JP2023009974A

JP2023009974A - ホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩並びにそれらの用途

Info

Publication number: JP2023009974A
Application number: JP2021113693A
Authority: JP
Inventors: 博貴加来田; Hirotaka Kakuta
Original assignee: Okayama University NUC
Current assignee: Okayama University NUC
Priority date: 2021-07-08
Filing date: 2021-07-08
Publication date: 2023-01-20

Abstract

【課題】一側面において、ホウ素中性子捕捉療法に用いることができるとともに、腫瘍内における蓄積量を容易に測定可能なホウ素含有化合物を提供すること、また、他の一側面においては、さらに、少量の投与にて腫瘍組織において高い^１０Ｂ－ホウ素濃度を与えるホウ素含有化合物を提供すること。
【解決する手段】下記式（Ｉ）：

（式（Ｉ）において、Ｘはホウ素１０（^１０Ｂ）を含有する基、Ｌはリンカー、Ｙはヨウ素を含有する基を表す。）で表されることを特徴とするホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩を提供することにより上記課題を解決する。
【選択図】なし

Description

本発明はホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩に関するものであり、より詳細には、ホウ素中性子捕捉療法に用いられる化合物又はその塩に関する。

ホウ素中性子捕捉療法（ＢｏｒｏｎＮｅｕｔｒｏｎＣａｐｔｕｒｉｎｇＴｈｅｒａｐｙ、以下「ＢＮＣＴ」ということがある。）は、ホウ素の同位体であるホウ素１０（^１０Ｂ）を、腫瘍疾患を患う患者に投与し、その後、中性子線を照射して腫瘍細胞のみを死滅させる治療法であり、治療後のＱＯＬも優れていることから、近年、低侵襲のがん治療法として注目を浴びている。ホウ素１０（^１０Ｂ）は、低エネルギーの熱中性子を吸収し、核***反応（^１０Ｂ（ｎ，α）^７Ｌｉ反応）により、α線（ヘリウム原子核）と^７Ｌｉ核を放出する。熱中性子は低エネルギー（０．０２５ＭｅＶ）であり人体に対する傷害性が低いが、その一方で上記核***反応により生じるα線と^７Ｌｉ核は細胞を破壊するのに十分なエネルギー（２．４ＭｅＶ）を有する。また、上記核***反応により放出されるα線の飛程は約９μｍ程度、^７Ｌｉ核の飛程は約４μｍ程度と短いため、^１０Ｂを腫瘍組織に予め集積させ、そこに熱中性子を照射すれば、腫瘍組織近傍においてのみ高エネルギーの放射線が発生し、腫瘍細胞のみを選択的に破壊することができる。ホウ素中性子捕捉療法は、特に、癌細胞と正常細胞が混在している悪性度の高い脳腫瘍などの頭頸部癌や、メラノーマの治療に効果的であることが知られている。

ホウ素中性子捕捉療法においては、腫瘍組織にホウ素１０を導入するためホウ素含有化合物が用いられる。ホウ素含有化合物は、十分に腫瘍細胞を破壊するとともに正常組織への影響を最低限にとどめるという観点から、腫瘍組織に選択的且つ多量に集積するものであることが望ましく、治療対象となる腫瘍組織における^１０Ｂ濃度を２０ｐｐｍ以上（２０μｇ／ｇに相当）とすることが望ましいとされている。この濃度は、ホウ素の分子量を約１０としてモル濃度に換算すると、およそ２ｍＭに相当することからわかるとおり、通常、μＭ（マイクロモーラー）からｎＭ（ナノモーラー）オーダーの低濃度で用いられる低分子医薬品に比べて極めて高い濃度である。

臨床研究を含め、ホウ素中性子捕捉療法での利用に耐えうるホウ素含有化合物はＬ－ＢＰＡ（化合物１a、４－ｂｏｒｏｎｏ－Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ（^１０Ｂ）、ＣＡＳＲＮ：８０９９４－５９－８）、その^１８Ｆ標識体である［^１８Ｆ］Ｆ－ＢＰＡ（化合物１ｂ、^１８Ｆ-ｆｌｕｏｒｏ－ｂｏｒｏｎｏ－Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）、ホウ酸、ＢＳＨ（化合物２、Ｓｏｄｉｕｍｍｅｒｃａｐｔｏｄｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（^１０Ｂ）、ＣＡＳＲＮ：１２４４８－２４－７）に限られる。なお、Ｌ－ＢＰＡ（化合物１ａ）は、ＢＮＣＴ用の薬剤として２０２０年に日本で上市されている（非特許文献１）。

Ｌ－ＢＰＡ（化合物１ａ）は、その安全性に基づき、ＢＮＣＴ用薬剤として使用されているが、腫瘍におけるホウ素濃度２０ｐｐｍ以上を達成するためには、５００ｍｇ／ｋｇ体重（体重６０ｋｇの場合、３０ｇに相当する）という投与量にて、大量のＬ－ＢＰＡが点滴投与される。一方、ＢＳＨ（化合物２）は、１分子あたり１２個のホウ素原子を有する二価の陰イオンクラスターであり、１分子あたりのホウ素含有量が高いものの、水溶性が高く、細胞への透過性が極めて低い。このようにＢＮＣＴに用いられている既存のホウ素含有化合物、すなわち、ＢＮＣＴ用薬剤は、いずれも腫瘍への集積性に改善の余地があり、治療効果の向上、副作用の低減などの観点から、腫瘍組織に選択的かつ大量に取り込まれるホウ素含有化合物の開発が強く望まれている。

ＢＳＨは１分子あたり最大１２個もの^１０Ｂ原子を有することから、その腫瘍への集積性を高めることができれば、細胞内ホウ素濃度の飛躍的な向上が期待される。このような観点から、ＢＳＨの腫瘍への集積性を高める技術が数多く報告されており、例えば、非特許文献２及び特許文献１には、細胞透過性ペプチドを使用する方法が記載されている。しかしながら、非特許文献２によれば、細胞透過性ペプチドを用いた場合であっても、細胞内ホウ素濃度２０ｐｐｍ（およそ２０００ｎｇ／１０^６ｃｅｌｌsに相当する）を与えるためには依然として１ｍＭ以上という高濃度のＢＳＨの投与が必要である。

他方、ホウ素中性子捕捉療法においては、治療対象となる腫瘍組織において腫瘍細胞を破壊するために十分な線量の放射線を発生させる一方で、正常組織に対する影響は最小限に留めることが望ましい。ホウ素のみならず、生体中に存在する元素、特に、生体中に多量に存在する水素や窒素も中性子を吸収して放射線を生じる性質があり、これらの元素からの影響を最小限にとどめるためにも、過度の中性子線の照射は好ましくなく、腫瘍におけるホウ素濃度に基づいて必要十分な量の中性子線を照射することが極めて重要である。しかしながら、腫瘍内のホウ素濃度を測定する方法については、現段階で未だ確立された手法がなく、例えば、非特許文献１及び３に示されるように、腫瘍内のホウ素濃度を直接測定する代わりに、その代替指標として全血中ホウ素濃度が用いられているのが現状である。

腫瘍内におけるホウ素の蓄積量を測定する方法として、陽電子放出断層画像法（ＰｏｓｉｔｒｏｎＥｍｉｓｓｉｏｎＴｏｍｏｇｒａｐｈｙ、以下、単に「ＰＥＴ」ということがある。）の利用が試みられており（非特許文献４）、ＰＥＴにてイメージングが可能なホウ素含有化合物として^１８Ｆ－ＦＢＰＡ（^１８Ｆ－ｆｌｕｏｒｏ－ｂｏｒｏｎｏ－Ｌ－ｐｈｅｎｙｌａｌａｎｉｎｅ）が知られている。しかしながら、ＰＥＴイメージングによるホウ素蓄積量の測定は、診断から治療までに時間を要し、患者の負担が大きい。また、ＰＥＴイメージングは放射性薬剤（例えば、^１８Ｆ）の取り扱いを必要とするため、医療従事者の被ばくは避けられない。

特許掲載公報第６５４８０６０号

ステボロニン点滴静注バッグ９０００ｍｇ／３００ｍＬ、医薬品インタビューフォーム、２０２０年５月改訂（第２版）ＭｉｃｈｉｕｅＨ，ｅｔａｌ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，３３０，７８８－７９６（２０２１）ＯｎｏＫ, ｅｔａｌ. ＡｄｖａｎｃｅｉｎＮｅｕｔｏｒｏｎＣａｐｔｕｒｅＴｈｅｒａｐｙ２００６，２７－３０高井良尋著、「ホウ素中性子捕捉療法と分子イメージング－１８Ｆ－ＦＢＰＡ－ＰＥＴの意味するもの・期待すること－」、ＲＡＤＩＯＩＳＯＴＯＰＥＳ、６８、２５―３５（２０１９）

本発明は上記のような従来技術の課題に鑑みてなされたものであり、一側面において、ホウ素中性子捕捉療法に用いることができるとともに、腫瘍内における蓄積量を容易に測定可能なホウ素含有化合物を提供することを課題とする。また、他の一側面においては、さらに、少量の投与にて腫瘍組織において高い^１０Ｂ－ホウ素濃度を与えるホウ素含有化合物を提供することを課題とする。

本発明者らは、上記課題を解決しようと鋭意研究努力を重ねる過程において、ホウ素中性子捕捉療法において用いられるホウ素含有化合物と同程度の濃度で用いられる医療用の薬剤として、Ｘ線造影用として用いられるヨウ素薬剤があることに着目した。そして、一つの分子内にＸ線造影能のあるヨウ素とホウ素中性子捕捉療法に用いられる^１０Ｂの双方を有する化合物を創出すれば、ホウ素濃度よりも測定が容易なヨウ素濃度を測定し、測定されたヨウ素濃度をホウ素濃度に換算することにより、生体の任意の部位におけるホウ素濃度を簡単かつ迅速に把握できること、かつ、また、ホウ素に加えて、脂溶性に優れるヨウ素を有する化合物を用いることにより、当該化合物の細胞膜に対する透過性が高められ、細胞内のホウ素濃度を飛躍的に高めることができることを見出し、本発明を完成した。

すなわち、本発明は、以下の［１］～［９］を提供することにより上記課題を解決するものである。

［１］、下記式（Ｉ）で表されることを特徴とするホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩。なお、下記式（Ｉ）において、Ｘはホウ素１０（^１０Ｂ）を含有する基、Ｌはリンカー、Ｙはヨウ素を含有する基を表す。

