JP2022550243A - 抗ｐｄ－１抗体及びその使用 - Google Patents

抗ｐｄ－１抗体及びその使用 Download PDF

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Abstract

抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合性断片、それをコードする核酸分子、及びそれを調製するための方法。抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合性断片は、ＰＤ－１に対する高い特異性及び高い親和性を有し、免疫系を活性化するように、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２の結合を効果的にブロックし、それによって腫瘍成長を阻害する効果を達成することができる。したがって、抗体又はその抗原結合性断片を含有する医薬組成物、及び薬物の調製における医薬組成物の使用を更に含む。薬物は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置するために使用される。【選択図】 なし

Description

本発明は、治療用モノクローナル抗体の分野に関し、より詳細には、ＰＤ－１に対する抗体、並びに腫瘍、感染症、若しくは自己免疫疾患の予防及び／又は処置におけるその抗体の使用に関する。
プログラム細胞死受容体－１（ＰＤ－１）は、２８８個のアミノ酸を有するＩ型膜タンパク質であり、主要な免疫チェックポイントのうちの１つとして知られている（Ｂｌａｎｋら、２００５年、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ、５４：３０７～３１４頁）。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達経路は、免疫寛容、微生物感染、及び腫瘍免疫回避の調節において重要な役割を果たす。ＰＤ－１と、そのリガンドのうちの１つであるＰＤ－Ｌ１との間の相互作用をブロックすることにより、腫瘍特異的ＣＤ８＋ Ｔ細胞の免疫が改善され、それによって、がん細胞を攻撃し、そうして免疫系が腫瘍細胞を排除することを補助する。ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１シグナル伝達をブロックすることにより、腫瘍抗原特異的Ｔ細胞の増殖を促進することができ、腫瘍細胞の死滅において役割を果たし、それによって局所的な腫瘍成長を阻害することができ（Ｊｕｌｉｅ Ｒら、２０１２年、Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ． ３６６：２４５５～２４６５頁）；ＰＤ－１及びその関連する研究は、 Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ａｓｐｅｃｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ＰＤ－１ Ｃｈｅｃｋｐｏｉｎｔ Ｐａｔｈｗａｙ、Ｖａｓｓｉｌｉｋｉ Ａ． Ｂｏｕｓｓｉｏｔｉｓ，ＮＥＪＭ ｎ ｅｎｇｌ ｊ ｍｅｄ ３７５；１８ ｎｅｊｍ．ｏｒｇ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ ３，２０１６年において詳細に考察されている。ＰＤ－１（腫瘍浸潤リンパ球上の）及び／又は腫瘍細胞上のＰＤ－Ｌ１の発現は、生検の免疫組織化学的評価により、様々なヒト原発性腫瘍において見出されている。そのような組織としては、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、結腸がん、直腸がん、神経膠腫、膀胱がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、口腔扁平上皮がん、尿道上皮細胞がん、膵臓がん、及び頭頸部腫瘍などが挙げられる。このことから、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の相互作用をブロックすることにより、腫瘍特異的Ｔ細胞の免疫応答性を改善し、免疫系が腫瘍細胞を排除するのを補助することができることを理解することができる。最近では、ＰＤ－１が、ＨＩＶに感染した個体に由来するＴ細胞において高度に発現されること、更に、抗ＰＤ－１抗体が、慢性ウイルス感染症に対する免疫を増強させ得ることも、研究により示されている。更に、Ｚｈａｏらは、マウスにおいてＰＤ－１の発現が陽性である免疫細胞を枯渇させることにより、糖尿病モデルの発症を遅延させることができ、実験的自己免疫性脳脊髄炎によって引き起こされる麻痺を緩和することができることを見出した（ Ｚｈａｏ Ｐ．ら、Ｄｅｐｌｅｔｉｏｎ ｏｆ ＰＤ－１－ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ａｍｅｌｉｏｒａｔｅｓａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅ． Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ３、２９２～３０５頁、２０１９年）。したがって、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１のブロックは、腫瘍、感染症、又は自己免疫疾患の予防及び／又は処置において有用であり得る。
抗ＰＤ－１モノクローナル抗体ペンブロリズマブ（Ｋｅｙｔｒｕｄａ、Ｍｅｒｃｋ）は、ＰＤ－Ｌ１の発現が陽性の食道がんを有する患者において、化学療法と比較して、死亡のリスクを３１％低減させることができるが、しかしながら、ペンブロリズマブは、吐き気及び嘔吐だけでなく、貧血、高血糖、低アルブミン血症、低ナトリウム血症、四肢の疼痛、呼吸困難、運動能力障害、及び他の副作用も引き起こす。再発性又は難治性ホジキンリンパ腫は、ＰＤ－１モノクローナル抗体であるシンチリマブに応答するが、しかしながら、患者のうちの１８％は、グレード３又は４の有害事象を有し、患者のうちの１５％は、重度の有害事象を有する。パミパリブと組み合わせた抗ＰＤ－１モノクローナル抗体チスレリズマブの処置に関する第Ｉ相臨床試験は、一部の患者が肝炎又は自己免疫性肝炎を発症したことを示しており、尿道がん及び肝臓がんにおけるチスレリズマブの有効性は、依然として臨床試験で調査されている。したがって、新規な抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の研究及び開発は、早急に解決すべき技術問題となっている。
本出願において、第１に、本発明者らは、ＰＤ－１を特異的に認識することができる優れた特性を有するマウス抗体を開発した。それに基づいて、本発明者らは、マウス抗体の深い研究及び改変に関し創造的な仕事を行うことによって、マウス抗体のヒト化抗体を更に開発した。
本発明による抗体、特に、ヒト化抗体は、高い親和性及び特異性でのＰＤ－１への結合などの親マウス抗体の機能及び特性を保持する（又は更には増強する）だけでなく、ヒト化の程度も極めて高く、極めて有益であり、免疫原性反応を引き起こすことなく、ヒト対象に安全に投与することができる。したがって、本発明の抗体には、大きな臨床的価値がある。
本発明の抗体
一態様では、本発明は、ＰＤ－１に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合性断片であって、抗体又はその抗原結合性断片が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
（ａ）配列番号１に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）に含有されるＣＤＲ－Ｈ１、若しくはＣＤＲ－Ｈ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号１に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）に含有されるＣＤＲ－Ｈ２、若しくはＣＤＲ－Ｈ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号１に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）に含有されるＣＤＲ－Ｈ３、若しくはＣＤＲ－Ｈ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；並びに／又は
配列番号２に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含有されるＣＤＲ－Ｌ１、若しくはＣＤＲ－Ｌ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号２に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含有されるＣＤＲ－Ｌ２、若しくはＣＤＲ－Ｌ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号２に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含有されるＣＤＲ－Ｌ３、若しくはＣＤＲ－Ｌ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；
（ｂ）配列番号２０に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ１、若しくはＣＤＲ－Ｈ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号２０に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ２、若しくはＣＤＲ－Ｈ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号２０に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ３若しくは、ＣＤＲ－Ｈ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；並びに／又は
配列番号２１に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ１、若しくはＣＤＲ－Ｌ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号２１に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ２、若しくはＣＤＲ－Ｌ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号２１に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ３、若しくはＣＤＲ－Ｌ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；
（ｃ）配列番号３６に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ１、若しくはＣＤＲ－Ｈ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号３６に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ２、若しくはＣＤＲ－Ｈ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号３６に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ３、若しくはＣＤＲ－Ｈ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；並びに／又は
配列番号３７に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ１、若しくはＣＤＲ－Ｌ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号３７に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ２、若しくはＣＤＲ－Ｌ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号３７に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ３、若しくはＣＤＲ－Ｌ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；
（ｄ）配列番号５４に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ１、若しくはＣＤＲ－Ｈ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号５４に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ２、若しくはＣＤＲ－Ｈ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号５４に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ３、若しくはＣＤＲ－Ｈ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；並びに／又は
配列番号５５に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ１、若しくはＣＤＲ－Ｌ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号５５に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ２、若しくはＣＤＲ－Ｌ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号５５に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ３、若しくはＣＤＲ－Ｌ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；
又は
（ｅ）配列番号６８に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ１、若しくはＣＤＲ－Ｈ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号６８に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ２、若しくはＣＤＲ－Ｈ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号６８に記載のＶＨに含有されるＣＤＲ－Ｈ３、若しくはＣＤＲ－Ｈ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント；並びに／又は
配列番号６９に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ１、若しくはＣＤＲ－Ｌ１の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、配列番号６９に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ２、若しくはＣＤＲ－Ｌ２の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント、及び配列番号６９に記載のＶＬに含有されるＣＤＲ－Ｌ３、若しくはＣＤＲ－Ｌ３の配列と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する、そのバリアント
を含む、抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、置換は、保存的置換である。
好ましくは、ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ又はＩＭＧＴの番号付けシステムによって定義される。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片のＶＨ及び／又はＶＬが、ヒト又はマウスに由来する免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＰＤ－１に結合する。
一態様では、本発明は、ＰＤ－１に特異的に結合することができる抗体又はその抗原結合性断片であって、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む、抗体又はその抗原結合性断片を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＲがＩＭＧＴ番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域を含む：
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号３に記載の配列、又は配列番号３と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４に記載の配列、又は配列番号４と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号５に記載の配列、又は配列番号５と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／又は
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号６に記載の配列、又は配列番号６と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７に記載の配列、又は配列番号７と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号８に記載の配列、又は配列番号８と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ３；
（ｂ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号２２に記載の配列、又は配列番号２２と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３に記載の配列、又は配列番号２３と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４に記載の配列、又は配列番号２４と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／又は
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号２５に記載の配列、又は配列番号２５と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６に記載の配列、又は配列番号２６と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号２７に記載の配列、又は配列番号２７と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ３；
（ｃ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号３８に記載の配列、又は配列番号３８と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９に記載の配列、又は配列番号３９と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４０に記載の配列、又は配列番号４０と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／又は
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号４１に記載の配列、又は配列番号４１と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２に記載の配列、又は配列番号４２と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号４３に記載の配列、又は配列番号４３と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ３；
（ｄ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号５６に記載の配列、又は配列番号５６と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７に記載の配列、又は配列番号５７と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号５８に記載の配列、又は配列番号５８と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／又は
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号５９に記載の配列、又は配列番号５９と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６０に記載の配列、又は配列番号６０と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号６１に記載の配列、又は配列番号６１と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ３；
或いは
（ｅ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号７０に記載の配列、又は配列番号７０と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１に記載の配列、又は配列番号７１と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号７２に記載の配列、又は配列番号７２と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／又は
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号７３に記載の配列、又は配列番号７３と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７４に記載の配列、又は配列番号７４と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号７５に記載の配列、又は配列番号７５と比較して１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加）を有する配列、を有するＣＤＲ－Ｌ３。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＲがＩＭＧＴ番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域を含む：
（ａ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３；
（ｂ）以下の３つのＣＤＲ含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号２２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号２４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号２５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号２７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３；
（ｃ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号３８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号４１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号４３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３；
（ｄ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号５６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号５８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号５９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号６１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３；
又は
（ｅ）以下の３つのＣＤＲを含む重鎖可変領域（ＶＨ）：配列番号７０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号７２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３；及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲを含む軽鎖可変領域（ＶＬ）：配列番号７３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号７５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＲがＫａｂａｔの番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む：
（ａ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号９に記載の配列又は配列番号９と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０に記載の配列又は配列番号１０と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１２に記載の配列又は配列番号１２と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は
以下の３つのＣＤＲ：配列番号１３に記載の配列又は配列番号１３と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４に記載の配列又は配列番号１４と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号１５に記載の配列又は配列番号１５と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｂ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号２８に記載の配列又は配列番号２８と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９に記載の配列又は配列番号２９と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３０に記載の配列又は配列番号３０と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は
以下の３つのＣＤＲ：配列番号３１に記載の配列又は配列番号３１と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３２に記載の配列又は配列番号３２と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号３３に記載の配列又は配列番号３３と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｃ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号４４に記載の配列又は配列番号４４と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４５に記載の配列又は配列番号４５と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４７に記載の配列又は配列番号４７と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は
以下の３つのＣＤＲ：配列番号４８に記載の配列又は配列番号４８と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４９に記載の配列又は配列番号４９と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号５０に記載の配列又は配列番号５０と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｄ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号６２に記載の配列又は配列番号６２と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６３に記載の配列又は配列番号６３と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６４に記載の配列又は配列番号６４と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は
以下の３つのＣＤＲ：配列番号６５に記載の配列又は配列番号６５と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６６に記載の配列又は配列番号６６と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号６７に記載の配列又は配列番号６７と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
或いは
（ｅ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号７６に記載の配列又は配列番号７６と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７７に記載の配列又は配列番号７７と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号７８に記載の配列又は配列番号７８と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／又は
以下の３つのＣＤＲ：配列番号７９に記載の配列又は配列番号７９と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８０に記載の配列又は配列番号８０と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号８１に記載の配列又は配列番号８１と比較して１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加）を有する配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＲがＫａｂａｔの番号付けシステムによって定義される、以下の重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む：
（ａ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号１２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲ：配列番号１３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号１５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｂ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号２８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号３０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲ：配列番号３１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号３３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｃ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号４４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号４７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲ：配列番号４８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号５０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
（ｄ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号６２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号６４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲ：配列番号６５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号６７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）、
又は
（ｅ）以下の３つのＣＤＲ：配列番号７６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号７７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２、配列番号７８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）、及び／若しくは
以下の３つのＣＤＲ：配列番号７９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号８０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２、配列番号８１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）内の少なくとも１つのＣＤＲが、上述のＩＭＧＴ又はＫａｂａｔによって定義されるＣＤＲと比較して、１個又は複数のアミノ酸の置換、欠失、付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ）である突然変異を含有する、重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
好ましくは、本発明の置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のＶＨは、マウス免疫グロブリンの重鎖可変領域（ＶＨ）に由来するフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、及び／又は本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のＶＬは、マウス免疫グロブリンの軽鎖可変領域（ＶＬ）に由来するフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。したがって、ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、マウスのものである。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のＶＨは、ヒト免疫グロブリンの重鎖可変領域（ＶＨ）に由来するフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、及び／又は本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片のＶＬは、ヒト免疫グロブリンの軽鎖可変領域（ＶＬ）に由来するフレームワーク領域（ＦＲ）を含む。したがって、ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ヒト化されている。そのような実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖可変領域内の１つ若しくは複数のＦＲ及び／又は軽鎖可変領域内の１つ若しくは複数のＦＲは、１個又は複数の非ヒト（例えば、マウス）アミノ酸残基を含み得、例えば、重鎖可変領域内の１つ若しくは複数のＦＲ、及び／又は軽鎖可変領域内の１つ若しくは複数のＦＲは、対応するマウスアミノ酸残基が存在する１個又は複数のアミノ酸の逆突然変異を含み得る。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）ヒト免疫グロブリンの重鎖フレームワーク領域又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する生殖系列抗体遺伝子配列と比較して、最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を含む、重鎖フレームワーク領域又はそのバリアント、及び／又は
