JP2023034874A - Composition for killing periodontal disease bacteria in oral cell - Google Patents

Abstract

To provide a technique that kills periodontal disease bacteria having invaded oral cells.SOLUTION: A composition contains copper chlorophyllin salt as an active ingredient and is to kill periodontal disease bacteria present in oral cells.SELECTED DRAWING: None

Description

本開示は、口腔細胞内に存在する歯周病菌を殺菌するための組成物等に関する。なお、本明細書に記載される全ての文献の内容は参照により本明細書に組み込まれる。 The present disclosure relates to a composition and the like for sterilizing periodontal bacteria present in oral cells. It should be noted that the contents of all documents mentioned herein are hereby incorporated by reference.

歯周病は細菌（歯周病菌）の感染によって引き起こされる炎症性疾患であり、このため歯周病の予防又は治療のために重要な要因の一つとして、歯周病菌の活動を抑制することが挙げられる。このため、歯周病菌の殺菌又は抑制を目的に、数多くの口腔用組成物が研究開発されてきている（例えば特許文献１）。 Periodontal disease is an inflammatory disease caused by infection with bacteria (periodontal disease bacteria). Therefore, one of the important factors for the prevention or treatment of periodontal disease is to suppress the activity of periodontal disease bacteria. is mentioned. For this reason, many oral compositions have been researched and developed for the purpose of sterilizing or suppressing periodontal disease bacteria (for example, Patent Document 1).

特開２０１２－１１１７３２号公報JP 2012-111732 A 特開２０２０－０１９７２４号公報JP 2020-019724 A 特開２０２０－０１９７２５号公報JP 2020-019725 A

歯周病菌であるP. gingivalisは、細胞（特に歯肉上皮細胞）に侵入することが知られている。侵入した菌は、強力な細胞傷害性を発揮する。侵入した菌の幾分かはリソソームで分解されるが、たとえ分解される運命となってもP. gingivalisはかなり長い時間オートリソソーム内で生き続け、細胞傷害性を発揮するのである。さらには細胞内に侵入した菌の半数近くは初期エンドソームからrecycling pathwayを経由して細胞外に出て、周囲の細胞に再侵入する。このため、P. gingivalisは細胞間を往来し・生き長らえ・増殖し・感染を続けるのである（例えば次のウェブページを参照：http://web.dent.osaka-u.ac.jp/~prevent/research01.html）。 P. gingivalis, a periodontal pathogen, is known to invade cells, especially gingival epithelial cells. Invading fungi exert potent cytotoxicity. Some of the invading bacteria are degraded in lysosomes, but even if destined for degradation, P. gingivalis persists in autolysosomes for a considerable length of time and exerts cytotoxicity. Furthermore, nearly half of the bacteria that have invaded the cell exit the cell via the recycling pathway from early endosomes and re-invade the surrounding cells. For this reason, P. gingivalis can move between cells, survive, proliferate, and continue to infect (for example, see the following web page: http://web.dent.osaka-u.ac.jp/~ prevent/research01.html).

この歯肉上皮細胞内への歯周病菌の侵入は、上記の為害作用に加え、殺菌剤からの逃避につながる。すなわち、殺菌又は抑制効果を奏する有効成分を含有する口腔用組成物を口腔内に適用しても、この有効成分が細胞内に侵入している歯周病菌まで到達し難く、このために、歯周病菌を殺菌又は抑制することが難しくなる。このため、歯周病菌が細胞に侵入するのを抑制する手段が検討されている（特許文献２、３）。 The invasion of periodontal bacteria into the gingival epithelial cells leads to escape from the disinfectant, in addition to the above-mentioned harmful effects. That is, even if an oral composition containing an active ingredient that exhibits a bactericidal or inhibitory effect is applied in the oral cavity, it is difficult for the active ingredient to reach the periodontal bacteria that have invaded the cells. It becomes difficult to sterilize or suppress pericobacteria. Therefore, means for suppressing the invasion of periodontal bacteria into cells have been investigated (Patent Documents 2 and 3).

今回、本発明者らは、歯肉上皮細胞内へ侵入した歯周病菌を殺菌する手法について、検討を進めた。 This time, the present inventors proceeded with the study of methods for sterilizing periodontal bacteria that have invaded gingival epithelial cells.

本発明者らは、銅クロロフィリン塩が、歯肉上皮細胞内へ侵入した歯周病菌（すなわち歯肉上皮細胞内に存在する歯周病菌）に対して優れた殺菌効果を奏することを見いだし、さらに改良を重ねた。 The present inventors have found that copper chlorophyllin salt has an excellent bactericidal effect against periodontal bacteria that have invaded gingival epithelial cells (that is, periodontal bacteria present in gingival epithelial cells), and further improvements. piled up.

