medicine, 132, 2, 8 (1970); Kabat EA, Wu TT, Bilofsky H, Reid-Miller M, Perry H. "Sequence of proteins of immunological interest" Bethesda: National Institute of Health; 1983. 323 (1983))は、 抗体ペプチド配列のアライメントのパイオニアであり、この点において彼らの貢献は大きかった。第１に、可変ドメイン間の配列の類似性を調べることにより、類似の３次元構造をとり、類似の機能的役割を果たし、隣接する残基と同様の相互作用をし、かつ、同様の化学環境に存在する限り、すべての脊椎動物種のすべての抗体において多かれ少なかれ相同性を有する、対応する残基を特定した。第２に、相同性を有する免疫グロブリン残基に同一の位置番号が割り当てられるペプチド配列番号付けシステムを考案した。当業者は、配列そのもの以外のいかなる実験データにも依存することなく、現在一般にＫａｂａｔナンバリングと呼ばれている番号を、任意の可変ドメイン配列に明確に割り当てることができる。第３に、Ｋａｂａｔ及びＷｕは、Ｋａｂａｔナンバリングされた各配列位置の変動性を計算したが、これは、可変ドメイン配列をアライメントさせたときに、少数または多数のアミノ酸が見つかることを意味する。彼らは、変動性の高い３つの連続した領域が、変動性の低い４つの連続した領域の中に組み込まれていることを確認した。Ｋａｂａｔ及びＷｕは、これらの可変領域を構成する残基を正式に特定し、抗体と抗原との化学的相補性に結び付けて、これらを「相補性決定領域」（ＣＤＲ）と命名した。抗原認識には関与していないが、可変領域の３次元的な折り畳みに関与している残りの可変性の低い領域は、現在では「フレームワーク領域」と呼ばれている。第４に、Ｋａｂａｔ及びＷｕは、現在も維持されており、かつ当業者には周知である、抗体のペプチド及び核酸配列の公開データベースを確立した。
Ｃｈｏｔｈｉａ及び共同研究者(Cyrus Chothia, Arthur M. Lesk. Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. Journal of Molecular Biology, 196, 4, 8 (1987))は、Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）内の特定の部分領域が、アミノ酸配列のレベルでは大きな多様性を有しているにもかかわらず、ほぼ同一のペプチド骨格構造を有していることを見出した。これらの部分領域は、Ｌ１、Ｌ２及びＬ３、または、Ｈ１、Ｈ２、及びＨ３と命名され、「Ｌ」及び「Ｈ」は、それぞれ軽鎖領域及び重鎖領域を示している。これらの領域は、Ｋａｂａｔの相補性決定領域（ＣＤＲ）と重複する境界を有するＣｈｏｔｈｉａの相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれることもある。
最近の研究では、実質的にすべての抗体結合残基が構造的コンセンサス領域に含まれることが示されている(Kunik, V. et al., PloS Computational Biology 8(2): el002388 (February 2012))。いくつかの実施形態では、これらの領域は、抗体結合領域と呼ばれる。これらの領域は、抗体配列からも特定できることが示された。この目的のために、抗体の構造的コンセンサスを特定するための構造的アプローチの実装である「Ｐａｒａｔｏｍｅ」が使用された(Ofran, Y. et al., J. Immunol. 757:6230-6235 (2008))。Ｐａｒａｔｏｍｅによって特定された残基は実質的にすべての抗体結合部位を包含しているが、（一般的に使用される相補性決定領域（ＣＤＲ）特定ツールによって特定された）相補性決定領域（ＣＤＲ）は、そのかなりの部分を見逃している。Ｐａｒａｔｏｍｅによって特定されたが、一般的な相補性決定領域（ＣＤＲ）特定方法では特定されなかった抗体結合残基は、Ｐａｒａｔｏｍｅ－ユニーク残基と呼ばれる。同様に、一般的な相補性決定領域（ＣＤＲ）特定方法では特定されるが、Ｐａｒａｔｏｍｅでは特定されない抗体結合残基は、ＣＤＲ－ユニーク残基と呼ばれる。Ｐａｒａｔｏｍｅ－ユニーク残基は、抗体－抗原相互作用にエネルギー的に大きく寄与しているが、ＣＤＲ－ユニーク残基の寄与はかなり小さいことがわかる。これらの結果は、抗原結合部位の特定をより確実なものにする。
ＩＭＧＴは、international ImMunoGeneTics information systemである（Nucleic Acids Res. 2015 Jan; 43 (Database issue): D413-22. doi: 10.1093/nar/gku1056. Epub 2014 Nov 5 Free article. PMID: 25378316 LIGM:441 and Dev Comp Immunol. 2003 Jan;27(1):55-77)を参照）。ＩＭＧＴは、免疫グロブリン及びＴ細胞受容体可変ドメインとＩｇスーパーファミリーＶ様ドメインについての独自のナンバリングシステムである(Lefranc et al., Dev Comp Immunol. 27: 55-77 (2003))。ＩＭＧＴは、５以上のＩＧ及びＴｃＲ可変領域配列のアライメントに基づき、ＦＲ及び相補性決定領域（ＣＤＲ）のＫａｂａｔ定義、構造データ、及びＣｈｏｔｈｉａの超可変ループの特徴付けを考慮して組み合わせた、これらのＩＧ及びＴｃＲ可変ドメイン配列の統一したナンバリングシステムを提示している。ＩＭＧＴは、抗体の普遍的なナンバリングスキームとして、当該技術分野ではよく知られていると考えられる。
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインにおける潜在的な変異アミノ酸位置の特定には、ＩＭＧＴ解析システムを使用する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインにおける潜在的な変異アミノ酸位置の特定には、Ｐａｒａｔｏｍｅ解析システムを使用する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインにおける潜在的な変異アミノ酸位置の特定には、Ｋａｂａｔ解析システムを使用する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインにおける潜在的な変異アミノ酸位置の特定には、Ｃｌｏｔｈｉａ解析システムを使用する。
重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインに存在する変異アミノ酸位置の説明において、いくつかの実施形態では、ＩＭＧＴナンバリングが使用される。重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインに存在する変異アミノ酸位置の説明において、いくつかの実施形態では、Ｐａｒａｔｏｍｅナンバリングが使用される。重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインに存在する変異アミノ酸位置の説明において、いくつかの実施形態では、Ｋａｂａｔナンバリングが使用される。重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインに存在する変異アミノ酸位置の説明において、いくつかの実施形態では、Ｃｌｏｔｈｉａナンバリングが使用される。
抗原結合配列は、通常、抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）内に配置される。例えば、これらの重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を操作することにより、例えば異なる抗原または同一の抗原の異なるエピトープに結合する抗体またはその断片を作製する、新たな結合部位を作製してもよい。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されているように、重鎖可変領域（ＶＨ）の配列、重鎖可変領域（ＶＨ）の配列、またはその両方を操作することにより、第２の抗原についての新たな結合部位が形成される。
抗体は、これに限定しないが、相補性決定領域（ＣＤＲ）、可変領域（Ｆｖ）、重鎖可変領域（ＶＨ）ドメイン、軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメイン、単鎖可変領域（ｓｃＦｖ）、及びＦａｂ断片などの様々なドメインを有して、あるいは様々な形態で存在していてもよい。
当業者であれば、ｓｃＦｖは、短いリンカーペプチドによって連結された免疫グロブリンの重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む融合ポリペプチドであり、リンカーは、例えば、１０－約２５のアミノ酸を有し得ることを理解するであろう。
また、当業者であれば、抗体に関する「Ｆａｂ」という用語は、一般に、単一の重鎖の可変領域及び第１定常領域にジスルフィド結合によって結合した単一の軽鎖（可変領域及び定常領域の両方）からなる抗体の部分を包含し、一方、Ｆ（ａｂ′）２は、重鎖可変領域（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインを含む軽鎖の断片を含むことを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体を含む、抗体分子全体を包含する。いくつかの実施形態では、抗体は、これに限定しないが、重鎖可変領域（ＶＨ）断片、軽鎖可変領域（ＶＬ）断片、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ´）２断片、ｓｃＦｖ断片、Ｆｖ断片、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、及びテトラボディなどの、結合特異性を保持する１以上の抗体断片を包含する。
操作された抗ＩＬ－２抗体
一実施形態では、本開示は、親の抗ＩＬ－２抗体にアミノ酸変異を導入することによって得られる操作された抗ＩＬ－２抗体を提供する。一実施形態では、１以上のアミノ酸変異は、ＣＤＲ領域に導入される。別の実施形態では、１以上のアミノ酸変異は、フレームワーク（ＦＲ）領域内に導入される。さらに別の実施形態では、アミノ酸変異は、ＣＤＲ領域とフレームワーク（ＦＲ）領域との両方に導入される。当業者であれば、当該技術分野で知られている様々な標準的技術を採用することにより、抗ＩＬ－２抗体にアミノ酸変異を導入した後、得られた改変された抗体をＩＬ－２への結合の変化について試験することは容易であろう。標準的技術を用いることもできるが、新たに作成された抗体の結合パターンは予測できないので、機能性を判断するためには分析が必要である。
或る実施形態では、本開示は、適切な条件下で二量化され得るＶＨ及びＶＬドメインを含むポリペプチドを提供する。例えば、ＶＨ及びＶＬドメインを、適切な緩衝液中で結合させ、疎水性相互作用などの適切な相互作用により二量化することができる。別の実施形態では、ＶＨ及びＶＬドメインの二量化を促進することができる酵素、及び／または補因子を含む適切な緩衝液中でＶＨ及びＶＬドメインを結合してもよい。別の実施形態では、ＶＨ及びＶＬドメインは、適切な試薬、及び／または触媒の存在下で互いに反応させることができる適切な媒体中で結合されてもよい。
或る実施形態では、ＶＨ及びＶＬドメインは、例えば、これに限定しないが、定常領域、ヒンジ領域、リンカー領域、Ｆｃ領域、またはジスルフィド結合領域、またはそれらの任意の組み合わせなどの、より長いポリペプチド配列内に含まれる。定常ドメインとは、免疫グロブリン分子の定常部分の免疫グロブリンフォールドユニットであり、定常領域のドメインとも呼ばれる（例えば、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３、ＣＨ４、Ｃｋ、Ｃｌ）。いくつかの実施形態では、より長いポリペプチドは、例えば、本明細書において生成されたポリペプチドがダイアボディまたはトリアボディを形成するために使用される場合、本明細書に開示された方法によって生成されたＶＨ及びＶＬドメインの一方または両方の複数のコピーを含んでいてよい。
いくつかの実施形態では、Ｆｃ領域は、Ｆｃ－ガンマ結合、すなわちＦｃγ受容体（ＦｃγＲｓ）への結合を減少させる少なくとも１つの突然変異を含む。いくつかの実施形態では、結合の減少は結合の消滅であり、Ｆｃγ受容体への結合が検出可能である。いくつかの実施形態では、結合の減少は、Ｆｃγ受容体への結合親和性を減少させる。いくつかの実施形態では、結合の減少は、Ｆｃγ受容体へのオンレートを低下させる。いくつかの実施形態では、結合の減少は、Ｆｃγ受容体へのオフレートを低下させる。いくつかの実施形態では、突然変異は、ＬＡＬＡ変異としても知られているＬ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、Ｆｃ－ガンマ結合を減少させる突然変異は、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ突然変異に加えて、Ｐ３２９Ｇ突然変異を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される抗体は、Ｆｃγ受容体への結合を減少させる突然変異を含む重鎖を含む。
一実施形態では、本開示は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、操作された（または、改変された）抗ＩＬ－２抗体を提供する。一実施形態では、操作された抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ´）２を含み得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブクラスであり得る。別の実施形態では、操作された抗体は、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体を含み得る。
一実施形態では、本開示は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、操作された（または、改変された）抗ＩＬ－２抗体を提供する。一実施形態では、操作された抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ´）２を含み得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブクラスであり得る。別の実施形態では、操作された抗体は、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体を含み得る。
一実施形態では、本開示は、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または、配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、操作された（または、改変された）抗ＩＬ－２抗体を提供する。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０及び１１の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１２及び１３の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１４及び１５の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１６及び１７の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１８及び１９の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号２０及び２１の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号２２及び２３の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号２４及び２５の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号２６及び２７の配列を含む。一実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号３６及び３７の配列を含む。
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）含む単離抗ＩＬ－２抗体であって、重鎖可変領域（ＶＨ）は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域（ＶＬ）は、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）のアミノ酸配列は、（ａ）ＨＣＤＲ１が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４１のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号４２のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号４３のアミノ酸配列を含むか、（ｂ）ＨＣＤＲ１が配列番号４４のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号４９のアミノ酸配列を含むか、（ｃ）ＨＣＤＲ１が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号５２のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５３のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号５４のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号５５のアミノ酸配列を含むか、（ｄ）ＨＣＤＲ１が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号５８のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号５９のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、または、（ｅ）ＨＣＤＲ１が配列番号６２のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ２が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、ＨＣＤＲ３が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ１が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、ＬＣＤＲ２が配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ、ＬＣＤＲ３が配列番号６７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列は、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号３６のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号３７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、抗体は、重鎖配列と、軽鎖配列とを含み、重鎖配列及び軽鎖配列は、配列番号６８に記載の重鎖配列及び配列番号６９に記載の軽鎖配列、配列番号７０に記載の重鎖配列及び配列番号７１に記載の軽鎖配列、または、配列番号７２に記載の重鎖配列及び配列番号７３に記載の軽鎖配列である。
一実施形態では、操作された抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ´）２であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブクラスであり得る。別の実施形態では、操作された抗体は、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体の一部であり得る。
一実施形態では、本開示はまた、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列が、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６に記載されたアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列を提供する。別の実施形態では、本開示はまた、上記のポリヌクレオチド配列を含むベクターを提供する。当業者であれば、本明細書に開示されるアミノ酸配列を考慮すると、アミノ酸配列をコードするベクターまたはプラスミドを容易に構築することができるであろう。別の実施形態では、本開示はまた、本明細書で提供されるベクターを含む宿主細胞を提供する。当業者であれば、用途や実験条件に応じて適切な宿主細胞を採用し、上記のポリヌクレオチド配列を担持及び／または発現させることは容易であろう。
一実施形態では、本開示はまた、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列が、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７に記載されたアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列を提供する。別の実施形態では、本開示はまた、上記のポリヌクレオチド配列を含むベクターを提供する。当業者であれば、本明細書に開示されたアミノ酸配列を考慮すると、アミノ酸配列をコードするベクターまたはプラスミドを容易に構築することができるであろう。別の実施形態では、本開示はまた、本明細書で提供されるベクターを含む宿主細胞を提供する。当業者であれば、用途や実験条件に応じて適切な宿主細胞を採用し、上記のポリヌクレオチド配列を担持及び／または発現させることは容易であろう。