（ｂ）ヒト免疫グロブリンの軽鎖フレームワーク領域又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する生殖系列抗体遺伝子配列と比較して、最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を含む、軽鎖フレームワーク領域又はそのバリアント
を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片のヒト化の程度は、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号１、２０、３６、５４、及び６８に記載のいずれか１つの配列、
（ｉｉ）配列番号１、２０、３６、５４、及び６８に記載の配列のうちのいずれか１つと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）配列番号１、２０、３６、５４、及び６８に記載の配列のうちのいずれか１つと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）
並びに／或いは
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号２、２１、３７、５５、及び６９に記載のいずれか１つの配列、
（ｖ）配列番号２、２１、３７、５５、及び６９に記載の配列のうちのいずれか１つと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｖｉ）配列番号２、２１、３７、５５、及び６９に記載の配列のうちのいずれか１つと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号１６、１７、３４、５１、及び５２に記載のいずれか１つの配列、
（ｉｉ）配列番号１６、１７、３４、５１、及び５２に記載の配列のうちのいずれか１つと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）配列番号１６、１７、３４、５１、及び５２に記載の配列のうちのいずれか１つと少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖可変領域（ＶＨ）
並びに／或いは
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号１８、１９、３５、及び５３に記載のいずれか１つの配列、
（ｖ）配列番号１８、１９、３５、及び５３に記載の配列のうちのいずれか１つと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｖｉ）配列番号１８、１９、３５、及び５３に記載の配列のうちのいずれか１つと少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、若しくは少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１、２０、３６、５４、及び６８のうちのいずれか１つに記載の重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに／又は配列番号２、２１、３７、５５、及び６９のうちのいずれか１つに記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１６、１７、３４、５１、及び５２のうちのいずれか１つに記載の重鎖可変領域（ＶＨ）、並びに／又は配列番号１８、１９、３５、及び５３のうちのいずれか１つに記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１に記載のＶＨ、及び／又は配列番号２に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号２に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）ＶＨ、並びに／或いは配列番号２に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）ＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１６に記載のＶＨ、及び／又は配列番号１８に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１６に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号１８に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１６に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）ＶＨ、並びに／或いは配列番号１８に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）ＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１７に記載のＶＨ、及び／又は配列番号１９に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１７に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号１９に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号１７に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）ＶＨ、並びに／或いは配列番号１９に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）ＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２０に記載のＶＨ、及び／又は配列番号２１に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２０に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号２１に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号２０に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＨ、並びに／或いは配列番号２１に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号３４に記載のＶＨ、及び／又は配列番号３５に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号３４に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号３５に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号３４に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＨ、並びに／或いは配列番号３５に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号３６に記載のＶＨ、及び／又は配列番号３７に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号３６に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号３７に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号３６に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＨ、並びに／或いは配列番号３７に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５１若しくは５２に記載のＶＨ、及び／又は配列番号５３に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５１若しくは５２に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号５３に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５１又は５２に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＨ、並びに／或いは配列番号５３に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５４に記載のＶＨ、及び／又は配列番号５５に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５４に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号５５に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号５４に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＨ、並びに／或いは配列番号５５に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号６８に記載のＶＨ、及び／又は配列番号６９に記載のＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号６８に記載のＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＨ、及び／又は配列番号６９に記載のＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、若しくは１００％の配列同一性を有するＶＬを含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号６８に記載のＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＨ、並びに／或いは配列番号６９に記載のＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有するＶＬを含む。好ましい実施形態では、置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）配列番号１に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号２に記載の配列を有するＶＬ、
（ｂ）配列番号１６に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号１８に記載の配列を有するＶＬ、
（ｃ）配列番号１７に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号１９に記載の配列を有するＶＬ、
（ｄ）配列番号２０に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号２１に記載の配列を有するＶＬ、
（ｅ）配列番号３４に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号３５に記載の配列を有するＶＬ、
（ｆ）配列番号３６に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号３７に記載の配列を有するＶＬ、
（ｇ）配列番号５１に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５３に記載の配列を有するＶＬ、
（ｈ）配列番号５２に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５３に記載の配列を有するＶＬ、
（ｉ）配列番号５４に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５５に記載の配列を有するＶＬ、
（ｊ）配列番号６８に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号６９に記載の配列を有するＶＬ、
（ｋ）それぞれ、（ａ）～（ｊ）のうちのいずれかにおけるＶＨ及びＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を独立的に有する、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）、或いは
（ｌ）それぞれ、（ａ）～（ｊ）のうちのいずれかにおけるＶＨ及びＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを独立的に有する（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する）、重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）
を含む。好ましくは、置換は、保存的置換である。
上述の態様のうちのいずれか１つにおいて、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、哺乳動物（例えば、マウス又はヒト）免疫グロブリンに由来する定常領域配列又はそのバリアントを更に含み得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖は、ヒト又はマウス免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントを含み、並びに／或いは本発明の抗体又はその抗原結合性断片の軽鎖は、ヒト又はマウス免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する、軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖は、ヒト免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で５０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有する、重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントを含み、並びに／或いは本発明の抗体又はその抗原結合性断片の軽鎖は、ヒト免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で５０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有する、軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、マウス免疫グロブリンの重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で５０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有する、重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントを含む。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、マウス免疫グロブリンの軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントであって、バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、最大で５０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有する、軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、定常領域は、抗ＰＤ－１抗体分子の特性を改変するように、変更されている、例えば、突然変異されている（例えば、以下の特徴：Ｆｃ受容体結合、抗体グリコシル化、システイン残基の数、エフェクター細胞機能、又は補体機能のうちの１つ又は複数を変更する）。機能は、例えば、抗体のエフェクターリガンド（例えば、ＦｃＲ又は補体Ｃ１ｑ）に対する親和性を変更し、それによって、エフェクター機能を変化させる（例えば、減少させる）ために、抗体定常領域における少なくとも１つのアミノ酸残基を、異なる残基と置き換えることによって、変更することができる。抗体のＦｃ領域は、いくつかの重要なエフェクター機能、例えば、ＡＤＣＣ、ファゴサイトーシス、ＣＤＣなどを媒介する。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、及びＩｇＥの重鎖定常領域からなる群から選択される、具体的には、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４の重鎖定常領域からなる群から選択される、及びより具体的には、ＩｇＧ１及びＩｇＧ４（例えば、ヒトＩｇＧ１又はＩｇＧ４）の重鎖定常領域からなる群から選択される、重鎖定常領域（Ｆｃ）を含む。一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、カッパ又はラムダ軽鎖定常領域、好ましくは、カッパ軽鎖定常領域（例えば、ヒトカッパ軽鎖定常領域）から選択される、軽鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、（１）ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域、（２）ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域、又は（３）ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域の突然変異体（Ｓ２２８Ｐ）からなる群から選択される重鎖定常領域を含む。
一部の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、ヒトＩｇＧ１定常領域（ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８５７）、又はヒトＩｇＧ４定常領域（ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８６１）を含む。
ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントであって、バリアントが、配列番号８３と比較して、最大で５０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有する重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアント、並びに／或いは配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントであって、バリアントが、配列番号８４と比較して、最大で５０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有する、軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントを含む。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号８２又は８３に記載の配列、
（ｉｉ）配列番号８２又は８３に記載の配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）配列番号８２又は８３に記載の配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖定常領域（ＣＨ）
並びに／或いは
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号８４に記載の配列、
（ｖ）配列番号８４に記載の配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｖｉ）配列番号８４に記載の配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖定常領域（ＣＬ）
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、配列番号８２又は８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号１に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号２に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号１６に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号１８に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号１７に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号１９に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号２０に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号２１に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号３４に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号３５に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号３６に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号３７に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号５１に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号５３に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号５２に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号５３に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号５４に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号５５に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
一部の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、
（ａ）
（ｉ）配列番号６８に記載のＶＨ配列及び配列番号８２又は８３に記載のＣＨ配列を含む配列、
（ｉｉ）（ｉ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
（ｉｉｉ）（ｉ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、重鎖
並びに
（ｂ）
（ｉｖ）配列番号６９に記載のＶＬ配列及び配列番号８４に記載のＣＬ配列を含む配列、
（ｖ）（ｉｖ）における配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個、若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ、例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個、若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）を有する配列、或いは
（ｖｉ）（ｉｖ）における配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％、又は１００％の配列同一性を有する配列
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、軽鎖
を含む。
ある特定の実施形態では、（ｉｉ）又は（ｖ）における置換は、保存的置換である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号２に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１６に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号１８に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号１７に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号１９に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２０に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号２１に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３４に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号３５に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号３６に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号３７に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５１に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号５３に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５２に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号５３に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号５４に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号５５に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、配列番号６８に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖と、配列番号６９に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖とを含む。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、キメラ又はヒト化抗体である。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、（Ｆａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｄｓＦｖ）、ダイアボディ、二特異性抗体、及び多特異性抗体からなる群から選択される。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、以下の特性：
（ａ）５０ｎＭ未満、例えば、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、１ｐＭ未満、０．１ｐＭ未満、又はそれよりも低いＫＤでＰＤ－１（例えば、ヒトＰＤ－１）に結合すること（ここで、ＫＤは、当該技術分野において周知の技法、例えば、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔ（登録商標））若しくはＥＬＩＳＡによって測定することができる）、
（ｂ）５０ｎＭ未満、例えば、４０ｎＭ未満、３０ｎＭ未満、２０ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．９ｎＭ未満、０．８ｎＭ未満、０．７ｎＭ未満、０．６ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．４ｎＭ未満、０．３ｎＭ未満、０．２ｎＭ未満、０．１ｎＭ未満、０．０１ｎＭ未満、１ｐＭ未満、０．１ｐＭ未満、若しくはそれよりも低いＥＣ５０でＰＤ－１（例えば、ヒトＰＤ－１）に結合すること（ここで、ＥＣ５０は、当該技術分野において周知の技法、例えば、フローサイトメトリー若しくは細胞競合ＥＬＩＳＡによって測定することができる）、
（ｃ）ＰＤ－Ｌ１若しくはＰＤ－Ｌ２への結合について、約０．１ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬのＩＣ５０でＰＤ－１と競合すること（好ましくは、ＩＣ５０は、ＥＬＩＳＡによって測定される）、
（ｄ）Ｔ細胞活性化を増加させること、例えば、Ｔリンパ球におけるＩＦＮ－γ及び／若しくはＩＬ－２の発現を増加させること、
（ｅ）ＢＴＬＡにも、ＰＤ－Ｌ１にも、ＩＣＯＳにも結合しないこと、
（ｇ）腫瘍細胞を死滅させるか、若しくはその成長を阻害すること、
（ｇ）良好な熱安定性を有すること、又は
（ｈ）ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ、及びＣＤＣ活性のうちの少なくとも１つの活性がないか、若しくは低減されていること
のうちの少なくとも１つを示し得る。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＤＣＰ活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＤＣＣ活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＣ活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＣＤＣ活性を有さない。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＤＣＰ活性を有さない。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＤＣＣ活性を有さない。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ、及びＣＤＣ活性のうちの１つ、２つ、又は全ての活性が低減されている。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ、及びＣＤＣ活性のうちの１つ、２つ、又は全てを有さない。
抗体の誘導体
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、例えば、追加の分子（例えば、追加のポリペプチド又はタンパク質）との連結によって誘導体化されてもよい。典型的には、抗体又はその抗原結合性断片の誘導体化（例えば、標識化）は、そのＰＤ－１（特に、ヒトＰＤ－１）への結合に悪影響を与えない。そのため、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、そのような誘導体形態を含むことも意図する。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、（化学カップリング、遺伝子融合、非共有結合的又は他の方法によって）１つ又は複数の他の分子群、例えば、別の抗体（例えば、二特異性抗体を形成する）、検出剤、薬学的試薬及び／又は抗体若しくは抗原結合性断片の別の分子（例えば、アビジン又はポリヒスチジンタグ）への結合を媒介することができるタンパク質又はポリペプチドに連結されてもよい。
ある種類の誘導体抗体（例えば、二特異性抗体）は、（同じ又は異なる種類の）２つ以上の抗体を架橋することによって作成される。二特異性抗体を得るための方法は、当技術分野において周知であり、例示的な方法としては、限定されるものではないが、化学的架橋、細胞の遺伝子操作（ハイブリドーマ）又は遺伝子操作が挙げられる。
別の種類の誘導体抗体は、標識抗体である。例えば、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、検出可能なマーカーに連結されていてもよい。本発明の検出可能なマーカーは、蛍光、分光法、光化学、生化学、免疫学、電気学、光学又は化学によって検出される任意の物質であってもよい。そのようなマーカーは、当技術分野において周知であり、その例としては、限定されるものではないが、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、ベータ－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど）、放射性核種（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ又は３２Ｐ）、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット又はシアニン色素誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ ７５０）、アクリジンエステル化合物、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、コロイド金若しくは着色ガラス若しくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの熱量測定マーカー、及び上記マーカーによって修飾されたアビジン（例えば、ストレプトアビジン）に結合するためのビオチンが挙げられる。そのようなマーカーは、限定されるものではないが、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；及び同第４，３６６，２４１号を含む特許に開示されており、その全ては、参照によって本明細書に組み込まれる。上記に記載の検出可能なマーカーは、当技術分野において公知の方法によって検出することができる。例えば、放射活性マーカーは、写真用フィルム又はシンチレーション計算機を使用して検出されてもよく、蛍光マーカーは、放射光を検出する光検出器を使用して検出されてもよい。酵素マーカーは、一般に、基質を酵素に提供すること、及び基質に対する酵素の効果によって生成する反応生成物を検出することによって検出され、熱量測定マーカーは、簡便な視覚性着色マーカーによって検出される。ある特定の実施形態では、そのようなマーカーは、イムノアッセイ（例えば、酵素結合イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイなど）において有用である。一部の実施形態では、上記に記載の検出可能なマーカーは、潜在的な立体障害を低減するために、異なる長さのリンカーを介して、本発明の抗体又はその抗原結合性断片に連結されていてもよい。
加えて、本発明の抗体又はその抗原結合性断片はまた、化学基、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、メチル若しくはエチル、又はグリコシルで誘導体化されてもよい。これらの基を使用して、血清の半減期の増加などの抗体の生物学的特性を改善することができる。
したがって、一態様では、本発明は、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片、及び上記に記載の検出可能なマーカー、例えば、放射性同位元素、蛍光性物質、発光性物質、着色物質又は酵素であり得るカップリング部分を含むコンジュゲートを提供する。カップリング部分はまた、薬剤、例えば、化学療法剤、放射性核種又は毒素、例えば、パクリタキセル、シクロホスファミド、フルオロウラシル、８９Ｓｒ、デュオカルマイシンであってもよい。
