JP2022522205A

JP2022522205A - 病態及び疾患の治療用アンチセンスオリゴマー

Info

Publication number: JP2022522205A
Application number: JP2021550217A
Authority: JP
Inventors: アズナレズ，イザベル
Original assignee: ストークセラピューティクス，インク．
Priority date: 2019-02-27
Filing date: 2020-02-27
Publication date: 2022-04-14
Also published as: EP3931329A1; WO2020176776A1; AU2020227825A1; EP3931329A4; CA3131591A1; SG11202109371VA; KR20210134003A; US20220162605A1; IL285867A; CN113748209A

Abstract

ＳＣＮ１Ａ遺伝子における選択的スプライシング事象は、非産生性ｍＲＮＡ転写産物をもたらす可能性があり、次いで異常なタンパク質発現をもたらす可能性があるため、ＳＣＮ１Ａ遺伝子における選択的スプライシング事象を標的にし得る治療薬剤は、ドラベ症候群患者において機能的タンパク質の発現レベルを調節し、及び／又は異常なタンパク質発現を阻害することができる。そのような治療薬剤を使用して、ＳＣＮ１Ａ、ＳＣＮ８Ａ、又はＳＣＮ５Ａタンパク質欠損症によって引き起こされる病態を治療することができる。【選択図】図１Ａ

Description

相互参照
[0001] 本出願は、その全体が本明細書に援用される、米国仮特許出願第６２／８１１，５１１号（２０１９年２月２７日出願）の利益を請求する。

[0002] 神経系障害は、神経細胞の興奮性、神経細胞の相互作用、及び脳機能全般に媒介するイオンチャネルの機能障害を特徴とする、イオンチャネル異常症（channelopathy）にしばしば関連する。ニューロン電位依存性ナトリウムチャネルのα細孔形成サブユニットをコードするＳＣＮ１Ａ－ＳＣＮ２Ａ－ＳＣＮ３Ａ遺伝子クラスターの一部であるＳＣＮ１Ａ遺伝子における突然変異は、ドラベ症候群（ＤＳ）のような、疾患及び病態の疾病分類番号にある疾患の発症に関連している（Miller, et al., 1993-2015, GeneReviews, Eds. Pagon RA, et al. シアトル（ワシントン州）：ワシントン大学、シアトル、Bookshelf ID: NBK1318, 及び Mulley, et al., 2005, Hum. Mutat. 25: 535-542）。

[0003] 本発明のある態様において開示されるのは、ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有するｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）であってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを有する細胞において、ＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する方法であって、該方法は、該細胞へ治療薬剤を接触させ、それにより治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンのスプライシングを調節し、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの５’端から約１００ヌクレオチド上流；又はＮＩＥの３’端の約１００ヌクレオチド下流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある。いくつかの態様では、治療薬剤は、標的化部分の領域からのＮＭＤエクソンのスプライシングに関与する因子の結合に干渉する。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの５’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド上流にある。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの５’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド上流にある。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの３’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド下流にある。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの３’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド下流にある。いくつかの態様では、治療薬剤は、アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含む。いくつかの態様では、治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除を促進させる。いくつかの態様では、治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの該細胞中のレベルを増加させる。いくつかの態様では、治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの量が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの全量と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する。

[0004] 本発明のある態様において開示されるのは、疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって、該方法は、該細胞中のＮＭＤエクソンを含有してＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡからのナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソン）のスプライシングを調節する治療薬剤と該被験者の該細胞とを接触させ、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり；ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの５’端から約１００ヌクレオチド上流；又はＮＩＥの３’端の約１００ヌクレオチド下流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある。いくつかの態様では、治療薬剤は、標的化部分の領域からのＮＭＤエクソンのスプライシングに関与する因子の結合に干渉する。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの５’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド上流にある。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの５’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド上流にある。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの３’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド下流にある。いくつかの態様では、標的化部分は、ＮＩＥの３’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド下流にある。いくつかの態様では、治療薬剤は、アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含む。いくつかの態様では、治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除を促進させる。いくつかの態様では、治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの該細胞中のレベルを増加させる。いくつかの態様では、治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの量が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの全量と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する。いくつかの態様では、疾患又は病態は、Ｎａ_ｖ１．１における機能欠失変異によって誘導される。いくつかの態様では、疾患又は病態はＳＣＮ１Ａ遺伝子のハプロ不全に関連し、ここで該被験者は、機能的ＳＣＮ１Ａをコードする第１対立遺伝子と、ＳＣＮ１Ａが産生されないか又は低下したレベルで産生される第２対立遺伝子、又は非機能的ＳＣＮ１Ａ又は部分機能的ＳＣＮ１Ａをコードする第２対立遺伝子とを有する。いくつかの態様では、疾患又は病態は脳症である。いくつかの態様では、脳症はてんかん性脳症である。いくつかの態様では、疾患又は病態は、ドラベ症候群（ＤＳ）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；自閉症；又は乳児悪性遊走性部分発作である。いくつかの態様では、ＧＥＦＳ＋は、全般性てんかん熱性痙攣プラス２型である。いくつかの態様では、熱性痙攣は、家族性熱性痙攣３Ａである。いくつかの態様では、ＳＭＥＢは、全般性棘徐波のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－ＳＷ）、ミオクロニー発作のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｍ）、ＳＭＥＩの１より多い特徴を欠いているＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｏ）、又は全身性強直性間代性発作を伴う小児難治性てんかん（ＩＣＥＧＴＣ）である。

[0005] 本発明のある態様において開示されるのは、ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有するｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）であってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを有する細胞において、ＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する方法であって、該方法は、該細胞へ治療薬剤を接触させ、それにより治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンのスプライシングを調節し、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある。

[0006] 本発明のある態様において開示されるのは、疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって、該方法は、該細胞中のＮＭＤエクソンを含有してＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡからのナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソン）のスプライシングを調節する治療薬剤と該被験者の該細胞とを接触させ、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり；ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある。

[0007] 本発明のある態様において開示されるのは、配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含んでなるアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）である。

[0008] 本発明のある態様において開示されるのは、配列番号１２～７３１より選択される配列から成るアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）である。
[0009] 本発明のある態様において開示されるのは、疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって、該方法は、配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含んでなるＡＳＯ；又は配列番号１２～７３１より選択される配列から成るＡＳＯと該被験者の該細胞とを接触させることを含んでなる。

[0010] 本発明のある態様において開示されるのは、配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含んでなるＡＳＯ；又は配列番号１２～７３１より選択される配列から成るＡＳＯを含んでなるキットである。

援用
[0011] 本明細書において言及されるすべての出版物、特許、及び特許出願は、それぞれ個別の出版物、特許、又は特許出願が具体的かつ個別的に援用されると示されるのと同じ程度で、本明細書に援用される。

[0012] 本発明の新規な特徴については、付帯の請求項において特に説明される。本発明の原理が活用される例解の態様について説明する以下の詳細な記載と、以下の付帯図面を参照することによって、本発明の特徴及び利点についてのより良い理解が得られよう。

[0013] 図１は、ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有する標的ｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）と、全長標的タンパク質又は機能的ＲＮＡの発現を増加させる、ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソンの治療薬剤媒介性排除の概略図を図示する。図１Ａは、核分画と細胞質分画へ分割された細胞を示す。核内では、標的遺伝子のプレｍＲＮＡ転写産物がスプライシングを受けてｍＲＮＡを産生し、このｍＲＮＡが細胞質へ輸送されて標的タンパク質へ翻訳される。この標的遺伝子について、そのｍＲＮＡのある画分は、ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）を含有してそれが細胞質において分解されるので、標的タンパク質産生をもたらさない。図１Ｂは、核分画と細胞質分画へ分割された同じ細胞の例を示す。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）のような治療薬剤で処理すると、ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソンの排除が促進されてｍＲＮＡの増加を生じ、次いでこれがより高いレベルの標的タンパク質へ翻訳される。図１Ｃは、ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソンの治療用ＡＳＯ媒介性排除の概略図であって、この排除は、非産生性ｍＲＮＡを減少させて産生性ｍＲＮＡを増加させ、この産生性ｍＲＮＡからの全長標的タンパク質の発現を増加させる。 [0014] 図２は、例示のナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解（ＮＭＤ）誘導エクソンのＳＣＮ１Ａ遺伝子における同定を図示する。比較ゲノミクスを使用するＳＣＮ１Ａ遺伝子中のＮＭＤ誘導エクソンの同定は、ＵＣＳＣゲノムブラウザーにおいて可視化されて示される。上パネルは、ＳＣＮ１Ａ遺伝子の拡大したグラフを示す。１００種の脊椎動物種にわたる保存レベルをピークとして示す。最高のピークがエクソン（黒色のボックス）に対応するのに対し、大多数のイントロン（矢じりのあるライン）では、ピークが観測されない。保存のピークがイントロン２０（ＮＭ＿００６９２０）に同定されており、中央パネルに示した。保存された配列の精査により、３’スプライス部位と５’スプライス部位（下線を施した配列）が横にある、６４ｂｐのエクソン様配列（下パネル、灰色で強調した配列）を同定し、これをエクソン２０ｘと称する。このエクソンの包含がフレームシフトをもたらすため、エクソン２１中に未成熟終止コドンを導入して、この転写産物をＮＭＤの標的とする。 [0015] 図３Ａは、シクロヘキシミド処理を介したＮＭＤ誘導エクソンの確認を図示する。ＤＭＳＯ処理（ＣＨＸ^－）又はシクロヘキシミド処理（ＣＨＸ^＋）したＮｅｕｒｏ２Ａ（マウス神経前駆細胞）由来の細胞質ＲＮＡと、エクソン２１と下流エクソンのプライマーを使用するＲＴ－ＰＣＲ分析によって、ＮＭＤ誘導エクソン（２１ｘ）に対応するバンドの存在を確認した。この産物の独自性について、配列決定によって確認した。このバンドの濃度測定分析を実施して、全ＳＣＮ１Ａ転写産物のエクソン２１ｘ包含％を計算した。Ｎｅｕｒｏ２Ａをシクロヘキシミドで処理（ＣＨＸ^＋）してＮＭＤを阻害すると、細胞質画分において、ＮＭＤ誘導エクソン２１ｘに対応する産物が２倍増加した（薄灰色のバー、ＣＨＸ^－と濃灰色のバー、ＣＨＸ^＋を比較すること）。 [0016] 図３Ｂは、シクロヘキシミド処理を介したＮＭＤ誘導エクソンの確認を図示する。ＤＭＳＯ処理（ＣＨＸ^－）又はシクロヘキシミド処理（ＣＨＸ^＋）したＲｅｎＣｅｌｌＶＭ（ヒト神経前駆細胞）由来の細胞質ＲＮＡと、エクソン２１とエクソン２３におけるプライマーを使用するＲＴ－ＰＣＲ分析によって、ＮＭＤ誘導エクソン（２０ｘ）に対応するバンドの存在を確認した。この産物の独自性について、配列決定によって確認した。このバンドの濃度測定分析を実施して、全ＳＣＮ１Ａ転写産物のエクソン２０ｘ包含％を計算した。ＲｅｎＣｅｌｌＶＭをシクロヘキシミドで処理（ＣＨＸ^＋）してＮＭＤを阻害すると、細胞質画分において、ＮＭＤ誘導エクソン２０ｘに対応する産物が２倍増加した（薄灰色のバー、ＣＨＸ^－と濃灰色のバー、ＣＨＸ^＋を比較すること）。 [0017] 図４は、エクソン２０ｘの３’スプライス部位の上流にある２つの指定領域（領域１と領域２）とエクソン２０ｘの５’スプライス部位の下流にある２つの指定領域（領域３と領域４）を標的とする、ＳＣＮ１Ａエクソン２０ｘ領域について実施したＡＳＯウォークの例示のグラフを図示する。１度に５ヌクレオチドをシフトさせることによってこれらの領域を網羅するようにＡＳＯを設計した。 [0018] 図５Ａは、ＲＴ－ＰＣＲによって評価した、伸長ＡＳＯウォークより選択されたＳＣＮ１Ａエクソン２０ｘ領域へのＡＳＯを図示する。代表的なＰＡＧＥは、ＲｅｎＣｅｌｌにおいて、１μＭで２４時間のヌクレオフェクションを介して、ＳＣＮ１Ａモック処理、対照ＡＳＯ処理（ＮＴ）、又は伸長ウォーク由来のＳＣＮ１Ａエクソン２０ｘ領域へのＡＳＯで処理された、ＳＹＢＲ－安全染色ＲＴ－ＰＣＲ産物を示す。モック＝ＡＳＯ無し；対照ＮＴ＝非標的化対照；Ｐｏｓｃｔｒｌ＝陽性対照。 [0019] 図５Ｂは、図５Ａのデータからのエクソン２０ｘ包含％をプロットするグラフを図示する。 [0020] 図５Ｃは、ＲＰＬ３２内部対照に対して正規化した、図５Ａの試料を使用する伸長ＡＳＯウォークのｑＰＣＲ結果のグラフを図示しており、モックに比べたＳＣＮ１ＡｍＲＮＡの倍数変化をプロットする。

発明の詳細な説明

スプライシングとナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解
[0021] 介在配列又はイントロンは、スプライセオソーム（これは、１次転写産物、核内低分子ＲＮＡ（ｓｎＲＮＡ）、及び多数のタンパク質の間の相互作用を調整する）と称される大きくてきわめて動的なＲＮＡ－タンパク質複合体によって除去される。スプライセオソームは、Ｕ１ｓｎＲＮＡによる５’スプライス部位（５’ｓｓ）の認識、又はＵ２経路による３’スプライス部位（３’ｓｓ）の認識から始まって、各イントロンについて秩序だったやり方でその場限りに（ad hoc）組み立てられるが、これにはＵ２補助因子（Ｕ２ＡＦ）が３’ｓｓ領域へ結合して分岐点配列（ＢＰＳ）へのＵ２結合を促進させることが関与する。Ｕ２ＡＦは、Ｕ２ＡＦ２をコードする６５ｋＤサブユニット（Ｕ２ＡＦ６５）（これは、ポリピリミジントラクト（ＰＰＴ）へ結合する）とＵ２ＡＦ１をコードする３５ｋＤサブユニット（Ｕ２ＡＦ３５）（これは、高度に保存されたＡＧジヌクレオチドと３’ｓｓにて相互作用し、Ｕ２ＡＦ６５結合を安定化させる）から構成される安定したヘテロ２量体である。このＢＰＳ／ＰＰＴユニットと３’ｓｓ／５’ｓｓに加えて、正確なスプライシングには、イントロン又はエクソンのスプライシングのエンハンサー又はサイレンサーとして知られている、スプライス部位認識を活性化するか又は抑制する、補助的な配列又は構造が必要とされる。これらのエレメントにより、高等真核生物のゲノムにある大過剰のクリプティック部位又はシュード部位（真正の部位と同じ配列を有するが、数は１桁多い）の中で真正のスプライス部位が認識されることが可能になる。それらは、しばしば調節機能を有するが、それらの活性化又は抑制の機序についてはほとんど理解されていない。

[0022] スプライシングするか又はしないかの決定は、典型的には、決定論的プロセスというより確率論的プロセスとしてモデル化され得るので、どんなに規定されたスプライシングシグナルであっても不正確にスプライシングする場合があり得る。しかしながら、正常な条件下では、プレｍＲＮＡスプライシングが驚くほど高い忠実度で進行するものである。これは、一部は、隣接するシス作用性の補助的なエクソン及びイントロンのスプライシング調節エレメント（ＥＳＲ又はＩＳＲ）の活性によるものである。典型的には、これらの機能的エレメントは、スプライシングを促進するか又は阻害するそれらの能力に基づいて、それぞれエクソンスプライシングエンハンサー又はイントロンスプライシングエンハンサー（ＥＳＥ又はＩＳＥ）又はサイレンサー（ＥＳＳ又はＩＳＳ）のいずれかとして分類される。一部の補助的シス作用性エレメントには、Ｕ１ｓｎＲＮＰと５’ｓｓとの複合体の配置のように、スプライセオソーム組立ての動力学に影響を及ぼすことによって作用する可能性があるという証拠が今日あるものの、多くのエレメントは、トランス作用性ＲＮＡ結合タンパク質（ＲＢＰ）と協調的に機能する可能性がきわめて高いようである。例えば、セリン及びアルギニンリッチのＲＢＰファミリー（ＳＲタンパク質）は、エクソンを規定するのに重要な役割を担っている、保存されたタンパク質ファミリーである。ＳＲタンパク質は、プレスプライセオソームの諸成分を隣接スプライス部位へ動員することによるか又は近傍にあるＥＳＳの効果に拮抗することによって、エクソン認識を促進させる。ＥＳＳの抑制効果は、ヘテロ核リボヌクレオタンパク質（ｈｎＲＮＰ）ファミリーのメンバーによって媒介され得て、コアなスプライシング因子の隣接スプライス部位への動員を変化させることができる。スプライシング調節におけるそれらの役割に加えて、サイレンサーエレメントは、シュードエクソン（典型的なエクソンの間隔を有するが、機能的なオープンリーディングフレームを有さない、デコイイントロンスプライス部位のセット）の抑制にも役割を有すると示唆されている。ＥＳＥとＥＳＳは、それらの同系のトランス作用性ＲＢＰと共同して、ｍＲＮＡがそれらの前駆体から組み立てられる方法、場所、及び時機を特性するスプライシング制御のセットにおいて重要な成分となる。

[0023] エクソン－イントロン境界の印となる配列は、ヒトの遺伝子内で高頻度に出現し得る、様々な強度の縮重シグナルである。多重エクソン遺伝子では、様々なスプライス部位の対が多くの異なる組合せで一緒に連結し得て、単一の遺伝子から多種多様な転写産物を創出する。これは、一般に、選択的プレｍＲＮＡスプライシングと呼ばれる。選択的スプライシングによって産生されるほとんどのｍＲＮＡアイソフォームは、核から輸送されて機能的なポリペプチドへ翻訳され得るが、単一遺伝子由来の様々なｍＲＮＡアイソフォームは、その翻訳効率において多大に変動する可能性がある。未成熟終止コドン（ＰＴＣ）がエクソン結合複合体の少なくとも５０ｂｐ上流にあるｍＲＮＡアイソフォームは、ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解（ＮＭＤ）経路による分解の標的にされる可能性がある。伝統的（ＢＰＳ／ＰＰＴ／３’ｓｓ／５’ｓｓ）及び補助的なスプライシングモチーフにおける突然変異は、エクソンスキッピング又はクリプティック（又はシュード）エクソン包含又はスプライス部位活性化といった、異常なスプライシングを引き起して、有意にヒトの罹患と死亡の原因になる可能性がある。異常スプライシングと選択的スプライシングのいずれのパターンも、エクソン及びイントロンにおける天然のＤＮＡ変異体によって影響を受ける可能性がある。

[0024] エクソン－イントロンの境界がコドンの３つの位置のどこでも生じ得るとすれば、基準の（canonical）オープンリーディングフレームを維持することができるのは、選択的スプライシング事象の１つのサブセットだけである。例えば、リーディングフレームの改変なしにｍＲＮＡにおいてスキップされるか又は包含され得るのは、３によって等しく割りきれるエクソンだけである。適合可能な相（compatible phases）を有さないスプライシング事象は、フレームシフトを誘導する。下流の事象によって元に戻されなければ、フレームシフトは、確実に１以上のＰＴＣをもたらして、おそらくはＮＭＤによる後続の分解を生じる可能性がある。ＮＭＤは、ＰＴＣを含有しているｍＲＮＡを除去する、翻訳に共役した機序である。ＮＭＤは、すべての真核生物に存在する監視経路として機能することができる。ＮＭＤは、未成熟停止コドンを含有するｍＲＮＡ転写産物を除去することによって、遺伝子発現におけるエラーを抑制することができる。これらの異常なｍＲＮＡの翻訳は、ある場合には、生じるタンパク質の有害な機能獲得又は優勢ネガティブ活性をもたらす可能性がある。ＮＭＤは、ＰＴＣのある転写産物だけでなく、多くの内因性遺伝子より発現される広範囲のｍＲＮＡアイソフォームも標的とするので、ＮＭＤは、細胞中の定常状態のＲＮＡレベルの微調整と粗調整をともに推進する主要制御因子であると示唆されている。

