JP2023131244A - Analysis method using spectrum measurement device - Google Patents

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悠佑 長井
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Abstract

To acquire spectral data of a component to be analyzed in a solution flowing through a flow cell with high signal intensity.SOLUTION: An analysis method for obtaining spectrum data of a component to be analyzed includes: a step of determining a target wavelength range to be acquired based on the difference in signal intensity between spectrum data of a sample solution acquired by a spectrum measurement device 10 and spectrum data of a solvent acquired in advance; a step of using the spectrum data of the sample solution and the spectrum data of the solvent acquired in a spectrum acquisition step as condition-compatible spectrum data of the sample solution and the solvent, respectively, if the signal intensity level of the spectrum data in the target wavelength range is within a predetermined reference range; and a calculation step of obtaining the spectrum data of the component to be analyzed in the target wavelength range by subtracting the condition-compatible spectrum data of the solvent from the condition-compatible spectrum data of the sample solution in the target wavelength range.SELECTED DRAWING: Figure 1

Description

本発明は、スペクトル測定装置を用いた分析方法に関する。 The present invention relates to an analysis method using a spectrum measuring device.

混合された複数成分のそれぞれがどのような物質であるかを同定するために、液体クロマトグラフ（以下、ＬＣ）がよく利用される。液体クロマトグラフでは、分離カラムによって複数成分を互いに分離し、分離カラムからの溶出液の光学的特性の変化を、ＵＶ検出器、ＰＤＡ検出器、ＲＩＤ検出器などを用いて測定することによって、分離カラムから溶出した各成分を検出することが一般的である。 A liquid chromatograph (hereinafter referred to as LC) is often used to identify the substance of each of a plurality of mixed components. In liquid chromatography, multiple components are separated from each other using a separation column, and changes in the optical properties of the eluate from the separation column are measured using a UV detector, PDA detector, RID detector, etc. It is common to detect each component eluted from the column.

一方で、上記のような一般的なＬＣ用検出器では、化学的特性や感度の問題から正確な同定結果が得られないような物質も存在する。そのような場合は、ラマン分光装置などの装置（特許文献１参照）を用いて分析対象成分のラマンスペクトルといった光学的特性を測定し、測定した光学的特性から各成分の物質を同定するといったことが行われる。 On the other hand, there are some substances for which accurate identification results cannot be obtained with the above-mentioned general LC detector due to problems in chemical properties and sensitivity. In such cases, it is recommended to measure optical properties such as Raman spectra of the components to be analyzed using a device such as a Raman spectrometer (see Patent Document 1), and identify the substance of each component from the measured optical properties. will be held.

特開２０２１－１１７０２２号公報JP 2021-117022 Publication

ラマン分光装置のようなスペクトル測定装置を用いてＬＣの分離カラムで分離された成分の同定を行なう場合、溶出液の液滴を乾燥させて溶媒を蒸発させてからスペクトル測定装置で分析対象成分のスペクトル測定を行なうことが一般的である。しかしそのような方法では、成分の分離から同定までをオンラインで行なうことができない上、分析時間が長くなる。そのため、分離カラムからの溶出液を直接的にスペクトル測定装置に導入して、分析対象成分のスペクトルデータを取得することが望まれる。 When identifying components separated in an LC separation column using a spectrum measurement device such as a Raman spectrometer, the eluate droplets are dried to evaporate the solvent, and then the spectrometer is used to identify the components to be analyzed. It is common to perform spectral measurements. However, with such a method, it is not possible to carry out the process from component separation to identification online, and the analysis time becomes long. Therefore, it is desirable to directly introduce the eluate from the separation column into a spectrum measuring device to obtain spectrum data of the component to be analyzed.

分析対象成分のスペクトルデータをリアルタイムで取得するためには、分離カラムからの溶出液をフローセルに導入し、フローセルを流れる溶出液のスペクトル測定を行なう必要があるが、フローセルを流れる溶出液には分析対象成分のほかに溶媒が含まれているため、分析対象成分と溶媒のスペクトルが重なって測定されることになる。そのため、分析対象成分由来のスペクトルデータを取得するためには、溶出液のスペクトルデータから溶媒のスペクトルデータを差し引く演算処理が必要である。 In order to obtain spectrum data of the target component in real time, it is necessary to introduce the eluate from the separation column into a flow cell and measure the spectrum of the eluate flowing through the flow cell. Since a solvent is included in addition to the target component, the spectra of the target component and the solvent will overlap when measured. Therefore, in order to obtain spectral data derived from the component to be analyzed, arithmetic processing is required to subtract the spectral data of the solvent from the spectral data of the eluate.

しかし、分離カラムからの溶出液に含まれる分析対象成分の量は溶媒の量に対して圧倒的に少ないため、溶出液のスペクトルデータから溶媒のスペクトルデータを差し引いて得られた分析対象成分由来のスペクトルデータの信号強度は非常に小さくなる。スペクトルデータの信号強度は、励起光の強度を高くしたりスペクトルの測定時間を長くしたりすることで上げることができる。しかし、励起光強度を高くしすぎると、フローセル内で分析対象成分が変質する恐れがある。また、スペクトルの測定時間を長くすると、分析対象成分がフローセルを通り過ぎた後もスペクトル測定を行なってしまう可能性があり、スペクトルデータの正確性が低下する恐れもある。そのような問題を避けるために、ＬＣの移動相の流量を低下させて分析対象成分がフローセルを流れている時間を長くすることも考えられるが、移動相の流量を変更すると分離カラムでの成分の分離が適切に行われなくなる可能性がある。そもそも、単純に試料溶液のスペクトルデータの信号強度を高めるだけでは、溶媒由来のスペクトルデータの信号強度の上昇によって測定波長範囲のどこかで信号強度が飽和してしまう恐れがある。 However, since the amount of the analyte contained in the eluate from the separation column is overwhelmingly small compared to the amount of solvent, the analyte derived from the analyte obtained by subtracting the spectral data of the solvent from the spectral data of the eluate is The signal strength of the spectral data becomes very small. The signal strength of the spectrum data can be increased by increasing the intensity of the excitation light or by lengthening the spectrum measurement time. However, if the excitation light intensity is made too high, there is a risk that the component to be analyzed will be altered within the flow cell. Furthermore, if the spectrum measurement time is increased, there is a possibility that the spectrum will be measured even after the component to be analyzed has passed through the flow cell, and the accuracy of the spectrum data may decrease. In order to avoid such problems, it may be possible to lower the flow rate of the LC mobile phase to prolong the time that the analyte components flow through the flow cell, but changing the mobile phase flow rate will reduce the flow rate of the components in the separation column. may not be properly separated. In the first place, simply increasing the signal intensity of the spectral data of the sample solution may cause the signal intensity to become saturated somewhere in the measurement wavelength range due to the increase in the signal intensity of the spectral data derived from the solvent.

本発明は、上記問題に鑑みてなされたものであり、フローセルを流れる溶液中の分析対象成分のスペクトルデータを高い信号強度で取得できるようにすることを目的とするものである。 The present invention has been made in view of the above-mentioned problems, and an object of the present invention is to enable spectrum data of an analysis target component in a solution flowing through a flow cell to be obtained with high signal strength.

