发明内容
在本申请中,发明人首先开发了具有优良性质的鼠源抗体,其能够特异性识别/结合LAG-3,阻断LAG-3与MHC II或FGL1的结合,并且能够在体外/体内增强免疫细胞活性,刺激免疫应答。因此,该鼠源抗体具有用于预防和/或***、感染或自身免疫性疾病的潜力。
在此基础上,发明人又付出了大量的创造性劳动,对该鼠源抗体进行了深入的研究和改造,从而开发了该鼠源抗体的人源化抗体。本发明的人源化抗体不仅具有极高的人源化程度,而且具有与鼠源抗体和人鼠嵌合抗体(其具有与鼠源抗体完全相同的重链和轻链可变区)基本上相同的(或甚至更优良的)生物学功能。
因此,本发明的抗体(特别是人源化抗体)是极为有利的,其不仅保留了亲本鼠源抗体的功能和性质,从而具有用于预防和***、感染或自身免疫性疾病的潜力;而且具有极高的人源化程度,从而可安全地施用给人受试者,而不引发免疫原性反应。本发明的抗体具有重大的临床价值。
本发明的抗体
因此,在一个方面,本发明提供了一种能够特异性结合LAG-3的抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段包含:
(a)下述3个重链可变区(VH)互补决定区(CDR):
(i)VH CDR1,其具有如SEQ ID NO:1所示的VH中含有的CDR1的序列,或者与所述VH中含有的CDR1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
(ii)VH CDR2,其具有如SEQ ID NO:1所示的VH中含有的CDR2的序列,或者与所述VH中含有的CDR2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;和
(iii)VH CDR3,其具有如SEQ ID NO:1所示的VH中含有的CDR3的序列,或者与所述VH中含有的CDR3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
和/或
(b)下述3个轻链可变区(VL)CDR:
(iv)VL CDR1,其具有如SEQ ID NO:2所示的VL中含有的CDR1的序列,或者与所述VL中含有的CDR1的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
(v)VL CDR2,其具有如SEQ ID NO:2所示的VL中含有的CDR2的序列,或者与所述VL中含有的CDR2的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;和
(vi)VL CDR3,其具有如SEQ ID NO:2所示的VL中含有的CDR3的序列,或者与所述VL中含有的CDR3的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列。
在某些优选的实施方案中,(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。
在某些优选的实施方案中,所述重链可变区(VH)中含有的CDR1、CDR2及CDR3,和/或所述轻链可变区(VL)中含有的CDR1、CDR2及CDR3由Kabat、Chothia或IMGT编号***定义。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)选自下列的重链可变区(VH)中含有的3个CDR:
如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:22、SEQID NO:24、SEQ ID NO:26任一项所示的VH;
和/或
(b)选自下列的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR:
如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:23、SEQID NO:25、SEQ ID NO:27任一项所示的VL。
在某些优选的实施方案中,所述重链可变区(VH)中含有的3个CDR和/或所述轻链可变区(VL)中含有的3个CDR由Kabat、Chothia或IMGT编号***定义。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:如SEQ ID NO:1所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;
其中,所述重链可变区(VH)中含有的3个CDR和所述轻链可变区(VL)中含有的3个CDR通过IMGT编号***确定。
在某些优选的实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包含:
(a)下述3个重链可变区(VH)CDR:
(i)VH CDR1,其由下述序列组成:SEQ ID NO:3,或与SEQ ID NO:3相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,
(ii)VH CDR2,其由下述序列组成:SEQ ID NO:4,或与SEQ ID NO:4相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,和
(iii)VH CDR3,其由下述序列组成:SEQ ID NO:5,或与SEQ ID NO:5相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
和/或
(b)下述3个轻链可变区(VL)CDR:
(iv)VL CDR1,其由下述序列组成:SEQ ID NO:6,或与SEQ ID NO:6相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,
(v)VL CDR2,其由下述序列组成:SEQ ID NO:7,或与SEQ ID NO:7相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,和
(vi)VL CDR3,其由下述序列组成:SEQ ID NO:8,或与SEQ ID NO:8相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
其中,所述重链可变区(VH)CDR和所述轻链可变区(VL)CDR由IMGT编号***定义。
在某些优选的实施方案中,(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:3所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:4所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:5所示的VH CDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:6所示的VL CDR1;如SEQ ID NO:7所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)如SEQ ID NO:1所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;或
(b)如SEQ ID NO:24所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ IDNO:25所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;
其中,所述重链可变区(VH)中含有的3个CDR和所述轻链可变区(VL)中含有的3个CDR由Chothia编号***定义。
在某些优选的实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包含:
(a)下述3个重链可变区(VH)CDR:
(i)VH CDR1,其由下述序列组成:SEQ ID NO:9,或与SEQ ID NO:9相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,
(ii)VH CDR2,其由下述序列组成:SEQ ID NO:10,或与SEQ ID NO:10相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,和
(iii)VH CDR3,其由下述序列组成:SEQ ID NO:11,或与SEQ ID NO:11相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
和/或
(b)下述3个轻链可变区(VL)CDR:
(iv)VL CDR1,其由下述序列组成:SEQ ID NO:12,或与SEQ ID NO:12相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,
(v)VL CDR2,其由下述序列组成:SEQ ID NO:13,或与SEQ ID NO:13相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,和
(vi)VL CDR3,其由下述序列组成:SEQ ID NO:8,或与SEQ ID NO:8相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
其中,所述重链可变区(VH)CDR和所述轻链可变区(VL)CDR由Chothia编号***定义。
在某些优选的实施方案中,(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:9所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:10所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:11所示的VHCDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:12所示的VL CDR1;如SEQID NO:13所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:9所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:10所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:11所示的VHCDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:12所示的VL CDR1;如SEQID NO:54所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)如SEQ ID NO:1所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ ID NO:2所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;
(b)如SEQ ID NO:22所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ IDNO:23所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;
(c)如SEQ ID NO:24所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ IDNO:25所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;或
(d)如SEQ ID NO:26所示的重链可变区(VH)中含有的3个CDR;和/或,如SEQ IDNO:27所示的轻链可变区(VL)中含有的3个CDR;
其中,所述重链可变区(VH)中含有的3个CDR和所述轻链可变区(VL)中含有的3个CDR由Kabat编号***定义。
在某些优选的实施方案中,所述抗体或其抗原结合片段包含:
(a)下述3个重链可变区(VH)CDR:
(i)VH CDR1,其由下述序列组成:SEQ ID NO:14,或与SEQ ID NO:14相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,
(ii)VH CDR2,其由下述序列组成:SEQ ID NO:15,或与SEQ ID NO:15相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,和
(iii)VH CDR3,其由下述序列组成:SEQ ID NO:11,或与SEQ ID NO:11相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
和/或
(b)下述3个轻链可变区(VL)CDR:
(iv)VL CDR1,其由下述序列组成:SEQ ID NO:12,或与SEQ ID NO:12相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,
(v)VL CDR2,其由下述序列组成:SEQ ID NO:13,或与SEQ ID NO:13相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列,和
(vi)VL CDR3,其由下述序列组成:SEQ ID NO:8,或与SEQ ID NO:8相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个或3个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;
其中,所述重链可变区(VH)CDR和所述轻链可变区(VL)CDR由Kabat编号***定义。