[0025] ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）は、イントロン内部の領域であって、成熟ＲＮＡ転写産物に含まれる場合にＮＭＤ経路を活性化することができる、エクソン又はシュードエクソンである。恒常的なスプライシング事象において、ＮＩＥを含有しているイントロンは、通常はスプライスアウトされるが、そのイントロン又はその一部（例、ＮＩＥ）は、選択的又は異常なスプライシング事象の間に保持される可能性がある。そのようなＮＩＥを含有している成熟ｍＲＮＡ転写産物は、ＮＭＤ経路を誘導するフレームシフトの故に非産生性であり得る。成熟ＲＮＡ転写産物におけるＮＩＥの包含は、遺伝子発現を下方調節する可能性がある。本開示では、ＮＩＥを含有しているｍＲＮＡ転写産物を「ＮＩＥ含有ｍＲＮＡ」又は「ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ」と呼ぶことにする。

[0026] クリプティック（又はシュード）スプライス部位は、真正のスプライス部位と同じスプライシング認識配列を有するが、スプライシング反応には使用されない。それらは、ヒトゲノム中の真正のスプライス部位より１桁数が多くて、通常は、これまでほとんど理解されていない分子機序によって抑制されている。クリプティック５’スプライス部位は、コンセンサスＮＮＮ／ＧＵＮＮＮＮ又はＮＮＮ／ＧＣＮＮＮＮ（ここでＮは、あらゆるヌクレオチドであって、／は、エクソン－イントロンの境界である）を有する。クリプティック３’スプライス部位は、コンセンサスＮＡＧ／Ｎを有する。それらの活性化は、正統なスプライス部位の最適なコンセンサス（即ち、それぞれ、ＭＡＧ／ＧＵＲＡＧＵとＹＡＧ／Ｇ、ここでＭは、Ｃ又はＡであり、Ｒは、Ｇ又はＡであり、そしてＹは、Ｃ又はＵである）により類似させる周囲のヌクレオチドによって、プラスの影響を受ける。

[0027] スプライス部位とそれらの調節配列は、当業者によって、例えば、Kralovicova, J. and Vorechovsky, I.(2007)「補助スプライシング配列による異常なスプライス部位活性化の全体制御：エクソン及びイントロンの明確化における勾配の証拠（Global control of aberrant splice site activation by auxiliary splicing sequences: evidence for a gradient in exon and intron definition），Nucleic Acids Res., 35, 6399-6413,（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2095810/pdf/gkm680.pdf）に収載される、公的に利用可能な好適なアルゴリズムを使用して、容易に同定することができる。

[0028] クリプティックスプライス部位又はスプライシング調節配列は、Ｕ２ＡＦのようなＲＮＡ結合タンパク質について、ＮＩＥのスプライス部位と競合する場合がある。１つの態様では、クリプティックスプライス部位又はスプライシング調節配列へある薬剤を結合させてＲＮＡ結合タンパク質の結合を妨げて、それによってＮＩＥスプライス部位の利用を有利にし得る。

[0029] １つの態様では、クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥの５’又は３’スプライス部位を含み得ない。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ５’スプライス部位の少なくとも１０ヌクレオチド上流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ５’スプライス部位の少なくとも２０ヌクレオチド上流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ５’スプライス部位の少なくとも５０ヌクレオチド上流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ５’スプライス部位の少なくとも１００ヌクレオチド上流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ５’スプライス部位の少なくとも２００ヌクレオチド上流にあり得る。

[0030] クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ３’スプライス部位の少なくとも１０ヌクレオチド下流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ３’スプライス部位の少なくとも２０ヌクレオチド下流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ３’スプライス部位の少なくとも５０ヌクレオチド下流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ３’スプライス部位の少なくとも１００ヌクレオチド下流にあり得る。クリプティックスプライス部位は、ＮＩＥ３’スプライス部位の少なくとも２００ヌクレオチド下流にあり得る。

標的転写産物
[0031] いくつかの態様では、本開示の方法は、ＳＣＮ１Ａ遺伝子より転写されるプレｍＲＮＡ中のＮＩＥの存在を利用する。同定されたＳＣＮ１ＡＮＩＥプレｍＲＮＡ分子種のスプライシングにより機能的な成熟ＳＣＮ１ＡｍＲＮＡを産生することは、ＮＩＥのエクソンスキッピングを促進させる、ＡＳＯのような治療薬剤を使用して誘導することができる。エクソンスキッピングの誘導は、ＮＭＤ経路の阻害を生じる可能性がある。生じる成熟ＳＣＮ１ＡｍＲＮＡは、通常はＮＭＤ経路を活性化することなく翻訳され得て、それによって患者の細胞中のＳＣＮ１Ａタンパク質の量を増加させて、ドラベ症候群（ＤＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス、２型；家族性熱性痙攣、３Ａ；自閉症；てんかん性脳症、早期乳児、１３；洞不全症候群１；アルツハイマー病；又はＳＵＤＥＰのようなＳＣＮ１Ａ欠損症に関連した病態の症状を軽減する。

[0032] 様々な態様では、本開示は、ＳＣＮ１ＡｍＲＮＡ転写産物を標的にしてスプライシング又はタンパク質発現レベルを調節する（例、亢進するか又は阻害する）ことができる治療薬剤を提供する。この治療薬剤は、低分子、ポリヌクレオチド、又はポリペプチドであり得る。いくつかの態様では、治療薬剤は、ＡＳＯである。ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ上の様々な領域又は配列がＡＳＯのような治療薬剤によって標的化され得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含有しているＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥ内部にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥ（３’ｓｓ）の５’端より上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥ（５’ｓｓ）の３’端より下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥの５’端の横にあるイントロンの内部にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥの３’端の横にあるイントロンの内部にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥ－イントロン境界を含んでなる配列を標的にする。ＮＩＥ－イントロン境界は、イントロン配列とＮＩＥ領域のジャンクションに言及し得る。このイントロン配列は、ＮＩＥの５’端又はＮＩＥの３’端の横にあり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のエクソンの内部にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物のイントロンの内部にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、イントロンの一部とエクソンの一部をともに含んでなる配列を標的にする。

[0033] いくつかの態様では、本明細書に記載される治療薬剤が、ＮＭＤエクソンｍＲＮＡのスプライシングに関与する因子の結合を調節する。
[0034] いくつかの態様では、本明細書に記載される治療薬剤が、ＮＭＤエクソンｍＲＮＡのスプライシングに関与する因子の結合に干渉する。

[0035] いくつかの態様では、本明細書に記載される治療薬剤が、ＮＭＤエクソンｍＲＮＡのスプライシングに関与する因子の結合を妨げる。
[0036] いくつかの態様では、治療薬剤が、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの２つの基準エクソン領域間のイントロン領域中に位置している標的化部分を標的にして、ここでこのイントロン領域は、ＮＭＤエクソンを含有する。

[0037] いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンと少なくとも一部重なっている標的化部分を標的にする。
[0038] いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンの上流にあるイントロンと少なくとも一部重なっている標的化部分を標的にする。

[0039] いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンの内部にある標的化部分を標的にする。
[0040] いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンの少なくとも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０以上の連続したヌクレオチドを含んでなる標的化部分を標的にする。いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンの最大でも約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０以上の連続したヌクレオチドを含んでなる標的化部分を標的にする。いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンの約５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、又は３０以上の連続したヌクレオチドを含んでなる標的化部分を標的にする。

[0041] いくつかの態様では、治療薬剤が、ＮＭＤエクソンの近位にある標的化部分を標的にする。
[0042] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの５’端から約１～約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの５’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、約１９５０～約２０００ヌクレオチド、約２０００～約３０００ヌクレオチド、約３０００～約４０００ヌクレオチド、又は約４０００～約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの５’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0043] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの５’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、少なくとも約２０００ヌクレオチド、少なくとも約３０００ヌクレオチド、少なくとも約４０００ヌクレオチド、又は少なくとも約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0044] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約１～約２０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、又は約１９５０～約２０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。

[0045] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、又は少なくとも約２０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。

[0046] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約１～約５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥ領域の５’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、又は少なくとも約５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0047] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約１～約５００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥ領域の３’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、又は少なくとも約５００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0048] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約１～約２０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、又は約１９５０～約２０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。

[0049] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、又は少なくとも約２０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。

[0050] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの３’端から約１～約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの３’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、約１９５０～約２０００ヌクレオチド、約２０００～約３０００ヌクレオチド、約３０００～約４０００ヌクレオチド、又は約４０００～約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの３’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0051] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなるイントロンの３’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、少なくとも約２０００ヌクレオチド、少なくとも約３０００ヌクレオチド、少なくとも約４０００ヌクレオチド、又は少なくとも約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0052] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約４～約３００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥ領域の５’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、又は約１４５０～約１５００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から３００ヌクレオチドより多く上流にある配列を標的にし得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約４～約３００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、又は約１４５０～約１５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から３００ヌクレオチドより多く下流にある配列を標的にする。

[0053] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約４～約３００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥ領域の５’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、又は少なくとも約１０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約４～約３００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、又は少なくとも約１０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から３００ヌクレオチドより多く下流にある配列を標的にする。

[0054] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から約４～約３００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥ領域の５’端から最大でも約１０ヌクレオチド、最大でも約２０ヌクレオチド、最大でも約５０ヌクレオチド、最大でも約８０ヌクレオチド、最大でも約８５ヌクレオチド、最大でも約９０ヌクレオチド、最大でも約９５ヌクレオチド、最大でも約９６ヌクレオチド、最大でも約９７ヌクレオチド、最大でも約９８ヌクレオチド、最大でも約９９ヌクレオチド、最大でも約１００ヌクレオチド、最大でも約１０１ヌクレオチド、最大でも約１０２ヌクレオチド、最大でも約１０３ヌクレオチド、最大でも約１０４ヌクレオチド、最大でも約１０５ヌクレオチド、最大でも約１１０ヌクレオチド、最大でも約１２０ヌクレオチド、最大でも約１５０ヌクレオチド、最大でも約２００ヌクレオチド、最大でも約３００ヌクレオチド、最大でも約４００ヌクレオチド、最大でも約５００ヌクレオチド、最大でも約６００ヌクレオチド、最大でも約７００ヌクレオチド、最大でも約８００ヌクレオチド、最大でも約９００ヌクレオチド、最大でも約１０００ヌクレオチド、最大でも約１１００ヌクレオチド、最大でも約１２００ヌクレオチド、最大でも約１３００ヌクレオチド、最大でも約１４００ヌクレオチド、又は最大でも約１５００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から約４～約３００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から最大でも約１０ヌクレオチド、最大でも約２０ヌクレオチド、最大でも約５０ヌクレオチド、最大でも約８０ヌクレオチド、最大でも約８５ヌクレオチド、最大でも約９０ヌクレオチド、最大でも約９５ヌクレオチド、最大でも約９６ヌクレオチド、最大でも約９７ヌクレオチド、最大でも約９８ヌクレオチド、最大でも約９９ヌクレオチド、最大でも約１００ヌクレオチド、最大でも約１０１ヌクレオチド、最大でも約１０２ヌクレオチド、最大でも約１０３ヌクレオチド、最大でも約１０４ヌクレオチド、最大でも約１０５ヌクレオチド、最大でも約１１０ヌクレオチド、最大でも約１２０ヌクレオチド、最大でも約１５０ヌクレオチド、最大でも約２００ヌクレオチド、最大でも約３００ヌクレオチド、最大でも約４００ヌクレオチド、最大でも約５００ヌクレオチド、最大でも約６００ヌクレオチド、最大でも約７００ヌクレオチド、最大でも約８００ヌクレオチド、最大でも約９００ヌクレオチド、又は最大でも約１０００ヌクレオチド、最大でも約１１００ヌクレオチド、最大でも約１２００ヌクレオチド、最大でも約１３００ヌクレオチド、最大でも約１４００ヌクレオチド、又は最大でも約１５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から３００ヌクレオチドより多く下流にある配列を標的にする。

[0055] いくつかの態様では、本明細書に記載されるようなＮＩＥ（エクソン２３）は、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０とｃｈｒ２：１６６００７２９３の間に位置している。いくつかの態様では、ＮＩＥの５’端は、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０に位置している。いくつかの態様では、ＮＩＥの３’端は、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３に位置している。

[0056] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０から約１～約２０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、又は約１９５０～約２０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。

[0057] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、又は少なくとも約２０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。

[0058] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位；ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０から約１～約５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２３０から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、又は少なくとも約５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0059] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３から約１～約５００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、又は少なくとも約５００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0060] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３から約１～約２０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、又は約１９５０～約２０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。

[0061] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９３から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、又は少なくとも約２０００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。

[0062] いくつかの態様では、ＮＩＥを含んでなるイントロンは、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００２７５４とｃｈｒ２：１６６００９７１８の間に位置している。いくつかの態様では、ＮＩＥを含んでなるイントロンの５’端は、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００２７５４に位置している。いくつかの態様では、ＮＩＥを含んでなるイントロンの３’端は、ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００９７１８に位置している。

[0063] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００２７５４から約１～約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００２７５４から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、約１９５０～約２０００ヌクレオチド、約２０００～約３０００ヌクレオチド、約３０００～約４０００ヌクレオチド、又は約４０００～約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００２７５４から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0064] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００２７５４から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、少なくとも約２０００ヌクレオチド、少なくとも約３０００ヌクレオチド、少なくとも約４０００ヌクレオチド、又は少なくとも約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0065] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２２９から約１～約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２２９から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、約１９５０～約２０００ヌクレオチド、約２０００～約３０００ヌクレオチド、約３０００～約４０００ヌクレオチド、又は約４０００～約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２２９から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0066] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２２９から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、少なくとも約２０００ヌクレオチド、少なくとも約３０００ヌクレオチド、少なくとも約４０００ヌクレオチド、又は少なくとも約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0067] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９４から約１～約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９４から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、約１９５０～約２０００ヌクレオチド、約２０００～約３０００ヌクレオチド、約３０００～約４０００ヌクレオチド、又は約４０００～約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９４から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0068] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００７２９４から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、少なくとも約２０００ヌクレオチド、少なくとも約３０００ヌクレオチド、少なくとも約４０００ヌクレオチド、又は少なくとも約５０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。

[0069] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００９７１８から約１～約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００９７１８から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、約１４５０～約１５００ヌクレオチド、約１５５０～約１６００ヌクレオチド、約１６５０～約１７００ヌクレオチド、約１７５０～約１８００ヌクレオチド、約１８５０～約１９００ヌクレオチド、約１９５０～約２０００ヌクレオチド、約２０００～約３０００ヌクレオチド、約３０００～約４０００ヌクレオチド、又は約４０００～約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００９７１８から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、又は約９５０～約１０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0070] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３８／ｈｇ３８：ｃｈｒ２：１６６００９７１８から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、少なくとも約１０００ヌクレオチド、少なくとも約１２００ヌクレオチド、少なくとも約１４００ヌクレオチド、少なくとも約１５００ヌクレオチド、少なくとも約１６００ヌクレオチド、少なくとも約１８００ヌクレオチド、少なくとも約２０００ヌクレオチド、少なくとも約３０００ヌクレオチド、少なくとも約４０００ヌクレオチド、又は少なくとも約５０００ヌクレオチド上流にある配列を標的にする。

[0071] いくつかの態様では、本明細書に記載されるようなＮＩＥは、図２に図示されるように、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０とＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３の間に位置している。いくつかの態様では、ＮＩＥの５’端は、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３に位置している。いくつかの態様では、ＮＩＥの３’端は、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０に位置している。

[0072] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から約４～約３００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、又は約１４５０～約１５００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から３００ヌクレオチドより多く上流にある配列を標的にし得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から約４～約３００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から約１～約２０ヌクレオチド、約２０～約５０ヌクレオチド、約５０～約１００ヌクレオチド、約１００～約１５０ヌクレオチド、約１５０～約２００ヌクレオチド、約２００～約２５０ヌクレオチド、約２５０～約３００ヌクレオチド、約３５０～約４００ヌクレオチド、約４５０～約５００ヌクレオチド、約５５０～約６００ヌクレオチド、約６５０～約７００ヌクレオチド、約７５０～約８００ヌクレオチド、約８５０～約９００ヌクレオチド、約９５０～約１０００ヌクレオチド、約１０５０～約１１００ヌクレオチド、約１１５０～約１２００ヌクレオチド、約１２５０～約１３００ヌクレオチド、約１３５０～約１４００ヌクレオチド、又は約１４５０～約１５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から３００ヌクレオチドより多く下流にある配列を標的にする。

[0073] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から約４～約３００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、又は少なくとも約１０００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から約４～約３００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から少なくとも約１ヌクレオチド、少なくとも約１０ヌクレオチド、少なくとも約２０ヌクレオチド、少なくとも約５０ヌクレオチド、少なくとも約８０ヌクレオチド、少なくとも約８５ヌクレオチド、少なくとも約９０ヌクレオチド、少なくとも約９５ヌクレオチド、少なくとも約９６ヌクレオチド、少なくとも約９７ヌクレオチド、少なくとも約９８ヌクレオチド、少なくとも約９９ヌクレオチド、少なくとも約１００ヌクレオチド、少なくとも約１０１ヌクレオチド、少なくとも約１０２ヌクレオチド、少なくとも約１０３ヌクレオチド、少なくとも約１０４ヌクレオチド、少なくとも約１０５ヌクレオチド、少なくとも約１１０ヌクレオチド、少なくとも約１２０ヌクレオチド、少なくとも約１５０ヌクレオチド、少なくとも約２００ヌクレオチド、少なくとも約３００ヌクレオチド、少なくとも約４００ヌクレオチド、少なくとも約５００ヌクレオチド、少なくとも約６００ヌクレオチド、少なくとも約７００ヌクレオチド、少なくとも約８００ヌクレオチド、少なくとも約９００ヌクレオチド、又は少なくとも約１０００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から３００ヌクレオチドより多く下流にある配列を標的にする。

[0074] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から約４～約３００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ゲノム部位：ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，８０３から最大でも約１０ヌクレオチド、最大でも約２０ヌクレオチド、最大でも約５０ヌクレオチド、最大でも約８０ヌクレオチド、最大でも約８５ヌクレオチド、最大でも約９０ヌクレオチド、最大でも約９５ヌクレオチド、最大でも約９６ヌクレオチド、最大でも約９７ヌクレオチド、最大でも約９８ヌクレオチド、最大でも約９９ヌクレオチド、最大でも約１００ヌクレオチド、最大でも約１０１ヌクレオチド、最大でも約１０２ヌクレオチド、最大でも約１０３ヌクレオチド、最大でも約１０４ヌクレオチド、最大でも約１０５ヌクレオチド、最大でも約１１０ヌクレオチド、最大でも約１２０ヌクレオチド、最大でも約１５０ヌクレオチド、最大でも約２００ヌクレオチド、最大でも約３００ヌクレオチド、最大でも約４００ヌクレオチド、最大でも約５００ヌクレオチド、最大でも約６００ヌクレオチド、最大でも約７００ヌクレオチド、最大でも約８００ヌクレオチド、最大でも約９００ヌクレオチド、最大でも約１０００ヌクレオチド、最大でも約１１００ヌクレオチド、最大でも約１２００ヌクレオチド、最大でも約１３００ヌクレオチド、最大でも約１４００ヌクレオチド、又は最大でも約１５００ヌクレオチド上流（又は５’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から約４～約３００ヌクレオチド下流（又は３’）にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から最大でも約１０ヌクレオチド、最大でも約２０ヌクレオチド、最大でも約５０ヌクレオチド、最大でも約８０ヌクレオチド、最大でも約８５ヌクレオチド、最大でも約９０ヌクレオチド、最大でも約９５ヌクレオチド、最大でも約９６ヌクレオチド、最大でも約９７ヌクレオチド、最大でも約９８ヌクレオチド、最大でも約９９ヌクレオチド、最大でも約１００ヌクレオチド、最大でも約１０１ヌクレオチド、最大でも約１０２ヌクレオチド、最大でも約１０３ヌクレオチド、最大でも約１０４ヌクレオチド、最大でも約１０５ヌクレオチド、最大でも約１１０ヌクレオチド、最大でも約１２０ヌクレオチド、最大でも約１５０ヌクレオチド、最大でも約２００ヌクレオチド、最大でも約３００ヌクレオチド、最大でも約４００ヌクレオチド、最大でも約５００ヌクレオチド、最大でも約６００ヌクレオチド、最大でも約７００ヌクレオチド、最大でも約８００ヌクレオチド、最大でも約９００ヌクレオチド、又は最大でも約１０００ヌクレオチド、最大でも約１１００ヌクレオチド、最大でも約１２００ヌクレオチド、最大でも約１３００ヌクレオチド、最大でも約１４００ヌクレオチド、又は最大でも約１５００ヌクレオチド下流にある配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＧＲＣｈ３７／ｈｇ１９：ｃｈｒ２：１６６，８６３，７４０から３００ヌクレオチドより多く下流にある配列を標的にする。