本開示は例えば以下の項に記載の主題を包含する。
項１．
銅クロロフィリン塩を有効成分として含有する、口腔細胞内、又はそれにより構成される組織内に存在する歯周病菌を、排除するための組成物。
項２．
銅クロロフィリン塩濃度が２０ｐｐｍ以上である、項１に記載の組成物。
項３．
銅クロロフィリン塩が銅クロロフィリンナトリウムである、項１又は２に記載の組成物。
項４．
口腔用組成物である、項１～３のいずれかに記載の組成物。
項５．
口腔細胞内にＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが存在する対象のための、項１～４のいずれかに記載の組成物。
項６．
口腔細胞が歯肉上皮細胞である、項１～５のいずれかに記載の組成物。
項７．
口腔細胞内、又はそれにより構成される組織内に存在する歯周病菌の殺菌用組成物である、項１～６のいずれかに記載の組成物。 The disclosure includes, for example, subject matter described in the following sections.
Section 1.
A composition containing a copper chlorophyllin salt as an active ingredient, for eliminating periodontal bacteria present in oral cells or tissues composed thereof.
Section 2.
Item 2. The composition according to Item 1, having a copper chlorophyllin salt concentration of 20 ppm or more.
Item 3.
Item 3. The composition according to Item 1 or 2, wherein the copper chlorophyllin salt is sodium copper chlorophyllin.
Section 4.
Item 4. The composition according to any one of Items 1 to 3, which is an oral composition.
Item 5.
5. The composition according to any one of Items 1 to 4, for a subject having Porphyromonas gingivalis present in oral cells.
Item 6.
Item 6. The composition according to any one of Items 1 to 5, wherein the oral cells are gingival epithelial cells.
Item 7.
Item 7. The composition according to any one of items 1 to 6, which is a composition for sterilizing periodontal bacteria present in oral cells or tissues composed thereof.

口腔細胞へ侵入した歯周病菌を効率よく殺菌し、細胞内から歯周病菌を排除することで細胞内を浄化することが可能となる。 It is possible to sterilize periodontal bacteria that have invaded oral cells efficiently and to purify the cells by eliminating periodontal bacteria from the cells.

歯肉上皮細胞に侵入したＰ．ｇ菌を、各種素材が殺菌できるかを検討した結果を示す。P. invaded gingival epithelial cells. The results of examining whether various materials can sterilize g bacteria are shown. 歯肉上皮細胞に侵入したＰ．ｇ菌を、各濃度の銅クロロフィリンナトリウムが殺菌できるかを検討した結果を示す。P. invaded gingival epithelial cells. The results of examining whether each concentration of sodium copper chlorophyllin can sterilize bacteria g are shown.

以下、本開示に包含される各実施形態について、さらに詳細に説明する。本開示は、口腔細胞内に存在する歯周病菌を殺菌するための組成物（口腔細胞内歯周病菌排除用、特に殺菌用組成物）等を好ましく包含するが、これに限定されるわけではなく、本開示は本明細書に開示され当業者が認識できる全てを包含する。 Each embodiment included in the present disclosure will be described in further detail below. The present disclosure preferably includes, but is not limited to, compositions for sterilizing periodontal bacteria present in oral cells (for eliminating periodontal bacteria in oral cells, especially compositions for sterilization). Rather, the present disclosure encompasses everything disclosed herein and recognized by a person skilled in the art.

本開示に包含される口腔細胞内歯周病菌排除用（特に殺菌用）組成物は、銅クロロフィリン塩を有効成分として含有する。本開示に包含される当該組成物を「本開示の組成物」ということがある。 A composition for eliminating intracellular periodontal disease bacteria (particularly for sterilization) included in the present disclosure contains a copper chlorophyllin salt as an active ingredient. Such compositions encompassed by the present disclosure are sometimes referred to as "compositions of the present disclosure."

銅クロロフィリン塩は、アルカリ金属塩であることが好ましく、ナトリム塩又はカリウム塩がより好ましい。銅クロロフィリン塩としては、特に銅クロロフィリンナトリウムが好ましい。 The copper chlorophyllin salt is preferably an alkali metal salt, more preferably a sodium salt or a potassium salt. Sodium copper chlorophyllin is particularly preferred as the copper chlorophyllin salt.