本発明に係る分析方法は、内部を液が流れるフローセル、及び前記フローセルからの波長帯域ごとの光の量を検出するための光検出部を備えて前記フローセルを流れる液のスペクトル測定を行なうように構成されたスペクトル測定装置を使用し、分析対象成分のスペクトルデータを取得するための分析方法であって、
前記スペクトル測定装置の前記スペクトル測定の条件パラメータを暫定的に設定し、分析対象成分を含む試料溶液についての前記スペクトル測定を実行し、前記試料溶液のスペクトルデータを取得するスペクトル取得ステップと、
前記スペクトル取得ステップの後で、前記試料溶液の前記スペクトルデータと予め取得した溶媒のスペクトルデータの信号強度の差分に基づいて前記分析対象成分のスペクトルデータを取得すべき対象波長範囲を決定する対象範囲決定ステップと、
前記対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲に入っている場合に前記スペクトル取得ステップで取得した前記試料溶液のスペクトルデータと前記溶媒のスペクトルデータを前記試料溶液と前記溶媒のそれぞれの条件適合スペクトルデータとし、前記対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度のレベルが前記所定の基準範囲から外れている場合は、前記対象波長範囲における前記スペクトルデータの信号強度のレベルが前記基準範囲に入るように前記条件パラメータを変更して前記試料溶液について前記スペクトル測定を再実施して前記試料溶液の当該対象波長範囲について前記基準範囲に入る条件適合スペクトルデータを取得するとともに、前記溶媒についての条件適合スペクトルデータを取得する条件適合スペクトル取得ステップと、
前記試料溶液の前記条件適合スペクトルデータから前記溶媒の前記条件適合スペクトルデータを前記対象波長範囲において差し引くことにより、前記対象波長範囲における前記分析対象成分のスペクトルデータを取得する演算ステップと、を含む。 The analysis method according to the present invention includes a flow cell through which a liquid flows, and a photodetector for detecting the amount of light in each wavelength band from the flow cell, and measures the spectrum of the liquid flowing through the flow cell. An analysis method for obtaining spectral data of a component to be analyzed using a configured spectral measurement device, the method comprising:
a spectrum acquisition step of provisionally setting condition parameters for the spectrum measurement of the spectrum measurement device, performing the spectrum measurement on the sample solution containing the component to be analyzed, and acquiring spectrum data of the sample solution;
After the spectrum acquisition step, a target wavelength range in which spectrum data of the analysis target component is to be acquired is determined based on a difference in signal intensity between the spectrum data of the sample solution and the spectrum data of the solvent acquired in advance. a decision step;
When the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range is within a predetermined reference range, the spectral data of the sample solution and the spectral data of the solvent acquired in the spectrum acquisition step are combined with the spectral data of the sample solution and the solvent. If the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range is outside the predetermined reference range, the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range falls within the reference range. The condition parameters are changed so that the spectrum is within the reference range, and the spectrum measurement is re-performed on the sample solution to obtain condition-compatible spectrum data that falls within the reference range for the target wavelength range of the sample solution. a condition-compatible spectrum acquisition step of acquiring condition-compatible spectrum data;
a calculation step of obtaining spectral data of the component to be analyzed in the target wavelength range by subtracting the condition-compatible spectral data of the solvent from the condition-compatible spectral data of the sample solution in the target wavelength range.

ここで、試料溶液と溶媒のスペクトルデータの信号強度の差分に基づいて対象波長範囲を決定するとは、試料溶液と溶媒のスペクトルデータの信号強度の差分が他の波長範囲に比べて大きい波長範囲、すなわち、分析対象成分のスペクトルの特徴が比較的よく表れている波長範囲を対象波長範囲とすることを意味する。すなわち、本発明の分析方法では、まず、スペクトル測定の条件パラメータを暫定的に設定して、試料溶液についてスペクトル測定を行ない、そのスペクトル測定で得られた試料溶液のスペクトルデータを予め取得された溶媒のスペクトルデータと比較し、分析対象成分のスペクトルの特徴が比較的よく表れている波長範囲を、分析対象成分のスペクトルデータの取得対象となる対象波長範囲とする。ここで、対象波長範囲内の溶媒のスペクトルデータの信号強度がすでに所定の基準範囲に入っている場合は、すでに取得されているスペクトルデータを「条件適合スペクトルデータ」として扱う。一方で、対象波長範囲内の溶媒のスペクトルデータの信号強度が基準範囲から外れている場合は、当該対象波長範囲内における試料溶液のスペクトルデータの信号強度のレベルが基準範囲に入るように条件パラメータを変更して試料溶液についてのスペクトル測定を再実施し、最終的に、試料溶液と溶媒についての「条件適合スペクトルデータ」を取得する。その後、試料溶液の「条件適合スペクトルデータ」から溶媒の「条件適合スペクトルデータ」を差し引く演算処理を対象波長範囲内において行なうことにより、対象波長範囲における分析対象成分のスペクトルデータを取得する。 Here, determining the target wavelength range based on the difference in signal strength between the spectral data of the sample solution and the solvent means a wavelength range in which the difference in signal strength between the spectral data of the sample solution and the solvent is larger than other wavelength ranges, That is, it means that the wavelength range in which the spectral characteristics of the component to be analyzed are relatively well expressed is set as the target wavelength range. That is, in the analysis method of the present invention, first, the condition parameters for spectrum measurement are provisionally set, a spectrum measurement is performed on a sample solution, and the spectrum data of the sample solution obtained by the spectrum measurement is used as a pre-obtained solvent. The wavelength range in which the spectral characteristics of the component to be analyzed are relatively well expressed is set as the target wavelength range from which the spectral data of the component to be analyzed is obtained. Here, if the signal intensity of the spectrum data of the solvent within the target wavelength range is already within a predetermined reference range, the already acquired spectrum data is treated as "condition-compliant spectrum data." On the other hand, if the signal intensity of the spectrum data of the solvent within the target wavelength range is outside the reference range, the condition parameters are adjusted so that the signal strength level of the spectrum data of the sample solution within the target wavelength range falls within the reference range. The spectral measurement for the sample solution is re-performed by changing the , and finally, "condition-compatible spectral data" for the sample solution and solvent are obtained. Thereafter, the spectral data of the component to be analyzed in the target wavelength range is obtained by performing calculation processing within the target wavelength range to subtract the "condition compatible spectral data" of the solvent from the "condition compatible spectral data" of the sample solution.

上記のとおり、本発明に係る分析方法によれば、分析対象成分のスペクトルの特徴が出ている対象波長範囲にのみ着目し、その対象波長範囲のスペクトルデータの信号強度が所定の基準範囲から外れている場合には当該対象波長範囲における試料溶液のスペクトルデータの信号強度のレベルが基準範囲に入るようにスペクトル測定装置の条件パラメータを変更してスペクトル測定の再実施を行ない、最終的に、分析対象成分について波長範囲が限定されたスペクトルデータを取得するので、分析対象成分のスペクトルの特徴が表れている対象波長範囲について高い信号強度のスペクトルデータが得られる。 As described above, according to the analysis method of the present invention, only the target wavelength range in which the spectral characteristics of the target component appear is focused, and the signal intensity of the spectral data in the target wavelength range deviates from the predetermined reference range. If so, change the condition parameters of the spectrum measurement device so that the signal intensity level of the spectrum data of the sample solution in the target wavelength range falls within the standard range, and re-perform the spectrum measurement.Finally, the analysis Since spectral data with a limited wavelength range is acquired for the target component, spectral data with high signal strength can be obtained for the target wavelength range in which the spectral characteristics of the target component are expressed.