在某些优选的实施方案中,(i)-(vi)任一项中所述的置换为保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:14所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:15所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:11所示的VHCDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:12所示的VL CDR1;如SEQID NO:13所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:14所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:55所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:11所示的VHCDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:12所示的VL CDR1;如SEQID NO:13所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:56所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:57所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:11所示的VHCDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:12所示的VL CDR1;如SEQID NO:54所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含:如SEQ IDNO:14所示的VH CDR1;如SEQ ID NO:58所示的VH CDR2;以及,如SEQ ID NO:11所示的VHCDR3;并且,所述抗体或其抗原结合片段的VL包含:如SEQ ID NO:12所示的VL CDR1;如SEQID NO:13所示的VL CDR2;以及,如SEQ ID NO:8所示的VL CDR3。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含上述重链可变区(VH)CDR和/或轻链可变区(VL)CDR,进一步包含来源于哺乳动物(例如,鼠或人)免疫球蛋白的构架区(FR)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含来源于鼠免疫球蛋白的重链可变区(VH)构架区(FR),和/或所述抗体或其抗原结合片段的VL包含来源于鼠免疫球蛋白的轻链可变区(VL)构架区(FR)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的VH包含来源于人免疫球蛋白的重链可变区(VH)构架区(FR),和/或所述抗体或其抗原结合片段的VL包含来源于人免疫球蛋白的轻链可变区(VL)构架区(FR)。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区FR和/或轻链可变区FR可以包含一个或多个非人源(例如,鼠源)氨基酸残基,例如所述重链构架区FR和/或轻链构架区FR可以包含一或多个氨基酸回复突变,在这些回复突变中有相应的鼠源氨基酸残基。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)人免疫球蛋白的重链构架区或其变体,所述变体与其所源自的胚系抗体基因序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换);和/或
(b)人免疫球蛋白的轻链构架区或其变体,所述变体与其所源自的胚系抗体基因序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换)。
因此,在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段是人源化的。在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的人源化程度为至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NOs:1、16、18、20、22、24、26任一项所示的序列;
(ii)与SEQ ID NOs:1、16、18、20、22、24、26任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NOs:1、16、18、20、22、24、26任一项所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和/或
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NOs:2、17、19、21、23、25、27任一项所示的序列;
(v)与SEQ ID NOs:2、17、19、21、23、25、27任一项所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NOs:2、17、19、21、23、25、27任一项所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:1所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:1所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:1所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:2所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:2所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:2所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:16所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:16所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:16所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:17所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:17所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:17所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:18所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:18所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:18所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:19所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:19所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:19所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:20所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:20所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:20所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:21所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:21所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:21所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:22所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:22所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:22所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:23所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:23所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:23所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:24所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:24所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:24所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:25所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:25所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:25所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链可变区(VH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:26所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:26所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:26所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链可变区(VL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:27所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:27所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:27所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(1)具有如SEQ ID NO:1所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:2所示的序列的VL;
(2)具有如SEQ ID NO:16所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:17所示的序列的VL;
(3)具有如SEQ ID NO:18所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:19所示的序列的VL;
(4)具有如SEQ ID NO:20所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:21所示的序列的VL;
(5)具有如SEQ ID NO:22所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:23所示的序列的VL;
(6)具有如SEQ ID NO:24所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:25所示的序列的VL;或
(7)具有如SEQ ID NO:26所示的序列的VH和具有如SEQ ID NO:27所示的序列的VL。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段进一步包含来源于哺乳动物(例如,鼠或人)免疫球蛋白的恒定区序列或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加。在某些优选的实施方案中,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加);和/或,本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加);和/或,本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换)。
在某些优选实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换);和/或,本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含人免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)的变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有改变(例如增强、降低或消除)的效应子功能。在此类实施方案中,所述变体与其所源自的野生型序列相比通常具有至少一个氨基酸的置换。抗体的Fc区介导几种重要的效应子功能,例如ADCC、吞噬作用、CDC等。在某些情况下,这些效应子功能对于治疗性抗体是需要的;但在其他情况下,这些效应子功能可能是不必要的或甚至是有害的,这取决于预期目的。因此,在某些实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具有降低或甚至消除的效应子功能(例如ADCC和/或CDC活性)。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含人IgG重链恒定区的变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有以下置换中的至少一个:Ser228Pro、Leu234Ala、Leu235Ala、Gly237Ala、Asn297Ala、Asp356Glu和Leu358Met(以上提及的氨基酸位置是根据EU编号***的位置,Edelman,G.M.et al.,Proc.Natl.Acad.USA,63,78-85(1969).PMID:5257969)。
在某些示例性实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含人IgG4重链恒定区的变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有以下置换:Ser228Pro(根据EU编号***的位置)。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具有降低的ADCC和CDC活性。
在某些示例性实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区的变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有以下置换:Leu234Ala、Leu235Ala和Gly237Ala(根据EU编号***的位置)。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具有降低的ADCC和CDC活性。
在某些示例性实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含人IgG1重链恒定区的变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有以下置换:Asn297Ala、Asp356Glu和Leu358Met(根据EU编号***的位置)。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具有消除的ADCC活性。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含人免疫球蛋白的重链恒定区(CH)的变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有基本不变的效应子功能。在此类实施方案中,所述变体与其所源自的野生型序列相比可以具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含鼠免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加);和/或,本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含鼠免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含鼠免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有一个或多个氨基酸的置换、缺失或添加(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的置换、缺失或添加;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加);和/或,本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含鼠免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段的重链包含鼠免疫球蛋白的重链恒定区(CH)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换);和/或,本发明的抗体或其抗原结合片段的轻链包含鼠免疫球蛋白的轻链恒定区(CL)或其变体,所述变体与其所源自的野生型序列相比具有至多20个氨基酸的保守置换(例如至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换;例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的保守置换)。