本明細書に開示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）の配列を考慮すると、当業者であれば、当該技術分野で知られている標準的な技術を採用し、抗ＩＬ－２ｓｃＦｖを構築することは容易であろう。一実施形態では、そのような抗ＩＬ－２ｓｃＦｖをコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号１－５のうちの１つ、または配列番号３１－３５のうちの１つの配列を有し得る。
或る実施形態では、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のいずれかのアミノ酸配列に記載された重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のいずれかのポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のいずれかのポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む。
或る実施形態では、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする本明細書に開示される単離ポリヌクレオチド配列は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のいずれかのアミノ酸配列に記載された軽鎖可変領域（ＶＬ）アミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態では、ベクターは、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のいずれかのポリヌクレオチド配列を含む。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のいずれかのポリヌクレオチド配列を含むベクターを含む。いくつかの実施形態では、単離ポリヌクレオチド配列は抗ＩＬ－２ｓｃＦｖをコードし、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている。いくつかの実施形態では、ベクターは抗ＩＬ－２ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列を含み、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、抗ＩＬ－２ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列を含むベクターを含み、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている。
別の実施形態では、本開示はまた、単離抗ＩＬ－２抗体を提供し、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号３４－４６、それぞれ配列番号３４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であり得る。一実施形態では、本開示はまた、上記の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を包含する。
別の実施形態では、本開示はまた、単離抗ＩＬ－２抗体を提供し、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一実施形態では、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であり得る。一実施形態では、本開示はまた、上記の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を包含する。
別の実施形態では、本開示はまた、単離抗ＩＬ－２抗体を提供し、抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）と、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）とを含む。一実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む。一実施形態では、抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４であり得る。一実施形態では、本開示はまた、上記の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物を包含する。
医薬組成物
いくつかの実施形態では、治療的使用のための組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の組成物は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体と、薬学的に許容される担体とを含む。
本明細書で使用するとき、「組成物」及び「医薬組成物」なる用語は、いくつかの実施形態では、すべて同一の性質及び意味を有し、互換的に使用され得る。いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるような状態または疾患の治療のための医薬組成物が本明細書に開示される。
いくつかの実施形態では、併用療法において使用するための医薬組成物が本明細書に開示される。
別の実施形態では、対象における疾患または状態の治療に使用するための組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を含む。いくつかの実施形態では、状態は、ＩＬ－２誘導性状態を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２誘導性状態は、ＩＬ－２誘導性肺水腫またはＩＬ－２誘導性血管漏出を含む。
本明細書に開示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ポリペプチドは、単独で、または担体、すなわち薬学的に許容される担体と組み合わせて、対象（例えば、ヒトまたは動物）に投与され得る。薬学的に許容されるとは、生物学的またはその他の点で望ましくない材料、すなわち、望ましくない生物学的効果を引き起こしたり、その材料が含まれる医薬組成物の他の成分のいずれとも有害な方法で相互作用したりすることなく、対象に投与され得る材料を意味する。当業者にはよく知られているように、担体は、本明細書に開示されるポリペプチドのあらゆる分解を最小限に抑え、かつ、対象におけるあらゆる有害な副作用を最小限に抑えるように選択される。医薬組成物は、医薬分野において周知の方法論によって調製されてよい。
本明細書に開示されるポリペプチドを含む上記の医薬組成物は、局所治療が望まれるか、全身治療が望まれるかに応じて、任意の適切な方法で（例えば、哺乳動物、細胞、または組織に）投与され得る。例えば、組成物は、局所的に（例えば、眼内、膣内、直腸内、鼻腔内、経皮など）、経口的に、吸入によって、または非経口的に（静脈内注入若しくは皮下、胸腔内、腹腔内、皮内、または、筋肉内注射によるものを含む）、投与され得る。局所的な鼻腔内投与とは、鼻孔の一方または両方を通して鼻及び鼻腔内に組成物を送達することを指す。組成物は、噴霧機構若しくは液滴機構によって、またはエアロゾル化によって送達され得る。送達はまた、挿管によって呼吸器系（例えば、肺）の任意の領域に向けることができる。あるいは、投与は、腫瘍内投与、例えば、局所注射または静脈内注射であり得る。
組成物が非経口的に投与される場合、投与は、一般に、注射によって行われる。注射剤は、液体溶液または懸濁液、注射前に液体中に懸濁するのに適した固体形態、あるいはエマルションとして、従来の形態で調製され得る。さらに、経口投与では、一定の投与量を維持するために、徐放性または持続性放出システムの調製を含み得る。
いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または、配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインを含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインと、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインと、を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０１４、ＢＤＧ１７．０２３、ＢＤＧ１７．０３８、ＢＤＧ１７．０４３、ＢＤＧ１７．０５３、ＢＤＧ１７．０５４、ＢＤＧ１７．０６６、ＢＤＧ１７．０６７、及びＢＤＧ１７．０６９のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０１４を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０２３を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０３８を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０４３を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０５３を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０５４を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０６６を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０６７を含む。いくつかの実施形態では、組成物は抗ＩＬ－２抗体を含み、抗ＩＬ－２抗体は抗ＩＬ－２抗体クローンＢＤＧ１７．０６９を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＩＬ－２抗体と、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＩＬ－２抗体と、ＩＬ－２と、薬学的に許容される担体とを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体と、薬学的に許容される担体とを含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２は、同一の組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、組成物は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２は、異なる組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせ、またはその組成物は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせ、またはその組成物は、同時に投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせ、またはその組成物の投与は、ＩＬ－２またはその組成物の投与の前の、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物の投与を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせ、またはその組成物の投与は、ＩＬ－２またはその組成物の後の、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物の投与を含む。
当業者は、「医薬組成物」が、本明細書に記載される１以上の活性成分と、生理学的に適切な担体及び賦形剤などの他の化学成分との調製物を包含し得ることを理解するであろう。医薬組成物の目的は、これに限定しないが抗体または化合物などの活性剤の生物に対する投与を容易にすることである。
いくつかの実施形態では、免疫系が弱った対象を治療する治療用途のための医薬組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を患っている対象を治療する治療用途のための医薬組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、免疫系が弱った対象を治療するための併用療法の一部として使用するための医薬組成物が本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を患っている対象を治療するための併用療法の一部として使用するための医薬組成物が本明細書に開示される。
当業者は、「生理学的に許容される担体」、「薬学的に許容される担体」、「生理学的に許容される賦形剤」、及び「薬学的に許容される賦形剤」という語句は、互換的に使用されてもよく、生物に著しい刺激を与えず、投与活性成分の生物活性及び特性を無効にしない担体、賦形剤または希釈剤を包含し得ることを理解するであろう。
当業者は、「賦形剤」が、活性成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性物質を包含し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、賦形剤には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖及び様々な種類のデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、及びポリエチレングリコールが含まれる。
薬物の製剤化及び投与のための技術は、ペンシルバニア州イーストン所在のMack Publishing Co.社による「Remington's Pharmaceutical Sciences」の最新版に記載されており、これは参照により本明細書に組み込まれる。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、治療用組成物を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、治療効果を有する。
併用療法
いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物は、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用される。いくつかの実施形態では、「免疫チェックポイント阻害剤」なる用語は、チェックポイントタンパク質の機能を阻害することができる任意の化合物または分子を包含する。いくつかの実施形態では、「免疫チェックポイント阻害剤」なる用語は、免疫チェックポイントタンパク質を標的とする任意の化合物または分子を包含する。当業者は、「免疫チェックポイント」が、刺激されると免疫学的刺激に対する免疫応答を減衰させることができる免疫系の重要な調節因子であることを理解するであろう。チェックポイント阻害剤は、阻害性チェックポイントをブロックすることにより、免疫系機能を回復させることができる。いくつかの実施形態では、１以上のチェックポイント阻害剤は、免疫チェックポイント阻害剤を含む。
当業者は、「免疫チェックポイント阻害剤」（ＩＣＩ）、「チェックポイント阻害剤」などの用語が、本明細書において互換的に使用され、すべて同一の性質及び意味を有しており、免疫チェックポイント阻害剤は、免疫系の活性または制御機構を阻害する化合物を包含することを理解するであろう。免疫系チェックポイント、又は免疫チェックポイントは、一般に、自己免疫寛容を維持するために、または付随的な組織損傷を最小限に抑えるために生理的免疫応答の期間及び大きさを調節するために作用する免疫系における阻害経路である。チェックポイント阻害剤は、経路内のタンパク質の活性を阻害することにより、免疫系チェックポイントを阻害することができる。
免疫チェックポイント阻害剤の対象は、これに限定しないが、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ７３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）、ＣＤ３９、ＩＬＤＲ２、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、及びＶＴＣＮ－１を含む。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体療法は、免疫チェックポイント阻害剤と組み合わせて使用され、免疫チェックポイント阻害剤の標的は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ７３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）、ＣＤ３９、ＩＬＤＲ２、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＶＴＣＮ－１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ７３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）、ＣＤ３９、ＩＬＤＲ２、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、またはＶＴＣＮ－１のうちの１以上に結合して、ブロックまたは阻害する抗体もしくはその抗原結合断片、他の結合タンパク質、生物治療物質、または小分子を含む。例示的なチェックポイント阻害剤には、これに限定しないが、以下の表１に列挙されているものが含まれる。
Figure 2023506093000002
Figure 2023506093000003
Figure 2023506093000004
いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤＬ－１阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＴＬＡ－４阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＧＩＴ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＴＩＭ－３阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、Ｂ７－Ｈ３阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ７３阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＬＡＧ３阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ２７阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ７０阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、４－１ＢＢ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＧＩＴＲ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＯＸ４０阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＣＤ３９阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＩＬＤＲ２阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＶＩＳＴＡ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＢＴＬＡ阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＶＴＣＮ－１阻害剤を含む。
いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤＬ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＣＤ７０阻害剤、４－１ＢＢ阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、ＩＬＤＲ２阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＶＴＣＮ－１阻害剤の組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤＬ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＣＤ７０阻害剤、４－１ＢＢ阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、ＩＬＤＲ２阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、及びＶＴＣＮ－１阻害剤から選択された少なくとも２つのチェックポイント阻害剤を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の併用療法において使用するための医薬組成物は、有効量の、本明細書に記載のチェックポイント阻害剤と、薬学的に許容される担体と、を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、チェックポイント阻害剤と、薬学的に許容される担体と、を含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される組成物は、チェックポイント阻害剤と、薬学的に許容される担体との組み合わせを含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤＬ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＣＤ７０阻害剤、４－１ＢＢ阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、ＩＬＤＲ２阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＶＴＣＮ－１阻害剤を含むチェックポイント阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤＬ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＣＤ７０阻害剤、４－１ＢＢ阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、ＩＬＤＲ２阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、またはＶＴＣＮ－１阻害剤から選択された少なくとも２つのチェックポイント阻害剤と、薬学的に許容される担体と、を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤＬ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＣＤ７０阻害剤、４－１ＢＢ阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、ＩＬＤＲ２阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、ＶＴＣＮ－１阻害剤から選択された少なくとも２つのチェックポイント阻害剤を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－１阻害剤、ＰＤＬ－１阻害剤、ＣＴＬＡ－４阻害剤、ＴＩＧＩＴ阻害剤、ＴＩＭ－３阻害剤、Ｂ７－Ｈ３阻害剤、ＣＤ７３阻害剤、ＬＡＧ３阻害剤、ＣＤ２７阻害剤、ＣＤ７０阻害剤、４－１ＢＢ阻害剤、ＧＩＴＲ阻害剤、ＯＸ４０阻害剤、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）阻害剤、ＣＤ３９阻害剤、ＩＬＤＲ２阻害剤、ＶＩＳＴＡ阻害剤、ＢＴＬＡ阻害剤、及びＶＴＣＮ－１阻害剤から選択された少なくとも２つのチェックポイント阻害剤と、薬学的に許容される担体と、を含む。
或る実施形態では、本明細書に記載の治療方法において２以上のチェックポイント阻害剤が使用される場合、各チェックポイント阻害剤は、別々の組成物内に含まれる。或る実施形態では、本明細書に記載の治療方法において２以上のチェックポイント阻害剤が使用される場合、チェックポイント阻害剤は、同一の組成物内に含まれる。
いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載の抗ＩＬ－２抗体またはその組成物、及び、チェックポイント阻害剤またはその組成物の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載の抗ＩＬ－２抗体またはその組成物、及びＩＬ－２と、チェックポイント阻害剤またはその組成物と、の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載のＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体またはその組成物と、チェックポイント阻害剤またはその組成物と、の使用を含む。
いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載の抗ＩＬ－２抗体またはその組成物、及び、少なくとも２つのチェックポイント阻害剤またはその組成物の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載の抗ＩＬ－２抗体またはその組成物、及びＩＬ－２と、少なくとも２つのチェックポイント阻害剤またはその組成物と、の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載のＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体またはその組成物と、少なくとも２つのチェックポイント阻害剤またはその組成物と、の使用を含む。
いくつかの実施形態では、併用療法は、本明細書に記載されるように、１以上のチェックポイント阻害剤を含む第２の組成物を含む。
併用療法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２は、チェックポイント阻害剤と同一の組成物に含まれる。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２は、互いに、及び、チェックポイント阻害剤とは異なる組成物に含まれる。
併用療法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物と、チェックポイント阻害剤またはその組成物と、の投与の順序は、どのような順序であってもよい。併用療法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物と、ＩＬ－２またはその組成物と、チェックポイント阻害剤またはその組成物と、の投与の順序は、どのような順序であってもよい。例えば、これに限定しないが、抗ＩＬ－２抗体は、チェックポイント阻害剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与される。同様に、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせは、チェックポイント阻害剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与される。いくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、少なくとも２つのチェックポイント阻害剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与される。同様に、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせは、少なくとも２つのチェックポイント阻害剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与される。
いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤との併用療法の投与は、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物と、チェックポイント阻害剤との同時投与を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤との併用療法の投与は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２またはそれらの組成物と、チェックポイント阻害剤との同時投与を含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤との併用療法の投与は、チェックポイント阻害剤の投与前に、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物を予め投与することを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤との併用療法の投与は、チェックポイント阻害剤の投与前に、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、またはそれらの組成物を予め投与することを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤との併用療法の投与は、チェックポイント阻害剤の投与後に、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物を遅れて投与することを含む。いくつかの実施形態では、チェックポイント阻害剤との併用療法の投与は、チェックポイント阻害剤の投与後に、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、またはそれらの組成物を遅れて投与することを含む。
いくつかの実施形態では、併用療法は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＩＬ－２抗体と、チェックポイント阻害剤と、の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体と、チェックポイント阻害剤と、の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、配列番号１０及び１１、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体と、チェックポイント阻害剤と、の使用を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインを含む抗ＩＬ－２抗体と、チェックポイント阻害剤と、の使用を含み、重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインは、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインを含む抗ＩＬ－２抗体と、チェックポイント阻害剤と、の使用を含み、軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインは、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、重鎖可変領域（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインを含む抗ＩＬ－２抗体と、の使用を含み、重鎖可変領域（ＶＨ）ドメインは、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含み、軽鎖可変領域（ＶＬ）ドメインは、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３領域を含む。
いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０１４、ＢＤＧ１７．０２３、ＢＤＧ１７．０３８、ＢＤＧ１７．０４３、ＢＤＧ１７．０５３、ＢＤＧ１７．０５４、ＢＤＧ１７．０６６、ＢＤＧ１７．０６７、及びＢＤＧ１７．０６９のいずれかを含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０１４を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０２３を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０３８を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０４３を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０５３を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０５４を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０６６を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０６７を含む。いくつかの実施形態では、併用療法は、チェックポイント阻害剤と、抗ＩＬ－２抗体との使用を含み、抗ＩＬ－２抗体は、クローンＢＤＧ１７．０６９を含む。
配合
抗ＩＬ－２抗体、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせ、またはチェックポイント阻害剤を含む本明細書に開示の医薬組成物は、例えば、等張水溶液、懸濁液、乳濁液、分散液、または粘性組成物などの無菌液体製剤として都合よく提供することができ、これらは選択されたｐＨに緩衝されてもよい。液体製剤は、通常、ゲル、その他の粘性組成物、及び固体組成物に比べて調整しやすい。さらに、液体組成物は、特に注射による投与がいくらか便利である。一方、粘性組成物は、特定の組織との接触時間をより長くするために、適切な粘度範囲内で配合することができる。液体または粘性組成物は、担体を含むことができ、これは、例えば、水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの適切な混合物を含む溶媒または分散媒であり得る。
無菌注射液は、本明細書に記載され、本明細書に開示される方法の実施において利用される抗ＩＬ－２抗体、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との組み合わせ、またはチェックポイント阻害剤を、必要に応じて、様々な量の他の成分とともに必要量の適切な溶媒に組み込むことによって調製することができる。このような配合物は、滅菌水、生理食塩水、グルコース、デキストロースなどの適切な担体、希釈剤、または賦形剤と混和されてもよい。配合物はまた、凍結乾燥することができる。配合物は、投与経路や所望の調整に応じて、湿潤剤、分散剤、または、乳化剤（例えば、メチルセルロース）、ｐＨ緩衝剤、ゲル化剤もしくは粘度向上剤、保存剤、香料、着色剤などの補助物質を含有することができる。過度の実験なしに、適切な調製物を調整するために、参照により本明細書に組み込まれる「"REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE"、第17版、1985年」などの標準テキストを参照してもよい。
抗菌防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、及び緩衝剤を含む、配合物の安定性や無菌性を高める様々な添加剤を添加することができる。微生物の作用の防止は、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸などの様々な抗菌剤及び抗真菌剤によって保証することができる。注射用医薬品の吸収は、吸収遅延剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンなどの使用により、延長することができる。
或る実施形態では、「医薬組成物」、「組成物」及び「配合物」なる用語は、同一の意味及び品質を有し、互換的に使用される。
本明細書に記載の組成物または配合物は、等張性であり得る。すなわち、血液及び涙液と同じ浸透圧を有し得る。本明細書に開示される組成物の所望の等張性は、塩化ナトリウム、あるいは、デキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、プロピレングリコール、または他の無機もしくは有機溶質などの、その他の薬学的に許容される薬剤を用いて達成される。塩化ナトリウムは、好ましくは、特にナトリウムイオンを含む緩衝剤に対して使用される。
組成物の粘度は、必要に応じて、薬学的に許容される増粘剤を用いて、選択されたレベルに維持することができる。メチルセルロースは、容易かつ経済的に入手可能であり、作業が容易であるので、好ましい。
他の適切な増粘剤としては、例えば、キサンタンガム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルボマーなどが挙げられる。増粘剤の好ましい濃度は、選択された増粘剤に依存する。重要な点は、選択された粘度を達成する量を使用することである。明らかに、適切な担体及び他の添加物の選択は、正確な投与経路、及び特定の剤形（例えば、液体剤形など）の性質（例えば、組成物が、溶液、懸濁液、ゲル、あるいは、時限放出製剤または液体充填製剤などの別の液体剤形に配合されるべきかどうか）に依存する。
いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～７．０のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～６．５のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～５．５のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．５～６．０のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．５～６．５のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．５のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ６．０のｐＨ値になるように配合される。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ６．５のｐＨ値になるように配合される。
いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、緩衝液は、薬学的に許容される緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝液またはクエン酸緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ヒスチジン緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、クエン酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、ヒスチジン緩衝液及びクエン酸緩衝液から選択される緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、ヒスチジン緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、クエン酸緩衝液を含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、スクロース、メチオニン、またはＰＳ８０のうちの少なくとも１つ、または、それらの任意の組み合わせをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、スクロースをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、メチオニンをさらに含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＰＳ８０をさらに含む。
いくつかの実施形態では、組成物は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体を含み、約ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、かつ、ヒスチジン緩衝液及びクエン酸緩衝液から選択される緩衝液を含む。いくつかの実施形態では、組成物は、ＩＬ－２をさらに含む。
当業者は、組成物または製剤の成分は、化学的に不活性であり、本明細書に開示される方法において使用するために、本明細書に記載される初期アポトーシス細胞集団の生存率または効果に影響を与えないように選択されるべきであることを認識するであろう。このことは、化学的及び薬学的原理または問題における当業者にとって問題ない。すなわち、本開示及び本明細書に引用した文書から、標準的なテキストを参照することによって、または（過度の実験を伴わない）簡単な実験によって、問題は容易に回避され得る。
使用方法
一実施形態では、本開示は、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）を作製する方法を提供し、本方法は、重鎖可変領域（ＶＨ）をコードするベクターの発現を促す条件下で宿主細胞を培養するステップを含み、これによって、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）が作製される。
一実施形態では、本開示は、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）を作製する方法を提供し、本方法は、軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードするベクターの発現を促す条件下で宿主細胞を培養するステップを含み、これによって、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）が作製される。
本明細書に開示される重鎖可変領域（ＶＨ）及び／または軽鎖可変領域（ＶＬ）ポリペプチドは、治療方法において使用される。一実施形態では、本開示のポリペプチドは、例えば、本明細書に記載されるような免疫細胞の分化活性化のための免疫療法剤として使用することができる。
所望の効果を引き出すために必要な本発明のポリペプチドまたはその組成物の正確な量は、対象の種、年齢、性別、体重及び全身状態、特定のポリペプチド、投与経路、並びに、レジメンに他の薬剤が含まれているかどうかに応じて、対象ごとに異なる。したがって、すべての組成物について正確な量を特定することはできない。しかし、当業者であれば、日常的な実験により適切な量を決定することができる。投与量は様々であり、ポリペプチドは、１日１回以上（例えば、２回以上、３回以上、４回以上、または５回以上）の投与で、１日以上にわたって投与することができる。抗体の適切な用量を選択する際のガイダンスは、文献で容易に見つけることができる。
本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体の使用方法のいくつかの実施形態では、対象は、哺乳類の対象を含む。いくつかの実施形態では、対象は、ヒトの対象を含む。いくつかの実施形態では、対象は、免疫力低下問題を有する対象を含む。いくつかの実施形態における免疫力が低下した対象の治療は、予防治療を含む。