［２］、上記式（Ｉ）におけるＸが、ホウ素１０（^１０Ｂ）を含有するホウ素クラスターを含む基であることを特徴とする上記［１］に記載の化合物又はその塩。

［３］、上記式（Ｉ）におけるＸが、下記式（ＸＩ）で表される基であることを特徴とする上記［１］又は［２］に記載の化合物又はその塩。なお、下記式（ＸＩ）において、黒丸はＢＨ、白丸はＢを表し、＊は隣接する原子との結合手を表す。

［４］、上記式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩ）で表される基であることを特徴とする上記［１］乃至［３］のいずれかに記載の化合物又はその塩。なお、下記式（ＹＩ）において、Ｒ^１はハロゲン原子、又は置換されていてもよい一価の有機基を表し、ａは、１～５の整数を表し、Ｒ^１が複数ある場合、それらはそれぞれ独立であり、＊は、隣接する原子との結合手を表す。ただし、下記式（ＹＩ）で表される基には、少なくとも１つ以上のヨウ素原子が含まれる。

［５］、上記式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩＩ）で表される基であることを特徴とする上記［１］乃至［４］のいずれかに記載の化合物又はその塩。なお、下記式（ＹＩＩ）において、Ｒ^２はヨウ素原子を表し、Ｒ^３は、置換されていてもよい一価のアルキル基又は置換されていてもよい一価のハロゲン化アルキル基を表し、ｂは１～４の整数を表し、＊は、隣接する原子との結合手を表す。

［６］、上記式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩＩＩ）で表される基であることを特徴とする上記［１］乃至［５］のいずれかに記載の化合物又はその塩。なお、下記式（ＹＩＩＩ）において、Ｒ^３は、置換されていてもよい一価のアルキル基又は置換されていてもよい一価のハロゲン化アルキル基を表し、＊は、隣接する原子との結合手を表す。

［７］、上記式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩＶ）で表される基であることを特徴とする上記［１］乃至［６］のいずれかに記載の化合物又はその塩。なお、下記式（ＹＩＶ）において、＊は、隣接する原子との結合手を表す。

［８］、上記式（Ｉ）におけるＬが、下記式（ＬＩ）で表される基であることを特徴とする上記［１］乃至［７］のいずれかに記載の化合物又はその塩。なお、下記式（ＬＩ）において、＊は、隣接する原子との結合手を表す。

上記［１］～［８］のいずれかに記載の化合物又はその塩は、その基本骨格中にホウ素^１０Ｂを含有しているため、ホウ素中性子捕捉療法におけるホウ素薬剤として好適に用いることができる。すなわち、本発明によれば、さらに、以下の［９］乃至［１１］が提供される。

［９］、上記［１］～［８］のいずれかに記載の化合物又はその塩を含む、医薬組成物。

［１０］、ホウ素中性子捕捉療法用であることを特徴とする上記［９］に記載の医薬組成物。

［１１］、上記［１］～［８］のいずれかに記載の化合物又はその塩を患者に投与する工程、及び、前記患者に中性子線を照射する工程を含む、腫瘍疾患の治療方法。

また、ホウ素とヨウ素の双方を含有する化合物又はその塩をＢＮＣＴ用の薬剤として用いる場合には、生体内の任意の部位、例えば腫瘍、におけるホウ素濃度を、ホウ素濃度よりも測定が容易なヨウ素濃度を測定し、測定されたヨウ素濃度をホウ素濃度に換算することにより、簡単かつ迅速に得ることができる。すなわち、本発明によれば、さらに以下の［１２］が提供される。

［１２］、上記［１］～［８］のいずれかに記載の化合物又はその塩を患者に投与する工程、前記患者の腫瘍におけるヨウ素濃度を測定する工程、測定された前記ヨウ素濃度に基づいて腫瘍におけるホウ素濃度を推定する工程、及び、推定された前記ホウ素濃度に基づいて前記患者に中性子線を照射する工程を含む、腫瘍疾患の治療方法。

本発明に係る化合物又はその塩、及びこれらを含有する医薬組成物によれば、生体内のホウ素濃度を、ホウ素濃度よりも測定が容易なヨウ素濃度を測定することにより簡単かつ迅速に得ることができる。

化合物３ａ～３ｃ（ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＭｅ、ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥｔ、ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥＦ）の合成スキームを示す図である。マウスメラノーマ細胞Ｂ１６／ＢＬ６を化合物３ａ～３ｃ（ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＭｅ、ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥｔ、ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥＦ）とインキュベートした後の各細胞における細胞内ホウ素濃度を示す図である。

以下、本発明についてさらに詳細に説明する。

本発明に係る化合物又はその塩は、上述したとおり、下記式（Ｉ）で表されることを特徴とする化合物又はその塩である。

上記式（Ｉ）中、Ｘはホウ素１０（^１０Ｂ）を含有する基、Ｌはリンカー、Ｙはヨウ素を含有する基を表す。ホウ素１０とは、質量数１０のホウ素の同位体であり、^１０Ｂと表される。天然にはホウ素１０（^１０Ｂ）とホウ素１１（^１１Ｂ）の２つの安定同位体が存在し、ホウ素１０は天然に存在するホウ素の約１９．９％、ホウ素１１は約８０．１％を占める。ホウ素中性子捕捉療法は、これらのホウ素の同位体のうち、^１０Ｂが起こす核***反応を用いるものである。

上記式（Ｉ）中のＸは、^１０Ｂを含有する基である限りにおいて、基本的にどのようなものであってもよく、例えば、前述したＬ－ＢＰＡ（化合物１ａ）のように１つのホウ素原子を含む基であってもよいが、２つ以上のホウ素原子を含む基であることが好ましく、３つ以上のホウ素原子を含む基であることがより好ましく、６つ以上のホウ素原子を含む基であることがさらに好ましく、特に、ホウ素クラスターを含む基であることが好ましい。

本明細書において「ホウ素クラスター」とは、主として複数のホウ素原子が集合して形成される多面体構造を有する分子を意味し、好ましくは３～２０個のホウ素原子を含有するホウ素クラスターであり、より好ましくは１０～２０個のホウ素原子を含有するホウ素クラスターであり、さらに好ましくは１０～１２個のホウ素原子を含有するホウ素クラスターであある。ホウ素クラスターとしては、例えば、Ｄｅｃａｂｏｒａｎｅ（Ｂ_１０Ｈ_１４）、Ｄｅｃａｈｙｄｒｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（［Ｂ_１０Ｈ_１０］^２－）、Ｄｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（［Ｂ_１２Ｈ_１２］^２－）、ｎｉｄｏ，ｎｉｄｏ－Ｏｃｔａｄｅｃａｂｏｒａｎｅ（２２）（Ｂ_１８Ｈ_２２、ＣＡＳＲＮ：２１１０７－５６－２）のような水素化ホウ素化合物が挙げられるが、これに限定されない。

例えば、ホウ素クラスターは、それを構成する骨格原子として、ホウ素原子以外に炭素原子、窒素原子、酸素原子、硫黄原子等を含んでいてもよい。ホウ素クラスターが含有するホウ素原子以外の原子の数は、好ましくは０～５個であり、より好ましくは０～２個である。基本骨格にホウ素原子以外の原子を含むホウ素クラスターとしては、例えば、ホウ素原子と炭素原子を含むカルボラン（ｃａｒｂｏｒａｎｅ）が挙げられる。カルボランとしては、例えば、炭素原子を１つ含むｃｌｏｓｏ－ｃａｒｂｏｒａｎｅ（［ＣＢ_１１Ｈ_１２］^－）、炭素原子を２つ含むｃｌｏｓｏ－ｃａｒｂｏｒａｎｅ（Ｃ_２Ｂ_１０Ｈ_１２）やｎｉｄｏ－ｃａｒｂｏｒａｎｅ（［Ｃ_２Ｂ_９Ｈ_１１］^－）、及び、例えば、分子式がＭ（Ｃ_２Ｂ_９Ｈ_１０）_２で表されるサンドイッチ型のものなどが知られているが、これらに限定されない。なお、前記分子式において、Ｍは遷移金属元素を表し、例えば、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｃｏ、Ｍｏなどであり得る。すなわち、ホウ素クラスターは、Ｆｅ、Ｎｉ、Ｃｏ、Ｍｏなどの遷移金属との金属錯体であってもよい。

本発明に用いられるホウ素クラスターは、基本的にどのようなホウ素クラスターであってもよいが、本発明に係る化合物又はその塩の水への溶解性を高めるという観点からは、イオン性のホウ素クラスター又は水溶性のホウ素クラスターであることが好ましい。イオン性又は水溶性のホウ素クラスターとしては、例えば、下記の構造式で表される、Ｄｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（[Ｂ_１２Ｈ_１２]^２－）、チオール基を有するＤｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（[Ｂ_１２Ｈ_１１ＳＨ]^２－、ＢＳＨ）、水酸基を有するＤｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（[Ｂ_１２Ｈ_１１ＯＨ]^２－）、アミノ基を有するＤｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（[Ｂ_１２Ｈ_１１ＮＨ_３]^－）などが知られている。

ある好適な一態様において、上記式（Ｉ）におけるＸはホウ素クラスターを含む基であり、より好適には、ホウ素クラスターからなる一価の基である。ホウ素クラスターからなる一価の基とは、ホウ素クラスターを構成する任意の一つのＨを除いてなる基を意味する。例えば、ホウ素クラスターが前述したＤｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（[Ｂ_１２Ｈ_１２]^２－）である場合には、ホウ素クラスターからなる一価の基は下記式（ＸＩ）で表される基である。なお、下記式（ＸＩ）において、黒丸はＢＨ、白丸はＢを表し、＊は隣接する原子との結合手を表す。すなわち、ホウ素クラスターからなる一価の基は、＊を介してリンカーＬと共有結合している。

本発明に係る化合物又はその塩は、ある好適な一態様において、ホウ素中性子捕捉療法に用いられる。したがって、上記式（Ｉ）中のＸにおける^１０Ｂの同位体比率は、１９％以上であることが好ましく、５０％以上であることがより好ましく、７０％以上であることがさらに好ましく、９０％以上であることがよりさらに好ましい。ホウ素含有化合物の^１０Ｂの同位体比率は、^１０Ｂ含有量を高めたホウ素（^１０Ｂ濃縮ホウ素)を原料として用いることで高めることができる。^１０Ｂ濃縮ホウ素を製造する方法としては、例えば、化学交換蒸留法が知られている。