在某些优选的实施方案中,所述重链恒定区是IgG重链恒定区,例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区。在某些优选的实施方案中,所述重链恒定区是鼠IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区。在某些优选的实施方案中,所述重链恒定区是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4重链恒定区。在某些实施方案中,优选地所述重链恒定区是人IgG1或IgG4重链恒定区。在某些优选的实施方案中,所述重链恒定区是如SEQ ID NO:30所示的IgG1重链恒定区,或如SEQ ID NO:28所示的IgG4重链恒定区。
在某些优选的实施方案中,所述轻链恒定区是κ轻链恒定区。在某些优选的实施方案中,所述轻链恒定区是鼠κ轻链恒定区。在某些优选的实施方案中,所述轻链恒定区是人κ轻链恒定区。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链恒定区(CH),其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:30所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:30所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:28或SEQ ID NO:30所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和/或
(b)轻链恒定区(CL),其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:33所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:33所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:33所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,(ii)中所述的序列选自如SEQ ID NO:29、31或32所示的氨基酸序列。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)如SEQ ID NOs:28-32任一项所示的重链恒定区(CH);和/或
(b)如SEQ ID NO:33所示的轻链恒定区(CL)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:38所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:38所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:38所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:39所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:39所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:39所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:40所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:40所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:40所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:41所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:41所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:41所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:42所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:42所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:42所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:43所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:43所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:43所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:44所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:44所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:44所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:45所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:45所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:45所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:46所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:46所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:46所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:47所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:47所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:47所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:48所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:48所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:48所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:49所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:49所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:49所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:50所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:50所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:50所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:51所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:51所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:51所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(a)重链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(i)SEQ ID NO:52所示的序列;
(ii)与SEQ ID NO:52所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(iii)与SEQ ID NO:52所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列;
和
(b)轻链,其包含选自下列的氨基酸序列:
(iv)SEQ ID NO:53所示的序列;
(v)与SEQ ID NO:53所示的序列相比具有一个或几个氨基酸的置换、缺失或添加(例如1个,2个,3个,4个或5个氨基酸的置换、缺失或添加)的序列;或
(vi)与SEQ ID NO:53所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性的序列。
在某些优选的实施方案中,(ii)或(v)中所述的置换是保守置换。
在某些示例性实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段包含:
(1)具有如SEQ ID NO:38所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:39所示的序列的轻链;
(2)具有如SEQ ID NO:40所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:41所示的序列的轻链;
(3)具有如SEQ ID NO:42所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:43所示的序列的轻链;
(4)具有如SEQ ID NO:44所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:45所示的序列的轻链;
(5)具有如SEQ ID NO:46所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:47所示的序列的轻链;
(6)具有如SEQ ID NO:48所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:49所示的序列的轻链;
(7)具有如SEQ ID NO:50所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:51所示的序列的轻链;或
(8)具有如SEQ ID NO:52所示的序列的重链和具有如SEQ ID NO:53所示的序列的轻链。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体或人源化抗体。在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段选自scFv、Fab、Fab’、(Fab’)2、Fv片段、二硫键连接的Fv(dsFv)、双抗体(diabody)、双特异性抗体、多特异性抗体。
本发明的抗体或其抗原结合片段对LAG-3(特别是人LAG-3)具有高特异性和高亲和力。在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段能够以约1×10
-9M或更低的K
D结合LAG-3(特别是人LAG-3),如通过生物薄膜干涉技术(BLI)(如ForteBio
)所测量的;优选地,以约5×10
-10M或更低的K
D结合LAG-3(特别是人LAG-3)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备以下生物学功能中的至少一项:
(1)特异性识别/结合LAG-3(特别是人LAG-3);
(2)抑制和/或阻断LAG-3与MHC II的结合,或者抑制和/或阻断由LAG-3结合MHCII介导的细胞内信号传导;
(3)抑制和/或阻断LAG-3与纤维介素蛋白1(Fibrinogen-like protein 1,FGL1)的结合,或者抑制和/或阻断由LAG-3结合FGL1介导的细胞内信号传导;
(4)在体外及受试者体内提高免疫细胞(特别是T细胞,例如抗原特异性T细胞)活性;
(5)在体外及受试者体内提高免疫细胞(特别是T细胞,例如抗原特异性T细胞)的效应细胞因子(例如,IL-2、IFN-γ等)的分泌水平、增殖活性、活化标记(例如,CD25、CD69等)的表达水平、和/或细胞杀伤活性;
(6)在体外及受试者体内增强免疫应答(特别是抗原特异性T细胞应答);
(7)在受试者中预防和/***或感染;
(8)在患有肿瘤的受试者中具有降低或消除的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒性(CDC);
(9)在患有自身免疫性疾病的受试者中清除LAG-3阳性免疫细胞(例如,LAG-3阳性的活化T细胞);
(10)在受试者中预防和/治疗自身免疫性疾病;
(11)在患有自身免疫性疾病的受试者中诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒性(CDC)。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备上述生物学功能的任意组合。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备(1)-(11)任一项所述的生物学功能。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备(1)-(7)、(9)-(10)任一项所述的生物学功能。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备(1)-(7)任一项所述的生物学功能。在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备(1)-(8)任一项所述的生物学功能。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备(1)、(9)-(10)任一项所述的生物学功能。在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段具备(1)、(9)-(11)任一项所述的生物学功能。