本開示の組成物における銅クロロフィリン塩含有量は、効果が奏される範囲であれば、特に限定はされない。例えば、本開示の組成物には、銅クロロフィリン塩が２０ｐｐｍ以上含有されることが好ましい。また、銅クロロフィリン塩含有量上限は特に限定はされないが、例えば５００ｐｐｍ以下が好ましい。当該範囲（２０～５００ｐｐｍ）の上限又は下限は例えば３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、又は４５０ｐｐｍであってもよい。 The copper chlorophyllin salt content in the composition of the present disclosure is not particularly limited as long as it is within the range in which the effect is exhibited. For example, the composition of the present disclosure preferably contains 20 ppm or more of copper chlorophyllin salt. The upper limit of the copper chlorophyllin salt content is not particularly limited, but is preferably 500 ppm or less, for example. The upper or lower limit of the range (20-500 ppm) may be, for example, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, or 450 ppm.

銅クロロフィリン塩（特に銅クロロフィリンナトリウム）は、口臭除去剤等として用いられる成分であるが、比較的低い量（濃度）で、口腔細胞内や、口腔細胞により構成される組織（特に歯周組織）内に存在する歯周病菌を殺菌する効果を奏することができることは知られていなかった。理論に拘束されることを望むものではないが、銅クロロフィリン塩（特に銅クロロフィリンナトリウム）が、比較的低量で口腔細胞内や、口腔細胞により構成される組織（特に歯周組織）内に存在する歯周病菌を殺菌することができるのは、銅クロロフィリン塩が口腔細胞を活性化（特に、リソソームでの分解反応を活性化し、これによって口腔細胞内の消化活性を亢進）するためではないかと推測される。 Copper chlorophyllin salt (especially copper chlorophyllin sodium) is a component used as a mouth odor remover, etc., but in a relatively low amount (concentration), it can be used in oral cells and tissues composed of oral cells (especially periodontal tissue). It was not known that it can have an effect of sterilizing periodontal disease bacteria existing inside. Without wishing to be bound by theory, copper chlorophyllin salts (especially copper chlorophyllin sodium) are present in relatively low amounts in buccal cells and tissues composed of buccal cells (especially periodontal tissues). It is thought that the reason why copper chlorophyllin can sterilize periodontal disease bacteria is that it activates oral cells (in particular, activates the decomposition reaction in lysosomes, thereby enhancing the digestive activity in oral cells). guessed.

本開示の組成物は、口腔用組成物として好ましく用いられる。また、特に歯周病の予防又は治療用として好ましく用いられる。すなわち、本発明に包含される組成物の特に好ましい一形態は抗歯周病口腔用組成物である。 The composition of the present disclosure is preferably used as an oral composition. In addition, it is particularly preferably used for the prevention or treatment of periodontal disease. That is, one particularly preferred form of the composition encompassed by the present invention is an anti-periodontal oral composition.

口腔細胞としては、特に限定はされないが、歯肉上皮細胞が特に好ましい。歯周病菌が侵入しダメージを受けやすいのが歯肉上皮細胞であるからである。 The oral cells are not particularly limited, but gingival epithelial cells are particularly preferable. This is because gingival epithelial cells are susceptible to invasion and damage by periodontal disease bacteria.

なお、本開示の組成物が特に有効な歯周病菌としては、本発明の効果が奏される限り特に限定されないが、例えばＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が好ましく挙げられる。 Periodontal disease bacteria for which the composition of the present disclosure is particularly effective are not particularly limited as long as the effects of the present invention are exhibited, but a preferred example is Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis).

また、本開示組成物の適用対象としては、口腔細胞内に歯周病菌が侵入している（すなわち、口腔細胞内に歯周病菌が存在する）対象が好ましい。また、ヒトを含む哺乳動物（例えばイヌ、ネコ、マウス、ラット、ヒツジ、ウマ、ウシ、サル等）に好ましく用いることができ、特にヒトが好ましい In addition, the subject to which the composition of the present disclosure is applied is preferably a subject in which periodontal bacteria have invaded oral cavity cells (that is, subjects in which periodontal disease bacteria are present in oral cells). In addition, it can be preferably used for mammals including humans (e.g., dogs, cats, mice, rats, sheep, horses, cows, monkeys, etc.), with humans being particularly preferred.

本開示の組成物は、例えば、固形組成物、液体組成物等で有り得る。また、本開示の組成物は、本開示の組成物（特に口腔用組成物）は、常法に従って例えば軟膏剤、ペースト剤、パスタ剤、ジェル剤、液剤、スプレー剤、洗口液剤、液体歯磨剤、練歯磨剤、ガム剤等の形態（剤形）にすることができる。なかでも、洗口液剤、液体歯磨剤、練歯磨剤、軟膏剤、ペースト剤、液剤、ジェル剤であることが好ましい。 Compositions of the present disclosure can be, for example, solid compositions, liquid compositions, and the like. In addition, the composition of the present disclosure (particularly oral compositions) can be prepared according to conventional methods, such as ointments, pastes, pastes, gels, liquids, sprays, mouthwashes, and liquid dentifrices. It can be in the form (dosage form) of an agent, toothpaste, gum, or the like. Among them, mouthwashes, liquid dentifrices, toothpastes, ointments, pastes, liquids and gels are preferred.