抗体の誘導体の１つとして、本発明は、第１の抗体若しくはその断片、及び追加の抗体若しくはその断片又は抗体模倣物を含む多特異性抗体であって、第１の抗体若しくはその断片、追加の抗体若しくはその断片又は抗体模倣物が、その元の結合特異性を保持する、多特異性抗体を提供する。第１の抗体又はその断片は、ＰＤ－１に特異的に結合する本発明の任意の（モノクローナル）抗体又はその抗原結合性断片である。本明細書で使用される場合、「抗体模倣体」は、抗体の構造なしではあるが、抗体としての抗原への特異的な結合を指す。それらは、通常、約３～２０ｋＤａのモル質量を有する人工ペプチド又はタンパク質、例えば、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）及びフィノマーである。設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）は、中国特許出願公開第１０４３４１５２９号に記載のように、ＩｇＧ抗体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体断片又はそれらの組合せに連結され得る。抗ＩＬ－１７ａフィノマーは、国際公開第２０１５／１４１８６２号に記載のように、抗ＩＬ－６Ｒ抗体に結合する。
ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、第１の抗体又はその抗原結合性断片と追加の抗体若しくはその抗原結合性断片又は抗体模倣物とをカップリングさせることによって形成され、それぞれの抗体若しくはその抗原結合性断片又は抗体類似体は、その元の結合特異性を保持し、第１の抗体又はその結合性断片は、本発明の抗体又はその抗原結合性断片である。ある特定の実施形態では、多特異性抗体は、二特異性抗体、又は三特異性抗体、又は四特異性抗体である。
抗体の調製
本発明の抗体は、当技術分野において公知の様々な方法、例えば、遺伝子操作組換え技術によって調製することができる。例えば、化学合成又はＰＣＲ増幅によって本発明の抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子をコードするＤＮＡ分子を得ること、得られたＤＮＡ分子を発現ベクターに挿入すること、及び次いで宿主細胞にトランスフェクトすること、次いでトランスフェクトされた宿主細胞を、本発明の抗体を発現する特定の条件下で培養することによって調製することができる。
本発明の抗原結合性断片は、無傷抗体分子を加水分解することによって得ることができる（Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４巻：１０７～１１７頁（１９９２年）及びＢｒｅｎｎａｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９巻：８１頁（１９８５年）を参照されたい）。加えて、これらの抗原結合性断片は、組換え宿主細胞によって直接産生させることもできる（Ｈｕｄｓｏｎ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１巻：５４８～５５７頁（１９９９年）；Ｌｉｔｔｌｅら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ、２１巻：３６４～３７０頁（２０００年）において概説）。例えば、Ｆａｂ’断片は、宿主細胞から直接得ることができ、Ｆａｂ’断片は、化学的にカップリングして、Ｆ（ａｂ’）２断片を形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻：１６３～１６７頁（１９９２年））。更にまた、Ｆｖ、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞の培養培地から直接単離することもできる。これらの抗原結合性断片を調製するための他の技術は、当業者に周知である。
そのため、別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、又はそれらの重鎖可変領域及び／若しくは軽鎖可変領域、又はそれらの１つ若しくは複数のＣＤＲをコードする核酸配列を含む単離された核酸分子を提供する。一部の実施形態では、ヌクレオチド配列は、当技術分野において公知のコドン縮重に従って、置換されていてもよい。ある特定の実施形態では、ヌクレオチド配列は、コドン最適化されている。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、（ｉ）本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖可変領域及び軽鎖可変領域をそれぞれコードする第１の核酸及び第２の核酸、又は（ｉｉ）本発明の抗体又はその抗原結合性断片の、それぞれ、重鎖可変領域及び重鎖定常領域をコードする第１の核酸、並びに軽鎖可変領域及び軽鎖定常領域をコードする第２の核酸、又は（ｉｉｉ）本発明の抗体又はその抗原結合性断片の重鎖及び軽鎖をそれぞれコードする第１の核酸及び第２の核酸を含む。ある特定の実施形態では、第１及び第２の核酸は、上記（ｉ）～（ｉｉｉ）における第１及び第２の核酸のうちのいずれか１つの縮重配列、又はそれと実質的に同一の配列の核酸を含む。縮重配列又は実質的に同一の配列は、（ｉ）～（ｉｉｉ）における核酸配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有する配列、或いは１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有するか、又は３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドが異なる配列を指す、例えば、単離された核酸分子は、配列番号８５、配列番号８７、配列番号８９、配列番号４６に記載のヌクレオチド配列、又はそれらの縮重配列、又はそれらと実質的に同一の配列を含んでいてもよい。
ある特定の実施形態では、本発明は、抗体の重鎖をコードする核酸分子及び／又は抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む単離された核酸分子であって、抗体の重鎖をコードする核酸分子が、（ａ）配列番号８５に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ａ）のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有するか、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、又は（ｃ）（ａ）のヌクレオチド配列と３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有し、並びに／或いは抗体の軽鎖をコードする核酸分子が、（ｄ）配列番号８７に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は（ｅ）（ｄ）のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｄ）のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有するか、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、又は（ｆ）（ｄ）のヌクレオチド配列と３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有する、単離された核酸分子を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号８５に記載の抗体の重鎖をコードする核酸分子及び／又は配列番号８７に記載の抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む。
ある特定の実施形態では、本発明は、抗体の重鎖をコードする核酸分子及び／又は抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む単離された核酸分子であって、抗体の重鎖をコードする核酸分子が、（ａ）配列番号８９に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は（ｂ）（ａ）のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ａ）のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有するか、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、又は（ｃ）（ａ）のヌクレオチド配列と３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有し、並びに／或いは抗体の軽鎖をコードする核酸分子が、（ｄ）配列番号４６に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、又は（ｅ）（ｄ）のヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｄ）のヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有するか、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、又は（ｆ）（ｄ）のヌクレオチド配列と３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドが異なる配列からなる群から選択される配列を有する、単離された核酸分子を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の単離された核酸分子は、配列番号８９に記載の抗体の重鎖をコードする核酸分子及び／又は配列番号４６に記載の抗体の軽鎖をコードする核酸分子を含む。
別の態様では、本発明の単離された核酸分子を含むベクター（例えば、クローニングベクター又は発現ベクター）が提供される。ある特定の実施形態では、本発明のベクターは、例えば、プラスミド、コスミド、ファージ、レンチウイルスなどである。ある特定の実施形態では、ベクターは、対象（例えば、哺乳動物、例えば、ヒト）においてｉｎ ｖｉｖｏで本発明の抗体又はその抗原結合性断片を発現することができる。
別の態様では、本発明の単離された核酸分子又は本発明のベクターを含む宿主細胞が提供される。宿主細胞は、真核細胞（例えば、哺乳動物細胞、昆虫細胞、酵母細胞）又は原核細胞（例えば、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ））であってもよい。好適な真核細胞としては、限定されるものではないが、ＮＳ０細胞、Ｖｅｒｏ細胞、Ｈｅｌａ細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＢＨＫ細胞及びＭＤＣＫＩＩ細胞が挙げられる。好適な昆虫細胞としては、限定されるものではないが、Ｓｆ９細胞が挙げられる。ある特定の実施形態では、本発明の宿主細胞は、哺乳動物細胞、例えば、ＣＨＯ（例えば、ＣＨＯ－Ｋ１、ＣＨＯ－Ｓ、ＣＨＯ ＤＸＢ１１、ＣＨＯ ＤＧ４４）である。
別の態様では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を調製するための方法であって、本発明の宿主細胞を、抗体又はその抗原結合性断片の発現を可能にする条件下で培養するステップ、及び抗体又はその抗原結合性断片を培養された宿主細胞培養物から回収するステップを含む方法が提供される。
別の態様では、１つ又は複数のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）、及びＣＡＲを有するか、又は発現する細胞が提供され、ＣＡＲを有するか、又は発現する細胞は、本発明の任意の抗体若しくは抗原結合性断片（例えば、ｓｃＦｖ）、核酸又はベクターを含むか、又は発現する。
ＣＡＲを受ける細胞は、宿主細胞と呼ばれる。ＣＡＲを有するか、又は発現する宿主細胞は、ＣＡＲ細胞と呼ばれる。ある特定の実施形態では、宿主細胞は、免疫細胞から選択され、好ましくは、免疫細胞は、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ又は樹状細胞、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される。
ＣＡＲ細胞の調製は、当技術分野における文献に記載の技術又は条件を参照することができ、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版（Ｈｕａｎｇ Ｐｅｉｔａｎｇら翻訳）を参照するか、又は製品の使用説明書に従って行うことができる。
別の態様では、本発明の単離された核酸分子又は本発明のベクターを含む腫瘍溶解性ウイルスが提供される。
１つ又はいくつかの本発明の抗体又はその抗原結合性断片をコードする核酸分子が、腫瘍溶解性ウイルスに挿入されているか、又は運ばれることを特徴とする。本発明の核酸分子を運ぶ腫瘍溶解性ウイルスは、１つ又は複数の抗ＰＤ－１抗体又はその結合性断片を発現する。
改変された腫瘍溶解性ウイルスの調製については、当技術分野における文献に記載されている技術又は条件を参照することができ（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、第３版（Ｈｕａｎｇ Ｐｅｉｔａｎｇら翻訳）を参照されたい）、又は製品の使用説明書に従って行うことができる。
本発明の核酸分子を運ぶ腫瘍溶解性ウイルスは、抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合性断片を送達する、腫瘍細胞を溶解するウイルスの機能を実現しながら、ｉｎ ｖｉｖｏで抗ＰＤ－１抗体又はその抗原結合性断片を発現する機能を実現する、そのようにして腫瘍細胞の溶解及び抗腫瘍免疫の増強の両方の二重の役割を果たすのに有効であり得る。したがって、本発明によって改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して、腫瘍を予防及び／又は処置するための医薬を調製することができ、本発明によって改変された腫瘍溶解性ウイルスを使用して、予防及び／又は処置することができる。
別の態様では、本発明のモノクローナル抗体又はその抗原結合性断片、及びサイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＴＮＦ－α又はＩＦＮγ）などのポリペプチドである非免疫グロブリン部分を含む融合タンパク質が提供される。
使用、治療方法及び医薬組成物
別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、腫瘍溶解性ウイルス又は融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の抗体又はその抗原結合性断片、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、上記に記載の単離された核酸分子又はベクターを含む本発明の宿主細胞、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の多特異性抗体、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明のコンジュゲート、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明のＣＡＲ細胞、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の腫瘍溶解性ウイルス、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、本発明の融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はまた、追加の薬学的活性薬剤を含んでいてもよい。ある特定の実施形態では、追加の薬学的活性薬剤は、化学療法剤、抗腫瘍剤、抗感染症剤又は抗自己免疫疾患剤、抗血管新生剤又はチロシンキナーゼ阻害剤である。
ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片及び追加の薬学的活性薬剤は、別々の成分として、又は同じ組成物中の成分として、提供される。そのため、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、追加の薬学的活性薬剤と、組み合わせて又は別々に、同時又は連続して投与することができる。
ある特定の実施形態では、医薬組成物はまた、追加の薬学的活性薬剤を含んでいてもよい。追加の薬学的活性薬剤は、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤からなる群から選択される。抗腫瘍剤は、化学療法剤、免疫調節効果と関連する抗体又は抗腫瘍生体高分子剤を含む。化学療法剤は、抗血管新生剤又はチロシンキナーゼ阻害剤を含む。ある特定の実施形態では、化学療法剤としては、限定されるものではないが、例えば、５－フルオロウラシル、アクチノマイシン－Ｄ、ダウノルビシン、マイトマイシン、ビンクリスチンなど、又はそれらの任意の組合せが挙げられる。
ある特定の実施形態では、放射性医薬品としては、限定されるものではないが、炭素－１１、炭素－１４、クロム－５１、コバルト－５７、コバルト－５８、エルビウム－１６９、フッ素－１８、ガリウム－６７、金－１９８、インジウム－１１１、インジウム－１１３ｍ、ヨウ素－１２３、ヨウ素－１２５、ヨウ素－１３１などが挙げられる。
ある特定の実施形態では、免疫調節効果と関連する抗体は、腫瘍の予防、阻害及び／又は処置において有用な抗体、例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体、抗ＨＥＲ２抗体、抗ＥＧＦＲ抗体、抗ＬＡＧ－３抗体又はＴＩＭ－３抗体などを指し、好ましくは、抗ＬＡＧ－３抗体はＡＢ１２Ｔ８（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、国際公開第２０１９／１４１０９２号）であり、及びＴＩＭ－３抗体はＡＢ１２Ｓ３（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｌｔｄ．、国際公開第２０１９／２０６０９５号）である。
ある特定の実施形態では、免疫調節効果と関連する薬剤は、炎症若しくは感染症の予防、阻害及び／若しくは処置において有用であるか、又は腫瘍調節効果を有する薬剤、例えば、抗ＩＬ－１抗体、抗ＩＬ－６抗体、抗ＴＮＦ－α抗体などを指す。
ある特定の実施形態では、自己免疫疾患と関連する薬剤は、自己免疫疾患の予防、阻害及び／又は処置において有用な薬剤、例えば、抗ＩＬ－１抗体、抗ＩＬ－６抗体、抗ＴＮＦ－α抗体、抗ＣＤ２０抗体、抗Ｂリンパ球刺激因子（ＢＬｙＳ）抗体などを指す。
ある特定の実施形態では、チロシンキナーゼ阻害剤としては、限定されるものではないが、イマチニブ、ソラフェニブ、スニチニブ、ラパチニブ、ダサチニブが挙げられる。
ある特定の実施形態では、医薬組成物は、例えば、腫瘍の処置の前、それと同時、又はその後に、他の処置若しくは治療剤と同時に、別々に又は連続して投与される。
別の態様では、本発明の医薬組成物中の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質又はコンジュゲートは、対象における以下の生物学的活性：
（１）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害するか、又はブロックする、
（２）ＰＤ－１の活性を下方調節するか、又は排除する、
（３）ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
（４）Ｔリンパ球におけるＩＦＮγ又はＩＬ－２の産生を増加させる、
（５）腫瘍細胞を死滅させるＴリンパ球の能力を増強する
のうちの少なくとも１つを生じるのに十分である。
別の態様では、本発明は、
（１）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害するか、又はブロックする、
（２）ＰＤ－１の活性を下方調節するか、又は排除する、
（３）ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
（４）Ｔリンパ球におけるＩＦＮγ又はＩＬ－２の産生を増加させる、及び／或いは
（５）腫瘍細胞を死滅させるＴリンパ球の能力を増強する
ための医薬の調製における、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、腫瘍溶解性ウイルス又は融合タンパク質の使用を提供する。
ある特定の実施形態では、医薬を調製するために使用される場合、本発明の宿主細胞は、上記に記載の単離された核酸分子又はベクターを含む。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質、コンジュゲート、医薬組成物、又は追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）と組み合わせた本発明の医薬組成物は、医薬を調製するために使用され、医薬は、対象（例えば、ヒト）における腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置するために使用される。
ある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物である。ある特定の実施形態では、対象は、ヒトである。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、コンジュゲート、融合タンパク質、薬剤、医薬組成物、又は追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）と組み合わせた本発明の医薬組成物は、腫瘍を予防及び／又は処置するために使用される。ある特定の実施形態では、腫瘍は、皮膚、骨髄、血液、リンパ液、頭頸部、脳、肺、***、胃、肝臓、膵臓、胆嚢、腸、卵巣、前立腺、副腎、腎臓、膀胱、子宮、子宮頸部、精巣、陰茎及び軟組織からなる群からの組織における１つ又は複数から選択される。
ある特定の実施形態では、腫瘍は、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、結腸がん、直腸がん、神経膠腫、膀胱がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、口腔扁平上皮がん、尿道上皮細胞がん及び膵臓がん、並びに頭頸部腫瘍からなる群における１つ又は複数から選択される。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質、コンジュゲート、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物は、追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）と一緒に、感染症と関連する疾患若しくは状態を予防及び／又は処置するために使用される。ある特定の実施形態では、感染症としては、限定されるものではないが、細菌感染症、病原体感染症、真菌感染症及びウイルス感染症が挙げられる。ある特定の実施形態では、抗体又はその抗原結合性断片、ベクター、宿主細胞、多重特異性抗体、コンジュゲートは、慢性ウイルス感染症、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス若しくはＨＩＶなどの感染症などのウイルス感染症を予防及び／若しくは処置するため、又は結核などの他の慢性感染症を予防及び／若しくは処置するために使用される。
ある特定の実施形態では、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質、コンジュゲート、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物は、追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）と一緒に、自己免疫と関連する疾患を予防及び／又は処置するために使用される。ある特定の実施形態では、疾患としては、限定されるものではないが、甲状腺機能亢進症、糖尿病、重症筋無力症、潰瘍性大腸炎、胃炎、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、紅斑性狼瘡、関節リウマチなどが挙げられる。
別の態様では、本発明は、ｉｎ ｖｉｖｏ／ｉｎ ｖｉｔｒｏの（１）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害するか、又はブロックする、（２）ＰＤ－１の活性を下方調節するか、又は排除する、（３）ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の免疫抑制を低減するか、又は軽減する、（４）Ｔリンパ球におけるＩＦＮγ又はＩＬ－２の産生を増加させる、及び（５）腫瘍細胞を死滅させるＴリンパ球の能力を増強するのうちの少なくとも１つのための方法であって、細胞又は対照に、記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物のうちのいずれか１つを、追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）と一緒に投与するステップを含む方法を提供する。
任意選択で、化学療法剤、抗腫瘍剤、抗血管新生剤、チロシンキナーゼ阻害剤又はＰＤ－１経路阻害剤が、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、多特異性抗体、コンジュゲート又は医薬組成物の投与と同時に、その前に又はその後に投与される。
ある特定の実施形態では、対象は、哺乳動物であり、好ましくは、対象は、ヒトである。
したがって、別の態様では、本発明は、対象における腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の、抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、コンジュゲート、融合タンパク質、医薬組成物、又は本発明の医薬組成物を、追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）と一緒に投与するステップを含む方法を提供する。
本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、コンジュゲート、融合タンパク質又は医薬組成物は、医薬において公知の任意の剤形、例えば、錠剤、丸剤、懸濁剤、乳剤、液剤、ゲル剤、カプセル剤、粉末剤、顆粒剤、エリキシル剤、ロゼンジ、坐剤、注射剤（注射剤溶液、滅菌注射可能粉末及び濃縮注射可能溶液を含む）、吸入剤、スプレー剤などとして製剤化することができる。好ましい剤形は、意図される投与経路及び治療的使用に依存する。本発明の医薬組成物は、製造及び保管条件下で無菌及び安定でなければならず、注射剤に調製することができる。
加えて、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、好都合な投与のために、医薬組成物の単位剤形中に存在し得る。
本発明の医薬組成物は、「治療有効量」又は「予防有効量」の、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、ＣＡＲ細胞、多特異性抗体、腫瘍溶解性ウイルス、融合タンパク質又はコンジュゲートを含み得る。「予防有効量」は、疾患の発生を予防するか、停止するか、又は遅延させるのに十分な量を意味する。「治療有効量」は、疾患を患っている患者において疾患及びその合併症を治癒するか、又は少なくとも部分的に予防するのに十分な量、例えば、０．１ｍｇ／ｍＬ～５０００ｍｇ／ｍＬを意味する。
本発明では、対象は、ヒトなどの哺乳動物であってもよい。
検出方法及びキット
本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＰＤ－１に特異的に結合することができ、そのため、試料中のＰＤ－１の存在又はレベルを検出するために使用することができる。
そのため、別の態様では、本発明は、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を含むキットを提供する。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、検出可能なマーカーを有する。好ましい実施形態では、キットは、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を特異的に認識する第２の抗体を更に含む。好ましくは、第２の抗体は、検出可能なマーカーを更に含む。
本発明では、検出可能なマーカーは、蛍光、分光法、光化学、生化学、免疫学、電気学、光学又は化学によって検出される任意の物質であってもよい。そのようなマーカーが、イムノアッセイ（例えば、酵素結合イムノアッセイ、ラジオイムノアッセイ、蛍光イムノアッセイ、化学発光イムノアッセイなど）のために好適であることが特に好ましい。そのようなマーカーは、当技術分野において周知であり、限定されるものではないが、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β－ガラクトシダーゼ、ウレアーゼ、グルコースオキシダーゼなど）、放射性核種（例えば、３Ｈ、１２５Ｉ、３５Ｓ、１４Ｃ又は３２Ｐ）、蛍光色素（例えば、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、フルオレセイン、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）、フィコエリトリン（ＰＥ）、テキサスレッド、ローダミン、量子ドット又はシアニン色素誘導体（例えば、Ｃｙ７、Ａｌｅｘａ ７５０））、アクリジンエステル化合物、磁気ビーズ（例えば、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標））、コロイド金若しくは着色ガラス若しくはプラスチック（例えば、ポリスチレン、ポリプロピレン、ラテックスなど）ビーズなどの熱量測定マーカー、及び上記マーカーによって修飾されたアビジン（例えば、ストレプトアビジン）に結合するために使用されるビオチンが挙げられる。そのようなマーカーの使用は、限定されるものではないが、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同第４，２７５，１４９号；及び同第４，３６６，２４１号を含む特許において教示されており、その全ては、参照によって本明細書に組み込まれる。本発明に包含されるマーカーは、当技術分野において公知の方法によって検出することができる。例えば、放射活性マーカーは、写真用フィルム又はシンチレーション計算機を使用して検出されてもよく、蛍光マーカーは、放射光を検出する光検出器を使用して検出されてもよい。酵素マーカーは、一般に、酵素ために基質を提供すること、及び基質に対する酵素の効果によって生成する反応生成物を検出することによって検出されてもよく、熱量測定マーカーは、簡便な視覚性着色マーカーによって検出されてもよい。一部の実施形態では、上記に記載の検出可能なマーカーは、潜在的な立体障害を低減するために、異なる長さのリンカーを介して、本発明の組換えタンパク質に連結されていてもよい。
別の態様では、本発明は、試料中のＰＤ－１の存在又はレベルを検出するための方法であって、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を用いるステップを含む方法を提供する。好ましい実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、依然として検出可能なマーカーを有する。別の好ましい実施形態では、方法は、検出可能なマーカーを有する薬剤を使用して、本発明の抗体又はその抗原結合性断片を検出するステップを更に含む。方法は、診断目的又は非診断目的（例えば、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１経路の研究、薬物スクリーニング、組織化学的分析など）のために使用されてもよい。ある特定の実施形態では、非診断目的のための試料は、細胞株又はｅｘ ｖｉｖｏの細胞培養物などの細胞試料である。
別の態様では、本発明は、試料中のＰＤ－１の存在又はレベルを検出するための方法であって、試料を、本発明の抗体又はその抗原結合性断片と、抗体又はその抗原結合性断片及びＰＤ－１の間で複合体の形成を可能にする条件下で接触させるステップ、及び複合体の形成を検出するステップを含む方法を提供する。
別の態様では、試料中のＰＤ－１の存在又はレベルを検出するためのキットを調製するための本発明の抗体又はその抗原結合性断片の使用が提供される。別の態様では、本発明は、本発明の抗体若しくはその抗原結合性断片、核酸、ベクター、宿主細胞、多特異性抗体、コンジュゲート、融合タンパク質又は医薬組成物のうちの１つ若しくは複数を含む診断用又は治療用キットを提供する。任意選択で、診断用又は治療用キットは、それを使用するための使用説明書を更に含む。
本発明の抗体又は抗原結合性断片は、ＰＤ－１に対する高い結合親和性を有し、かつ強い特異性を有する。したがって、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置するために好適である。本発明のヒト化抗体及びＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体は、親のマウス抗体の機能及び性質を保持するだけでなく、より高いヒト化度も有し、そのため、免疫原性反応を引き起こすことなく、ヒト対象に安全に投与することができる。したがって、本発明の抗体又は抗原結合性断片は、高い臨床的価値がある。
用語の定義
本発明では、他に定義されない限り、本明細書において使用される全ての科学用語及び技術用語は、本発明が属する分野の当業者によって通常理解される意味と同じ意味を有する。加えて、本明細書において使用される、細胞培養、生化学、核酸化学、免疫研究室及び他の操作ステップは、対応する分野において広く使用される従来のステップである。その一方で、本発明をより良好に理解するために、関連する用語の定義及び説明を下記に提供する。
中国語の文法には単数及び複数の規則はなく、本明細書において使用される名詞は、単数及び複数の両方を指し、これは文脈に従って特に決定することができ、したがって、本明細書で使用される名詞を英語に翻訳すると、「１つ又は複数」が先行し得る。
本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、典型的には、軽鎖（ＬＣ）及び重鎖（ＨＣ）をそれぞれ有する、ポリペプチド鎖の２つの対で構成される免疫グロブリン分子を指す。軽鎖は、カッパ（κ）又はラムダ（λ）軽鎖のいずれかとして分類される。重鎖は、μ、δ、γ、α又はεとして分類することができ、抗体のアイソタイプは、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥとして定義することができる。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定量領域は、約１２個以上のアミノ酸の「Ｊ」セグメントによって連結され、重鎖は、約３個以上のアミノ酸の「Ｄ」セグメントも含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（ＶＨ）及び重鎖定常領域（ＣＨ）で構成される。重鎖定常領域は、３つのドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３）で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）で構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメインＣＬで構成される。定常ドメインは、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）及び伝統的な補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主の組織又は因子への免疫グロブリンの結合を媒介するなどの様々なエフェクター機能を示す。ＶＨ及びＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる比較的保存された領域で中断された超可変領域（相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる）に細分化することもできる。それぞれのＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシル末端に以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配列された３つのＣＤＲ及び４つのＦＲで構成される。それぞれの重鎖／軽鎖の対の可変領域（ＶＨ及びＶＬ）は、それぞれ抗原結合部位を形成する。様々な領域又はドメイン中のアミノ酸の分布は、Ｋａｂａｔ、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９８７年及び１９９１年））、又はＣｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（１９８７年） Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１～９１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａら、（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ ３４２巻：８７８～８８３頁に記載の定義に従ってもよい。