一実施形態では、本開示は、対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法であって、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を調製するステップと、組成物を対象に投与し、それによって、対象における免疫細胞の分化成長を促進するステップと、を含む方法を提供する。一実施形態では、本開示は、対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法であって、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製するステップと、組成物を対象に投与し、それによって、対象における免疫細胞の分化成長を促進するステップと、を含む方法を提供する。一実施形態では、対象は、動物またはヒトであり得る。一実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞であり得る。
いくつかの実施形態では、対象における疾患または状態を治療する方法であって、本開示の抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を対象に投与するステップを含み、抗体が、免疫細胞のサブセットの分化成長を促進し、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響を低減させ、それによって、対象における疾患または状態を治療する、方法が開示される。いくつかの実施形態では、本開示の疾患を治療する方法は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む組成物の使用を含む。いくつかの実施形態では、疾患を治療する方法は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を治療するステップを含む。いくつかの実施形態では、状態を治療する方法は、免疫系が弱った状態を治療するステップと、免疫系を予防的に高めることを含む。
疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、状態は、対象における癌の可能性を増加させる遺伝的素因を含む。いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含む。いくつかの実施形態では、癌の可能性を増加させる遺伝的素因は、腫瘍抑制遺伝子、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）遺伝子、またはそれらの組み合わせの突然変異を含む。
非限定的な例として、これに限定しないが、例えば遺伝性乳癌及び卵巣癌（ＨＢＯＣ）症候群、リンチ症候群（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）、及びリ・フラウメニ症候群などの多くの遺伝性癌が当該技術分野で知られている。
いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、ＨＢＯＣの可能性を増加させる。ＨＢＯＣは、ＲＡＣ１及びＢＲＡＣ２遺伝子における突然変異と関連する。ＨＢＯＣは、乳癌だけでなく、これに限定しないが、例えば卵管癌、原発性腹膜癌、男性乳癌、膵臓癌、及び前立腺癌などの様々な癌と関連する。いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、乳癌、卵巣癌、卵管癌、原発性腹膜癌、男性乳癌、膵臓癌、または前立腺癌のいずれか、あるいはそれらの組み合わせの可能性を増加させる。
いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、遺伝性非ポリポーシス大腸癌（ＨＮＰＣＣ）の可能性を増加させる。ＨＮＰＣＣは、これに限定しないが、例えばＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＭＳ１及びＰＭＳ２などの遺伝子における突然変異と関連する。ＨＮＰＣＣは、子宮内膜癌、並びに、卵巣、胃、小腸、膵臓、腎臓、脳、尿管、及び胆管の癌の発生リスクの高さと関連する。いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、遺伝性非ポリポーシス大腸癌、卵巣癌、胃癌、小腸癌、膵臓癌、腎臓癌、脳癌、尿管癌、及び胆管癌のいずれかの可能性を増加させる。
いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、リ・フラウメニ症候群の可能性を増加させる。リ・フラウメニ症候群は、これに限定しないが、ＴＰ５３及びＣＨＥＫ２、またはその組み合わせなどの遺伝子において生じる。リ・フラウメニ症候群は、肉腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、白血病、脳（中枢神経系）がん、副腎皮質癌、及び乳癌、またはそれらの組み合わせなどの癌と関連する。いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、肉腫、骨肉腫、軟部組織肉腫、白血病、脳（中枢神経系）がん、副腎皮質癌、及び乳癌のいずれか、またはそれらの組み合わせの可能性を増加させる。
いくつかの実施形態では、対象において治療される状態は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含む、遺伝的素因を有する対象を治療することを含み、遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＴＰ５３、ＣＨＥＫ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
本明細書に記載されるように、開示されたＩＬ－２と抗ＩＬ－２抗体との複合体は、メモリー表現型エフェクターＴ細胞（ＭＰ）ＣＤ８＋及びＮＫ細胞の増殖を誘導する顕著な効果を示したが、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇに対する影響は非常に小さかった。したがって、本明細書に開示される操作された抗ＩＬ－２抗体は、免疫細胞集団の調整、及び、特定の免疫エフェクター細胞の分化増殖を誘導において有用であろう。一実施形態では、免疫エフェクター細胞のそのような分化増殖は、免疫系の強固な活性化をもたらし、腫瘍の治療に有用である。いくつかの実施形態では、治療は、固形腫瘍の治療を含む。いくつかの実施形態では、治療は、非固形腫瘍の治療を含む。いくつかの実施形態では、治療は、これに限定しないが、例えばメラノーマ、腎細胞癌、小細胞肺癌、または他の癌の状態などの固形腫瘍または非固形腫瘍の治療を含む。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、ウイルス感染症または細菌感染症の治療に有用である。別の実施形態では、本明細書に開示される方法は、例えば肺水腫またはＩＬ－２誘導性血管漏出などの、内皮ＣＤ２５発現細胞へのＩＬ－２の結合によって引き起こされる状態の治療または予防に有用である。
疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、分化成長を示す免疫細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１以上を含む。疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響は、制御性Ｔ細胞の活性化、ＣＤ２５＋Ｔエフェクター細胞のアポトーシス、ＩＬ－２誘導性肺水腫、ＩＬ－２誘導性肺炎、またはＩＬ－２誘導性血管漏出のうちの１以上を含む。疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ－２の結合を阻害する。
いくつかの実施形態では、癌の治療は、維持治療を含む。いくつかの実施形態では、維持治療は、癌または腫瘍の非存在を維持するために投与が行われる。いくつかの実施形態では、維持治療は、癌または腫瘍の転移の欠如を維持するために投与が行われる。いくつかの実施形態では、維持治療は、癌または腫瘍の転移を阻害するために投与が行われる。いくつかの実施形態では、維持治療は、癌または腫瘍の成長の欠如を維持するために投与が行われる。いくつかの実施形態では、維持治療は、癌または腫瘍の成長を阻害するために投与が行われる。
いくつかの実施形態では、癌の治療は、これに限定しないが、例えば癌を発症するリスクが高い遺伝子マーカーを有する対象などに対する予防的治療を含む。いくつかの実施形態では、遺伝子マーカーは、ＢＲＣＡ１遺伝子における突然変異を含む。
対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を調製及び投与するステップを含む。
対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製及び投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２の組み合わせ、またはそれらの組成物の投与は、同時に行われる。対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製及び投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、またはそれらの組成物の投与は、ＩＬ－２またはその組成物の投与の前に、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物を投与することを含む。対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製及び投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、またはそれらの組成物の投与は、ＩＬ－２またはその組成物の投与の後に、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物を投与することを含む。
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞の分化成長の誘導によって、疾患または状態を有する対象を治療する方法を提供する。一実施形態では、疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌であり得る。一実施形態では、状態は、ＩＬ－２誘導性肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出であり得る。本方法は、（ａ）本明細書に開示の抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を調製するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）によって得られた組成物を対象に投与し、それによって、対象における免疫細胞の分化成長によって対象を治療するステップと、を含む。或る実施形態では、本明細書に開示される操作された抗ＩＬ－２抗体のいずれかが、本明細書に記載されるように、治療の方法において使用される。
いくつかの実施形態では、本開示は、免疫細胞の分化成長の誘導によって、疾患または状態を有する対象を治療する方法を提供する。一実施形態では、疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌であり得る。一実施形態では、状態は、ＩＬ－２誘導性肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出であり得る。本方法は、（ａ）本明細書に開示の抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製するステップと、（ｂ）ステップ（ａ）によって得られた組成物を対象に投与し、それによって、対象における免疫細胞の分化成長によって対象を治療するステップと、を含む。抗体／ＩＬ－２複合体は、免疫エフェクター細胞のサブセットの増殖を促進することに加えて、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響（例えば、ＩＬ－２誘導性肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出）も低減させるであろう。一実施形態では、対象は、動物またはヒトであり得る。或る実施形態では、本明細書に開示される操作された抗ＩＬ－２抗体のいずれかが、本明細書に記載されるように、治療の方法において使用される。
一実施形態では、本開示は、対象（例えば、動物またはヒト）における疾患または状態を治療する方法であって、抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を対象に投与するステップを含み、抗体は、免疫細胞のサブセットの増殖を促進し、かつＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響を低減させ、それによって、対象における疾患または状態を治療する、方法を提供する。対象における疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を調製及び投与するステップと、抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を投与するステップと、を含む。一実施形態では、組成物は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む、あるいは、組成物は、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。
対象における疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製及び投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２の組み合わせ、またはそれらの組成物の投与は、同時に行われる。対象における疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製及び投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、またはそれらの組成物の投与は、ＩＬ－２またはその組成物の投与の前に、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物を投与することを含む。対象における疾患または状態を治療する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む組成物を調製及び投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、またはそれらの組成物の投与は、ＩＬ－２またはその組成物の投与の後に、抗ＩＬ－２抗体またはその組成物を投与することを含む。
一実施形態では、治療の方法は、ＩＬ－２誘導性肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出などの状態の治療に有効であろう。別の実施形態では、治療の方法は、ウイルス感染症または細菌感染症に起因する（軽度、または慢性の）肺水腫の治療に有効であろう。
一実施形態では、疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、癌、自己免疫疾患、または免疫障害であり得る。一実施形態では、疾患は、上気道ウイルス感染症、早期肺感染症、または末期肺感染症であり得る。多くの病気及び癌は、ウイルスによって引き起こされることが知られている。病気を引き起こすウイルスの例としては、これに限定しないが、例えば、ノロウイルス；ロタウイルス；Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはＥ型の肝炎ウイルス；狂犬病ウイルス、西ナイルウイルス、エンテロウイルス、エコーウイルス、コクサッキーウイルス、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、ＨＳＶ－２、水痘帯状疱疹ウイルス、蚊媒介ウイルス、アルボウイルス、セントルイス脳炎ウイルス、カリフォルニア脳炎ウイルス、リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、ポリオウイルス、ジカウイルス、風疹ウイルス、サイトメガロウイルス、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）、エンテロウイルスＤ６８、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス、中東呼吸器症候群コロナウイルス、ＳＡＲＳコロナウイルス２、エプスタイン・バー・ウイルス、インフルエンザウイルス、呼吸器合胞体ウイルス、ポリオーマウイルス（ＪＣウイルス、ＢＫウイルスなど）、エボラウイルス、デングウイルス、またはそれらの組み合わせが挙げられる。一実施形態では、ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ ＣｏＶ－２によって引き起こされる。別の実施形態では、癌は、これに限定しないが、例えばメラノーマまたは腎細胞癌などであり得る。
一実施形態では、抗ＩＬ－２抗体による治療によって拡大する免疫細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１以上を含む。一実施形態では、抗ＩＬ－２抗体による治療は、制御性Ｔ細胞の活性化、ＣＤ２５＋Ｔエフェクター細胞のアポトーシス、肺水腫、肺炎、及びＩＬ－２誘導性血管漏出などの、ＩＬ－２によって引き起こされる１以上の望ましくない影響を低減させる。
一実施形態では、上記の方法で投与される抗ＩＬ－２抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ－２の結合を阻害することができる、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体である。いくつかの実施形態では、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。いくつかの実施形態では、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。いくつかの実施形態では、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
別の実施形態では、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。一実施形態では、重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む。
別の実施形態では、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体は、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。一実施形態では、軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ´）２であり得る。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブクラスであり得る。いくつかの実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体は、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体の一部であり得る。
いくつかの実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体をコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の疾患または状態を有する対象を治療する方法において使用され、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、抗体をコードする。いくつかの実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体をコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の疾患または状態を有する対象を治療する方法において使用され、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つのアミノ酸配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体をコードする。いくつかの実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体をコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の疾患または状態を有する対象を治療する方法において使用され、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つのアミノ酸配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体をコードする。
上記の疾患または状態を治療するためにポリヌクレオチドを使用する方法のいくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ´）２であり得る操作された抗ＩＬ－２抗体をコードする。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４のサブクラスであり得る。いくつかの実施形態では、ポリヌクレオチドは、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体の一部である操作された抗ＩＬ－２抗体をコードする。
いくつかの実施形態では、操作された抗ＩＬ－２抗体をコードするポリヌクレオチド配列は、本明細書に記載の疾患または状態を有する対象を治療する方法において使用され、ポリヌクレオチド配列は、配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５のうちの１つの配列を含む。