スペクトル測定装置を備えた分析装置の一例を示す図である。1 is a diagram showing an example of an analysis device including a spectrum measurement device. 分析方法の一実施例を説明するためのフローチャートである。3 is a flowchart for explaining one embodiment of an analysis method. 重ね合わされた試料溶液のスペクトルデータと溶媒のスペクトルデータの一例である。This is an example of superimposed spectrum data of a sample solution and spectrum data of a solvent. 試料溶液のスペクトルデータから溶媒のスペクトルデータを対象波長範囲において差し引く演算処理を説明するための概念図である。FIG. 2 is a conceptual diagram for explaining arithmetic processing for subtracting spectrum data of a solvent from spectrum data of a sample solution in a target wavelength range. 複数の対象波長範囲における分析対象成分のスペクトルデータを繋ぎ合わせる合成処理を説明するための概念図である。FIG. 2 is a conceptual diagram for explaining a synthesis process that connects spectrum data of analysis target components in a plurality of target wavelength ranges.

以下、図面を参照しながら本発明に係る分析方法の一実施例について説明する。 An embodiment of the analysis method according to the present invention will be described below with reference to the drawings.

本発明の分析方法の実施に使用される分析システムの一例を図１に示す。 An example of an analysis system used to carry out the analysis method of the present invention is shown in FIG.

図１の分析システムはＬＣシステムであり、分析流路２、送液ポンプ４、インジェクタ６、分離カラム８、スペクトル測定装置１０、演算処理装置１２、ディスプレイ１４、及び入力装置１６を備えている。 The analysis system in FIG. 1 is an LC system, and includes an analysis channel 2, a liquid pump 4, an injector 6, a separation column 8, a spectrum measurement device 10, an arithmetic processing device 12, a display 14, and an input device 16.

送液ポンプ４は、分析流路２中で移動相を送液する。インジェクタ６は、分析流路２を流れる移動相中に試料を注入する。分離カラム８は、インジェクタ６により移動相中に注入された試料に含まれる成分を互いに分離するためのものである。スペクトル測定装置１０は、分離カラム８からの溶出液が内部を流れるフローセル１８、フローセル１８を流れる溶出液に対して励起光を照射する励起光源２０、及び、励起光によって励起された溶出液からのラマン散乱光を波長帯域ごとに検出して溶出液のラマンスペクトルを測定する光検出部２２を備えたラマン分光装置である。演算処理装置１２は、スペクトル測定装置１０の光検出部２２から出力されるラマンスペクトルデータを使用して演算処理を行なうように構成されたコンピュータ装置である。ディスプレイ１４は、演算処理装置１２から出力された種々の情報を表示するためのものである。入力装置１６は、キーボードなど、演算処理装置１２に対してユーザが情報入力を行なうためのものである。 The liquid feed pump 4 feeds the mobile phase into the analysis channel 2 . The injector 6 injects the sample into the mobile phase flowing through the analysis channel 2 . The separation column 8 is for separating components contained in the sample injected into the mobile phase by the injector 6 from each other. The spectrum measurement device 10 includes a flow cell 18 through which the eluate from the separation column 8 flows, an excitation light source 20 that irradiates the eluate flowing through the flow cell 18 with excitation light, and a flow cell 18 that emits excitation light from the eluate excited by the excitation light. This is a Raman spectrometer equipped with a light detection section 22 that detects Raman scattered light for each wavelength band and measures the Raman spectrum of the eluate. The arithmetic processing device 12 is a computer device configured to perform arithmetic processing using Raman spectrum data output from the photodetector 22 of the spectrum measurement device 10. The display 14 is for displaying various information output from the arithmetic processing unit 12. The input device 16 is a device, such as a keyboard, that allows the user to input information to the arithmetic processing device 12.

次に、上記の分析システムを使用した分析方法の一実施例について、図１とともに図２のフローチャートを用いて説明する。 Next, an example of an analysis method using the above-mentioned analysis system will be described using the flowchart of FIG. 2 together with FIG.

［ステップ１０１：スペクトル測定］
ＬＣの分析条件として、分析対象成分が他の成分から良好に分離されるような条件（移動相流量、カラム温度等）を設定してＬＣ分析を実施する。このとき、スペクトル測定装置１０の条件パラメータ（励起光強度、露光時間、積算回数、スリット幅等）を暫定的に設定し、分離カラム８からの溶出液のうち分析対象成分を含む部分（試料溶液）と分析対象成分を含まない部分（溶媒）のラマンスペクトルをそれぞれ測定する。スペクトル測定装置１０により取得された試料溶液と溶媒のそれぞれのスペクトルデータを演算処理装置１２に読み込ませ、ディスプレイ１４に表示させる。このとき、試料溶液と溶媒のスペクトルデータを互いに比較しやすくするために、互いに重ね合わされた状態でディスプレイ１４に表示させることが好ましい。 [Step 101: Spectrum measurement]
LC analysis is performed by setting conditions (mobile phase flow rate, column temperature, etc.) that allow the target component to be well separated from other components as LC analysis conditions. At this time, the condition parameters (excitation light intensity, exposure time, number of integrations, slit width, etc.) of the spectrum measuring device 10 are temporarily set, and the portion of the eluate from the separation column 8 containing the component to be analyzed (sample solution ) and the Raman spectra of the part (solvent) that does not contain the target component. The spectral data of the sample solution and the solvent acquired by the spectrum measuring device 10 are read into the arithmetic processing device 12 and displayed on the display 14. At this time, in order to make it easier to compare the spectrum data of the sample solution and the solvent with each other, it is preferable to display them on the display 14 in a state where they are superimposed on each other.

［ステップ１０２：対象波長範囲の決定］
ディスプレイ１４に表示された試料溶液と溶媒のスペクトルデータを比較し、両者の信号強度の差が他の波長範囲（波数範囲）に比べて大きくなっているような１つ以上の波長範囲（波数範囲）をそれぞれ対象波長範囲として決定する。または、溶媒のスペクトルデータにはピークが存在せず、試料溶液のスペクトルデータにはピークが存在する波長範囲を対象波長範囲としてもよい。ここで決定された対象波長範囲は、全測定波長範囲のうちの分析対象成分のラマンスペクトルの特徴部分であると考えられるため、以降のステップを対象波長範囲にのみ着目して実行する。 [Step 102: Determination of target wavelength range]
The spectral data of the sample solution and the solvent displayed on the display 14 are compared, and one or more wavelength ranges (wavenumber ranges) in which the difference in signal intensity between the two is larger than other wavelength ranges (wavenumber ranges) are selected. ) are determined as target wavelength ranges. Alternatively, the target wavelength range may be a wavelength range in which there is no peak in the spectrum data of the solvent and a peak in the spectrum data of the sample solution. Since the target wavelength range determined here is considered to be a characteristic part of the Raman spectrum of the component to be analyzed within the entire measurement wavelength range, the following steps are executed focusing only on the target wavelength range.