本明細書で使用される場合、「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」という用語は、抗原結合の原因となる抗体の可変領域中のアミノ酸残基を指す。これらのアミノ酸残基の正確な境界は、当技術分野において公知の様々な番号付けシステム、例えば、Ｋａｂａｔの番号付けシステム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ， Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．、１９９１年）、Ｃｈｏｔｈｉａの番号付けシステム（Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（１９８７年））Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６巻：９０１～９１７頁；Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８９年）Ｎａｔｕｒｅ ３４２巻：８７８～８８３頁）又はＩＭＧＴの番号付けシステム（Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７巻：５５～７７頁、２００３年）に従って定義され得る。所与の抗体について、当業者は、それぞれの番号付けシステムによって定義されるＣＤＲを容易に特定する。また、異なる番号付けシステムの間の対応は、当業者に周知である（例えば、Ｌｅｆｒａｎｃら、Ｄｅｖ．Ｃｏｍｐａｒａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７巻：５５～７７頁、２００３年を参照されたい）。
本発明では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片に含有されるＣＤＲは、当技術分野において公知の様々な番号付けシステムに従って決定され得る。ある特定の実施形態では、本発明の抗体又はその抗原結合性断片に含有されるＣＤＲは、好ましくは、Ｋａｂａｔ又はＩＭＧＴの番号付けシステムによって決定される。
本明細書で使用される場合、「フレームワーク領域」又は「ＦＲ」残基という用語は、上記で定義されたＣＤＲ残基以外の抗体の可変領域中のそれらのアミノ酸残基を指す。
本明細書で使用される場合、「生殖細胞系抗体遺伝子」という用語は、特異的な免疫グロブリンの発現をもたらす遺伝子の再配列及び変異の変異プロセスを受けていない非リンパ球によってコードさえる免疫グロブリン配列である。本発明の様々な実施形態によって提供される利点は、生殖細胞系列抗体遺伝子が、成熟抗体遺伝子よりも個々の動物種の特性を示すより重要なアミノ酸配列の構造を保持しているというコンセンサスに由来する。したがって、この種に治療的に適用される場合、それは、この種によって外因性物質としてあまり認識されない。
「抗体」という用語は、それを生成するための任意の特定の方法によって限定されない。例えば、それは、組換え抗体、モノクローナル抗体及びポリクローナル抗体を含む。抗体は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブタイプ）、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ又はＩｇＭ抗体などの異なるアイソタイプの抗体であってもよい。
本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合性断片」という用語は、全長抗体による結合と同じ抗原に特異的に結合する能力、及び／又は抗原に特異的に結合するために全長抗原と競合する能力を保持する、全長抗体のポリペプチド断片などの抗体のポリペプチド断片を指し、「抗原結合性部分」としても公知である。一般に、全ての目的のためにその全体が参照によって本明細書に組み込まれる、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第７章（Ｐａｕｌ，Ｗ．編、第２版、Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９年））を参照されたい。抗体の抗原結合性断片は、組換えＤＮＡ技術によって、又は無傷抗体の酵素的若しくは化学的切断によって、生成することができる。抗原結合性断片の非限定的な例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｄ、Ｆｖ、ｄＡｂ及び相補性決定領域（ＣＤＲ）断片、一本鎖抗体（例えば、ｓｃＦｖ）、キメラ抗体、ダイアボディ、直鎖状抗体、ナノボディ（例えば、Ａｂｌｙｎｘからの技術による）、ドメイン抗体（例えば、Ｄｏｍａｎｔｉｓからの技術による）、及びポリペプチドに特異的な抗原結合能力を付与するのに十分な抗体の少なくとも一部分を含むポリペプチドが挙げられる。遺伝子操作して改変された抗体バリアントは、Ｈｏｌｌｉｇｅｒら、２００５年；Ｎａｔ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、２３巻：１１２６～１１３６頁に概説されている。
本明細書で使用される場合、「全長抗体」という用語は、２つの「全長重鎖」及び２つの「全長軽鎖」で構成される抗体を意味する。ここで、「全長重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端に、重鎖可変領域（ＶＨ）、重鎖定常領域ＣＨ１ドメイン、ヒンジ領域（ＨＲ）、重鎖定常領域ＣＨ２ドメイン、及び重鎖定常領域ＣＨ３ドメインで構成されるポリペプチド鎖を指し、全長抗体がＩｇＧアイソタイプである場合、これは、任意選択で、重鎖定常領域ＣＨ４ドメインを更に含む。好ましくは、「全長重鎖」は、Ｎ末端からＣ末端に、ＶＨ、ＣＨ１、ＨＲ、ＣＨ２及びＣＨ３で構成されるポリペプチド鎖である。「全長軽鎖」は、Ｎ末端からＣ末端に、軽鎖可変領域（ＶＬ）及び軽鎖定常領域（ＣＬ）で構成されるポリペプチドである。全長抗体鎖の２つの対は、ＣＬ及びＣＨ１の間のジスルフィド架橋、及び２つの全長重鎖のＨＲの間のジスルフィド架橋によって連結される。本発明の全長抗体は、ヒトなどの単一の種に由来していてもよく、またキメラ抗体又はヒト化抗体であり得る。本発明の全長抗体は、それぞれＶＨ及びＶＬの対によって形成される２つの抗原結合部位を含み、この部位は、同じ抗原を特異的に認識／結合する。
本明細書で使用される場合、「Ｆｄ断片」という用語は、ＶＨ及びＣＨ１ドメインで構成される抗体断片を意味し、「ｄＡｂ断片」という用語は、ＶＨドメインで構成される抗体断片を意味し（Ｗａｒｄら、Ｎａｔｕｒｅ ３４１巻：５４４～５４６頁（１９８９年））、「Ｆａｂ断片」という用語は、ＶＬ、ＶＨ、ＣＬ及びＣＨ１ドメインで構成される抗体断片を意味し、「Ｆ（ａｂ’）２断片」という用語は、ヒンジ領域においてジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む抗体断片を意味し、「Ｆａｂ断片」という用語は、完全な軽鎖及び重鎖のＦｄ断片（ＶＨ及びＣＨ１ドメインからできている）で構成されるＦ（ａｂ’）２断片において２つの重鎖断片を連結するジスルフィド架橋を減らすことによって得られる断片を意味する。
本明細書で使用される場合、「Ｆｖ断片」という用語は、抗体の単一アームのＶＬ及びＶＨドメインで構成される抗体断片を意味する。Ｆｖ断片は、一般に、完全な抗原結合部位を形成することができる最も小さな抗体断片であると考えられる。それは、一般に、６つのＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与すると思われる。しかしながら、１つの可変領域（３つの抗原特異的ＣＤＲのみを含有するＦｄ断片など）でさえ抗原を認識及び結合することができるが、完全な結合部位よりも低い親和性を有する可能性がある。
本明細書で使用される場合、「Ｆｃ断片」という用語は、抗体の第１の重鎖の第２及び第３の定常領域を、抗体の第２の重鎖の第２及び第３の定常領域に、ジスルフィド架橋を介して連結することによって形成される抗体断片を意味する。抗体のＦｃ断片は、抗原結合に関与しないが多くの異なる機能を有する。
本明細書で使用される場合、「ｓｃＦｖ」という用語は、ＶＬ及びＶＨがリンカーによって連結されている、ＶＬ及びＶＨドメインを含む単一のポリペプチド鎖を指す（例えば、Ｂｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２巻：４２３～４２６頁（１９８８年）；Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５巻：５８７９～５８８３頁（１９８８年）；及びＰｌｕｃｋｔｈｕｎ、Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、１１３巻、Ｒｏｓｅｂｕｒｇ及びＭｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２６９～３１５頁（１９９４年）を参照されたい）。そのようなｓｃＦｖ分子は、一般式：ＮＨ２－ＶＬ－リンカー－ＶＨ－ＣＯＯＨ又はＮＨ２－ＶＨ－リンカー－ＶＬ－ＣＯＯＨを有し得る。当技術分野における好適なリンカーは、繰り返されるＧＧＧＧＳアミノ酸配列又はそのバリアントで構成される。例えば、アミノ酸配列のリンカー（ＧＧＧＧＳ）４又はそのバリアントを使用することができる（Ｈｏｌｌｉｇｅｒら（１９９３年）、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０巻：６４４４～６４４８頁）。本発明において使用され得る他のリンカーは、Ａｌｆｔｈａｎら（１９９５年）、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．８巻：７２５～７３１頁；Ｃｈｏｉら（２００１）、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３１巻：９４～１０６頁；Ｈｕら（１９９６年）、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５６巻：３０５５～３０６１頁；Ｋｉｐｒｉｙａｎｏｖら（１９９９）、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３巻：４１～５６頁及びＲｏｏｖｅｒｓら（２００１）、Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．に記載されている。一部の場合では、ジスルフィド架橋はまた、ｓｃＦｖのＶＨ及びＶＬの間に存在してもよい。本明細書で使用される場合、「ジ－ｓｃＦｖ」という用語は、２つのｓｃＦｖを連結することによって形成される抗体断片を指す。
本明細書で使用される場合、「ダイアボディ」という用語は、ＶＨ及びＶＬドメインが、単一のポリペプチド鎖において発現するが、使用されるリンカーが同じ鎖の２つのドメインの間で対形成するのを可能にするには短すぎ、そのためドメインを他の鎖の相補的ドメインと対形成させ、２つの抗原結合部位を生成することを意味する（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０巻：６４４４～６４４８頁（１９９３年）及びＰｏｌｊａｋ Ｒ．Ｊ．ら、Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ２巻：１１２１～１１２３頁（１９９４年）を参照されたい）。
本明細書で使用される場合、「抗体模倣体」は、抗体の構造なしではあるが、抗体としての抗原への特異的な結合を指す。それらは、通常、約３～２０ｋＤａのモル質量を有する人工ペプチド又はタンパク質である。例は、設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）及びフィノマーである。設計アンキリンリピートタンパク質（ＤＡＲＰｉｎ）は、中国特許出願公開第１０４３４１５２９号に記載のように、ＩｇＧ抗体、ｓｃＦｖ－Ｆｃ抗体断片又はそれらの組合せに連結され得る。抗ＩＬ－１７ａフィノマーは、国際公開第２０１５／１４１８６２号に記載のように、抗ＩＬ－６Ｒ抗体に結合する。
上記抗体断片のそれぞれは、全長抗体が結合する同じ抗原に特異的に結合する能力、及び／又は抗原に特異的に結合するために全長抗体と競合する能力を保持する。
抗原結合性断片（例えば、上記に記載の抗体断片）は、当業者に公知の従来技術（例えば、組換えＤＮＡ技術、又は酵素的若しくは化学的切断法）を使用して、所与の抗体（例えば、本発明によって提供される抗体）から得てもよく、抗体の抗原結合性断片は、無傷抗体に関して同じ方法で特異的にスクリーニングされる。
本明細書では、文脈において他が明確に示されない限り、「抗体」という用語への言及は、無傷抗体だけでなく、その抗原結合性断片も含む。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」、「ＭｃＡｂ」及び「ｍＡｂ」という用語は、同じ意味を有し、互換可能に使用され、これは、非常に相同の抗体分子の集団、すなわち、自然発生的に生じることがある天然の変異を除いて同一の抗体分子の集団に由来する抗体又はその断片を指す。モノクローナル抗体は、抗原上の単一のエピトープに対して高い特異性を有する。モノクローナル抗体と比較して、ポリクローナル抗体は、通常、少なくとも２つ以上の異なる抗体を含有し、これは通常、抗原上の異なるエピトープを認識する。更にまた、「モノクローナル」という修飾語は、抗体の特徴が、非常に相同の抗体の集団から得られ、抗体を調製するための任意の特定の方法を必要とすると理解することができないことを単に示す。
本発明のモノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（例えば、Ｋｏｈｌｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻：４９５頁、１９７５年を参照されたい）、組換えＤＮＡ技術（例えば、米国特許出願第４，８１６，５６７号を参照されたい）又はファージ抗体ライブラリー技術（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、Ｎａｔｕｒｅ ３５２巻：６２４～６２８頁、１９９１年又はＭａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２巻：５８１～５９７頁、１９９１年を参照されたい）などの様々な技術によって調製することができる。
例えば、モノクローナル抗体は、以下の通り調製することができる。最初に、マウス又は他の好適な宿主動物を、免疫原（必要によりアジュバントを添加する）で免疫する。免疫された後、動物は、ｉｎ ｖｉｖｏで免疫原に特異的に結合する抗体を分泌するリンパ球を産生する。加えて、リンパ球は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの免疫化によって得ることもできる。目的のリンパ球を収集し、ＰＥＧなどの好適な融合試薬を使用して骨髄腫細胞と融合させて、ハイブリドーマ細胞を得る（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９～１０３頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９６年）。上記のようにして調製されたハイブリドーマ細胞を、成長のために好適な培養培地に播種し、次いで、これを特異的抗原に対するモノクローナル抗体の産生を検出するために使用することができる。ハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を決定するための方法としては、例えば、免疫沈降、又はラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）などのｉｎ ｖｉｔｒｏ結合アッセイが挙げられる。例えば、モノクローナル抗体の親和性は、Ｍｕｎｓｏｎら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７巻：２２０頁（１９８０年）に記載のスキャッチャード分析によって決定することができる。ハイブリドーマによって産生された抗体の特異性、親和性及び反応性を決定した後、目的の細胞株を、Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ、５９～１０３頁、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、１９９６年に記載の標準的な限界希釈法によってサブクローニングすることができる。好適な培養培地は、ＤＭＥＭ又はＲＰＭＩ－１６４０であり得る。加えて、ハイブリドーマ細胞は、腹水の腫瘍の形態で、動物においてｉｎ ｖｉｖｏで成長させることもできる。サブクローニングされた細胞によって分泌されたモノクローナル抗体は、従来の免疫グロブリン精製法、例えば、プロテインＡアガロースゲル、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析又はアフィニティークロマトグラフィーなどを使用することによって、細胞培養培地、腹水又は血清から単離することができる。
モノクローナル抗体は、遺伝子を操作する組換え技術によって得ることもできる。モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子をコードするＤＮＡ分子を、モノクローナル抗体の重鎖及び軽鎖の遺伝子に特異的に結合する核酸プライマーを使用するＰＣＲ増幅によってハイブリドーマ細胞から単離することができる。得られたＤＮＡ分子を、発現ベクターに挿入し、それを用いて、次いで、宿主細胞（大腸菌細胞、ＣＯＳ細胞、ＣＨＯ細胞又は免疫グロブリンを産生しない他の骨髄腫細胞）にトランスフェクトし、好適な条件下で培養して、組換えで発現した目的の抗体を得る。
抗体は、プロテインＡ又はプロテインＧを使用するアフィニティークロマトグラフィーなどの周知の技術によって精製することができる。その後、又は代わりに、特異的抗原（抗体によって認識される標的分子）又はその抗原性エピトープを、カラム上に固定することができ、免疫学的特異的抗体を免疫－アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。免疫グロブリンの精製のために、例えば、Ｄ．Ｗｉｌｋｉｎｓｏｎ（Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ、Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ， Ｉｎｃ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ Ｐａ．によって公開、１４巻、８号（２０００年４月１７日）、２５～２８頁）に言及し得る。
本明細書で使用される場合、２つの配列の間の「同一性％」は、２つの配列に共通の同一の位置の数の関数であるが（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）、２つの配列が最適に整列される場合に、導入することが必要なギャップの数及びそれぞれのギャップの長さを考慮する。配列の整列及び２つの配列の間の同一性％の決定は、数学的アルゴリズムによって達成することができる。例えば、２つのアミノ酸配列の間の同一性％は、Ｅ．Ｍｅｙｅｒｓ及びＷ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ．Ａｐｐ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４巻：１１～１７頁（１９８８年））のアルゴリズムによって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「同一性％」を有する配列は、それと整列されるか、又はそれが由来する配列の抗体－結合特異性などの重要な生物学的活性を保持する。１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、又はそれらの任意の組合せを有する配列は、それと整列されるか、又はそれが由来する配列の抗体－結合特異性などの重要な生物学的活性を保持する。「同一性％」を有するヌクレオチド配列又は３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドが異なるヌクレオチド配列は、それが整列されるか、又はそれが由来する配列と類似の機能を達成することができ、例えば、全ての発現タンパク質は、同じ抗原又は分子に特異的に結合することができる。
本明細書で使用される場合、「キメラ抗体」という用語は、その軽鎖又は／及び重鎖の一部分が抗体（特定の種に由来し得るか、又は特異的抗体のクラス若しくはサブクラスに属し得る）に由来し、軽鎖又は／及び重鎖の他の部分が、別の抗体（同じ若しくは異なる種に由来していてもよく、又は同じ若しくは異なる抗体のクラス若しくはサブクラスに属していてもよい）に由来し、任意の場合では、標的抗原に対する結合活性を保持する、そのような抗体を意味する（Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１巻：６８５１～６８５５頁（１９８４年））。
本明細書で使用される場合、「ヒト化抗体」という用語は、アミノ酸配列が、ヒト抗体の配列との相同性を増加させるように改変された、遺伝子操作された非ヒト抗体を指す。一般に、ヒト化抗体のＣＤＲ領域の全て又は一部は、非ヒト抗体（ドナー抗体）に由来し、非ＣＤＲ領域（例えば、可変領域及び／又は定常領域中のＦＲ）の全て又は一部は、ヒト免疫グロブリン（アクセプター抗体）に由来する。ヒト化抗体は、通常、限定されるものではないが、抗原特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を改善する能力、免疫応答を増強する能力などを含む、ドナー抗体の期待される性質を保持する。ドナー抗体は、所望の性質（例えば、抗原特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を増強する能力及び／又は免疫応答を増強する能力）を有する、マウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類（例えば、カニクイザル）の抗体であってもよい。
ヒト化抗体は、それらが非ヒトドナー抗体（例えば、マウス抗体）の期待される性質を保持するだけでなく、ヒト対象における非ヒトドナー抗体（例えば、マウス抗体）の免疫原性を効果的に低減するので、特に有利である。しかしながら、ドナー抗体のＣＤＲ及びアクセプター抗体のＦＲの間の一致の問題に起因して、ヒト化抗体の期待される性質（例えば、抗原特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を改善する能力及び／又は免疫応答を増強する能力）は、一般に、非ヒトドナー抗体（例えば、マウス抗体）のものよりも低い。
そのため、当技術分野における研究者は、ディープリサーチを開発し、抗体のヒト化におけるいくつかの前進があったが（例えば、Ｊｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ、３２１巻：５２２～５２５頁（１９８６年）；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻：３２３～３２９頁（１９８８年）；Ｐｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２巻：５９３～５９６頁（１９９２年）；及びＣｌａｒｋ、Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１巻：３９７～４０２頁（２０００年）を参照されたい）、それにもかかわらず、産生したヒト化抗体が可能な限り高いヒト化度を有するだけでなく、ドナー抗体の期待される性質を可能な限り保持するように、所与のドナー抗体を十分にヒト化する方法に対する詳細なガイダンスは先行技術に提供されていない。高いヒト化度（例えば、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％のヒト化）を有するだけでなく、特定のドナー抗体の期待される性質を保持するヒト化抗体を得るために、当業者は、多くの創造性に富んだ作業を費やすことによって、特定のドナー抗体を活用し、調査し、かつ改変しなければならない。
本発明では、可能な限り高いドナー抗体の性質（例えば、抗体特異性、親和性、反応性、免疫細胞の活性を改善する能力及び／又は免疫応答を増強する能力）を保持するヒト化抗体を作製するために、本発明のヒト化抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）は、ヒトアクセプター抗体のアミノ酸残基、及び非ヒトドナー抗体の対応するアミノ酸残基の両方を含む。
本出願では、本発明の抗体の期待される性質は、（１）ＰＤ－１（特に、ヒトＰＤ－１）を特異的に認識する／結合する、（２）ＰＤ－１のＰＤＬ－１への結合を阻害する、及び／又はブロックする、（３）ＰＤ－１のＰＤＬ－１への結合によって媒介される細胞内シグナル伝達を阻害する、及び／又はブロックする、（４）免疫細胞の活性を改善する、（５）免疫応答を増強する、（６）抗体依存性細胞媒介性食作用（ＡＤＣＰ）及び／又は抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）及び／若しくは補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を低減するか、又は排除する、を含む。本発明のヒト化抗体は、親抗体（マウス抗体又はマウス－ヒトキメラ抗体）の上記で言及した期待される性質のうちの１つ又は複数を保持する。
本発明のキメラ抗体又はヒト化抗体は、上記のようにして調製されたマウスモノクローナル抗体の配列に従って調製することができる。重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡは、標的マウスハイブリドーマから得ることができ、標準的な分子生物学技術を使用して、非マウス（例えば、抗体）免疫グロブリン配列を含むように遺伝子操作する。
キメラ抗体を調製するために、マウス免疫グロブリンの可変領域を、当技術分野において公知の方法（例えば、Ｃａｂｉｌｌｙらに対する米国特許第４，８１６，５６７号を参照されたい）を使用して、ヒト免疫グロブリンの定常領域に連結させることができる。例えば、ＶＨをコードするＤＮＡを、重鎖定常領域をコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結させて、全長重鎖遺伝子を得るか、又はＶＬをコードするＤＮＡを、軽鎖定常領域ＣＬをコードする別のＤＮＡ分子に作動可能に連結させて、全長軽鎖遺伝子（及びＦａｂ軽鎖遺伝子）を得る。ヒト重鎖定常領域の遺伝子及び軽鎖定常領域の遺伝子の配列は、当技術分野において公知であり（例えば、Ｋａｂａｔ，Ｅ．Ａ．ら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、米国保健福祉省、ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ第９１－３２４２を参照されたい）、これらの領域を含有するＤＮＡ断片は、標準的なＰＣＲ増幅によって得ることができる。重鎖定常領域は、ＩｇＧ１（例えば、ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８５７）、ＩｇＧ２（例えば、ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８５９）、ＩｇＧ３（例えば、ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８６０）、ＩｇＧ４（例えば、ｕｎｉｐｒｏｔ ＩＤ Ｐ０１８６１）、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＭ又はＩｇＤの定常領域、一般に好ましくは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ４の定常領域であってもよい。軽鎖定常領域は、κ又はラムダ定常領域、一般に好ましくは、κ定常領域であり得る。
ヒト化抗体を調製するために、マウスＣＤＲ領域を、当技術分野において公知の方法（Ｗｉｎｔｅｒに対する米国特許第５，２２５，５３９号；Ｑｕｅｅｎらに対する米国特許第５，５３０，１０１号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６２号及び同第６，１８０，３７０号；並びにＬｏ，Ｂｅｎｎｙ，Ｋ．Ｃ．編、Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、２４８巻、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ、２００４年を参照されたい）を使用して、ヒトフレームワークの配列に挿入することができる。或いは、免疫化後に内因性免疫グロブリンを産生することができないが、無傷ヒト抗体ライブラリーを生成することができる、トランスジェニック動物を用いることもできる（例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０巻：２５５１頁；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ ３６２巻：２５５～２５８頁；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、１９９３年、Ｙｅａｒ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ７巻：３３頁；及びＤｕｃｈｏｓａｌら、１９９２年、Ｎａｔｕｒｅ ３５５巻：２５８頁；Ｌｏｎｂｅｒｇら（１９９４年）Ｎａｔｕｒｅ ３６８巻（６４７４号）：８５６～８５９頁；国際公開第０２／４３４７８号を参照されたい）。抗体のヒト化の他の方法としては、ファージディスプレイ技術が挙げられる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら、１９９１年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７巻：３８１頁；Ｍａｒｋｓら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９９１年、２２２巻：５８１～５９７頁；Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６年、Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈ １４巻：３０９頁）。
本明細書で使用される場合、「ヒト化度」という用語は、ヒト化抗体中の非ヒトアミノ酸残基の数を評価するための指標である。ヒト化抗体のヒト化度は、例えば、ヒトＶドメインを有する可変領域配列の相同性についてのＩＭＧＴウェブサイトからのＤｏｍａｉｎＧａｐＡｌｉｇｎによって予測することができる。
本明細書で使用される場合、「特異的結合」という用語は、抗体及びそれが向けられる抗原の間の反応などの２つの分子の間の非ランダム結合反応を指す。特異的結合相互作用の強さ又は親和性は、相互作用の平衡解離定数（ＫＤ）によって示すことができる。本発明では、「ＫＤ」という用語は、特異的抗体－抗原の相互作用の解離平衡定数を指し、これは抗体及び抗原の間の結合親和性を記載するために使用される。平衡解離定数が小さいほど、抗原－抗体の結合がより緊密になり、抗体及び抗原の間の親和性が高くなる。ある特定の実施形態では、抗原（又は抗原に特異的な抗体）への抗体特異的結合は、抗体が、約１０－９Ｍ未満、例えば、約１０－９Ｍ、１０－１０Ｍ、１０－１１Ｍ若しくは１０－１２Ｍ未満、又はそれよりも低い親和性（ＫＤ）で抗原に結合することを意味する。一部の実施形態では、ＫＤ≦１０×１０－８Ｍ（好ましくは、ＫＤ≦５×１０－９Ｍ）である場合、本発明の抗体又はその抗原結合性断片は、ＰＤ－１に特異的に結合すると考えられる。
２つの分子の間の特異的結合性は、当技術分野において周知の方法を使用して、測定することができる。ある方法は、抗原－結合部位／抗原複合体の形成及び解離の速度を測定することを含む。「結合速度定数」（ｋａ又はｋｏｎ）及び「解離速度定数」（ｋｄｉｓ又はｋｏｆｆ）は両方とも、濃度並びに会合及び解離の実際の速度から計算することができる（Ｍａｌｍｑｖｉｓｔ Ｍ、Ｎａｔｕｒｅ、１９９３年、３６１巻：１８６～１８７頁を参照されたい）。ｋｄｉｓ／ｋｏｎの比は、解離定数ＫＤに等しい（Ｄａｖｉｅｓら、Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖ Ｂｉｏｃｈｅｍ、１９９０年；５９巻：４３９～４７３頁を参照されたい）。ＫＤ、ｋｏｎ及びｋｄｉｓの値は、任意の有効な方法によって測定することができる。ある特定の実施形態では、解離定数は、生物発光干渉分光法（例えば、ＦｏｒｔｅＢｉｏ Ｏｃｔｅｔアッセイ）によって測定することができる。加えて、解離定数は、表面プラズモン共鳴技術（Ｂｉａｃｏｒｅなど）又はＫｉｎｅｘａによって測定することができる。
本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、ポリヌクレオチドが挿入され得る核酸ビヒクルを指す。挿入されたポリヌクレオチドによってコードされるタンパク質の発現が可能である場合、ベクターは、発現ベクターと呼ばれる。ベクターは、形質転換、形質導入又はトランスフェクションにより宿主細胞に導入することができ、その結果、運ばれた遺伝子材料エレメントが、宿主細胞中で発現し得る。ベクターは、当業者に周知であり、限定されるものではないが、プラスミド；ファージミド；コスミド；人工染色体、例えば、酵母人工染色体（ＹＡＣ）、細菌人工染色体（ＢＡＣ）又はＰ１－由来人工染色体（ＰＡＣ）；ファージ、例えば、λファージ又はＭ１３ファージ、及び動物ウイルスが挙げられる。ベクターとして使用することができる動物ウイルスとしては、限定されるものではないが、レトロウイルス（レンチウイルスを含む）、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス、ヘルペスウイルス（例えば、単純ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス、バキュロウイルス、パピローマウイルス、パポーバウイルス（例えば、ＳＶ４０）が挙げられる。ベクターは、限定されるものではないが、プロモーター配列、転写開始配列、エンハンサー配列、選択エレメント及びレポーター遺伝子を含む、発現を制御するエレメントを含有していてもよい。加えて、ベクターはまた、複製開始点を含有していてもよい。
本明細書で使用される場合、「宿主細胞」という用語は、ベクターが導入され得る細胞を指し、限定されるものではないが、大腸菌若しくは枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などの原核細胞、酵母細胞若しくはアスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）などの真菌細胞、Ｓ２ショウジョウバエ細胞若しくはＳｆ９などの昆虫細胞、又は線維芽細胞、ＣＨＯ細胞、ＣＯＳ細胞、ＮＳＯ細胞、ＨｅＬａ細胞、ＢＨＫ細胞、ＨＥＫ２９３細胞若しくはヒト細胞などの動物細胞が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「同一性」という用語は、２つのポリペプチド又は２つの核酸の間の配列の一致度を指すために使用される。比較のための２つの配列中の位置が、同じ塩基又はアミノ酸単量体サブユニットによって占有される場合（例えば、２つのＤＮＡ分子のそれぞれにおける位置が、アデニンによって占有されるか、又は２つのポリペプチドのそれぞれにおける位置が、リシンによって占有される）、その結果、分子は、その位置で同一である。２つの配列の間の「同一性パーセンテージ」は、比較される位置の数によって割られた２つの配列によって共有される一致する位置の数×１００の関数である。例えば、２つの配列において、１０の位置のうち６つの位置が一致する場合、その結果、２つの配列は、６０％同一である。例えば、ＤＮＡ配列ＣＴＧＡＣＴ及びＣＡＧＧＴＴは、５０％の同一性を有する（全部で６つの位置のうち３つの位置が一致する）。典型的には、２つの配列を、最大同一性のために、比較及び整列させる。そのような整列は、例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８巻：４４３～４５３頁の方法を使用して実現することができ、これは、Ａｌｉｇｎプログラム（ＤＮＡｓｔａｒ，Ｉｎｃ）などのコンピュータープログラムによって好都合に行うことができる。加えて、２つのアミノ酸配列の間の同一性パーセンテージは、Ｂｌｏｓｓｕｍ Ｍａｔｒｉｘ ６２又はＰＡＭ２５０のいずれか、並びに１６、１４、１２、１０、８、６又は４のギャップ重さ及び１、２、３、４、５又は６の長さ重さを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍにおいて利用可能）に組み込まれたＧＡＰプログラムにおけるＮｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈのアルゴリズム（Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ．４８巻：４４４～４５３頁（１９７０年））によって決定することができる。