本明細書に記載の疾患または状態を有する対象を治療する方法のいくつかの実施形態では、治療によって活性化される免疫エフェクター細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。一実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体、または、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との複合体は、ＭＰ ＣＤ８＋細胞及びＮＫ細胞の増殖を誘導する顕著な効果を示したが、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇに対する影響は非常に小さかった。或る実施形態では、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇに対する影響はなかった。
或る実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体の使用方法は、刺激促進効果を提供する。当業者は、本明細書（例えば、実施例１）に記載及び例示された抗ＩＬ－２抗体の使用が、抗刺激効果または調節促進（pro-regulatory）効果とは対照的に、刺激促進効果を明らかに示すことを理解するであろう。
いくつかの実施形態では、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体の使用は、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体の使用は、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体の使用は、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との複合体の使用を含む。
いくつかの実施形態では、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体の使用は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体の使用は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、操作された、すなわち改変された抗ＩＬ－２抗体の使用は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との複合体の使用を含む。
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＩＬ－２抗体の使用は、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体の使用は、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む抗ＩＬ－２抗体の使用は、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との複合体の使用を含む。
いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＩＬ－２抗体の使用は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体の使用は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）と、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む抗ＩＬ－２抗体の使用は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、それを必要とする対象において、刺激促進免疫効果を提供する。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２の使用を含む。いくつかの実施形態では、使用は、抗ＩＬ－２抗体とＩＬ－２との複合体の使用を含む。
したがって、本明細書に開示される操作された抗ＩＬ－２抗体は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌などの疾患、あるいは、ＩＬ－２誘導性肺水腫、またはＩＬ－２誘導性血管漏出などの状態を治療する方法において、免疫細胞集団の調整、及び、特定の免疫エフェクター細胞の分化増殖の誘導に有用であると考えられる。
いくつかの実施形態では、対象を免疫化する方法であって、免疫化はアジュバントを含むワクチンを投与することを含み、アジュバントはＩＬ－２抗体アジュバントを含む、方法が、本明細書に開示される。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。いくつかの実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体を含む。
いくつかの実施形態では、免疫化される対象は、哺乳類の対象である。いくつかの実施形態では、免疫化される対象は、ヒトである。いくつかの実施形態では、免疫化される対象は、免疫系が弱っている。
免疫化する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。免疫化する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。免疫化する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗ＩＬ－２抗体を含む。
免疫化する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む抗ＩＬ－２抗体を含む。免疫化する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体を含む。免疫化する方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体を含み、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）は相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含み、重鎖可変領域（ＶＨ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域（ＶＬ）の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む。
対象を免疫化する方法のいくつかの実施形態では、免疫化はアジュバントを含むワクチンを投与することを含み、アジュバントはＩＬ－２抗体アジュバントを含み、当該抗ＩＬ－２抗体は本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体を含む。或る実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。対象を免疫化する方法のいくつかの実施形態では、対象は、免疫系が弱っている。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントを含むワクチンによる免疫化のための対象は、該対象における癌の可能性を増加させる遺伝的素因を含む状態を有する対象を含む。いくつかの実施形態では、遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含む。いくつかの実施形態では、癌の可能性を増加させる遺伝的素因は、腫瘍抑制遺伝子、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）遺伝子、またはそれらの組み合わせにおける突然変異を含む。非限定的な例として、これに限定しないが、例えば遺伝性乳癌及び卵巣癌（ＨＢＯＣ）症候群、リンチ症候群（遺伝性非ポリポーシス大腸癌）、及びリ・フラウメニ症候群などの多くの遺伝性癌が当該技術分野で知られている。
いくつかの実施形態では、疾患または状態の治療のために本明細書に開示される方法によって治療される対象は、１以上の免疫チェックポイントを標的とする１以上の免疫チェックポイント阻害剤でさらに治療される。いくつかの実施形態では、対象は、抗ＩＬ－２抗体による治療と同時に、抗ＩＬ－２抗体による治療の前に、または、抗ＩＬ－２抗体による治療の後に、免疫チェックポイント阻害剤で治療される。本明細書に開示される治療の方法のいくつかの実施形態では、免疫チェックポイントは、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ７３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）、ＣＤ３９、ＩＬＤＲ２、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＶＴＣＮ－１、またはそれらの任意の組み合わせを含む。
いくつかの実施形態では、上記のように、本明細書に開示される治療の治療方法は、免疫チェックポイント阻害剤を含む追加の活性剤をさらに含む。当業者は、ＩＬ－２の存在下または非存在下での抗ＩＬ－２抗体療法と、さらにチェックポイント阻害剤とを含む併用療法が、本明細書に提供される抗ＩＬ－２抗体＋／－ＩＬ－２、及びチェックポイント阻害剤を含む治療組成物または製剤のいずれかを利用し得ることを理解するであろう。いくつかの実施形態では、少なくとも２つのチェックポイント阻害剤が併用療法において使用される。
本出願の実施形態は、以下を含む。
配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む、単離抗ＩＬ－２抗体。
ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体を含む、抗体。
（ａ）ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４、（ｂ）Ｆｃγ受容体（ＦｃγＲｓ）への結合を減少させる突然変異を含む重鎖、（ｃ）λまたはκ軽鎖、または、（ｄ）（ａ）－（ｃ）の任意の組み合わせ、を含むＩｇＧ。
単離抗ＩＬ－２抗体と、薬学的に許容される担体と、を含む組成物。
配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離抗ＩＬ－２抗体。
配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、単離抗ＩＬ－２抗体。
相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）
を含む単離抗ＩＬ－２抗体であって、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む、単離抗ＩＬ－２抗体。
相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む単離抗ＩＬ－２抗体であって、相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む、単離抗ＩＬ－２抗体。
それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）と、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）と、を含む単離抗ＩＬ－２抗体。
抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つのアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列。
本明細書に記載のポリヌクレオチド配列を含むベクター。本明細書に記載のベクターを含む宿主細胞。
抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つのアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列。
抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、重鎖可変領域（ＶＨ）は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つのアミノ酸配列を含み、軽鎖可変領域（ＶＬ）は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つのアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列。
配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５のうちの１つの配列を含み、ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列。
抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）を作製する方法であって、本明細書に開示されるベクターを含む宿主細胞を、宿主細胞のベクターの発現を促す条件下で培養し、それによって、抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）を作製するステップを含む、方法。
抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）を作製する方法であって、宿主細胞を、宿主細胞のベクターの発現を促す条件下で培養し、それによって、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）を作製するステップを含む、方法。
抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む抗ＩＬ－２抗体を作製する方法であって、宿主細胞を、宿主細胞のベクターの発現を促す条件下で培養し、それによって、抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）を作製するステップを含む、方法。
対象における免疫細胞の分化成長を促進する方法であって、抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を投与し、それによって、対象における免疫細胞の分化成長を促進するステップを含む、方法。
免疫細胞の分化成長の誘導によって、癌を有する対象を治療する方法であって、抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を投与し、それによって、癌を有する対象を治療するステップを含む、方法。
対象における疾患または状態を治療する方法であって、抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を対象に投与するステップを含み、抗ＩＬ－２抗体は、免疫細胞のサブセットの増殖を促進し、かつＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響を低減させ、それによって、対象における疾患または状態を治療する、方法。
いくつかの実施形態では、疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を含む。いくつかの実施形態では、ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２；ノロウイルス；ロタウイルス；Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはＥ型の肝炎ウイルス；狂犬病ウイルス；西ナイルウイルス；エンテロウイルス；エコーウイルス；コクサッキーウイルス；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）；ＨＳＶ－２；水痘帯状疱疹ウイルス；蚊媒介ウイルス；アルボウイルス；セントルイス脳炎ウイルス；カリフォルニア脳炎ウイルス；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；ポリオウイルス；ジカウイルス；風疹ウイルス；サイトメガロウイルス；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）；エンテロウイルスＤ６８；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス；中東呼吸器症候群コロナウイルス；エプスタイン・バー・ウイルス；インフルエンザウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；ＪＣウイルスを含むポリオーマウイルス；ＢＫウイルス；エボラウイルス；デングウイルス；またはそれらの任意の組み合わせによって引き起こされる。いくつかの実施形態では、状態は、免疫系が弱った状態を含み、治療は、免疫系を予防的に高める。
いくつかの実施形態では、状態は、ＩＬ－２誘導性肺炎を含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１以上を含む。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響は、制御性Ｔ細胞の活性化、ＣＤ２５＋Ｔエフェクター細胞のアポトーシス、ＩＬ－２誘導性肺水腫、ＩＬ－２誘導性肺炎、またはＩＬ－２誘導性血管漏出のうちの１以上を含む。
いくつかの実施形態では、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ－２の結合を阻害する。
対象を免疫化する方法であって、免疫化はアジュバントを含むワクチンを投与することを含み、アジュバントはＩＬ－２抗体アジュバントを含む、方法。
いくつかの実施形態では、ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む。
いくつかの実施形態では、対象は、動物またはヒトである。いくつかの実施形態では、対象は、免疫系が弱っている。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、免疫細胞は、ＣＤ８＋Ｔ細胞またはＮＫ細胞である。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７のうちの１つの配列を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、配列番号１０及び１１、配列番号１０及び１１、配列番号１０及び１１、配列番号１２及び１３、配列番号１４及び１５、配列番号１６及び１７、配列番号１８及び１９、配列番号２０及び２１、配列番号２２及び２３、配列番号２４及び２５、配列番号２６及び２７、または、配列番号３６及び３７のうちの１つの配列を有する重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）を含む軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
本明細書に開示される方法のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ－２抗体は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含み、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）のそれぞれは相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）を含み、重鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号３８－４０、それぞれ配列番号４４－４６、それぞれ配列番号５０－５２、それぞれ配列番号５６－５８、または、それぞれ配列番号６２－６４のアミノ酸配列を含み、軽鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３）は、それぞれ配列番号４１－４３、それぞれ配列番号４７－４９、それぞれ配列番号５３－５５、それぞれ配列番号５９－６１、または、それぞれ配列番号６５－６７のアミノ酸配列を含む。
本明細書で使用するとき、単数形の「１つの（ａ）」、「１つの（ａｎ）」、「その（ｔｈｅ）」は、文脈が他の意味を明確に示さない限り、その指示対象の複数形も含む。例えば、「１つの化合物」または「少なくとも１つの化合物」という用語は、それらの組み合わせを含む、複数の化合物を含み得る。
本出願の全体を通じて、本発明の様々な実施形態を範囲形式で示すことがある。範囲形式での記載は単に便利さ及び簡潔さのためのであり、本発明の範囲に対する柔軟性のない限定と解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲形式での記載は、その範囲内に含まれる個々の数値だけでなく、その範囲内に含まれるすべての可能な部分的な範囲を具体的に開示したものと見なされるべきである。例えば、１から６までという範囲の記載は、１から３まで、１から４まで、１から５まで、２から４まで、２から６まで、３から６まで、・・・、という部分的な範囲、並びに、その範囲内に含まれる個々の数値（例えば、１、２、３、４、５、及び６）を具体的に開示したものと見なされるべきである。このことは、範囲の幅に関係なく適用される。
本明細書において数値範囲を指定している場合は常に、指定された数値範囲内に含まれるすべての数値（分数または整数）を含むことを意味する。第１の指定数と第２の指定数と「の間の範囲」という表現、及び第１の指定数「から」第２の指定数「までの範囲」という表現は、本明細書では相互交換的に使用されており、第１の指定数及び第２の指定数、並びにこれらの間のすべての分数及び整数を含むことを意味する。
当業者であれば、「約（about）」という用語が、示された数値または数値範囲からの０．０００１～５％の逸脱を包含し得ることを理解するであろう。或る場合には、「約」という用語は、示された数値または数値範囲からの１～１０％の逸脱を包含し得る。或る場合には、「約」という用語は、示された数値または数値範囲からの最大２５％の逸脱を包含し得る。