［ステップ１０３：信号強度の評価］
上記のステップ１０２で決定した１つ以上の対象波長範囲のそれぞれについて、各対象波長範囲内のスペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲に入っているか否かをそれぞれ評価する。所定の基準範囲とは、各対象波長範囲内の試料溶液のスペクトルデータの信号強度を飽和させない範囲で向上させる余地があるか否か又は向上させた方がよいか否かの基準の範囲であり、スペクトル測定装置１０の検出限界強度に基づいて設定することができる。基準範囲は、例えば、上限を検出限界強度の１００％、下限を検出限界強度の８０％と設定することができる。信号強度のレベルが基準範囲に入っているか否かは、例えば、対象波長範囲内の試料溶液のスペクトルデータの信号強度の最大値が基準範囲の上限に達しているか否か、対象波長範囲内の試料溶液のスペクトルデータの信号強度の最小値が基準範囲の下限以上であるか否かによって判定することができる。 [Step 103: Evaluation of signal strength]
For each of the one or more target wavelength ranges determined in step 102 above, it is evaluated whether the signal intensity level of the spectral data within each target wavelength range is within a predetermined reference range. The predetermined reference range is a reference range for determining whether there is room to improve the signal intensity of the spectral data of the sample solution within each target wavelength range without saturating it, or whether it is better to improve it. , can be set based on the detection limit intensity of the spectrum measuring device 10. The reference range can be set, for example, with an upper limit of 100% of the detection limit intensity and a lower limit of 80% of the detection limit intensity. Whether or not the signal intensity level is within the reference range can be determined by, for example, whether the maximum value of the signal intensity of the spectrum data of the sample solution within the target wavelength range has reached the upper limit of the reference range, or whether the signal intensity level is within the target wavelength range. The determination can be made based on whether the minimum value of the signal intensity of the spectrum data of the sample solution is equal to or higher than the lower limit of the reference range.

［ステップ１０４：最適化されたスペクトルデータの取得］
上記ステップ１０３でその対象波長範囲内のスペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲に入っていると評価した対象波長範囲については、ステップ１０１で取得した試料溶液のスペクトルデータと溶媒のスペクトルデータをそれぞれ、当該対象波長範囲についての試料溶液と溶媒のそれぞれの「条件適合スペクトルデータ」とすることができる。 [Step 104: Obtaining optimized spectral data]
For the target wavelength range evaluated in step 103 as being within the predetermined reference range, the spectral data of the sample solution and the spectral data of the solvent obtained in step 101 are used. can be used as "condition-compatible spectral data" for each of the sample solution and solvent for the target wavelength range.

一方で、上記ステップ１０３でその対象波長範囲内のスペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲から外れていると評価した対象波長範囲については、その対象波長範囲内のスペクトルデータの信号強度が基準範囲に入るような条件パラメータをスペクトル測定装置１０に設定し、ＬＣの分析条件は変更せずに試料溶液と溶媒のそれぞれについてスペクトル測定の再実施を行なう。スペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲から外れている対象波長範囲が複数存在する場合、対象波長範囲ごとにスペクトルデータの信号強度を基準範囲に収めるようなスペクトル測定装置１０の条件パラメータを決定し、それぞれの条件パラメータでのスペクトル測定を試料溶液と溶媒について実施する。再実施されたスペクトル測定で取得された試料溶液のスペクトルデータと溶媒のスペクトルデータをそれぞれ、当該対象波長範囲についての試料溶液と溶媒のそれぞれの「条件適合スペクトルデータ」とする。 On the other hand, for the target wavelength range for which the signal strength level of the spectral data within the target wavelength range was evaluated to be outside the predetermined reference range in step 103, the signal strength of the spectral data within the target wavelength range is Condition parameters that fall within the reference range are set in the spectrum measurement device 10, and the spectrum measurement is performed again for each of the sample solution and solvent without changing the LC analysis conditions. If there are multiple target wavelength ranges in which the signal strength level of spectral data deviates from a predetermined reference range, the condition parameters of the spectrum measurement device 10 are set so that the signal strength of the spectral data falls within the reference range for each target wavelength range. Spectrum measurements are performed on the sample solution and solvent under each condition parameter. The spectral data of the sample solution and the spectral data of the solvent obtained in the re-implemented spectral measurement are respectively defined as "condition-compliant spectral data" of the sample solution and the solvent for the target wavelength range.

［ステップ１０５：演算処理］
上記ステップ１０４で取得された試料溶液の「条件適合スペクトルデータ」から溶媒の「条件適合スペクトルデータ」を差し引く演算処理を各対象波長範囲において行なうことで、各対象波長範囲における分析対象成分のスペクトルデータを取得する。なお、ここまでの説明では、試料溶液と溶媒のそれぞれについてスペクトル測定を実施し、試料溶液と溶媒のそれぞれの条件適合スペクトルを取得しているが、本発明はこれに限定されるものではない。溶媒のスペクトルデータは予め用意されたものであってもよい。その場合、分析前に予め用意されたスペクトルデータを、試料溶液の条件適合スペクトルを取得するために変更された条件パラメータを考慮して補正し、溶媒の条件適合スペクトルデータとすることができる。 [Step 105: Arithmetic processing]
By performing calculation processing in each target wavelength range to subtract the "condition compatible spectral data" of the solvent from the "condition compatible spectral data" of the sample solution acquired in step 104 above, the spectral data of the analysis target component in each target wavelength range is get. Note that in the explanation so far, spectra are measured for each of the sample solution and the solvent to obtain condition-compatible spectra for each of the sample solution and the solvent, but the present invention is not limited to this. The spectral data of the solvent may be prepared in advance. In that case, the spectral data prepared in advance before analysis can be corrected in consideration of the condition parameters changed in order to obtain the condition-compatible spectrum of the sample solution, and can be used as the condition-compatible spectrum data of the solvent.

［ステップ１０６：合成処理］
上記ステップ１０５で取得された各対象波長範囲における分析対象成分のスペクトルデータを互いに繋ぎ合わせる合成処理を行ない、分析対象成分についての仮想的なスペクトルデータを作成する。この合成処理で互いに繋ぎ合わされるスペクトルデータは、同じ測定条件（条件パラメータ）で取得されたデータに基づくものでないことがあり得るが、分析対象成分がどのような物質であるかを同定するためのデータとしては問題がない。なお、対象波長範囲が１つのみである場合は、この合成処理により、対象波長範囲以外の信号強度が基準強度（例えば、ゼロ）となるようなスペクトルデータとなり得る。 [Step 106: Composition processing]
A synthesis process is performed in which the spectral data of the component to be analyzed in each target wavelength range acquired in step 105 is connected to each other to create virtual spectral data for the component to be analyzed. The spectral data that are joined together in this synthesis process may not be based on data acquired under the same measurement conditions (condition parameters), but they can be used to identify the substance being analyzed. There is no problem with the data. Note that when there is only one target wavelength range, this combining process can result in spectrum data in which signal intensities other than the target wavelength range become the reference strength (for example, zero).