在某些优选的实施方案中,本发明本发明的抗体或其抗原结合片段衍生自下列的单克隆抗体,或是下列的单克隆抗体:
杂交瘤细胞株#27所产生的单克隆抗体,其中,杂交瘤细胞株#27保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),且具有保藏号CCTCC NO.C2017183。
在本发明中,本发明的抗体或其抗原结合片段可以包括这样的变体,所述变体与其所源自的抗体或其抗原结合片段相比差异仅在于一个或多个(例如,至多20个、至多15个、至多10个、或至多5个氨基酸的保守置换)氨基酸残基的保守置换,或者与其所源自的抗体或其抗原结合片段具有至少85%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%、或100%的序列同一性,且基本保留了其所源自的抗体或其抗原结合片段的上述生物学功能。
衍生的抗体
本发明的抗体或其抗原结合片段可进行衍生化,例如被连接至另一个分子(例如另一个多肽或蛋白)。通常,抗体或其抗原结合片段的衍生化(例如,标记)不会不利影响其对LAG-3(特别是人LAG-3)的结合。因此,本发明的抗体或其抗原结合片段还意欲包括此类衍生化的形式。例如,可以将本发明的抗体或其抗原结合片段功能性连接(通过化学偶合、基因融合、非共价连接或其它方式)于一个或多个其它分子基团,例如另一个抗体(例如,形成双特异性抗体),检测试剂,药用试剂,和/或能够介导抗体或抗原结合片段与另一个分子结合的蛋白或多肽(例如,抗生物素蛋白或多组氨酸标签)。
一种类型的衍生化抗体(例如,双特异性抗体)是通过交叉连接2个或多个抗体(属于同一类型或不同类型)而产生的。获得双特异性抗体的方法是本领域公知的,其实例包括但不限于,化学交联法、细胞工程法(杂交杂交瘤法)或基因工程法。
另一种类型的衍生化抗体是与治疗性部分连接的抗体。本发明所述的治疗性部分可以是细菌毒素、细胞毒性药物或放射性毒素,其实例包括但不限于,泰素(taxol)、细胞松弛素B(cytochalasin B)、丝裂霉素(mitomycin)、依托泊苷(etoposide)、长春新碱(vincristine)或其它抗代谢物、烷化剂、抗生素或抗有丝***药物。
另一种类型的衍生化抗体是标记的抗体。例如,可以将本发明的抗体或其抗原结合片段连接至可检测的标记。本发明所述的可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。这类标记是本领域熟知的,其实例包括但不限于,酶(例如,辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶,等)、放射性核素(例如,
3H、
125I、
35S、
14C或
32P)、荧光染料(例如,异硫氰酸荧光素(FITC)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、藻红蛋白(PE)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如Cy7、Alexa750))、吖啶酯类化合物、磁珠(例如,
)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如,聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶,等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如,链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括,但不限于,美国专利3,817,837;3,850,752;3,939,350;3,996,345;4,277,437;4,275,149;及4,366,241(全部通过引用并入本文)。如上所述的可检测的标记可通过本领域已知的方法检测。例如,放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测,荧光标记物可使用光检测器检测,以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测,及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中,此类标记能够适用于免疫学检测(例如,酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。在某些实施方案中,可通过不同长度的接头(linker)将如上所述的可检测的标记连接至本发明的抗体或其抗原结合片段,以降低潜在的位阻。
此外,本发明的抗体或其抗原结合片段还可以用化学基团进行衍生,例如聚乙二醇(PEG),甲基或乙基,或者糖基。这些基团可用于改善抗体的生物学特性,例如增加血清半衰期。
杂交瘤细胞株
在另一个方面,本发明提供了一种杂交瘤细胞株,其为:
杂交瘤细胞株#27,其于2017年10月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC),且具有保藏号CCTCC NO.C2017183。
抗体的制备
本发明的抗体可以本领域已知的各种方法来制备,例如通过基因工程重组技术来获得。例如,通过化学合成或PCR扩增获得编码本发明抗体的重链和轻链基因的DNA分子。将所得DNA分子***表达载体内,然后转染宿主细胞。然后,在特定条件下培养转染后的宿主细胞,并表达本发明的抗体。
本发明的抗原结合片段可以通过水解完整的抗体分子获得(参见Morimoto etal.,J.Biochem.Biophys.Methods 24:107-117(1992)and Brennan et al.,Science 229:81(1985))。另外,这些抗原结合片段也可以直接由重组宿主细胞产生(reviewed inHudson,Curr.Opin.Immunol.11:548-557(1999);Little et al.,Immunol.Today,21:364-370(2000))。比如,Fab’片段可以直接从宿主细胞中获得;可以将Fab’片段化学偶联形成F(ab’)2片段(Carter et al.,Bio/Technology,10:163-167(1992))。另外,Fv、Fab或F(ab’)2片段也可以直接从重组宿主细胞培养液中直接分离得到。本领域的普通技术人员完全知晓制备这些抗原结合片段的其它技术。
因此,在另一个方面,本发明提供了一种分离的核酸分子,其包含编码本发明的抗体或其抗原结合片段,或其重链可变区和/或轻链可变区的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中,所述分离的核酸分子编码本发明的抗体或其抗原结合片段,或其重链可变区和/或轻链可变区。
在某些优选的实施方案中,所述分离的核酸分子包含分别编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区的第一核酸和第二核酸,或分别编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链可变区和重链恒定区的的第一核酸和编码其轻链可变区和轻链恒定区的第二核酸,或分别编码本发明的抗体或其抗原结合片段的重链和轻链的第一核酸和第二核酸,或与所述第一核酸和第二核酸基本上相同的序列;其中,该抗体选自下组中的任意一种:AB12T2、AB12T3、AB12T4、AB12T5、AB12T6、AB12T7、AB12T8。例如,所述分离的核酸分子可以包含序列表中SEQ ID NO:34,SEQ ID NO:35所示的核苷酸序列或与其基本上相同的序列。
在某些优选的实施方案中,本发明提供了一种的分离的核酸分子,其包含编码抗体重链可变区的核酸分子,和/或编码抗体轻链可变区的核酸分子,其中,所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有选自下列的序列:(a)如SEQ ID NO:34所示的核苷酸序列,或(b)与(a)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如,与(a)所述的核苷酸序列相比,具有至少大约85%、90%、95%、99%或更高序列同一性的序列,或具有一个或更多个核苷酸取代的序列),或(c)与(a)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列;所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有选自下列的序列:(d)如SEQ ID NO:35所示的核苷酸序列,或(e)与d)所述的核苷酸序列基本上相同的序列(例如,与d)所述的核苷酸序列相比,具有至少大约85%、90%、95%、99%或更高序列同一性的序列,或具有一个或更多个核苷酸取代的序列),或(f)与(d)所述的核苷酸序列相差不超过3、6、15、30或45个核苷酸的序列。
在某些优选的实施方案中,所述编码抗体重链可变区的核酸分子具有如SEQ IDNO:34所示的核苷酸序列,以及所述编码抗体轻链可变区的核酸分子具有如SEQ ID NO:35所示的核苷酸序列。在某些优选的实施方案中,本发明的分离的核酸分子包含如SEQ IDNO:34所示的编码抗体重链可变区的核酸分子,和/或如SEQ ID NO:35所示的编码抗体轻链可变区的核酸分子。
在另一个方面,本发明提供了一种载体(例如克隆载体或表达载体),其包含本发明的分离的核酸分子。在某些优选的实施方案中,本发明的载体是例如质粒,粘粒,噬菌体等。在某些优选的实施方案中,所述载体能够在受试者(例如哺乳动物,例如人)体内表达本发明的抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面,本发明提供了一种宿主细胞,其包含本发明的分离的核酸分子或本发明的载体。此类宿主细胞包括但不限于,原核细胞例如大肠杆菌细胞,以及真核细胞例如酵母细胞,昆虫细胞,植物细胞和动物细胞(如哺乳动物细胞,例如小鼠细胞、人细胞等)。在某些优选的实施方案中,本发明的宿主细胞是哺乳动物细胞,例如CHO(例如CHO-K1、CHO-S、CHO DG44)。
在另一个方面,提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法,其包括,在允许所述抗体或其抗原结合片段表达的条件下,培养本发明的宿主细胞,和从培养的宿主细胞培养物中回收所述抗体或其抗原结合片段。
治疗方法和药物组合物
本发明的抗体或其抗原结合片段可用于体外或在受试者体内抑制和/或阻断由LAG-3结合MHC II和/或FGL1介导的细胞内信号传导,提高免疫细胞活性,增强免疫应答,以及用于预防和/或治疗与免疫异常有关的疾病(例如,肿瘤、感染或自身免疫性疾病),或者用作免疫佐剂。
因此,在另一个方面,本发明提供了一种药物组合物,其含有本发明的抗体或其抗原结合片段或其前体药物(例如probody),以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
在某些优选的实施方案中,所述药物组合物还可以包含另外的药学活性剂。在某些优选的实施方案中,所述另外的药学活性剂是具有抗肿瘤活性的药物。在某些优选的实施方案中,所述另外的药学活性剂是用于治疗感染的药物。在某些优选的实施方案中,所述另外的药学活性剂是用于治疗自身免疫性疾病的药物。
某些优选的实施方案中,在所述药物组合物中,本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供。因此,本发明的抗体或其抗原结合片段与所述另外的药学活性剂可以同时、分开或相继施用。
另一方面,本发明的药物组合物还包含特异性结合选自以下受体或配体的第二抗体或编码所述第二抗体的核酸,其中,所述受体或配体选自:PD-1、PD-L1、PD-L2,TIM-3、TIGIT、VISTA、CTLA-4、OX40、BTLA、4-1BB、CD96、CD27、CD28、CD40、LAIR1、CD160、2B4、TGF-R、KIR、ICOS、GITR、CD3、CD30、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、SLAMF7、NKp80、B7-H3及其任意组合。
在某些特定的实施方案中,所述第二抗体是结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中,本发明的药物组合物包含结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段。
在某些优选的实施方案中,本发明的药物组合物包含的结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段选自:AB12M4或其抗原结合片段,Nivolumab(纳武单抗或
或欧狄沃)或其抗原结合片段,和Pembrolizumab(帕博利珠单抗或
或可瑞达)或其抗原结合片段。AB12M4可参见中国专利申请CN106519034A。
在某些优选的实施方案中,本发明的药物组合物包含的结合人PD-1的抗体或其结合抗原片段为AB12M4。
在某些特定的实施方案中,所述第二抗体是结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中,本发明的药物组合物包含结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面,本发明提供了一种免疫原性组合物,其含有本发明的抗体或其抗原结合片段,以及免疫原。
在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段作为佐剂。
在某些优选的实施方案中,所述免疫原选自与肿瘤相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、肿瘤细胞、由所述抗原致敏的树突状细胞,及其任意组合。
在某些优选的实施方案中,所述免疫原选自与病原体(例如,病毒)相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、灭活或减毒的病原体、由所述抗原致敏的树突状细胞,及其任意组合。
在某些优选的实施方案中,所述免疫原性组合物还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。在某些优选的实施方案中,所述免疫原性组合物包含稳定剂。
在某些优选的实施方案中,在所述免疫原性组合物中,本发明的抗体或其抗原结合片段与所述免疫原作为分离的组分或作为同一组合物的组分提供。因此,本发明的抗体或其抗原结合片段与所述免疫原可以同时、分开或相继施用。
在另一个方面,本发明涉及本发明的抗体或其抗原结合片段、药物组合物或免疫原性组合物在制备药物中的用途,所述药物用于:
(1)在体外或受试者(例如人)体内提高免疫细胞活性;
(2)在受试者(例如人)中增强免疫应答;
(3)在受试者(例如人)中预防和/或***;
(4)在受试者(例如人)中预防和/或治疗感染;或
(5)在受试者(例如人)中预防和/或治疗自身免疫性疾病。
在另一个方面,本发明涉及本发明的抗体或其抗原结合片段用作佐剂的用途,或者,在制备免疫原性组合物中的用途,所述免疫原性组合物用于在受试者中增强免疫应答;其中,所述免疫原性组合物包含本发明的抗体或其抗原结合片段以及免疫原。
在某些优选的实施方案中,所述免疫原选自与肿瘤相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、肿瘤细胞、由所述抗原致敏的树突状细胞,及其任意组合。在此类实施方案中,所述免疫原性组合物用于在受试者中预防和/或***。