一方、上記式（Ｉ）中のＹは、ヨウ素原子を含有する基である。Ｙは、少なくとも１つ以上のヨウ素原子を含有する限りにおいて、基本的にどのような基であってもよいが、本発明に係る化合物又はその塩のＸ線ＣＴ又は蛍光Ｘ線ＣＴにおける造影能を高めるという観点及び／又は本発明に係る化合物又はその塩の脂溶性を高め細胞膜の透過性を向上させるという観点からは、２つ以上のヨウ素原子を含有する基であることが好ましい。

また、本発明に係る化合物又はその塩の脂溶性を高め細胞膜の透過性を向上させるという観点から、上記式（Ｉ）中のＹは、少なくとも１つ以上のフェニル環を有する基であることが好ましく、例えば、ある好適な一態様において、上記式（Ｉ）中のＹは、下記式（ＹＩ）で表される基であり得る。

上記式（ＹＩ）中、Ｒ^１はハロゲン原子、又は置換されていてもよい一価の有機基を表す。ａは、１～５の整数を表す。Ｒ^１が複数ある場合、それらはそれぞれ独立である。すなわち、Ｒ^１は全て同一でも異なってもよい。ただし、上記式（ＹＩ）で示される構造には、少なくとも１つ以上のヨウ素原子が含まれる。なお、＊は、隣接する原子との結合手を表す。

Ｒ^１において、一価の有機基とは、例えば、炭素原子数１～１０の一価の基である。一価の有機基は、基本的にどのようなものであってもよいが、例えば、アルキル基、アルコキシ基、フェニル基、フェノキシ基、アミノ基、イミノ基、チオアルキル基、アリル基等を挙げることができる。これらの基は、置換基により置換されていてもよい。

本明細書において、「置換されていてもよい」とは、当該基を構成する置換可能な水素原子が置換されていない場合と置換されている場合の双方を含む。置換可能な水素原子が置換されていない場合とは、置換可能な水素原子が全て水素原子であることを意味する。一方、置換可能な水素原子が置換されている場合とは、置換可能な水素原子が、水素原子以外の置換基に置換されていることを意味する。置換基の例としては、例えば、ハロゲン、ヒドロキシ基、アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、アセチル基、シクロアルキル基、ハロゲン化アルキル基、ハロアルキル基、ヒドロキシアルキル基、アルコキシ基、ハロアルコキシ基、アミノ基、ニトロ基、シアノ基、カルボキシル基等が挙げられるが、これらに限定されない。置換基が複数であってもよい。置換基が複数ある場合には、それらの置換基は同一であっても異なっていてもよい。

ある好適な一態様において、上記式（Ｉ）中のＹは、下記式（ＹＩＩ）で表される基である。

上記式（ＹＩＩ）中、Ｒ^２はヨウ素原子を表し、Ｒ^３は、置換されていてもよい一価のアルキル基又は置換されていてもよい一価のハロゲン化アルキル基を表す。ｂは１～４の整数を表す。＊は、隣接する原子との結合手を表す。

Ｒ^２において、一価のアルキル基とは、例えば、炭素原子数１～１０の一価のアルキル基であり、より好ましくは炭素原子数１～８、さらに好ましくは炭素原子数１～５、よりさらに好ましくは炭素原子数１～２の一価のアルキル基である。

一方、Ｒ^３において、一価のハロゲン化アルキル基とは、例えば、炭素原子数１～１０の一価のハロゲン化アルキル基であり、より好ましくは炭素原子数１～８、さらに好ましくは炭素原子数１～５、よりさらに好ましくは炭素原子数１～２の一価のハロゲン化アルキル基である。アルキル基及びハロゲン化アルキル基は直鎖状であっても分岐構造を有するものであってもよい。ここで、ハロゲン化アルキル基とは、アルキル基に含まれる１つ以上の水素原子がハロゲン原子に置換された基をいう。ハロゲン原子としては、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子、及びアンチモン原子が挙げられる。なお、炭素原子数１～１０のアルキル基中の１つの水素原子がハロゲン原子に置換されたハロゲン化アルキル基としては、例えば、フルオロメチル基、２－フルオロエチル基、３－フルオロプロピル基、クロロメチル基、２－クロロエチル基、３－クロロプロピル基、ブロモメチル基、２－ブロモメチル基、３－ブロモプロピル基が挙げられるが、これらに限定されない。一方、炭素原子数１～１０のアルキル基中の２つ以上の水素原子がハロゲン原子に置換されたハロゲン化アルキル基としては、ジフルオロメチル基、トリフルオロメチル基、テトラフルオロエチル基、ペンタフルオロエチル基、ジクロロメチル基、トリクロロメチル基、テトラクロロエチル基、ペンタクロロエチル基などが挙げられるが、これらに限定されない。

本発明に係る化合物又はその塩のＸ線ＣＴ又は蛍光Ｘ線ＣＴにおける造影能を高めるという観点及び／又は本発明に係る化合物又はその塩の脂溶性を高め細胞膜の透過性を向上させるという観点からは、上記式（ＹＩＩ）で表される基は、２つ以上のヨウ素原子を含有する基であることが好ましく、下記式（ＹＩＩＩ）で表される基であることが特に好ましい。なお、下記式（ＹＩＩＩ）中、Ｒ^３は、置換されていてもよい一価のアルキル基又は置換されていてもよい一価のハロゲン化アルキル基を表す。また、＊は、隣接する原子との結合手を表す。

また、ある好適な一態様において、上記式（ＹＩＩＩ）におけるハロゲン化アルキル基は２－フルオロエチル基である。換言すれば、ある好適な一態様において、式（Ｉ）におけるＹは下記式（ＹＩＶ）で表される基である。後述する実験例に示すとおり、下記式（ＹＩＶ）で表される基を含むホウ素含有化合物を用いることにより、細胞内ホウ素濃度を飛躍的に高めることができる。

また、本発明の化合物はＸとＹとの間に、リンカーＬを有している。本明細書において「リンカー」とは、ホウ素を含有する基であるＸとヨウ素を含有する基であるＹとを連結する基であり、このような役割を果たすことができる基であれば、基本的にどのようなものであってもよい。例えば、炭素原子、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれる１又は複数の原子から構成される基本骨格を有する二価の基であり得る。より好ましくは、炭素原子、酸素原子、硫黄原子及び窒素原子から選ばれる２種以上の原子から構成される複素環を有する二価の基であり得る。

より具体的には、Ｌは、例えば、－Ｏ－、－Ｓ－、－ＮＨ－、－ＣＯ－、－ＣＨ_２－、－ＣＨ_２Ｏ－、－ＯＣＨ_２－、－（ＣＨ_２Ｏ）_ｎ－、－ＮＨＣＯ－、－ＣＯＮＨ－、－ＯＣＯ－、－ＣＯＯ－、－ＳＣＯ－、－ＣＯＳ－、－ＮＨＣＯＮＨ－、－ＮＨＣＯＯ－、－ＳＣＨ_２ＣＯＮＨ－、－ＳＣＨ_２ＣＯＯ－、－Ｐｈ－、－ＯＰｈ－、－ＰｈＯ－、－ＳＰｈ－、－ＰｈＳ－、－ＮＨＰｈ－、－ＰｈＮＨ－、－複素環－、－Ｏ－複素環－、－複素環－Ｏ－、－Ｏ－複素環－Ｏ－、－Ｓ－複素環－、－複素環－Ｓ－、－Ｓ－複素環－Ｓ－、－ＮＨ－複素環－、－複素環－ＮＨ－、－ＮＨ－複素環－ＮＨ－、－Ｓ－複素環－Ｏ－、－Ｓ－複素環－ＮＨ－、－Ｏ－複素環－Ｓ－、－Ｏ－複素環－ＮＨ－、－ＮＨ－複素環－Ｓ－、－ＮＨ－複素環－Ｏ－などであり得るが、これらに限定されない。なお、上記式においてＰｈは、１，２－フェニレン、１，３－フェニレン又は１，４－フェニレンを表す。

前述したとおり、ある好適な一態様において、式（Ｉ）におけるＸはホウ素クラスターからなる一価の基であり、このような基を与える典型的な物質としては、ｄｏｄｅｃａｂｏｒａｔｅ（［Ｂ_１２Ｈ_１２］^２－）の誘導体であって、チオール基を有するＢＳＨ（［Ｂ_１２Ｈ_１１ＳＨ］^２－）、化合物２）が知られている。したがって、ある好適な一態様において、式（Ｉ）におけるＬは、チオール基とチオール反応性の官能基に由来する基である。このような基としては、チオエーテルを含む基、チオエステルを含む基、又はジスルフィドを含む基が含まれる。より具体的には、例えば、下記式（ＬＩ）に記載されるようなチオエーテルを含む基が挙げられるが、これに限定されない。

以上説明したＸ、Ｙ、Ｌを有する式（Ｉ）で表される化合物の具体例としては、例えば、後述する実験例に示す化合物３ａ乃至化合物３ｃが例示されるが、これらに限定されない。

本発明の化合物の塩の種類に特段の制限はなく、例えば、ナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、カルシウム塩、マグネシウム塩等のアルカリ土類金属塩、アルミニウム塩などの金属塩であってもよく、アンモニウム塩、テトラメチルアンモニウム塩、テトラブチルアンモニウム塩などのアンモニウム塩であってもよく、また、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチレンジアミンなどの有機塩基との塩であってもよい。しかしながら、これらに限定されず、薬学的に許容される塩であれば基本的にどのようなものであってもよい。

本発明に係る化合物又はその塩を含む組成物は、医薬組成物、特に、ホウ素中性子捕捉療法用の医薬組成物として提供され得る。したがって、本発明は、他の一側面において、医薬組成物、特に、ホウ素中性子捕捉療法用の医薬組成物を製造するための本発明に係る化合物又はその塩の使用をも包含する。

本発明に係る化合物又はその塩、及びそれらを含有する医薬組成物は、特に、腫瘍疾患の治療に好適に用いられる。本発明に係る医薬組成物が用いられるホウ素中性子捕捉療法が適用される腫瘍疾患の種類に特段の制限はないが、例えば、脳腫瘍（髄膜腫、神経膠腫、下垂体腫瘍、聴神経腫瘍、多型性膠芽腫など）、悪性黒色腫、頭頸部癌、肺癌、肝臓癌、甲状腺癌、腎臓癌、前立腺癌、乳癌、膵臓癌、大腸癌、膀胱癌、髄膜腫、中皮腫、肉腫、胃癌、卵巣癌、子宮癌、子宮頸癌、咽頭癌、喉頭癌などを含む固形癌が含まれる。