［ステップ１０７：分析対象成分の同定］
上記ステップ１０６で作成された分析対象成分についての仮想的なスペクトルデータを、演算処理装置１２内にあるデータベース、若しくは演算処理装置１２が接続されているネットワーク上にある物質のスペクトル情報を格納したデータベースを参照することで、分析対象物質がどのような物質であるかを同定する。 [Step 107: Identification of the component to be analyzed]
The virtual spectral data for the analysis target component created in step 106 above can be stored in a database within the arithmetic processing unit 12 or in a database storing spectral information of substances on a network to which the arithmetic processing unit 12 is connected. Identify what kind of substance the target substance is by referring to .

上記分析方法の具体例を、図２とともに図３～図５のデータを用いて説明する。 A specific example of the above analysis method will be explained using the data of FIGS. 3 to 5 as well as FIG. 2.

上記ステップ１０１のスペクトル測定により、試料溶液と溶媒について、図３に示されるようなスペクトルデータが得られたとする。なお、図３の横軸は、励起光の波長に対するラマン散乱光の波長のシフト量を示すラマンシフト［ｃｍ－１］であり、太い線で描かれた波形が試料溶液（分析対象成分を含む溶出液）のスペクトルデータ、細い線で描かれた波形が溶媒（分析対象成分を含まない溶出液）のスペクトルデータである。図３の例では、１１００ｃｍ－１～１６００ｃｍ－１辺りと、１７５０ｃｍ－１～２０５０ｃｍ－１辺りの２つの範囲が他の範囲に比べて、試料溶液と溶媒のスペクトルデータの信号強度の差が大きい部分が多い（分析対象成分の特徴がよく表れている）ように見えるため、これら２つの範囲をそれぞれ対象波長範囲１、対象波長範囲２とした（図２：ステップ１０２）。 Assume that spectrum data as shown in FIG. 3 is obtained for the sample solution and solvent by the spectrum measurement in step 101 above. The horizontal axis in FIG. 3 is the Raman shift [cm -1 ], which indicates the amount of shift in the wavelength of Raman scattered light with respect to the wavelength of excitation light. The waveform drawn with a thin line is the spectrum data of the solvent (eluate that does not contain the target component). In the example in Figure 3, the two ranges of 1100cm -1 to 1600cm -1 and 1750cm -1 to 2050cm -1 have larger differences in signal intensity between the sample solution and solvent spectrum data than other ranges. Since it appears that there are many parts (characteristics of the component to be analyzed are clearly expressed), these two ranges were designated as target wavelength range 1 and target wavelength range 2, respectively (FIG. 2: step 102).

次に、対象波長範囲１と対象波長範囲２のそれぞれにおける信号強度の評価を実施する（図２：ステップ１０３）。 Next, the signal strength in each of the target wavelength range 1 and the target wavelength range 2 is evaluated (FIG. 2: step 103).

対象波長範囲１については、試料溶液の信号強度の最大値が検出限界強度付近に達している（所定の基準範囲に入っている）ため、試料溶液の信号強度を向上させる必要がないと判断できる。したがって、ステップ１０１のスペクトル測定で取得した試料溶液のスペクトルデータと溶媒のスペクトルデータを「対象波長範囲１の条件適合スペクトルデータ」とする（図２：ステップ１０４）。 Regarding target wavelength range 1, the maximum value of the signal intensity of the sample solution has reached near the detection limit intensity (within the predetermined reference range), so it can be determined that there is no need to improve the signal intensity of the sample solution. . Therefore, the spectral data of the sample solution and the spectral data of the solvent obtained in the spectral measurement in step 101 are defined as "condition-compliant spectral data for target wavelength range 1" (FIG. 2: step 104).

一方で、対象波長範囲２については、検出限界強度と試料溶液の信号強度の最大値との間に数１０％の開きがあり（所定の基準範囲の下限未満である）、試料溶液の信号強度を向上させる余地があると判断できる。したがって、この対象波長範囲２の試料溶液の信号強度が基準範囲に入る（例えば検出限界強度の８０％以上で１００％以下）になるようにスペクトル測定装置１０の条件パラメータを設定し、試料溶液と溶媒のそれぞれについてスペクトル測定を実施する。これにより、対象波長範囲２において高い信号強度をもつ「対象波長範囲２の条件適合スペクトルデータ」が得られる（図２：ステップ１０４）。なお、「対象波長範囲２の条件適合スペクトルデータ」は、対象波長範囲２以外の波長範囲（例えば、対象波長範囲１）では試料溶液の信号強度が飽和したものとなり得るが、以降の処理においてこのスペクトルデータが使用されるのは対象波長範囲２の部分のみであるため問題がない。むしろ、対象波長範囲２のように信号強度のレベルが低い波長範囲に着目し、他の波長範囲において信号強度が飽和するか否かを考慮せずに信号強度を高めるようなスペクトル測定を実施することが、本発明に係る分析方法では重要である。 On the other hand, for target wavelength range 2, there is a difference of several tens of percent between the detection limit intensity and the maximum signal intensity of the sample solution (less than the lower limit of the predetermined reference range), and the signal intensity of the sample solution It can be judged that there is room for improvement. Therefore, the condition parameters of the spectrum measuring device 10 are set so that the signal intensity of the sample solution in this target wavelength range 2 falls within the reference range (for example, 80% or more and 100% or less of the detection limit intensity), and Spectral measurements are performed for each of the solvents. As a result, "condition-compliant spectrum data for target wavelength range 2" having high signal strength in target wavelength range 2 is obtained (FIG. 2: step 104). Note that "condition-compliant spectral data for target wavelength range 2" may indicate that the signal intensity of the sample solution is saturated in a wavelength range other than target wavelength range 2 (for example, target wavelength range 1); There is no problem because the spectrum data is used only for the target wavelength range 2. Rather, it focuses on wavelength ranges where the signal strength level is low, such as target wavelength range 2, and performs spectrum measurements that increase the signal strength without considering whether the signal strength will be saturated in other wavelength ranges. This is important in the analysis method according to the present invention.

次に、対象波長範囲１と２のそれぞれについて、試料溶液の条件適合スペクトルデータから溶媒の条件適合スペクトルデータを差し引く演算処理を行ない、図４に示されるような、対象波長範囲１と２のそれぞれにおける分析対象成分のスペクトルデータを取得する（図２：ステップ１０５）。なお、図４では対象波長範囲１の演算処理のみが図示されているが、対象波長範囲２についても、試料溶液と溶媒の「対象波長範囲２の条件適合スペクトルデータ」を用いた演算処理を実施する。 Next, for each of target wavelength ranges 1 and 2, arithmetic processing is performed to subtract the condition-compatible spectral data of the solvent from the condition-compatible spectral data of the sample solution, and as shown in FIG. Obtain spectrum data of the component to be analyzed (FIG. 2: step 105). Although only the calculation process for target wavelength range 1 is illustrated in Figure 4, calculation processing is also performed for target wavelength range 2 using "condition-compatible spectrum data for target wavelength range 2" of the sample solution and solvent. do.