実施例
実施例１
本実施例では、改変された抗ＩＬ－２抗体の生成を、生成された抗体の実施形態に基づき説明する。改変された抗ＩＬ－２抗体の生成の例示は、本明細書に開示される抗体のサブセットに基づいている。実施例１に示された記載及び結果は例示的なものであり、本出願を通じて開示された改変された抗ＩＬ－２抗体の生成を制限するものではない。
ライブラリの設計
ＪＥＳ６．１の配列に変異を導入するためのライブラリを設計した。ＪＥＳ６．１の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列をそれぞれ配列番号６及び配列番号７に示す。簡単に説明すると、すべてのアミノ酸をコードするコドン（コドンＮＮＳ）で３つの位置を変えた。ライブラリの設計により、ＣＤＲＬ３及びＨ３の両方において１つの変異を可能にし、また、ＣＤＲ：Ｈ１、Ｈ２、またはＬ２のいずれかにおいて１つの変異を可能にした。ＣＤＲは、ＩＭＧＴまたはＡＢＲ（「Kunik et al., 2012」）のいずれかの定義を満たすことによって定義された。ｍＩＬ２－ＪＥＳ６．１複合体（ＰＤＢ４ＹＱＸ）の結晶構造における、保存されているＣＤＲ残基（ＰＤＢデータベースに対するＢｌａｓｔ検索に基づく）、または、マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）と特異的相互作用を形成しないＣＤＲ残基は、変異から除外された。ライブラリの理論的サイズは、１．３８Ｅ＋７変異体であった。
ライブラリの選択
酵母表面ディスプレイを用いたスクリーニング及び選択
酵母ディスプレイｓｃＦｖライブラリをＳＤＣＡＡ選択培地中で増殖させ、確立されたプロトコルにしたがって、２％ｗ／ｖのガラクトースで３０°Ｃで一晩発現を誘導した。ライブラリを、ＰＢＳ０．１％ＢＳＡ中で、６ｘｈｉｓタグ（ｈＩＬ－２－Ｈｉｓ）（イスラエル国レプロキン社（Reprokine））と共に１００ｎＭの組換えヒトＩＬ－２と１時間インキュベートした。次いで、ＰＢＳ０．１％ＢＳＡで３回洗浄し、蛍光標識抗体マウス抗Ｍｙｃ－ＦＩＴＣ（米国サンタクルーズ社（Santa Cruze））、及び、マウスモノクローナル抗ＨｉｓＡＰＣ（ドイツ国ミルテニーバイオテク社（Miltenyi Biotec）、ｃａｔ：００２０１３０－１１９－７８２）で標識した。標識後、ライブラリを、ＢｉｏＲａｄ Ｓ３ｅ蛍光活性化細胞ソータで、組換えヒトＩＬ－２に対する高親和性結合剤についてソートした。最終ソートから分離したクローンの配列決定を、Ｚｙｍｏｐｒｅｐキット（米国サイモリサーチ社（Zymo Research））を使用して酵母クローンからプラスミドＤＮＡを抽出することによって行い、それにより、ＤＮＡの配列決定を行った。
Ｋｏｆｆの選択
オフレートが改善された結合剤を選択するために、選択の第２ラウンドのクローンを、１０ｎＭの６×ｈｉｓタグ（ｈＩＬ－２）と共に１５分間インキュベートし、次いで、酵母を１ｍｌのＰＢＳ０．１％ＢＳＡで３回洗浄し、１００ｎＭの未標識ＩＬ－２と共に５分間、４時間、６時間、及び２４時間インキュベートした。指示された時点で、酵母を洗浄し、Ｍｙｃ－ＦＩＴＣ（米国サンタクルーズ社）及びモノクローナル抗ＨｉｓＡＰＣ（ドイツ国ミルテニーバイオテク社、ｃａｔ：００２０３０－１１９－７８２）で標識し、上記のようにＳｅ３でソートした。
ＩｇＧの産生
ＪＥＳ６．１ｗ．ｔ．は、サーモ・フィッシャー社（Thermo Fisher）（ｃａｔ：１６－７０２２－８１）から購入した。ＪＥＳ６．１．ＲＭＣは、マウスＩｇＧ２ａ定常領域を有するラットＦｖとしてクローニングされ、ＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ抗体産生サービス（米国ニュージャージー州ジェンスクリプト社（Genscript））によって産生された。ＢＤＧ１７．００１４は、ヒトＩｇＧ１定常領域にクローニングされ、ＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ抗体産生サービスによって産生された。ＪＥＳ６．１．ＲＭＣの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列をそれぞれ配列番号８及び配列番号９に示す。他のすべての抗体は、以下に記載するようにして作製した。
再フォーマット
選択したｓｃＦｖクローンを、ヒトＩｇＧ１フォーマットに再フォーマットした。軽鎖（ＬＣ）可変領域及び重鎖（ＨＣ）可変領域の配列を哺乳動物コドンの使用に最適化し、ＩＤＴ（米国アイオワ州コーラルビル、インテグレーテッド・ディーエヌエー・テクノロジーズ社（Integrated DNA Technologies））からジェンブロック（ＧＢ）としてオーダした。ＧＢを、標準的なクローニング技術を用いて、ｐＳＦ－ＣＭＶ－ＨｕＩｇＧ１＿ＨＣ（ＨＣプラスミド）、及び、ｐＳＦ－ＣＭＶ－ＨｕＬａｍｂｄａ＿ＬＣ（ＬＣプラスミド）（英国オックスフォード、オックスフォード・ジェネティックス社（Oxford genetics））にクローニングした。指示された場合には、可変重鎖を、重鎖のＬ２３４及びＬ２３５をコードするＤＮＡをアラニンコドン（Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ）に変異させたｐＳＦ－ＣＭＶ－ＨｕＩｇＧ１＿ＨＣ＿ＬＡＬＡ（ＨＣプラスミド）にクローニングした。
ＩｇＧの発現
Ｅｘｐｉ－ＣＨＯ細胞（米国、サーモ・フィッシャー・サイエンティフィック社（Thermo Fisher Scientific））に、ＬＣプラスミド及びＨＣプラスミドを２：１の比率でトランスフェクトし、製造業者の説明書にしたがって発現させた。簡単に説明すると、５０ｍｌのＥｘｐｉ－ＣＨＯ細胞を、３７°Ｃ、１２０ｒｐｍ、８％ＣＯ２で、６×１０６細胞／ｍｌの密度になるように培養した。次いで、ＣＨＯ細胞に、５０μｇの重鎖及び軽鎖発現プラスミドを１：２の比率で、トランスフェクトした。トランスフェクション後、ブースターエンハンサ及びフィードを培養物に添加し、増殖条件を３２°Ｃ、１２０ｒｐｍ、５％ＣＯ２に変更した。細胞は、トランスフェクションの１０日後に採取した。ＩｇＧを上清からｐｒｏｔｅｉｎＡビーズ（ドイツ国、トーソー・バイオサイエンス社（Tosoh Bioscience GmbH））を用いて精製し、次いで、ＰＢＳを移動相（米国、ＧＥヘルスケア社（GE healthcare））として、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００増加カラム上でサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥＣ）精製を行った。
配列
クローン１（１７．０２１）のｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列を配列番号１に示す。クローン２（１７．０２２）のｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列を配列番号２に示す。クローン４（１７．０２３）のｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列を配列番号３に示す。クローン５（１７．０３０）のｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列を配列番号４に示す。クローン６（１７．０３５）のｓｃＦｖをコードするＤＮＡ配列を配列番号５に示す。
オリジナルのＪＥＳ６＿１開始配列と様々な抗ＩＬ－２クローンとの重鎖可変領域及び軽鎖可変領域のアミノ酸配列を、以下の表２と図１１及び図１２に示す。
Figure 2023506093000005
ヒトＩＬ－２に対するＩｇＧ結合の測定
ＳＰＲ解析は、ＣＭ５チップ（米国、ＧＥヘルスケア社、ｃａｔ：ｂｒ１０００５－３０）上のＢｉａｃｏｒｅ ２００（米国、ＧＥヘルスケア社）で行った。ＣＭ５チップを、ヒトＩｇＧに対する一次捕捉抗体（米国、ＧＥヘルスケア社、ｃａｔ：ｂｒ－１００８－３９）、またはマウスＩｇＧに対する一次捕捉抗体（米国、ＧＥヘルスケア社、ｃａｔ：ＢＲ－１００８－３８）により、８０００ＲＵの標的に架橋した。一次捕捉抗体の架橋後、マウス及びヒトの試験抗体を、一次捕捉抗体上に、約５００ＲＵを追加の標的に固定化した。ＪＥＳ６．１をＣＭ５チップに直接架橋した。ヒトＩＬ－２（イスラエル国レプロキン社、ｃａｔ：６０５６８）分析物を、ＨＥＢ－ＥＰまたはＰＢＳ０．０５％ｔｗｅｅｎ－２０（ＰＢＳ－Ｔ）緩衝液中で、１２８～０．０３ｎＭの範囲の濃度で、一連の２倍または３倍の希釈、各サイクルにつき１つの濃度でストリーミングした。マウスＩＬ－２（イスラエル国レプロキン社、ｃａｔ：ＲＫＰ０４３５１）を、０．５～４０ｎＭの範囲の濃度で、ＨＥＢ－ＥＰまたはＰＢＳ－Ｔ緩衝液中にストリーミングした。各サイクルの終わりに、３Ｍ ＭｇＣｌ２を用いてチップから分析物及び試験された抗体を剥がし、新しい被試験抗体を上記のようにチップ上に載置した。指示された場合には、抗体を剥がす代わりに、単一サイクルキネティクス法により、１サイクルにおいて一連の分析物濃度を注入することによってキネティクスを求めた。結合キネティクスは、Ｂｉａｃｏｒｅ Ｔ２００評価ソフトウェアを用いて、１：１結合モデルにより求めた。
カニクイザルＩＬ－２に対するＩｇＧ結合
ＳＰＲ解析は、ＣＭ５チップ（米国、ＧＥヘルスケア社、ｃａｔ：ｂｒ１０００５－３０）上のＢｉａｃｏｒｅ ２００（米国、ＧＥヘルスケア社）で行った。ＣＭ５チップを、ヒトＩｇＧに対する一次捕捉抗体（米国、ＧＥヘルスケア社、ｃａｔ：ｂｒ－１００８－３９）により５０００ＲＵの標的に架橋し、カニクイザルＩＬ－２（ｃＩＬ－２）を上記と同じ条件下でマルチサイクル法を用いて試験した。
ＳＥＣ分析
ＩｇＧを分析するために、１００μｇの試料を、ＧＥ ＡＫＴＡ Ｅｘｐｌｏｒｅｒクロマトグラフィシステム（米国、ＧＥヘルスケア社）上でＳｕｐｅｒｄｅｘ ２００ １０／３００増加カラム（米国、ＧＥヘルスケア社）で０．８ｍｌ／分の流量でロードした。抗体保持時間の観察は２８０ｎｍで行った。
ＣＤ２５及びＣＤ１２２に対する特異的結合の検査
ＣＤ２５に対する特異的結合を試験するために、ＢＤＧ１７．０２３を、上記のように約３００ＲＵの標的ＲＵのＣＭ５チップに固定した。続いて、５０ｎＭのＩＬ－２を、ＢＤＧ１７．０２３または対照抗体がＩＬ－２で飽和するまで注入した。その後、Ａｂ－ＩＬ－２複合体をＰＢＳ－Ｔ緩衝液で１０秒間洗浄し、１０００ｎＭのＣＤ２５を注入し、応答を観察した。
ＣＤ１２２に対する特異的結合を試験するために、ＢＤＧ１７．０２３を、上記のように約３００ＲＵ～５００ＲＵの標的ＲＵのＣＭ５チップに固定した。続いて、５０ｎＭのｈＩＬ－２を、ＢＤＧ１７．０２３抗体がｈＩＬ－２で飽和するまで注入した。その後、Ａｂ－ｈＩＬ－２複合体をＰＢＳ－Ｔ緩衝液で１０秒間洗浄し、１０００ｎＭのＣＤ１２２を注入し、反応を観察した。
ＣＤ１２２及びＣＤ２５に対するヒト化抗体ＩＬ－２複合体の特異的結合を試験するために、抗体ＢＤＧ１７．０３８、ＢＤＧ１７．０４３、ＢＤＧ１７．０５３、ＢＤＧ１７．０５４、ＢＤＧ１７．０６７、ＢＤＧ１７．０６９（これらのクローンの配列情報については、実施例２の表６及び表７を参照のこと）を、上記のように約３００ＲＵの標的ＲＵのＣＭ５チップチャネルに取り付けた捕捉抗体に固定化した。続いて、５０ｎＭのＩＬ－２を、それぞれの抗体がｈＩＬ－２で飽和するまで注入した。次に、Ａｂ－ＩＬ－２複合体をＰＢＳ－Ｔ緩衝液で６０秒間洗浄し、１０００ｎＭのＣＤ２５を注入し、応答を観察した。その後、定常ベースラインに達するまでランニングバッファを６０秒間注入し、次いで、３０μｌ／分の流量で１０００ｎＭのＣＤ１２２を３０秒間注入した。ＣＤ１２２の結合を試験するために、同じ実験を逆の順序で繰り返した。すなわち、まず、ＣＤ２５を注入し、その後に、ＣＤ１２２を注入した。
ＩｇＧ ＴｍのＤＳＦ分析
ヒト化抗ｈＩＬ－２抗体のＴ－ｏｎｓｅｔ及びＴｍを求めるために、抗体をＰＢＳ中で０．５ｍｇ／ｍｌに希釈し、ＮａｎｏＤＳＦ Ｐｒｏｍｅｔｈｅｕｓ ＮＴ．４８（ドイツ国ナノテンパー社（Nanotemper））を用いて１℃／分の温度上昇速度で分析した。
インビボ実験
ＩＬ－２／Ａｂ複合体によるマウスの治療
７～８週齢の６匹の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスのグループに、ＢＤＧ１７．０２３／ｈＩＬ－２またはＪＥＳ６．１／ｍＩＬ－２免疫複合体を、４日間連続して毎日腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。ＰＢＳ及び遊離ｈＩＬ－２またはｍＩＬ－２を対照とした。４日目の終わりにマウスを屠殺し、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液にホモジナイズした。細胞を濾過し、遠心分離し（４００ｇを５分間）、５ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、５×１０６リンパ球／ｍｌの最終濃度にした。実験は、イスラエルの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインにしたがって行った。
７～８週齢の６匹の雄のＣ５７ＢＬ／６マウスのグループに、ＢＤＧ１７．０３８／ｈＩＬ－２、ＢＤＧ１７．０４３／ｈＩＬ－２、ＢＤＧ１７．０５４／ｈＩＬ－２、ＢＤＧ１７．０３８／ｈＩＬ－２、またはアイソタイプ対照／ｈＩＬ－２免疫複合体を、４日間連続して毎日腹腔内（ｉ．ｐ．）投与した。この複合体を形成するために、投与前に、１０μｇの抗体を０．５μｇのｈＩＬ－２と共に３７°Ｃで３０分間プレインキュベートした。４日目の終わりにマウスを屠殺し、脾臓を採取し、単一細胞懸濁液にホモジナイズした。細胞を濾過し、遠心分離し（４００ｇを５分間）、５ｍｌのＰＢＳ中に再懸濁し、５×１０６リンパ球／ｍｌの最終濃度にした。実験は、イスラエルの動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）のガイドラインにしたがって行った。
Ｂ１６Ｆ１０マウスメラノーマ腫瘍異種移植モデル
雌のＣ５７ＢＬ／６マウスの右後側腹部に、（２×１０５個の）Ｂ１６－Ｆ１０腫瘍細胞を皮下接種した。腫瘍体積が約３０～５０ｍｍ３に達した接種５日後に、マウスを実験群（各群ｎ＝１０）に無作為化し、指示された抗体の１０μｇの抗ＩＬ－２抗体／１μｇのｈＩＬ－２複合体の単回投与またはＰＢＳ対照を、４日間連続して毎日腹腔内投与した。実験を通じて、マウスにおける、腫瘍体積の増大、体重減少、及び非特異的臨床徴候を観察した。
ＦＡＣＳによる免疫細胞集団の決定
免疫細胞集団を同定するために、製造業者の説明書にしたがって、脾臓リンパ球を以下に記載する抗体で標識した。制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）：ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋／ＣＤ４＋／ＣＤ２５＋／ＦｏｘＰ３＋。メモリー表現型エフェクターＴ細胞（ＭＰＣＤ８＋）：ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋／ＣＤ８＋／ＣＤ４４＋／ＩＬ－２ＲＢ（ＣＤ１２２）＋。ナチュラルキラー細胞（ＮＫ）：ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋／ＣＤ４９ｂ＋／ＮＫ１．１（ＣＤ１６１）。ナチュラルキラーＴ細胞（ＮＫＴ）：ＣＤ４５＋／ＣＤ３＋／ＣＤ４９ｂ＋／ＮＫ１．１（ＣＤ１６１）。陽性細胞の頻度及び数は、フローサイトメータで取得した生データから算出した。
Figure 2023506093000006
結果
ＪＥＳ６．１は、マウスＩＬ－２には強固に結合したが、ヒトＩＬ－２には結合しなかった。
ＪＥＳ６．１は、マウスＩＬ－２（ｍＩＬ－２）に対して５．６ｎＭのＫＤで結合することが報告されている。ＪＥＳ６．１がヒトＩＬ－２（ｈＩＬ－２）に対して結合できるかどうかを試験するために、ＪＥＳ６．１抗体をＢｉａｃｏｒｅＴ２００上でＳＰＲによって試験した。ＪＥＳ６．１をＣＭ５チップに直接架橋し、次いで、ヒトＩＬ－２またはマウスＩＬ－２の分析物を、それぞれ０．５～１２８ｎＭまたは０．５～１６ｎＭの範囲の濃度でストリーミングした。図４Ａに示すように、ヒトＩＬ－２で試験した場合、ＪＥＳ６．１は応答単位（ＲＵ）の明らかな変化は見られなかった。一方、マウスＩＬ－２で試験した場合、強い応答が見られた（図４Ｂ）。これにより、ＪＥＳ６．１がマウスＩＬ－２には強固に結合するが、ヒトＩＬ－２には結合しないことが示された。この実験は、本明細書に記載のようにマウス定常領域を有するＪＥＳ６．１ラットＦＶとして発現させたＪＥＳ６．１ＲＭＣ抗体キメラを用いて繰り返した。ＧＥ抗体捕捉キットを使用して、ＣＭ５チップ上にＪＥＳ６．１ＲＭＣを固定化した。ｈＩＬ－２を最大で１００ｎＭの濃度でストリーミングしてもＲＵに変化はなく、これにより、ヒトＩＬ－２（図４Ｃ）に対しては結合しないことが示された。ＪＥＳ６．１ＲＭＣキメラが、上記のＪＥＳ６．１のようにそのｍＩＬ－２結合特性を保持するかどうかを試験するために、マウスＩＬ－２に対する結合を試験した。ｍＩＬ－２を０．５～３２０ｎＭの濃度でストリーミングしたところ、ＲＵが大きく変化し、強固な結合を示した（図４Ｄ）。これらの結果は、ＪＥＳ６．１及びＪＥＳ６．１ＲＭＣは、マウスＩＬ－２には強固に結合するが、ヒトＩＬ－２への明らかな結合が見られないことを示す。ｈＩＬ－２及びｍＩＬ－２の両方に対するＪＥＳ６．１ＲＭＣ結合キネティクスの分析結果を以下に示す。
Figure 2023506093000007
マウスＩＬ－２からヒトＩＬ－２への結合特異性の変更
マウスＩＬ－２からヒトＩＬ－２への結合特異性を変更するために、ＪＥＳ６．１をｓｃＦｖとして酵母ディスプレイベクターにクローニングした。ＪＥＳ６．１のｓｃＦｖフォーマットは、カルボキシ末端ｍｙｃタグ標識で示されるように、酵母表面で良好に発現した（図５Ａ～図５Ｃ）。ＩｇＧフォーマットの１００ｎＭのＪＥＳ６．１を、マウスＩＬ－２を発現するＹＳＤクローンとインキュベートすると、強固な結合が生じた（図５Ａ～図５Ｃ）。しかしながら、上記のＳＰＲ結果との相関関係において、ＪＥＳ６．１ＹＳＤクローンを、最大で１μＭで標識したヒトＩＬ－２とインキュベーションしても蛍光の増加は見られず、これにより、ＪＥＳ６．１ｓｃＦｖはヒトＩＬ－２に対しては結合しないことが示された。
ＪＥＳ６．１ｓｃＦｖをベースにして、上記のように、変異誘発ライブラリを作製した。簡単に説明すると、ＹＳＤライブラリを、上記のように、組換えヒトＩＬ－２に対して選択した。変異体ライブラリは、１μＭのヒトＩＬ－２に対するＭＡＣＳ選択の１回のラウンド、及び、１μＭのヒトＩＬ－２に対するＦＡＣＳ選択の追加ラウンドを行った。上位０．２％のクローンを選択した。その後、この変異体ライブラリは、上記のように選択されたクローンのｋｏｆｆ特性を改善することを特に目的とした選択の２回の追加ラウンドを行った。３回目のラウンドでは、酵母を１０ｎＭのＨｉｓ標識ｈＩＬ－２と共に室温で１５分間インキュベートし、次いで、酵母をｈＩＬ－２で洗浄し、１００ｎＭの非標識ＩＬ－２と共に室温で５分間インキュベートした。４回目のラウンドは、同様の方法で行ったが、酵母を標識及び洗浄した後、初期体積の２０倍のＰＢＳ中で２４時間インキュベートした。５回目のラウンドでは、酵母を標識及び洗浄した後、１００ｎＭの非標識ＩＬ－２と共に室温で６時間インキュベートした。５回目のラウンドの後、クローンを単離した。ｈＩＬ－２への結合を獲得した５つのＹＳＤクローン（図６Ａ及び図６Ｂ）の配列決定を行った。加えて、これらのクローンを、５００ｎＭの可溶性ＴＮＦＲ２と、５００ｎＭのＯＸ４０と、５００ｎＭのＰＤ１との混合物で標識することによって、特異性について試験した。図６Ａ及び図６Ｂに見られるように、これらのクローンは、ｈＩＬ－２に対して特異的であり、他のタンパク質には結合しなかった。
ＢＤＧ１７．０２３の発現
ＹＳＤの特性化後、ｈＩＬ－２に対する有意な結合を示したクローン＃４を、ラットＦＶ及びヒトＦｃキメラを有するヒトキメラＩｇＧ１（ＢＤＧ１７．０２３）に再フォーマットした。ラット可変領域を、上記のように、２つの別個の発現ベクターである、ｐＳＦ－ＣＭＶ－ＨｕＩｇＧ１＿ＨＣ及びｐＳＦ－ＣＭＶ－ＨｕＬａｍｂｄａ＿ＬＣにサブクローニングした。ＩｇＧは、上記のように、ＥｘｐｉＣＨＯ細胞に発現させた。精製されたＩｇＧは、ＳＤＳＰＡＧＥ分析から明らかなように、９５％超の純度を有していた。Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ １０／３００上でのＢＤＧ１７．０２３のサイズ排除クロマトグラフィは、２つの主要なピークを示した。第１のピークは、約９．２ｍｌ（０．３６ＣＶ）の保持時間を有し、これは、大きな凝集体に特有のものであった。第２のピークは、約１２．６ｍｌ（０．５２８ＣＶ）の保持時間を有し、これは、通常のヒトｈＩｇＧ１に特有のものであった。これらのＳＥＣランのピーク積分は、それぞれ１１％と８９％を示した（図７）。
ＢＤＧ１７．０２３の結合キネティクス
ＢＤＧ１７．０２３の結合キネティクス、及び、ｍＩＬ－２またはｈＩＬ－２に対する親和性を求めるために、上記のようにＧＥ捕捉抗体キットを使用してＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００上でＳＰＲによってＩｇＧを分析した。図８Ａ及び図８Ｂに示すように、ＢＤＧ１７．０２３は、ｈＩＬ－２に約８×１０－１１の親和性で結合し、オンレートは１．３×１０７、オフレートは１×１０－３であった。また、ＢＤＧ１７．０２３は、ｍＩＬ－２に対して、約２．５×１０－６のはるかに低い親和性で結合することを示した。
Figure 2023506093000008
ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体の受容体識別