本開示の組成物には、効果を損なわない範囲で、例えば口腔用組成物に配合し得る任意成分を単独で又は２種以上さらに含有してもよい。 The composition of the present disclosure may further contain, for example, one or two or more optional components that can be blended in an oral composition, as long as the effects are not impaired.

例えば、界面活性剤として、ノニオン界面活性剤、アニオン界面活性剤または両性界面活性剤を配合することができる。具体的には、例えば、ノニオン界面活性剤としてはショ糖脂肪酸エステル、マルトース脂肪酸エステル、ラクトース脂肪酸エステル等の糖脂肪酸エステル；脂肪酸アルカノールアミド類；グリセリン脂肪酸エステル；ソルビタン脂肪酸エステル；脂肪酸モノグリセライド；ポリオキシエチレン付加係数が８～１０、アルキル基の炭素数が１３～１５であるポリオキシエチレンアルキルエーテル；ポリオキシエチレン付加係数が１０～１８、アルキル基の炭素数が９であるポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル；セバシン酸ジエチル；ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油；脂肪酸ポリオキシエチレンソルビタン等が挙げられる。アニオン界面活性剤としては、ラウリル硫酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸ナトリウム等の硫酸エステル塩；ラウリルスルホコハク酸ナトリウム、ポリオキシエチレンラウリルエーテルスルホコハク酸ナトリウム等のスルホコハク酸塩；ココイルサルコシンナトリウム、ラウロイルメチルアラニンナトリウム等のアシルアミノ酸塩；ココイルメチルタウリンナトリウム等が挙げられる。両性イオン界面活性剤としては、ラウリルジメチルアミノ酢酸ベタイン、ヤシ油脂肪酸アミドプロピルジメチルアミノ酢酸ベタイン等の酢酸ベタイン型活性剤；Ｎ－ココイル－Ｎ－カルボキシメチル－Ｎ－ヒドロキシエチルエチレンジアミンナトリウム等のイミダゾリン型活性剤；Ｎ－ラウリルジアミノエチルグリシン等のアミノ酸型活性剤等が挙げられる。これらの界面活性剤は、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。その配合量は、通常、組成物全量に対して０．１～５質量％である。 For example, nonionic surfactants, anionic surfactants or amphoteric surfactants can be blended as surfactants. Specifically, for example, nonionic surfactants include sugar fatty acid esters such as sucrose fatty acid esters, maltose fatty acid esters, and lactose fatty acid esters; fatty acid alkanolamides; glycerin fatty acid esters; sorbitan fatty acid esters; fatty acid monoglycerides; Polyoxyethylene alkyl ether having an addition coefficient of 8 to 10 and an alkyl group having 13 to 15 carbon atoms; Polyoxyethylene alkylphenyl ether having a polyoxyethylene addition coefficient of 10 to 18 and an alkyl group having 9 carbon atoms; diethyl sebacate; polyoxyethylene hydrogenated castor oil; fatty acid polyoxyethylene sorbitan; Examples of anionic surfactants include sulfuric acid ester salts such as sodium lauryl sulfate and sodium polyoxyethylene lauryl ether sulfate; sulfosuccinates such as sodium lauryl sulfosuccinate and sodium polyoxyethylene lauryl ether sulfosuccinate; sodium cocoyl sarcosinate and lauroyl methylalanine. acyl amino acid salts such as sodium; cocoyl methyl taurate sodium; Zwitterionic surfactants include betaine acetate type surfactants such as betaine lauryldimethylaminoacetate and betaine coconut oil fatty acid amidopropyldimethylaminoacetate; imidazoline type surfactants such as N-cocoyl-N-carboxymethyl-N-hydroxyethylethylenediamine sodium. Active agent: amino acid-type active agent such as N-lauryldiaminoethylglycine, and the like. These surfactants can be blended singly or in combination of two or more. The blending amount thereof is usually 0.1 to 5% by mass based on the total amount of the composition.