次に、対象波長範囲１と２のそれぞれにおける分析対象成分のスペクトルデータを互いに繋ぎ合わせる合成処理を行ない、図５の下段に示されるような、分析対象成分の全測定波長範囲における仮想的なスペクトルデータを作成する（図２：ステップ１０６）。その後、作成した仮想的なスペクトルデータを用いて、分析対象成分の同定を行なう（図２：ステップ１０７）。 Next, a synthesis process is performed to connect the spectral data of the component to be analyzed in target wavelength ranges 1 and 2, respectively, to create a virtual spectrum of the component to be analyzed in the entire measurement wavelength range, as shown in the lower part of Figure 5. Create data (FIG. 2: step 106). Thereafter, the component to be analyzed is identified using the created virtual spectrum data (FIG. 2: step 107).

なお、上記実施例では、スペクトル測定装置としてラマン分光装置を使用しているが、ＦＩＩＲをスペクトル測定装置として使用した場合でも同様に本発明を適用することができる。 In the above embodiment, a Raman spectrometer is used as the spectrum measurement device, but the present invention can be similarly applied even when FIIR is used as the spectrum measurement device.

以上において説明した実施例は、本発明に係る分析方法の実施形態の一例に過ぎない。本発明に係る分析方法の実施形態は以下のとおりである。 The example described above is only one example of the embodiment of the analysis method according to the present invention. Embodiments of the analysis method according to the present invention are as follows.

本発明に係る分析方法の一実施形態では、内部を液が流れるフローセル、及び前記フローセルからの波長帯域ごとの光の量を検出するための光検出部を備えて前記フローセルを流れる液のスペクトル測定を行なうように構成されたスペクトル測定装置を使用し、分析対象成分のスペクトルデータを取得するための分析方法であって、
前記スペクトル測定装置の前記スペクトル測定の条件パラメータを暫定的に設定し、分析対象成分を含む試料溶液についての前記スペクトル測定を実行し、前記試料溶液のスペクトルデータを取得するスペクトル取得ステップと、
前記スペクトル取得ステップの後で、前記試料溶液の前記スペクトルデータと予め取得した溶媒のスペクトルデータの信号強度の差分に基づいて前記分析対象成分のスペクトルデータを取得すべき対象波長範囲を決定する対象範囲決定ステップと、
前記対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲に入っている場合に前記スペクトル取得ステップで取得した前記試料溶液のスペクトルデータと前記溶媒のスペクトルデータをそれぞれの条件適合スペクトルデータとし、前記対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度のレベルが前記所定の基準範囲から外れている場合は、前記対象波長範囲における前記スペクトルデータの信号強度のレベルが前記基準範囲に入るように前記条件パラメータを変更して前記試料溶液について前記スペクトル測定を再実施して前記試料溶液の当該対象波長範囲について前記基準範囲に入る条件適合スペクトルデータを取得するとともに、前記溶媒についての条件適合スペクトルデータを取得する条件適合スペクトル取得ステップと、
前記試料溶液の前記条件適合スペクトルデータから前記溶媒の前記条件適合スペクトルデータを前記対象波長範囲において差し引くことにより、前記対象波長範囲における前記分析対象成分のスペクトルデータを取得する演算ステップと、を含む。 An embodiment of the analysis method according to the present invention includes a flow cell through which a liquid flows, and a photodetector for detecting the amount of light in each wavelength band from the flow cell, and measures the spectrum of the liquid flowing through the flow cell. An analysis method for obtaining spectral data of a component to be analyzed using a spectral measurement device configured to perform
a spectrum acquisition step of provisionally setting condition parameters for the spectrum measurement of the spectrum measurement device, performing the spectrum measurement on the sample solution containing the component to be analyzed, and acquiring spectrum data of the sample solution;
After the spectrum acquisition step, a target wavelength range in which spectrum data of the analysis target component is to be acquired is determined based on a difference in signal intensity between the spectrum data of the sample solution and the spectrum data of the solvent acquired in advance. a decision step;
When the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range is within a predetermined reference range, the spectral data of the sample solution and the spectral data of the solvent acquired in the spectrum acquisition step are used as respective condition-compatible spectral data. , if the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range is outside the predetermined reference range, the condition parameter is adjusted so that the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range falls within the reference range. and re-performing the spectral measurement on the sample solution to obtain condition-compatible spectral data that falls within the reference range for the target wavelength range of the sample solution, and obtain condition-compatible spectral data for the solvent. a condition-compatible spectrum acquisition step;
a calculation step of obtaining spectral data of the component to be analyzed in the target wavelength range by subtracting the condition-compatible spectral data of the solvent from the condition-compatible spectral data of the sample solution in the target wavelength range.

上記一実施形態の第１態様では、前記対象範囲決定ステップを２回以上実行して互いに重複しない複数の対象波長範囲を決定し、決定した前記複数の対象波長範囲のそれぞれについて前記条件適合スペクトル取得ステップ及び前記演算ステップを実行し、それによって、前記複数の対象波長範囲のそれぞれにおける前記分析対象成分のスペクトルデータを取得する。 In the first aspect of the above-described embodiment, the target range determining step is executed two or more times to determine a plurality of target wavelength ranges that do not overlap with each other, and the condition-compatible spectrum is obtained for each of the determined target wavelength ranges. and the calculation step, thereby obtaining spectral data of the component to be analyzed in each of the plurality of target wavelength ranges.

上記第１態様において、前記条件適合スペクトル取得ステップでは、前記複数の対象波長範囲ごとに互いに異なる前記条件パラメータを前記スペクトル測定装置に設定して複数の前記条件適合スペクトルを取得することができる。これにより、対象波長範囲ごとに互いに異なる条件パラメータを設定してスペクトル測定を実行するため、対象波長範囲の選定の自由度が広がり、分析対象成分の同定に多くの波長範囲を使用することが可能になる。 In the first aspect, in the condition-compatible spectrum acquisition step, the condition parameters, which are different from each other for each of the plurality of target wavelength ranges, may be set in the spectrum measuring device to obtain a plurality of condition-compatible spectra. This enables spectrum measurements to be performed by setting different condition parameters for each target wavelength range, increasing the degree of freedom in selecting target wavelength ranges and making it possible to use many wavelength ranges to identify target components. become.

また、上記第１態様において、前記複数の対象波長範囲のそれぞれにおける前記分析対象成分のスペクトルデータを互いに繋ぎ合わせて、前記分析対象成分の１つの仮想的なスペクトルデータを作成する合成ステップをさらに備えている。これにより、幅広い波長範囲における分析対象成分の仮想的なスペクトルデータが得られ、分析対象成分の同定を正確に行なうことが可能になる。 In the first aspect, the method further includes a synthesizing step of connecting the spectrum data of the component to be analyzed in each of the plurality of target wavelength ranges to create one virtual spectrum data of the component to be analyzed. ing. This makes it possible to obtain virtual spectrum data of the component to be analyzed over a wide wavelength range, making it possible to accurately identify the component to be analyzed.