[0075] 本明細書の実施例に記載されるように、ＳＣＮ１Ａ遺伝子（配列番号１）についてＮＩＥを分析して、イントロン２０（イントロン２０プレｍＲＮＡをコードする配列番号６を参照のこと）の一部（本開示を通して、この部分をエクソン２３又はエクソン２０ｘと呼ぶ）の包含について観測した。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＳＣＮ１Ａゲノム配列より転写されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ（配列番号２）を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、イントロン２０の一部を含んでなる、ＳＣＮ１Ａゲノム配列由来のＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、エクソン２３（又はエクソン２０ｘ）（配列番号４）を含んでなる、ＳＣＮ１Ａゲノム配列由来のＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号２又は９のＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥを含んでなる、配列番号２又は９のＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、エクソン２３（又はエクソン２０ｘ）（配列番号７）を含んでなる、配列番号２のＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物を標的にする。いくつかの態様では、本明細書に開示されるＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ配列（配列番号２又は９）を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥ（配列番号７又は１１）を含んでなるＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号６、７、１０、又は１１のいずれか１つによるＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２～７３１のいずれか１つによる配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号１２～３７１のいずれか１つによる配列を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯは、配列番号３７２～７３１のいずれか１つによる配列を有する。

[0076] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物は、配列番号１又は８に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性がある遺伝子配列によってコードされる。いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥプレｍＲＮＡ転写産物は、配列番号２～７及び９～１１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の配列同一性がある配列を含む。

[0077] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物（又はＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）は、配列番号２、６、７、９、１０、及び１２に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含む。いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物（又はＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）は、配列番号１及び８に対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列によってコードされる。いくつかの態様では、ＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分は、配列番号２、６、７、９、１０、及び１２の少なくとも８個の連続した核酸を含んでなる領域に対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含む。

[0078] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの５’端から上流にある配列を標的にする。例えば、ＮＩＥの５’端から上流にある配列（例、ヒトＳＣＮ１Ａ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）、又はマウスＳＣＮ１Ａ中のエクソン２１ｘ）を標的にするＡＳＯは、配列番号１２～１９１又は３７２～５５１のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含み得る。別の例では、ＮＩＥの５’端から上流にある配列（例、ヒトＳＣＮ１Ａ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）、又はマウスＳＣＮ１Ａ中のエクソン２１ｘ）を標的にするＡＳＯは、配列番号１２～１９１のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含み得る。追加の例では、ＮＩＥの５’端から上流にある配列（例、ヒトＳＣＮ１Ａ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）、又はマウスＳＣＮ１Ａ中のエクソン２１ｘ）を標的にするＡＳＯは、配列番号３７２～５５１のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含み得る。

[0079] いくつかの態様では、ＡＳＯは、エクソン２３を含んでなる、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡのエクソン２３の５’端から下流（又は３’）にあるエクソン２３配列を標的にする。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡのエクソン２０ｘの３’端から上流（又は５’）にあるエクソン２３配列を標的にする。

[0080] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＮＩＥの３’端から下流にある配列を標的にする。例えば、ＮＩＥの３’端から下流にある配列（例、ヒトＳＣＮ１Ａ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）、又はマウスＳＣＮ１Ａ中のエクソン２１ｘ）を標的にするＡＳＯは、配列番号１９２～３７１又は５５２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含み得る。別の例では、ＮＩＥの３’端から下流にある配列（例、ヒトＳＣＮ１Ａ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）、又はマウスＳＣＮ１Ａ中のエクソン２１ｘ）を標的にするＡＳＯは、配列番号１９２～３７１のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含み得る。追加の例では、ＮＩＥの３’端から下流にある配列（例、ヒトＳＣＮ１Ａ中のエクソン２３（又はエクソン２０ｘ）、又はマウスＳＣＮ１Ａ中のエクソン２１ｘ）を標的にするＡＳＯは、配列番号５５２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％の配列同一性がある配列を含み得る。

[0081] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分は、イントロン１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５（イントロン番号付けは、ＮＭ＿００６９２０でのｍＲＮＡ配列に対応する）中にある。いくつかの態様では、ＮＩＥプレｍＲＮＡの標的化部分へのＡＳＯのハイブリダイゼーションがイントロン１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５の内部にあるＮＩＥの少なくとも１つのエクソンスキッピングを生じて、引き続きＳＣＮ１Ａタンパク質産生を増加させる。いくつかの態様では、ＮＩＥプレｍＲＮＡの標的化部分へのＡＳＯのハイブリダイゼーションがイントロン１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、又は２５の内部にあるＮＩＥの少なくとも１つのエクソンスキッピングを阻害するか又は妨害して、引き続きＳＣＮ１Ａタンパク質産生を減少させる。いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分は、イントロン２０中にある。当業者は、本明細書に提供されるイントロン配列に基づくか又はＮＭ＿００６９２０、ＮＭ＿００１２０２４３５、ＮＭ＿００１１６５９６４、又はＮＭ＿００１１６５９６３でのｍＲＮＡ配列に関連して提供される番号を使用して、どのアイソフォームにおいても対応するイントロン番号を決定することができる。当業者はまた、本明細書に提供されるイントロン配列に基づくか又はＮＭ＿００６９２０、ＮＭ＿００１２０２４３５、ＮＭ＿００１１６５９６４、又はＮＭ＿００１１６５９６３でのｍＲＮＡ配列に関連して提供される番号を使用して、本発明の方法を使用して標的化するための、どのＳＣＮ１Ａアイソフォームにおいても横にあるエクソンの配列を決定することができる。

[0082] いくつかの態様では、本開示の方法及び組成物は、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡのシュードエクソンのエクソンスキッピングを誘導するか又は阻害することによってＳＣＮ１Ａの発現を調節する（例えば、増加させるか又は減少させる）ために使用される。いくつかの態様では、シュードエクソンは、イントロン１～イントロン２５のいずれの内部にもある配列である。いくつかの態様では、シュードエクソンは、イントロン２、４、６、１３、１４、１５、１６、１７、１８、２０、２１、２２、２３、２４、及び２５のいずれの内部にもある配列である。いくつかの態様では、シュードエクソンは、イントロン１５、イントロン１８、及びイントロン１９いずれの内部にもある配列である。いくつかの態様では、シュードエクソンは、どのＳＣＮ１Ａイントロンでもその一部でもあり得る。いくつかの態様では、シュードエクソンは、イントロン２０の内部にある。本明細書において使用されるＳＣＮ１Ａイントロン番号付けは、ＮＭ＿００６９２０でのＲＮＡ配列に対応する。このイントロン番号付けは、異なるＳＣＮ１Ａアイソフォーム配列に関連して変更し得ると理解される。

ＳＣＮ１Ａタンパク質
[0083] ＳＣＮ１Ａ遺伝子は、ＳＣＮ１Ａ（ナトリウムチャネル、電位依存性、Ｉ型、αサブユニット）タンパク質（これは、電位依存性ナトリウムチャネルＮａ_ｖ１．１のα－サブユニットとしても言及され得る）をコードし得る。また上記に記載されるように、ＤＳにおけるＳＣＮ１Ａ突然変異は、このタンパク質全体に広がっている。この遺伝子全体で１００より多い新規突然変異が同定されていて、より衰弱化させるものが新たに生じている。これらは、短縮化（４７％）、ミスセンス（４３％）、欠失（３％）、及びスプライス部位変異（７％）を含む。ＳＣＮ１Ａ突然変異を担っている被験者の百分率は、３３％と１００％の間で変動する。大多数の突然変異（８８％）は、新規の変化である。

[0084] いくつかの態様では、本明細書に記載される方法は、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質の産生を調節する（例えば、増加させるか又は減少させる）ために使用される。本明細書に使用されるように、「機能的」という用語は、治療される病態（例、ドラベ症候群；全般性てんかん熱性痙攣プラス、２型；家族性熱性痙攣、３Ａ；自閉症；てんかん性脳症、早期乳児、１３；洞不全症候群１；アルツハイマー病；又はＳＵＤＥＰ）のどの１以上の症状も消失させるのに必要であるＳＣＮ１Ａタンパク質の活性又は機能の量に言及する。いくつかの態様では、本方法は、部分機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質の産生を増加させるために使用される。本明細書に使用されるように、「部分機能的」という用語は、疾患又は病態のどの１以上の症状も消失させるか又は予防するのに必要である活性又は機能の量未満である、ＳＣＮ１Ａタンパク質の活性又は機能のあらゆる量に言及する。いくつかの態様では、部分機能的なタンパク質又はＲＮＡは、完全機能的なタンパク質又はＲＮＡに比べて、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、又は少なくとも９５％少ない活性を有するものである。

[0085] いくつかの態様では、本方法は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡを有している被験者の細胞によるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を増加させる方法であって、ここで該被験者は、ＳＣＮ１Ａタンパク質の活性の不足量によって引き起こされるドラベ症候群を有して、ここでそのＳＣＮ１Ａタンパク質の不足量は、ＳＣＮ１Ａタンパク質のハプロ不全によって引き起こされる。このような態様では、該被験者は、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする第１対立遺伝子と、ＳＣＮ１Ａタンパク質が産生されない第２対立遺伝子を有する。別のこのような態様では、該被験者は、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする第１対立遺伝子と、非機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする第２対立遺伝子を有する。別のこのような態様では、該被験者は、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする第１対立遺伝子と、部分機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする第２対立遺伝子を有する。これらの態様のいずれにおいても、当該アンチセンスオリゴマーは、第２対立遺伝子より転写されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ結合して、それによってプレｍＲＮＡ由来のシュードエクソンのエクソンスキッピングを誘導して、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルの増加と、該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現の増加を引き起こす。

[0086] 関連した態様では、本方法は、ＡＳＯを使用して、タンパク質又は機能的ＲＮＡの発現を増加させる方法である。いくつかの態様では、ＡＳＯを使用して、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡを有している被験者の細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を増加させるが、ここで該被験者は、ＳＣＮ１Ａタンパク質の量又は機能における欠損症、例えば、ドラベ症候群（ＤＳ）（ＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；又は自閉症を有している。いくつかの態様では、ＡＳＯを使用して、被験者の細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を増加させるが、ここで該被験者は、ＳＣＮ８Ａタンパク質の量又は機能における欠損症、例えば、てんかん性脳症、早期乳児、１３を有している。いくつかの態様では、ＡＳＯを使用して、被験者の細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を増加させるが、ここで該被験者は、ＳＣＮ５Ａタンパク質の量又は機能における欠損症、例えば洞不全症候群１を有している。

[0087] いくつかの態様では、疾患又は病態の原因であるタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物は、本明細書に記載されるＡＳＯの標的になる。いくつかの態様では、該疾患の原因ではないタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ転写産物がＡＳＯの標的になる。例えば、特別な経路における第１タンパク質の突然変異又は欠損の結果である疾患が、第２タンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡを標的にして第２タンパク質の産生を増加させることによって、改善される場合がある。いくつかの態様では、第２タンパク質の機能は、第１タンパク質（疾患又は病態の原因である）の突然変異又は欠損を相殺することができる。

[0088] いくつかの態様では、被験者は：
（ａ）第１の突然変異対立遺伝子［それにより：
（ｉ）ＳＣＮ１Ａタンパク質は、野生型対立遺伝子からの産生に比較して低下したレベルで産生される、
（ｉｉ）ＳＣＮ１Ａタンパク質は、同等の野生型タンパク質に比較して低下した機能を有する形態で産生される、又は
（ｉｉｉ）ＳＣＮ１Ａタンパク質も機能的ＲＮＡも、産生されない］、及び
（ｂ）第２の突然変異対立遺伝子［それにより：
（ｉ）ＳＣＮ１Ａタンパク質は、野生型対立遺伝子からの産生に比較して低下したレベルで産生される、
（ｉｉ）ＳＣＮ１Ａタンパク質は、同等の野生型タンパク質に比較して低下した機能を有する形態で産生される、又は
（ｉｉｉ）ＳＣＮ１Ａタンパク質は、産生されない］を有して、ここでＮＩＥ含有プレｍＲＮＡは、第１対立遺伝子及び／又は第２対立遺伝子より転写される。これらの態様では、ＡＳＯは、第１対立遺伝子又は第２対立遺伝子より転写されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ結合して、それによってＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ由来のシュードエクソンのエクソンスキッピングを誘導して、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルの増加と、該被験者の該細胞における標的タンパク質又は機能的ＲＮＡの発現の増加を引き起こす。これらの態様では、ＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ由来のシュードエクソンのエクソンスキッピングより生じる、発現レベルの増加を有している標的タンパク質又は機能的ＲＮＡは、同等の野生型タンパク質に比較して低下した機能を有している形態（部分機能的）、又は同等の野生型タンパク質に比較して完全な機能を有している形態（完全機能的）のいずれかである。

[0089] いくつかの態様では、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルは、対照細胞（例、アンチセンスオリゴマーで処理されない細胞、又はＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ結合しないアンチセンスオリゴマーで処理される細胞）において産生される、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡの量に比較されるとき、１．１～１０倍増加する。

[0090] いくつかの態様では、本開示の方法を使用して治療される被験者が、一方の対立遺伝子より部分機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質を発現して、ここで部分機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質は、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、又は部分的な遺伝子欠失によって引き起こされる。いくつかの態様では、本発明の方法を使用して治療される被験者が、一方の対立遺伝子より非機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質を発現して、ここで非機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質は、一方の対立遺伝子における、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、部分的な遺伝子欠失によって引き起こされる。いくつかの態様では、本発明の方法を使用して治療される被験者が、一方の対立遺伝子において、ＳＣＮ１Ａ全遺伝子の欠失を有する。

[0091] いくつかの態様では、本方法は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡを有している被験者の細胞によるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を減少させる方法であって、ここで該被験者は、Ｎａ_ｖ１．１において機能獲得変異を有する。このような態様では、該被験者は、ＳＣＮ１Ａタンパク質が上昇量で産生される対立遺伝子、又はＮａ_ｖ１．１の増加した活性を該細胞において誘導する突然変異ＳＣＮ１Ａをコードする対立遺伝子を有する。いくつかの態様では、Ｎａ_ｖ１．１の増加した活性を特徴付けるのは、突然変異Ｎａ_ｖ１．１チャネルによって媒介される長期的又はほぼ永続的なナトリウム電流、迅速な不活性化の遅延、定常状態の不活性化における正シフト、反復刺激の間のより高いチャネル利用度、非不活性化脱分極誘発性の持続的なナトリウム電流の増加、不活性化へのエントリーの遅延、迅速不活性化からの回復の加速化、及び／又は低温でのインキュベーション又は相互作用するタンパク質の同時発現による、フォールディング障害の救出である。これら態様のいずれにおいても、当該アンチセンスオリゴマーは、第２対立遺伝子より転写されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ結合して、それによってプレｍＲＮＡ由来のシュードエクソンのエクソンスキッピングを阻害するか又は妨害して、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡのレベルの減少と、該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現の減少を引き起こす。

[0092] 関連した態様では、本方法は、ＡＳＯを使用して、タンパク質又は機能的ＲＮＡの発現を減少させる方法である。いくつかの態様では、ＡＳＯを使用して、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡを有している被験者の細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を減少させる。いくつかの態様では、該被験者は、Ｎａ_ｖ１．１における機能獲得変異（例、偏頭痛）を有する。いくつかの態様では、ＡＳＯを使用して、被験者の細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を減少させるが、該被験者は、Ｎａ_ｖ１．１における機能獲得変異（例、家族性片麻痺性偏頭痛、３）を有する。

[0093] いくつかの態様では、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルは、対照細胞（例、アンチセンスオリゴマーで処理されない細胞、又はＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ結合しないアンチセンスオリゴマーで処理される細胞）において産生され、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡの量に比較されるとき、１．１～１０倍減少する。

[0094] いくつかの態様では、本開示の方法を使用して治療される被験者が、一方の対立遺伝子より突然変異ＳＣＮ１Ａタンパク質を発現して、ここで突然変異ＳＣＮ１Ａタンパク質は、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、又は部分的な遺伝子欠失によって引き起こされ、そしてここで突然変異ＳＣＮ１Ａタンパク質は、Ｎａ_ｖ１．１の上昇した活性レベルを引き起こす。いくつかの態様では、本開示の方法を使用して治療される被験者が、一方の対立遺伝子より、フレームシフト突然変異、ナンセンス突然変異、ミスセンス突然変異、又は部分的な遺伝子欠失によって、上昇量のＳＣＮ１Ａタンパク質を発現する。

[0095] 本発明の態様（複数）では、被験者がＳＣＮ１Ａ遺伝子中に突然変異を有する可能性がある。ＳＣＮ１Ａ中の突然変異は、前記遺伝子全体に広がる可能性がある。ＳＣＮ１Ａタンパク質は、４個のドメインからなり得る。前記ＳＣＮ１Ａドメインは、膜貫通セグメントを有し得る。前記ＳＣＮ１Ａタンパク質における突然変異は、前記タンパク質全体で生じる場合がある。前記ＳＣＮ１Ａタンパク質は、少なくとも２つのアイソフォームからなり得る。ＳＣＮ１Ａにおける突然変異は、Ｒ９３１Ｃ、Ｒ９４６Ｃ、Ｍ９３４Ｉ、Ｒ１６４８Ｃ、又はＲ１６４８Ｈを含み得る。いくつかの事例では、ＳＣＮ１Ａタンパク質のＣ末端に突然変異が観測される場合がある。前記ＳＣＮ１Ａタンパク質の最初の３個のドメインのセグメント５とセグメント６の間のループにもＳＣＮ１Ａタンパク質中の突然変異が見出される場合がある。いくつかの事例では、ＳＣＮ１Ａタンパク質のＮ末端に突然変異が観測される場合がある。ＳＣＮ１Ａ内にある例示の突然変異には、限定されないが、Ｒ２２２Ｘ、Ｒ７１２Ｘ、Ｉ２２７Ｓ、Ｒ１８９２Ｘ、Ｗ９５２Ｘ、Ｒ１２４５Ｘ、Ｒ１４０７Ｘ、Ｗ１４３４Ｒ、ｃ．４３３８＋１Ｇ＞Ａ、Ｓ１５１６Ｘ、Ｌ１６７０ｆｓＸ１６７８、又はＫ１８４６ｆｓＸ１８５６が含まれる。本発明で標的化され得る突然変異がイオンチャネルの細孔をコードする場合もある。

[0096] いくつかの態様では、本明細書に記載される方法と組成物は、ＤＳを治療するために使用することができる。他の態様では、本明細書に記載される方法と組成物は、乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）を治療するために使用することができる。他の態様では、本明細書に記載される方法と組成物は、辺縁型ドラベ症候群；全般性てんかん熱性痙攣プラス、２型；家族性熱性痙攣、３Ａ；家族性片麻痺性偏頭痛、３；自閉症；てんかん性脳症、早期乳児、１３；洞不全症候群１；アルツハイマー病又、はＳＵＤＥＰを治療するために使用することができる。本明細書に記載される方法と組成物は、辺縁型ＳＭＥＩを治療するためにも使用することができる。加えて、本明細書に記載される方法と組成物は、熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）を伴う全般性てんかんを治療するために使用することができる。ＧＥＦＳ＋は、ＳＣＮ１Ｂ又はＧＡＢＲＧ２のような、てんかん関連のイオンチャネルサブユニット中の突然変異に関連している場合がある。本明細書に記載される方法と組成物は、ナトリウムチャネロパチーを治療するために使用することもできる。ナトリウムチャネロパチーは、ＳＣＮ１Ａ中の突然変異に関連している場合がある。ナトリウムチャネロパチーはまた、βサブユニットのＳＣＮ１Ｂのような、ＳＣＮ１Ａのサブユニットに関連している場合がある。いくつかの事例では、ＳＣＮ１Ａ突然変異に関連した追加の疾患も、本開示で治療し得る。ＳＣＮ１Ａ突然変異に関連した、関連のＳＣＮ１Ａ疾患には、限定されないが、先天性非定型ミオトニー、高カリウム性周期性四肢麻痺、及び先天性パラミオトニアが含まれる。