本明細書で使用される場合、「保存的置換」という用語は、アミノ酸配列を含むタンパク質／ポリペプチドの期待される性質に悪影響を与えないか、又はそれを変えないアミノ酸置換を意味する。例えば、保存的置換は、部位特異的変異誘発及びＰＣＲ媒介変異誘発などの当技術分野において公知の標準的な技術によって導入され得る。保存的アミノ酸置換は、類似の側鎖を有するアミノ酸残基、例えば、対応するアミノ酸残基と物理的又は機能的に類似の残基（例えば、類似のサイズ、形状、電荷、共有結合又は水素結合を形成する能力を含む化学的性質などを有する）によるアミノ酸残基の置換を含む。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当技術分野において定義されている。これらのファミリーとしては、塩基性側鎖（例えば、リシン、アルギニン及びヒスチジン）、酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、非荷電極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、ベータ分枝側鎖（例えば、トレオニン、バリン、イソロイシン）及び芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）を有するアミノ酸が挙げられる。したがって、対応するアミノ酸残基を、同じ側鎖ファミリーからの別のアミノ酸残基で置き換えることが好ましい。アミノ酸の保存的置換を特定するための方法は、当技術分野において周知である（例えば、参照によって本明細書に組み込まれる、Ｂｒｕｍｍｅｌｌら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２巻：１１８０～１１８７頁（１９９３年）；Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２巻（１０号）：８７９～８８４頁（１９９９年）；及びＢｕｒｋｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ Ａｃａｄ．Ｓｅｔ ＵＳＡ ９４巻：４１２～４１７頁（１９９７年）を参照されたい）。
本明細書に含まれる２０個の保存的アミノ酸の比較は、従来の使用法に従う。例えば、参照によって本明細書に組み込まれるＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ－Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（第２版、Ｅ．Ｓ．Ｇｏｌｕｂ及びＤ．Ｒ．Ｇｒｅｎ編、Ｓｉｎａｕｅｒ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ、Ｍａｓｓ．（１９９１年））を参照されたい。本発明では、「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語は、同じ意味を有し、互換可能に使用される。また、本発明では、アミノ酸は、一般に、当技術分野において周知の一文字及び三文字の略号によって表される。例えば、アラニンは、Ａ又はＡｌａと表すことができる。
本明細書で使用される場合、「薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤」という用語は、対象及び活性成分と薬理学的及び／又は生理学的に適合する担体及び／又は賦形剤を意味し、これは当技術分野において周知であり（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｇｅｎｎａｒｏ ＡＲ編、第１９版、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９５年を参照されたい）、限定されるものではないが、ｐＨ調整剤、界面活性剤、補助剤、イオン強度増強剤、希釈剤、浸透圧維持試薬、吸収遅延試薬、保存剤が挙げられる。例えば、ｐＨ調整剤としては、限定されるものではないが、リン酸緩衝液が挙げられる。界面活性剤としては、限定されるものではないが、カチオン性、アニオン性又は非イオン性界面活性剤、例えば、Ｔｗｅｅｎ－８０が挙げられる。イオン強度増強剤としては、限定されるものではないが、塩化ナトリウムが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、ｐ－ヒドロキシベンゾエート、トリクロロ－ｔｅｒｔ－ブチルアルコール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。浸透圧維持試薬としては、限定されるものではないが、糖、ＮａＣｌなどが挙げられる。吸収遅延試薬としては、限定されるものではないが、モノステアレート及びゼラチンが挙げられる。希釈剤としては、限定されるものではないが、水、水性緩衝液（例えば、緩衝食塩水）、アルコール及びポリオール（例えば、グリセロール）などが挙げられる。保存剤としては、限定されるものではないが、様々な抗細菌剤及び抗真菌剤、例えば、チオメルサレート、２－フェノキシエタノール、ｐ－ヒドロキシベンゾエート、トリクロロ－ｔｅｒｔ－ブチルアルコール、フェノール、ソルビン酸などが挙げられる。安定剤は、当業者によって一般に理解される意味を有し、これは、薬物中の活性成分の所望の活性を安定化することができ、限定されるものではないが、グルタミン酸ナトリウム、ゼラチン、ＳＰＧＡ、糖（ソルビトール、マンニトール、デンプン、スクロース、ラクトース、デキストラン又はグルコースなど）、アミノ酸（グルタミン酸、グリシンなど）、タンパク質（乾燥ホエイ、アルブミン又はカゼインなど）又はそれらの分解生成物（ラクトアルブミン加水分解物など）が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「予防」という用語は、対象において、ｉｎ ｖｉｖｏで、疾患若しくは状態若しくは症状（例えば、腫瘍、感染症又は自己免疫疾患）の開始を予防するか、又は遅延させるためのプロセスを指す。本明細書で使用される場合、「処置」という用語は、有益な又は所望の臨床結果を達成するためのプロセスを指す。本発明の目的のために、有益な又は所望の臨床結果としては、限定されるものではないが、検出可能又は検出不可能を問わず、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患の状態の安定化（すなわち、悪化させない）、疾患の進行の遅延又は遅らせる、疾患の状態の改善又は緩和、及び症状の寛解（部分的又は全て）が挙げられる。加えて、「処置」は、期待される生存（処置なし）と比較して、生存を延長することも意味し得る。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、哺乳動物、例えば、霊長類哺乳動物、例えば、ヒトを指す。一部の実施形態では、対象（例えば、ヒト）は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を有するか、又はそのような疾患を患うリスクがある。
本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、所望の効果を達成するか、少なくとも部分的に達成するのに十分な量を指す。例えば、疾患（例えば、腫瘍、感染症又は自己免疫疾患）を予防するための有効量は、疾患（例えば、腫瘍、感染症又は自己免疫疾患）の開始を予防するか、停止するか、又は遅延させるのに十分な量であり、治療有効量は、既に疾患を患っている患者の疾患及びその合併症を治癒するか、又は少なくとも部分的に予防するのに十分な量を指す。そのような有効量を決定することは、当業者の能力の範囲内である。例えば、治療的使用のために有効な量は、処置される疾患の重症度、患者自身の免疫系の一般的症状、年齢、体重及び性別などの患者の一般的状態、投与の経路、並びに同時に投与される他の処置などに依存する。
本明細書で使用される場合、「免疫細胞」という用語は、造血起源を有し、免疫応答において役割を果たす細胞、例えば、Ｂ細胞及びＴ細胞などのリンパ球；ナチュラルキラー細胞；単球、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、好塩基球及び顆粒細胞などの骨髄性細胞を含む。
本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、免疫細胞（リンパ球、抗原提示細胞、食細胞又は顆粒細胞など）及び免疫細胞又は肝臓によって産生される可溶性高分子（抗体、サイトカイン及び補体を含む）の作用を意味し、これは、侵襲性病原体、病原体に感染した細胞若しくは組織、がん細胞、又は自己免疫性若しくは病理学的炎症の場合における正常なヒト細胞若しくは組織の選択的な損傷、破壊又はヒト身体からの除去をもたらす。本発明では、「抗原特異的Ｔ細胞応答」という用語は、Ｔ細胞がＴ細胞に特異的な抗原によって刺激される場合に、Ｔ細胞によって生じる免疫応答を指す。抗原特異的刺激に応答してＴ細胞によって生じる応答の非限定的な例としては、Ｔ細胞の増殖及びサイトカイン（例えば、ＩＬ－２）の産生が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「エフェクター機能」という用語は、抗体のＦｃ領域（天然配列のＦｃ領域又はアミノ酸配列バリアントのＦｃ領域）に寄与し、かつ抗体のアイソタイプに伴って変化する、それらの生物学的活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、限定されるものではないが、Ｆｃ受容体の結合親和性、抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、抗体依存性細胞食作用（ＡＤＣＰ）、細胞表面受容体（Ｂ細胞受容体など）の下方調節、Ｂ細胞の活性化、サイトカイン分泌、抗体及び抗原－抗体複合体の半減期／クリアランス速度などが挙げられる。抗体のエフェクター機能を変えるための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、Ｆｃ領域中に変異を導入することによる。
本明細書で使用される場合、「抗体依存性細胞媒介性傷害（ＡＤＣＣ）」という用語は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）に結合するＩｇが細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球又はマクロファージ）上に存在し、これらの細胞傷害性エフェクター細胞が、抗原が結合する標的細胞に特異的に結合し、次いで細胞毒素を分泌することによって標的細胞を死滅させることを可能にする、細胞傷害性の一種を意味する。抗体のＡＤＣＣ活性を検出するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、試験される抗体及びＦｃ受容体（例えば、ＣＤ１６ａ）の間の結合活性を決定することによって評価される。
本明細書で使用される場合、「補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）」という用語は、補体成分Ｃ１ｑが抗体Ｄｃに結合することによって補体カスケードを活性化する、細胞傷害性の一種を指す。抗体のＣＤＣ活性を検出するための方法は、当技術分野において公知であり、例えば、試験される抗体及びＦｃ受容体（例えば、Ｃ１ｑ）の間の結合活性を決定することによって評価される。
「がん」及び「腫瘍」という用語は、互換可能に使用され、ｉｎ ｖｉｖｏでの異常な細胞の非制御の成長によって特徴付けられる疾患の大きなクラスを指す。調節されない細胞***は、隣接する組織に浸潤する悪性の腫瘍又は細胞の形成をもたらすことがあり、これは、リンパ系又は血流を通して身体の離れた部位に転移することがある。がんは、良性及び悪性のがん、並びに休眠中の腫瘍又は微小転移を含む。がんは、血液系悪性腫瘍も含む。
例示的な腫瘍としては、限定されるものではないが、固形腫瘍、血液腫瘍（例えば、白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫などの骨髄腫）、及び転移性、難治性又は再発性のがんの病変が挙げられ、例えば、限定されるものではないが、食道がん、消化器がん、膵臓がん、甲状腺がん、結腸直腸がん、腎臓がん、肺がん（例えば、非小細胞肺がん）、肝臓がん、胃がん、頭頸部がん、膀胱がん、乳がん、子宮がん、子宮頸がん、卵巣がん、前立腺がん、精巣がん、生殖細胞がん、皮膚がん、胸部の腺癌、胆管細胞癌、胆嚢がん、黒色腫、中皮腫、リンパ腫、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、肉腫、膠芽腫、神経膠芽腫及び白血病が挙げられる。
「血液系悪性腫瘍」という用語は、リンパ腫、白血病、骨髄腫又はリンパ系の悪性腫瘍、並びに脾臓がん及びリンパ節腫瘍を含む。例示的なリンパ腫としては、Ｂ細胞リンパ腫及びＴ細胞リンパ腫が挙げられる。Ｂ細胞リンパ腫としては、例えば、ホジキンリンパ腫が挙げられる。Ｔ細胞リンパ腫としては、例えば、皮膚Ｔ細胞性リンパ腫が挙げられる。血液系悪性腫瘍としては、二次性白血病又は急性リンパ性白血病などの白血病も挙げられる。血液系悪性腫瘍としては、骨髄腫（例えば、多発性骨髄腫）、及び他の血液系及び／又はＢ細胞若しくはＴ細胞に関連するがんも挙げられる。
「薬学的に許容できる」という用語は、分子全体、分子の断片又は組成物が動物又はヒトに適切に投与される場合に、それらが好ましくないか、アレルギー性か、又は他の有害な反応を生じないことを意味する。薬学的に許容できる担体又はその成分として使用され得る材料の具体例としては、糖（例えば、ラクトース）、デンプン、セルロース及びその誘導体、植物油、ゼラチン、ポリオール（例えば、プロピレングリコール）、アルギン酸などが挙げられる。
本発明の有益な効果
先行技術と比較して、本発明の技術的な解決手段は、以下の有益な効果を有する。
（１）本発明の抗体は、ＰＤ－１を特異的に認識／結合し、かつＰＤ－１のＰＤＬ－１又はＰＤ－Ｌ２への結合をブロックするだけでなく、免疫細胞の活性を増強し、かつｉｎ ｖｉｔｒｏ／ｉｎ ｖｉｖｏで免疫応答を刺激する。したがって、本発明の抗体は、腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置する可能性を有する。
（２）本発明の抗体（特に、ヒト化抗体）は、親のマウス抗体の機能及び性質を保持し、それによって腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び処置する可能性を有するだけでなく、極めて高いヒト化度を有し、そのため、これは、免疫原性反応を引き起こすことなく、ヒト対象に安全に投与することができる。したがって、本発明の抗体（特に、ヒト化抗体）は、高い臨床的価値がある。
抗ＰＤ－１マウス抗体のＣＨＯ－ｈＰＤ－１に対する親和性の検出。 ｈＰＤ－１トランスジェニックマウスにおけるＭＣ３８腫瘍成長を阻害する点での抗ＰＤ－１マウス抗体のｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の検出。 ＣＨＯ－ｈＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断する抗ＰＤ－１キメラ抗体の活性の検出。 抗ＰＤ－１キメラ抗体のＴｍの検出。 ｈＰＤ－１トランスジェニックマウスにおけるＭＣ３８腫瘍成長を阻害する点での抗ＰＤ－１キメラ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の検証。 ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ルシフェラーゼレポーターシステムにおける抗ＰＤ－１ヒト化抗体の機能の検証。 ＩＬ－２を発現及び分泌するようにＰＢＭＣを刺激するようにＳＥＢを促す抗ＰＤ－１ヒト化抗体（ドナーＡ）の検出。左から右へ、対照抗体１、９１Ｄ５－ＨＺ２及び２９Ｃ６－ＨＺ２の最終濃度は、１μＭから出発し、３倍希釈され、陰性対照抗体ＩｇＧの最終濃度は、１μＭであった。 ＩＬ－２を発現及び分泌するようにＰＢＭＣを刺激するようにＳＥＢを促す抗ＰＤ－１ヒト化抗体（ドナーＢ）の検出。左から右へ、対照抗体２、９１Ｄ５－ＨＺ２及び２９Ｃ６－ＨＺ２の最終濃度は、１μＭから出発し、３倍希釈され、陰性対照抗体ＩｇＧの最終濃度は、１μＭであった。 ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＣＨＯ－ｈＰＤ－１に対する親和性の検出。 ＣＨＯ－ｈＰＤ－１とＰＤ－Ｌ１との相互作用を遮断するＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の活性の検出。 ＢＴＬＡ－ｈｉｓ及びＰＤ－Ｌ１－ｈｉｓに対するＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の非特異性の検証。 ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＴｍの検出。 ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１ルシフェラーゼレポーターシステムにおけるＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の機能の検証。 ９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄヒト化抗体のＣＤ６４に対する動的親和性の検出。 ３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄヒト化抗体のＣＤ６４に対する動的親和性の検出。 対照抗体１のＣＤ６４に対する動的親和性の検出。 対照抗体３のＣＤ６４に対する動的親和性の検出。 ＡＤＣＰルシフェラーゼレポーターシステムにおけるＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の機能の検証。 ＡＤＣＣルシフェラーゼレポーターシステムにおけるＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の機能の検証。９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３の濃度は、左側（Ｙ軸の近く）から右側へ、４５０μｇ／ｍＬ、４５μｇ／ｍＬ、４．５μｇ／ｍＬ、及び４５０ｎｇ／ｍＬであり、陰性対照抗体ＩｇＧの最終濃度は、１５０μｇ／ｍＬであった。 ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体及び対照抗体それぞれの存在下でのヒト免疫系再構成Ｂ－ＮＤＧマウスモデル１の各マウス群における腫瘍体積の変化。 ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体及び対照抗体それぞれの存在下でのヒト免疫系再構成Ｂ－ＮＤＧマウスモデル１の各マウス群における体重の変化。 ＡＢ１２Ｔ８と組み合わせられたＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体、及び対照抗体、それぞれの存在下での、ヒト免疫系再構成Ｂ－ＮＤＧマウスモデル２の各マウス群における腫瘍体積の変化。 ＡＢ１２Ｔ８と組み合わせられたＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体、及び対照抗体、それぞれの存在下での、ヒト免疫系再構成Ｂ－ＮＤＧマウスモデル２の各マウス群における体重の変化。 ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の存在下でのｈＰＤ－１／ｈＴＩＭ－３トランスジェニックマウスモデルの各マウス群における腫瘍体積の変化。 ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の存在下でのｈＰＤ－１／ｈＴＩＭ－３トランスジェニックマウスモデルの各マウス群における体重の変化。
配列情報
本発明に関する配列情報は、以下の表に記載され、詳細な配列が配列表に示される。
Figure 2022550243000001
Figure 2022550243000002
Figure 2022550243000003
本発明の実施形態は、添付の図面及び実施例と組み合わせて下記で詳細に説明されることになるが、以下の図面及び実施例が本発明の例証を目的としたものに過ぎず、本発明範囲の限定を目的としたものでないことは、当業者には理解されるであろう。当業者は、本発明の様々な目的及び有利な態様を、図面及び好ましい実施形態についての以下の詳細な説明から実施できるようになる。詳細な技術又は条件の例示を伴わない例については、当技術分野の文献に記載されている技術又は条件を参照することができ（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（Ｈｕａｎｇ Ｐｅｉｔａｎｇらにより翻訳された）を参照されたい）、又は製品使用説明書に従って行うことができる。製造業者を示さずに用いられる試薬又は機器は、市場から購入することができる従来の製品である。
実施例１：抗ＰＤ－１モノクローナル抗体の調製
１．１ 抗原及び対照抗体の調製
次の３つの材料を免疫化のための抗原として使用した：（ｉ）インタクトヒトＰＤ－１をコードする核酸配列を含有するプラスミド。ＮＰ＿００５００９．２のアミノ酸配列のインタクトヒトＰＤ－１をコードするヌクレオチド配列をコドン最適化及び合成（Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓａｎｇｏｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）により得、次いで、ｐｃＤＮＡ３．１ベクターにクローニングし、プラスミドをエンドトキシンフリープラスミド抽出キット（ＯＭＥＧＡから購入した）により抽出し、生理食塩水注射液に溶解した。（ｉｉ）ヒトＰＤ－１の細胞外ドメインの組換え融合タンパク質。ＰＤ－１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）とマウスＦｃ（ｍＦｃ）アミノ酸（ＡＢ０９７８４７．１）の融合、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｇｅｎｓｃｒｉｐｔによるヌクレオチド配列のコドン最適化及び合成、分子クローニングそしてＨＥＫ２９３Ｆ細胞のレンチウイルス感染により、ヒトＰＤ－１－ＥＣＤ－ｍＦｃタンパク質を得、次いで、上清をＰｒｏＡカラムにより精製し、組換えタンパク質の純度をＳＤＳ－ＰＡＧＥ及びＳＥＣにより検証し、組換えタンパク質ヒトＰＤ－１－ｍＦｃの活性をＥＬＩＳＡにより検証した。（ｉｉｉ）膜上に完全長ヒトＰＤ－１を発現するＣＨＯ－Ｓ細胞。ＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞株を、分子クローニング、ＣＨＯ－Ｓ細胞のレンチウイルスによる感染、及び圧力下でのスクリーニング、続いてのＦＡＣＳアッセイにより得た。
実験用の対照抗体の調製：ペムブロリズマブ（ＩＭＧＴ ＩＤ：４７２）、シンチリマブ（ＩＭＧＴ ＩＤ：８５９）、及びチスレリズマブ（ＩＭＧＴ ＩＤ：７５７）のアミノ酸配列は、ＩＭＧＴウェブサイトからのものであり、これらの各々は、Ｎａｎｊｉｎｇ Ｇｅｎｓｃｒｉｐによってコドン最適化され、発現ベクターｐｃＣＨＯ１．０へと合成され、それらをＰＥＩによりＣＨＯ－Ｓ細胞に一過性にトランスフェクトし、得られた細胞が抗体を発現し、その後、上清を精製し、対照抗体１、対照抗体２及び対照抗体３とそれぞれ命名した。
１．２ マウス免疫化
プラスミドＤＮＡ、ヒトＰＤ－１細胞外ドメインの組換え融合タンパク質、及びＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞を抗原として使用して、７～８週齢の様々な系統のマウス、例えば、Ｂ６Ｃ５７マウス、Ｂａｌｂ／ｃマウス及びこれらに類するもの（全てＢｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌ Ｒｉｖｅｒから購入した）を免疫化した。免疫化中に、抗ＰＤ－１抗体の血清力価を２週間ごとにＥＬＩＳＡにより検出した。マウス脾臓及びリンパ節の単個細胞浮遊液を混合した後に、ＳＰ２／０骨髄腫細胞を１：１の量比で添加し、均一に混合した。細胞混合溶液を、洗浄し、電気融合緩衝剤（Ｚｈｕｈａｉ Ｑｉｗｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）を用いて再浮遊させた。ここでの浮遊液中の細胞密度は、１×１０６細胞／ｍＬである。ＢＴＸ ２０００電気融合デバイスによる電気融合後、直ちに細胞浮遊液を融合チャンバから完全培養培地が入っている滅菌遠心分離管に移し、３７℃のインキュベーターで少なくとも１時間インキュベートした。次いで、細胞浮遊液を混合し、合計約３００プレートの９６ウェルプレートに１ウェル当たり２×１０４細胞の密度で播種した。融合細胞を３７℃及び５％ＣＯ２で培養した。ハイブリドーマクローンを５日間培養した後、全ての９６ウェルプレート内のハイブリドーマクローンを完全培養培地と完全に交換し、７日間成長させた時点で、ハイブリドーマクローンをスクリーニングした。
１．３ ハイブリドーマスクリーニング
ハイブリドーマスクリーニングをＥＬＩＳＡ及び競合ＦＡＣＳにより行った。ＥＬＩＳＡの詳細な実験ステップは、次の通りであった：ヒトＰＤ－１の細胞外ドメイン及びサルＰＤ－１の細胞外ドメイン（ＮＰ＿００１１０７８３０）を対応するタグとそれぞれ融合させ、ヒトＰＤ－１－Ｈｉｓ、ヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃなどの抗原を、分子クローニング及び相同組換えにより構築し、発現させ、精製し、それをその後、ＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、４℃で一晩、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）にコーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を３７℃で１時間、ブロッキングに使用し、その後、２０μＬのハイブリドーマクローン上清を添加し、３７℃で２時間インキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体（ＦＣ）を添加し、その後、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取った。
競合ＦＡＣＳの詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＥＬＩＳＡスクリーニング後のヒト及びサル結合陽性ハイブリドーマクローンにおいて、競合ＦＡＣＳスクリーニングを行った。完全長ヒトＰＤ－１を発現しているＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞を遠心分離し、リン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で洗浄した。細胞密度をリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１×１０７細胞／ｍＬに調整して、得られた溶液をＶ底９６ウェルプレートに５０μＬ／ウェルで添加し、上清を遠心分離により除去した。陽性ハイブリドーマクローンの５０μＬの上清を採取して、０．５％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で３００ｎＭに希釈した５０μＬのＦＩＴＣ標識ヒトＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ組換え融合タンパク質と共に、Ｖ底９６ウェルプレートに添加し、その後、完全に混合し、４℃で暗所において４０分間インキュベートした。遠心分離及びリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）での２回の洗浄後、得られたものをフローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ）及びＦｌｏｗＪｏソフトウェアにより解析した。
１．４ 抗ＰＤ－１ハイブリドーマサブクローニング
１．３で説明したスクリーニングによって、ハイブリドーマクローン４２Ｇ１、２９Ｃ６、９１Ｄ５、１４Ａ４及び３５Ｅ６をサブクローニングのために選択し、このサブクローニングにより生じた抗ＰＤ－１抗体を、４２Ｇ１、２９Ｃ６、９１Ｄ５、１４Ａ４及び３５Ｅ６とそれぞれ命名した。詳細には、段階希釈後、ウェル内のハイブリドーマ細胞を細胞計数に供し、６０～７０個のハイブリドーマ細胞を有する個々のウェルを、９６ウェルプレートにおける再浮遊及び播種のために選択し、播種した細胞を３７℃、５％ＣＯ２で培養した。７日間培養した後、実施例１．３の場合と同じ方法を使用してＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳアッセイを行い、１～２個の陽性単一クローンを無血清培地での拡大培養のために各プレートから選択し、次いで、マウス抗体を次の機能性の検証のために回収した。
実施例２：抗ＰＤ－１マウス抗体の評価
２．１ 抗ＰＤ－１マウス抗体のヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対する結合親和性の判定
マウス抗ＰＤ－１抗体のヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対する結合親和性の判定するために、ＥＬＩＳＡを使用した。詳細な実験ステップは、次の通りである：ヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃをＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、次いで、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）に４℃で一晩コーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を３７℃で１時間、ブロッキングに使用し、次いで、１００μＬのマウス抗ＰＤ－１抗体４２Ｇ１、２９Ｃ６及び９１Ｄ５を添加し（１０μｇ／ｍＬから出発して、４倍段階希釈、２反復）、その後、３７℃で２時間、放置してインキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体（ＦＣ）を添加し、その後、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取った。データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＥＣ５０値を計算した。
結果を表１に示した。マウス抗体２９Ｃ６、４２Ｇ１及び９１Ｄ５の各々の、ヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対するＥＣ５０は、３０～７０ｐＭであった。このことは、ヒト又はサルＰＤ－１に対するマウス抗体の良好な結合親和性を示す。
２．２ ヒトＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の結合を遮断する抗ＰＤ－１マウス抗体の活性の判定
競合ＥＬＩＳＡを使用して、マウス抗ＰＤ－１抗体によるＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１の遮断を検証した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ヒトＰＤ－１－ｈＦｃ抗原をＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、次いで、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）に４℃で一晩コーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を３７℃で１時間、ブロッキングに使用し、次いで、０．８μｇ／ｍＬのビオチン化ＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃを含有する１００μＬのマウス抗ＰＤ－１抗体４２Ｇ１、２９Ｃ６及び９１Ｄ５を添加し（１０μｇ／ｍＬから出発して、２倍段階希釈、２反復）、室温で２時間、放置してインキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたストレプトアビジンを添加し、その後、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取り、データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＩＣ５０値を計算した。
結果を表１に示した。マウス抗体２９Ｃ６、４２Ｇ１及び９１Ｄ５の各々の、ＰＤ－１－ｈＦｃのＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃへの結合を遮断するＩＣ５０は、ｎＭレベルであった。このことは、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を遮断する良好な活性を示した。
Figure 2022550243000004
２．３ 抗ＰＤ－１マウス抗体の、ＣＨＯ－ｈＰＤ－１の細胞膜表面のＰＤ－１に対する結合親和性の判定
抗ヒトＰＤ－１マウス抗体の、細胞膜表面のＰＤ－１への結合を検証するために、ＦＡＣＳ技術を使用してマウス抗体とＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞との親和性を検出した。
詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞を５００ｇで３分間遠心分離し、次いで、ＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）を用いて再浮遊させて６×１０６細胞／ｍＬにし、５０μＬを採取して対応する９６ウェルプレートに添加し；マウス抗体４２Ｇ１、２９Ｃ６及び対照抗体１を、ＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）で希釈し（１μＭから出発して、３倍段階希釈、１１濃度点）、次いで５０μＬを対応する９６ウェルプレートに添加し、ブランク対照ウェルには抗体がなく；細胞及び抗体を穏やかに混合し、４℃で１時間放置し、ＰＢＳで２回洗浄し、５０μＬのＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）を用いて再浮遊させ；ここで、２．５μＬの蛍光二次抗体Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８抗ヒトＩｇＧ Ｆｃを対照抗体１の試料に添加し、２．５μＬのＦＩＴＣ抗マウスＩｇＧを４２Ｇ１及び２９Ｃ６マウス抗体の試料にそれぞれ添加し、４℃で１時間放置し、ＰＢＳで３回洗浄し、その後、フローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ製；モデル：ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ）により検出し、データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＥＣ５０値を計算した。
実験結果を図１に示した。この場合、マウス抗体２９Ｃ６のＥＣ５０は、３．１２ｎＭであり、４２Ｇ１のＥＣ５０は、６．６２ｎＭであり、対照抗体１のＥＣ５０は、３．５７ｎＭであった。したがって、マウス抗体は、細胞膜表面のＰＤ－１に対して良好な結合親和性を有する。
２．４ ｈＰＤ－１トランスジェニックマウスにおける抗ＰＤ－１マウス抗体のｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の判定