上記一実施形態の第２態様では、前記対象範囲決定ステップにおいて、前記対象波長範囲は前記試料スペクトルにピークが存在し、前記溶媒スペクトルにピークが存在しない波長範囲である。このような波長範囲では、試料溶液のスペクトルと溶媒のスペクトルの差分をとったときに分析対象成分の特徴的なスペクトルが表れやすいため、分析対象成分の同定精度の向上に寄与することができる。 In the second aspect of the above-described embodiment, in the target range determining step, the target wavelength range is a wavelength range in which a peak exists in the sample spectrum and a peak does not exist in the solvent spectrum. In such a wavelength range, when the difference between the spectrum of the sample solution and the spectrum of the solvent is taken, a characteristic spectrum of the component to be analyzed is likely to appear, which can contribute to improving the identification accuracy of the component to be analyzed.

上記一実施形態の第３態様では、前記基準範囲の下限が、前記スペクトル測定装置の検出限界強度の８０％である。これにより、スペクトル測定の再実施により試料溶液の対象波長範囲における信号強度が高いスペクトルデータが得られ、最終的に得られる分析体操成分の当該対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度も高くなる。 In a third aspect of the above embodiment, the lower limit of the reference range is 80% of the detection limit intensity of the spectrum measuring device. As a result, spectral data with high signal strength in the target wavelength range of the sample solution can be obtained by re-performing the spectrum measurement, and the signal strength of the spectral data in the target wavelength range of the analytical component that is finally obtained also becomes high.

上記一実施形態の第４態様では、前記基準範囲の上限が、前記スペクトル測定装置の検出限界強度の１００％である。これにより、対象波長範囲内の信号強度が飽和することを防止できる。 In a fourth aspect of the above embodiment, the upper limit of the reference range is 100% of the detection limit intensity of the spectrum measuring device. This can prevent the signal strength within the target wavelength range from becoming saturated.

上記一実施形態の第５態様では、前記スペクトル測定装置はラマン分光装置であり、前記スペクトル測定は、前記フローセルからのラマン散乱光の単位時間あたりの量を前記検出部で検出する露光動作を一定時間間隔で周期的に実行するものであり、
前記条件パラメータは、１回の前記露光動作における前記単位時間の長さである露光時間、及び前記スペクトル測定に含まれる前記露光動作の回数である前記積算回数を含む。 In a fifth aspect of the above-described embodiment, the spectrum measurement device is a Raman spectrometer, and the spectrum measurement involves constant exposure operation in which the detection unit detects the amount of Raman scattered light per unit time from the flow cell. It is executed periodically at time intervals,
The condition parameters include an exposure time, which is the length of the unit time in one exposure operation, and the cumulative number of times, which is the number of exposure operations included in the spectrum measurement.

上記一実施形態の第６態様では、前記条件パラメータは、前記フローセルに対して照射される光の強度を含む。 In a sixth aspect of the above-described embodiment, the condition parameter includes the intensity of light with which the flow cell is irradiated.

上記一実施形態の第７態様では、前記条件パラメータは、前記フローセルに対して照射される光の強度を含み、前記条件適合スペクトル取得ステップにおいて、前記スペクトルデータの信号強度が前記基準範囲の上限を超えている場合に前記光の強度を小さくする。 In a seventh aspect of the above-described embodiment, the condition parameter includes the intensity of light with which the flow cell is irradiated, and in the condition-compatible spectrum acquisition step, the signal intensity of the spectrum data exceeds the upper limit of the reference range. If the intensity exceeds the limit, the intensity of the light is reduced.

上記一実施形態の第８態様では、前記条件パラメータは、前記フローセルに対して照射される光の強度を含み、前記条件適合スペクトル取得ステップにおいて、前記スペクトルデータの信号強度が前記基準範囲の下限未満である場合に前記光の強度を大きくする。 In an eighth aspect of the above-described embodiment, the condition parameter includes the intensity of light irradiated onto the flow cell, and in the condition-compatible spectrum acquisition step, the signal intensity of the spectrum data is less than the lower limit of the reference range. In this case, the intensity of the light is increased.

上記一実施形態の第９態様では、前記フローセル内で液体クロマトグラフの分離カラムからの溶出液を流す。このような態様により、本発明に係る分析方法をＬＣシステムに適用することができる。 In a ninth aspect of the above-described embodiment, an eluate from a separation column of a liquid chromatograph is allowed to flow in the flow cell. With this aspect, the analysis method according to the present invention can be applied to an LC system.

上記一実施形態の第１０態様では、前記演算ステップで取得した前記分析対象成分のスペクトルデータに基づいて前記分析対象成分の物質を同定する。 In the tenth aspect of the above-described embodiment, the substance of the component to be analyzed is identified based on the spectrum data of the component to be analyzed acquired in the calculation step.

２ 分析流路
４ 送液ポンプ
６ インジェクタ
８ 分離カラム
１０ スペクトル測定装置
１２ 演算処理装置
１４ ディスプレイ
１６ 入力装置 2 Analysis channel 4 Liquid pump 6 Injector 8 Separation column 10 Spectrum measurement device 12 Arithmetic processing device 14 Display 16 Input device

Claims (13)