在某些优选的实施方案中,所述免疫原选自与病原体(例如,病毒)相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、灭活或减毒的病原体、由所述抗原致敏的树突状细胞,及其任意组合。在此类实施方案中,所述免疫原性组合物用于在受试者中预防和/或治疗感染。
在某些优选的实施方案中,所述免疫原性组合物还包含药学上可接受的载体和/或赋形剂。在某些优选的实施方案中,所述免疫原性组合物包含稳定剂。
在另一个方面,本发明提供了一种在体外提高免疫细胞活性的方法,所述方法包括将所述免疫细胞与本发明的抗体或其抗原结合片段接触的步骤。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段可以具有降低或甚至消除的ADCC和/或CDC活性。
在某些优选的实施方案中,可使用任何适宜的指示物来测量免疫细胞的活性。此类适宜的指示物的非限制性实例包括:在本发明的抗体或其抗原结合片段存在的条件下,免疫细胞(例如T细胞)的细胞因子(例如,IL-2、IFN-γ等)分泌水平、增殖活性、和/或活化标记(例如,CD25、CD69等)表达水平增加。
在某些优选的实施方案中,所述方法用于***。在此类实施方案中,通过上述方法获得的免疫细胞可以过继转移到受试者中以***。在本发明的抗体或其抗原结合片段存在下进行体外活化可预期提高过继转移的免疫细胞的活性,从而有利于这些过继转移的免疫细胞在受试者体内的肿瘤杀伤作用。在某些优选的实施方案中,所述免疫细胞是肿瘤浸润淋巴细胞。
在某些优选的实施方案中,所述方法还包括将所述免疫细胞与另外的药学活性剂接触的步骤,所述另外的药学活性剂可以选自免疫反应刺激剂,例如免疫刺激性细胞因子或另外的免疫刺激性抗体。在某些示例性实施方案中,所述免疫刺激性细胞因子选自例如IL-2、IL-3、IL-12、IL-15、IL-18、IFN-γ、IL-10、TGF-β、GM-CSF,及其任意组合。在某些示例性实施方案中,所述免疫刺激性抗体选自结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段,或结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段。
在另一个方面,本发明提供了一种在受试者中提高免疫细胞活性和/或增强免疫应答的方法,所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段可以具有降低或甚至消除的ADCC和/或CDC活性。
在某些优选的实施方案中,所述免疫应答是特异性免疫应答(例如,抗原特异性T细胞应答)。
在某些优选的实施方案中,所述方法用于预防和/或***。在此类实施方案中,所述受试者患有肿瘤。
在某些优选的实施方案中,所述方法用于预防和/或治疗感染。在此类实施方案中,所述受试者患有感染。在某些优选的实施方案中,所述感染是病毒感染,例如慢性病毒感染。
在某些优选的实施方案中,所述免疫细胞为T细胞,例如细胞毒性T细胞(CTL)或抗原特异性T细胞。在某些优选的实施方案中,所述免疫细胞为肿瘤浸润淋巴细胞。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与另外的药学活性剂联合施用。这种另外的药学活性剂可以在施用本发明的抗体(或其抗原结合片段)之前、同时或之后施用。在某些优选的实施方案中,所述另外的药学活性剂是具有免疫刺激活性的药物,例如免疫刺激性抗体。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与第二抗体联合施用,所述第二抗体特异性结合选自以下受体或配体:PD-1、PD-L1、PD-L2,TIM-3、TIGIT、VISTA、CTLA-4、OX40、BTLA、4-1BB、CD96、CD27、CD28、CD40、LAIR1、CD160、2B4、TGF-R、KIR、ICOS、GITR、CD3、CD30、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、SLAMF7、NKp80、B7-H3及其任意组合。所述第二抗体可以在施用本发明的抗体(或其抗原结合片段)之前、同时或之后施用。
在某些示例性实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段联合施用。在某些优选的实施方案中,所述结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段选自AB12M4或其抗原结合片段,Nivolumab(纳武单抗或
或欧狄沃)或其抗原结合片段,和Pembrolizumab(帕博利珠单抗或
或可瑞达)或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中,所述结合人PD-1的抗体或其结合抗原片段为AB12M4。
在某些示例性实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段联合施用。
在另一个方面,本发明提供了一种用于在受试者(例如人)中预防和/或***的方法,所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段可以具有降低或甚至消除的ADCC和/或CDC活性。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与另外的药学活性剂联合施用,如与另外的具有抗肿瘤活性的药物联合施用。
在某些优选的实施方案中,所述另外的药学活性剂如毒素、细胞毒剂、放射性同位素、免疫抑制剂或疫苗。本发明的抗LAG-3抗体或其抗原结合片段可连接至所述另外的药学活性剂(作为免疫复合体)或与所述另外的药学活性剂分开施用。在后一种情况下,本发明的抗LAG-3抗体或其抗原结合片段可在所述另外的药学活性剂之前、之后或与另外的药学活性剂共同施用,或可与其他已知疗法(如抗癌疗法、如辐射)共同施用。
在某些优选的实施方案中,另外的药学活性剂治疗剂包括但不限于抗肿瘤剂,诸如多柔比星(阿霉素)、顺铂、博来霉素硫酸盐、亚硝基脲氮芥、苯丁酸氮芥和环磷酰胺羟脲,这些治疗剂本身仅在对患者具有毒性或亚毒性水平时才有效。靶特异性效应细胞,如连接至本发明的抗LAG-3抗体或其抗原结合片段的效应细胞,也可用作治疗剂。靶特异性效应细胞可以是人白细胞,诸如巨噬细胞、嗜中性粒细胞或单核细胞。其他细胞包括嗜酸性粒细胞、NK细胞和其他带有IgG或IgA受体的细胞。如果需要,可从要治疗的受试者获取效应细胞。靶特异性效应细胞可作为生理可接受的溶液中的细胞的悬浮液来施用。施用的细胞数可在108-109数量级范围内,但是可根据治疗目的而有所不同。一般而言,该量足以实现在靶细胞(如表达LAG-3的肿瘤的细胞)的定位并通过如吞噬实现细胞杀伤。施用途径也有所不同,包括经口、直肠、经粘膜、经肠、肠胃外;肌肉内、皮下、皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、经皮或动脉内。
存在补体的情况下,也可使用具有补体结合位点的本发明的组合物,所述补体结合位点诸如来自与补体结合的IgG1、IgG2或IgG4或IgM的部分。本发明的组合物还可与补体一起施用,例如与C1q组合施用。
施用靶特异性效应细胞的疗法可与清除靶细胞的其他技术联合进行。例如,使用本发明的组合物和/或装备了这些组合物的效应细胞的抗肿瘤疗法与化学疗法联合使用。本发明抗体组合治疗的非限制性实例包括手术、化疗、放疗、免疫疗法、基因疗法、DNA疗法、RNA疗法、纳米疗法、病毒疗法、辅助疗法及其任意组合。
适当剂量的测定通过临床医师,例如使用本领域中已知或怀疑影响治疗的参数或因素进行。通常,剂量以略小于最佳剂量的量开始,且其随后以较小增量增加,直至相对于任何负面的副作用实现所要或最佳作用。重要的诊断量度包括例如炎症的症状或所产生炎性细胞因子的水平的量度。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与第二抗体联合施用,所述第二抗体特异性结合选自以下受体或配体:PD-1、PD-L1、PD-L2,TIM-3、TIGIT、VISTA、CTLA-4、OX40、BTLA、4-1BB、CD96、CD27、CD28、CD40、LAIR1、CD160、2B4、TGF-R、KIR、ICOS、GITR、CD3、CD30、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、SLAMF7、NKp80、B7-H3及其任意组合。所述第二抗体可以在施用本发明的抗体(或其抗原结合片段)之前、同时或之后施用。
在某些示例性实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段联合施用。在某些优选的实施方案中,所述结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段选自AB12M4或其抗原结合片段,Nivolumab(纳武单抗或
或欧狄沃)或其抗原结合片段,和Pembrolizumab(帕博利珠单抗或
或可瑞达)或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中,所述结合人PD-1的抗体或其结合抗原片段为AB12M4。
在某些示例性实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段联合施用。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)、药物组合物或免疫原性组合物与另外的抗肿瘤疗法组合施用。这种另外的抗肿瘤疗法可以是已知用于肿瘤的任何疗法,例如手术、化学治疗、放射治疗、靶向治疗、免疫治疗、激素治疗、基因治疗或姑息治疗。这种另外的抗肿瘤疗法可以在施用本发明的抗体(或其抗原结合片段)、药物组合物或免疫原性组合物之前、同时或之后施用。
在另一个方面,本发明提供了一种用于在受试者(例如人)中预防和/或治疗感染的方法,所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段可以具有降低或甚至消除的ADCC和/或CDC活性。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与另外的用于治疗感染的药物联合施用。这种另外的用于治疗感染的药物可以在施用抗体(或其抗原结合片段)之前、同时或之后施用。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与第二抗体联合施用,所述第二抗体特异性结合选自以下受体或配体:PD-1、PD-L1、PD-L2,TIM-3、TIGIT、VISTA、CTLA-4、OX40、BTLA、4-1BB、CD96、CD27、CD28、CD40、LAIR1、CD160、2B4、TGF-R、KIR、ICOS、GITR、CD3、CD30、BAFFR、HVEM、CD7、LIGHT、SLAMF7、NKp80、B7-H3及其任意组合。所述第二抗体可以在施用本发明的抗体(或其抗原结合片段)之前、同时或之后施用。
在某些示例性实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段联合施用。在某些优选的实施方案中,所述结合人PD-1的抗体或其抗原结合片段选自AB12M4或其抗原结合片段,Nivolumab(纳武单抗或
或欧狄沃)或其抗原结合片段,和Pembrolizumab(帕博利珠单抗或
或可瑞达)或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中,所述结合人PD-1的抗体或其结合抗原片段为AB12M4。
在某些示例性实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与结合人PD-L1的抗体或其抗原结合片段联合施用。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与疫苗联合施用。在某些优选的实施方案中,所述疫苗可以是与病原体相关的抗原(例如蛋白、多肽或糖类分子)、灭活或减毒的病原体、由所述抗原致敏的树突状细胞,或其任意组合。在某些优选的实施方案中,所述病原体可以是病毒(例如,甲、乙、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、人***状瘤病毒或疱疹病毒)、真菌、细菌或寄生虫。
在另一个方面,本发明提供了一种用于在受试者(例如人)中预防和/或治疗自身免疫性疾病的方法,所述方法包括向有此需要的受试者施用有效量的本发明的抗体(或其抗原结合片段)、本发明的药物组合物或本发明的免疫原性组合物。在此类实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段可以具有ADCC和/或CDC活性。
在某些优选的实施方案中,将本发明的抗体(或其抗原结合片段)与另外的具有治疗自身免疫性疾病活性的药物联合使用。这种另外的具有治疗自身免疫性疾病活性的药物可以在施用抗体(或其抗原结合片段)之前、同时或之后施用。
在本发明中,所述肿瘤的非限制性实例包括卵巢癌、黑色素瘤(例如,转移性恶性黑素瘤)、***癌、肠癌(例如,结直肠癌癌和小肠的癌症)、胃癌、食管癌、乳腺癌、肺癌、肾癌(例如,透明细胞癌)、胰腺癌、子宫癌、肝癌、膀胱癌、子***、口腔癌、脑癌、睾丸癌、皮肤癌、甲状腺癌以及血液学恶性肿瘤包括骨髓瘤和慢性和急性白血病等。
在本发明中,所述感染是指病毒、细菌、真菌、寄生虫等任何病原微生物所导致的任何感染。所述病毒的非限制性实例包括甲、乙、丙型肝炎病毒、人免疫缺陷病毒、人***状瘤病毒或疱疹病毒等;所述细菌的非限制性实例包括衣原体、分枝杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎球菌、脑膜炎球菌等;所述真菌的非限制性实例包括毛癣菌属、表皮癣菌属、小孢子癣菌属、白假丝酵母菌、新生隐球菌等;所述寄生虫的非限制性实例包括疟原虫、血吸虫、杜氏利什曼原虫、丝虫、钩虫等。
在本发明中,所述自身免疫性疾病的非限制性实例包括类风湿性关节炎、银屑病、***性红斑狼疮、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血小板减少性紫癜、胰岛素依赖性糖尿病、格雷夫斯病、重症肌无力、自生免疫肝炎和多发性硬化等。
本发明的抗体或其抗原结合片段、本发明的药物组合物或者本发明的免疫原性组合物可以配制成医学领域已知的任何剂型,例如,片剂、丸剂、混悬剂、乳剂、溶液、凝胶剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、锭剂、栓剂、注射剂(包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液)、吸入剂、喷雾剂等。优选剂型取决于预期的给药方式和治疗用途。本发明的药物组合物应当是无菌的并在生产和储存条件下稳定。一种优选的剂型是注射剂。此类注射剂可以是无菌注射溶液。例如,可通过下述方法来制备无菌注射溶液:在适当的溶剂中掺入必需剂量的本发明的重组蛋白,以及任选地,同时掺入其他期望的成分(包括但不限于,pH调节剂,表面活性剂,佐剂,离子强度增强剂,等渗剂、防腐剂、稀释剂,或其任何组合),随后过滤除菌。此外,可以将无菌注射溶液制备为无菌冻干粉剂(例如,通过真空干燥或冷冻干燥)以便于储存和使用。此类无菌冻干粉剂可在使用前分散于合适的载体中,例如无菌无热原水。
此外,本发明的抗体或其抗原结合片段可以以单位剂量形式存在于药物组合物或免疫原性组合物中,以便于施用。