ｉｎ ｖｉｖｏでの抗ヒトＰＤ－１マウス抗体の抗腫瘍効果を検証するために、ｈＰＤ－１の皮下腫瘍形成モデル（Ｂｅｉｊｉｎｇ Ｖｉｔａｌｓｔａｒ）トランスジェニックマウスを使用した。アッセイは、次の通りであった：ＭＣ３８腫瘍細胞（ＡＴＣＣから購入した）を、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養培地を使用して３７℃、５％ＣＯ２で培養した。マウスＰＤ－Ｌ１は、通常はヒトＰＤ－１に結合することができ、抗ヒトＰＤ－１抗体は、マウスＰＤ－Ｌ１のヒトＰＤ－１への結合の遮断後、腫瘍細胞の成長を阻害することができる。指数増殖期のＭＣ３８細胞を回収し、ＰＢＳを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌ｈＰＤ－１マウスに皮下接種して結腸がんモデルを樹立した。約１００ｍｍ３の平均体積に達したら、マウスを腫瘍サイズに従って次の群：ヒトＩｇＧの群（陰性対照）、マウス抗体４２Ｇ１の群、マウス抗体２９Ｃ６の群及び対照抗体２の群にそれぞれランダムに分けた。この場合、投与する投薬量は、１ｍｇ／ｋｇであり、この投薬量を週２回、３週間、腹腔内注射する。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定した。実験的指数は、腫瘍成長に対する薬物の効果を調査するためのものであり、特定の指数は、Ｔ／Ｃ％又は腫瘍成長阻害％（ＴＧＩ％）であった。腫瘍直径をノギスにより週２回測定し、腫瘍成長（Ｖ）を計算する式は、次のものであった：Ｖ＝１／２×ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂは、長さ及び幅をそれぞれ示す）。Ｔ／Ｃ％＝Ｔ／Ｃ×１００（式中、Ｃ及びＴは、溶媒群及び処置群の腫瘍体積又は腫瘍重量をそれぞれ表す）。腫瘍成長阻害（ＴＧＩ％）＝（Ｃ－Ｔ）／Ｃ×１００（式中、Ｃ及びＴは、溶媒群及び処置群の腫瘍体積又は腫瘍重量をそれぞれ表す）。
結果を図２に示した：陰性対照群と比較して、マウス抗体２９Ｃ６群の有効性は有意であり、ＴＧＩ＝９７．２３％、この場合、完全腫瘍退縮がマウス６匹のうちの３匹に生じ；マウス抗体４２Ｇ１群の有効性は有意であり、ＴＧＩ＝５５．１２％、この場合、完全腫瘍退縮がマウス６匹のうちの１匹に生じ；対照抗体２群の有効性は有意であり、ＴＧＩ＝６８．９９％、この場合、部分腫瘍退縮がマウス６匹のうちの１匹に生じた。
実施例３ 抗ＰＤ－１抗体配列の入手
マウス抗体配列をＧａｒｙ Ｃ．Ｈｏｗａｒｄら（Ｂａｓｉｃ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｈａｒａｃｔｅｒ， ＣＲＣ ｐｒｅｓｓ， ２０００）の方法に従って入手し、候補ハイブリドーマＲＮＡを抽出し、ＲＴ－ＰＣＲにより増幅して、マウス抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を得、次いで、シークエンシングのためにこれらの領域を組み立ててＴベクターにした。ハイブリドーマＲＮＡをＴＲＩｚｏｌ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ Ｒｅａｇｅｎｔキットの使用説明書に従って抽出し、次いで、５０μＬのＤＥＰＣ処理水に溶解し、ＲＮＡ濃度を検出した。ＲｅｖｅｒｔＡｉｄ Ｆｉｒｓｔ Ｓｔｒａｎｄ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓキットの使用説明書に従って、オリゴ（ｄＴ）１８プライマーを使用する逆転写により全ｃＤＮＡを得た。Ｇａｒｙ Ｃ．Ｈｏｗａｒｄらの方法、並びにＩＭＧＴでの全マウス抗体の配列解析を参照して、高相同領域を選択することにより可変領域用の複数の対の上流プライマーを設計し、下流プライマーをＣＨ１相同配列により設計し、プライマープールを使用することによりＰＣＲ増幅によって抗体の軽鎖及び重鎖可変領域を得、ＰＣＲ産物を組み立ててｐＵＣｍ－Ｔベクターにし、同定及び配列解析後、抗体の可変領域及びＣＤＲ配列を表２に示した。
Figure 2022550243000005
実施例４：抗ＰＤ－１キメラ抗体の調製及び判定
４．１ 抗ＰＤ－１キメラ抗体の発現
キメラ抗体を、１４Ａ４、２９Ｃ６、３５Ｅ６及び９１Ｄ５の軽鎖可変領域のアミノ酸配列と軽鎖カッパ定常領域のアミノ酸配列（配列番号８４）との融合によりそれぞれ、並びに１４Ａ４、２９Ｃ６、３５Ｅ６及び９１Ｄ５の重鎖可変領域のアミノ酸配列とＩｇＧ４の重鎖定常領域のアミノ酸配列（配列番号８２）との融合によりそれぞれ構築した。ｃＤＮＡをコドン最適化後に合成し、プラスミドｐＴＴ５（Ｓｈａｎｇｈａｉ ｓａｎｇｏｎ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）にライゲーションした。各キメラ抗体の重鎖を保有するｐＴＴ５ベクターと軽鎖を保有するｐＴＴ５ベクターとを同時にＣＨＯ－Ｓ－Ｅ細胞（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．により調製された）にトランスフェクトし、培養上清をプロテインＡカラム（ＭａｂＳｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ、ＧＥ）により精製してキメラ抗体を得、それらを１４Ａ４－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、及び９１Ｄ５－ＣＨとそれぞれ命名した。
４．２ 抗ＰＤ－１キメラ抗体のヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対する結合親和性のＥＬＩＳＡによる判定
詳細な実験ステップは、次の通りであった：ヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃ抗原をＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、次いで、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）に４℃で一晩コーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を３７℃で１時間、ブロッキングに使用し、その後、１００μＬのキメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ及び対照抗体１をそれぞれ添加し（１０μｇ／ｍＬから出発して、４倍段階希釈）、３７℃で２時間、インキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗ヒト二次抗体（ＦＣ）を添加し、その後、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取り、データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＥＣ５０値を計算した。
結果を下記の表３に示した。キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ、及び対照抗体１の各々の、ヒトＰＤ－１－ｈＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対する結合親和性ＥＣ５０は、０．０５～０．３ｎＭの範囲であった。
４．３ ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合及びＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２結合を遮断する抗ＰＤ－１キメラの活性のＥＬＩＳＡによる判定
詳細な実験ステップは、次の通りであった：ヒトＰＤ－１－ｈＦｃをＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）に４℃で一晩コーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を、３７℃で１時間、ブロッキングに使用した。５０μＬのキメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ、及び陽性対照抗体１（２０μｇ／ｍＬから出発して、２倍希釈）をそれぞれ添加し、同時に、５０μＬ（１．６μｇ／ｍＬ）のｈＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ（ｈＰＤ－Ｌ１アミノ酸配列ＮＰ＿０５４８６２．１）又はｈＰＤ－Ｌ２－ｍＦｃ（ｈＰＤ－Ｌ２アミノ酸配列ＡＡＩ１３６７９）をウェルごとに添加し、その後、室温で２時間インキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ＨＲＰで標識されたヤギ抗マウス二次抗体を添加し、その後、室温で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取り、データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＩＣ５０値を計算した。
結果を下記の表３に示した。キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨの各々のＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を遮断する活性は、対照抗体１のものと同等であったこと、及びこれらのキメラ抗体の各々の、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ２結合を遮断する活性は、対照抗体１のものと同等であったことが、ＩＣ５０から分かる。
４．４ 抗ＰＤ－１キメラ抗体のＰＤ－Ｌ１／ＣＨＯ－ｈＰＤ－１結合を遮断する活性の検出
競合ＦＡＣＳ技術を使用して、抗ＰＤ－１キメラ抗体のＰＤ－Ｌ１／ＣＨＯ－ｈＰＤ－１結合を遮断する活性を検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞を５００ｇで３分間遠心分離し、ＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）を用いて再浮遊させて６×１０６細胞／ｍＬにし、そのうちの５０μＬを対応する９６ウェルプレートに添加し；キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ及び対照抗体１をＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）で希釈し、０．４μｇ／ｍＬのＰＤ－Ｌ１－ｍＦｃ－Ｂｉｏを含有するＰＢＳで１μＭに希釈し、次いで３倍希釈して９つの濃度点を得、次いで、５０μＬを対応する９６ウェルプレートに添加し、ブランク対照ウェルには抗体がなく；細胞及び抗体を穏やかに混合し、４℃で１時間放置し、ＰＢＳで２回洗浄し、５０μＬのＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）を用いて再浮遊させ；２．５μＬのＡＰＣストレプトアビジン蛍光二次抗体を試料の各々に添加し、４℃で１時間放置し；その後、ＰＢＳで３回洗浄し、各試料をフローサイトメトリー（Ｂｅｃｋｍａｎ製、モデル：ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ）により検出した。データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＩＣ５０値を計算した。
実験結果を下記の表３、及び図３に示した。キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ及び９１Ｄ５－ＣＨは、対照抗体１よりもＣＨＯ－ｈＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断する活性が高かったこと；キメラ抗体３５Ｅ６－ＣＨ及び２９Ｃ６－ＣＨの、ＣＨＯ－ｈＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断する活性は、陽性抗体１のものと同等であったことが、ＩＣ５０から分かる。
Figure 2022550243000006
４．５ 抗ＰＤ－１キメラ抗体の動的親和性の測定
候補キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ及び対照抗体１のヒトＰＤ－１－Ｈｉｓに対する動的親和性を、抗体の抗原に対する動的親和性を検出するためのオクテットフォルテバイオ（Ｏｃｔｅｔ ＦｏｒｔｅＢｉｏ）（登録商標）により測定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＰｒｏＡバイオセンサーは、まず、試験すべき抗体に、応答シグナル値が０．５ｎｍに達するまで、結合させ、次いで、８０秒間、ヒトＰＤ－１－Ｈｉｓタンパク質（５００、２５０、１２５、６２、３１、１６及び０ｎＭ）に結合させ、そしてその後、１２０秒間、解離させ、測定結果を１：１モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。表４に示すように、キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ及び２９Ｃ６－ＣＨの各々の会合速度は、対照抗体１のものと比較して（ｋｏｎ値により示される通り）同レベルであったが、これらのキメラ抗体の各々の解離速度は、対照抗体１の解離速度よりも（ｋｄｉｓ値により示される通り）１桁遅く、キメラ抗体の各々の親和性は、対照抗体１のものよりもそれぞれ４．３、１１．７、１５．４及び７．３倍強かった。
Figure 2022550243000007
４．６ 抗ＰＤ－１キメラ抗体の、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を遮断する細胞活性
ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を遮断する細胞生物活性をレポーター遺伝子アッセイにより検出した。ＣＨＯ－ＰＤ－Ｌ１－ＣＤ３細胞株は、標的細胞として使用されるとＰＤ－Ｌ１及び抗ＣＤ３－ｓｃＦｖを安定的に発現し、Ｊｕｒｋａｔ－ＰＤ－１－ＮＦＡＴ細胞株は、エフェクター細胞として使用されるとＰＤ－１及びルシフェラーゼを安定的に発現し、この場合のルシフェラーゼ遺伝子は、ＮＦＡＴエレメント（転写因子）（ＩＬ－２プロモーター）により調節される。ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合は、下流にシグナル伝達するＣＤ３の伝達を遮断することができ、したがって、ルシフェラーゼの発現を阻害することができ、ＰＤ－１抗体又はＰＤＬ－１抗体を添加すると、この遮断効果が逆転され、ルシフェラーゼが発現され得るため、蛍光シグナルを検出することができる（Ｌａｎ Ｗａｎｇ， Ｃｈｕａｎｆｅｉ Ｙｕ ｅｔ． ａｌ．， Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｏｆ ａ ｒｏｂｕｓｔ ｒｅｐｏｒｔｅｒ ｇｅｎｅ ａｓｓａｙ ｔｏ ｍｅａｓｕｒｅ ｔｈｅ ｂｉｏａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ａｎｔｉ－ＰＤ－１／ａｎｔｉ－ＰＤ－Ｌ１ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ． Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｍｅｄ Ａｎａｌ ２０１７ Ｏｃｔ ２５； １４５： ４４７－４５３を参照されたい）。
詳細な実験ステップは、次の通りであった：Ｊｕｒｋａｔ－ＰＤ－１－ＮＦＡＴ細胞（Ｐｒｏｍｅｇａから購入した）及びＣＨＯ－Ｓ－ＯＫＴ３－ＰＤ－Ｌ１細胞（Ｐｒｏｍｅｇａから購入した）を２００ｇで５分間遠心分離し、検出緩衝剤ＲＰＭＩ１６４０＋１％ＦＢＳを用いて再浮遊させた。ＣＨＯ－Ｓ－ＯＫＴ３－ＰＤ－Ｌ１細胞を５×１０５細胞／４０μＬ／ウェルで播種した。ＣＨＯ－Ｓ－ＯＫＴ３－ＰＤＬ１細胞が予め播種されているウェルにＪｕｒｋａｔ－ＰＤ－１－ＮＦＡＴ細胞を１．２５×１０６／４０μＬ／ウェルで添加し、その後、２０μＬのキメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ及び対照抗体１をそれぞれ添加した（１００μＭから出発して、２倍段階希釈）。５時間のインキュベーション後、それらを取り出し、室温で２０分間、置いておき、２０μＬの検出試薬Ｂｒｉｇｈｔ－Ｇｌｏ Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ（Ｐｒｏｍｅｇａ Ｃｏｍｐａｎｙから購入した）を添加し、室温で５分間、揺動させ、マイクロプレートリーダー（ＢＭＧ Ｃｏｍｐａｎｙ、ＰＨＥＡＲｓｔａｒ ＦＳ）を使用して測定した。実験データのＧｒａｐｈｐｒｉｓｍによる曲線フィッティングを行ってＥＣ５０を計算した。結果を表５に示した。キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨ及び対照抗体１の各々の、ＰＤ－１／ＰＤ－Ｌ１結合を遮断する細胞活性は、ｎＭレベルであった。
Figure 2022550243000008
４．７ 抗ヒトＰＤ－１キメラ抗体のＴｍの判定
抗ＰＤ－１キメラ抗体のＴｍ値をＤＳＦ（示差走査蛍光定量法）により判定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：抗ＰＤ－１キメラ抗体１４Ａ４－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、２９Ｃ６－ＣＨの各々をＰＢＳで１ｍｇ／ｍＬに希釈し、各々の１２．５μＬを採取し、２．５μＬの４０×ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅ色素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．、カタログ番号４３０６７３７）及び５μＬのｄｄＨ２Ｏを添加した。次いで、各試料を、反応用のＱ－ＰＣＲシステム（ＡＢ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ＡＢＩ、７５００）、Ｑ－ＰＣＲパラメーター設定：標的（ＲＯＸ）、プログラム（２５℃、２分；１％ずつ、９５％℃；９５℃、２分）、に添加した。
結果を図４に示した。この場合、抗ＰＤ－１キメラ抗体９１Ｄ５－ＣＨのＴｍ値は、７２．２８℃であり、２９Ｃ６－ＣＨのＴｍ値は、７１．４６℃であり、１４Ａ４－ＣＨのＴｍ値は、６８．９９℃であり、３５Ｅ６－ＣＨのＴｍ値は、６６．７７℃であり、これらの抗体全てに良好な熱安定性があった。
４．８ ｈＰＤ－１トランスジェニックマウスにおける抗ヒトＰＤ－１キメラ抗体のｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の判定
実施例２．４の場合と同じ方法を使用してモデルを樹立した。約１００ｍｍ３の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群：ヒトＩｇＧ４の群（陰性対照）、キメラ抗体９１Ｄ５－ＣＨの群、３５Ｅ６－ＣＨ抗体の群、陽性対照抗体１の群、及び対照抗体３の群にそれぞれランダムに分け、各群に０．５ｍｇ／ｋｇの投薬量で週２回、３週間、腹腔内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、特定の結果を図５に示した。陰性対照と比較して、キメラ抗体９１Ｄ５－ＣＨ群の有効性は有意であり（ｐ＜０．０５）、ＴＧＩ＝７５．４６％、この場合、完全腫瘍退縮がマウス６匹のうちの３匹に生じ；３５Ｅ６－ＣＨ群の有効性は有意であり（ｐ＜０．０５）、ＴＧＩ＝７３．０８％、この場合、完全腫瘍退縮がマウス６匹のうちの３匹に生じ；対照抗体３の有効性は有意であり（ｐ＜０．０５）、ＴＧＩ＝８１．７９％、この場合、部分腫瘍退縮がマウス６匹のうちの１匹にのみ生じ；対照抗体１の有効性は有意であり（ｐ＜０．０５）、ＴＧＩ＝５１．８０％、この場合、マウス６匹のうちのいずれにも腫瘍退縮は生じなかった。
実施例５：抗ＰＤ－１抗体のヒト化
マウス抗体２９Ｃ６、３５Ｅ６及び９１Ｄ５を、抗体ＣＤＲグラフト法を使用してヒト化した。手短に述べると、ヒト化改変は、次のステップを含む：マウスモノクローナル抗体のアミノ酸配列とヒト生殖細胞系列抗体のものをアラインメントして、高い相同性はもちろんヒト生殖細胞系列フレームワーク配列として役立つ良好な物理的及び化学的特性も有する配列を見つけ出すステップ；ＨＬＡ－ＤＲの親和性を解析し、調査して、親和性が低いヒト生殖細胞系列フレームワーク配列を選択するステップ；並びに選択された重鎖及び軽鎖フレームワーク配列にマウス抗体の６つのＣＤＲをそれぞれグラフトするステップ。
詳細には、マウス抗体２９Ｃ６、３５Ｅ６及び９１Ｄ５の重鎖及び軽鎖ＣＤＲ領域を、対応するヒト化鋳型のＦＲフレームワークに移植した。２９Ｃ６の重鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列ＩＧＨＶ１－１８＊０１（ＩＭＧＴ受託番号Ｍ９９６４１を参照されたい）であり、２９Ｃ６の軽鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列ＩＧＫＶ３－１１＊０１（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ０１６６８を参照されたい）であり；３５Ｅ６の重鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列ＩＧＨＶ４－５９＊０１（ＩＭＧＴ受託番号ＡＢ０１９４３８を参照されたい）であり、３５Ｅ６の軽鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列ＩＧＫＶ３－１１＊０１（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ０１６６８を参照されたい）であり；９１Ｄ５の重鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列ＩＧＨＶ１－１８＊０１（ＩＭＧＴ受託番号Ｍ９９６４１を参照されたい）であり、９１Ｄ５の軽鎖ヒト化鋳型は、ヒト生殖細胞系列遺伝子配列ＩＧＫＶ１－３９＊０１（ＩＭＧＴ受託番号Ｘ５９３１５を参照されたい）であった。
更に、コンピューターシミュレーション法を使用して、分子ドッキングにより、可変領域及びそれらの隣接領域のフレームワークアミノ酸配列を解析して、３次元組合せモードを調査した。静電力、ファンデルワールス力、親水性及び疎水性、並びにエントロピー値を計算することにより、ＰＤ－１と相互作用すること及び空間的配座を維持することができるマウス抗体のアミノ酸配列中の肝要なアミノ酸を解析し、移植抗体内に保持した。換言すると、ヒト化抗体が、マウス抗体の抗原結合能力をできる限り保持することができように、ヒト化鋳型のＦＲ領域内のアミノ酸残基の一連の復帰突然変異を遂行した。
上記方法に従って、マウス抗体２９Ｃ６のＣＤＲに基づいて、２つのヒト化抗体を構築し、それぞれ、２９Ｃ６－ＨＺ１及び２９Ｃ６－ＨＺ２と命名し；マウス抗体３５Ｅ６のＣＤＲに基づいて、１つのヒト化抗体を構築し、３５Ｅ６－ＨＺ１と命名し；マウス抗体９１Ｄ５のＣＤＲに基づいて、２つのヒト化抗体を構築し、それぞれ、９１Ｄ５－ＨＺ１及び９１Ｄ５－ＨＺ２と命名した。各ヒト化抗体の重鎖定常領域は、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域（配列番号８２）であり、その軽鎖定常領域は、ヒト軽鎖カッパ定常領域（配列番号８４）であった。
上記のヒト化抗体の可変領域及び定常領域のアミノ酸配列を表６に示した。
Figure 2022550243000009
実施例６：抗ＰＤ－１ヒト化抗体の評価
６．１ ヒト化抗体のヒトＰＤ－１－Ｈｉｓに対する結合親和性のＥＬＩＳＡによる判定
ヒト化ＰＤ－１抗体のＰＤ－１－Ｈｉｓ抗原に対する親和性を検証するために、ＥＬＩＳＡを利用した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ヒトＰＤ－１－ｈｉｓをＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、次いで、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）に４℃で一晩コーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を３７℃で１時間、ブロッキングに使用し、その後、１００μＬのキメラ抗体２９Ｃ６－ＣＨ、３５Ｅ６－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ及びヒト化抗体２９Ｃ６－ＨＺ１、２９Ｃ６－ＨＺ２、３５Ｅ６－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ２を添加し（１０μｇ／ｍＬから出発して、３倍段階勾配希釈、２反復）、３７℃で２時間、インキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗マウス二次抗体（ＦＣ）を添加し、その後、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取った。データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＥＣ５０値を計算した。
結果を表７に示した。全体的に、ヒト化は、親和性にほとんど影響を与えず、ヒトＰＤ－１－Ｈｉｓに対する良好な結合親和性を保持した。
Figure 2022550243000010
６．２ 抗ヒトＰＤ－１ヒト化抗体のＰＤ－１－Ｈｉｓに対する動的親和性の判定
キメラ抗体２９Ｃ６－ＣＨ及び９１Ｄ５－ＣＨ、ヒト化抗体２９Ｃ６－ＨＺ２、３５Ｅ６－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ２及び対照抗体１を含む、抗ヒトＰＤ－１ヒト化抗体の、ＰＤ－１－Ｈｉｓに対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ（登録商標）を使用して判定した。詳細な実験ステップは、実施例４．５を参照する。実験結果を表８に示した。キメラ抗体及びヒト化抗体の各々のＫＤ値は、ｎＭレベルであり、対照抗体１のものより強かった。
Figure 2022550243000011
６．３ 抗ヒトＰＤ－１ヒト化抗体の、ヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ１結合及びヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ２結合を遮断する活性の判定
キメラ抗体２９Ｃ６－ＣＨ、９１Ｄ５－ＣＨ及び３５Ｅ６－ＣＨ、並びにヒト化抗体２９Ｃ６－ＨＺ１、２９Ｃ６－ＨＺ２、３５Ｅ６－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ１及び９１Ｄ５－ＨＺ２、並びに対照抗体１を含む、抗ヒトＰＤ－１ヒト化抗体の、ヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ１結合及びヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ２結合を遮断する活性を、競合ＥＬＩＳＡにより検出した。また詳細な実験ステップ及び結果解析については実施例４．３を参照されたい。結果を表９に示した。全ての抗体は、ヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ１又はヒトＰＤ－１／ヒトＰＤ－Ｌ２の結合を遮断する良好な活性を有した。
Figure 2022550243000012
６．４ 抗ＰＤ－１ヒト化抗体の機能のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
ヒト化抗体２９Ｃ６－ＨＺ２、３５Ｅ６－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ２及び対照抗体１を含む抗ヒトＰＤ－１ヒト化抗体の、細胞学的機能を、ルシフェラーゼレポーターシステムを使用して検出した。また詳細な実験ステップについては実施例４．６を参照されたい。結果を図６に示した。この場合、ヒト化抗体２９Ｃ６－ＨＺ２、３５Ｅ６－ＨＺ１、９１Ｄ５－ＨＺ２及び対照抗体１により活性化されたルシフェラーゼレポーターシステムからのＥＣ５０値は、それぞれ、５．７４ｎＭ、３．６３ｎＭ、４．４７ｎＭ及び３．３８ｎＭであった。
６．５ 抗ＰＤ－１ヒト化抗体は、ＩＬ－２を分泌するようにＰＢＭＣを刺激するようにブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）を促す
本実験では、抗ＰＤ－１ヒト化抗体９１Ｄ５－ＨＺ２及び２９Ｃ６－ＨＺ２、対照抗体１、対照抗体３並びにＩｇＧ対照抗体、それぞれの影響下でＳＥＢ刺激ＰＢＭＣ細胞により分泌されるＩＬ－２サイトカインのレベルを、ＨＴＲＦアッセイにより測定して、これらの抗体の生物活性を評価した。
ＰＢＭＣ細胞は、密度勾配遠心分離を使用することにより、２名のドナーＡ及びＢそれぞれからのヒト新鮮血から調製した。新鮮ＰＢＭＣ細胞を、１ｎｇ／ｍＬのＳＥＢを含有する培地に再浮遊させ、細胞密度を５×１０５／ｍＬに調整し、次いで、９６ウェルプレートに１ウェル当たり１００μＬ（５×１０４細胞／ウェル）で均一に分配した。抗体を３倍勾配で希釈し、１ウェル当たり１００μＬで添加した。抗体濃度勾配は、１μＭから出発した；３倍希釈、各抗体の濃度ごとに２回反復とした。７２時間後、細胞上清を遠心分離により回収し、上清中のＩＬ－２の分泌をＩＬ－２ ＨＴＲＦキット（ＣｉｓＢｉｏ）により検出した。
結果を図７－１及び図７－２に示した。この場合、２名のドナーから得たＰＢＭＣ細胞において、抗体９１Ｄ５－ＨＺ２及び２９Ｃ６－ＨＺ２、対照抗体１又は対照抗体２の濃度の増加に伴って、ＰＢＭＣ細胞により産生されるＩＬ－２の量も増加した。このことは、免疫細胞応答を増強する能力を示す。上記結果は、９１Ｄ５－ＨＺ２、２９Ｃ６－ＨＺ２、対照抗体１及び対照抗体２全てにＴ細胞活性を増強する能力があり、９１Ｄ５－ＨＺ２にはより強い促進効果があることを示していた。
実施例７：抗ＰＤ－１ヒト化抗体Ｆｃの設計及び検証
７．１：ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体
ＰＤ－１は、主として活性化Ｔ細胞に発現されるので、現在のところ、ＩｇＧ４サブタイプは、ＰＤ－１陽性Ｔ細胞の死滅を防止するために、市販されている全てのＰＤ－１抗体に使用されている。多くの研究により、ヒトＩｇＧ４抗体サブタイプには中等度のＡＤＣＣがあり、ＣＤＣエフェクター機能がほとんどないことが示されている。しかし、天然ＩｇＧ４は、圧力条件下（例えば、酸性緩衝剤中、又はこれに類するもの）で不安定であることが判明している（Ｂｏｎｉｎｇ Ｌｉｕ， Ｈｕａｉｚｈｕ Ｇｕｏ， Ｊｉｎ Ｘｕ ｅｔ． ａｌ．， Ａｃｉｄーｉｎｄｕｃｅｄ ａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ ｐｒｏｐｅｒｔｙ ｏｆ ｎｉｖｏｌｕｍａｂ ｉｓ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｏｎ ｔｈｅ Ｆｃ． Ｍａｂｓ， ２０１６， １９４２－０８６２）。
より良好な安定性とヒンジ領域突然変異とを有するＩｇＧ１サブタイプは、弱いＡＤＣＣ及びＣＤＣ機能を有することができ、その一方で、ＦＣγＲＩの親和性を欠き、単球系（ｍｏｎｏｃｙｔｉｖ）骨髄系由来サプレッサー細胞（ＭＤＳＣ）によるＴ細胞のクリアランスを回避することができ；これに基づいて、Ｆｃ定常領域の突然変異は、ＦｃＲｎの親和性を増強して、及びｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長して、より良好な薬物有効性を得ることができる。本発明者らは、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｎ４３４Ａ点突然変異（ＥＵ番号付け、配列番号８３）を含む、変異体ＩｇＧ１サブタイプＦｃの定常領域を使用して、ＦｃＲ結合を除去し、ＦｃＲｎの親和性を延長した。表１０に示すように、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄの重鎖配列（アミノ酸配列番号８６）及び軽鎖配列（アミノ酸配列番号８８）の核酸コード配列、並びに３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄの重鎖配列（アミノ酸配列番号９０）及び軽鎖配列（アミノ酸配列番号１１）の核酸コード配列を、それぞれ組み立ててｐＴＴ５発現ベクターにし、発現のためにＰＥＩによりＣＨＯ－Ｓ細胞に一過性にトランスフェクトし、ＰｒｏＡによる精製後、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ及び３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体を得た。
Figure 2022550243000013
７．２ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＰＤ－１抗原に対する親和性のＥＬＩＳＡによる検出
９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３の、ヒトＰＤ－１－ｍＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対する親和性を、ＥＬＩＳＡにより判定した。詳細な実験ステップについては実施例４．２及び実施例６．１を参照されたい。また結果を表１１に示した。この場合、４つのＰＤ－１抗体の各々についてのヒトＰＤ－１－ｍＦｃ及びサルＰＤ－１－ｈＦｃに対するＥＬＩＳＡ結合親和性は、ｎＭレベルであった。ヒトＰＤ－１－ｍＦｃへの結合活性について、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄは、対照抗体１及び対照抗体３よりもわずかに強く、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄは、対照抗体１及び対照抗体３と同等であった。
Figure 2022550243000014
７．３ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＰＤ－１抗原に対する動的親和性の検出
９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３を含む、ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、ＰＤ－１－Ｈｉｓに対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ（登録商標）により検出した。また詳細な実験ステップについては実施例４．５を参照されたい。実験結果を表１２に示した。この場合、４つの抗体の動的親和性は、全てｎＭレベルであり、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ及び３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄの親和性は、対照抗体１及び対照抗体３のものよりも約４～５倍強かった。このことは、それらが、より強い結合活性を有したことを示す。
Figure 2022550243000015
７．４ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＣＨＯ－ｈＰＤ－１に対する親和性の検出
ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、細胞膜表面のＰＤ－１への結合を検証するために、ＦＡＣＳ技術を使用してマウス抗体のＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞に対する親和性を検出した。
詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＣＨＯ－ｈＰＤ－１細胞を５００ｇで３分間遠心分離し、ＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）を用いて再浮遊させて６×１０６細胞／ｍＬにし、次いで５０μＬを対応する９６ウェルプレートに採取し；ＦＩＴＣ標識９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３をＰＢＳ（１％ＢＳＡを含有する）で希釈し（１μＭから出発して、４倍勾配希釈、１１濃度点）、次いで、５０μＬを対応する９６ウェルプレートに添加し、１μＭのＦＩＴＣ標識ＩｇＧ陰性対照抗体を陰性対照として使用し、その後、４℃で１時間、置いておき；ＰＢＳで３回洗浄し、フローサイトメトリー（製造業者：Ｂｅｃｋｍａｎ、モデル：ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ）により検出し、データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＥＣ５０値を計算した。