内部を液が流れるフローセル、及び前記フローセルからの波長帯域ごとの光の量を検出するための光検出部を備えて前記フローセルを流れる液のスペクトル測定を行なうように構成されたスペクトル測定装置を使用し、分析対象成分のスペクトルデータを取得するための分析方法であって、
前記スペクトル測定装置の前記スペクトル測定の条件パラメータを暫定的に設定し、分析対象成分を含む試料溶液についての前記スペクトル測定を実行し、前記試料溶液のスペクトルデータを取得するスペクトル取得ステップと、
前記スペクトル取得ステップの後で、前記試料溶液の前記スペクトルデータと予め取得した溶媒のスペクトルデータの信号強度の差分に基づいて前記分析対象成分のスペクトルデータを取得すべき対象波長範囲を決定する対象範囲決定ステップと、
前記対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度のレベルが所定の基準範囲に入っている場合に前記スペクトル取得ステップで取得した前記試料溶液のスペクトルデータと前記溶媒のスペクトルデータを前記試料溶液と前記溶媒のそれぞれの条件適合スペクトルデータとし、前記対象波長範囲におけるスペクトルデータの信号強度のレベルが前記所定の基準範囲から外れている場合は、前記対象波長範囲における前記スペクトルデータの信号強度のレベルが前記基準範囲に入るように前記条件パラメータを変更して前記試料溶液について前記スペクトル測定を再実施して前記試料溶液の当該対象波長範囲について前記基準範囲に入る条件適合スペクトルデータを取得するとともに、前記溶媒についての条件適合スペクトルデータを取得する条件適合スペクトル取得ステップと、
前記試料溶液の前記条件適合スペクトルデータから前記溶媒の前記条件適合スペクトルデータを前記対象波長範囲において差し引くことにより、前記対象波長範囲における前記分析対象成分のスペクトルデータを取得する演算ステップと、を含む分析方法。 Using a spectrum measuring device configured to measure the spectrum of the liquid flowing through the flow cell, including a flow cell through which a liquid flows, and a photodetector for detecting the amount of light in each wavelength band from the flow cell. An analysis method for obtaining spectral data of a component to be analyzed,
a spectrum acquisition step of provisionally setting condition parameters for the spectrum measurement of the spectrum measurement device, performing the spectrum measurement on the sample solution containing the component to be analyzed, and acquiring spectrum data of the sample solution;
After the spectrum acquisition step, a target wavelength range in which spectrum data of the analysis target component is to be acquired is determined based on a difference in signal intensity between the spectrum data of the sample solution and the spectrum data of the solvent acquired in advance. a decision step;
When the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range is within a predetermined reference range, the spectral data of the sample solution and the spectral data of the solvent acquired in the spectrum acquisition step are combined with the spectral data of the sample solution and the solvent. If the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range is outside the predetermined reference range, the signal intensity level of the spectral data in the target wavelength range falls within the reference range. The condition parameters are changed so that the spectrum is within the reference range, and the spectrum measurement is re-performed on the sample solution to obtain condition-compatible spectrum data that falls within the reference range for the target wavelength range of the sample solution. a condition-compatible spectrum acquisition step of acquiring condition-compatible spectrum data;
an calculation step of obtaining spectral data of the component to be analyzed in the target wavelength range by subtracting the condition-compatible spectral data of the solvent from the condition-compatible spectral data of the sample solution in the target wavelength range; Method. 前記対象範囲決定ステップを２回以上実行して互いに重複しない複数の対象波長範囲を決定し、決定した前記複数の対象波長範囲のそれぞれについて前記条件適合スペクトル取得ステップ及び前記演算ステップを実行し、それによって、前記複数の対象波長範囲のそれぞれにおける前記分析対象成分のスペクトルデータを取得する、請求項１に記載の分析方法。 Executing the target range determination step two or more times to determine a plurality of target wavelength ranges that do not overlap with each other, and performing the condition-compatible spectrum acquisition step and the calculation step for each of the determined target wavelength ranges, and The analysis method according to claim 1, wherein spectral data of the component to be analyzed in each of the plurality of target wavelength ranges is obtained. 前記条件適合スペクトル取得ステップにおいて、前記複数の対象波長範囲ごとに互いに異なる前記条件パラメータを前記スペクトル測定装置に設定して複数の前記条件適合スペクトルを取得する、請求項２に記載の分析方法。 3. The analysis method according to claim 2, wherein in the condition-compatible spectrum acquisition step, the condition parameters, which are different from each other for each of the plurality of target wavelength ranges, are set in the spectrum measuring device to obtain a plurality of the condition-compatible spectra. 前記複数の対象波長範囲のそれぞれにおける前記分析対象成分のスペクトルデータを互いに繋ぎ合わせて、前記分析対象成分の１つの仮想的なスペクトルデータを作成する合成ステップをさらに備えている、請求項２又は３に記載の分析方法。 Claim 2 or 3, further comprising a synthesizing step of connecting spectral data of the component to be analyzed in each of the plurality of target wavelength ranges to create one virtual spectral data of the component to be analyzed. Analytical method described in. 前記対象範囲決定ステップにおいて、前記対象波長範囲は前記試料スペクトルに複数のピークが存在し、前記溶媒スペクトルにピークが存在しない波長範囲である、請求項１から４のいずれか一項に記載の分析方法。 The analysis according to any one of claims 1 to 4, wherein in the target range determining step, the target wavelength range is a wavelength range in which a plurality of peaks are present in the sample spectrum and no peak is present in the solvent spectrum. Method. 前記所定の基準範囲の下限は、前記スペクトル測定装置の検出限界強度の８０％である、請求項１から５のいずれか一項に記載の分析方法。 The analysis method according to any one of claims 1 to 5, wherein the lower limit of the predetermined reference range is 80% of the detection limit intensity of the spectrum measuring device. 前記所定の基準範囲の上限は前記スペクトル測定装置の検出限界強度の１００％である、請求項１から６のいずれか一項に記載の分析方法。 The analysis method according to any one of claims 1 to 6, wherein the upper limit of the predetermined reference range is 100% of the detection limit intensity of the spectrum measuring device. 前記スペクトル測定装置はラマン分光装置であり、前記スペクトル測定は、前記フローセルからのラマン散乱光の単位時間あたりの量を前記検出部で検出する露光動作を一定時間間隔で周期的に実行するものであり、
前記条件パラメータは、１回の前記露光動作における前記単位時間の長さである露光時間、及び前記スペクトル測定に含まれる前記露光動作の回数である前記積算回数を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の分析方法。 The spectrum measurement device is a Raman spectrometer, and the spectrum measurement is performed by periodically performing an exposure operation at regular time intervals in which the detection unit detects the amount of Raman scattered light per unit time from the flow cell. can be,
Any one of claims 1 to 7, wherein the condition parameters include an exposure time that is the length of the unit time in one exposure operation, and the cumulative number of times that the exposure operation is performed in the spectrum measurement. The analytical method described in item (1) above. 前記条件パラメータは、前記フローセルに対して照射される光の強度を含む、請求項１から７のいずれか一項に記載の分析方法。 The analysis method according to any one of claims 1 to 7, wherein the condition parameter includes the intensity of light with which the flow cell is irradiated. 前記条件パラメータは、前記フローセルに対して照射される光の強度を含み、
前記条件適合スペクトル取得ステップにおいて、前記スペクトルデータの信号強度が前記所定の基準範囲の上限を超えている場合には前記光の強度を小さくする、請求項１から８のいずれか一項に記載の分析方法。 The condition parameter includes the intensity of light irradiated to the flow cell,
9. The method according to claim 1, wherein in the condition-compatible spectrum acquisition step, the intensity of the light is reduced if the signal intensity of the spectral data exceeds the upper limit of the predetermined reference range. Analysis method. 前記条件パラメータは、前記フローセルに対して照射される光の強度を含み、
前記条件適合スペクトル取得ステップにおいて、前記スペクトルデータの信号強度が前記所定の基準範囲の下限未満である場合には前記光の強度を大きくする、請求項１から８、及び１０のいずれか一項に記載の分析方法。 The condition parameter includes the intensity of light irradiated to the flow cell,
According to any one of claims 1 to 8, and 10, in the condition-compatible spectrum acquisition step, the intensity of the light is increased when the signal intensity of the spectrum data is less than the lower limit of the predetermined reference range. Analytical methods described. 前記フローセル内で液体クロマトグラフの分離カラムからの溶出液を流す、請求項１から１１のいずれか一項に記載の分析方法。 The analysis method according to any one of claims 1 to 11, wherein an eluate from a separation column of a liquid chromatograph is passed through the flow cell. 前記演算ステップで取得した前記分析対象成分のスペクトルデータに基づいて前記分析対象成分の物質を同定する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の分析方法。 The analysis method according to any one of claims 1 to 12, wherein the substance of the analysis target component is identified based on the spectrum data of the analysis target component acquired in the calculation step.
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