[0097] いくつかの態様では、本明細書に記載される方法と組成物を使用して、当該技術分野で知られていて上記の参考文献において（例えば、Hamdan, et al., 2009, Mulley, et al., 2005 によって）記載されているＳＣＮ１Ａ突然変異を有している被験者を治療することができる。いくつかの態様では、この突然変異は、ＳＣＮ１Ａのイントロン又はエクソンの内部にある。

エクソン包含
[0098] 本明細書に使用されるように、「ＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ」は、少なくとも１つのシュードエクソンを含有するプレｍＲＮＡ転写産物である。選択的又は異常なスプライシングは、少なくとも１つのシュードエクソンの成熟ｍＲＮＡ転写産物中の包含を生じる可能性がある。「成熟ｍＲＮＡ」と「完全にスプライスされたｍＲＮＡ」という用語は、本明細書において、完全にプロセシングされたｍＲＮＡについて記載するために交換可能的に使用される。少なくとも１つのシュードエクソンの包含は、非産生性ｍＲＮＡになり得て、成熟ｍＲＮＡのＮＭＤにつながる可能性がある。ＮＩＥ含有成熟ｍＲＮＡは、時々異常なタンパク質発現をもたらす場合がある。

[0099] いくつかの態様では、包含されたシュードエクソンは、標的タンパク質をコードする遺伝子より細胞において転写されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの集団において最も豊富なシュードエクソンである。いくつかの態様では、包含されたシュードエクソンは、標的タンパク質をコードする遺伝子より細胞において転写されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの集団において最も豊富なシュードエクソンであって、ここでＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの集団は、２個以上の包含されたシュードエクソンを含む。いくつかの態様では、標的タンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの集団において最も豊富なシュードエクソンを標的にするアンチセンスオリゴマーが該集団中の１個又は２個以上のシュードエクソン（アンチセンスオリゴマーが標的にするか又は結合するシュードエクソンが含まれる）のエクソンスキッピングを誘導する。態様（複数）において、標的化領域は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＩＥ含有プレｍＲＮＡにおいて最も豊富なシュードエクソンであるシュードエクソン中にある。

[00100] エクソン包含の度合いは、エクソン包含％（例えば、所与のシュードエクソンが包含されている転写産物の百分率）として表すことができる。簡潔には、エクソン包含のあるＲＮＡ転写産物の量の平均＋エクソン排除のあるＲＮＡ転写産物の量の平均の合計に対する、当該エクソン包含のあるＲＮＡ転写産物の量の百分率としてエクソン包含％を計算することができる。

[00101] いくつかの態様では、包含されたシュードエクソンが、少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約３０％、少なくとも約３５％、少なくとも約４０％、少なくとも約４５％、又は少なくとも約５０％の包含の決定に基づいて包含されたシュードエクソンとして同定されるエクソンである。態様（複数）では、包含されたシュードエクソンが、約５％～約１００％、約５％～約９５％、約５％～約９０％、約５％～約８５％、約５％～約８０％、約５％～約７５％、約５％～約７０％、約５％～約６５％、約５％～約６０％、約５％～約５５％、約５％～約５０％、約５％～約４５％、約５％～約４０％、約５％～約３５％、約５％～約３０％、約５％～約２５％、約５％～約２０％、約５％～約１５％、約１０％～約１００％、約１０％～約９５％、約１０％～約９０％、約１０％～約８５％、約１０％～約８０％、約１０％～約７５％、約１０％～約７０％、約１０％～約６５％、約１０％～約６０％、約１０％～約５５％、約１０％～約５０％、約１０％～約４５％、約１０％～約４０％、約１０％～約３５％、約１０％～約３０％、約１０％～約２５％、約１０％～約２０％、約１５％～約１００％、約１５％～約９５％、約１５％～約９０％、約１５％～約８５％、約１５％～約８０％、約１５％～約７５％、約１５％～約７０％、約１５％～約６５％、約１５％～約６０％、約１５％～約５５％、約１５％～約５０％、約１５％～約４５％、約１５％～約４０％、約１５％～約３５％、約１５％～約３０％、約１５％～約２５％、約２０％～約１００％、約２０％～約９５％、約２０％～約９０％、約２０％～約８５％、約２０％～約８０％、約２０％～約７５％、約２０％～約７０％、約２０％～約６５％、約２０％～約６０％、約２０％～約５５％、約２０％～約５０％、約２０％～約４５％、約２０％～約４０％、約２０％～約３５％、約２０％～約３０％、約２５％～約１００％、約２５％～約９５％、約２５％～約９０％、約２５％～約８５％、約２５％～約８０％、約２５％～約７５％、約２５％～約７０％、約２５％～約６５％、約２５％～約６０％、約２５％～約５５％、約２５％～約５０％、約２５％～約４５％、約２５％～約４０％、又は約２５％～約３５％の包含の決定に基づいて包含されたシュードエクソンとして同定されるエクソンである。ＥＮＣＯＤＥデータ（例えば、Tilgner, et al., 2012, 「Deep sequencing of subcellular RNA fractions shows splicing to be predominantly co-transcriptional in the human genome but inefficient for lncRNAs（細胞内ＲＮＡ画分のディープシークエンシングは、スプライシングがヒトゲノムにおいて圧倒的に同時転写性であるが、ＩｎｃＲＮＡに対しては非効率であることを示す）」 Genome Research 22(9): 1616-25 によって記載される）を使用して、エクソン包含を同定するのに役立てることができる。

[00102] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物の標的化部分に相補的であるＡＳＯと細胞を接触させることが、産生されるＳＣＮ１Ａタンパク質の量において、ＡＳＯの非存在／処理の非存在時の細胞によって産生されるタンパク質の量に比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、又は１０００％の増加を生じる。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴマーが接触する細胞によって産生されるＳＣＮ１Ａタンパク質の全量は、対照化合物によって産生される標的タンパク質の量に比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する。対照化合物は、例えば、プレｍＲＮＡの標的化部分へ相補的でないオリゴヌクレオチドであり得る。

[00103] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物の標的化部分に相補的であるＡＳＯと細胞を接触させることが、産生されるＳＣＮ１Ａタンパク質の量において、ＡＳＯの非存在／処理の非存在時の細胞によって産生されるタンパク質の量に比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、又は１０００％の減少を生じる。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴマーが接触する細胞によって産生されるＳＣＮ１Ａタンパク質の全量は、対照化合物によって産生される標的タンパク質の量に比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍減少する。対照化合物は、例えば、プレｍＲＮＡの標的化部分へ相補的でないオリゴヌクレオチドであり得る。

[00104] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物の標的化部分に相補的であるＡＳＯと細胞を接触させることが、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡが含まれる、ＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡの量の増加を生じる。いくつかの態様では、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、又はＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの量は、ＡＳＯの非存在／処理の非存在時の細胞によって産生されるタンパク質の量に比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、又は１０００％増加する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴマーが接触した細胞において産生される、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、又はＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの全量は、未処理細胞（例えば、未処理細胞、又は対照化合物で処理された細胞）において産生される成熟ＲＮＡの量に比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する。対照化合物は、例えば、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ相補的でないオリゴヌクレオチドであり得る。

[00105] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡ転写産物の標的化部分に相補的であるＡＳＯと細胞を接触させることが、標的タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡが含まれる、ＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡの量の減少を生じる。いくつかの態様では、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、又はＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの量は、ＡＳＯの非存在／処理の非存在時の細胞によって産生されるタンパク質の量に比較して、少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、８０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００、又は１０００％減少する。いくつかの態様では、アンチセンスオリゴマーが接触した細胞において産生される、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡ、又はＳＣＮ１Ａタンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡの全量は、未処理細胞（例えば、未処理細胞、又は対照化合物で処理された細胞）において産生される成熟ＲＮＡの量に比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍減少する。対照化合物は、例えば、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ相補的でないオリゴヌクレオチドであり得る。

[00106] ＮＩＥは、あらゆる長さであり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、イントロンの全長配列を含み、この場合、それは、イントロン保持と呼ぶことができる。いくつかの態様では、ＮＩＥは、そのイントロンの一部であり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、５’ｓｓ配列が含まれるイントロンの５’端部分であり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、３’ｓｓ配列が含まれるイントロンの３’端部分であり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、５’ｓｓ配列を包含しないイントロン内の部分であり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、３’ｓｓ配列を包含しないイントロン内の部分であり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、５’ｓｓ配列も３’ｓｓ配列も包含しないイントロン内の部分であり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、５ヌクレオチド～１０ヌクレオチドの長さ、１０ヌクレオチド～１５ヌクレオチドの長さ、１５ヌクレオチド～２０ヌクレオチドの長さ、２０ヌクレオチド～２５ヌクレオチドの長さ、２５ヌクレオチド～３０ヌクレオチドの長さ、３０ヌクレオチド～３５ヌクレオチドの長さ、３５ヌクレオチド～４０ヌクレオチドの長さ、４０ヌクレオチド～４５ヌクレオチドの長さ、４５ヌクレオチド～５０ヌクレオチドの長さ、５０ヌクレオチド～５５ヌクレオチドの長さ、５５ヌクレオチド～６０ヌクレオチドの長さ、６０ヌクレオチド～６５ヌクレオチドの長さ、６５ヌクレオチド～７０ヌクレオチドの長さ、７０ヌクレオチド～７５ヌクレオチドの長さ、７５ヌクレオチド～８０ヌクレオチドの長さ、８０ヌクレオチド～８５ヌクレオチドの長さ、８５ヌクレオチド～９０ヌクレオチドの長さ、９０ヌクレオチド～９５ヌクレオチドの長さ、又は９５ヌクレオチド～１００ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも２０ヌクレオチド、少なくとも３０ヌクレオチド、少なくとも４０ヌクレオチド、少なくとも５０ヌクレオチド、少なくとも６０ヌクレオチド、少なくとも７０ヌクレオチド、少なくとも８０ヌクレオチドの長さ、少なくとも９０ヌクレオチド、又は少なくとも１００ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、１００～２００ヌクレオチドの長さ、２００～３００ヌクレオチドの長さ、３００～４００ヌクレオチドの長さ、４００～５００ヌクレオチドの長さ、５００～６００ヌクレオチドの長さ、６００～７００ヌクレオチドの長さ、７００～８００ヌクレオチドの長さ、８００～９００ヌクレオチドの長さ、９００～１，０００ヌクレオチドの長さであり得る。いくつかの態様では、ＮＩＥは、１，０００ヌクレオチドの長さより長い場合がある。

[00107] シュードエクソンの包含がフレームシフトをもたらし得るので、未成熟終止コドン（ＰＩＣ）の成熟ｍＲＮＡ転写産物中の導入は、この転写産物をＮＭＤの標的とする。ＮＩＥを含有している成熟ｍＲＮＡ転写産物は、タンパク質発現をもたらさない非産生性ｍＲＮＡ転写産物であり得る。ＰＩＣは、ＮＩＥの下流のどの位置にも存在し得る。いくつかの態様では、ＰＩＣは、ＮＩＥの下流にあるどのエクソン中にも存在し得る。いくつかの態様では、ＰＩＣは、ＮＩＥの内部に存在し得る。例えば、ＳＣＮ１Ａ遺伝子によってコードされるｍＲＮＡ転写産物にエクソン２０ｘが包含されると、ｍＲＮＡ転写産物中にＰＩＣを誘導する可能性がある（例えば、ｍＲＮＡ転写産物のエクソン２１中のＰＩＣ）。

治療薬剤
[00108] 本開示の様々な態様では、治療薬剤を含んでなる組成物と方法がＳＣＮ１Ａのタンパク質発現レベルを調節するために提供される。いくつかの態様では、本発明で提供されるのは、ＳＣＮＡ１プレｍＲＮＡの選択的スプライシングを調節するための組成物と方法である。いくつかの態様では、本発明で提供されるのは、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡのスプライシングにおいてエクソンスキッピングを誘導する（例えば、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡのスプライシングの間にシュードエクソンのスキッピングを誘導する）ための組成物と方法である。他の態様では、そのタンパク質発現レベルを減少させるために、治療薬剤を使用してエクソンの包含を誘導し得る。

[00109] ある態様では、本明細書に開示される治療薬剤が、低分子、ポリペプチド、又はポリ核酸ポリマーである。いくつかの事例において、治療薬剤は、低分子である。いくつかの事例において、治療薬剤は、ポリペプチドである。いくつかの事例において、治療薬剤は、ポリ核酸ポリマーである。いくつかの場合において、治療薬剤は、レプレッサー剤である。追加の場合において、治療薬剤は、エンハンサー剤である。

[00110] 本明細書に開示される治療薬剤は、ＮＩＥレプレッサー剤であり得る。治療薬剤は、ポリ核酸ポリマーを含む場合がある。
[00111] 本開示の１つの側面によれば、本発明で提供されるのは、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質のレベルを増加させるために被験者へＮＩＥレプレッサー剤を投与することを含んでなる、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質欠損症に関連した病態の治療又は予防の方法であって、ここで該薬剤は、プレｍＲＮＡ転写産物のある領域へ結合して、ＮＩＥの成熟転写産物中の包含を減少させる。例えば、本発明で提供されるのは、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質のレベルを増加させるために被験者へＮＩＥレプレッサー剤を投与することを含んでなる、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質欠損症に関連した病態の治療又は予防の方法であって、ここで該薬剤は、プレｍＲＮＡ転写産物のＮＩＥを含有しているイントロン（例、ヒトＳＣＮ１Ａ遺伝子中のイントロン２０）のある領域へ、又は同じイントロン中のＮＩＥ活性化調節配列へ結合する。

[00112] 成熟ｍＲＮＡ中のＮＩＥ包含を抑制することに言及する場合、この抑制は、完全（例、１００％）であっても、一部であってもよい。この抑制は、臨床的に重要であり得る。この抑制／是正は、治療無しの被験者におけるＮＩＥ包含のレベルに対するものであっても、同様の被験者の集団におけるＮＩＥ包含の量に対するものであってもよい。この抑制／是正は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも１０％未満のＮＩＥ包含であり得る。この抑制は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも２０％未満のＮＩＥ包含であり得る。この抑制は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも４０％未満のＮＩＥ包含であり得る。この抑制は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも５０％未満のＮＩＥ包含であり得る。この抑制は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも６０％未満のＮＩＥ包含であり得る。この抑制は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも８０％未満のＮＩＥ包含であり得る。この抑制は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも９０％未満のＮＩＥ包含であり得る。

[00113] 活性ＳＣＮ１Ａタンパク質レベルを増加させることに言及する場合、この増加は、臨床的に重要であり得る。この増加は、治療無しの被験者における活性ＳＣＮ１Ａタンパク質レベルに対するものであっても、同様の被験者の集団における活性ＳＣＮ１Ａタンパク質の量に対するものであってもよい。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも１０％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも２０％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも４０％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも５０％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも８０％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも１００％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも２００％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。この増加は、平均的な被験者、又は治療前の被験者に対して少なくとも５００％より多い活性ＳＣＮ１Ａタンパク質であり得る。

[00114] ＮＩＥレプレッサー剤がポリ核酸ポリマーを含む態様（複数）において、このポリ核酸ポリマーは、約５０ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約４５ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約４０ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約３５ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約３０ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約２４ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約２５ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約２０ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１９ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１８ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１７ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１６ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１５ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１４ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１３ヌクレオチドの長さであり得るこのポリ核酸ポリマーは、約１２ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１１ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドの長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約５０ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約４５ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約４０ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約３５ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約３０ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約２５ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１０ヌクレオチドと約２０ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１５ヌクレオチドと約２５ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１５ヌクレオチドと約３０ヌクレオチドの間の長さであり得る。このポリ核酸ポリマーは、約１２ヌクレオチドと約３０ヌクレオチドの間の長さであり得る。

[00115] このポリ核酸ポリマーの配列は、ｍＲＮＡ転写産物（例、部分的にプロセシングされたｍＲＮＡ転写産物）の標的配列に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％相補的であり得る。

[00116] このポリ核酸ポリマーの配列は、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して４個以下のミスマッチを有し得る。このポリ核酸ポリマーの配列は、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して３個以下のミスマッチを有し得る。このポリ核酸ポリマーの配列は、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して２個以下のミスマッチを有し得る。このポリ核酸ポリマーの配列は、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して１個以下のミスマッチを有し得る。このポリ核酸ポリマーの配列は、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対してミスマッチを有さない場合がある。

[00117] このポリ核酸ポリマーは、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列へ特異的にハイブリダイズし得る。例えば、このポリ核酸ポリマーは、プレｍＲＮＡ転写産物の標的配列に対して９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、又は１００％の配列相補性を有し得る。このハイブリダイゼーションは、高ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下であり得る。

[00118] このポリ核酸ポリマーは、配列配列番号１２～７３１から成る群より選択される配列に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の配列同一性がある配列を有し得る。このポリ核酸ポリマーは、配列番号１２～７３１から成る群より選択される配列に対して１００％の配列同一性がある配列を有し得る。いくつかの事例において、このポリ核酸ポリマーは、配列番号１２～３７１から成る群より選択される配列に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の配列同一性がある配列を有し得る。いくつかの場合において、このポリ核酸ポリマーは、配列番号１２～３７１から成る群より選択される配列に対して１００％の配列同一性がある配列を有し得る。いくつかの事例において、このポリ核酸ポリマーは、配列番号３７２～７３１から成る群より選択される配列に対して少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は９９．５％の配列同一性がある配列を有し得る。いくつかの場合において、このポリ核酸ポリマーは、配列番号３７２～７３１から成る群より選択される配列に対して１００％の配列同一性がある配列を有し得る。

[00119] ポリ核酸ポリマー配列に言及する場合、当業者は、標的配列へハイブリダイズする能力、又は（置換が標的配列中にある場合は）標的配列として認識される能力をそれが維持すれば、その配列において、１以上の置換が許容され得て、場合によっては２個の置換が許容され得ることを理解されよう。配列同一性への参照は、標準／デフォルト変数を使用するＢＬＡＳＴ配列アライメントによって決定され得る。例えば、該配列は、９９％の同一性を有しても、本開示に従って機能し得る。他の態様では、該配列は、９８％の同一性を有しても、本開示に従って機能し得る。別の態様では、該配列は、９５％の同一性を有しても、本開示に従って機能し得る。別の態様では、該配列は、９０％の同一性を有しても、本開示に従って機能し得る。

アンチセンスオリゴマー
[00120] 本発明で提供されるのは、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ結合することによってエクソンスキッピングを誘導するアンチセンスオリゴマーを含んでなる組成物である。本明細書に使用されるように、「ＡＳＯ」及び「アンチセンスオリゴマー」という用語は、交換可能的に使用されて、ワトソン・クリック塩基対合又はゆらぎ塩基対合（Ｇ－Ｕ）によって標的核酸（例、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ）配列へハイブリダイズするヌクレオ塩基を含んでなる、ポリヌクレオチドのようなオリゴマーに言及する。このＡＳＯは、標的配列に対して相補的な正確な配列、又は近い相補性（例えば、標的配列へ結合してスプライス部位でのスプライシングを高めるのに十分な相補性）を有し得る。ＡＳＯは、標的核酸（例えば、プレｍＲＮＡ転写産物の標的化部分）へ結合（ハイブリダイズ）して、生理学的条件の下でハイブリダイズしたままであるように設計される。典型的には、それらが企図された（標的化）核酸配列以外の部位へハイブリダイズするならば、それらは、標的核酸ではない限られた数の配列へ（標的核酸以外の数少ない部位へ）ハイブリダイズする。ＡＳＯの設計では、ＡＳＯが他の部位へ結合して「標的外」効果を引き起こす可能性が限定されるように、プレｍＲＮＡ転写産物の標的化部分の核酸配列、又はゲノム又は細胞のプレｍＲＮＡ又はトランスクリプトーム中の他の位置にある十分に類似した核酸配列の出現を考慮に容れることができる、当該技術分野で知られている、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、ＰＣＴ出願番号：ＰＣＴ／ＵＳ２０１４／０５４１５１（「Reducing Nonsense-Mediated mRNA Decay（ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解を抑制する方法）」と題して、ＷＯ２０１５／０３５０９１として公開されている）中のどのアンチセンスオリゴマーも、本明細書に記載される方法を実践するのに使用することができる。