また、香味剤として、例えば、メントール、カルボン酸、アネトール、オイゲノール、サリチル酸メチル、リモネン、オシメン、ｎ－デシルアルコール、シトロネール、α－テルピネオール、メチルアセタート、シトロネニルアセタート、メチルオイゲノール、シネオール、リナロール、エチルリナロール、チモール、スペアミント油、ペパーミント油、レモン油、オレンジ油、セージ油、ローズマリー油、珪皮油、シソ油、冬緑油、丁子油、ユーカリ油、ピメント油、ｄ－カンフル、ｄ－ボルネオール、ウイキョウ油、ケイヒ油、シンナムアルデヒド、ハッカ油、バニリン等の香料を用いることができる。これらは、単独または２種以上を組み合わせて組成物全量に対して例えば０.００１～１．５質量％配合することができる。 Flavoring agents such as menthol, carboxylic acid, anethole, eugenol, methyl salicylate, limonene, ocimene, n-decyl alcohol, citronol, α-terpineol, methyl acetate, citronenyl acetate, methyl eugenol, cineole, Linalool, ethyl linalool, thymol, spearmint oil, peppermint oil, lemon oil, orange oil, sage oil, rosemary oil, cinnamon oil, perilla oil, wintergreen oil, clove oil, eucalyptus oil, pimento oil, d-camphor, Perfumes such as d-borneol, fennel oil, cinnamon oil, cinnamaldehyde, peppermint oil and vanillin can be used. These may be blended singly or in combination of two or more in an amount of, for example, 0.001 to 1.5% by mass based on the total amount of the composition.

また、甘味剤として、例えば、サッカリンナトリウム、アセスルファームカリウム、ステビオサイド、ネオヘスペリジルジヒドロカルコン、ペリラルチン、タウマチン、アスパラチルフェニルアラニルメチルエステル、ｐ－メトキシシンナミックアルデヒド等を用いることができる。これらは、組成物全量に対して例えば０.０１～１質量％配合することができる。 Sweeteners that can be used include, for example, saccharin sodium, acesulfame potassium, stevioside, neohesperidyl dihydrochalcone, perillartine, thaumatin, aspartylphenylalanylmethyl ester, p-methoxycinnamic aldehyde, and the like. These can be blended, for example, in an amount of 0.01 to 1% by mass relative to the total amount of the composition.

さらに、湿潤剤として、ソルビット、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、１，３―ブチレングリコール、ポリプロピレングリコール、キシリット、マルチット、ラクチット、ポリオキシエチレングリコール等を単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。 Furthermore, as wetting agents, sorbit, ethylene glycol, propylene glycol, glycerin, 1,3-butylene glycol, polypropylene glycol, xylit, maltit, lactit, polyoxyethylene glycol, etc. may be blended alone or in combination of two or more. can.

粘結剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルエチルセルロース塩、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、エチルセルロース、結晶セルロース、結晶セルロース・カルメロースナトリウムなどのセルロース誘導体、キサンタンガムなどの微生物産生高分子、トラガントガム、カラヤガム、アラビヤガム、カラギーナン、デキストリン、寒天、ペクチン、プルラン、ジェランガム、ローカストビーンガム、アルギン酸ナトリウムなどの天然高分子または天然ゴム類、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルメチルエーテル、ポリアクリル酸ナトリウムなどの合成高分子、増粘性シリカ、ビーガムなどの無機粘結剤、塩化Ｏ－［２－ヒドロキシ－３－（トリメチルアンモニオ）プロピル］ヒドロキシエチルセルロースなどのカチオン性粘結剤が挙げられる。これら粘結剤は、単独であるいは２種以上を組み合わせて使用することができる。 Binders include sodium carboxymethyl cellulose, carboxymethyl ethyl cellulose salt, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, hydroxypropyl methyl cellulose, methyl cellulose, ethyl cellulose, crystalline cellulose, cellulose derivatives such as crystalline cellulose and carmellose sodium, and microbial productivity such as xanthan gum. Natural polymers or natural gums such as molecules, tragacanth gum, karaya gum, gum arabic, carrageenan, dextrin, agar, pectin, pullulan, gellan gum, locust bean gum, sodium alginate, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone, carboxyvinyl polymer, polyvinyl methyl ether, Synthetic polymers such as sodium polyacrylate, thickening silica, inorganic binders such as Veegum, and cationic binders such as O-[2-hydroxy-3-(trimethylammonio)propyl]hydroxyethylcellulose chloride. be done. These caking agents can be used individually or in combination of 2 or more types.

防腐剤として、メチルパラベン、エチルパラベン、プロピルパラベン、ブチルパラベン等のパラベン類、安息香酸ナトリウム、フェノキシエタノール、塩酸アルキルジアミノエチルグリシン等を配合することができる。 As preservatives, parabens such as methylparaben, ethylparaben, propylparaben and butylparaben, sodium benzoate, phenoxyethanol, alkyldiaminoethylglycine hydrochloride, and the like can be added.