ＪＥＳ６１－ｍＩＬ－２複合体は、ＣＤ２５には特異的に結合するが、ＣＤ１２２には結合しないことが報告されている。ＳＰＲチップに結合したＪＥＳ６．１－ｍＩＬ－２複合体は、ＣＤ２５には結合するが、ＣＤ１２２には結合しなかった。ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体がＣＤ２５またはＣＤ１２２への結合を識別できるかどうかを試験するために、上記と同様の実験を行った。図９に示すように、ｈＩＬ－２と複合体を形成した対照抗体は、ヒトＣＤ２５には結合したが、ＣＤ１２２には結合しなかった。対照的に、ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体は、ＣＤ１２２には結合するが、ＣＤ２５には結合しないことが分かった。この結果は、ＢＤＧ１７．０２３はＪＥＳ６．１に由来するが、ＪＥＳ６．１－ｍＩＬ－２複合体、及びＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体は、おそらくそれぞれｍＩＬ－２及びｈＩＬ－２の異なるエピトープの結合により、非常に異なるＩＬ－２受容体選択性を有することを示す。あるいは、ＩＬ－２受容体に対する結合選好性に影響を与えるｍＩＬ－２及びｈＩＬ－２に対して、異なるアロステリック効果が誘導され得る。
ＢＤＧ１７．０２３のインビボ特性解析
ｍＩＬ－２と複合体を形成したＪＥＳ６．１のインビボ投与は、制御性Ｔ細胞の強固な増殖及びエフェクターＴ細胞のはるかに小さい増殖をもたらし、それによって、ＭＰＣＤ８＋／Ｔｒｅｇ比を免疫抑制に向けてシフトさせた。ＳＰＲ生化学アッセイにおいて、ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体はＣＤ１２２との結合に選好性を示し、ＣＤ２５との結合を除外したことから、ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体はインビボにおいてＣＤ８＋エフェクター細胞及びＮＫ細胞の増殖を増強すると予測される。ヒトＩＬ－２は、マウスＩＬ－２受容体と交差反応できるため、ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体をＣ５７ＢＬ／６マウスに投与し、上記のようにインビボでその効果を試験した。簡単に説明すると、１７．０２３抗体－ｈＩＬ－２複合体をｈＩＬ－２と共に１：１のモル比でインキュベートし、Ｃ５７ＢＬ／６マウスに４日間連続して毎日腹腔内投与した。対照として、ＪＥＳ６．１－ｍＩＬ－２複合体、ｈＩＬ－２単独、または、ｍＩＬ－２単独も同様に投与した。５日目にマウスの脾臓を採取し、細胞を標識し、上記のようにＦＡＣＳによって分析した。
図１０Ａ～図１０Ｄに見られるように、ＢＤＧ１７．０２３は、ＭＰＣＤ８＋細胞及びＮＫ細胞の増殖誘導に顕著な効果を示したが、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇに対する効果は非常に小さかった。一方、ＪＥＳ６．１は、報告されている抗炎症効果と一致して、非常に異なる効果を示した。これらの結果は、結合データと一致して、またＪＥＳ６．１とは対照的に、ＢＤＧ１７．０２３－ＩＬ－２複合体は、抗刺激または調節促進効果とは対照的に、インビボで免疫系に対して強い刺激効果を有することを実証した。
実施例２
本実施例は、ヒトＩＬ－２結合剤のさらなる選択、及びヒト化抗体の生成に関する結果を示す。
別の選択ストラテジーを用いて、別の選択圧下でヒトＩＬ－２結合剤を選択した。簡単に説明すると、ライブラリは、１μＭのヒトＩＬ－２に対するＭＡＣＳ選択の１回のラウンド、及び、１００ｎＭのヒトＩＬ－２に対するＦＡＣＳ選択のさらなる４回のラウンドを行った。１回のラウンドのＦＡＣＳ選択の後、すべての結合剤が選択され、その後、結合剤の上位０．５％、上位０．５％、及び上位０．１％が選択された。５回のラウンドの選択の後、クローンＣ＃７（１７３Ｒ５Ｃ１－１７．００２）（配列番号２８）を単離し、結合を確認し、配列を決定した。
抗体ヒト化
クローンＣ＃７（１７３Ｒ５Ｃ１－１７．００２）が、ヒト化のためのテンプレートとして選択された。ヒトテンプレートは、「Schrodinger BioLuminate 'Antibody Humanization: CDR Grafting' CDR tool (Kai Zhu, Tyler Day et al., Antibody structure determination using a combination of homology modeling, energy-based refinement, and loop prediction. Proteins: Structure, Function and Bioinformatics, 82, 8, 8 2014), and the PDB entry of JES6-1 was used as a query (4YQX; Jamie B. Spangler, Jakub Tomala et al., Antibodies to Interleukin-2 Elicit Selective T Cell Subset Potentiation through Distinct Conformational Mechanisms. Immunity, 42, 5, 5 2015)」を用いて選択された。Ｌ鎖及びＨ鎖のフレームワーク同一性及びステム幾何学の組み合わせに関して最良のスコアを有するＰＤＢエントリ５Ｉ１８が選択された（「Alexey Teplyakov, Galina Obmolova et al., Structural diversity in a human antibody germline library. mAbs, 8, 6, 8 2016」）。変異は、ＣＤＲ領域（ＩＭＧＴナンバリングスキームにしたがって）または４ＹＱＸにおける抗原と相互作用する位置（半径５Ａ以内）のいずれかに導入された。これらの位置の多様性は、ヒトテンプレート（５Ｉ１８）及びマウスクエリ（４ＹＱＸ）のアミノ酸を含むように選択された。加えて、クエリのＨ１とテンプレートとの間の大きな構造的変化に起因して、４ＹＱＸのＨ１と５Ｉ１８との間の完全な移行のオプションが導入された。このライブラリには、約１３００種類の変異体が存在した。
このライブラリは、ＦＡＣＳによる選択を２ラウンド受けた。１回目のラウンドでは、ライブラリを５ｎＭのｈＩＬ－２で標識し、結合クローンの上位５％を選択した。２回目のラウンドでは、ライブラリを１ｎＭのｈＩＬ－２で標識し、クローンの上位５％を選択した。クローンの選択後、クローンの配列決定を行い、クローンＣ＃８（１７３．２Ａ．Ｃ６－１７．０１４）（配列番号３１）が親和性成熟のためのテンプレートとして使用された。
ヒト化抗体親和性成熟
体細胞超変異の発生率が高いと予測されるＣＤＲ位置（ＩＭＧＴ／ＡＢＲ定義）を変異の標的として選択した。ＪＥＳ６－１に基づいて抗原と相互作用すると推定されるＬ３の追加的な位置、及びＨ３全体も、変異の標的として選択した。変異は、ＤＨＹコドンであるＨ３以外のすべての位置の配列保存に基づくものであった。このライブラリの理論的多様性は、３．２１×１０１２であった。
クローンＣ＃８（１７３．２Ａ．Ｃ６－１７．０１４）に基づき、すべてのアミノ酸をコードするＮＮＳ縮重コドンを用いてすべてのＣＤＲ位置を探索した別のライブラリを構築した。各ＣＤＲにつき１つまでの、２～３個の変異を有する変異体をスクリーニングした。このようなライブラリの理論的なサイズは、２×１０６個の二重変異体、及び、１×１０９個の三重変異体である。
上記で作製したヒト化親和性成熟ライブラリを、選択のために一緒にプールした。簡単に説明すると、１回目の選択では、プールされたＹＳＤライブラリを１０ｎＭのｈＩＬ－２で標識し、ＭＡＣＳにより選択した。２回目の選択では、酵母を０．１ｎＭのｈＩＬ－２で標識し、ＭＡＣＳにより選択した。３回目の選択では、酵母を０．１ｎＭのｈＩＬ－２で標識し、すべての結合剤をＦＡＣＳにより選択した。４回目及び５回目の選択では、酵母を１０ｎＭのｈＩＬ－２で標識し、１００ｎＭの非標識ｈＩＬ－２とそれぞれ２４時間及び４８時間競合させた。その後、酵母をＦＡＣＳによりソートし、すべての結合剤を選択した。最後の選択は、４回目及び５回目と同様の方法で行ったが、標識及び洗浄後、酵母をＰＢＳ中の初期体積の１０００倍で室温にて１週間インキュベートした。
選択後、クローンを単離し、結合を確認し、配列を決定した。いくつかのクローンのアミノ酸配列を以下に示す。重鎖及び軽鎖の可変領域、並びに、クローンのサブセットのＣＤＲ領域のアライメントを、図１３Ａ及び図１３Ｂに示す。
Figure 2023506093000009
クローン１７．０６６、１７．０６７、及び１７．０６９は、ＬＡＬＡ変異（Ｌ２３４Ａ変異、Ｌ２３５Ａ変異）を含むことに留意されたい。
特定のクローンのＣＤＲ配列を以下に示す。
Figure 2023506093000010
Figure 2023506093000011
ヒト化抗体の結合キネティクス
ＢＤＧ１７．０３８、ＢＤＧ１７．０４３、ＢＤＧ１７．０５３、ＢＤＧ１７．０５４、ＢＤＧ１７．０６７、ＢＤＧ１７．０６６、及びＢＤＧ１７．０６９のｈＩＬ－２及びカニクイザルＩＬ－２（ｃＩＬ－２）に対する結合キネティクス及び親和性を求めるために、クローンをＩｇＧに再フォーマットし、発現させ、精製した。その後、本明細書に記載のようにＧＥ捕捉抗体キットを使用してＢＩＡｃｏｒｅ Ｔ２００上でＳＰＲによって抗体を分析した。表９、図１４Ａ～図１４Ｇ、及び図１５Ａ～図１５Ｂ示すように、抗体は、ヒトＩＬ－２及びカニクイザルＩＬ－２の両方に、２桁台の前半のｐＭ範囲で強固に結合する。
ヒト化抗体のサイズ排除クロマトグラフィプロファイル及び熱安定性
ヒト化ＩｇＧであるＢＤＧ１７．０３８、ＢＤＧ１７．０４３、ＢＤＧ１７．０５３、ＢＤＧ１７．０５４、ＢＤＧ１７．０６６、ＢＤＧ１７．０６７、及びＢＤＧ１７．０６９が正しく折り畳まれていて安定しているかどうかを調べるために、抗体を、上記のサイズ排除クロマトグラフィ及び示差走査蛍光分析（ＤＳＦ）分析に供した。その結果を図１６Ａ～図１６Ｇ及び表８に要約する。図１６Ａ～図１６Ｇ及び表８は、これらのＩｇＧが９５％超の非凝集種として産生され、ヒトＩｇＧ１に特有のＳＥＣ保持プロファイル、及び、５４．４℃以上のＴｏｎｓｅｔ及び６９℃以上のＴｍ１を有する熱変性プロファイルを有することを示唆する。受容体識別アッセイの説明を図１７Ａに示し、異なるクローンに対するＳＰＲの結果を図１７Ｂ～図１７Ｇに示す。結論として、ＳＰＲ、ＳＥＣ、及びＤＳＦの実験により、ヒト化抗体が、ヒトＩＬ－２及びカニクイザルＩＬ－２に対して強固に結合し、正確に折り畳まれ、かつ、非常に安定していることが示された。
Figure 2023506093000012
実施例３
本実施例は、ヒトＩＬ－２のＩＬ－２受容体ＣＤ２５に対する結合を特異的に遮断し、インビボで免疫系を調節する抗ＩＬ－２抗体に関する開示を提供する。
ＩＬ－２とヒトＣＤ２５との間の相互作用を特異的に遮断するエピトープでヒトＩＬ－２に結合する抗ＩＬ－２抗体は、いくつかの意味を持つ。これにより、エフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞に対するＩＬ－２抗体複合体の結合が可能になるが、高レベルのＣＤ２５を発現する非免疫細胞（例えば、肺内皮、血管内皮）、または高親和性の三量体複合体を発現する免疫細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ２５＋短寿命細胞傷害性エフェクターＴ細胞）に対するヒトＩＬ－２の結合は阻害される。その結果、これらの抗ＩＬ－２抗体は、制御性Ｔ細胞を大幅に増加させることなく、エフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞を増加させることができる（図１及び図２参照）。加えて、肺内皮細胞がＣＤ２５を発現し、その存在下でＩＬ－２が高レベルになると肺水腫を引き起こすことが以前から分かっている。同様の効果が、血管内皮細胞に発現したＣＤ２５とＩＬ－２との相互作用による血管漏出のＩＬ－２誘導においても観察された。したがって、ＣＤ２５から離れてＩＬ－２を標的とすることによって、本明細書に開示される抗ＩＬ－２抗体は、ＩＬ－２関連の肺及び血管の毒性を低減することが期待される（図３Ａ及び図３Ｂ）。
ヒト化ＩｇＧ－ｈＩＬ－２複合体の受容体識別
ＢＤＧ１７．０２３－ｈＩＬ－２複合体（抗ＩＬ－２抗体とヒトＩＬ－２との複合体）は受容体結合の識別が可能であり、ＣＤ２５ではなくＣＤ１２２に結合して特異的な免疫系調節結果をもたらすことが見出された。ヒト化抗体が同様の効果を有するかどうかを試験するために、ヒト化抗体をｈＩＬ－２と複合体化し、ＳＰＲによってＣＤ１２２及びＣＤ２５に対する結合を分析した。この分析は、本明細書に記載されるＢＤＧ１７．０２３と同様の方法で行った。図１７Ｂ～図１７Ｇ中のＳＰＲトレースに見られるように、ヒト化抗体ＢＤＧ１７．０３８、ＢＤＧ１７．０４３、ＢＤＧ１７．０５３、ＢＤＧ１７．０５４、ＢＤＧ１７．０６６、ＢＤＧ１７．００６７、またはＢＤＧ１７．０６９がｈＩＬ－２と複合体化した場合、その複合体はＣＤ１２２には結合するが、ＣＤ２５には結合しない。このことは、これらの抗体が、ヒトラットキメラＢＤＧ１７．０２３の結合識別特性を保持することを示す。
ヒト化抗体のインビボ特性評価
高親和性抗体によってＩＬ－２上のＣＤ２５結合エピトープをブロックすることにより、エフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞に対するヒトＩＬ－２の結合が可能になるが、ＣＤ２５を発現する非免疫細胞（例えば、肺内皮、血管内皮）または三量体複合体を発現する細胞（例えば、Ｔｒｅｇ細胞、ＣＤ２５＋エフェクターＴ細胞）に対するヒトＩＬ－２の結合が阻害されるという仮説が立てられた。この仮説をインビボで試験するために、抗ＩＬ－２抗体をヒトＩＬ－２と予め複合体化し、健康なＣ５７ＢＬ／６雄マウスに投与した（図１８Ａ及び図１８Ｂ）。図１８Ａ及び図１８Ｂに見られるように、抗ＩＬ－２抗体ＢＤＧ１７．０４３及びＢＤＧ１７．０５４は、おそらくはそれらのエピトープ特異的特性に起因して、制御性Ｔ細胞（図１８Ａ～１８Ｂ）を有意に増加させることなく、エフェクターＴ細胞、ＮＫＴ細胞、及びＮＫ細胞集団を増加させることができた。加えて、ＭＰ ＣＤ８＋Ｔ細胞とＮＫＴの増殖はＩｇＧ－ｈＩＬ－２複合体の投与量に依存しており、ｈＩＬ－２を投与したアイソタイプ対照と比べてはるかに強固であることから、ＢＤＧ１７．０４３／ＩＬ－２とＢＤＧ１７．０５４／ＩＬ－２はＣＤ２５／ＣＤ１２２／ＣＤ１３２三量体経路を避けながらＣＤ１２２／ＣＤ１３２二量体活性化経路を能動的に促進することが示唆された（図１９Ａ及び図１９Ｂ）。
ＩＬ－２と複合化したＢＤＧ１７．０４３及びＢＤＧ１７．０５４は、ＭＰ ＣＤ８エフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞の増殖を誘導したが、制御性Ｔ細胞の大幅な増殖を促進しなかったことから、これらの抗体－ＩＬ２複合体は、Ｔｒｅｇの増殖を促進して免疫系の抗刺激作用を誘導するＪＥＳ６．１－ＩＬ－２（「Spangler JB, Tomala J, Luca VC, Jude KM, Dong S, Ring AM, Votavova P, Pepper M, Kovar M, Garcia KC. Antibodies to Interleukin-2 Elicit Selective T Cell Subset Potentiation through Distinct Conformational Mechanisms. Immunity. 2015 May 19;42(5):815-25.」）や、ファイザー社のＦ５１１１．２－ＩＬ２（「Trotta E, Bessette PH, Silveria SL, et al. A human anti-IL-2 antibody that potentiates regulatory T cells by a structure-based mechanism. Nat Med. 2018;24(7):1005-1014.」）などの他の抗体－ＩＬ２複合体と比較して、免疫系に対する強力な刺激作用を有することが示唆された。
上記のマウス試験では、マウスの体重減少及び非特異的な臨床症状について毎日観察した。マウスにおいて薬物化合物を評価する場合、２０％の体重減少は倫理的介入を必要とする行動項目と考えられる。図２０Ａ及び図２０Ｂに示すように、１７．０４３／ＩＬ－２複合体または１７．０５４／ＩＬ－２複合体が投与されたマウスは、実験終了時の体重減少は１０％以下であった。この結果は、最大用量の２５μｇのＩｇＧ／１．２５μｇＩＬ－２複合体が投与されたマウスを含むすべての用量コホートで観察され、投与された複合体の耐容性が十分に高いことが示された。
Ｂ１６Ｆ１０同系癌モデルにおけるヒト化抗体の活性
ウイルスクリアランス及び癌治療は両方とも、有効性を高めるためには、獲得Ｔ細胞免疫応答を拡大する必要があることが共通している。免疫応答を効果的に活性化する抗ＩＬ－２抗体の能力を、Ｂ１６Ｆ１０同系黒色腫モデルで試験した。Ｃ５７ＢＬ／６マウスにＢ１６Ｆ１０メラノーマを接種し、本明細書に記載のように、１０μｇの抗ＩＬ－２抗体と１μｇのｈＩＬ－２との複合体、またはＰＢＳ対照を投与した。図２１Ａに示すように、ＩＬ－２と複合体化したＢＤＧ１７．０４３またはＢＤＲ１７．０５４が投与されたすべてのマウスは、投与後８日目に有意な腫瘍増殖阻害を示した。これは、アイソタイプ対照及びｈＩＬ－２をマウスに投与した場合（試験１７日目）よりもはるかに大きく、おそらくは強力かつ特異的な免疫刺激に起因すると思われる。加えて、図２１Ｂに見られるように、２種類の抗ＩＬ－２抗体が投与されたマウスにおける一時的な平均体重減少は、６．８４％±３．９％及び３．６％±５．２％であった。これは、同系Ｂ１６Ｆ１０腫瘍モデルの設定において、投与された抗体／ＩＬ－２複合体の耐容性が十分に高いことを示す。
要約すると、これらの試験により、抗ＩＬ－２抗体（１７．０４３及び１７．０５４）は、予め定義されたエピトープでヒトＩＬ－２に対して高親和的に結合し、それにより、ＩＬ－２とその受容体ＣＤ２５との相互作用を完全に阻害することが示された。結論として、抗体／ＩＬ－２複合体は、ＩＬ－２Ｒの二量体（ＣＤ１２２／ＣＤ１３２）に結合し、活性化させる。
二量体受容体複合体は、エフェクター細胞に存在する。インビボでの免疫刺激効果の分析により、抗ＩＬ－２クローン１７．０４３及び１７．０５４の存在下でＩＬ－２がＴ－エフェクター細胞集団（ＩＬ－２Ｒβγ結合及びシグナル伝達）を増加させるが、制御性Ｔ細胞（ＩＬ－２Ｒαβγ結合及びシグナル伝達）に対する影響は観察されないことが実証された。これにより、ＩＬ－２と二量体ＩＬ－２受容体との相互作用は、非毒性免疫刺激をもたらすことが実証された。総合すると、これらのデータは、サイトカインのＣＤ２５陽性細胞に結合する能力を阻害する抗ヒトＩＬ－２抗体が、癌に対する免疫応答を増強させるために癌患者の治療に使用することができるという仮説、または、ＣＯＶＩＤ－１９感染症の場合、ウイルス負荷のクリアランスを増加させることができるという仮説を支持する。加えて、これらの抗体特性は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２感染肺におけるＩＬ－２誘発性肺水腫や肺組織損傷を防止することができる。
実施例４
本実施例は、抗ＩＬ－２抗体の製剤を調べるために実施された試験の説明を提供する。
方法：３０ｍｇ／ｍｌの抗ＩＬ－２クローンＢＤＧ１７．０６９を４種類の製剤でインキュベートすることによって、製剤分析を行った。
（Ｆ１）２０ｍＭのヒスチジン、８％のスクロース、０．０４％のＰＳ８０、ｐＨ５．５；
（Ｆ２）２０ｍＭのヒスチジン、８％のスクロース、０．０４％のＰＳ８０、ｐＨ６．０；
（Ｆ３）２０ｍＭのクエン酸、８％のスクロース、０．０４％のＰＳ８０、ｐＨ５．５；及び、
（Ｆ４）２０ｍＭのヒスチジン、８％のスクロース、１０ｍＭのメチオニン、０．０４％のＰＳ８０、ｐＨ５．５。
抗体を、（１）４０°Ｃでの１週間及び２週間のインキュベーション、（２）２５°Ｃでの３日間の３００ｒｐｍの撹拌、及び、（３）凍結／融解（Ｆ／Ｔ）の３～５回のサイクルに供した。Ｔ＝０及び処置後に、抗体を、外観、サイズ排除クロマトグラフィ超高性能液体クロマトグラフィ（ＳＥＣ－ＵＰＬＣ）、ｐＨ、タンパク質濃度、ＰＩ（キャピラリー等電点電気泳動：ｃＩＥＦ）、準可視粒子（マイクロフローイメージング：ＭＦＩ）、及び、Ｔｍ（ＤＳＣ）について分析した。
結果：図２２Ａ～図２２Ｇに示した表は、様々な抗体製剤の分析結果を示す。
図２２Ａ～図２２Ｇに示した表から分かるように、Ｆ２、Ｆ３、Ｆ４として製剤化したＢＤＧ１７．０６９は、４０°Ｃで１週間及び２週間インキュベーションしても濃度の明らかな変化を示さず、外観の変化も検出されなかった。ＭＦＩによる準可視粒子の分析は、Ｆ１、Ｆ２、またはＦ４として製剤化されたＢＤＧ１７．０６９において、２５μＭ以上の粒子は形成されず、１０μＭ以上の粒子の形成においてわずかな変化が見られることを実証する（図２２Ｂ）。ＳＥＣ－ＵＰＬＣ分析は、４種類すべての製剤条件において、低分子量種のわずかな増加のみが見られたことを明らかにした。加えて、キャリパーＳＤＳ分析では、Ｆ２及びＦ４として製剤化されたＢＤＧ１７．０６９においてわずかな変化が見られ、ｃＩＥＦによる分析では、Ｆ４として製剤化されたＢＤＧ１７．０６９において比較的小さな変化が見られることを示した。しかしながら、Ｆ３として製剤化されたＢＤＧ１７．０６９は、２週間のインキュベーション後、４０°Ｃでの酸性率が大幅に増加した（図２２Ｃ）。
Ｆ２及びＦ３として製剤化したＢＤＧ１７．０６９は、撹拌後にわずかな粒子形成を示した（図２２Ｄ）。また、Ｆ４及びＦ１として製剤化したＢＤＧ１７．０６９は、凍結／解凍の５回のサイクル後に、その外観、ｐＨ、濃度、または５μＭ超の準可視粒子の形成に有意な変化を示さなかった（図２２Ｆ）。
これらの試験結果を総合すると、製剤Ｆ１、Ｆ２、Ｆ３、及びＦ４において、ＢＤＧ１７．０６９が、攪拌後の良好な安定性、凍結融解応力を有し、４０°Ｃで２週間インキュベーションした後の凝集率がごくわずかであったことが実証された。すべてのストレス条件を考慮すると、ＢＤＧ１７．０６９は、２０ｍＭのヒスチジン、８％のスクロース、１０ｍＭのメチオニン、０．０４％のＰＳ８０、ｐＨ５．５で配合した場合（Ｆ４）に最も安定的であることは明らかである。
実施例５
本実施例は、エフェクターＴ細胞及びＮＫ細胞を特異的に活性化することによって、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２などの感染因子に対する免疫応答を増強するとともに、ＩＬ－２の制御性Ｔ細胞及び肺内皮に対する結合を抑制するように設計されたエピトープ特異的抗ｈＩＬ－２抗体の安全性及び有効性を実証する試験についての記載を提供する。