[00121] いくつかの態様では、ＡＳＯが標的核酸又はＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分へ「特異的にハイブリダイズする」か又は「特異的」である。典型的には、そのようなハイブリダイゼーションは、３７℃より実質的に高いＴ_ｍで、好ましくは少なくとも５０℃で、そして典型的には６０℃～概ね９０℃の間で起こる。そのようなハイブリダイゼーションは、好ましくは、ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件に対応する。所与のイオン強度とｐＨで、Ｔ_ｍは、標的配列の５０％が相補的なオリゴヌクレオチドへハイブリダイズする温度である。

[00122] オリゴヌクレオチドのようなオリゴマーが互いに対して「相補的」であるのは、２本の１本鎖ポリヌクレオチドの間で、逆平行配置でハイブリダイゼーションが起こるときである。２本鎖ポリヌクレオチドが別のポリヌクレオチドに対して「相補的」になり得るのは、第１ポリヌクレオチドの鎖の一方と第２ポリヌクレオチドの鎖の一方の間でハイブリダイゼーションが起こり得る場合である。相補性（一方のポリヌクレオチドが他方のポリヌクレオチドに対して相補的である度合い）は、一般的に受容された塩基対合ルールに従って、互いと水素結合を形成することが予測される、対合する鎖中の塩基の比率（例、百分率）を単位として定量可能である。アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）の配列は、ハイブリダイズするその標的核酸の配列に対して１００％相補的である必要はない。ある態様では、ＡＳＯが、それらが標的とする標的核酸配列内の標的領域に対して少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、又は少なくとも９９％の配列相補性を含む可能性がある。例えば、そのオリゴマー化合物の２０個のヌクレオ塩基のうち１８個が標的領域に対して相補的であって、それ故に特異的にハイブリダイズするＡＳＯは、９０％の相補性を表すことになろう。この例において、残りの非相補的なヌクレオ塩基は、一緒にまとまっていても、相補的なヌクレオ塩基で分断されていてもよくて、互いに対しても、相補的なヌクレオ塩基に対しても連続してなくてよい。標的核酸の領域とＡＳＯの％相補性は、当該技術分野で知られているＢＬＡＳＴプログラム（基本的な局所アライメント検索ツール）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Altschul, et al., J. Mol. Biol., 1990, 215, 403-410; Zhang and Madden, Genome Res., 1997, 7, 649-656）を使用して定型的に決定することができる。

[00123] ＡＳＯは、標的配列中のすべてのヌクレオ塩基へハイブリダイズする必要はなくて、それが実際にハイブリダイズするヌクレオ塩基は、連続していても不連続であってもよい。ＡＳＯは、介在又は隣接セグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないように、プレｍＲＮＡ転写産物の１以上のセグメントにわたってハイブリダイズする場合がある（例えば、ループ構造又はヘアピン構造が形成される場合がある）。ある態様にでは、ＡＳＯが標的プレｍＲＮＡ転写産物中の不連続なヌクレオ塩基へハイブリダイズする。例えば、ＡＳＯがハイブリダイズしない１以上のヌクレオ塩基（複数）によって分離されている、プレｍＲＮＡ転写産物中のヌクレオ塩基に対してＡＳＯがハイブリダイズすることができる。

[00124] 本明細書に記載されるＡＳＯは、ＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に存在するヌクレオ塩基に対して相補的であるヌクレオ塩基を含む。ＡＳＯという用語は、標的ｍＲＮＡ上の相補的なヌクレオ塩基へハイブリダイズすることが可能なヌクレオ塩基を含むが、ペプチド核酸（ＰＮＡ）のような糖部分を含まない、オリゴヌクレオチドと他のオリゴマー分子を具現化する。ＡＳＯは、天然に存在するヌクレオチド、ヌクレオチド類似体、修飾ヌクレオチド、又はこれら２項又は３項のあらゆる組合せを含み得る。「天然に存在するヌクレオチド」という用語には、デオキシリボヌクレオチドとリボヌクレオチドが含まれる。「修飾ヌクレオチド」という用語には、糖基が修飾されたか又は置換されたヌクレオチド、及び／又は修飾された骨格を有するヌクレオチドが含まれる。いくつかの態様では、ＡＳＯのヌクレオチドのすべてが修飾ヌクレオチドである。当業者には、本明細書に記載される方法及び組成物と適合可能である、ＡＳＯ又はＡＳＯの成分の化学修飾が明らかであろうし、例えば、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，２５８，１０９Ｂ２号、米国特許第５，６５６，６１２号、米国特許公開番号２０１２／０１９０７２８、及び Dias and Stein, Mol. Cancer Ther. 2002, 347-355 に見出すことができる。

[00125] ＡＳＯの１以上のヌクレオ塩基は、アデニン、グアニン、シトシン、チミン、及びウラシルのような、天然に存在するどの非修飾ヌクレオ塩基であっても、標的プレｍＲＮＡ上に存在するヌクレオ塩基と水素結合することが可能であるほどに非修飾ヌクレオ塩基に十分類似しているどの合成又は修飾ヌクレオ塩基でもよい。修飾ヌクレオ塩基の例には、限定無しに、ヒポキサンチン、キサンチン、７－メチルグアニン、５，６－ジヒドロウラシル、５－メチルシトシン、及び５－ヒドロキシメトイルシトシンが含まれる。

[00126] 本明細書に記載されるＡＳＯはまた、オリゴマーの諸成分を連結する骨格構造を含む。「骨格構造」及び「オリゴマー連結」という用語は、交換可能的に使用し得て、ＡＳＯのモノマー間の連結に言及する。天然に存在するオリゴヌクレオチドにおいて、骨格は、オリゴマーの糖部分を連結している３’－５’ホスホジエステル連結を含む。本明細書に記載される、ＡＳＯの骨格構造又はオリゴマー連結には、（限定されないが）ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニラデート、ホスホロアミデート、等が含まれ得る。例えば、La Planche, et al., Nucleic Acids Res. 14: 9081 (1986); Stec, et al., J. Am. Chem. Soc. 106: 6077 (1984), Stein, et al., Nucleic Acids Res. 16: 3209 (1988), Zon, et al., Anti-Cancer Drug Design 6: 539 (1991); Zon, et al., 「Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach（オリゴヌクレオチドと類似体、実践アプローチ）」, 87-108 頁 (F. Eckstein 監修、オックスフォード大学出版、オックスフォード、イギリス (1991)); Stec, et al.. 米国特許第５，１５１，５１０号；Uhlmann and Peyman, Chemical Reviews 90: 543 (1990) を参照のこと。いくつかの態様では、ＡＳＯの骨格構造は、リンを含有せず、代わりに、ペプチド結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）において）、又はカルバメート、アミド、並びに線状及び環状の炭化水素基が含まれる連結基を含有する。いくつかの態様では、骨格修飾は、ホスホロチオエート連結である。いくつかの態様では、骨格修飾は、ホスホロアミデート連結である。

[00127] 態様（複数）において、ＡＳＯ骨格のリン－ヌクレオチド間連結のそれぞれでの立体化学は、ランダムである。態様（複数）において、ＡＳＯ骨格のリン－ヌクレオチド間連結のそれぞれでの立体化学は、制御されていて、ランダムではない。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許出願公開番号２０１４／０１９４６１０、「Methods for the Synthesis of Functionalized Nucleic Acids（機能化核酸の合成法）」は、核酸オリゴマー中の各リン原子でのキラリティーの掌性を独立的に選択するための方法について記載する。態様（複数）では、本発明の方法において使用されるＡＳＯ（限定されないが、表５と表６において本明細書に示されるＡＳＯのいずれも含まれる）が、ランダムではないリン－ヌクレオチド間連結を有しているＡＳＯを含む。態様（複数）では、本発明の方法において使用される組成物が純粋なジアステレオマーのＡＳＯを含む。態様（複数）では、本発明の方法において使用される組成物が、少なくとも約９０％、少なくとも約９１％、少なくとも約９２％、少なくとも約９３％、少なくとも約９４％、少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、約１００％、約９０％～約１００％、約９１％～約１００％、約９２％～約１００％、約９３％～約１００％、約９４％～約１００％、約９５％～約１００％、約９６％～約１００％、約９７％～約１００％、約９８％～約１００％、又は約９９％～約１００％のジアステレオマー純度を有するＡＳＯを含む。

[00128] 態様（複数）において、ＡＳＯは、そのリン－ヌクレオチド間連結でＲｐ配置とＳｐ配置の非ランダム混合物を有する。例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドにおけるＲｐとＳｐの混合には、良好な活性とヌクレアーゼ安定性の間で均衡を達成することが必要であると示唆されてきた（参照により本明細書に組み込まれる、Wan, et al., 2014,「Synthesis, biophysical properties and biological activity of second generation antisense oligonucleotides containing chiral phosphorothioate linkages（キラルなホスホロチオエート連結を含有する第２世代アンチセンスオリゴヌクレオチドの合成、生物物理学的特性、及び生理活性）」Nucleic Acids Research 42 (22): 13456-13468）。態様（複数）では、本発明の方法において使用されるＡＳＯ（限定されないが、本明細書において配列番号１２～７３１に示されるＡＳＯのいずれも含まれる）が、約５～１００％Ｒｐ、少なくとも約５％Ｒｐ、少なくとも約１０％Ｒｐ、少なくとも約１５％Ｒｐ、少なくとも約２０％Ｒｐ、少なくとも約２５％Ｒｐ、少なくとも約３０％Ｒｐ、少なくとも約３５％Ｒｐ、少なくとも約４０％Ｒｐ、少なくとも約４５％Ｒｐ、少なくとも約５０％Ｒｐ、少なくとも約５５％Ｒｐ、少なくとも約６０％Ｒｐ、少なくとも約６５％Ｒｐ、少なくとも約７０％Ｒｐ、少なくとも約７５％Ｒｐ、少なくとも約８０％Ｒｐ、少なくとも約８５％Ｒｐ、少なくとも約９０％Ｒｐ、又は少なくとも約９５％Ｒｐを残りのＳｐとともに含むか又は約１００％Ｒｐを含む。態様（複数）では、本発明の方法において使用されるＡＳＯ（限定されないが、本明細書において配列番号１２～７３１に示されるＡＳＯのいずれも含まれる）が、約１０％～約１００％Ｒｐ、約１５％～約１００％Ｒｐ、約２０％～約１００％Ｒｐ、約２５％～約１００％Ｒｐ、約３０％～約１００％Ｒｐ、約３５％～約１００％Ｒｐ、約４０％～約１００％Ｒｐ、約４５％～約１００％Ｒｐ、約５０％～約１００％Ｒｐ、約５５％～約１００％Ｒｐ、約６０％～約１００％Ｒｐ、約６５％～約１００％Ｒｐ、約７０％～約１００％Ｒｐ、約７５％～約１００％Ｒｐ、約８０％～約１００％Ｒｐ、約８５％～約１００％Ｒｐ、約９０％～約１００％Ｒｐ、又は約９５％～約１００％Ｒｐ、約２０％～約８０％Ｒｐ、約２５％～約７５％Ｒｐ、約３０％～約７０％Ｒｐ、約４０％～約６０％Ｒｐ、又は約４５％～約５５％Ｒｐを残りのＳｐとともに含む。

[00129] 態様（複数）では、本発明の方法において使用されるＡＳＯ（限定されないが、本明細書において配列番号１２～７３１に示されるＡＳＯのいずれも含まれる）が、約５～１００％Ｓｐ、少なくとも約５％Ｓｐ、少なくとも約１０％Ｓｐ、少なくとも約１５％Ｓｐ、少なくとも約２０％Ｓｐ、少なくとも約２５％Ｓｐ、少なくとも約３０％Ｓｐ、少なくとも約３５％Ｓｐ、少なくとも約４０％Ｓｐ、少なくとも約４５％Ｓｐ、少なくとも約５０％Ｓｐ、少なくとも約５５％Ｓｐ、少なくとも約６０％Ｓｐ、少なくとも約６５％Ｓｐ、少なくとも約７０％Ｓｐ、少なくとも約７５％Ｓｐ、少なくとも約８０％Ｓｐ、少なくとも約８５％Ｓｐ、少なくとも約９０％Ｓｐ、又は少なくとも約９５％Ｓｐを残りのＲｐとともに含むか又は約１００％Ｓｐを含む。態様（複数）では、本発明の方法において使用されるＡＳＯ（限定されないが、本明細書において配列番号１２～７３１に示されるＡＳＯのいずれも含まれる）が、約１０％～約１００％Ｓｐ、約１５％～約１００％Ｓｐ、約２０％～約１００％Ｓｐ、約２５％～約１００％Ｓｐ、約３０％～約１００％Ｓｐ、約３５％～約１００％Ｓｐ、約４０％～約１００％Ｓｐ、約４５％～約１００％Ｓｐ、約５０％～約１００％Ｓｐ、約５５％～約１００％Ｓｐ、約６０％～約１００％Ｓｐ、約６５％～約１００％Ｓｐ、約７０％～約１００％Ｓｐ、約７５％～約１００％Ｓｐ、約８０％～約１００％Ｓｐ、約８５％～約１００％Ｓｐ、約９０％～約１００％Ｓｐ、又は約９５％～約１００％Ｓｐ、約２０％～約８０％Ｓｐ、約２５％～約７５％Ｓｐ、約３０％～約７０％Ｓｐ、約４０％～約６０％Ｓｐ、又は約４５％～約５５％Ｓｐを残りのＲｐとともに含む。

[00130] 本明細書に記載されるＡＳＯのいずれも、天然に存在するヌクレオチド中に存在するような、リボース又はデオキシリボースを含む糖部分、又は修飾糖部分又は糖類似体（モルホリン環が含まれる）を含有し得る。修飾糖部分の非限定的な例には、２’－Ｏ－メチル（２’－Ｏ－Ｍｅ）、２’－Ｏ－メトキシエチル（２’ＭＯＥ）、２’－Ｏ－アミノエチル、２’Ｆのような２’置換；Ｎ３’－＞Ｐ５’ホスホロアミデート、２’ジメチルアミノオキシエトキシ、２’ジメチルアミノエトキシエトキシ、２’－グアニジニウム、２’－Ｏ－グアジニウムエチル、カルバメート修飾糖、及び２環式修飾糖が含まれる。いくつかの態様では、糖部分修飾は、２’－Ｏ－Ｍｅ、２’Ｆ、及び２’ＭＯＥより選択される。いくつかの態様では、糖部分修飾は、ロックト（locked）核酸（ＬＮＡ）にあるような、余分の架橋結合である。いくつかの態様では、糖類似体は、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）のようなモルホリン環を含有する。いくつかの態様では、糖部分は、リボフラノシル又は２’デオキシリボフラノシル修飾を含む。いくつかの態様では、糖部分は、２’，４’－制約化（constrained）２’Ｏ－メチルオキシエチル（ｃＭＯＥ）修飾を含む。いくつかの態様では、糖部分は、ｃＥｔ２’，４’制約化２’－ＯエチルＢＮＡ修飾を含む。いくつかの態様では、糖部分は、トリシクロＤＮＡ（ｔｃＤＮＡ）修飾を含む。いくつかの態様では、糖部分は、エチレン核酸（ＥＮＡ）修飾を含む。いくつかの態様では、糖部分は、ＭＣＥ修飾を含む。当該技術分野では修飾について知られていて、例えば、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、Jarver, et al., 2014,「A Chemical View of Oligonucleotides for Exon Skipping and Related Drug Applications（エクソンスキッピングと関連した医薬応用のためのオリゴヌクレオチドについての化学的視点）」 Nucleic Acid Therapeutics 24(1): 37-47 による文献に記載されている。

[00131] いくつかの態様では、ＡＳＯの各モノマーが同じやり方で修飾され、例えばＡＳＯの骨格の各連結がホスホロチオエート連結を含むか又は各リボース糖部分が２’Ｏ－メチル修飾を含む。ＡＳＯのモノマー成分のそれぞれに存在するそのような修飾は、「均一な修飾」と呼ばれる。いくつかの実施例では、異なる修飾の組合せが望まれる場合があり、例えば、ＡＳＯがホスホロジアミデート連結とモルホリン環（モルホリノ）を含んでなる糖部分の組合せを含む場合がある。ＡＳＯへの様々な修飾の組合せは、「混合修飾」又は「混合化学」と呼ばれる。

[00132] いくつかの態様では、ＡＳＯは、１以上の骨格修飾を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１以上の糖部分修飾を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１以上の骨格修飾と１以上の糖部分修飾を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、２’ＭＯＥ修飾とホスホロチオエート骨格を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ホスホロジアミデートモルホリノ（ＰＭＯ）を含む。いくつかの態様では、ＡＳＯは、ペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。本明細書に記載されるＡＳＯのいずれも、又はＡＳＯのどの成分（例、ヌクレオ塩基、糖部分、骨格）も、ＡＳＯの所望される特性又は活性を達成するために、又はＡＳＯの所望されない特性又は活性を抑制するために修飾され得る。例えば、ＡＳＯ又はどのＡＳＯの１以上の成分も、プレｍＲＮＡ転写産物上の標的配列に対する結合親和性を高めるために；非標的配列への結合を抑制するために；細胞ヌクレアーゼ（即ち、ＲＮアーゼＨ）による分解を抑制するために；ＡＳＯの細胞中への取込み、及び／又は細胞の核中への取込みを改善するために；ＡＳＯの薬物動態又は薬力学を変化させるために；及び／又はＡＳＯの半減期を調節するために修飾され得る。

[00133] いくつかの態様では、ＡＳＯは、２’－Ｏ－（２－メトキシエチル）（ＭＯＥ）ホスホロチオエート－修飾ヌクレオチドから構成される。そのようなヌクレオチドから構成されるＡＳＯは、本明細書に開示される方法に特によく適していて、そのような修飾を有しているオリゴマーでは、ヌクレアーゼ分解に対して有意に亢進された抵抗性と増加したバイオアベイラビリティを有して、例えば、本明細書に記載されるいくつかの態様では、経口送達に適したものになることが示されてきた。例えば、Geary, et al., J Pharmacol Exp Ther. 2001; 296(3): 890-7; Geary, et al., J Pharmacol Exp Ther. 2001; 296(3): 898-904 を参照のこと。

[00134] 当業者には、ＡＳＯを合成する方法が知られていよう。あるいは、又は追加して、市販の供給元よりＡＳＯを入手し得る。
[00135] 特に断らなければ、１本鎖核酸（例、プレｍＲＮＡ転写産物、オリゴヌクレオチド、ＡＳＯ、等）配列の左端は５’端であって、１本鎖又は２本鎖核酸配列の左手方向は、５’方向と言及される。同様に、核酸配列（１本鎖又は２本鎖）の右端又は右方向は、３’端又は３’方向と言及される。一般に、核酸中の基準点に対して５’にある領域又は配列は、「上流」と言及されて、核酸中の基準点に対して３’にある領域又は配列は、「下流」と言及さる。一般に、ｍＲＮＡの５’方向又は５’端には開始又は出発コドンが位置するのに対し、その３’端又は３’方向には、終止コドンが位置する。いくつかの側面では、核酸中の基準点の上流にあるヌクレオチドが負数によって明記され得る一方で、核酸中の基準点の下流にあるヌクレオチドが正数によって明記され得る。例えば、基準点（例、ｍＲＮＡ中のエクソン－エクソン結合点）を「ゼロ」位と明記し得て、その基準点に直接隣接して上流にあるヌクレオチドを「マイナス１」、例えば「－１」と明記するのに対し、その基準点に直接隣接して下流にあるヌクレオチドを「プラス１」、例えば「＋１」と明記する。