着色剤として、青色１号、黄色４号、赤色２０２号、緑３号等の法定色素、群青、強化群青、紺青等の鉱物系色素、酸化チタン等を配合してもよい。 As a coloring agent, legal dyes such as Blue No. 1, Yellow No. 4, Red No. 202 and Green No. 3, mineral dyes such as ultramarine blue, enhanced ultramarine blue and Prussian blue, titanium oxide, and the like may be blended.

ｐＨ調整剤として、クエン酸、リン酸、リンゴ酸、ピロリン酸、乳酸、酒石酸、グリセロリン酸、酢酸、硝酸、またはこれらの化学的に可能な塩や水酸化ナトリウム等を配合してもよい。これらは、組成物のｐＨが４～８、好ましくは５～７の範囲となるよう、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。ｐＨ調整剤の配合量は例えば０．０１～２重量％であってよい。 As a pH adjuster, citric acid, phosphoric acid, malic acid, pyrophosphoric acid, lactic acid, tartaric acid, glycerophosphoric acid, acetic acid, nitric acid, or chemically possible salts thereof, sodium hydroxide, or the like may be added. These may be blended singly or in combination of two or more so that the pH of the composition is in the range of 4-8, preferably 5-7. The blending amount of the pH adjuster may be, for example, 0.01 to 2% by weight.

なお、本開示の口腔用組成物には、さらに、薬効成分として酢酸ｄｌ－α－トコフェロール、コハク酸トコフェロール、またはニコチン酸トコフェロール等のビタミンＥ類、ドデシルジアミノエチルグリシン等の両性殺菌剤、トリクロサン、イソプロピルメチルフェノール等の非イオン性殺菌剤、ラウロイルサルコシンナトリウム等のアニオン系殺菌剤、塩化セチルピリジニウム、塩酸クロルヘキシジン、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム等のカチオン系殺菌剤、デキストラナーゼ、アミラーゼ、プロテアーゼ、ムタナーゼ、リゾチーム、溶菌酵素（リテックエンザイム）等の酵素、モノフルオロリン酸ナトリウム、モノフルオロリン酸カリウム等のアルカリ金属モノフルオロフォスフェート、フッ化ナトリウム、フッ化第一錫等のフッ化物、トラネキサム酸やイプシロンアミノカプロン酸、アルミニウムクロルヒドロキシルアラントイン、ジヒドロコレステロール、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸、グリセロフォスフェート、クロロフィル、塩化ナトリウム、カロペプタイド、アラントイン、カルバゾクロム、ヒノキチオール、硝酸カリウム、パラチニット等を、単独または２種以上を組み合わせて配合することができる。 The oral cavity composition of the present disclosure further includes vitamin E compounds such as dl-α-tocopherol acetate, tocopherol succinate, or tocopherol nicotinate as active ingredients, amphoteric fungicides such as dodecyldiaminoethylglycine, triclosan, Nonionic fungicides such as isopropylmethylphenol, anionic fungicides such as sodium lauroyl sarcosinate, cationic fungicides such as cetylpyridinium chloride, chlorhexidine hydrochloride, benzalkonium chloride, and benzethonium chloride, dextranase, amylase, protease, Enzymes such as mutanase, lysozyme, lytic enzyme (retech enzyme), alkali metal monofluorophosphates such as sodium monofluorophosphate and potassium monofluorophosphate, fluorides such as sodium fluoride and stannous fluoride, tranexamic acid , epsilon aminocaproic acid, aluminum chlorohydroxyallantoin, dihydrocholesterol, glycyrrhetinic acid, glycyrrhizic acid, glycerophosphate, chlorophyll, sodium chloride, caropeptide, allantoin, carbazochrome, hinokitiol, potassium nitrate, palatinit, etc. alone or in combination of two or more can be compounded.

また、基剤として、アルコール類、シリコン、アパタイト、白色ワセリン、パラフィン、流動パラフィン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、プラスチベース等を添加することも可能である。 As a base, alcohols, silicon, apatite, white petrolatum, paraffin, liquid paraffin, microcrystalline wax, squalane, plastibase, etc. can be added.

なお、本明細書において「含む」とは、「本質的にからなる」と、「からなる」をも包含する（The term "comprising" includes "consisting essentially of” and "consisting of."）。また、本開示は、本明細書に説明した構成要件の任意の組み合わせを全て包含する。 In this specification, the term "comprising" includes "consisting essentially of" and "consisting of." Also, the present disclosure encompasses any and all combinations of the constituent elements described herein.

また、上述した本開示の各実施形態について説明した各種特性（性質、構造、機能等）は、本開示に包含される主題を特定するにあたり、どのように組み合わせられてもよい。すなわち、本開示には、本明細書に記載される組み合わせ可能な各特性のあらゆる組み合わせからなる主題が全て包含される。 Also, the various characteristics (property, structure, function, etc.) described for each of the embodiments of the disclosure described above may be combined in any way to identify subject matter encompassed by the disclosure. That is, the present disclosure encompasses all subject matter consisting of any and all possible combinations of the features described herein.