本发明的抗体或其抗原结合片段、药物组合物或免疫原性组合物可以通过本领域已知的任何合适的方法来施用,包括但不限于,口服、口腔、舌下、眼球、局部、肠胃外、直肠、叶鞘内、内胞浆网槽内、腹股沟、膀胱内、局部(如,粉剂、药膏或滴剂),或鼻腔途径。但是,对于许多治疗用途而言,优选的给药途径/方式是胃肠外给药(例如静脉注射,皮下注射,腹膜内注射,肌内注射)。技术人员应理解,给药途径和/或方式将根据预期目的而发生变化。在一个优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段、药物组合物或免疫原性组合物通过静脉输注或注射给予。
本发明的药物组合物或免疫原性组合物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明的抗体或其抗原结合片段。“预防有效量”是指,足以预防,阻止,或延迟疾病的发生的量。“治疗有效量”是指,足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。本发明的抗体或其抗原结合片段的治疗有效量可根据如下因素发生变化:待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫***的总体状态、患者的一般情况例如年龄,体重和性别,药物的施用方式,以及同时施用的其他治疗等等。
在本发明中,可调整给药方案以获得最佳目的反应(例如治疗或预防反应)。例如,可以单次给药,可以在一段时间内多次给药,或者可以随治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。
本发明的重组蛋白的治疗或预防有效量的典型非极限范围是0.02~100mg/kg,例如0.1~100mg/kg,0.1~50mg/kg,或1~50mg/kg。应注意的是,剂量可随需要治疗的症状的类型和严重性不同而发生变化。此外,本领域技术人员理解,对于任一特定患者,特定的给药方案应根据患者需要和医生的专业评价而随时间调整;此处给出的剂量范围只用于举例说明目的,而不限定本发明药物组合物或免疫原性组合物的使用或范围。
在本发明中,所述受试者可以为哺乳动物,例如人。
本发明提供容器(例如塑料或玻璃小瓶,例如具有盖或色谱柱、中空孔针或注射器圆筒),其包含任一本发明的抗体或抗原结合片段、或药物组合物。本发明还提供注射装置,其包含任一本发明的抗体或抗原结合片段、或药物组合物。
检测方法和试剂盒
本发明的抗体或其抗原结合片段能够特异性结合LAG-3,从而可用于检测LAG-3在样品中的存在或其水平。
因此,在另一个方面,本发明提供了一种试剂盒,其包括本发明的抗体或其抗原结合片段。在某些优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段带有可检测的标记。在一个优选的实施方案中,所述试剂盒还包括第二抗体,其特异性识别本发明的抗体或其抗原结合片段。优选地,所述第二抗体还包括可检测的标记。
在本发明中,所述可检测的标记可以是可通过荧光、光谱、光化学、生物化学、免疫学、电学、光学或化学手段检测的任何物质。特别优选的是,此类标记能够适用于免疫学检测(例如,酶联免疫测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、化学发光免疫测定法等)。这类标记是本领域熟知的,包括但不限于,酶(例如,辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、脲酶、葡萄糖氧化酶,等)、放射性核素(例如,
3H、
125I、
35S、
14C或
32P)、荧光染料(例如,异硫氰酸荧光素(FITC)、荧光素、异硫氰酸四甲基罗丹明(TRITC)、藻红蛋白(PE)、德克萨斯红、罗丹明、量子点或花菁染料衍生物(例如Cy7、Alexa 750))、吖啶酯类化合物、磁珠(例如,
)、测热标记物例如胶体金或有色玻璃或塑料(例如,聚苯乙烯、聚丙烯、乳胶,等)珠、以及用于结合上述标记物修饰的亲和素(例如,链霉亲和素)的生物素。教导该标记物的使用的专利包括,但不限于,美国专利3,817,837;3,850,752;3,939,350;3,996,345;4,277,437;4,275,149;及4,366,241(全部通过引用并入本文)。本发明中涵盖的标记物可通过本领域已知的方法检测。例如,放射性标记可使用摄影胶片或闪烁计算器检测,荧光标记物可使用光检测器检测,以检测发射的光。酶标记物一般通过给酶提供底物及检测通过酶对底物的作用产生的反应产物来检测,及测热标记物通过简单可视化着色标记物来检测。在某些实施方案中,可通过不同长度的接头将如上所述的可检测的标记连接至本发明的重组蛋白,以降低潜在的位阻。
在另一个方面,本发明提供了检测LAG-3在样品中的存在或其水平的方法,其包括使用本发明的抗体或其抗原结合片段的步骤。在一个优选的实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段还带有可检测的标记。在另一个优选的实施方案中,所述方法还包括,使用带有可检测的标记的试剂来检测本发明的抗体或其抗原结合片段。所述方法可以用于诊断目的,或者非诊断目的(例如,所述样品是细胞样品,而非来自患者的样品)。
在另一个方面,提供了本发明的抗体或其抗原结合片段在制备试剂盒中的用途,所述试剂盒用于检测LAG-3在样品中的存在或其水平。
缩写及术语定义
在本文中使用以下缩写:
CDR 免疫球蛋白可变区中的互补决定区
FR 抗体构架区:抗体可变区中除CDR残基以外的氨基酸残基
VH 抗体重链可变区
VL 抗体轻链可变区
IgG 免疫球蛋白G
Kabat 由Elvin A.Kabat提出的免疫球蛋白比对及编号***(参见,例如Kabat etal.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)。
Chothia 由Chothia等人提出的免疫球蛋白编号***,其是基于结构环区的位置鉴定CDR区边界的经典规则(参见,例如Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917;Chothia等人(1989)Nature 342:878-883)。
IMGT 基于由Lefranc等人发起的国际免疫遗传学信息***(The internationalImMunoGeneTics information
(IMGT))的编号***,可参阅Lefranc etal.,Dev.Comparat.Immunol.27:55-77,2003。
mAb 单克隆抗体
EC50 产生50%功效或结合的浓度
IC50 产生50%抑制的浓度
ELISA 酶联免疫吸附测定
PCR 聚合酶链式反应
HRP 辣根过氧化物酶
IL-2 白细胞介素2
IFN 干扰素
KD 平衡解离常数
kon 结合速率常数
kdis 解离速率常数
在本发明中,除非另有说明,否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且,本文中所用的细胞培养、生物化学、核酸化学、免疫学实验室等操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时,为了更好地理解本发明,下面提供相关术语的定义和解释。
如本文中所使用的,术语“抗体”是指,通常由两对多肽链(每对具有一条轻链(LC)和一条重链(HC))组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ(kappa)和λ(lambda)轻链。重链可分类为μ、δ、γ、α或ε,并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内,可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接,重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合,但展现出多种效应子功能,如可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子,包括免疫***的各种细胞(例如,效应细胞)和经典补体***的第一组分(C1q)的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR)),其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序:FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗原结合部位。氨基酸在各区域或结构域的分配可遵循Kabat,Sequences of Proteins of Immunological Interest(NationalInstitutes of Health,Bethesda,Md.(1987and 1991)),或Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917;Chothia等人(1989)Nature 342:878-883的定义。
如本文中所使用的,术语“互补决定区”或“CDR”是指抗体可变区中负责抗原结合的氨基酸残基。这些氨基酸残基的精确边界可根据本领域已知的各种编号***进行定义,例如可按照Kabat编号***(Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.,1991)、Chothia编号***(Chothia&Lesk(1987)J.Mol.Biol.196:901-917;Chothia等人(1989)Nature 342:878-883)或IMGT编号***(Lefranc et al.,Dev.Comparat.Immunol.27:55-77,2003)中的定义。对于给定的抗体,本领域技术人员将容易地鉴别各编号***所定义的CDR。并且,不同编号***之间的对应关系是本领域技术人员熟知的(例如,可参见Lefranc et al.,Dev.Comparat.Immunol.27:55-77,2003)。
在本发明中,本发明的抗体或其抗原结合片段含有的CDR可根据本领域已知的各种编号***确定。在某些实施方案中,本发明的抗体或其抗原结合片段含有的CDR优选地通过Kabat、Chothia或IMGT编号***确定。
如本文中所使用的,术语“构架区”或“FR”残基是指,抗体可变区中除了如上定义的CDR残基以外的那些氨基酸残基。
如本文中所使用的,术语“胚系抗体基因”是由非淋巴细胞编码的免疫球蛋白序列,它没有经历导致表达特异免疫球蛋白的遗传学重排及成熟的成熟过程。本发明的各种实施方案所提供的一个优点来源于一种认识,那就是胚系抗体基因比成熟抗体基因更多地保留了动物物种个体的特征性的重要氨基酸序列结构。因此当被治疗性应用于该物种时,更少地被该物种识别为外源物质。
术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如,其包括,重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体,例如,IgG(例如,IgG1,IgG2,IgG3或IgG4亚型),IgA1,IgA2,IgD,IgE或IgM抗体。
如本文中所使用的,术语抗体的“抗原结合片段”是指抗体的多肽片段,例如全长抗体的多肽片段,其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力,和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合,其也被称为“抗原结合部分”。通常参见,FundamentalImmunology,Ch.7(Paul,W.,ed.,第2版,Raven Press,N.Y.(1989),其以其全文通过引用合并入本文,用于所有目的。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。抗原结合片段的非限制性实例包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fd、Fv、dAb和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(例如,scFv)、嵌合抗体、双抗体(diabody)、线性抗体(linearantibody)、纳米抗体(如技术来自Ablynx)、结构域抗体(如技术来自Domantis)、和这样的多肽,其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。工程改造的抗体变体综述于Holliger等,2005;Nat Biotechnol,23:1126-1136中。
如本文中所使用的,术语“全长抗体”意指,由两条“全长重链”和两条“全长轻链”组成的抗体。其中,“全长重链”是指这样的多肽链,其在N端到C端的方向上由重链可变区(VH)、重链恒定区CH1结构域、铰链区(HR)、重链恒定区CH2结构域、重链恒定区CH3结构域组成;并且,当所述全长抗体为IgE同种型时,任选地还包括重链恒定区CH4结构域。优选地,“全长重链”是在N端到C端方向上由VH、CH1、HR、CH2和CH3组成的多肽链。“全长轻链”是在N端到C端方向上由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成的多肽链。两对全长抗体链通过在CL和CH1之间的二硫键和两条全长重链的HR之间的二硫键连接在一起。本发明的全长抗体可以来自单一物种,例如人;也可以是嵌合抗体或人源化抗体。本发明的全长抗体包含分别由VH和VL对形成的两个抗原结合部位,这两个抗原结合部位特异性识别/结合相同的抗原。
如本文中所使用的,术语“Fd片段”意指由VH和CH1结构域组成的抗体片段;术语“dAb片段”意指由VH结构域组成的抗体片段(Ward等人,Nature 341:544 546(1989));术语“Fab片段”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段;术语“F(ab’)2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段;术语“Fab’片段”意指还原连接F(ab’)2片段中两个重链片段的二硫键后所获片段,由一条完整的轻链和重链的Fd片段(由VH和CH1结构域组成)组成。
如本文中所使用的,术语“Fv片段”意指由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的抗体片段。Fv片段通常被认为是,能形成完整的抗原结合位点的最小抗体片段。一般认为,六个CDR赋予抗体的抗原结合特异性。然而,即便是一个可变区(例如Fd片段,其仅仅含有三个对抗原特异的CDR)也能够识别并结合抗原,尽管其亲和力可能低于完整的结合位点。
如本文中所使用的,术语“Fc片段”意指,由抗体的第一重链的第二、第三恒定区与第二重链的第二、第三恒定区经二硫键结合而形成的抗体片段。抗体的Fc片段具有多种不同的功能,但不参与抗原的结合。