[00136] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ（例えば、５’スプライス部位に対して正数によって明記される方向）中の包含されたエクソンの５’スプライス部位（又はＮＩＥの３’端）の下流（３’方向）にあるＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である（そしてそれへ結合する）。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して約＋１～約＋５００の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して＋６のヌクレオチドと＋４９６のヌクレオチドの間の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的であり得る。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して約＋１～約＋５００、約＋１～約＋４９０、約＋１～約＋４８０、約＋１～約＋４７０、約＋１～約＋４６０、約＋１～約＋４５０、約＋１～約＋４４０、約＋１～約＋４３０、約＋１～約＋４２０、約＋１～約＋４１０、約＋１～約＋４００、約＋１～約＋３９０、約＋１～約＋３８０、約＋１～約＋３７０、約＋１～約＋３６０、約＋１～約＋３５０、約＋１～約＋３４０、約＋１～約＋３３０、約＋１～約＋３２０、約＋１～約＋３１０、約＋１～約＋３００、約＋１～約＋２９０、約＋１～約＋２８０、約＋１～約＋２７０、約＋１～約＋２６０、約＋１～約＋２５０、約＋１～約＋２４０、約＋１～約＋２３０、約＋１～約＋２２０、約＋１～約＋２１０、約＋１～約＋２００、約＋１～約＋１９０、約＋１～約＋１８０、約＋１～約＋１７０、約＋１～約＋１６０、約＋１～約＋１５０、約＋１～約＋１４０、約＋１～約＋１３０、約＋１～約＋１２０、約＋１～約＋１１０、約＋１～約＋１００、約＋１～約＋９０、約＋１～約＋８０、約＋１～約＋７０、約＋１～約＋６０、約＋１～約＋５０、約＋１～約＋４０、約＋１～約＋３０、又は約＋１～約＋２０の領域内にある標的化部分に対して相補的である。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して約＋１～約＋１００、約＋１００～約＋２００、約＋２００～約＋３００、約＋３００～約＋４００、又は約＋４００～約＋５００の領域内にある標的化部分に対して相補的である。

[00137] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ（例えば、５’スプライス部位に対して負数によって明記される方向）中の包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）の上流（５’方向）にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である（そしてそれへ結合する）。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して約－４～約－２７０の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して－１のヌクレオチドと－２６４のヌクレオチドの間の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的であり得る。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して約－１～約－２７０、約－１～約－２６０、約－１～約－２５０、約－１～約－２４０、約－１～約－２３０、約－１～約－２２０、約－１～約－２１０、約－１～約－２００、約－１～約－１９０、約－１～約－１８０、約－１～約－１７０、約－１～約－１６０、約－１～約－１５０、約－１～約－１４０、約－１～約－１３０、約－１～約－１２０、約－１～約－１１０、約－１～約－１００、約－１～約－９０、約－１～約－８０、約－１～約－７０、約－１～約－６０、約－１～約－５０、約－１～約－４０、約－１～約－３０、又は約－１～約－２０の領域内にある標的化部分に対して相補的である。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの５’スプライス部位（又は３’端）に対して約－１～約－５０、約－５０～約－１００、約－１００～約－１５０、約－１５０～約－２００、又は約－２００～約－２５０の領域内にある標的化部分に対して相補的である。

[00138] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ（例えば、負数によって明記される方向）中の包含されたエクソンの３’スプライス部位（又は５’端）の上流（５’方向）にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位（又は５’端）に対して約－１～約－５００の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して－１～－４９６の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して約－１～約－５００、約－１～約－４９０、約－１～約－４８０、約－１～約－４７０、約－１～約－４６０、約－１～約－４５０、約－１～約－４４０、約－１～約－４３０、約－１～約－４２０、約－１～約－４１０、約－１～約－４００、約－１～約－３９０、約－１～約－３８０、約－１～約－３７０、約－１～約－３６０、約－１～約－３５０、約－１～約－３４０、約－１～約－３３０、約－１～約－３２０、約－１～約－３１０、約－１～約－３００、約－１～約－２９０、約－１～約－２８０、約－１～約－２７０、約－１～約－２６０、約－１～約－２５０、約－１～約－２４０、約－１～約－２３０、約－１～約－２２０、約－１～約－２１０、約－１～約－２００、約－１～約－１９０、約－１～約－１８０、約－１～約－１７０、約－１～約－１６０、約－１～約－１５０、約－１～約－１４０、約－１～約－１３０、約－１～約－１２０、約－１～約－１１０、約－１～約－１００、約－１～約－９０、約－１～約－８０、約－１～約－７０、約－１～約－６０、約－１～約－５０、約－１～約－４０、又は約－１～約－３０の領域内にある標的化部分に対して相補的である。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して約－１～約－１００、約－１００～約－２００、約－２００～約－３００、約－３００～約－４００、又は約－４００～約－５００の領域内にある標的化部分に対して相補的である。

[00139] いくつかの態様では、ＡＳＯは、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ（例えば、正数によって明記される方向）中の包含されたエクソンの３’スプライス部位（又は５’端）の下流（３’方向）にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの態様では、ＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して約＋１～約＋１００の領域内にある、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分に対して相補的である。いくつかの側面において、ＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して約＋１～約＋９０、約＋１～約＋８０、約＋１～約＋７０、約＋１～約＋６０、約＋１～約＋５０、約＋１～約＋４０、約＋１～約＋３０、約＋１～約＋２０、又は約＋１～約＋１０の領域内にある標的化部分に対して相補的である。

[00140] いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分は、包含されたエクソンの５’スプライス部位（３’端）に対して＋１００～包含されたエクソンの３’スプライス部位（５’端）に対して－１００の領域内にある。いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分は、ＮＩＥ内にある。いくつかの態様では、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの標的化部分は、シュードエクソンとイントロンの境界を含む。

[00141] ＡＳＯは、特異的な結合とスプライシングの効果的な亢進に適した、どの長さであってもよい。いくつかの態様では、ＡＳＯは、８～５０のヌクレオ塩基から成る。例えば、ＡＳＯは、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、４０、４５、又は５０ヌクレオ塩基の長さであり得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、５０より多いヌクレオ塩基から成る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、８～５０ヌクレオ塩基、８～４０ヌクレオ塩基、８～３５ヌクレオ塩基、８～３０ヌクレオ塩基、８～２５ヌクレオ塩基、８～２０ヌクレオ塩基、８～１５ヌクレオ塩基、９～５０ヌクレオ塩基、９～４０ヌクレオ塩基、９～３５ヌクレオ塩基、９～３０ヌクレオ塩基、９～２５ヌクレオ塩基、９～２０ヌクレオ塩基、９～１５ヌクレオ塩基、１０～５０ヌクレオ塩基、１０～４０ヌクレオ塩基、１０～３５ヌクレオ塩基、１０～３０ヌクレオ塩基、１０～２５ヌクレオ塩基、１０～２０ヌクレオ塩基、１０～１５ヌクレオ塩基、１１～５０ヌクレオ塩基、１１～４０ヌクレオ塩基、１１～３５ヌクレオ塩基、１１～３０ヌクレオ塩基、１１～２５ヌクレオ塩基、１１～２０ヌクレオ塩基、１１～１５ヌクレオ塩基、１２～５０ヌクレオ塩基、１２～４０ヌクレオ塩基、１２～３５ヌクレオ塩基、１２～３０ヌクレオ塩基、１２～２５ヌクレオ塩基、１２～２０ヌクレオ塩基、１２～１５ヌクレオ塩基、１３～５０ヌクレオ塩基、１３～４０ヌクレオ塩基、１３～３５ヌクレオ塩基、１３～３０ヌクレオ塩基、１３～２５ヌクレオ塩基、１３～２０ヌクレオ塩基、１４～５０ヌクレオ塩基、１４～４０ヌクレオ塩基、１４～３５ヌクレオ塩基、１４～３０ヌクレオ塩基、１４～２５ヌクレオ塩基、１４～２０ヌクレオ塩基、１５～５０ヌクレオ塩基、１５～４０ヌクレオ塩基、１５～３５ヌクレオ塩基、１５～３０ヌクレオ塩基、１５～２５ヌクレオ塩基、１５～２０ヌクレオ塩基、２０～５０ヌクレオ塩基、２０～４０ヌクレオ塩基、２０～３５ヌクレオ塩基、２０～３０ヌクレオ塩基、２０～２５ヌクレオ塩基、２５～５０ヌクレオ塩基、２５～４０ヌクレオ塩基、２５～３５ヌクレオ塩基、又は２５～３０ヌクレオ塩基の長さである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１８ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、１５ヌクレオチドの長さである。いくつかの態様では、ＡＳＯは、２５ヌクレオチドの長さである。

[00142] いくつかの態様では、化学的に異なるがＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの同じ標的化部分に対して相補的な２個以上のＡＳＯを使用する。いくつかの態様では、ＮＩＥ含有プレｍＲＮＡの異なる標的化部分に対して相補的である２個以上のＡＳＯを使用する。

[00143] 態様（複数）において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、１以上の部分又はコンジュゲート（例えば、当該オリゴヌクレオチドの活性又は細胞取込みを高める、標的指向性の部分又は他のコンジュゲート）へ化学的に連結される。そのような部分には、限定されないが、脂質部分（例えば、コレステロール部分、コレステリル部分のような）、脂肪族鎖（例えば、ドデカンジオール又はウンデシル残基）、ポリアミン又はポリエチレングリコール鎖、又はアダマンタン酢酸が含まれる。親油性部分を含んでなるオリゴヌクレオチドと製造法については、公知の文献に記載されてきた。態様（複数）において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定されないが、非塩基性ヌクレオチド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、例えば、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）、Ｎ－Ａｃ－グルコサミン（ＧｌｕＮＡｃ）、又はマンノース（例、マンノース－６－リン酸）、脂質、又はポリ炭化水素化合物が含まれる部分とコンジュゲートされる。当該技術分野で理解されて文献に記載されているように、例えばリンカーを使用して、アンチセンスオリゴヌクレオチドを含んでなるヌクレオチドの１以上に対して、糖、塩基、又はリン酸基上のいくつかの位置のいずれでも、コンジュゲートを連結させることができる。リンカーには、２価又は３価の分岐鎖リンカーが含まれ得る。態様（複数）において、コンジュゲートは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの３’端へ付く。オリゴヌクレオチドコンジュゲートを製造する方法については、例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第８，４５０，４６７号「Carbohydrate conjugates as delivery agents for oligonucleotides（オリゴヌクレオチドの送達剤としての炭水化物コンジュゲート）」に記載されている。

[00144] いくつかの態様では、ＡＳＯの標的になるべき核酸は、真核細胞のような細胞において発現される、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡである。いくつかの態様では、「細胞」という用語は、細胞の集団に言及する場合がある。いくつかの態様では、細胞は、被験者中にある。いくつかの態様では、細胞は、被験者から単離される。いくつかの態様では、細胞は、体外（ex vivo）にある。いくつかの態様では、細胞は、病態又は疾患に関連した細胞又は細胞系である。いくつかの態様では、細胞は、試験管内（in vitro）（例えば、細胞培養物中）にある。

医薬組成物
[00145] 記載される組成物の薬剤（例、アンチセンスオリゴヌクレオチド）を含んでなり、記載される方法のいずれにも使用のための医薬組成物又は製剤は、製薬業界においてよく知られていて公知の文献に記載されている慣用の技術に従って調製することができる。態様（複数）では、被験者を治療するための医薬組成物又は製剤が本明細書に記載されるようなアンチセンスオリゴマー、又はその医薬的に許容される塩、溶媒和物、水和物、又はエステルの有効量を含む。アンチセンスオリゴマーを含んでなる医薬製剤は、医薬的に許容される賦形剤、希釈剤、又は担体をさらに含み得る。

[00146] 医薬的に許容される塩は、不当な毒性、刺激、アレルギー反応、等を伴うことなく、ヒト及び低級動物の組織との接触における使用に適していて、妥当な利益／リスク比に見合っている（例えば、この目的のために参照により本明細書に組み込まれる、S. M. Berge, et al., J. Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19 (1977) を参照のこと）。その塩は、該化合物の最終単離及び精製の間にその場で、又はその遊離塩基の官能基を好適な有機酸と反応させることによって別々に製造することができる。医薬的に許容される、無害な酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸、及び過塩素酸のような無機酸とともに、又は酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸、又はマロン酸のような有機酸とともに生成されるか又はイオン交換のような他の文書化された方法論を使用することによる、アミノ基の塩である。他の医薬的に許容される塩には、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリル酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩、等が含まれる。代表的なアルカリ又はアルカリ土類金属塩には、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、等の塩が含まれる。さらなる医薬的に許容される塩には、ハロゲン化物、水酸化物、カルボン酸塩、硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、低級アルキルスルホン酸塩、及びアリールスルホン酸塩のような対イオンを使用して生成される、無害のアンモニウム、四級アンモニウム、及びアミンカチオンの塩が適宜含まれる。

[00147] 態様（複数）において、該組成物は、限定されないが、錠剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、液体シロップ剤、ソフトゲル剤、坐剤、及び浣腸剤のような、多くの可能な剤形のいずれにも製剤化される。態様（複数）において、該組成物は、水性、非水性、又は混合した媒体中の懸濁液剤として製剤化される。水性懸濁液剤は、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、及び／又はデキストランが含まれる、該懸濁液剤の粘稠性を増加させる物質をさらに含有し得る。該懸濁液剤は、安定化剤も含有し得る。態様（複数）では、本発明の医薬製剤又は組成物には、限定されないが、溶液剤、乳剤、ミクロ乳剤、フォーム剤、又はリポソーム含有製剤（例、カチオン性又は非カチオン性のリポソーム剤）が含まれる。

[00148] 本明細書に記載される医薬組成物又は製剤は、適正であって、当業者によく知られているか又は公知の文献に記載されているような、１以上の浸透エンハンサー、担体、賦形剤、又は他の活性又は不活性成分を含み得る。態様（複数）では、立体的に安定したリポソーム剤（例、１以上の特殊化脂質を含んでなるリポソーム剤）もリポソーム剤に含まれる、これらの特殊化脂質は、循環寿命が亢進されたリポソーム剤を生じる。態様（複数）では、立体的に安定したリポソーム剤が１以上の糖脂質を含むか又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）部分のような１以上の親水性ポリマーで誘導体化される。態様（複数）では、界面活性剤が医薬製剤又は組成物に含まれる。医薬品、製剤、及び乳剤における界面活性剤の使用については当該技術分野でよく知られている。態様（複数）において、本発明は、アンチセンスオリゴヌクレオチドの効率的な送達を有効にするために（例えば、細胞膜を通過する拡散に役立つために、及び／又は親油性薬物の透過性を高めるために）浸透エンハンサーを利用する。態様（複数）において、浸透エンハンサーは、界面活性剤、脂肪酸、胆汁酸塩、キレート形成剤、又は非キレート形成性の非界面活性剤である。

[00149] 態様（複数）において、当該医薬製剤は、多数のアンチセンスオリゴヌクレオチドを含む。態様（複数）において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、別の薬物又は治療薬剤と併用して投与される。

併用療法
[00150] いくつかの態様では、本開示に開示されるＡＳＯは、１以上の追加治療薬剤と併用して使用することができる。いくつかの態様では、１以上の追加治療薬剤は、低分子を含み得る。例えば、１以上の追加治療薬剤は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる、ＷＯ２０１６１２８３４３Ａ１、ＷＯ２０１７０５３９８２Ａ１、ＷＯ２０１６１９６３８６Ａ１、ＷＯ２０１４２８４５９Ａ１、ＷＯ２０１５２４８７６Ａ２、ＷＯ２０１３１１９９１６Ａ２、及びＷＯ２０１４２０９８４１Ａ２に記載される低分子を含み得る。いくつかの態様では、この１以上の追加治療薬剤は、イントロン保持を是正するために使用し得るＡＳＯを含む。いくつかの態様では、この１以上の他剤は、表４に収載されたＡＳＯより選択される。

被験者の治療
[00151] 本発明で提供される組成物のいずれも、個体へ投与し得る。「個体」は、「被験者」又は「患者」と交換可能的に使用し得る。個体は、哺乳動物、例えば、ヒト又は非ヒト霊長動物のような動物、齧歯動物、ウサギ、ラット、マウス、ウマ、ロバ、ヤギ、ネコ、イヌ、ウシ、ブタ、又はヒツジである。態様（複数）において、個体は、ヒトである。態様（複数）において、個体は、胎児、胚、又は小児である。他の態様では、個体は、植物のような、別の真核生物であり得る。いくつかの態様では、本発明で提供される組成物は、体外細胞へ投与される。

[00152] いくつかの態様では、本発明で提供される組成物は、疾患又は障害を治療する方法として個体へ投与される。いくつかの態様では、個体は、本明細書に記載される疾患のいずれかのような、遺伝性疾患を有する。いくつかの態様では、個体は、本明細書に記載される疾患のいずれかのような疾患を有するリスク状態にある。いくつかの態様では、個体は、あるタンパク質の不十分な量又はあるタンパク質の不十分な活性によって引き起こされる疾患又は障害を有するリスクが増加した状態にある。個体があるタンパク質の不十分な量又はあるタンパク質の不十分な活性によって引き起こされる疾患又は障害を有する「リスクが増加した状態」にあるならば、本方法は、防止的又は予防的な治療に関わる。例えば、ある個体は、そのような疾患又は障害を該疾患の家族歴の故に有するリスクが増加した状態にあり得る。典型的には、そのような疾患又は障害を有するリスクが増加した状態にある個体は、予防的治療より（例えば、該疾患又は障害の発現を防ぐか又はその進行を遅らせることによって）利益を得る。態様（複数）では、例えば、ＡＳＯ組成物を胎児へ直接的又は間接的に（例えば、母体を介して）投与することによって、胎児を子宮内で治療する。

[00153] 本発明のＡＳＯの投与に適した経路は、ＡＳＯの送達が所望される細胞種に依って変わる場合がある。ドラベ症候群；全般性てんかん熱性痙攣プラス、２型；家族性熱性痙攣、３Ａ；家族性片麻痺性偏頭痛、３；自閉症；てんかん性脳症、早期乳児、１３；洞不全症候群１；アルツハイマー病、又はＳＵＤＥＰによって多数の組織及び臓器が影響を受けるが、最も有意に影響される組織は、脳である。本発明のＡＳＯは、患者へ非経口的に、例えば、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、硝子体内注射、又は静脈内注射によって投与し得る。

[00154] いくつかの態様では、当該疾患又は病態は、Ｎａ_ｖ１．１（ＳＣＮ１Ａ遺伝子によってコードされるタンパク質）中の突然変異によって誘導される。いくつかの事例において、突然変異は、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異である。いくつかの場合において、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異は、Ｎａ_ｖ１．１の機能を野生型Ｎａ_ｖ１．１の機能に比べて（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％以上）減らすか又は損なう１以上の突然変異を含む。いくつかの場合において、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異は、疾患表現型が生じる１以上の突然変異を含む。例示の機能欠失変異には、限定されないが、Ｒ８５９Ｃ、Ｔ８７５Ｍ、Ｖ１３５３Ｌ、Ｉ１６５６Ｍ、Ｒ１６５７Ｃ、Ａ１６８５Ｖ、Ｍ１８４１Ｔ、及びＲ１９１６Ｇが含まれる。

[00155] 他の事例において、突然変異は、Ｎａ_ｖ１．１中の機能獲得変異である。そのような場合において、機能獲得変異は、Ｎａ_ｖ１．１の活性化を野生型Ｎａ_ｖ１．１の機能に比べて（例えば、１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、又は９５％以上）長くする１以上の突然変異を含む。そのような場合において、Ｎａ_ｖ１．１中の機能獲得変異は、疾患表現型が生じる１以上の突然変異を含む。例示の機能獲得変異には、限定されないが、Ｄ１８８Ｖ、Ｗ１２０４Ｒ、Ｒ１６４８Ｈ、及びＤ１８６６Ｙが含まれる。