前臨床試験
以下の非臨床試験は、健康な被験者に本化合物を単回静脈内投与した場合の安全性を実証する第１相と、ウイルス感染動物モデルに本化合物を複数回投与した場合の安全性を実証する第２相との、２つの相で実施される。
本明細書に開示されるように、抗ＩＬ－２抗体は、ヒトＩＬ－２に対して特異的に結合するが、マウスＩＬ－２には結合しない。マウスＩＬ－２受容体はヒトＩＬ－２に結合することができるので、ｈＩＬ－２を複合体にロードしてマウスモデルを使用することが可能であるが、正常マウスは、その後、高レベルのマウスＩＬ－２の産生を開始するので望ましくない。そのため、分泌されたｍＩＬ－２は、肺の受容体に結合して浮腫を誘発するので、安全性の解釈を混乱させる。したがって、ヒトＩＬ－２の使用を可能にするか、または内因性ＩＬ－２との抗体交差反応性が生じる動物モデルが好ましいモデルである。マウスモデルの場合、いくつかのオプションが利用可能できる。第１のオプションは、抗体またはＡｂ／ＩＬ２複合体がＣＤ２５発現肺組織に対して直接有害な影響を与えるかどうかを調べるために、ＩＬ－２ノックアウトマウスを使用できることである。このモデルの主な限界は、その後の免疫応答の増幅や、追加的な免疫誘導性サイトカインを欠くことである。第２のオプションは、中和抗体を使用してマウスＩＬ－２を枯渇させた健康なＣ５７ＢＬ／６またはＢａｌｂＣマウスを使用できることである。しかし、このモデルの最適化が依然として必要である。第３のオプションは、ＮＯＤ－ＥＸＬマウスに移植されたＣＤ３４＋ヒト臍帯血細胞を使用して、ヒト免疫系を発現するマウスを作製することである。このモデルの利点は、（いくつかの制限はあるが）ほぼ完全なヒト免疫系が、特にすべてのＴ細胞及びＮＫ細胞集団が発現することである。このモデルは、急性ウイルス感染症モデルや腫瘍学研究におけるモデル系としての使用にも適している。
ここに提示されたデータに基づいて、１７．０６７及び１７．０６９は、カニクイザルＩＬ－２に対する強い親和性を示し、ｈＩＬ－２及びｃＩＬ－２に対する高い相同性に基づき、その両方に対してＡｂ－ＩＬ２複合体受容体識別を提示すると考えられるため、霊長類の安全性モデルを完成することができた。健康なカニクイザルを、単回漸増用量試験に供する。カニクイザルはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－１に感染し、アカゲザルはＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２に感染することが分かっている。いずれの状況においても、軽度のヒト感染で観察されるのと同様に、軽度の肺水腫が観察された。したがって、これらのサルモデルは、抗ＩＬ－２抗体／ＩＬ－２複合体の安全性及び有効性の両方の試験を可能にする。
用量漸増実験は、健康な動物（例えば、ヒト化マウス、カニクイザルなど）を用いて以下のように行うことができる。
ファースト・イン・マン（ＦＩＭ）の健康性の支援。
（ａ）ＩＬ－２ ＫＯマウスの用量漸増；及び／または
（ｂ）ｍＩＬ２抗体欠失ｈＩＬ２＋抗体；及び／または
（ｃ）ＣＤ３４＋ＳＣＴヒト化マウス（＋／－ＩＬ２）；
（ｄ）健康なカニクイザルまたはアカゲザルへの用量漸増単回投与；
（ｅ）健康なカニクイザルまたはアカゲザルへの複数回投与（ＦＩＭ単回漸増投与と同時に実施）。
患者への投与の支援（第１ｂ相または第２相）
（ａ）マウス（上記の（ｂ）または（ｃ）、及び／または、ｈＡＣＥ２トランスジェニック）ウイルスロード（それぞれ急性インフルエンザ感染症モデルまたはコロナウイルス）。
（ｂ）可能な場合は、カニクイザル（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ）またはアカゲザル（ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２）のコロナウイルス急性感染モデル。
臨床試験
パート（１）：健康な被験者を対象とした用量漸増試験を、最大耐量を特定するために実施した。安全性を判定するために、すべての被験者に対して適切な投与間隔を用いて、１０人（試験８人、プラセボ２人）からなるコホートを最大で８つまでを実施した。
パート（２）：パート（１）で求められた用量を用いて、症状の軽い最近の症候性ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２の陽性患者を治療し、安全性と有効性を観察した。有効性は、ウイルスクリアランスまでの時間の短縮と呼吸器感染症の徴候及び症状の低減によって判断することができる。探索的評価項目には、末梢血免疫細胞集団の変化及び活性化状態が含まれる。
化学、製造、及び制御
細胞株、製剤原料（ＤＳ）、及び製剤（ＤＰ）は、ＧＭＰガイダンス下でＧＭＰ認定製造業者が製造することができる（例えば、ウーシー・バイオロジクス社（Wuxi Biologics））。材料の加速生産は、ＩＮＤのための材料を６ヶ月で準備するために行うことができる。すべてのバイオバーデン、ウイルスクリアランス、ウイルス量、宿主細胞タンパク質は、製品の安全性を確保するために、検査し、現在の製造ガイドラインで規定されている仕様まで減らすことができる。Ｐは、静脈内投与用に製剤化することができる。製品の品質を長期にわたって確保するために、安定性試験も同時に行うことができる。

Claims (38)

  1. 重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む単離抗ＩＬ－２抗体であって、
    前記重鎖可変領域（ＶＨ）は、重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）であるＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及びＨＣＤＲ３を含み、
    前記軽鎖可変領域（ＶＬ）は、軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）であるＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及びＬＣＤＲ３を含み、
    前記重鎖相補性決定領域（ＨＣＤＲ）及び前記軽鎖相補性決定領域（ＬＣＤＲ）のアミノ酸配列は、
    （ａ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号３８のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号３９のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号４０のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号４１のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号４２のアミノ酸配列を含み、かつ、前記ＬＣＤＲ３が配列番号４３のアミノ酸配列を含むか、
    （ｂ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号４４のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号４５のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号４６のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号４７のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号４８のアミノ酸配列を含み、かつ、前記ＬＣＤＲ３が配列番号４９のアミノ酸配列を含むか、
    （ｃ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号５０のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５１のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号５２のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５３のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号５４のアミノ酸配列を含み、かつ、前記ＬＣＤＲ３が配列番号５５のアミノ酸配列を含むか、
    （ｄ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号５６のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号５７のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号５８のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号５９のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６０のアミノ酸配列を含み、かつ、前記ＬＣＤＲ３が配列番号６１のアミノ酸配列を含むか、または、
    （ｅ）前記ＨＣＤＲ１が配列番号６２のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ２が配列番号６３のアミノ酸配列を含み、前記ＨＣＤＲ３が配列番号６４のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ１が配列番号６５のアミノ酸配列を含み、前記ＬＣＤＲ２が配列番号６６のアミノ酸配列を含み、かつ、前記ＬＣＤＲ３が配列番号６７のアミノ酸配列を含む、抗体。
  2. 請求項１に記載の抗体であって、
    前記重鎖可変領域（ＶＨ）及び前記軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列は、
    （ａ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１１のアミノ酸配列を含むか、
    （ｂ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１３のアミノ酸配列を含むか、
    （ｃ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１５のアミノ酸配列を含むか、
    （ｄ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１６のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１７のアミノ酸配列を含むか、
    （ｅ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号１８のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号１９のアミノ酸配列を含むか、
    （ｆ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２１のアミノ酸配列を含むか、
    （ｇ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２２のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２３のアミノ酸配列を含むか、
    （ｈ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２４のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２５のアミノ酸配列を含むか、
    （ｉ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号２６のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号２７のアミノ酸配列を含むか、または、
    （ｊ）前記重鎖可変領域（ＶＨ）が配列番号３６のアミノ酸配列を含み、かつ、前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が配列番号３７のアミノ酸配列を含む、抗体。
  3. 請求項１に記載の抗体であって、
    当該抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ´）２、ミニボディ、ダイアボディ、トリアボディ、ナノボディ、または単一ドメイン抗体を含む、抗体。
  4. 請求項１に記載の抗体であって、
    当該抗体は、Ｆｃγ受容体への結合を減少させる突然変異を有する重鎖を含む、抗体。
  5. 請求項４に記載の抗体であって、
    当該抗体は、重鎖配列と、軽鎖配列とを含み、
    前記重鎖配列及び前記軽鎖配列は、
    （ａ）配列番号６８に記載の重鎖配列及び配列番号６９に記載の軽鎖配列、
    （ｂ）配列番号７０に記載の重鎖配列及び配列番号７１に記載の軽鎖配列、または、
    （ｃ）配列番号７２に記載の重鎖配列及び配列番号７３に記載の軽鎖配列、を含む、抗体。
  6. 請求項１に記載の抗体と、薬学的に許容される担体とを含む組成物。
  7. 請求項６に記載の組成物であって、
    ｐＨ５．０～６．０のｐＨ値になるように配合され、
    ヒスチジン緩衝液及びクエン酸緩衝液から選択される緩衝液を含む、組成物。
  8. 請求項７に記載の組成物であって、
    スクロース、メチオニン、またはＰＳ８０のうちの少なくとも１つ、または、それらの任意の組み合わせをさらに含む、組成物。
  9. 請求項６に記載の組成物であって、
    ＩＬ－２をさらに含む、組成物。
  10. 抗ＩＬ－２抗体の重鎖可変領域（ＶＨ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、
    前記重鎖可変領域（ＶＨ）のアミノ酸配列が、配列番号１０、１２、１４、１６、１８、２０、２２、２４、２６、または３６に記載されたアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列。
  11. 請求項１０に記載の単離ポリヌクレオチド配列を含むベクター。
  12. 請求項１１に記載のベクターを含む宿主細胞。
  13. 抗ＩＬ－２抗体の軽鎖可変領域（ＶＬ）をコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、
    前記軽鎖可変領域（ＶＬ）のアミノ酸配列が、配列番号１１、１３、１５、１７、１９、２１、２３、２５、２７、または３７に記載されたアミノ酸配列を含む、単離ポリヌクレオチド配列。
  14. 請求項１３に記載の単離ポリヌクレオチド配列を含むベクター。
  15. 請求項１４に記載のベクターを含む宿主細胞。
  16. 抗ＩＬ－２抗体ｓｃＦｖをコードする単離ポリヌクレオチド配列であって、
    配列番号１、２、３、４、５、３１、３２、３３、３４、または３５に記載されている、単離ポリヌクレオチド配列。
  17. 請求項１６に記載の単離ポリヌクレオチド配列を含むベクター。
  18. 請求項１７に記載のベクターを含む宿主細胞。
  19. 対象における疾患または状態を治療する方法であって、
    請求項１に記載の抗ＩＬ－２抗体を含む組成物を前記対象に投与するステップを含み、
    前記抗体が、免疫細胞のサブセットの分化成長を促進し、ＩＬ－２によって引き起こされる望ましくない影響を低減させ、
    それによって、前記対象における前記疾患または状態を治療する、方法。
  20. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記組成物は、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む、方法。
  21. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記疾患は、ウイルス感染症、細菌感染症、または癌を含む、方法。
  22. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記状態は、免疫系が弱った状態を含み、
    前記状態の治療は、前記免疫系を予防的に高めることを含む、方法。
  23. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記状態は、前記対象における癌の可能性を増加させる遺伝的素因を含む、方法。
  24. 請求項２３に記載の方法であって、
    前記遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、
    前記遺伝子は、腫瘍抑制遺伝子、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）遺伝子、またはそれらの組み合わせを含む、方法。
  25. 請求項２３に記載の方法であって、
    前記遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、
    前記遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＴＰ５３、ＣＨＥＫ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む、方法。
  26. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記免疫細胞は、ナイーブＴ細胞、メモリーＴ細胞、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはナチュラルキラーＴ細胞のうちの１以上を含む、方法。
  27. 請求項１９に記載の方法であって、
    ＩＬ－２によって引き起こされる前記望ましくない影響は、制御性Ｔ細胞の活性化、ＣＤ２５＋Ｔエフェクター細胞のアポトーシス、ＩＬ－２誘導性肺水腫、ＩＬ－２誘導性肺炎、またはＩＬ－２誘導性血管漏出のうちの１以上を含む、方法。
  28. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記抗ＩＬ－２抗体は、ＣＤ２５へのＩＬ－２の結合を阻害する、方法。
  29. 請求項１９に記載の方法であって、
    前記対象は、１以上の免疫チェックポイントを標的とする１以上の免疫チェックポイント阻害剤でさらに治療される、方法。
  30. 請求項２９に記載の方法であって、
    前記対象は、前記抗ＩＬ－２抗体による治療と同時に、前記抗ＩＬ－２抗体による治療の前に、または、前記抗ＩＬ－２抗体による治療の後に、前記免疫チェックポイント阻害剤で治療される、方法。
  31. 請求項２９に記載の方法であって、
    前記免疫チェックポイントは、ＰＤ－１、ＰＤＬ－１、ＣＴＬＡ－４、ＴＩＧＩＴ、ＴＩＭ－３、Ｂ７－Ｈ３、ＣＤ７３、ＬＡＧ３、ＣＤ２７、ＣＤ７０、４－１ＢＢ、ＧＩＴＲ、ＯＸ４０、ＳＩＲＰ－α（ＣＤ４７）、ＣＤ３９、ＩＬＤＲ２、ＶＩＳＴＡ、ＢＴＬＡ、ＶＴＣＮ－１、またはそれらの任意の組み合わせを含む、方法。
  32. 請求項２１に記載の方法であって、
    前記ウイルス感染症は、ＳＡＲＳ－ＣｏＶ－２；ノロウイルス；ロタウイルス；Ａ型、Ｂ型、Ｃ型、Ｄ型、またはＥ型の肝炎ウイルス；狂犬病ウイルス；西ナイルウイルス；エンテロウイルス；エコーウイルス；コクサッキーウイルス；単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）；ＨＳＶ－２；水痘帯状疱疹ウイルス；蚊媒介ウイルス；アルボウイルス；セントルイス脳炎ウイルス；カリフォルニア脳炎ウイルス；リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス；ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）；ポリオウイルス；ジカウイルス；風疹ウイルス；サイトメガロウイルス；ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）；エンテロウイルスＤ６８；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）コロナウイルス；中東呼吸器症候群コロナウイルス；エプスタイン・バー・ウイルス；インフルエンザウイルス；呼吸器合胞体ウイルス；ＪＣウイルスを含むポリオーマウイルス；ＢＫウイルス；エボラウイルス；デングウイルス；またはそれらの任意の組み合わせによって引き起こされる、方法。
  33. 対象を免疫化する方法であって、
    アジュバントを含むワクチンを投与するステップを含み、
    前記アジュバントは、ＩＬ－２抗体アジュバントを含み、
    前記ＩＬ－２抗体アジュバントは、請求項１に記載の抗ＩＬ－２抗体を含む、方法。
  34. 請求項３３に記載の方法であって、
    前記ＩＬ－２抗体アジュバントは、抗ＩＬ－２抗体及びＩＬ－２、または、ＩＬ－２と複合体を形成した抗ＩＬ－２抗体を含む、方法。
  35. 請求項３３に記載の方法であって、
    前記対象は、免疫系が弱っている、方法。
  36. 請求項３３に記載の方法であって、
    前記対象は、該対象における癌の可能性を増加させる遺伝的素因を有する、方法。
  37. 請求項３６に記載の方法であって、
    前記遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、
    前記遺伝子は、腫瘍抑制遺伝子、ミスマッチ修復（ＭＭＲ）遺伝子、またはそれらの組み合わせを含む、方法。
  38. 請求項３６に記載の方法であって、
    前記遺伝的素因は、遺伝子産物の発現または活性の変化を含み、
    前記遺伝子は、ＢＲＣＡ１、ＢＲＡＣ２、ＭＬＨ１、ＭＳＨ２、ＭＳＨ６、ＰＭＳ１、ＰＭＳ２、ＴＰ５３、ＣＨＥＫ２、またはそれらの任意の組み合わせを含む、方法。
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