如本文中所使用的,术语“scFv”是指,包含VL和VH结构域的单个多肽链,其中所述VL和VH通过接头(linker)相连(参见,例如,Bird等人,Science 242:423-426(1988);Huston等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988);和Pluckthun,ThePharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Roseburg和Moore编,Springer-Verlag,纽约,第269-315页(1994))。此类scFv分子可具有一般结构:NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体组成。例如,可使用具有氨基酸序列(GGGGS)4的接头,但也可使用其变体(Holliger等人(1993),Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448)。可用于本发明的其他接头由Alfthan等人(1995),Protein Eng.8:725-731,Choi等人(2001),Eur.J.Immunol.31:94-106,Hu等人(1996),Cancer Res.56:3055-3061,Kipriyanov等人(1999),J.Mol.Biol.293:41-56和Roovers等人(2001),Cancer Immunol.描述。在一些情况下,scFv的VH与VL之间还可以存在二硫键。如本文中所使用的,术语“di-scFv”是指,由两个scFv连接形成的抗体片段。
如本文中所使用的,术语“双抗体”意指,其VH和VL结构域在单个多肽链上表达,但使用太短的连接体以致不允许在相同链的两个结构域之间配对,从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对并且产生两个抗原结合部位(参见,例如,Holliger P.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993),和Poljak R.J.等人,Structure 2:1121-1123(1994))。
上述各个抗体片段均保持了特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力,和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合。
可使用本领域技术人员已知的常规技术(例如,重组DNA技术或酶促或化学断裂法)从给定的抗体(例如本发明提供的抗体)获得抗体的抗原结合片段(例如,上述抗体片段),并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。
在本文中,除非上下文明确指出,否则当提及术语“抗体”时,其不仅包括完整抗体,而且包括抗体的抗原结合片段。
如本文中所使用的,术语“单克隆抗体”、“单抗”、“mAb”具有相同的含义且可互换使用可互换,其是指,来自一群高度同源的抗体分子中的一个抗体或抗体的一个片段,也即,除可能自发出现的自然突变外,一群完全相同的抗体分子。单抗对抗原上的单一表位具有高特异性。多克隆抗体是相对于单克隆抗体而言的,其通常包含至少2种或更多种的不同抗体,这些不同的抗体通常识别抗原上的不同表位。此外,修饰语“单克隆”仅表明该抗体的特征为从高度同源的抗体群中获得,不能理解为需要通过任何特定方法来制备所述抗体。
本发明的单克隆抗体可以通过多种技术进行制备,例如杂交瘤技术(参见,例如Kohler等人.Nature,256:495,1975),重组DNA技术(参见,例如美国专利申请4,816,567),或噬菌体抗体库技术(参见,例如Clackson等.Nature352:624-628,1991,或Marks等.J.Mol.Biol.222:581-597,1991)。
例如,可以如下来制备单克隆抗体。首先用免疫原(必要时候添加佐剂)免疫注射小鼠或其它合适的宿主动物。免疫原或佐剂的注射方式通常为皮下多点注射或腹腔注射。可将免疫原预先偶联到某些已知蛋白,如血清白蛋白或大豆胰酶抑制剂上,以增强抗原在宿主内的免疫原性。佐剂可以是弗氏佐剂或MPL-TDM等。动物在接受免疫后,体内将产生分泌特异性结合免疫原的抗体的淋巴细胞。另外,淋巴细胞也可以利用体外免疫获得。收集目的淋巴细胞,并用合适的融合剂,如PEG,使其与骨髓瘤细胞融合以获得杂交瘤细胞(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,pp.59-103,AcademicPress,1996)。上述制备的杂交瘤细胞可以接种到合适的培养液中生长,培养液中优选含有一种或多种能够抑制未融合的、母体骨髓瘤细胞生长的物质。例如,对于缺乏次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸转移酶(HGPRT或HPRT)的母体骨髓瘤细胞,在培养液中添加次黄嘌呤、氨基喋呤和胸腺嘧啶(HAT培养基)等物质将可以抑制HGPRT-缺陷细胞的生长。优选的骨髓瘤细胞应该具有融合率高,抗体分泌能力稳定,对HAT培养液敏感等特征。其中,骨髓瘤细胞首选鼠源骨髓瘤,如MOP-21或MC-11小鼠肿瘤衍生株(THE Salk Institute Cell Distribution Center,San Diego,Calif.USA),和SP-2/0或X63-Ag8-653细胞株(American Type CultureCollection,Rockville,Md.USA)。另外也有研究报道,利用人骨髓瘤和人鼠异源骨髓瘤细胞株制备人单抗(Kozbor,J.Immunol.,133:3001(1984);Brodeur et al.,MonoclonalAntibody Production Techniques and Applications,pp.51-63,Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)。生长杂交瘤细胞的培养液用于检测针对特异抗原的单抗的产生。测定杂交瘤细胞产生的单抗的结合特异性的方法包括例如,免疫沉淀或体外结合试验,如放射免疫试验(RIA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)。例如,可利用Munson等在Anal.Biochem.107:220(1980)描述的Scatchard分析法来测定单抗的亲和力。当确定了杂交瘤产生的抗体的特异性、亲和力和反应性之后,目的细胞株可以通过(Goding,Monoclonal Antibodies:Principles and Practice,pp.59-103,Academic Press,1996)所描述的标准的有限稀释法进行亚克隆化。合适的培养液可以是DMEM或RPMI-1640等。另外,杂交瘤细胞还可以腹水瘤的形式在动物体内生长。利用传统的免疫球蛋白纯化方法,如蛋白A琼脂糖凝胶、羟基磷灰石层析、凝胶电泳、透析或亲和层析等,可以将亚克隆细胞分泌的单抗从细胞培养液、腹水或血清中分离出来。
还可以通过基因工程重组技术获得单克隆抗体。利用特异性结合单抗重链和轻链基因的核酸引物进行PCR扩增,可以从杂交瘤细胞中分离得到编码单抗重链和轻链基因的DNA分子。将所得的DNA分子***表达载体内,然后转染宿主细胞(如E.coli细胞、COS细胞、CHO细胞、或其它不产生免疫球蛋白的骨髓瘤细胞),并在合适的条件下进行培养,可以获得重组表达的目标抗体。
抗体可通过公知的技术,例如使用蛋白A或蛋白G的亲和层析进行纯化。随后或作为替代,可将特异性抗原(该抗体识别的靶分子)或其抗原表位固定在柱上,并通过免疫亲合层析法来纯化免疫特异性抗体。免疫球蛋白的纯化可参考例如D.Wilkinson(TheScientist,published by The Scientist,Inc.,Philadelphia Pa.,Vol.14,No.8(Apr.17,2000),pp.25-28)。
如本文中所使用的,术语“嵌合抗体(Chimeric antibody)”是指,这样的抗体,其轻链或/和重链的一部分源自一个抗体(其可以源自某一特定物种或属于某一特定抗体类或亚类),且轻链或/和重链的另一部分源自另一个抗体(其可以源自相同或不同的物种或属于相同或不同的抗体类或亚类),但无论如何,其仍保留对目标抗原的结合活性(U.S.P4,816,567to Cabilly et al.;Morrison et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:68516855(1984))。例如,术语“嵌合抗体”可包括这样的抗体(例如人鼠嵌合抗体),其中抗体的重链和轻链可变区来自第一抗体(例如鼠源抗体),而抗体的重链和轻链可变区来自第二抗体(例如人抗体)。
如本文中所使用的,术语“人源化抗体”是指,经基因工程改造的非人源抗体,其氨基酸序列经修饰以提高与人源抗体的序列的同源性。通常而言,人源化抗体的全部或部分CDR区来自于非人源抗体(供体抗体),全部或部分的非CDR区(例如,可变区FR和/或恒定区)来自于人源免疫球蛋白(受体抗体)。人源化抗体通常保留了供体抗体的预期性质,包括但不限于,抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力、增强免疫应答的能力等。供体抗体可以是有预期性质(例如,抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)的小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物(例如,食蟹猴)抗体。
人源化抗体既能够保留非人源供体抗体(例如鼠源抗体)的预期性质,又能够有效降低非人源供体抗体(例如鼠源抗体)在人受试者中的免疫原性,因此,是特别有利的。然而,由于供体抗体的CDR与受体抗体的FR之间的匹配问题,人源化抗体的预期性质(例如,抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力)通常低于非人源供体抗体(例如鼠源抗体)。
因此,尽管本领域的研究人员已对抗体的人源化展开了深入的研究,并取得了一些进展(参见例如,Jones et al.,Nature,321:522 525(1986);Reichmann et al.,Nature,332:323 329(1988);Presta,Curr.Op.Struct.Biol.,2:593 596(1992);andClark,Immunol.Today 21:397 402(2000)),但是,如何对某一供体抗体进行充分的人源化,以使得所产生的人源化抗体既具有尽可能高的人源化程度,又能够尽可能地保留供体抗体的预期性质,现有技术并没有提供详尽的指导。技术人员需要针对具体供体抗体进行摸索、探究和改造,付出大量的创造性劳动才有可能获得,既具有高人源化程度(例如至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的人源化程度)、又保留具体供体抗体的预期性质的人源化抗体。
在本发明中,为了使人源化抗体尽可能保留供体抗体的性质(包括例如,抗原特异性、亲和性、反应性、提高免疫细胞活性的能力和/或增强免疫应答的能力),本发明的人源化抗体中构架区(FR)可以既包含人源受体抗体的氨基酸残基,也包含相应的非人源供体抗体的氨基酸残基。
在本申请中,本发明抗体的预期性质包括:(1)特异性识别/结合LAG-3(特别是人LAG-3)的能力;(2)抑制和/或阻断LAG-3与MHC II的结合的能力;(3)抑制和/或阻断由LAG-3结合MHC II介导的细胞内信号传导的能力;(4)抑制和/或阻断LAG-3与纤维介素蛋白1(Fibrinogen-like protein 1,FGL1)的结合;(5)抑制和/或阻断由LAG-3结合FGL1介导的细胞内信号传导;(6)提高免疫细胞活性的能力;(7)增强免疫应答的能力;(8)降低或消除的诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒性(CDC)的能力;(9)诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖的细胞毒性(CDC)的能力。本发明的人源化抗体保留了亲本抗体(鼠源抗体或鼠-人嵌合抗体)的上述预期性质中的一项或多项。
本发明的嵌合抗体或人源化抗体可以根据上述制备的鼠单克隆抗体的序列进行制备。编码重链和轻链的DNA可以从目标鼠杂交瘤中获得,并且使用标准分子生物学技术进行工程改造以包含非鼠(例如人)免疫球蛋白序列。
为制备嵌合抗体,可使用本领域已知的方法将鼠免疫球蛋白可变区连接至人免疫球蛋白恒定区(参见例如Cabilly等人的美国专利No.4,816,567)。例如,将编码VH的DNA可操作的连接至编码重链恒定区的另一DNA分子以获得全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and HumanServices,NIH Publication No.91-3242),包含这些区的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区,但是通常优选为IgG1或IgG4恒定区。例如,将编码VL的DNA可操作的连接至编码轻链恒定区CL的另一DNA分子以获得全长轻链基因(以及Fab轻链基因)。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的(参见例如Kabat,E.A.等人(1991)Sequences of Proteins of Immunological Interest,Fifth Edition,U.S.Department of Health and Human Services,NIH PublicationNo.91-3242),包含这些区的DNA片段可以通过标准PCR扩增获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区,但通常优选为κ恒定区。
为制备人源化抗体,可以使用本领域已知的方法将鼠CDR区***人源框架序列(参见Winter的美国专利No.5,225,539;Queen等人的美国专利Nos.5,530,101;5,585,089;5,693,762和6,180,370;以及Lo,Benny,K.C.,editor,in Antibody Engineering:Methodsand Protocols,volume 248,Humana Press,New Jersey,2004)。或者,还可以利用转基因动物,其能够在免疫后不产生内源性免疫球蛋白、并且能够产生完整人抗体库。例如,已有报道在嵌合和种系突变小鼠中抗体重链连接区(JH)基因的纯合缺失可以完全抑制了内源性抗体产生,然后将人种系免疫球蛋白基因阵列转移到所述种系突变小鼠中将导致该小鼠在遇到抗原刺激时产生人抗体(参见例如,Jakobovits等,1993,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:2551;Jakobovits等,1993,Nature362:255-258;Bruggermann等,1993,Year inImmunology 7:33;和Duchosal等,1992,Nature 355:258)。上述转基因动物的非限制性实例包括,HuMAb小鼠(Medarex,Inc.),其含有编码未重排的人重链(μ和γ)和κ轻链免疫球蛋白序列的人免疫球蛋白基因微型基因座(miniloci),加之使内源μ和κ链基因座失活的靶向突变(参见例如Lonberg等人(1994)Nature368(6474):856-859);或携带人重链转基因和人轻链转染色体的“KM小鼠TM”(参见专利申请WO02/43478)。其他抗体人源化改造的方法还包括噬菌体展示技术(Hoogenboom等,1991,J.Mol.Biol.227:381;Marks等,J.Mol.Biol.1991,222:581-597;Vaughan等,1996,Nature Biotech 14:309)。
如本文中所使用的,术语“人源化程度”是用于评价人源化抗体中非人源氨基酸残基的数量的指标。人源化抗体的人源化程度例如可通过IMGT网站DomainGapAlign来预测可变区序列与人V结构域的同源性。