[00156] いくつかの態様では、疾患又は病態は、脳症である。いくつかの場合において、脳症は、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異によって誘導される。
[00157] いくつかの態様では、脳症は、てんかん性脳症である。例示のてんかん性には、限定されないが、ドラベ症候群（ＤＳ）（乳児重症ミオクロニーてんかん又はＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；又は洞不全症候群１が含まれる。いくつかの態様では、疾患又は病態は、場合によっては、ドラベ症候群（ＤＳ）（乳児重症ミオクロニーてんかん又はＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；及び洞不全症候群１より選択されるてんかん性脳症である。

[00158] いくつかの事例において、ＧＥＦＳ＋は、全般性てんかん熱性痙攣プラス２型である。
[00159] いくつかの事例において、熱性痙攣は、家族性熱性痙攣、３Ａである。

[00160] いくつかの事例において、ＳＭＥＢは、全般性棘徐波のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－ＳＷ）、ミオクロニー発作のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｍ）、ＳＭＥＩの１より多い特徴を欠いているＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｏ）、又は全身性強直性間代性発作を伴う小児難治性てんかん（ＩＣＥＧＴＣ）である。

[00161] いくつかの態様では、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異によって誘導される疾患又は病態には、限定されないが、ドラベ症候群（ＤＳ）（ＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；自閉症；又は乳児悪性遊走性部分発作が含まれる。

[00162] いくつかの態様では、疾患又は病態は、Ｎａ_ｖ１．１中の機能獲得変異によって誘導される。Ｎａ_ｖ１．１中の機能獲得変異に関連した例示の疾患又は病態には、限定されないが、偏頭痛が含まれる。いくつかの事例において、Ｎａ_ｖ１．１中の機能獲得変異によって誘導される疾患又は病態は、偏頭痛である。

[00163] いくつかの事例において、偏頭痛は、家族性片麻痺性偏頭痛、３である。
[00164] いくつかの態様では、疾患又は病態は、Ｎａ_ｖ１．１遺伝性てんかんである。Ｎａ_ｖ１．１遺伝性てんかんには、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異又はＮａ_ｖ１．１中の機能獲得変異が含まれ得る。いくつかの場合において、Ｎａ_ｖ１．１遺伝性てんかんには、１以上の遺伝性変異が含まれる。他の場合において、Ｎａ_ｖ１．１遺伝性てんかんには、１以上の新規（de novo）突然変異が含まれる。いくつかの場合において、Ｎａ_ｖ１．１遺伝性てんかんには、ドラベ症候群（ＤＳ）（乳児重症ミオクロニーてんかん又はＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；又は乳児悪性遊走性部分発作が含まれる。いくつかの場合において、Ｎａ_ｖ１．１中の機能欠失変異に関連したＮａ_ｖ１．１遺伝性てんかんには、ドラベ症候群（ＤＳ）（乳児重症ミオクロニーてんかん又はＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；乳児悪性遊走性部分発作が含まれる。

[00165] いくつかの態様では、疾患又は病態は、ＳＣＮ１Ａ遺伝子のハプロ不全に関連している。ＳＣＮ１Ａ遺伝子のハプロ不全に関連した例示の疾患又は病態には、限定されないが、ドラベ症候群（ＤＳ）（ＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；又は乳児悪性遊走性部分発作が含まれる。いくつかの場合において、疾患又は病態は、ドラベ症候群（ＤＳ）（ＳＭＥＩとしても知られている）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；早期乳児ＳＣＮ１Ａ脳症；早期乳児てんかん性脳症（ＥＩＥＥ）；又は乳児悪性遊走性部分発作である。

[00166] いくつかの場合において、疾患又は病態は、ドラベ症候群（ＤＳ）である。
[00167] ドラベ症候群（ＤＳ）（あるいは、乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）として知られている）は、生後１年目に出現するてんかん性脳症である。ドラベ症候群は、概ね７０～８０％の患者にあるナトリウムチャネル遺伝子変異の所見によって臨床診断が裏付けられる、ますます認知されているてんかん性脳症である。イオンチャネル遺伝子の突然変異は、広範囲のてんかん症候群の病態発生において重要な役割を担って、チャネロパチーとしてみなされている、いくつかのてんかん症を生じる。電位依存性ナトリウムチャネル（ＶＧＳＣ）は、神経細胞の興奮性に必須の役割を担うので、ＤＳに関連した多くの突然変異がＶＧＳＣサブユニットをコードする遺伝子中に同定されてきたことは驚きではない。この疾患については、例えば、Mulley, et al., 2005 によって記載されて、この疾患の説明については、OMIM #607208（Online Mendelian Inheritance in Man, Johns Hopkins University, 1966-2015）に記載されていて、これらはともに参照により本明細書に組み込まれる。

[00168] ７０％と８０％の間の患者がナトリウムチャネルα１サブユニット遺伝子（ＳＣＮ１Ａ）異常を保有して、短縮化変異が約４０％を占めて、より早期の年齢での発作発現と有意な相関性がある。約７０％の症例で配列変異が見出されて、短縮化変異（４０％）とミスセンス変異（４０％）を含み、残りがスプライス部位変化である。ほとんどの突然変異が新規であるが、５～１０％の症例で家族性変異が発生し、通常、本質はミスセンスである。残りのＳＣＮ１Ａ突然変異は、スプライス部位変異とミスセンス変異を含み、そのほとんどがナトリウムチャネルの細孔形成領域に該当する。現在、５００種を超える突然変異がＤＳに関連付けられていて、その遺伝子に沿ってランダムに分布している（Mulley, et al., Neurol. 2006, 67, 1094-1095）。

[00169] ＳＣＮ１Ａ遺伝子は、ヒト染色体２ｑ２４上のナトリウムチャネル遺伝子のクラスター中に位置していて、ニューロン電位依存性ナトリウムチャネルのＮａ_ｖ１．１として知られているα細孔形成サブユニットをコードする。ＳＣＮ１Ａ遺伝子は、概ね１００ｋｂのゲノムＤＮＡに拡がって、２６個のエクソンを含む。ＳＣＮ１Ａタンパク質は、それぞれが６回膜貫通型セグメントを有する、４つのドメインから成る。ドメイン１とドメイン２の間にある細胞質ループ中の１１個のアミノ酸の存在又は非存在において異なる長いアイソフォームと短いアイソフォームを生じる、エクソン１１における２種のスプライス変異体が同定されている（Miller, et al., 1993-2015 及び Mulley, et al., 2005, 25, 535-542、参照により本明細書に組み込まれる）。

[00170] ＳＣＮ１Ａ遺伝子における選択的スプライシング事象は、非産生性ｍＲＮＡ転写産物をもたらす可能性があって、これが次に異常なタンパク質発現をもたらす可能性があるので、ＳＣＮ１Ａ遺伝子における選択的スプライシング事象を標的にし得る治療薬剤は、ＤＳ患者中の機能的タンパク質の発現レベルを調節する、及び／又は異常なタンパク質発現を阻害することができる。そのような治療薬剤を使用して、ＳＣＮ１Ａタンパク質欠損症によって引き起こされる病態を治療することができる。

[00171] 非産生性ｍＲＮＡ転写産物をもたらす可能性がある選択的スプライシング事象の１つは、ナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解を誘導する可能性がある、ｍＲＮＡ転写産物における余分なエクソンの包含である。本開示は、ＳＣＮ１Ａの選択的スプライシングを調節して、タンパク質をコードする成熟ｍＲＮＡと、それにより翻訳される機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質の産生を増加させための組成物と方法を提供する。これらの組成物と方法には、エクソンスキッピングを引き起こして、ＳＣＮ１ＡプレｍＲＮＡの恒常的なスプライシングを促進させることが可能であるアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）が含まれる。様々な態様では、ＳＣＮ１Ａタンパク質欠損症によって引き起こされる病態を治療するために本開示の方法を使用して、機能的ＳＣＮ１Ａタンパク質を増加させることができる。

[00172] いくつかの場合において、疾患又は病態は、ＳＭＥＢである。
[00173] いくつかの場合において、疾患又は病態は、ＧＥＦＳ＋である。
[00174] いくつかの場合において、疾患又は病態は、熱性痙攣（例、家族性熱性痙攣、３Ａ）である。

[00175] いくつかの場合において、疾患又は病態は、自閉症（自閉症スペクトル障害又はＡＳＤとしても知られている）である。
[00176] いくつかの場合において、疾患又は病態は、偏頭痛（例、家族性片麻痺性偏頭痛、３）である。

[00177] いくつかの場合において、疾患又は病態は、アルツハイマー病である。
[00178] いくつかの態様では、疾患又は病態は、ＳＣＮ２Ａ脳症である。
[00179] いくつかの態様では、疾患又は病態は、ＳＣＮ８Ａ脳症である。

[00180] いくつかの態様では、疾患又は病態は、ＳＣＮ５Ａ不整脈である。
[00181] 態様（複数）において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、当該技術分野で知られているどの方法によっても、当該アンチセンスオリゴヌクレオチドの血液脳関門を通過する浸透を促進させることが可能な１以上の薬剤とともに投与される。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，６３２，４２７号「Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons（延髄運動ニューロン中へのアデノウイルスベクター媒介性の遺伝子導入）」には、アデノウイルスベクターの投与による薬剤の運動ニューロンへの送達について記載されている。例えば、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第６，７５６，５２３号「Adenovirus vectors for the transfer of foreign genes into cells of the central nervous system particularly in brain（中枢神経系、特に脳の細胞中へ異種遺伝子を導入するためのアデノウイルスベクター）」には、ベクターの脳（例、線条体、視床、海馬、黒質）への直接的な送達について記載されている。

[00182] 態様（複数）において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、望まれる医薬特性又は薬力学的特性を提供する薬剤と連結されるか又はコンジュゲートされる。態様（複数）において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、血液脳関門を通過する浸透又は輸送を促進させることが当該技術分野で知られている物質（例えば、トランスフェリン受容体に対する抗体）へ結合させる。態様（複数）において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば、該アンチセンス化合物をより有効にするか又は血液脳関門を通過する輸送を高めるために、ウイルスベクターと連結させる。態様（複数）では、糖（例、メソエリスリトール、キシリトール、Ｄ（＋）ガラクトース、Ｄ（＋）ラクトース、Ｄ（＋）キシロース、ズルシトール、ミオイノシトール、Ｌ（－）フルクトース、Ｄ（－）マンニトール、Ｄ（＋）グルコース、Ｄ（＋）アラビノース、Ｄ（－）アラビノース、セロビオース、Ｄ（＋）マルトース、Ｄ（＋）ラフィノース、Ｌ（＋）ラムノース、Ｄ（＋）メリビオース、Ｄ（－）リボース、アドニトール、Ｄ（＋）アラビトール、Ｌ（－）アラビトール、Ｄ（＋）フコース、Ｌ（－）フコース、Ｄ（－）リキソース、Ｌ（＋）リキソース、及びＬ（－）リキソース）、又はアミノ酸（例、グルタミン、リジン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、システイン、グルタミン酸、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、チロシン、バリン、及びタウリン）の注入によって、浸透圧血液脳関門破壊に役立てる。例えば、それぞれ参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１９３，９６９号「Compositions and methods for selective delivery of oligonucleotide molecules to specific neuron types（特定のニューロン型へのオリゴヌクレオチド分子の選択的送達のための組成物と方法）」、米国特許第４，８６６，０４２号「Method for the delivery of genetic material across the blood brain barrier（遺伝物質の血液脳関門を通過する送達のための方法）」、米国特許第６，２９４，５２０号「Material for passage through the blood-brain barrier（血液脳関門の通過のための物質）」、及び米国特許第６，９３６，５８９号「Parenteral delivery systems（非経口送達システム）」には、血液脳関門浸透を高めるための方法と物質について記載されている。

[00183] 態様（複数）では、参照により本明細書に組み込まれる、米国特許第９，１９３，９６９号に記載される方法を使用して、本発明のＡＳＯをドーパミン再取込み阻害剤（ＤＲＩ）、選択的セロトニン再取込み阻害剤（ＳＳＲＩ）、ノルアドレナリン再取込み阻害剤（ＮＲＩ）、ノルエピネフリン－ドーパミン再取込み阻害剤（ＮＤＲＩ）、及びセロトニン－ノルエピネフリン－ドーパミン再取込み阻害剤（ＳＮＤＲＩ）へ結合させる。

[00184] 態様（複数）では、当該方法及び組成物を使用して治療される被験者について、当該技術分野で知られていて記載されている方法を使用して、病態の改善を評価する。

エクソンスキッピングを誘導する追加のＡＳＯを同定する方法
[00185] 本開示の範囲内にはまた、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡのエクソンスキッピングを誘導するＡＳＯを同定又は決定するための方法がある。例えば、ある方法は、ＳＣＮ１ＡＮＩＥ含有プレｍＲＮＡのシュードエクソンスキッピングを誘導するＡＳＯを同定又は決定することを含み得る。標的イントロンのスプライシングの割合及び／又は程度を改善するＡＳＯを同定又は決定するために、プレｍＲＮＡの標的領域内にある様々なヌクレオチドへ特異的にハイブリダイズするＡＳＯについてスクリーニングし得る。いくつかの態様では、ＡＳＯは、スプライシングレプレッサー（複数）／サイレンサーの結合部位（複数）を遮断するか又はそれに干渉し得る。エクソンの標的領域へハイブリダイズするときに所望される効果（例、シュードエクソンスキッピング、タンパク質又は機能的ＲＮＡの産生）を生じるＡＳＯを同定する（決定する）ために、当該技術分野で知られているどの方法も使用し得る。これらの方法は、包含されたエクソンの横にあるイントロン中、又は包含されていないエクソン中の標的化領域へ結合することによって包含されたエクソンのエクソンスキッピングを誘導するＡＳＯを同定するために使用することができる。使用し得る方法の１例を以下に提供する。

[00186] プレｍＲＮＡの標的領域へハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを使用して、ＡＳＯ「ウォーク」と呼ばれる１回目のスクリーニングを実施し得る。例えば、ＡＳＯウォークにおいて使用されるＡＳＯは、包含されたエクソンの３’スプライス部位の概ね１００ヌクレオチド上流（例えば、標的／包含されたエクソンの上流に位置するエクソンの配列の一部）～標的／包含されたエクソンの３’スプライス部位の概ね１００ヌクレオチド下流、及び／又は包含されたエクソンの５’スプライス部位の概ね１００ヌクレオチド上流～標的／包含されたエクソンの５’スプライス部位の概ね１００ヌクレオチド下流（例えば、標的／包含されたエクソンの下流に位置するエクソンの配列の一部）を５個のヌクレオチドごとにタイルする（tile）ことができる。例えば、標的／包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して＋６～＋２０にあるヌクレオチドへ特異的にハイブリダイズするように、長さ１５ヌクレオチドの第１ＡＳＯを設計し得る。標的／包含されたエクソンの３’スプライス部位に対して＋１１～＋２５にあるヌクレオチドへ特異的にハイブリダイズするように、第２ＡＳＯを設計し得る。ＡＳＯは、プレｍＲＮＡの標的領域を網羅するように設計される。態様（複数）において、ＡＳＯは、より綿密に、例えば、１、２、３、又は４個のヌクレオチドごとにタイルすることができる。さらに、ＡＳＯは、５’スプライス部位の１００ヌクレオチド下流～３’スプライス部位の１００ヌクレオチド上流までタイルすることができる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、３’スプライス部位の約１，１６０ヌクレオチド上流～５’スプライス部位の約５００ヌクレオチド下流までタイルすることができる。いくつかの態様では、ＡＳＯは、３’スプライス部位の約５００ヌクレオチド上流～３’スプライス部位の約１，９２０ヌクレオチド下流までタイルすることができる。

[00187] １以上のＡＳＯ又は対照ＡＳＯ（スクランブル配列、即ち標的領域へハイブリダイズすると予測されない配列のあるＡＳＯ）を、標的プレｍＲＮＡ（例、本明細書に記載されるＮＩＥ含有プレｍＲＮＡ）を発現する疾患関連細胞系の中へ、例えばトランスフェクションによって送達する。このＡＳＯのそれぞれのエクソンスキッピング効果について、当該技術分野で知られているどの方法によっても、実施例４に記載されるように、例えばスプライスジャンクションを網羅するプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）－ＰＣＲによって評価し得る。対照ＡＳＯ処理細胞に比較して、ＡＳＯ処理細胞において、包含されたエクソンを含有する領域（例えば、ＮＩＥの横にあるエクソンが含まれる）を網羅するプライマーを使用して産生される、より長いＲＴ－ＰＣＲ産物の低下又は非存在は、標的ＮＩＥのスプライシングが亢進されたことを示唆する。いくつかの態様では、エクソンスキッピング効率（又はＮＩＥ含有イントロンをスプライシングするスプライシング効率）、スプライスされたプレｍＲＮＡのスプライスされないプレｍＲＮＡに対する比、スプライシングの割合、又はスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的プレｍＲＮＡによってコードされるタンパク質又は機能的ＲＮＡの量についても評価して、それぞれのＡＳＯが所望される効果（例えば、機能的タンパク質産生の亢進）を達成したかどうかを判定することができる。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、及びＥＬＩＳＡのような、タンパク質産生について評価する、及び／又はそれを定量するための当該技術分野で知られているどの方法も使用することができる。

[00188] プレｍＲＮＡの標的領域へハイブリダイズするように設計されたＡＳＯを使用して、ＡＳＯ「マイクロウォーク」と呼ばれる２回目のスクリーニングを実施し得る。ＡＳＯマイクロウォークにおいて使用されるＡＳＯは、１個のヌクレオチドごとにタイルされて、ＡＳＯとハイブリダイズするときにエクソンスキッピング（又はＮＩＥのスプライシング亢進）が生じる、プレｍＲＮＡのヌクレオチド酸配列をさらに精緻化する。

[00189] １ヌクレオチド刻みに隔てたＡＳＯ、並びにより長いＡＳＯ（典型的には１８～２５ヌクレオチド）が関与するＡＳＯ「マイクロウォーク」の手段によって、標的イントロンのスプライシングを促進させる、ＡＳＯによって明確化される領域をより詳細に探究する。

[00190] 上記のＡＳＯウォークについて記載したように、ＡＳＯマイクロウォークは、標的プレｍＲＮＡを発現する疾患関連細胞系の中へ、例えばトランスフェクションによって、１以上のＡＳＯ、又は対照ＡＳＯ（スクランブル配列、即ち標的領域へハイブリダイズすると予測されない配列のあるＡＳＯ）を送達することによって実施される。このＡＳＯのそれぞれのスプライシング誘導効果について、当該技術分野で知られているどの方法によっても、本明細書に記載されるように（例えば、実施例４を参照のこと）、例えば、ＮＩＥを網羅するプライマーを使用する逆転写酵素（ＲＴ）－ＰＣＲによって評価し得る。対照ＡＳＯ処理細胞に比較して、ＡＳＯ処理細胞において、ＮＩＥを網羅するプライマーを使用して産生される、より長いＲＴ－ＰＣＲ産物の低下又は非存在は、エクソンスキッピング（又はＮＩＥ含有標的イントロンのスプライシング）が亢進されたことを示唆する。いくつかの態様では、エクソンスキッピング効率（又はＮＩＥ含有イントロンをスプライシングするスプライシング効率）、スプライスされたプレｍＲＮＡのスプライスされないプレｍＲＮＡに対する比、スプライシングの割合、又はスプライシングの程度は、本明細書に記載されるＡＳＯを使用して改善され得る。標的プレｍＲＮＡによってコードされるタンパク質又は機能的ＲＮＡの量についても評価して、それぞれのＡＳＯが所望される効果（例えば、機能的タンパク質産生の亢進）を達成したかどうかを判定することができる。ウェスタンブロッティング、フローサイトメトリー、免疫蛍光顕微鏡検査法、及びＥＬＩＳＡのような、タンパク質産生について評価する、及び／又はそれを定量するための当該技術分野で知られているどの方法も使用することができる。