本発明に係る化合物又はその塩、及びそれらを含有する医薬組成物の投与方法に特段の制限はなく、適用対象に応じて適宜の投与方法を選択すれば良い。例えば、経口投与、舌下投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与、腫瘍内投与を含む局所投与、点滴投与等が例示されるが、これらに限定されない。

本発明に係る医薬組成物の剤型は特に限定されず、適用対象や投与方法に応じて適宜の剤型とすればよい。例えば、注射剤、錠剤、散剤、顆粒剤、シロップ剤、カプセル剤などの剤型とすることができるが、これらに限定されない。また、用時調整型の製剤としてもよい。本発明に係る医薬組成物は、その剤型や投与方法に応じて、さらに、薬学的に許容される賦形剤、溶媒、結合剤、安定化剤、分散剤等を含んでいてもよいことは言うまでもない。

また、本発明に係る医薬組成物は、さらに、薬物送達剤を含んでいてもよい。ここで、薬物送達剤とは、それを含む医薬組成物の有効成分である化合物又はその塩の薬物動態、より具体的には、血中滞留性、標的組織への分布、又は標的細胞への透過性を、薬物送達剤を含有しない場合と比較して高めることができる化学物質をいう。本発明に係る医薬組成物に配合される薬物送達剤の種類に特段の制限はないが、例えば、脂質、ビタミン、糖質、タンパク質、抗体、ペプチド、ペプチド模倣体、核酸、核酸模倣体、ポリアミン、合成又は天然のポリマー又はオリゴマー、微粒子、並びにそれらの組み合わせが挙げられる。ホウ素含有化合物に用いられる薬物送達剤に関しては、例えば、「福田寛著「ホウ素化合物を用いる癌の中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）、東北薬科大学研究誌、６２、１－１１（２０１５）」「中村浩之著「ホウ素中性子捕捉療法：がん細胞内でα線を発生させる次世代放射線治療、ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍ３５－２、２０２０」「ＭｉｃｈｉｕｅＨ，ｅｔａｌ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，３３０，７８８－７９６（２０２１）」などに記載されている。

ある好適な一態様において、本発明に係る医薬組成物が含有する薬物送達剤は、細胞透過性ペプチドである。細胞透過性ペプチドは、細胞、特に、ヒト細胞の細胞膜を透過する性質を有するペプチドである。

ある好適な一態様において、本発明に係る医薬組成物が含有する細胞透過性ペプチドは、疎水性アミノ酸残基と塩基性アミノ酸残基を含むペプチドであり得る。疎水性アミノ酸残基と塩基性アミノ酸残基を含むペプチドとしては、例えば、特許文献１や非特許文献２に記載されているＡＡＡＡＡＡＫ（本明細書において、「Ａ６Ｋ」ということもある。なお、ＡはＬ－アラニン、ＫはＬ－リジンを表す。）及びＡＡＡＡＡＡＲ（本明細書において、「Ａ６Ｒ」ということもある。なお、ＡはＬ－アラニン、ＲはＬ－アルギニンを表す。）を用いることができる。後述する実験例に示すとおり、本発明に係る化合物又はその塩と、疎水性アミノ酸残基と塩基性アミノ酸残基を含む細胞透過性ペプチドを併用することにより、細胞内ホウ素濃度を飛躍的に高めることができる。前記併用に際し、本発明に係る化合物又はその塩と、疎水性アミノ酸残基と塩基性アミノ酸残基を含む細胞透透過性ペプチドとの割合は適宜、設定できるが、通常、モル比で、２０：１～１：１０、好適には１０：１～１：１、より好適には５：１～１：１の範囲を例示できる。なお、ここで、「～」で示す数値範囲は上限と下限を含む数値範囲を意味する。

本発明に係る化合物又はその塩、並びにそれらを含有する医薬組成物は、ホウ素中性子捕捉療法に好適に用いられる。したがって、本発明は、他の一側面において、本発明に係る化合物又はその塩を含む医薬組成物を患者に投与する工程を含む、腫瘍疾患の治療方法をも包含するものである。本発明に係る腫瘍疾患の治療方法が適用される前記患者は、腫瘍疾患を患うヒト又はヒトを除く動物であり得る。

本発明に係る腫瘍疾患の治療方法は、例えば、本発明に係る化合物又はその塩を含む医薬組成物を、腫瘍疾患を患う患者に投与した後、熱中性子線または熱外中性子線などの低エネルギー中性子線を前記患者に照射することにより行われる。このように、本発明に係る腫瘍疾患の治療方法は、ある好適な一態様において、本発明に係る化合物又はその塩を患者に投与する工程、及び、中性子線を前記患者に照射する工程を含む、腫瘍疾患の治療方法であり得る。

熱中性子線または熱外中性子線などの低エネルギー中性子線の照射は、本発明の化合物又はその塩が治療すべき部位に到達した後に行うことが好ましく、例えば、本発明の化合物又はその塩を投与して、所定の時間が経過した後に行うことができる。しかしながら、本発明の化合物又はその塩は、必ずしも低エネルギー中性子線の照射に先立って投与される必要はなく、低エネルギー中性子線の照射中に投与してもよいし、本発明の化合物又はその塩を投与しながら低エネルギー中性子線を照射してもよい。なお、後述するとおり、本発明の化合物又はその塩の治療すべき部位への集積の程度は、ヨウ素原子濃度をＸ線ＣＴや蛍光Ｘ線ＣＴなどで測定することにより把握することができる。

低エネルギー中性子線の照射方法にも特段の制限はなく、治療対象となる腫瘍の種類、治療すべき部位の位置などに応じて、適宜の手法で照射を行えばよい。例えば、治療対象となる腫瘍が皮膚癌など表面に露出している場合には、直接、その部位に低エネルギー中性子線を照射すればよい。一方、治療対象となる腫瘍が表面に露出していない場合には、皮膚を通して低エネルギー中性子線を照射してもよいし、その部位を完全に又は部分的に露出させて低エネルギー中性子線を照射してもよい。なお、照射される低エネルギー中性子線の種類に特段の制限はないが、例えば、深部に位置する腫瘍を治療するにあたっては、低エネルギー中性子線として、生体内で熱中性子に変わる熱外中性子線が好適に用いられ、特に、エネルギー範囲０．６～４０ｋeＶ程度の熱外中性子線が好適に用いられる。

また、中性子線の照射回数は１回であっても複数回であってもよく、治療対象となる腫瘍疾患の部位や状態に応じて、或いは、対象者の年齢、性別、治療期間などを勘案し、医療従事者が適宜の回数を選択すればよい。

中性子線の発生源は特に限定されず、原子炉を用いてもよいし、サイクロトロン、線形加速器、静電加速器などの加速器を用いてもよいし、それらを組み合わせて用いてもよい。

また、本発明に係る腫瘍疾患の治療方法は、単独の治療として行われてもよいし、外科手術及び／又は化学療法と併用してもよい。

一方、ホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩は、ホウ素に加えて、Ｘ線ＣＴにおける造影剤として機能するヨウ素を含有するため、ホウ素の腫瘍への蓄積量又は分布状態を、ホウ素よりも測定が容易であるヨウ素の腫瘍への蓄積量又は分布状態を測定し、得られたヨウ素濃度をホウ素濃度に換算することによって把握することができる。このように、本発明は、ある他の一側面において、ホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩を患者に投与する工程、前記患者の腫瘍におけるヨウ素濃度を測定する工程、測定された前記ヨウ素濃度に基づいて前記患者の腫瘍におけるホウ素濃度を推定する工程を含む、腫瘍におけるホウ素濃度の定量方法を提供するものである。ホウ素とヨウ素を含有する上記化合物は、上記［１］～［８］に示したような本発明に係る化合物又はその塩であり得る。また、前記患者は、ヒト又はヒト以外の動物であり得る。腫瘍の種類、化合物の投与方法等については、既に本発明に係る腫瘍疾患の治療方法について述べたと同様である。

本発明に係る腫瘍疾患の治療方法は、上記ホウ素濃度の定量方法を含んでいてもよいことは言うまでもない。すなわち、本発明に係る腫瘍疾患の治療方法は、ある好適な一態様において、本発明に係る化合物又はその塩を患者に投与する工程、前記患者の腫瘍におけるヨウ素濃度を測定する工程、測定された前記ヨウ素濃度に基づいて前記患者の腫瘍におけるホウ素濃度を推定する工程、及び、推定された前記ホウ素濃度に基づいて前記患者に中性子線を照射する工程を含む、腫瘍疾患の治療方法であり得る。推定されたホウ素濃度に基づいて前記患者に中性子線を照射するとは、患者に照射される中性子線の種類、強度、照射時間、回数、照射方向など中性子線の照射条件を、推定されたホウ素濃度に基づいて設定し、設定された照射条件に従って中性子線を患者に照射することを意味する。

ヨウ素濃度を測定する方法はどのようなものであってもよいが、例えば、Ｘ線ＣＴを用いることができる。また、Ｘ線ＣＴに限らず、蛍光Ｘ線ＣＴにより行ってもよい。蛍光Ｘ線ＣＴによれば、腫瘍組織をはじめとする生体内におけるヨウ素の分布を、より優れた空間分解能で画像化及び／又は定量評価することができる。

適宜の方法により測定された細胞内ヨウ素濃度は、例えば、以下に示す式に従って細胞内ホウ素濃度に換算することができる。なお、以下の式において「１分子当たりのヨウ素原子数」は、患者に投与されるホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩の１分子当たりに含まれるヨウ素原子の数を意味し、「１分子当たりのホウ素原子数」は、患者に投与されるホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩の１分子当たりに含まれるヨウ素原子の数を意味する。

このように本発明に係る化合物又はその塩を用いれば、従来測定が困難であった生体内におけるホウ素濃度を、ホウ素濃度よりも測定が容易なヨウ素濃度の測定値に基づいて精度よく把握することが可能となる。したがって、患者に投与するホウ素含有化合物の投与量、患者に照射する中性子線の線量等の照射条件をより適切に設定することができ、これによりホウ素中性子捕捉療法の治療効果の向上、副作用の低減が期待できる。