実験結果を図８及び表１１に示した。９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ及び対照抗体１及び対照抗体３は、ＣＨＯ－ｈＰＤ－１の細胞膜表面のＰＤ－１に対して同等の結合親和性を有したが、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄは、対照抗体１及び対照抗体３よりもわずかに強い親和性を有した。
７．５：ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、ＣＨＯ－ｈＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断する活性の検出
ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体が、ＣＨＯ－ｈＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１への結合を遮断することを検証するために、ＦＡＣＳ技術を検出に使用した。また詳細な実験ステップについては実施例４．４を参照されたい。
実験結果を図９及び表１１に示した。９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄの遮断活性は、対照抗体１及び対照抗体３のものと同等であり、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄの遮断活性は、対照抗体１及び対照抗体３のものよりもわずかに強かった。
７．６ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の特異性の検出
ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、ＨＵＶＥＣ及びＨＥＫ２９３Ｔ上皮細胞への非特異的結合を、ＦＡＣＳにより検出した。手短に述べると、ＨＵＶＥＣ又はＨＥＫ２９３Ｔ細胞の密度を１ウェル当たり２×１０５細胞に設定した。試験抗体９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３をＦＩＴＣにより標識し、５００ｎＭに希釈し、次いで、ＨＵＶＥＣ又はＨＥＫ２９３Ｔ細胞と共に４℃で１時間、それぞれインキュベートした。洗浄後、細胞をフローサイトメトリー（製造業者：Ｂｅｃｋｍａｎ、モデル：ＣｙｔＥｘｐｅｒｔ）により検出し、解析した。結果は、非特異的結合が観察されなかったことを示した。
ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、ＢＴＬＡ－ｈｉｓ、ＰＤ－Ｌ１－ｈｉｓ及びＩＣＯＳへの非特異的結合を、ＥＬＩＳＡにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ヒトＰＤ－１－ｈｉｓ、ヒトＢＴＬＡ－ｈｉｓ、ヒトＩＣＯＳ及びヒトＰＤ－Ｌ１－ｈｉｓ（Ｎｏｖｏｐｒｏｔｅｉｎから購入した）をＣＢＳ溶液で１μｇ／ｍＬに希釈し、次いで、９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｊｉｅｔｅ Ｂｉｏから購入した）に４℃で一晩コーティングした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有する１００μＬのリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）を３７℃で１時間、ブロッキングに使用し、次いで、１００μＬの９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ及び対照抗体１（１０μｇ／ｍＬ及び１μｇ／ｍＬ）を添加し、２反復を設け、３７℃で２時間、インキュベートした。洗浄後、２％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝剤（ＰＢＳ）で１：１５０００の比で希釈した、ホースラディッシュペルオキシダーゼで標識されたヤギ抗ヒトＩｇＧ二次抗体を添加し、その後、３７℃で１時間インキュベートした。洗浄後、ＴＭＢ色素原溶液を現像に使用し、マイクロプレートリーダーを使用して４５０ｎｍで吸光度値を読み取った。データをＧｒａｐｈｐｒｉｓｍにインポートしてＥＣ５０値を計算した。実験結果を図１０に示した。この場合、バックグラウンド（ブランク対照）と比較して、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ及び対照抗体１は全て、ヒトＰＤ－１抗原に特異的に結合したが、ＢＴＬＡ－ｈｉｓにも、ＰＤ－Ｌ１－ｈｉｓにも、ＩＣＯＳにも結合しない。
７．７ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＴｍの判定
９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３のＴｍ値をＤＳＦ（示差走査蛍光定量法）により検出した。また詳細な実験ステップについては実施例４．７を参照されたい。結果を図１１に示した。この場合、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１ＤのＴｍ値（６７．６２℃）及び３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１ＤのＴｍ値（６６．５８℃）は、対照抗体１のもの（６３．９５℃）及び対照抗体３のもの（６２．５６℃）より４～５℃高かった。このことは、薬物開発に有利に働く、より良好な熱安定性を示す。
７．８ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の細胞学的機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより判定した。また詳細な実験ステップについては実施例４．６を参照されたい。実験結果を図１２に示した。この場合、ルシフェラーゼレポーターシステムによる９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３のＥＣ５０値は、それぞれ、３．４８ｎＭ、２．８１ｎＭ、３．２２ｎＭ、及び３．７９ｎＭであった。
７．９ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＣＤ６４タンパク質に対する動的親和性の検出
抗体ＦｃのＣＤ６４（すなわち、ＦｃγＲＩ）への結合は、ＡＤＣＰ機能を発揮する上での１つの重要な態様であり、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３を含む、ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、ＣＤ６４（ＡＣＲＯから購入した）に対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ（登録商標）により検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＰＢＳＴで４μｇ／ｍＬに希釈したＣＤ６４タンパク質を最初に固定化して、ＳＡバイオセンサー（Ｐａｌｌから購入した）を使用することにより；抗体をＰＢＳＴ（ｐＨ７．０）で１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、１．５６２５ｎＭ、０ｎＭに希釈し；９０秒間結合させ、次いで１２０秒間解離させ、データを１：１モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。
９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３のＣＤ６４に対する動的親和性にそれぞれ対応する実験結果を、図１３－１～１３－４に示した。この場合、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ及び対照抗体３は、ＣＤ６４に全く結合せず、対照抗体１の動的親和性値は、次の通りであった：ＫＤ＝６．９４Ｅ－０９（Ｍ）、Ｋｏｎ＝２．０７Ｅ－１０（１／Ｍｓ）及びｋｄｉｓ＝３．８５Ｅ－０４（１／ｓ）。このことは、抗体９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ及び３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１ＤがＡＤＣＰ活性を生じさせなかったことを示す。
７．１０ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＦｃＲｎタンパク質に対する親和性の検出
抗体Ｆｃは、ＦｃＲｎに結合することができ、その結果、抗体Ｆｃは、ｉｎ ｖｉｖｏで容易にクリアランスされることがなく、それ故、ｉｎ ｖｉｖｏでの半減期を延長することになる。９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３を含む、ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の、ＦｃＲｎ（ＡＣＲＯから購入した）に対する動的親和性を、オクテットフォルテバイオ（登録商標）により測定した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：ＰＢＳＴで３μｇ／ｍＬに希釈したＦｃＲｎタンパク質を最初に固定化して、ＳＡバイオセンサー（Ｐａｌｌから購入した）を使用することにより；ＰＢＳＴ（ｐＨ６．０）で抗体を２００ｎＭ、１００ｎＭ、５０ｎＭ、２５ｎＭ、１２．５ｎＭ、６．２５ｎＭ、３．１２５ｎＭ、０ｎＭに希釈するステップ；９０秒間結合させ、次いで１２０秒間解離させるステップ、そしてデータを１：１モデル及びグローバルフィッティングにより解析した。
実験結果を図１３に示した。この場合、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ及び３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１ＤのＦｃＲｎに対する親和性は、Ｅ－０９（Ｍ）のレベルであり、対照抗体１及び対照抗体２のＦｃＲｎに対する親和性は、Ｅ－０８（Ｍ）のレベルであった。ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体の親和性は、対照抗体の親和性よりも２～３倍強かった。ｉｎ ｖｉｖｏでのその半減期を延長することができる。
Figure 2022550243000016
７．１１ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＡＤＣＰ活性のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
抗体ＦｃのＣＤ３２ａへの結合は、ＡＤＣＰ機能を発揮する上での１つの重要な態様であり、ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＡＤＣＰ機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ／ＣＤ３２ａ及びＣＨＯ－Ｓ－ＰＤ－１細胞（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）を採取し、遠心分離し、ＲＰＭＩ１６４０＋１％ＦＢＳ培地を用いて再浮遊させ、次いで計数し、２×１０６細胞／ｍＬ及び１×１０６細胞／ｍＬにそれぞれ希釈し、５０μＬの細胞浮遊液をウェルごとに添加し；９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１、対照抗体３及びマウスＰＤ－１抗体２９Ｃ６を希釈し（１．２μＭから出発して、２倍希釈、２反復）、対応するウェルに５０μＬ／ウェルで添加し；３７℃で５時間のインキュベーション後、マイクロプレートリーダーによる検出のために２０μＬのｏｎｅ－ｇｌｏ検出試薬（Ｐｒｏｍｅｇａから購入した）をウェルごとに添加した。
結果は、図１４に示した通りであり、この場合、マウスＰＤ－１抗体２９Ｃ６は、強いＡＤＣＰ活性、ＥＣ５０＝６．０９ｎＭ、を有し、対照抗体１は、弱いＡＤＣＰ活性を有したが、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ及び対照抗体３は、ＡＤＣＰ活性を全く有さなかった。
７．１２ ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＡＤＣＣ機能のルシフェラーゼレポーターシステムによる判定
抗体ＦｃのＣＤ１６ａへの結合は、ＡＤＣＣ機能を発揮する上での１つの重要な態様であり、ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のＡＤＣＣ機能をルシフェラーゼレポーターシステムにより検出した。詳細な実験ステップは、次の通りであった：Ｊｕｒｋａｔ－ＮＦＡＴ／ＣＤ１６ａ及びＣＨＯ－Ｓ－ＰＤ－１細胞（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）を採取し、遠心分離し、ＲＰＭＩ１６４０＋１％ＦＢＳ培地を用いて再浮遊させ、次いで計数し、２×１０６細胞／ｍＬ及び１×１０６細胞／ｍＬにそれぞれ希釈し、５０μＬの細胞浮遊液をウェルごとに添加し；希釈した９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１、対照抗体３（４５０μｇ／ｍＬから出発して、１０倍希釈、２反復）、及びマウスＰＤ－１抗体４２Ｇ１（４５０μｇ／ｍＬ）を、対応するウェルに５０μＬ／ウェルで添加し；３７℃で５時間のインキュベーション後、マイクロプレートリーダーによる検出のために２０μＬのｏｎｅ－ｇｌｏ検出試薬（Ｐｒｏｍｅｇａから購入した）をウェルごとに添加した。
結果は、図１５に示した通りであり、この場合、マウスＰＤ－１抗体４２Ｇ１は、強いＡＤＣＣ活性を有したが、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ、対照抗体１及び対照抗体３は、ＡＤＣＣ活性を全く有さなかった。
実施例８：ＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性試験
３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ及び９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の、ヒト免疫系再構築マウス又はトランスジェニックマウスにおける皮下移植腫瘍の増殖に対する阻害効果を、実施例８．１～８．３で評価した。詳細には、本発明では、抗体３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ及び９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄを、ヒト非小細胞肺がんＨＣＣ８２７を皮下移植したＨｕ－ＰＢＭＣ－Ｂ－ＮＤＧマウスモデル、及びマウス結腸がん細胞株ＭＣ３８を皮下移植したｈＰＤ－１／ｈＴＩＭ３トランスジェニックマウスモデルに、尾静脈注射又は腹腔内注射により、週２回、３週間投与した。腫瘍体積の変化及び動物の体重の変化を週２回測定し、本発明の抗体の担腫瘍マウスに対する有効性（腫瘍成長阻害）を計算した。
試験薬物：３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ又は９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の適切な量を使うこと、１０μＬ／ｇに対応する投薬体積を計算すること、そして投与することになる投薬量に従って生理食塩水で母溶液を対応する投薬溶液体積に希釈すること。同じ用量のヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトＩｇＧ１（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）及びヒト免疫グロブリンヒトＩｇＧ（Ｃｈｅｎｇｄｕ Ｒｏｎｇｓｈｅｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）を陰性対照として使用し、キイトルーダ（Ｍｅｒｃｋから購入した；カタログ番号Ｓ００１１９５）を陽性対照として使用し、ＡＢ１２Ｔ８（国際公開第２０１９１４１０９２号を参照して調製した）は、併用投与用であった。
実験動物及び細胞株：Ｂ－ＮＤＧマウス（Ｂｉｏｃｙｔｏｇｅｎ Ｊｉａｎｇｓｕ Ｃｏ．， Ｌｔｄ）、ｈＰＤ－１／ｈＴＩＭ－３トランスジェニックマウス（Ｊｉａｎｇｓｕ ＧｅｍＰｈａｒｍａｔｅｃｈ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）、マウス結腸がん細胞株ＭＣ３８（Ｎａｎｊｉｎｇ Ｃｏｂｉｏｅｒ Ｇｅｎｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏ．， Ｌｔｄ）、ヒト非小細胞肺がん細胞株ＨＣＣ８２７（ＡＴＣＣ）、及びヒト末梢血単核リンパ球ＰＢＭＣ（ＡｌｌＣＥＬＬＳ）。
実験の群分け及び評価方法
７０～１５０ｍｍ３の平均腫瘍体積を有する担腫瘍マウスをランダムに群に分けた（群の数は、試料の数に従って決定した）。群に従って、ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトＩｇＧ１、静注用ヒト免疫グロブリンヒトＩｇＧ、又は本発明の抗体を、それぞれ、週２回、３週間、投与し、この場合の投与経路は、腹腔内注射又は尾静脈注射であり、投薬体積は、１０ｍＬ／ｋｇであった。投与後、週２回、ノギスにより腫瘍直径を測定し、腫瘍体積を次の式に従って計算した：Ｖ＝０．５ａ×ｂ２（式中、ａ及びｂは、腫瘍の長及び短径をそれぞれ示す）。動物の死亡数を毎日観察して記録した。
腫瘍成長阻害ＴＧＩ（％）を次の式：ＴＧＩ（％）＝［１－（ＶＴｅｎｄ－ＶＴ０）／（ＶＣｅｎｄ－ＶＣ０）］×１００％（式中、ＶＴｅｎｄ：処置群における実験終了時の腫瘍体積の平均値、ＶＴ０：処置群における投薬開始時の腫瘍体積の平均値、ＶＣｅｎｄ：陰性対照群における実験終了時の腫瘍体積の平均値、ＶＣ０：陰性対照群における投薬開始時の腫瘍体積の平均値）により計算して、式（Ｉ）の抗体の腫瘍阻害効果を評価し、相対腫瘍増殖率Ｔ／Ｃ（％）を次の式：Ｔ／Ｃ＝（ＶＴｅｎｄ／ＶＴ０）／（ＶＣｅｎｄ／ＶＣ０）により計算して、式（Ｉ）の抗体の抗腫瘍有効性を評価した。
８．１ ヒト免疫系再構築マウスｈＰＢＭＣ－Ｂ－ＮＤＧ－ＨＣＣ８２７モデル１における３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄのｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の判定
ＨＣＣ８２７（非小細胞肺がん）細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養培地で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＨＣＣ８２７細胞を回収し、次いで、ＰＢＳを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌Ｂ－ＮＤＧマウスに皮下接種して非小細胞肺がんがんモデルを樹立した。ＰＢＭＣを翌日中に解凍し、ＰＢＳを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、次いで、担腫瘍マウスに腹腔内接種してそれらの免疫系を再構築した。腫瘍が約９７ｍｍ３の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群：ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトＩｇＧ１（陰性対照）群、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体群及びキイトルーダ群にランダムに分け、尾静脈経由で週２回、３週間、注射した。投薬後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定した。図１６～１７に示すような特定の結果を表１４に示した。ヒトＩｇＧ１陰性対照群と比較して、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体群は、ＨＣＣ８２７非小細胞肺がん移植腫瘍モデルの腫瘍成長を有意に阻害し、腫瘍成長阻害率（ＴＧＩ）が１０４．９４％であったが、キイトルーダ群は、明らかな抗腫瘍効果を一切示さなかった。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されず、処置中のマウスにおける耐容性は良好であった。
Figure 2022550243000017
８．２ ヒト免疫系再構築マウスｈＰＢＭＣ－Ｂ－ＮＤＧ－ＨＣＣ８２７モデル２における９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄのｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の判定
ＨＣＣ８２７細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養培地で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＨＣＣ８２７細胞を回収し、次いで、ＰＢＳを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、雌Ｂ－ＮＤＧマウスに皮下接種して非小細胞肺がんモデルを樹立した。腫瘍細胞を接種した５日後、ＰＢＭＣを解凍し、次いで、ＰＢＳを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、次いで、担腫瘍マウスに腹腔内接種してそれらの免疫系を再構築した。腫瘍が約９１ｍｍ３の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群：ヒト抗ニワトリリゾチーム免疫グロブリンヒトＩｇＧ１（陰性対照）の群、単一９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の群、及びＬＡＧ３モノクローナル抗体（ＡＢ１２Ｔ８、Ｓｉｃｈｕａｎ Ｋｅｌｕｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｃｏ．， Ｌｔｄ．）と併用での９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の群に、それぞれ、ランダムに分け、これらのマウスに尾静脈経由で週２回、２週間、注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、図１８～１９に示したような特定の結果を表１５に示した。ヒトＩｇＧ１陰性対照群と比較して、単一９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の群には、良好な腫瘍阻害傾向があり、ＴＧＩが６９．１３％であり、更に、ＬＡＧ３モノクローナル抗体と併用での９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の群には、増強された腫瘍阻害効果があり、ＴＧＩが８３．４０％であった。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されなかった。このことは、処置中のマウスにおける良好な耐容性を示す。
Figure 2022550243000018
８．３ ｈＰＤ－１／ｈＴＩＭ－３二重トランスジェニックモデルにおけるＩｇＧ１－１Ｄ変異体抗ＰＤ－１ヒト化抗体のｉｎ ｖｉｖｏ薬物有効性の判定
ＭＣ３８（マウス結腸がん細胞株）細胞を、１０％ウシ胎仔血清を含有するＲＰＭＩ１６４０培養培地で、３７℃、５％ＣＯ２で培養した。指数増殖期のＭＣ３８細胞を回収し、ＰＢＳを用いて再浮遊させて好適な濃度にし、ｈＰＤ－１／ｈＴＩＭ－３トランスジェニックマウスに皮下接種して結腸がんモデルを樹立した。腫瘍が約８３ｍｍ３の平均体積に達したら、マウスを、腫瘍サイズに従って次の群：静注用ヒト免疫グロブリンヒトＩｇＧ（陰性対照）の群、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の群、３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄ抗体の群、及びキイトルーダの群に、ランダムに分け、これらのマウスに週２回、３週間、腹腔内注射した。投与後、マウスの腫瘍体積及び体重を定期的に観察して測定し、図２０～２１に示したような特定の結果を表１６に示した。ヒトＩｇＧ陰性対照群と比較して、９１Ｄ５－ＨＺ２－ＩｇＧ１－１Ｄ及び３５Ｅ６－ＨＺ１－ＩｇＧ１－１Ｄは、ＭＣ３８結腸がん移植腫瘍モデルの腫瘍成長を有意に阻害し、ＴＧＩがそれぞれ８０．３０％及び６９．２３％であった。このことは、キイトルーダ（ＴＧＩ＝４８．６９％）よりも良好な有効性を示す。全ての処置群において観察期間中に動物の死亡も、動物の有意な体重減少も、明らかな薬物毒性も観察されなかった。このことは、処置中のマウスにおける良好な耐容性を示す。
Figure 2022550243000019
本発明の特定の実施形態を詳細に説明したが、公開されているあらゆる教示に従ってこれらの詳細に様々な改変及び変更を加えることができ、そのような改変及び変更を加えたものもまた本発明の範囲に含まれることは、当業者には理解されるであろう。本発明の全ては、添付の特許請求の範囲及びそのあらゆる均等物により与えられる。

Claims (30)

  1. ＰＤ－１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片であって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、以下の相補性決定領域（ＣＤＲ）：
    （ａ）配列番号１に記載の重鎖可変領域（ＶＨ）に含有される、ＣＤＲ－Ｈ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｈ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｈ３若しくはその配列バリアント、並びに／又は
    配列番号２に記載の軽鎖可変領域（ＶＬ）に含有される、ＣＤＲ－Ｌ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｌ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｌ３若しくはその配列バリアント、
    （ｂ）配列番号２０に記載のＶＨに含有される、ＣＤＲ－Ｈ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｈ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｈ３若しくはその配列バリアント、並びに／又は
    配列番号２１に記載のＶＬに含有される、ＣＤＲ－Ｌ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｌ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｌ３若しくはその配列バリアント、
    （ｃ）配列番号３６に記載のＶＨに含有される、ＣＤＲ－Ｈ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｈ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｈ３若しくはその配列バリアント、並びに／又は
    配列番号３７に記載のＶＬに含有される、ＣＤＲ－Ｌ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｌ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｌ３若しくはその配列バリアント、或いは
    （ｄ）配列番号５４に記載のＶＨに含有される、ＣＤＲ－Ｈ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｈ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｈ３若しくはその配列バリアント、並びに／又は
    配列番号５５に記載のＶＬに含有される、ＣＤＲ－Ｌ１若しくはその配列バリアント、ＣＤＲ－Ｌ２若しくはその配列バリアント及びＣＤＲ－Ｌ３若しくはその配列バリアント
    を含み、
    前記配列バリアントが、それが由来するＣＤＲと比較して、１個又は複数のアミノ酸の置換、欠失又は付加（例えば、１個、２個又は３個のアミノ酸の置換、欠失又は付加）を有するＣＤＲであり、好ましくは、前記置換が、保存的置換であり、
    好ましくは、ＣＤＲが、Ｋａｂａｔ又はＩＭＧＴの番号付けシステムによって定義され、
    好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片の前記ＶＨ及び／又はＶＬが、ヒト又はマウスに由来する免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）を含み、
    好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトＰＤ－１に結合する、
    抗体又はその抗原結合性断片。
  2. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
    （１）重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、ＩＭＧＴの番号付けシステムによって定義して、
    （１ａ）前記ＶＨが、配列番号３に記載の配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）－Ｈ１、配列番号４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
    （１ｂ）前記ＶＨが、配列番号２２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号２４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号２５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号２７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
    （１ｃ）前記ＶＨが、配列番号３８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号４０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号４１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号４３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含むか、又は
    （１ｄ）前記ＶＨが、配列番号５６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号５８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号５９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号６１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、
    ＶＨ及び／又はＶＬ、
    或いは
    （２）重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、Ｋａｂａｔの番号付けシステムによって定義して、
    （２ａ）前記ＶＨが、配列番号９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号１２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号１３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号１５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
    （２ｂ）前記ＶＨが、配列番号２８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号３０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号３１に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号３３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
    （２ｃ）前記ＶＨが、配列番号４４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号４７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号４８に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４９に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号５０に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含むか、
    又は
    （２ｄ）前記ＶＨが、配列番号６２に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ１、配列番号６３に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ２及び配列番号６４に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｈ３を含み、並びに／若しくは
    前記ＶＬが、配列番号６５に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ１、配列番号６６に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ２及び配列番号６７に記載の配列を有するＣＤＲ－Ｌ３を含む、
    ＶＨ及び／又はＶＬ、
    或いは
    （３）重鎖可変領域（ＶＨ）及び／又は軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、少なくとも１つのＣＤＲが、（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）、（１ｄ）又は（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）、（２ｄ）のうちのいずれか１つの前記ＶＨ及び／又はＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個若しくは３個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、又はそれらの任意の組合せ）から選択される突然変異を含有し、好ましくは、前記置換が、保存的置換である、
    ＶＨ及び／又はＶＬ
    を含む、
    請求項１に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  3. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
    （ａ）配列番号１、２０、３６及び５４のうちのいずれか１つに記載のＶＨ、並びに／又は配列番号２、２１、３７及び５５のうちのいずれか１つに記載のＶＬ、
    （ｂ）配列番号１６、１７、３４、５１及び５２のうちのいずれか１つに記載のＶＨ、並びに／又は配列番号１８、１９、３５及び５３のうちのいずれか１つに記載のＶＬ、
    （ｃ）（ａ）若しくは（ｂ）のいずれかの前記ＶＨと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び／又は（ａ）若しくは（ｂ）のいずれかの前記ＶＬと少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）、或いは
    （ｄ）（ａ）若しくは（ｂ）のいずれかの前記ＶＨと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する重鎖可変領域（ＶＨ）；及び／又は（ａ）若しくは（ｂ）のいずれかの前記ＶＬと比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、好ましくは、前記置換が、保存的置換である、ＶＨ及び／又はＶＬ