如本文中所使用的,术语“特异性结合”是指,两分子间的非随机的结合反应,如抗体和其所针对的抗原之间的反应。特异性结合相互作用的强度或亲和力可以该相互作用的平衡解离常数(KD)表示。在本发明中,术语“KD”是指特定抗体-抗原相互作用的解离平衡常数,其用于描述抗体与抗原之间的结合亲和力。平衡解离常数越小,抗体-抗原结合越紧密,抗体与抗原之间的亲和力越高。在某些实施方式中,特异性结合某抗原的抗体(或对某抗原具有特异性的抗体)是指,抗体以小于约10-9M,例如小于约10-9M、10-10M、10-11M或10-12M或更小的亲和力(KD)结合该抗原。在某些实施方案中,当KD为≤1×10-9M(优选为≤5×10-10M)时,本发明的抗体或其抗原结合片段被认为特异性地结合LAG-3。
两分子间的特异性结合性质可使用本领域公知的方法进行测定。一种方法涉及测量抗原结合位点/抗原复合物形成和解离的速度。“结合速率常数”(ka或kon)和“解离速率常数”(kdis或koff)两者都可通过浓度及缔合和解离的实际速率而计算得出(参见Malmqvist M,Nature,1993,361:186-187)。kdis/kon的比率等于解离常数KD(参见Davies等人,Annual Rev Biochem,1990;59:439-473)。可用任何有效的方法测量KD、kon和kdis值。在某些实施方案中,可以使用生物发光干涉测量法(例如,实施例3中所述的ForteBioOctet法)来测量解离常数。除此以外还可用表面等离子共振技术(例如Biacore)或Kinexa来测量解离常数。
如本文中所使用的,术语“载体(vector)”是指,可将多聚核苷酸***其中的一种核酸运载工具。当载体能使***的多核苷酸编码的蛋白获得表达时,载体称为表达载体。载体可以通过转化,转导或者转染导入宿主细胞,使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的,包括但不限于:质粒;噬菌粒;柯斯质粒;人工染色体,例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC);噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于,逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、***瘤病毒、***多瘤空泡病毒(如SV40)。一种载体可以含有多种控制表达的元件,包括但不限于,启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外,载体还可含有复制起始位点。
如本文中所使用的,术语“宿主细胞”是指,可用于导入载体的细胞,其包括但不限于,如大肠杆菌或枯草菌等的原核细胞,如酵母细胞或曲霉菌等的真菌细胞,如S2果蝇细胞或Sf9等的昆虫细胞,或者如纤维原细胞,CHO细胞,COS细胞,NSO细胞,HeLa细胞,BHK细胞,HEK 293细胞或人细胞等的动物细胞。
如本文中所使用的,术语“同一性”用于指两个多肽之间或两个核酸之间序列的匹配情况。当两个进行比较的序列中的某个位置都被相同的碱基或氨基酸单体亚单元占据时(例如,两个DNA分子的每一个中的某个位置都被腺嘌呤占据,或两个多肽的每一个中的某个位置都被赖氨酸占据),那么各分子在该位置上是同一的。两个序列之间的“百分数同一性”是由这两个序列共有的匹配位置数目除以进行比较的位置数目×100的函数。例如,如果两个序列的10个位置中有6个匹配,那么这两个序列具有60%的同一性。例如,DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50%的同一性(总共6个位置中有3个位置匹配)。通常,在将两个序列比对以产生最大同一性时进行比较。这样的比对可通过使用,例如,可通过计算机程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地进行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48:443-453的方法来实现。还可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和W.Miller(Comput.ApplBiosci.,4:11-17(1988))的算法,使用PAM120权重残基表(weight residue table)、12的缺口长度罚分和4的缺口罚分来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。此外,可使用已整合入GCG软件包(可在www.gcg.com上获得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J MoIBiol.48:444-453(1970))算法,使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及16、14、12、10、8、6或4的缺口权重(gap weight)和1、2、3、4、5或6的长度权重来测定两个氨基酸序列之间的百分数同一性。
如本文中所使用的,术语“保守置换”意指不会不利地影响或改变包含氨基酸序列的蛋白/多肽的预期性质的氨基酸置换。例如,可通过本领域内已知的标准技术例如定点诱变和PCR介导的诱变引入保守置换。保守氨基酸置换包括用具有相似侧链的氨基酸残基替代氨基酸残基的置换,例如用在物理学上或功能上与相应的氨基酸残基相似(例如具有相似大小、形状、电荷、化学性质,包括形成共价键或氢键的能力等)的残基进行的置换。已在本领域内定义了具有相似侧链的氨基酸残基的家族。这些家族包括具有碱性侧链(例如,赖氨酸、精氨酸和组氨酸)、酸性侧链(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不带电荷的极性侧链(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非极性侧链(例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支侧链(例如,苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(例如,酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。因此,优选用来自相同侧链家族的另一个氨基酸残基替代相应的氨基酸残基。鉴定氨基酸保守置换的方法在本领域内是熟知的(参见,例如,Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993);Kobayashi等人Protein Eng.12(10):879-884(1999);和Burks等人Proc.NatlAcad.Set USA 94:412-417(1997),其通过引用并入本文)。
本文涉及的二十个常规氨基酸的编写遵循常规用法。参见例如,Immunology-ASynthesis(2nd Edition,E.S.Golub and D.R.Gren,Eds.,Sinauer Associates,Sunderland,Mass.(1991)),其以引用的方式并入本文中。在本发明中,术语“多肽”和“蛋白质”具有相同的含义且可互换使用。并且在本发明中,氨基酸通常用本领域公知的单字母和三字母缩写来表示。例如,丙氨酸可用A或Ala表示。
如本文中所使用的,术语“药学上可接受的载体和/或赋形剂”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容的载体和/或赋形剂,其是本领域公知的(参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences.Edited by Gennaro AR,19thed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995),并且包括但不限于:pH调节剂,表面活性剂,佐剂,离子强度增强剂,稀释剂,维持渗透压的试剂,延迟吸收的试剂,防腐剂。例如,pH调节剂包括但不限于磷酸盐缓冲液。表面活性剂包括但不限于阳离子,阴离子或者非离子型表面活性剂,例如Tween-80。离子强度增强剂包括但不限于氯化钠。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂,例如对羟苯甲酸酯,三氯叔丁醇,苯酚,山梨酸等。维持渗透压的试剂包括但不限于糖、NaCl及其类似物。延迟吸收的试剂包括但不限于单硬脂酸盐和明胶。稀释剂包括但不限于水,水性缓冲液(如缓冲盐水),醇和多元醇(如甘油)等。防腐剂包括但不限于各种抗细菌试剂和抗真菌试剂,例如硫柳汞,2-苯氧乙醇,对羟苯甲酸酯,三氯叔丁醇,苯酚,山梨酸等。稳定剂具有本领域技术人员通常理解的含义,其能够稳定药物中的活性成分的期望活性,包括但不限于谷氨酸钠,明胶,SPGA,糖类(如山梨醇,甘露醇,淀粉,蔗糖,乳糖,葡聚糖,或葡萄糖),氨基酸(如谷氨酸,甘氨酸),蛋白质(如干燥乳清,白蛋白或酪蛋白)或其降解产物(如乳白蛋白水解物)等。
如本文中所使用的,术语“预防”是指,为了阻止或延迟疾病或病症或症状(例如,肿瘤、感染或自身免疫性疾病)在受试者体内的发生而实施的方法。如本文中所使用的,术语“治疗”是指,为了获得有益或所需临床结果而实施的方法。为了本发明的目的,有益或所需的临床结果包括但不限于,减轻症状、缩小疾病的范围、稳定(即,不再恶化)疾病的状态,延迟或减缓疾病的发展、改善或减轻疾病的状态、和缓解症状(无论部分或全部),无论是可检测或是不可检测的。此外,“治疗”还可以指,与期望的存活期相比(如果未接受治疗),延长存活期。
如本文中使用的,术语“受试者”是指哺乳动物,例如灵长类哺乳动物,例如人。在某些实施方式中,所述受试者(例如人)患有肿瘤、感染或自身免疫性疾病,或者,具有患有上述疾病的风险。
如本文中所使用的,术语“有效量”是指足以获得或至少部分获得期望的效果的量。例如,预防疾病(例如,肿瘤、感染或自身免疫性疾病)有效量是指,足以预防,阻止,或延迟疾病(例如,肿瘤、感染或自身免疫性疾病)的发生的量;治疗疾病有效量是指,足以治愈或至少部分阻止已患有疾病的患者的疾病和其并发症的量。测定这样的有效量完全在本领域技术人员的能力范围之内。例如,对于治疗用途有效的量将取决于待治疗的疾病的严重度、患者自己的免疫***的总体状态、患者的一般情况例如年龄,体重和性别,药物的施用方式,以及同时施用的其他治疗等等。
如本文中所使用的,术语“免疫细胞”包括具有造血的起源并在免疫应答中起作用的细胞,例如淋巴细胞,例如B细胞和T细胞;天然杀伤细胞;髓样细胞,例如单核细胞、巨噬细胞、嗜曙红细胞、肥大细胞、嗜碱细胞和粒细胞。
如本文中所使用的,术语“免疫应答”是指,免疫细胞(例如淋巴细胞、抗原呈递细胞、吞噬细胞或粒细胞)以及由免疫细胞或肝脏所产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子、以及补体)的作用,该作用导致对侵入性病原体、被病原体感染的细胞或组织、癌细胞、或者在自身免疫或病理炎症情况下的正常人类细胞或组织的选择性损害、破坏或将它们从人体中清除。在本发明中,术语“抗原特异性T细胞应答”指由T细胞产生的免疫应答,该应答产生于当该T细胞特异的抗原对该T细胞的刺激之时。由T细胞在抗原特异性刺激时产生的反应的非限制性实例包括T细胞的增殖以及细胞因子(例如IL-2)的产生。
如本文中所使用的,术语“效应子功能(effector function)”是指,那些可归因于抗体Fc区(天然序列Fc区或氨基酸序列变体Fc区)的生物学活性,且其随抗体同种型而变化。抗体效应子功能的例子包括但不限于:Fc受体结合亲和性、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)、补体依赖的细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)、细胞表面受体(例如B细胞受体)的下调、B细胞活化、细胞因子分泌、抗体和抗原-抗体复合物的半衰期/清除率等。改变抗体的效应子功能的方法是本领域已知的,例如通过在Fc区引入突变来完成。
如本文中所使用的,术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)”是指,一种细胞毒性形式,Ig通过与细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞或巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)结合,使这些细胞毒性效应细胞特异性结合到抗原附着的靶细胞上,然后通过分泌细胞毒素杀死靶细胞。检测抗体的ADCC活性的方法是本领域已知的,例如可通过测定待测抗体与Fc受体(例如CD16a)之间的结合活性来评价。
如本文中所使用的,术语“补体依赖的细胞毒性(CDC)”是指,通过使补体成分C1q与抗体Fc结合来激活补体级联的细胞毒性形式。检测抗体的CDC活性的方法是本领域已知的,例如可通过测定待测抗体与Fc受体(例如C1q)之间的结合活性来评价。
术语“癌症”,“肿瘤”可互换使用,其是指以体内异常细胞的不受控生长为特征的一大类疾病。不受管制的细胞***可能导致恶性肿瘤或侵入邻近组织的细胞的形成,并可能通过淋巴***或血流转移到身体的远端部位。癌症包括良性和恶性癌症以及休眠肿瘤或微转移。癌症也包括血液学恶性肿瘤。
作为示例所述肿瘤包含但不限于实体肿瘤、血液肿瘤(例如,白血病、淋巴瘤、骨髓瘤,例如,多发性骨髓瘤)和癌症的转移性、难治性或复发性病灶;例如,包括但不限于食管癌、胃肠癌、胰腺癌、甲状腺癌、结直肠癌、肾癌、肺癌(例如非小细胞肺癌)、肝癌、胃癌、头颈癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、***、卵巢癌、***癌、睾丸癌、生殖细胞癌、骨癌、皮肤癌、胸腺癌、胆管癌、胆囊癌、黑素瘤、间皮瘤、淋巴瘤、骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)、肉瘤、成胶质细胞瘤、神经胶质母细胞瘤、白血病。
术语“血液学恶性肿瘤”包括淋巴瘤,白血病,骨髓瘤或淋巴恶性肿瘤,以及脾癌和***肿瘤。示例性淋巴瘤包括B细胞淋巴瘤和T细胞淋巴瘤。B细胞淋巴瘤,包括例如霍奇金淋巴瘤。T细胞淋巴瘤,包括例如皮肤T细胞淋巴瘤。血液学恶性肿瘤还包括白血病,例如继发性白血病或急性淋巴细胞性白血病。血液恶性肿瘤还包括骨髓瘤(例如多发性骨髓瘤)及其他血液学和/或B细胞或T细胞相关的癌症。
术语“药学上可接受的”指当分子本体、分子片段或组合物适当地给予动物或人时,它们不会产生不利的、过敏的或其他不良反应。可作为药学上可接受的载体或其组分的一些物质的具体示例包括糖类(如乳糖)、淀粉、纤维素及其衍生物、植物油、明胶、多元醇(如丙二醇)、海藻酸等。
发明的有益效果
与现有技术相比,本发明的技术方案具有以下有益效果:
(1)本发明的抗体不仅能够特异性识别/结合LAG-3,阻断LAG-3与MHC II或FGL1的结合,并且能够在体外/体内增强免疫细胞活性,刺激免疫应答。因此,本发明的抗体具有用于预防和/或***、感染或自身免疫性疾病的潜力。
(2)本发明的抗体(特别是人源化抗体)不仅保留了亲本鼠源抗体的功能和性质,从而具有用于预防和***、感染或自身免疫性疾病的潜力;而且具有极高的人源化程度,从而可安全地施用给人受试者,而不引发免疫原性反应。因此,本发明的抗体(特别是人源化抗体)具有重大的临床价值。
下面将结合附图和实施例对本发明的实施方案进行详细描述,但是本领域技术人员将理解,下列附图和实施例仅用于说明本发明,而不是对本发明的范围的限定。根据附图和优选实施方案的下列详细描述,本发明的各种目的和有利方面对于本领域技术人员来说将变得可实施。