なお、本発明に係る化合物又はその塩が含有するヨウ素原子はヨウ素１２３（^１２３Ｉ）であってもよく、本発明に係る化合物又はその塩が、^１２３Ｉを含有する場合には、ヨウ素或いは本発明に係る化合物又はその塩の腫瘍組織への蓄積量をＳＰＥＣＴ（ＳｉｎｇｌｅＰｈｏｔｏｎＥｍｉｓｓｉｏｎＣｏｍｐｕｔｅｄＴｏｍｏｇｒａｐｈｙ）を用いて測定、可視化してもよい。

また、本発明に係る化合物又はその塩が、フッ素を含む化合物又はその塩である場合には、そのフッ素原子は^１８Ｆであってもよい。本発明に係る化合物又はその塩が^１８Ｆを含む場合には、ＰＥＴ（ＰｏｓｉｔｒｏｎＥｍｉｓｓｉｏｎＴｏｍｏｇｒａｐｈｙ）によって、本発明に係る化合物又はその塩の腫瘍組織への蓄積量を測定してもよい。

本明細書において引用されたすべての文献の開示内容は、全体として明細書に参照により組み込まれる。また、本明細書全体において、単数形の「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」の単語が含まれる場合、文脈から明らかにそうでないことが示されていない限り、単数のみならず複数のものを含むものとする。

以下、具体例を参照しながら本発明をさらに具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの具体例に限定されない。

（実験１）化合物の合成

（実験１－０）方法及び機器の説明
以下に示す合成反応において、全ての反応の進行状況は、０．２ｍｍ厚のＴＬＣプレート（Ｍｅｒｃｋ社製；ガラスバック、製品名「ＴＬＣガラスプレートシリカゲル６０Ｆ_２５４」）を用いてモニターした。
フラッシュカラムクロマトグラフィーにはシリカゲル６０（粒子径０．０３５－０．０７０ｍｍ）を用いた。
^１ＨＮＭＲおよび^１３ＣＮＭＲスペクトルは、ＶａｒｉａｎＶＸＲ－４００分光器（^１Ｈ４００ＭＨｚ，^１３Ｃ１００ＭＨｚ）を用いて，室温にて測定した。ＮＭＲ溶媒としては、後述するとおり、重水素化クロロホルム（ＣＤＣｌ_３）、メタノール－ｄ_４（ＣＤ_３ＯＤ）、又はアセトニトリル－ｄ_３（ＣＤ_３ＣＮ）を使用した。また、ケミカルシフトは、重水素化溶媒のピーク（ＣＤＣｌ_３：^１Ｈ δ ７．２６ｐｐｍ，^１３Ｃ δ ７７．１１ｐｐｍ，ＣＤ_３ＯＤ： ^１Ｈ δ ３．３１ｐｐｍ，^１３Ｃ δ ４９．００ｐｐｍ，ＣＤ_３ＣＮ：^１Ｈ δ １．９４ｐｐｍ，^１３Ｃ δ １．３２および１１８．２６ｐｐｍ）に対する相対的なｐｐｍで示した。カップリング定数の単位はＨｚである。
融点は柳本製作所のホットステージ式融点測定装置で測定し、無補正で表示した。

また、各工程において合成した化合物の純度は、分析用ＨＰＬＣにて確認した。本実験で使用したＨＰＬＣシステムは、ＬＣ－２０ＡＴポンプ、ＳＰＤ－２０Ａ紫外可視分光光度計、ＣＴＯ－１０ＡＳｖｐカラムオーブン、およびＬａｂＳｏｌｕｔｉｏｎｓソフトウェアから構成される株式会社島津製作所製の液体クロマトグラフィーシステムである。サンプル（各２０μＬ）は、リン酸緩衝液（ｐＨ２）を移動相とし、４０℃でガードカラムを備えたＩｎｅｒｔｓｉｌＯＤＳ－３カラム（４．６ｉ.ｄ.×１００ｍｍ，３μｍ，ＧＬＳｃｉｅｎｃｅｓ）に注入した。流速は０．７ｍＬ/ｍｉｎで、２３０ｎｍの吸光度をモニターした。溶媒はすべて分析グレードのものを精製することなく使用した。ＨＰＬＣで確認したところ、試験したすべての化合物の純度は９５％以上であった。

（実験１－１）２，６－ジイオド－４－ニトロフェノール（化合物５）の合成

２，６－ジイオド－４－ニトロフェノール（化合物５）の合成は、ＴｈｏｍａｓＭ．Ｂｅａｌｅｅｔａｌ．ＡＣＳ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１２, ３, １７７－１８１．に記載の方法に従って行った。すなわち、亜塩素酸ナトリウム（約８０％、１．６ｇ、１４ｍｍｏｌ）とヨウ化ナトリウム（４．３ｇ、２９ｍｍｏｌ）をＨ_２Ｏ（１００ｍＬ）に溶解し，氷浴上で溶液を冷却した（当該溶液を「溶液Ａ」という。）。次に、４－ニトロフェノール（１．０ｇ、７．１９ｍｍｏｌ、化合物４）をメタノール（１００ｍＬ）に溶解し、氷浴上で冷却した（当該溶液を「溶液Ｂ」という。）。溶液Ａに、溶液Ｂと濃縮塩酸（１．３４ｍＬ）を、アルゴン雰囲気下、氷浴上で加えた後、反応混合物を室温で２４時間撹拌した。反応混合物をｐＨ３に調整し、酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を回収し、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３飽和水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。さらに、有機層をＨ_２Ｏ（５０ｍＬ×２）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、減圧下で溶媒留去した。その後、酢酸エチルより再結晶を行い、化合物５（２．５７ｇ、７．０６ｍｍｏｌ、収率９８％）を黄色の固体として得た。また、酢酸エチルより再結晶を施すことで、化合物５の黄色針状晶を得た。得られた化合物５の^１ＨＮＭＲ測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ） δ：８．６０（２Ｈ，ｓ），６．３８（１Ｈ，ｓ）。

（実験１－２）１，３－ジイオド－２－メトキシ－５－ニトロベンゼン（化合物６ａ）の合成

１，３－ジイオド－２－メトキシ－５－ニトロベンゼン（化合物６ａ）の合成は、ＴｈｏｍａｓＭ．Ｂｅａｌｅｅｔａｌ．ＡＣＳ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．２０１２, ３, １７７－１８１．に記載の方法に従って行った。すなわち、２，６－ジイオド－４－ニトロフェノール（化合物５）（１．３５ｇ，３．４６ｍｍｏｌ）をアセトン（２０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（１．４３ｇ，１０．４ｍｍｏｌ）および硫酸ジメチル（０．９８ｍＬ，１０．４ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を１９時間還流させた。氷浴上の反応混合物にアンモニア水（２８％ｉｎｗａｔｅｒ，１０ｍＬ）を加え、１０分間撹拌した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を回収し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒留去し、化合物６ａ（１．２６ｇ，３．１２ｍｍｏｌ，収率９１％）を白色固体として得た。得られた化合物６ａの^１ＨＮＭＲ測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ） δ：８．６４（２Ｈ，ｓ），３．９４（３Ｈ，ｓ）。

（実験１－３）１，３－ジイオド－２－エトキシ－５－ニトロベンゼン（化合物６ｂ）の合成

１，３－ジイオド－２－エトキシ－５－ニトロベンゼンの合成は、上述した化合物６aの合成方法に準じて行った。すなわち、化合物5（５８６ｍｇ，１．５０ｍｍｏｌ）をアセトン（１０ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（６２２ｍｇ，４．５０ｍｍｏｌ）および硫酸ジエチル（５８８ μＬ，４．５０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を１８時間還流した。氷浴上の反応混合物にアンモニア水（２８％ｉｎｗａｔｅｒ，１０ｍＬ）を加え、１０分間撹拌した。反応混合物をＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を回収し、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒留去し固体を６５８ｍｇ得た。この固体をＥｔＯＡｃ／ｎ－Ｈｅｘａｎｅ＝１／２０の溶離液を用いたクロマトグラフィーで精製し、化合物６ｂ（５３４ｍｇ，１．２７ｍｍｏｌ，収率８５％）を黄色の固体として得た。得られた化合物６ｂの^１ＨＮＭＲ測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ） δ：８．６４（２Ｈ，ｓ），４．１３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）, １．５８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。

（実験１－４）４－アミノ－２，６－ジイオドフェノール（化合物７）の合成

４－アミノ－２，６－ジイオドフェノール（化合物７）の合成は、２，６－ジイオド－４－ニトロフェノール（化合物５）のニトロ基の還元反応により行った。すなわち、化合物5（１．１７ｇ，３．００ｍｍｏｌ）をエタノール（１５ｍＬ）と酢酸エチル（１５ｍＬ）の混合溶液に溶解し、次いで塩化スズ（ＩＩ）（２．８４ｇ，１５．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７０℃で１８時間撹拌した。反応混合物にＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）を加え、セライトでろ過した。濾液を酢酸エチル（５０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を回収し、ブライン（４０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒留去し、酢酸エチルより再結晶を行うことで、化合物７（８８３ｇ，２．４５ｍｍｏｌ，収率８２％）を黄色の固体として得た。得られた化合物７の^１ＨＮＭＲ測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３、４００ＭＨｚ） δ：７．１５（２Ｈ，ｓ）。

（実験１－５）１，３－ジイオド－２－メトキシ－５－アミノベンゼン（化合物８ａ）の合成

１，３－ジイオド－２－メトキシ－５－アミノベンゼン（化合物８ａ）の合成は、１，３－ジイオド－２－メトキシ－５－ニトロベンゼン（化合物６ａ）のニトロ基の還元反応により行った。化合物６ａ（８０２ｍｇ，１．９９ｍｍｏｌ）をエタノール（１０ｍＬ）と酢酸エチル（１０ｍＬ）の混合溶液に溶解し、次いで塩化スズ（ＩＩ）（１．８８６ｇ，９．９５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７０℃で６．５時間撹拌した。反応混合物にＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（２０ｍＬ）を加え、セライトでろ過した。濾液を酢酸エチル（４０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を回収し、ブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒留去し、酢酸エチルより再結晶を行うことで、化合物８ａ（７５６ｍｇ，１．９９ｍｍｏｌ，ｑ.ｙ.）を固体として得た。得られた化合物８ａは、そのまま、次の工程に用いた。