    を含む、請求項１又は２に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  4. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
    （ａ）配列番号１に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号２に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｂ）配列番号１６に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号１８に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｃ）配列番号１７に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号１９に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｄ）配列番号２０に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号２１に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｅ）配列番号３４に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号３５に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｆ）配列番号３６に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号３７に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｇ）配列番号５１に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５３に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｈ）配列番号５２に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５３に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｉ）配列番号５４に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５５に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｊ）重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、（ａ）～（ｉ）のうちのいずれかにおける前記ＶＨ及びＶＬと比較して、前記重鎖可変領域が、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するか、或いは
    （ｋ）重鎖可変領域（ＶＨ）及び軽鎖可変領域（ＶＬ）であって、（ａ）～（ｉ）のうちのいずれかにおける前記ＶＨ及びＶＬと比較して、前記重鎖可変領域（ＶＨ）が、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有し、及び／又は前記軽鎖可変領域（ＶＬ）が、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有し、好ましくは、前記置換が、保存的置換である
    を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  5. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、マウス抗体、キメラ抗体又はヒト化抗体である、請求項１～４のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  6. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
    （ａ）ヒト免疫グロブリン若しくはそのバリアントの重鎖定常領域（ＣＨ）、及び／又は
    （ｂ）ヒト免疫グロブリン若しくはそのバリアントの軽鎖定常領域（ＣＬ）
    を更に含み、
    前記バリアントが、それが由来する野生型配列と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有するか、又は前記バリアントが、それが由来する野生型配列と比較して、１個若しくは複数のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失、付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有し、好ましくは、前記置換が、保存的置換であり、
    好ましくは、前記重鎖定常領域が、ＩｇＧ重鎖定常領域、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４重鎖定常領域であり、
    好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、
    （１）ヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域、又は
    （２）ヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域
    からなる群から選択される重鎖定常領域を含み、
    好ましくは、前記軽鎖定常領域が、カッパ又はラムダ軽鎖定量領域であり、より好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、ヒトカッパ軽鎖定常領域を含む、
    請求項１～５のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  7. 前記重鎖定常領域又はそのバリアントが、
    （１）ＥＵ番号付けシステムによるヒトＩｇＧ４の重鎖定常領域の変異体（Ｓ２２８Ｐ）、
    （２）ＥＵ番号付けシステムによる、２３４、２３５、２６５及び４３４位のうちの少なくとも１つに突然変異を有するヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域、好ましくは、突然変異：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｄ２６５Ａ及びＮ４３４Ａのうちの１、２、３又は４つを有するヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域の変異体（例えば、配列番号８３に記載の重鎖定常領域）、
    （３）配列番号８２に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントであって、前記バリアントが、配列番号８２と比較して、最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有するか、又は配列番号８２と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアント、或いは
    （４）配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアントであって、前記バリアントが、配列番号８３と比較して、最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有するか、又は配列番号８３と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、重鎖定常領域（ＣＨ）又はそのバリアント
    を含み、
    （２）又は（４）における前記突然変異又は置換が、前記突然変異又は置換なしの対応する抗体又は抗原結合性断片と比較して、前記抗体又は抗原結合性断片のＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣの活性をなくすか、又は低減し、
    並びに／或いは
    前記軽鎖定常領域又はそのバリアントが、
    （５）カッパ軽鎖定常領域、又は
    （６）配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアントであって、前記バリアントが、配列番号８４と比較して、最大で２０個のアミノ酸の保存的置換（例えば、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の保存的置換；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の保存的置換）を有するか、又は配列番号８４と少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、軽鎖定常領域（ＣＬ）又はそのバリアント
    を含み、
    好ましくは、前記抗体が、配列番号８２又は配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む、
    請求項６に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  8. 前記抗体が、
    （ａ）配列番号１に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載の重鎖定常領域（ＣＨ）を含む重鎖、並びに配列番号２に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載の軽鎖定常領域（ＣＬ）を含む軽鎖、
    （ｂ）配列番号１６に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号１８に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｃ）配列番号１７に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号１９に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｄ）配列番号２０に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号２１に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｅ）配列番号３４に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号３５に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｆ）配列番号３６に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号３７に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｇ）配列番号５１に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号５３に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｈ）配列番号５２に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号５３に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｉ）配列番号５４に記載のＶＨ及び配列番号８３に記載のＣＨを含む重鎖、並びに配列番号５５に記載のＶＬ及び配列番号８４に記載のＣＬを含む軽鎖、
    （ｊ）重鎖及び軽鎖であって、（ａ）～（ｉ）のうちのいずれかにおける前記重鎖及び前記軽鎖と、前記重鎖が、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有し、及び／又は前記軽鎖が、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する、重鎖及び軽鎖
    を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  9. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、
    （ａ）重鎖及び軽鎖であって、
    前記重鎖が、
    （ｉ）配列番号８６に記載の配列、
    （ｉｉ）（ｉ）に記載の配列と比較して、１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
    （ｉｉｉ）（ｉ）に記載の配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列
    を含み、及び
    前記軽鎖が、
    （ｉｖ）配列番号８８に記載の配列、
    （ｖ）（ｉｖ）に記載の配列と比較して、１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
    （ｖｉ）（ｉｖ）に記載の配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列、
    を含み、
    好ましくは、（ｉｉ）又は（ｖ）における前記置換が、保存的置換である、重鎖及び軽鎖、
    或いは
    （ｂ）重鎖及び軽鎖であって、
    前記重鎖が、
    （ｉ）配列番号９０に記載の配列、
    （ｉｉ）（ｉ）に記載の配列と比較して、１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
    （ｉｉｉ）（ｉ）に記載の配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列
    を含み、及び
    前記軽鎖が、
    （ｉｖ）配列番号１１に記載の配列、
    （ｖ）（ｉｖ）に記載の配列と比較して、１個若しくはいくつかのアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ（例えば、最大で５０個、最大で４５個、最大で４０個、最大で３５個、最大で３０個、最大で２５個、最大で２０個、最大で１５個、最大で１０個若しくは最大で５個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ；例えば、１個、２個、３個、４個、５個、６個、７個、８個、９個若しくは１０個のアミノ酸の置換、欠失若しくは付加、若しくはそれらの任意の組合せ）を有する配列、又は
    （ｖｉ）（ｉｖ）に記載の配列と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％の配列同一性を有する配列（ｉｖ）
    を含み、
    好ましくは、（ｉｉ）又は（ｖ）における前記置換が、保存的置換である、重鎖及び軽鎖
    を含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  10. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ断片、ジスルフィド連結されたＦｖ（ｄｓＦｖ）及びダイアボディからなる群から選択され、
    好ましくは、前記ｓｃＦｖが、
    （ａ）配列番号１に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号２に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｂ）配列番号１６に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号１８に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｃ）配列番号１７に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号１９に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｄ）配列番号２０に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号２１に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｅ）配列番号３４に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号３５に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｆ）配列番号３６に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号３７に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｇ）配列番号５１に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５３に記載の配列を有するＶＬ、
    （ｈ）配列番号５２に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５３に記載の配列を有するＶＬ、又は
    （ｉ）配列番号５４に記載の配列を有するＶＨ及び配列番号５５に記載の配列を有するＶＬ
    を含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  11. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、マーカーを有し、
    好ましくは、前記抗体又はその抗原結合性断片が、検出可能なマーカー、例えば、酵素（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼ）、放射性核種、蛍光色素、発光性物質（例えば、化学発光性物質）又はビオチンを有する、
    請求項１～１０のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  12. 前記抗体又はその抗原結合性断片が、以下の特性：
    （ａ）５０ｎＭ未満、例えば、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、１ｐＭ、０．１ｐＭ未満又はそれよりも低いＫＤでＰＤ－１（例えば、ヒトＰＤ－１）に結合する、好ましくは、前記ＫＤが、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）又はＥＬＩＳＡによって測定される、
    （ｂ）５０ｎＭ未満、例えば、２０ｎＭ、１０ｎＭ、１ｎＭ、０．９ｎＭ、０．８ｎＭ、０．７ｎＭ、０．６ｎＭ、０．５ｎＭ、０．４ｎＭ、０．３ｎＭ、０．２ｎＭ、０．１ｎＭ、０．０１ｎＭ、１ｐＭ、０．１ｐＭ未満又はそれよりも低いＥＣ５０でＰＤ－１（例えば、ヒトＰＤ－１）に結合する、好ましくは、前記ＥＣ５０が、フローサイトメトリー又は細胞競合ＥＬＩＳＡ技術によって測定される、
    （ｃ）約０．１ｎｇ／ｍＬ～約１０００ｎｇ／ｍＬの範囲のＩＣ５０でＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合と競合する、好ましくは、前記ＩＣ５０が、ＥＬＩＳＡ技術によって測定される、
    （ｄ）Ｔ細胞の活性化を増加させる、例えば、Ｔリンパ球におけるＩＦＮ－γ及び／又はＩＬ－２の発現を増加させる、
    （ｅ）ＢＴＬＡ、ＰＤ－Ｌ１又はＩＣＯＳに結合しない、
    （ｆ）腫瘍細胞を死滅させるか、又はその成長を阻害する、
    （ｇ）良好な熱安定性を有する、或いは
    （ｈ）ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ及びＣＤＣの活性のうちの少なくとも１つがないか、若しくは低減されている、例えば、ＡＤＣＣの活性がないか、若しくは低減されている；ＡＤＣＰの活性がないか、若しくは低減されている；ＡＤＣＰの活性がないか、若しくは低減されており、かつＡＤＣＣの活性がないか、若しくは低減されている；又は、ＡＤＣＰ、ＡＤＣＣ及びＣＤＣの活性がないか、若しくは低減されている
    のうちの少なくとも１つを有する、請求項１～１１のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片。
  13. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、それらの重鎖及び／若しくは軽鎖、又はそれらの重鎖可変領域及び／若しくは軽鎖可変領域をコードする単離された核酸分子。
  14. 前記抗体の前記重鎖をコードする核酸分子及び／又は前記抗体の前記軽鎖をコードする核酸分子を含み、
    （ａ）前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、
    （ｉ）配列番号８５に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
    （ｉｉ）（ｉ）の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｉ）の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有する配列、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、若しくは
    （ｉｉｉ）３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドにおいて、（ｉ）の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
    からなる群から選択される配列を有し、
    並びに／又は、
    前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、
    （ｉｖ）配列番号８７に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
    （ｖ）（ｉｖ）の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｉｖ）の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有する配列、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、若しくは
    （ｖｉ）３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドにおいて、（ｉｖ）の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
    からなる群から選択される配列を有するか、
    或いは
    （ｂ）前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、
    （ｉ）配列番号８９に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
    （ｉｉ）（ｉ）の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｉ）の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有する配列、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、若しくは
    （ｉｉｉ）３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドにおいて、（ｉ）の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
    からなる群から選択される配列を有し、
    並びに／又は、
    前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、
    （ｉｖ）配列番号４６に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列、
    （ｖ）（ｉｖ）の前記ヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、（ｉｖ）の前記ヌクレオチド配列と比較して、少なくとも約８５％、９０％、９５％、９９％以上の配列同一性を有する配列、又は１個若しくは複数のヌクレオチド置換を有する配列）、若しくは
    （ｖｉ）３個、６個、１５個、３０個若しくは４５個以下のヌクレオチドにおいて、（ｉｖ）の前記ヌクレオチド配列と異なる配列
    からなる群から選択される配列を有し、
    好ましくは、前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号８５に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有し、及び／又は前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号８７に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有し、
    好ましくは、前記抗体の前記重鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号８９に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有し、及び／又は前記抗体の前記軽鎖をコードする前記核酸分子が、配列番号４６に記載のヌクレオチド配列若しくはその縮重配列を有する、
    請求項１３に記載の単離された核酸分子。
  15. 請求項１３又は１４に記載の単離された核酸分子を含むベクターであって、好ましくは、クローニングベクター又は発現ベクターであるベクター。
  16. 請求項１３若しくは１４に記載の単離された核酸分子、又は請求項１５に記載のベクターを含む宿主細胞。
  17. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片を調製するための方法であって、請求項１６に記載の宿主細胞を、前記抗体又はその抗原結合性断片の発現を可能にする条件下で培養するステップ、及び前記抗体又はその抗原結合性断片を培養された宿主細胞培養物から回収するステップを含む方法。
  18. 第１の抗体若しくはその断片、及び追加の抗体若しくはその断片又は抗体模倣物を含む多特異性抗体であって、前記第１の抗体若しくはその断片が、請求項１～１２のいずれか一項に記載のＰＤ－１に特異的に結合する抗体又はその抗原結合性断片であり、
    好ましくは、前記多特異性抗体が、二特異性抗体、又は三特異性抗体、又は四特異性抗体である、多特異性抗体。
  19. 抗体又はその抗原結合性断片及びカップリング部分を含むコンジュゲートであって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片であり、前記カップリング部分が、検出可能なマーカー、例えば、放射性同位元素、蛍光性物質、発光性物質、着色物質若しくは酵素であるか、又は前記カップリング部分が、薬剤、例えば、化学療法剤、放射性核種若しくは毒素である、コンジュゲート。
  20. キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞であって、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、請求項１３若しくは１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載のベクターを含むか、又は発現し、好ましくは、前記細胞が、免疫細胞に由来するか、又は前記抗原結合性断片が、ｓｃＦｖから選択され、より好ましくは、前記細胞が、Ｔリンパ球、ＮＫ細胞、単球、マクロファージ又は樹状細胞及びそれらの任意の組合せに由来する、細胞。
  21. 請求項１３若しくは１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載のベクターを含む腫瘍溶解性ウイルス。
  22. 抗体又はその抗原結合性断片及び非免疫グロブリン部分を含む融合タンパク質であって、前記抗体又はその抗原結合性断片が、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片であり、前記非免疫グロブリン部分が、ポリペプチド、例えば、サイトカイン（例えば、ＩＬ－２、ＩＬ－１５、ＩＬ－７、ＩＬ－１２、ＩＬ－１８、ＩＬ－２１、ＴＮＦ－アルファ又はＩＦＮガンマ）である、融合タンパク質。
  23. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、請求項１３若しくは１４に記載の核酸分子、請求項１５に記載のベクター、請求項１６に記載の宿主細胞、請求項１８に記載の多特異性抗体、請求項１９に記載のコンジュゲート、請求項２０に記載のＣＡＲ細胞、請求項２１に記載の腫瘍溶解性ウイルス及び／又は請求項２２に記載の融合タンパク質、並びに薬学的に許容できる担体及び／又は賦形剤を含む医薬組成物であって、
    任意選択で、前記医薬組成物が、追加の薬学的活性薬剤、例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤を更に含み、より好ましくは、前記抗腫瘍剤が、免疫調節効果と関連する抗体、例えば、抗ＬＡＧ－３抗体（例えば、ＡＢ１２Ｔ８）又はＴＩＭ－３抗体（例えば、ＡＢ１２Ｓ３）から選択される、
    医薬組成物。
  24. 前記医薬組成物が、対象における以下の生物学的活性：
    （１）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害するか、又はブロックする、
    （２）ＰＤ－１の活性を下方調節するか、又は排除する、
    （３）ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
    （４）Ｔリンパ球におけるＩＦＮγ又はＩＬ－２の産生を増加させる、
    （５）腫瘍細胞を死滅させるＴリンパ球の能力を増強する
    のうちの少なくとも１つを誘発するのに十分な有効用量の前記抗体又はその抗原結合性断片を含む、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. 請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、及び／又は請求項１３若しくは１４に記載の核酸分子、及び／又は請求項１５に記載のベクター、及び／又は請求項１６に記載の宿主細胞、及び／又は請求項１８に記載の多特異性抗体、及び／又は請求項１９に記載のコンジュゲート、及び／又は請求項２０に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞、及び／又は請求項２１に記載の腫瘍溶解性ウイルス、及び／又は請求項２２に記載の融合タンパク質、及び／又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物、並びに任意選択で使用説明書を含むキット。
  26. 腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置するための医薬の調製における、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、又は請求項１３若しくは１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載のベクター、又は請求項１６に記載の宿主細胞、又は請求項１８に記載の多特異性抗体、又は請求項１９に記載のコンジュゲート、又は請求項２０に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞、又は請求項２１に記載の腫瘍溶解性ウイルス、又は請求項２２に記載の融合タンパク質、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物及び追加の薬学的活性薬剤（例えば、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤）の使用であって、
    任意選択で、前記腫瘍が、以下の組織：皮膚、骨髄、血液、リンパ液、頭頸部、脳、肺、***、胃、胆嚢、肝臓、膵臓、腸、卵巣、前立腺、副腎、腎臓、膀胱、子宮、子宮頸部、精巣、陰茎及び軟組織のうちの１つ又は複数に由来し、
    任意選択で、前記感染症が、細菌感染症、病原体感染症、真菌感染症及びウイルス感染症からなる群から選択され、
    任意選択で、前記感染症が、ウイルス感染症、例えば、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎又はＣ型肝炎であり、任意選択で、前記感染症が、結核であり、
    任意選択で、前記自己免疫疾患が、糖尿病、重症筋無力症、胃炎、天疱瘡、原発性胆汁性肝硬変、多発性硬化症、狼瘡、大腸炎、リウマチ性疾患及び甲状腺疾患からなる群から選択され、
    好ましくは、前記腫瘍が、肺がん、肝臓がん、卵巣がん、子宮頸がん、皮膚がん、結腸がん、直腸がん、神経膠腫、膀胱がん、乳がん、腎臓がん、食道がん、胃がん、口腔扁平上皮がん、尿道上皮細胞がん及び膵臓がん、並びに頭頸部腫瘍からなる群から選択され、
    好ましくは、前記抗腫瘍剤が、免疫調節効果と関連する抗体、例えば、抗ＬＡＧ－３抗体（例えば、ＡＢ１２Ｔ８）又はＴＩＭ－３抗体（例えば、ＡＢ１２Ｓ３）であり、
    任意選択で、請求項２３又は２４に記載の医薬組成物及び追加の薬学的活性薬剤が、組み合わせて又は別々に、同時又は連続して投与される、
    使用。
  27. 前記医薬が、
    （１）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害するか、又はブロックする、
    （２）ＰＤ－１の活性を下方調節するか、又は排除する、
    （３）ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２によって誘導される免疫抑制を低減するか、又は軽減する、
    （４）Ｔリンパ球におけるＩＦＮγ又はＩＬ－２の産生を増加させる、
    （５）腫瘍細胞を死滅させるＴリンパ球の能力を増強する
    のうちの少なくとも１つのためである、請求項２６に記載の使用。
  28. ｉｎ ｖｉｖｏ又はｉｎ ｖｉｔｒｏで、（１）ＰＤ－１のＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２への結合を阻害するか、又はブロックする、（２）ＰＤ－１の活性を下方調節するか、又は排除する、（３）ＰＤ－１又はＰＤ－Ｌ１又はＰＤ－Ｌ２の免疫抑制を低減するか、又は軽減する、（４）Ｔリンパ球におけるＩＦＮγ又はＩＬ－２の産生を増加させる、及び（５）腫瘍細胞を死滅させるＴリンパ球の能力を増強するのうちの少なくとも１つを行うための方法であって、
    有効量の、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体若しくはその抗原結合性断片、又は請求項１３若しくは１４に記載の核酸分子、又は請求項１５に記載のベクター、又は請求項１６に記載の宿主細胞、又は請求項１８に記載の多特異性抗体、又は請求項１９に記載のコンジュゲート、又は請求項２０に記載のキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を発現する細胞、又は請求項２１に記載の腫瘍溶解性ウイルス、又は請求項２２に記載の融合タンパク質、又は請求項２３若しくは２４に記載の医薬組成物を投与するステップ、
    任意選択で、抗腫瘍剤、放射性医薬品、免疫調節効果と関連する薬剤又は自己免疫疾患と関連する薬剤のうちの１つ若しくは複数を、前記抗体若しくはその抗原結合性断片、前記核酸分子、前記ベクター、前記宿主細胞、前記多特性抗体、前記コンジュゲート又は前記医薬組成物の投与と同時、その前又はその後に投与するステップ
    を含む方法。
  29. 対象における腫瘍、感染症若しくは自己免疫疾患を予防及び／又は処置するための方法であって、それを必要とする対象に、有効量の請求項２３又は２４に記載の医薬組成物を投与するステップを含み、前記対象が、哺乳動物であり、好ましくは、前記対象が、ヒトである、方法。
  30. 試料中のＰＤ－１の存在又はレベルを検出する方法であって、前記試料を、請求項１～１２のいずれか一項に記載の抗体又はその抗原結合性断片と、前記抗体又はその抗原結合性断片及びＰＤ－１の間で複合体の形成を可能にする条件下で接触させるステップ、及び前記複合体の前記形成を検出するステップを含む方法。
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