[00191] プレｍＲＮＡのある領域へハイブリダイズするときにエクソンスキッピング（又はＮＩＥ含有イントロンのスプライシングの亢進）を生じてタンパク質産生を増加させるＡＳＯについて、動物モデル（例えば、全長ヒト遺伝子がノックインされたトランスジェニックマウスモデル、又は疾患のヒト化マウスモデル）を使用して生体内で（in vivo）試験し得る。ＡＳＯの投与に適した経路は、ＡＳＯの送達が所望される疾患及び／又は細胞種に依って変わる場合がある。ＡＳＯは、例えば、髄腔内注射、脳室内注射、腹腔内注射、筋肉内注射、皮下注射、硝子体内注射、又は静脈内注射によって投与し得る。投与に続いて、例えば、スプライシング（効率、割合、程度）とタンパク質産生について当該技術分野で知られていて本明細書に記載される方法によって評価することによって、モデル動物の細胞、組織、及び／又は臓器について評価して、ＡＳＯ処理の効果を判定することができる。動物モデルは、疾患又は疾患重症度の表現型又は行動を示すものでもよい。

[00192] 本明細書の様々な実施例に記載されるように、ヒトＳＣＮ１Ａ遺伝子中のエクソン２０ｘは、マウスＳＣＮ１Ａ遺伝子中エクソン２１ｘと同等である。
[00193] 本開示の範囲内にはまた、ＮＭＤ阻害剤（例えば、シクロヘキシミド）の存在下にＮＭＤ誘導エクソンを同定するか又は立証するための方法がある。例示の方法を図３と実施例２に提供する。

具体的な態様
[00194] 態様１．ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有するｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）であってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを有している細胞において、ＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する方法であって、該細胞へ治療薬剤を接触させ、それにより治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンのスプライシングを調節し、それによってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの５’端から約１００ヌクレオチド上流；又はＮＩＥの３’端の約１００ヌクレオチド下流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある、前記方法。

[00195] 態様２．疾患又は病態を治療することの必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって、該細胞中のＮＭＤエクソンを含有してＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡからのナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソン）のスプライシングを調節する治療薬剤と該被験者の該細胞とを接触させ、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり；ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの５’端から約１００ヌクレオチド上流；又はＮＩＥの３’端の約１００ヌクレオチド下流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある、前記方法。

[00196] 態様３．治療薬剤が、標的化部分の領域からのＮＭＤエクソンのスプライシングに関与する因子の結合に干渉する、態様１又は２の方法。
[00197] 態様４．標的化部分が、ＮＩＥの５’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド上流にある、態様１又は２の方法。

[00198] 態様５．標的化部分が、ＮＩＥの５’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド上流にある、態様１又は２の方法。

[00199] 態様６．標的化部分が、ＮＩＥの３’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド下流にある、態様１又は２の方法。

[00200] 態様７．標的化部分が、ＮＩＥの３’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド下流にある、態様１又は２の方法。

[00201] 態様８．治療薬剤がアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）である、態様１～７のいずれか１つの方法。
[00202] 態様９．ＡＳＯが配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含む、態様８の方法。

[00203] 態様１０．治療薬剤が、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除を促進させる、態様１～９のいずれか１つの方法。

[00204] 態様１１．治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する、態様１０の方法。

[00205] 態様１２．治療薬剤が、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの該細胞中のレベルを増加させる、態様１０の方法。
[00206] 態様１３．治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの量が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの全量と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する、態様１０の方法。

[00207] 態様１４．疾患又は病態が、Ｎａ_ｖ１．１における機能欠失変異によって誘導される、態様２の方法。
[00208] 態様１５．疾患又は病態がＳＣＮ１Ａ遺伝子のハプロ不全に関連し、ここで該被験者は、機能的ＳＣＮ１Ａをコードする第１対立遺伝子と、ＳＣＮ１Ａが産生されないか又は低下したレベルで産生される第２対立遺伝子、又は非機能的ＳＣＮ１Ａ又は部分機能的ＳＣＮ１Ａをコードする第２対立遺伝子とを有する、態様１４の方法。

[00209] 態様１６．疾患又は病態が脳症である、態様１４の方法。
[00210] 態様１７．脳症がてんかん性脳症である、態様１６の方法。
[00211] 態様１８．疾患又は病態が、ドラベ症候群（ＤＳ）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；自閉症；又は乳児悪性遊走性部分発作である、態様１４の方法。

[00212] 態様１９．ＧＥＦＳ＋が、全般性てんかん熱性痙攣プラス２型である、態様１８の方法。
[00213] 態様２０．熱性痙攣が家族性熱性痙攣３Ａである、態様１８の方法。

[00214] 態様２１．ＳＭＥＢが、全般性棘徐波のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－ＳＷ）、ミオクロニー発作のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｍ）、ＳＭＥＩの１より多い特徴を欠いているＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｏ）、又は全身性強直性間代性発作を伴う小児難治性てんかん（ＩＣＥＧＴＣ）である、態様１８の方法。

[00215] 態様２２．ＡＳＯが配列番号７２又は４３２より選択される配列から成る、態様１又は２の方法。
[00216] 態様２３．ＡＳＯが配列番号７３又は４３３より選択される配列から成る、態様１又は２の方法。

[00217] 態様２４．ＡＳＯが配列番号７６又は４３６より選択される配列から成る、態様１又は２の方法。
[00218] 態様２５．ＡＳＯが配列番号１８１又は５４１より選択される配列から成る、態様１又は２の方法。

[00219] 態様２６．ＡＳＯが配列番号２２０又は５８０より選択される配列から成る、態様１又は２の方法。
[00220] 態様２７．ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有するｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）であってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを有する細胞において、ＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する方法であって、該細胞へ治療薬剤を接触させ、それにより治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンのスプライシングを調節し、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある、前記方法。

[00221] 態様２８．疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって、該細胞中のＮＭＤエクソンを含有してＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡからのナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソン）のスプライシングを調節する治療薬剤と該被験者の該細胞とを接触させ、それにより、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、ことを含んでなり；ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある、前記方法。

[00222] 態様２９．配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含んでなるアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）。

[00223] 態様３０．配列番号１２～７３１より選択される配列から成るアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）。
[00224] 態様３１．疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって、態様２９又は３０のＡＳＯと該被験者の該細胞とを接触させることを含んでなる、前記方法。

[00225] 態様３２．態様２９又は３０のＡＳＯを含んでなるキット。
[00226] 本発明の好ましい態様について本明細書において示して記載してきたが、当業者には、このような態様が実施例によってのみ提供されることが明らかであろう。当業者には、本発明の精神より逸脱することなく、数多くの変形態様、変化態様、及び置換態様が今や思いつくだろう。本発明を実施する場合には、本明細書に記載される本発明の態様に対する様々な代替態様を利用し得ると理解されたい。以下の特許請求項は、本発明の範囲を明確化するものであって、これら特許請求項の範囲内にある方法及び構造とそれらの均等物は、それに含まれると企図される。

[00227] 本発明は、以下の実施例によってより具体的に例解されよう。しかしながら、本発明は、これらの実施例によっていかなる方法でも制限されないと理解されたい。
実施例１：次世代配列決定法を使用するＲＮＡｓｅｑによる、ＳＣＮ１Ａ転写産物中のＮＭＤ誘導エクソン包含事象の同定
[00228] 次世代配列決定法を使用する全トランスクリプトームショットガン配列決定を行ってＳＣＮ１Ａ遺伝子によって産生される転写産物のスナップショットを明らかにして、ＮＩＥ包含事象を同定した。この目的のために、ＨＣＮ（ヒト皮質ニューロン）の核画分と細胞質画分よりポリＡ^＋ＲＮＡを単離して、Illumina’s TruSeq Stranded mRNA library Prep Kit を使用してｃＤＮＡライブラリーを構築した。このライブラリーについてペアエンド（pair-end）配列決定して生じた１００ヌクレオチドの読取り（reads）をヒトゲノム（2009年2月、GRCh37/hg19 アセンブリー）へマッピングした。ＳＣＮ１Ａについての配列決定結果を図２に示す。簡潔に言えば、図２は、ＵＣＳＣゲノムブラウザー（UCSC Genome Informatics Group（ゲノムインフォーマティクスグループ）（生体分子科学・工学センター、カリフォルニア州立大学、サンタクルーズ、1156 HighStreet、サンタクルーズ、CA95064）によって操作される）を使用して可視化されて、例えば、Rosenbloom, et al., 2015,「The UCSC Genome Browser database（ＵＣＳＣゲノムブラウザーデータベース）：2015 更新版」 Nucleic Acids Research 43, Database Issue, doi: 10.1093/nar/gku1177）によって記載された、マッピングされた読取りを示し、読取りの範囲と数は、ピークシグナルによって推定することができる。ピークの高さは、特別な領域中の読取りの密度によって与えられる発現のレベルを示す。上パネルは、ＳＣＮ１Ａ遺伝子の拡大したグラフ図を示す。１００種の脊椎動物種にわたる保存レベルをピークとして示す。最高のピークがエクソン（黒色のボックス）に対応するのに対し、大多数のイントロン（矢じりのあるライン）では、ピークが観測されない。イントロン２０（ＮＭ＿００６９２０）には保存のピークが同定されて、中央パネルにおいて示した。保存された配列の精査により、３’スプライス部位と５’スプライス部位（下線を施した配列）が横にある、６４ｂｐのエクソン様配列（下パネル、灰色で強調した配列）を同定した。このエクソンの包含がフレームシフトをもたらすので、エクソン２１中に未成熟終止コドンを導入して、この転写産物をＮＭＤの標的とする。

[00229] 例示のＳＣＮ１Ａ遺伝子、プレｍＲＮＡ、エクソン、及びイントロンの配列を表１に要約する。それぞれのエクソン又はイントロンの配列を表２に要約する。

実施例２：シクロヘキシミド処理を介したＮＩＥの確認
[00230] ＤＭＳＯ処理（ＣＨＸ^－）又はシクロヘキシミド処理（ＣＨＸ^＋）したマウスＮｅｕｒｏ２Ａ細胞（図３Ａ）とＲｅｎＣｅｌｌＶＭ（ヒト神経前駆細胞）（図３Ｂ）由来の細胞質ＲＮＡと、エクソン２１及びエクソン２３におけるプライマーを使用するＲＴ－ＰＣＲ分析によって、ＮＭＤ誘導エクソン（２０ｘ）に対応するバンドの存在を確認した。この産物の独自性について、配列決定によって確認した。このバンドの濃度測定分析を実施して、全ＳＣＮ１Ａ転写産物のエクソン２０ｘ包含％を計算した。ＲｅｎＣｅｌｌＶＭをシクロヘキシミドで処理（ＣＨＸ^＋）してＮＭＤを阻害すると、細胞質画分において、ＮＭＤ誘導エクソン２０ｘに対応する産物の２倍増加をもたらした（薄灰色のバー、ＣＨＸ^－と濃灰色のバー、ＣＨＸ^＋を比較すること）。

実施例３：ＳＣＮ１Ａエクソン２３（エクソン２０ｘ）領域のＡＳＯウォーク
[00231] １度に５ヌクレオチドをシフトさせることによって、ＳＣＮ１Ａエクソン２３（エクソン２０ｘ）遺伝子の５’端の約１０００～約１００ヌクレオチド上流の領域を網羅するようにＡＳＯを設計した。また、１度に５ヌクレオチドをシフトさせることによって、ＳＣＮ１Ａエクソン２３（エクソン２０ｘ）遺伝子の３’端から約１０００～約１００ヌクレオチド下流の第２領域を網羅するようにＡＳＯを設計した。ＳＣＮ１Ａを標的にするＡＳＯのリストを表３に要約する。ＡＳＯの配列を表４に要約する。

実施例４：ＲＴ－ＰＣＲによって評価される、ＳＣＮ１Ａエクソン２３（エクソン２０ｘ）領域の伸長ＡＳＯウォーク
[00232] ＡＳＯウォーク配列について、例えばＲＴ－ＰＣＲによって評価することができる。図５Ａでは、代表的なＰＡＧＥが、ＲｅｎＣｅｌｌにおける１μＭの濃度でのヌクレオフェクションによる、実施例３において、そして図３の記載において本明細書に記載したような、エクソン２０ｘ領域を標的とする、ＳＣＮ１Ａモック処理、対照ＡＳＯ処理された、ＳＹＢＲ－安全染色ＲＴ－ＰＣＲ産物を示す。２種の産物（一方はエクソン２０ｘを含んでなり、他方はエクソン２０ｘを排除している）について定量して、エクソン２０ｘ包含％を棒グラフ中にプロットする（図５Ｂ）。ＴａｑｍａｎｑＰＣＲ産物についてもＲＰＬ３２内部対照に対して正規化して、モックに比べた倍数変化を棒グラフ中にプロットする（図５Ｃ）。

[00233] 本発明の好ましい態様について本明細書において示して記載してきたが、当業者には、このような態様が実施例によってのみ提供されることが明らかであろう。当業者には、本発明の精神より逸脱することなく、数多くの変形態様、変化態様、及び置換態様が今や思いつくだろう。本発明を実施する場合には、本明細書に記載される本発明の態様に対する様々な代替態様を利用し得ると理解されたい。以下の特許請求項は、本発明の範囲を明確化するものであって、これら特許請求項の範囲内にある方法及び構造とそれらの均等物は、それに含まれると企図される。

Claims

ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有するｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）であってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを有する細胞において、ＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する方法であって、
該細胞へ治療薬剤を接触させ、それにより治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンのスプライシングを調節し、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして、
該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、
ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は：
ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの５’端から約１００ヌクレオチド上流；又は
ＮＩＥの３’端の約１００ヌクレオチド下流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流、
にある、前記方法。
疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって：
該細胞中のＮＭＤエクソンを含有してＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡからのナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソン）のスプライシングを調節する治療薬剤と該被験者の該細胞とを接触させ、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして
該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、
ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は：
ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの５’端から約１００ヌクレオチド上流；又は
ＮＩＥの３’端の約１００ヌクレオチド下流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流、
にある、前記方法。
治療薬剤が、標的化部分の領域からのＮＭＤエクソンのスプライシングに関与する因子の結合に干渉する、請求項１又は２の方法。
標的化部分が、ＮＩＥの５’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド上流にある、請求項１又は２の方法。
標的化部分が、ＮＩＥの５’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド上流にある、請求項１又は２の方法。
標的化部分が、ＮＩＥの３’端の最大でも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド下流にある、請求項１又は２の方法。
標的化部分が、ＮＩＥの３’端の少なくとも約８００ヌクレオチド、約７００ヌクレオチド、約６００ヌクレオチド、約５００ヌクレオチド、約４００ヌクレオチド、約３００ヌクレオチド、約２００ヌクレオチド、約１００ヌクレオチド、約８０ヌクレオチド、約７０ヌクレオチド、約６０ヌクレオチド、約５０ヌクレオチド、約４０ヌクレオチド、約３０ヌクレオチド、約２０ヌクレオチド、約１０ヌクレオチド、約５ヌクレオチド、約４ヌクレオチド、約２ヌクレオチド、約１ヌクレオチド下流にある、請求項１又は２の方法。
治療薬剤がアンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）である、請求項１～７のいずれか１項の方法。
ＡＳＯが、配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含む、請求項８の方法。
治療薬剤が、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除を促進させる、請求項１～９のいずれか１項の方法。
治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンの排除と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する、請求項１０の方法。
治療薬剤が、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの該細胞中のレベルを増加させる、請求項１０の方法。
治療薬剤と接触した細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの量が、対照細胞における、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡの全量と比較して、約１．１～約１０倍、約１．５～約１０倍、約２～約１０倍、約３～約１０倍、約４～約１０倍、約１．１～約５倍、約１．１～約６倍、約１．１～約７倍、約１．１～約８倍、約１．１～約９倍、約２～約５倍、約２～約６倍、約２～約７倍、約２～約８倍、約２～約９倍、約３～約６倍、約３～約７倍、約３～約８倍、約３～約９倍、約４～約７倍、約４～約８倍、約４～約９倍、少なくとも約１．１倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約２．５倍、少なくとも約３倍、少なくとも約３．５倍、少なくとも約４倍、少なくとも約５倍、又は少なくとも約１０倍増加する、請求項１０の方法。
疾患又は病態が、Ｎａ_ｖ１．１における機能欠失変異によって誘導される、請求項２の方法。
疾患又は病態がＳＣＮ１Ａ遺伝子のハプロ不全に関連し、ここで該被験者は、機能的ＳＣＮ１Ａをコードする第１対立遺伝子と、ＳＣＮ１Ａが産生されないか又は低下したレベルで産生される第２対立遺伝子、又は非機能的ＳＣＮ１Ａ又は部分機能的ＳＣＮ１Ａをコードする第２対立遺伝子とを有する、請求項１４の方法。
疾患又は病態が脳症である、請求項１４の方法。
脳症がてんかん性脳症である、請求項１６の方法。
疾患又は病態が、ドラベ症候群（ＤＳ）；乳児重症ミオクロニーてんかん（ＳＭＥＩ）－辺縁型（ＳＭＥＢ）；熱性痙攣（ＦＳ）；全般性てんかん熱性痙攣プラス（ＧＥＦＳ＋）；てんかん性脳症、早期乳児、１３；潜在性（cryptogenic）全般性てんかん；潜在性焦点性てんかん；ミオクロニー失立発作てんかん；レノックス・ガスト症候群；ウェスト症候群；特発性痙攣；早期ミオクロニー脳症；進行性ミオクロニーてんかん；小児交互性片麻痺；分類不能てんかん性脳症；てんかんにおける予期せぬ突然死（ＳＵＤＥＰ）；洞不全症候群１；自閉症；又は乳児悪性遊走性部分発作である、請求項１４の方法。
ＧＥＦＳ＋が、全般性てんかん熱性痙攣プラス２型である、請求項１８の方法。
熱性痙攣が、家族性熱性痙攣３Ａである、請求項１８の方法。
ＳＭＥＢが、全般性棘徐波のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－ＳＷ）、ミオクロニー発作のないＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｍ）、ＳＭＥＩの１より多い特徴を欠いているＳＭＥＢ（ＳＭＥＢ－Ｏ）、又は全身性強直性間代性発作を伴う小児難治性てんかん（ＩＣＥＧＴＣ）である、請求項１８の方法。
ＡＳＯが、配列番号７２又は４３２より選択される配列から成る、請求項１又は２の方法。
ＡＳＯが、配列番号７３又は４３３より選択される配列から成る、請求項１又は２の方法。
ＡＳＯが、配列番号７６又は４３６より選択される配列から成る、請求項１又は２の方法。
ＡＳＯが、配列番号１８１又は５４１より選択される配列から成る、請求項１又は２の方法。
ＡＳＯが、配列番号２２０又は５８０より選択される配列から成る、請求項１又は２の方法。
ナンセンス変異依存性ＲＮＡ分解誘導エクソンを含有するｍＲＮＡ（ＮＭＤエクソンｍＲＮＡ）であってＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするｍＲＮＡを有する細胞において、ＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する方法であって、
該細胞へ治療薬剤を接触させ、それにより治療薬剤は、ＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡからのＮＭＤエクソンのスプライシングを調節し、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして
該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、
ことを含んでなり、ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある、前記方法。
疾患又は病態を治療することが必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって：
該細胞中のＮＭＤエクソンを含有してＳＣＮ１ＡをコードするｍＲＮＡからのナンセンス変異依存性ｍＲＮＡ分解誘導エクソン（ＮＭＤエクソン）のスプライシングを調節する治療薬剤と該被験者の該細胞とを接触させ、それによりＳＣＮ１Ａタンパク質をコードするプロセシングされたｍＲＮＡのレベルを調節し、そして
該被験者の該細胞におけるＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節する、
ことを含んでなり；ここで該治療薬剤は、ＳＣＮ１ＡをコードするＮＭＤエクソンｍＲＮＡの標的化部分へ結合し、そして該標的化部分は、ＮＭＤ誘導エクソン（ＮＩＥ）の５’端から約１０００ヌクレオチド上流～ＮＩＥの３’端の約１０００ヌクレオチド下流にある、前記方法。
配列番号１２～７３１のいずれか１つに対して少なくとも約８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、又は１００％同一である配列を含んでなる、アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）。
配列番号１２～７３１より選択される配列から成る、アンチセンスオリゴマー（ＡＳＯ）。
疾患又は病態を治療することの必要な被験者の細胞においてＳＣＮ１Ａタンパク質の発現を調節することによって、該被験者においてそれを治療する方法であって：
請求項２９又は３０のＡＳＯと該被験者の該細胞とを接触させることを含んでなる、前記方法。
請求項２９又は３０のＡＳＯを含んでなるキット。