以下、例を示して本開示の実施形態をより具体的に説明するが、本開示の実施形態は下記の例に限定されるものではない。なお、以下特に断らない限り、ＣＯ_２濃度を示す％以外の％は質量％を示す。 Hereinafter, the embodiments of the present disclosure will be described more specifically with examples, but the embodiments of the present disclosure are not limited to the following examples. Unless otherwise specified, % other than % indicating CO ₂ concentration indicates % by mass.

＜P. ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの培養＞
１０^６個／ｍＬのＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ ＯＭＺ３１４株（以下、Ｐ．ｇ）を、１０ｍＬ変法ＧＡＭ培地を含む試験管に接種した。その後、３７℃嫌気条件下で１日培養した（前培養）。 <Culture of P. gingivalis>
10 ⁶ cells/mL of Porphyromonas gingivalis strain OMZ314 (hereinafter Pg) were inoculated into a test tube containing 10 mL modified GAM medium. After that, the cells were cultured under 37° C. anaerobic conditions for one day (preculture).

前培養で得られた菌液１ｍＬを新しい１０ｍＬ変法ＧＡＭ培地を含む試験管に移し、３７℃嫌気条件下で１日培養した（本培養）。 1 mL of the bacterial solution obtained in the pre-culture was transferred to a test tube containing 10 mL of new modified GAM medium, and cultured under 37° C. anaerobic conditions for 1 day (main culture).

本培養で得られたＰ．ｇ菌を１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地にてＯ．Ｄ６００＝０．１に調整し、Ｐ．ｇ菌液として試験に用いた。 P. spp. g bacteria were cultured in MEM medium containing 10% FBS. D600 was adjusted to 0.1 and P.D. It was used for the test as a g bacterial solution.

＜歯肉上皮細胞の培養＞
歯肉上皮細胞（Ｃａ９－２２株）を１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地に懸濁し、２．０×１０^５個／ｍＬに調整した後、１ｍＬずつ１２ウェルプレートの各ウェルに分注し、３７℃、５％ＣＯ_２の条件下で１日培養し、試験に用いた。 <Culture of gingival epithelial cells>
Gingival epithelial cells (Ca9-22 strain) were suspended in 10% FBS-containing MEM medium and adjusted to 2.0×10 ⁵ cells/mL, then 1 mL was dispensed into each well of a 12-well plate and placed at 37° C. It was cultured for 1 day under 5% _CO2 conditions and used for the test.

＜供試素材溶液の調製＞
供試素材として銅クロロフィリンナトリウム（銅クロ）、トコフェロール酢酸エステル（ＶＥＡ）、トコフェロールニコチン酸エステル（ＶＥＮ）、レチノイン酸を用いた。各素材について、１％エタノールを１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地で溶解した溶液を溶媒とし、所定の濃度となる溶液を調製した。以下、各素材の溶液は、当該溶媒で溶解したものを示す。 <Preparation of test material solution>
Sodium copper chlorophyllin (copper black), tocopherol acetate (VEA), tocopherol nicotinate (VEN), and retinoic acid were used as test materials. For each material, a solution of 1% ethanol dissolved in 10% FBS-containing MEM medium was used as a solvent to prepare a solution having a predetermined concentration. Hereinafter, the solutions of each material indicate those dissolved in the solvent.

細胞内P. ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ殺菌検討（実験１）
歯肉上皮細胞の培養後、培地をＰ．ｇ菌液に置換し、３７℃、５％ＣＯ_２条件下で２時間共培養し、Ｐ．ｇ菌の歯肉上皮細胞への侵入を誘導した。培養２時間後、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で細胞内に侵入していないＰ．ｇ菌を洗浄した上で、濃度５０ｐｐｍに調整した各素材溶液１ｍＬを歯肉上皮細胞に添加し、３７℃、５％ＣＯ_２の条件の下２０時間培養した。培養２０時間後、ＰＢＳで洗浄して、０．２５％Ｔｒｙｐｓｉｎ－ＥＤＴＡ溶液２００μＬを３７℃で５分間処理して、細胞を剥がし、その後、１０％ＦＢＳ含有ＭＥＭ培地１．８ｍＬで反応を停止させ、溶液を回収した。回収した溶液を血液寒天培地に播種し、３７℃、嫌気条件で５日間培養し、寒天培地上に形成されたコロニーをカウントすることで、各素材の細胞内Ｐ．ｇ菌の殺菌効果を評価した。 Intracellular P. gingivalis sterilization study (experiment 1)
After culturing the gingival epithelial cells, the medium was changed to P. The strain was replaced with P.g bacterial solution and co-cultivated at 37° C., 5% CO ₂ for 2 hours. g induced invasion of the bacteria into gingival epithelial cells. After 2 hours of culture, non-invaded P. spp. After washing the g bacteria, 1 mL of each material solution adjusted to a concentration of 50 ppm was added to the gingival epithelial cells and cultured for 20 hours under conditions of 37° C. and 5% CO ₂ . After 20 hours of culture, the cells were washed with PBS, treated with 200 μL of 0.25% Trypsin-EDTA solution at 37° C. for 5 minutes to detach the cells, and then the reaction was stopped with 1.8 mL of MEM medium containing 10% FBS. , the solution was recovered. The recovered solution was seeded on a blood agar medium and cultured at 37° C. under anaerobic conditions for 5 days. The bactericidal effect of g bacteria was evaluated.