（実験１－６）１，３－ジイオド－２－エトキシ－５－アミノベンゼン（化合物８ｂ）の合成

１，３－ジイオド－２－エトキシ－５－アミノベンゼン（化合物８ｂ）の合成は、１，３－ジイオド－２－エトキシ－５－ニトロベンゼン（化合物６ｂ）のニトロ基の還元反応により行った。すなわち、化合物６ｂ（４１９ｍｇ，１．０ｍｍｏｌ）をエタノール（５ｍＬ）と酢酸エチル（５ｍＬ）の混合溶液に溶解し、次いで塩化スズ（ＩＩ）（９４８ｍｇ，５．０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を７０℃で２．５時間撹拌した。反応混合物にＮａＨＣＯ_３飽和水溶液（１０ｍＬ）を加え、セライトでろ過した。濾液を酢酸エチル（４０ｍＬ×２）で抽出した。有機層を回収し、ブライン（５０ｍＬ×２）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒留去し、酢酸エチルより再結晶を行うことで、化合物８ｂ（３７６ｍｇ，０．９７ｍｍｏｌ，収率９７％）を固体として得た。得られた化合物８ｂは、そのまま、次の工程に用いた。

（実験１－７）２－（２－フルオロエトキシ）－１，３－ジイオド－５－アミノベンゼン（化合物８ｃ）の合成

化合物７（３１０ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ）をアセトン（９ｍＬ）に溶解し、炭酸カリウム（２３８ｍｇ、１．７２ｍｍｏｌ）と１－フルオロ－２－ヨードエタン（８３ μＬ、１．０３ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で21時間撹拌した。水（５０ｍＬ）を反応混合物に注ぎ、酢酸エチル（４０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を回収し、水（３０ｍＬ×２）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で溶媒留去し、化合物８ｃ（３０６ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ、収率８７％）を緑色の固体として得た。得られた化合物８ｃの^１ＨＮＭＲ及び^１３ＣＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，４００ＭＨｚ） δ：７．１４（２Ｈ,ｓ），４．７７（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４７．６，４．０Ｈｚ），４．１２（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４７．６，４．０Ｈｚ)；^１３ＣＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ，１００ＭＨｚ） δ：１４８．３６，１４７．２８，１２５．１３，８９．４８，８３．０６，８１．３７，７１．９７，７１．７７。

（実験１－８）１－（３，５－ジイオド－４－メトキシフェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（化合物９ａ）の合成

１－（３，５－ジイオド－４－メトキシフェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（化合物９ａ）の合成は、ＨｏｎｇｊｕａｎＴｏｎｇｅｔａｌ．Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｏｎ．，２０１７，５３，３５８３－３５８６．に記載されている手法にしたがって行った。まず、化合物８ａ（７８１ｍｇ，２．００ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（２５ｍＬ）に、無水マレイン酸（２３５ｍｇ，２．４０ｍｍｏｌ）を加えた。この反応混合物を３０℃で６．５時間撹拌した後、減圧下で溶媒留去した。ついで、酢酸ナトリウム（１９７ｍｇ，２．４０ｍｍｏｌ）と無水酢酸（２５ｍＬ）を加え、アルゴン雰囲気下、７５℃で１５時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、析出した固体を回収した。この固体をＥｔＯＡｃ／ｎ－Ｈｅｘａｎｅ=１／５の溶離液を用いたクロマトグラフィーで精製し、酢酸エチルより再結晶することで、化合物９ａ（６３４ｍｇ，１．３９ｍｍｏｌ，収率７０％）を黄色固体として得た。得られた化合物９ａの^１ＨＮＭＲ及び^１３ＣＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ） δ：７．７８（２Ｈ，ｓ），６．８６（２Ｈ，ｓ），３．８８（３Ｈ，ｓ）；^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ） δ：１６８．８８，１５８．７４，１３７．１２，１３４．４７，１２９．１８，８９．９４，６０．９２。

（実験１－９）１－（３，５－ジイオド－４－エトキシフェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（化合物９ｂ）の合成

１－（３，５－ジイオド－４－エトキシフェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオンは、上述した化合物９aの合成方法に準じて合成した。すなわち、無水マレイン酸（１１４ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）を、化合物８ｂ（３７６ｍｇ、０．９７ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（１０ｍＬ）に加えた。この反応混合物を室温で１４時間撹拌した後、減圧下で溶媒留去した。ついで、酢酸ナトリウム（９６ｍｇ、１．１７ｍｍｏｌ）と無水酢酸（１０ｍＬ）を加えた。アルゴン雰囲気下、７５℃で２４時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、析出した固体を回収して、化合物９ｂ（３１８ｍｇ，０．６８ｍｍｏｌ，収率：７０％）を白色固体として得た。得られた化合物９ｂの^１ＨＮＭＲ及び^１３ＣＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ） δ：７．７７（２Ｈ，ｓ），６．８６（２Ｈ，ｓ），４．０６（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．５４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，１００ＭＨｚ） δ：１６８．７５，１５７．８６，１３６．９０，１３４．２９，１２８．７６，９０．２４，６９．４８, １５．４７。

（実験１－１０）１－（４－（２－フルオロエトキシ）－３，５－ジイオドフェニル）－１Ｈ－ピロール－２，５－ジオン（化合物９ｃ）の合成

無水マレイン酸（０．１１ｇ，１．１７ｍｍｏｌ）を、化合物８ｃ（２９３ｍｇ，０．７２ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（８ｍＬ）に加えた。この反応混合物を室温で１６時間撹拌し後、減圧下で溶媒留去し、緑色の固形物を３８９ｍｇで得た。ついで、酢酸ナトリウム（７０ｍｇ，０．８６ｍｍｏｌ）と無水酢酸（８ｍＬ）を加えた。アルゴン雰囲気下、７５℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、析出した固体を回収して、化合物９ｃ（２４１ｍｇ，０．４９５ｍｍｏｌ，収率６９％）を白色固体として得た。得られた化合物９ｃの^１ＨＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３，４００ＭＨｚ）δ：７．８１（２Ｈ，ｓ），６．８７（２Ｈ，ｓ），４．８８（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．０，４．７Ｈｚ），４．２８（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４．０，４．７Ｈｚ）。

（実験１－１１）化合物３a（ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＭｅ）の合成

化合物９ａ（４５５ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１０ｍＬ）とアセトニトリル（１０ｍＬ）に溶解し、硫酸マグネシウム（１０ｍｇ）、次にｎ－ＢＳＨ（２２０ｍｇ，１．００ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃で７２時間撹拌した。濾過後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ／ｎ－Ｈｅｘａｎｅ＝１／５の溶離液を用いたクロマトグラフィーで精製し、化合物３ａ（４３９ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ，収率６５％）を黄色固体として得た。得られた化合物３ａの^１ＨＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ，４００ＭＨｚ） δ：７．７８（２Ｈ，ｓ），３．９０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．０，４．０Ｈｚ），３．８５（３Ｈ，ｓ），３．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１９．０，８．６Ｈｚ），３．１１（１Ｈ,ｄｄ,Ｊ＝１９．０,４．０Ｈｚ），１．８０－０．５０（１１Ｈ，ｂｒ）。また、ＨＰＬＣで測定した化合物３ａの純度は９７％であった（ＨＰＬＣ測定条件：溶離液２０ｍＭｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ／Ｈ_２Ｏ＝５０／５０；カラム：ＯＤＳ－３；検出波長：２３０ｎｍ；温度：４０℃；保持時間２．５６６分)。

（実験１－１２）化合物３ｂ（ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥｔ）の合成

化合物９ｂ（３０５ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）をクロロホルム（５ｍＬ）とアセトニトリル（５ｍＬ）に溶解し、硫酸マグネシウム（１０ｍｇ）、次にｎ－ＢＳＨ（１４３ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃で３８時間撹拌した。濾過後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をＥｔＯＡｃ／ｎ－Ｈｅｘａｎｅ＝１／５の溶離液を用いたクロマトグラフィーで精製し、化合物３ｂ（２４０ｍｇ，０．３５ｍｍｏｌ，収率５４％）を白色固体として得た。また、ＥｔＯＨ／ＤＣＭより再結晶を施し、白色針状晶を得た。得られた化合物３ｂの^１ＨＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ，４００ＭＨｚ）δ：７．７５（２Ｈ,ｓ），４．０３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），３．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，４．０Ｈｚ），３．２５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．０，８．８Ｈｚ），３．０７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．０，４．０Ｈｚ），１．４６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．７０－０．５０（１１Ｈ，ｂｒ）。また、ＨＰＬＣで測定した化合物３ｂの純度は９６％であった（ＨＰＬＣ測定条件：溶離液１０ｍＭｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒ；カラム：ＯＤＳ－３；検出波長：２３０ｎｍ；温度：４０℃；保持時間８．８９３分)。また、得られた化合物３ｂの融点は２５２．１－２６３．５℃であった。

（実験１－１３）化合物３ｃ（ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥＦ）の合成

化合物９ｃ（２１３ｍｇ，０．４３６ｍｍｏｌ）をクロロホルム（４．３６ｍＬ）とアセトニトリル（４．３６ｍＬ）に溶解し、硫酸ナトリウム（３１０ｍｇ，２．１８ｍｍｏｌ）、ｎ－ＢＳＨ（９２ｍｇ，０．４３６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を６０℃で１７時間撹拌した。濾過後、溶媒を減圧下で除去し、残渣をＭｅＯＨ／ＤＣＭ＝１／８の溶離液を用いたクロマトグラフィーで精製し、化合物３ｃ（１１３ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ，収率：３７％）を白色固体として得た。得られた化合物３ｃの^１ＨＮＭＲの測定結果は次のとおりである：^１ＨＮＭＲ（ＣＤ_３ＣＮ，４００ＭＨｚ） δ：７．８０（２Ｈ，ｓ），４．８５（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝４７．０，４．０Ｈｚ），４．２７（２Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝３０．０，４．０Ｈｚ），３．９２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，４．０Ｈｚ），３．２７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１９．０，８．６Ｈｚ），３．１４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１９．０，４．０Ｈｚ），１．７０－０．５０（１１Ｈ，ｂｒ)。また、ＨＰＬＣで測定した化合物３ｂの純度は９５％であった（ＨＰＬＣ測定条件：溶離液アセトニトリル/過塩素酸ナトリウム(５０ｍＭ)バッファー＝６５／３５；カラム：ＯＤＳ－３；検出波長：２３０ｎｍ；温度：４０℃；保持時間１．４４６分)。