結果を、コントロール（素材を用いずに溶媒だけを用いて同様に行った検討）でのコロニー数を細胞内Ｐ．ｇ菌数１００％としたときの相対値で、図１に示す。銅クロロフィリンナトリウムが、歯肉上皮細胞に侵入したＰ．ｇ菌を効率的に殺菌していることが分かった。 The results were obtained by comparing the number of colonies in the control (similar examination using only the solvent without using the material) to the intracellular P.C. Fig. 1 shows the relative value when the number of g bacteria is 100%. Sodium copper chlorophyllin has been shown to invade gingival epithelial cells from P. cerevisiae. It was found that g bacteria were efficiently sterilized.

細胞内P. ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ殺菌検討（実験２）
銅クロロフィリンナトリウムを異なる濃度で含む溶液を調製し、上記（実験１）と同様にして、銅クロロフィリンナトリウムの量（溶液濃度）によって、歯肉上皮細胞に侵入したＰ．ｇ菌への殺菌効果が変化するかを検討した。結果を図２に示す。（図１と同様に、コントロール（銅クロロフィリンナトリウムを用いずに溶媒だけを用いて同様に行った検討）でのコロニー数を細胞内Ｐ．ｇ菌数１００％としたときの相対値で示す。）銅クロロフィリンナトリウムの濃度が、約２０ｐｐｍを超えると、歯肉上皮細胞に侵入したＰ．ｇ菌に対する殺菌効果が向上することがわかった。 Intracellular P. gingivalis sterilization study (experiment 2)
Solutions containing different concentrations of copper chlorophyllin sodium were prepared, and P. cerevisiae that had invaded gingival epithelial cells was affected by the amount of copper chlorophyllin sodium (solution concentration) in the same manner as described above (Experiment 1). It was examined whether the bactericidal effect on g bacteria would change. The results are shown in FIG. (Similarly to Fig. 1, the number of colonies in the control (study conducted in the same manner using only the solvent without sodium copper chlorophyllin) is shown as a relative value when the number of intracellular P.g bacteria is 100%. ) When the concentration of sodium copper chlorophyllin exceeds about 20 ppm, P. It was found that the bactericidal effect against g bacteria was improved.

Claims (7)

銅クロロフィリン塩を有効成分として含有する、口腔細胞内、又はそれにより構成される組織内に存在する歯周病菌を、排除するための組成物。 A composition containing a copper chlorophyllin salt as an active ingredient, for eliminating periodontal bacteria present in oral cells or tissues composed thereof. 銅クロロフィリン塩濃度が２０ｐｐｍ以上である、請求項１に記載の組成物。 2. The composition of claim 1, wherein the copper chlorophyllin salt concentration is 20 ppm or greater. 銅クロロフィリン塩が銅クロロフィリンナトリウムである、請求項１又は２に記載の組成物。 3. The composition of claim 1 or 2, wherein the copper chlorophyllin salt is sodium copper chlorophyllin. 口腔用組成物である、請求項１～３のいずれかに記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 3, which is an oral composition. 口腔細胞内にＰｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓが存在する対象のための、請求項１～４のいずれかに記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 4, for subjects having Porphyromonas gingivalis in oral cells. 口腔細胞が歯肉上皮細胞である、請求項１～５のいずれかに記載の組成物。 The composition according to any one of claims 1 to 5, wherein the oral cells are gingival epithelial cells. 口腔細胞内、又はそれにより構成される組織内に存在する歯周病菌の殺菌用組成物である、項１～６のいずれかに記載の組成物。 Item 7. The composition according to any one of items 1 to 6, which is a composition for sterilizing periodontal bacteria present in oral cells or tissues composed thereof.

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