（実験２）細胞内取り込み濃度の測定

（実験２－１）ホウ素含有化合物を含むストック溶液Ａの調製
化合物３ｃ（ＢＳ－ＤＩＰ－ＯＥＦ（Ｆ．Ｗ．６９８．１６））を１４．０４ｍｇ、２ｍＬエッペンドルフチューブに量り取った。なお、化合物３ｃをはじめ、本実験で用いるホウ素含有化合物は吸湿性に富むことから、これらの化合物の秤量は、窒素雰囲気、湿度４０％以下に調整されたグローブボックス内にて行った。なお、グローブボックス内で化合物３ｃを秤量する前に、グローブボックス外の精密天秤にて予め空の２ｍＬエッペンドルフチューブの重さ（風袋）を測っておき、グローブボックス内で当該エッペンドルフチューブに化合物３ｃを量り取った。量り取った化合物３ｃを含むエッペンドルフチューブの重さを、グローブボックス外の精密天秤にて測り、秤量前後での重さの増加分を量り取った化合物３ｃの重さとした。

次いで、化合物３ｃを量り取った２ｍＬエッペンドルフチューブ中に、滅菌Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水を１００５．５ μＬ加えて、化合物３ｃの濃度が２０ｍＭの溶液を調製した。得られた溶液は、超音波水浴に１０分かけ、０．２ μｍの滅菌フィルターにより滅菌状態とした。Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水にて２倍に希釈し、化合物３ｃの濃度を１０ｍＭとしたものをストック溶液Ａとした。

化合物３ｃについて説明した上記手順にしたがって、化合物３ａ、３ｂ及びｎ－ＢＳＨについても同様に、濃度１０ｍＭのストック溶液Ａを調製した。

（実験２－２）細胞処置液の調製
従来のホウ素クラスターＢＳＨ（ｎ－ＢＳＨ）とホウ素含有化合物（化合物３ａ、３ｂ、３ｃ）の濃度が、１，０００ μＭ（１ｍＭ）となるようにストック溶液Ａ、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水、及びＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ－１６４０（シグマアルドリッチ、カタログ番号：Ｒ８７５８）、ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ１０％ｆｅｔａl ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ (ＦＢＳ)、０．５％ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ５０，０００Ｕ/Ｌ、ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ５０，０００ μｇ/Ｌ)）を混合し、細胞処置液１～４を調製した。細胞処置液の調製は、１５ｍＬ遠沈管に、ホウ素含有化合物を含むストック溶液Ａ、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水、及びＲＰＭＩ培地をこの順番で加えることにより行った。また、この際、ストック溶液Ａ及びＭｉｌｌｉ－Ｑ水を混合した後、３０℃を超えないように氷で冷却しながら超音波水浴に１０分間かけた後に、ＲＰＭＩ培地を加えた。各細胞処置液はそれぞれ４ｍＬずつ調製した。計４ｍＬの細胞処置液を調製するのに混合した各溶液の添加量は以下の表１に示すとおりである。

（実験２－３）細胞培養・化合物処置・細胞溶解液の調製
マウスメラノーマ細胞であるＢ１６／ＢＬ６細胞（理化学研究所より購入、細胞番号：ＲＣＢ２６３８）を、３５ｍｍディッシュ（Ｆａｌｃｏｎセルカルチャーディッシュ、製品番号：３５３００１）に細胞数が６０×１０^４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬとなるように播種し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で４８時間培養した。その後、各ディッシュから培地を１ｍＬずつ除去し、上で調製した細胞処置液１～４を１ｍＬ添加した。表１に示したとおり、細胞処置液２～４を添加したディッシュにおけるホウ素含有化合物の濃度は、およそ５００μＭ（０．５ｍＭ）である。５％ＣＯ_２、３７℃の条件で２時間インキュベートした後、ディッシュ中の培地を可能な限りアスピレーターで除去し、冷却した生理食塩水（１ｍＬ、株式会社大塚製薬製、以下同じ。）を用いて、常法に従って洗浄した。その後に、各ディッシュに冷却した生理食塩水１ｍＬを加え、スクレーパーを用いて各ディッシュから細胞を剥離し懸濁させた。このようにして得られた懸濁液から、１０μＬをとり、トリパンブルーにて２倍希釈し、血球計算盤を用いて細胞数をカウントした。一方、各ディッシュにつき、残りの懸濁液全量を２ｍＬエッペンドルフチューブに移し、４℃、１，８００ｒｐｍの条件で３ｍｉｎ遠心し、遠心後、上清を取り除いた。その後、ＲＩＰＡＢｕｆｆｅｒ（富士フィルム和光純薬株式会社、カタログ番号：１８２－０２４５１）を０．５ｍＬずつ加え、数回ピペッティングした。１０分間、氷上でインキュベートし、細胞を溶解し、細胞溶解液（ライセート）を得た。得られた細胞溶解液は４℃で保存した。また、得られた細胞溶解液のタンパク定量は、ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔ（タカラバイオ株式会社製）を用いて行なった。

細胞内ホウ素濃度及び細胞内ヨウ素濃度の測定は、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）により行った。具体的な手順は以下に示すとおりである。

まず、上述した手順で得た細胞溶解液の全量を０．５ｍＬシリンジに取り、シリンジフィルター（ＭｉｌｌｅｘＳｙｒｉｎｇｅＦｉｌｔｅｒ（０．２２ μｍ）、メルク株式会社製）を装着してろ過し、ろ過サンプルを１．５ｍＬエッペンドルフチューブに得た。得られたろ過サンプルのうち２０μＬを別のエッペンドルフチューブに取り分け、ここにＬＣＭＳ用展開溶媒１８０μＬを加え、１０倍希釈した。希釈したサンプルをオートサンプラー用サンプルカップに１００μＬ分注した。なお、展開溶媒の組成は次のとおりである：５ｍＭＤＨＡＡアセトニトリル溶液／５ｍＭＤＨＡＡＭｉｌｌｉ－Ｑ水溶液＝６５／３５；ＤＨＡＡ（Ｄｉｈｅｘｙｌａｍｍｏｎｉｕｍａｃｅｔａｔｅ、ＣＡＳＲＮ：３６６７９３－１７－１）は東京化成工業株式会社より購入したもの（製品コード：Ａ５７０５）を、アセトニトリルはメルク株式会社より購入したもの（製品コード：１１４２９１）を用いた。

一方、検量線用の化合物溶液として、化合物３ａ乃至３ｃを１０，０００、１，０００、１００、１０、１、０．１ｎＭを目安に展開溶媒に溶解し、各化合物について検量線用希釈系列を作製した。なお、各サンプルについて測定された化合物濃度が上記範囲内に収まらない場合は、その濃度が検量線用希釈系列の濃度範囲内に収まるように、追加の検量線用希釈系列を作製した。

ＬＣ－ＭＳシステムとしては、ＬＣ－２０ＡＤポンプ、ＳＰＤ－２０ＡＶＵＶ－Ｖｉｓ分光光度検出器、およびＣＴＯ－２０ＡＣカラムオーブン（株式会社島津製作所）で構成されるＡＰＩ４０００ＬＣ－ＭＳ／ＭＳシステム（ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍ社、トロント、オンタリオ州、カナダ）を用いた。なお、測定条件は次のとおりである：展開溶媒５ｍＭＤＨＡＡアセトニトリル溶液／５ｍＭＤＨＡＡＭｉｌｌｉ－Ｑ水溶液＝６５／３５；流速０．２ｍＬ／ｍｉｎ；ＵＶ２３０ｎｍ；オートサンプラー温度１５℃；カラムオーブン温度４０℃；カラムＴｏｓｏｈＯＤＳ－１００Ｖ、５ｃｍ。

各サンプルについて、得られた化合物３ａ乃至３ｃのピークと検量線に基づいて、細胞内化合物濃度を得た。得られた細胞内化合物濃度に基づいて、各サンプルにおける細胞内ホウ素濃度及び細胞内ヨウ素濃度を得た。

以上のようにして得られた各サンプルの細胞内ホウ素濃度の測定結果を図２に示す。なお、図２において、測定結果は、各サンプルについて独立した３回の試験から得られた値の平均値±標準偏差として示した。

図２に示すとおり、化合物３a（細胞処置液２）、化合物３ｂ（細胞処置液３）及び化合物３ｃ（細胞処置液４）はいずれも細胞内に取り込まれ、特に、化合物３aおよび化合物３ｂと比較して、フッ素を有する化合物３ｃが約４０ｐｐｍと顕著に高い細胞内ホウ素濃度を与えた。なお、ホウ素中性子捕捉療法（ＢＮＣＴ）においては２０乃至４０ｐｐｍ程度の細胞内ホウ素濃度が要求されるところ、ＢＳＨを単独で用いても、２０乃至４０ｐｐｍの細胞内ホウ素濃度は得られないことが報告されている（例えば、非特許文献２：ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，３３０，７８８－７９６（２０２１））。これに対して、フッ素を含有する化合物３ｃが、処置濃度５００μＭというＢＮＣＴ用ホウ素薬剤としては著しく低い濃度で使用した場合であっても、約４０ｐｐｍという高い細胞内ホウ素濃度を与えたことは驚くべき顕著な効果といえる。以上の結果から、化合物３ｃは、細胞内ホウ素濃度を高める、特に優れた作用を有していることが示された。

（実験３）細胞透過性ペプチドとの併用実験
以上のように化合物３ｃを用いることにより、化合物３ａ及び化合物３ｂ並びに従来のホウ素クラスターＢＳＨと比較して高い細胞内ホウ素濃度を達成することができた。そこで、化合物３ｃについて、化合物３ｃを単独で用いるだけでなく、ホウ素クラスターの細胞内取り込みを高める効果があることが報告されている細胞透過性ペプチドＡ６Ｋペプチド（例えば、特許掲載公報第６５４８０６０号、ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｏｎｔｒｏｌｌｅｄＲｅｌｅａｓｅ，３３０，７８８－７９６（２０２１））との併用について検討した。

（実験３－１）細胞透過性ペプチドＡ６Ｋを含むストック溶液Ｂの調製
Ａ６Ｋペプチド塩酸塩（Ａｃ－Ａ６－Ｋ－ＮＨ_２・ＨＣｌ、株式会社バイオロジカにて受託合成、ＦＷ＝６１３．７１＋３６．４６＝６５０．１７、ＡはＬ－アラニン、ＫはＬ－リジンを表す。）（８．９１２ｍｇ、０．００５ｍｍｏｌ）を２ｍＬエッペンドルフチューブに量り取った。なお、Ａ６Ｋペプチド塩酸塩は静電気が発生しやすいため、Ａ６Ｋペプチド塩酸塩を量り取る際は、薬包紙の上で量り取った。Ａ６Ｋ塩酸塩を量り取った２ｍＬエッペンドルフチューブ中に、クリーンベンチ内で滅菌Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水を１３７０．７２ μＬ加えて、濃度１０ｍＭの溶液とした。なお、Ａ６Ｋ塩酸塩を溶解する際は、超音波水浴を用いて、完全に溶解させるようにした。得られた溶液は、０．２μｍの滅菌フィルターにより滅菌状態とした。これは細菌などによるＡ６Ｋペプチドの分解を避けるためである。このようにして得られた溶液をストック溶液Ｂとした。ストック溶液Ｂは、４℃で保管し、使用前には再度超音波水浴にかけてから使用した。

（３－２）細胞処置液の調製
Ａ６Ｋペプチド／ホウ素含有化合物（化合物３ｃ）の濃度が、それぞれ０ μＭ／１，０００ μＭ、５０ μＭ／１，０００ μＭ、１００ μＭ／１，０００ μＭ、２００ μＭ／１，０００μ ｍＭとなるようにストック溶液Ａ、ストック溶液Ｂ、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水、及びＲＰＭＩ培地（ＲＰＭＩ－１６４０（シグマアルドリッチ、カタログ番号：Ｒ８７５８）、ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｅｄｗｉｔｈ１０％ｆｅｔａl ｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ (ＦＢＳ)、０．５％ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ５０，０００Ｕ/Ｌ、ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ５０，０００ μｇ/Ｌ)）を混合し、細胞処置液５～７を調製した。なお、細胞処置液５～７の調製は、１５ｍＬ遠沈管に、ホウ素含有化合物（化合物３ｃ）を含むストック溶液Ａ、Ａ６Ｋペプチドを含むストック溶液Ｂ、Ｍｉｌｌｉ－Ｑ水、及びＲＰＭＩ培地をこの順番で加えることにより行った。また、この際、ストック溶液Ａ、ストック溶液Ｂ及びＭｉｌｌｉ－Ｑ水を混合した後、３０℃を超えないように氷で冷却しながら超音波水浴に１０分間かけた後に、ＲＰＭＩ培地を加えた。なお、各細胞処置液はそれぞれ４ｍＬずつ調製した。計４ｍＬの細胞処置液を調製するのに混合した各溶液の添加量は以下の表２に示すとおりである。比較対象である細胞処置液１及び細胞処置液４の調製方法については、表１から抜粋して再掲した。

（実験３－３）細胞培養・化合物処置・細胞溶解液の調製
（実験２－３）で示したと同様の手順にて、細胞培養、細胞処置液による細胞の処理、及び細胞溶解液の調製を行った。すなわち、マウスメラノーマ細胞であるＢ１６／ＢＬ６細胞（理化学研究所より購入、細胞番号：ＲＣＢ２６３８）を、３５ｍｍディッシュ（Ｆａｌｃｏｎセルカルチャーディッシュ、製品番号：３５３００１）に細胞数が６０×１０^４ｃｅｌｌｓ／２ｍＬとなるように播種し、５％ＣＯ_２、３７℃の条件で４８時間培養した。その後、各ディッシュから培地を１ｍＬずつ除去し、細胞処置液１、２又は５～７を１ｍＬ添加した。表２に示すおり、細胞処置液２又は５～７を添加したディッシュにおけるホウ素含有化合物の濃度は、およそ５００μＭ（０．５ｍＭ）である。５％ＣＯ_２、３７℃の条件で２時間インキュベートした後、ディッシュ中の培地を可能な限りアスピレーターで除去し、冷却した生理食塩水（１ｍＬ、株式会社大塚製薬製、以下同じ。）を用いて、常法に従って洗浄した。その後に、各ディッシュに冷却した生理食塩水１ｍＬを加え、スクレーパーを用いて各ディッシュから細胞を剥離し懸濁させた。このようにして得られた懸濁液から、１０μＬをとり、トリパンブルーにて２倍希釈し、血球計算盤を用いて細胞数をカウントした。一方、各ディッシュにつき、残りの懸濁液全量を２ｍＬエッペンドルフチューブに移し、４℃、１，８００ｒｐｍの条件で３ｍｉｎ遠心し、遠心後、上清を取り除いた。その後、ＲＩＰＡＢｕｆｆｅｒ（富士フィルム和光純薬株式会社、カタログ番号：１８２－０２４５１）を０．５ｍＬずつ加え、数回ピペッティングした。１０分間、氷上でインキュベートし、細胞を溶解し、細胞溶解液（ライセート）を得た。得られた細胞溶解液は４℃で保存した。また、得られた細胞溶解液のタンパク定量は、ＢＣＡＰｒｏｔｅｉｎＡｓｓａｙＫｉｔ（タカラバイオ株式会社製）を用いて行なった。

（実験２－３）に示したと同様の手順にて、液体クロマトグラフィー質量分析法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）を用いて、細胞内ホウ素濃度及び細胞内ヨウ素濃度の測定を行った。得られた結果を表３に示す。

表３に示されるとおり、化合物３ｃを単独で使用した場合（細胞処置液４）、化合物３ｃの濃度５００μＭで２時間インキュベートした後の細胞内ホウ素濃度は３９±１３ｐｐｍであったところ、２５μＭ、５０μＭ、１００μＭのＡ６Ｋペプチドと併用することにより、同じ条件でインキュベートした後の細胞内ホウ素濃度は５７±４ｐｐｍ、６３±３８ｐｐｍ、４０２±１０３ｐｐｍまで高まった。これは前述したホウ素中性子捕捉療法に通常必要とされる細胞内ホウ素濃度である４０ｐｐｍをはるかに上回るものである。なお、非特許文献２によれば、従来のホウ素クラスターであるＢＳＨ（５００μＭ）とＡ６Ｋペプチド（１００μＭ）を併用した場合、細胞内ホウ素濃度は約２，０００ｎｇ／１０^６ｃｅｌｌｓとなることが報告されている（非特許文献２、Ｆｉｇｕｒｅ２Ｂ）。これに対して、化合物３ｃ（５００μＭ）とＡ６Ｋペプチド（１００μＭ）を併用した場合、細胞内ホウ素濃度は３２００±８２８ｎｇ／１０^６ｃｅｌｌｓであり、従来のホウ素クラスターであるＢＳＨと比較して、およそ１．６倍も高い細胞内ホウ素濃度が得られることが分かった。このようにホウ素とヨウ素を含有する化合物と細胞透過性ペプチドを併用することで、細胞内ホウ素濃度を顕著に高められることが示された。

本発明に係る化合物又はその塩、並びにこれらを含有する医薬組成物によれば、ホウ素濃度に代えて、より測定がし易いヨウ素濃度を測定することにより、患部のホウ素濃度を定量的に得ることができるので、現在、得ることが非常に困難であった患部におけるホウ素濃度についての情報を容易に得ることが可能となり、また、好適な一態様において、本発明に係る化合物又はその塩、並びにこれらを含有する医薬組成物によれば、従来のホウ素含有化合物と比較して高い細胞内ホウ素濃度を達成することができる。したがって、本発明によれば、ホウ素中性子捕捉療法の治療効果の向上、副作用の低減が期待される。このように本発明は、腫瘍性疾患の治療におけるホウ素中性子捕捉療法の応用に資するものであり、その産業上の利用可能性は大きい。

Claims

下記式（Ｉ）：

（式（Ｉ）において、Ｘはホウ素１０（^１０Ｂ）を含有する基、Ｌはリンカー、Ｙはヨウ素を含有する基を表す。）で表されることを特徴とするホウ素とヨウ素を含有する化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＸが、^１０Ｂを含有するホウ素クラスターを含む基であることを特徴とする請求項１に記載の化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＸが、下記式（ＸＩ）：

（式（ＸＩ）において、黒丸はＢＨ、白丸はＢを表し、＊は隣接する原子との結合手を表す。）で表される基であることを特徴とする請求項１又は２に記載の化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩ）：

（式（ＹＩ）において、Ｒ^１はハロゲン原子、又は置換されていてもよい一価の有機基を表し、ａは、１～５の整数を表し、Ｒ^１が複数ある場合、それらはそれぞれ独立であり、＊は、隣接する原子との結合手を表す。ただし、式（ＹＩ）で表される基には、少なくとも１つ以上のヨウ素原子が含まれる。）で表される基であることを特徴とする請求項１乃至３のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩＩ）：

（式（ＹＩＩ）において、Ｒ^２はヨウ素原子を表し、Ｒ^３は、置換されていてもよい一価のアルキル基又は置換されていてもよい一価のハロゲン化アルキル基を表し、ｂは１～４の整数を表し、＊は、隣接する原子との結合手を表す。）で表される基であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩＩＩ）：

（式（ＹＩＩＩ）において、Ｒ^３は、置換されていてもよい一価のアルキル基又は置換されていてもよい一価のハロゲン化アルキル基を表し、＊は、隣接する原子との結合手を表す。）で表される基であることを特徴とする請求項１乃至５のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＹが、下記式（ＹＩＶ）：

（式（ＹＩＶ）において、＊は、隣接する原子との結合手を表す。）で表される基であることを特徴とする請求項１乃至６のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
式（Ｉ）におけるＬが、下記式（ＬＩ）：

（式（ＬＩ）において、＊は、隣接する原子との結合手を表す。）で表される基であることを特徴とする請求項１乃至７のいずれか一項に記載の化合物又はその塩。
請求項１乃至８のいずれか一項に記載の化合物又はその塩を含む、医薬組成物。
さらに、細胞透過性ペプチドを含む請求項９に記載の医薬組成物。
前記細胞透過性ペプチドが、Ａ６Ｋペプチド又はＡ６Ｒペプチドであることを特徴とする請求項１０に記載の医薬組成物。
ホウ素中性子捕捉療法用であることを特徴とする請求項９～１１に記載の医薬組成物。
請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又はその塩を患者に投与する工程を含む、腫瘍疾患の治療方法。
請求項１～８のいずれか一項に記載の化合物又はその塩を患者に投与する工程、
前記患者の腫瘍におけるヨウ素濃度を測定する工程、
測定された前記ヨウ素濃度に基づいて腫瘍におけるホウ素濃度を推定する工程、及び、
推定された前記ホウ素濃度に基づいて前記患者に中性子線を照射する工程
を含む、腫瘍疾患の治療方法。