JP2022512481A - トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのための改変抗体、ならびにそのコンジュゲート、方法および用途 - Google Patents

トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションのための改変抗体、ならびにそのコンジュゲート、方法および用途 Download PDF

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Abstract

抗体は、重鎖ＣＨ１、ＣＨ２またはＣＨ３あるいは軽鎖定数領域におけるアミノ酸を、選択された置換グルタミン含有配列で置き換えることにより改変され、酵素トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーションが可能となる。

Description

(関連出願の相互参照)
本願は、米国特許法第１１９条(ｅ)の定めにより米国仮特許出願第６２/７７８,４３７号の２０１８年１２月１２日に出願日の権利を受けることを請求し、その全体が引用により本明細書に援用される。
配列表
ファイル名「１８１０３１＿ＳＥＱＴ＿１３１４３ＷＯＰＣＴ＿ＹＣ．ｔｘｔ」の配列表は、本明細書に開示された核酸および／またはアミノ酸配列を含む配列番号：１から配列番号：１０３で構成されており、これを引用することによりその全てが本明細書に組み込まれる。配列表は、ＥＦＳ－Ｗｅｂを介してＡＳＣＩＩテキスト形式で提出されているため、その紙媒体およびコンピュータ可読形式の両方からなる。配列表は、最初に２０１８年１０月３１日にＰａｔｅｎｔＩｎ３.５を用いて作成され、サイズは約３９ＫＢである。
本明細書は、酵素トランスグルタミナーゼによりコンジュゲート可能な改変抗体およびそのような抗体から作成されたコンジュゲートに関する。
現在、強い関心を集めているタイプの生物学的製剤は、抗体がパートナー分子に共有結合しているものである(「抗体－薬剤コンジュゲート」、「ＡＤＣ」、「コンジュゲート」または「イムノコンジュゲート」)。つまり、コンジュゲートは、３つの成分：(１)抗体、(２)パートナー分子および(３)最初の２つの成分を共有結合するリンカーを含んでいる。
パートナー分子は、治療剤、例えば、抗がん剤、アジュバント、他のタンパク質または放射性同位元素などであり得る。抗体は、その抗原が標的細胞または組織により発現されているものである。抗体は、抗原に結合することで、コンジュゲートを標的に送達する役割を果たす。標的に到達した後、共有結合の開裂または抗体の分解により、治療剤が標的とする場所で放出される。逆に、コンジュゲートが、血液中で循環している間は、治療剤は、抗体との共有結合により不活性化されているため、副作用のリスクが低い。抗がん剤治療におけるコンジュゲートについてのレビューは、Ｇｅｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．２０１３を参照されたい。
治療剤の代わりに、パートナー分子は、診断、疾患部位の特定または病状のモニタリングのためのアッセイ剤であってもよい。そのような例では、アッセイ剤は、例えば、ビオチン、蛍光標識、放射性標識または重水素化ポリマーも可能である。Ｓｍｉｔｈら(２０１９)は、ＭＲＩイメージングのための重水素化ポリマーを含むコンジュゲートを開示している。その例においては、標的部位でリンカーを切断することは必要では無いが、実際には望ましくない場合がある。そのような使用のためには、リンカーを、非開裂性のタイプとなるように設計できる。
コンジュゲートを製造する際に重要な工程は、共有結合の工程であって、コンジュゲーション工程とも呼ばれる。コンジュゲーションを実施するための多くの方法が開示されている。最近では、トランスグルタミナーゼ(ＥＣ ２.３.２.１３)により媒介されるコンジュゲーションが注目されている。
多くのトランスグルタミナーゼ変異体が知られており、様々な生物によって自然に産生されたものや、生物工学的に作られたものがある。食品業界でタンパク質のテクスチャーを改変するために、一般的に使用されているものは、発酵または組換え発現によって得られるＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ由来のトランスグルタミナーゼである。本明細書では、特定の種類または供給源を示さない限り、「トランスグルタミナーゼ」という用語を一般的に使用する。
トランスグルタミナーゼは、グルタミンのカルボキサミド側鎖(アミンアクセプター、あるいは逆にアシルドナー)とリジンのε－アミノ基(アミンドナー、あるいは逆にアシルアクセプター)の間にアミド結合を形成する。特に、トランスグルタミナーゼは、グルタミン残基に関しては選択的であり、グルタミン残基がタンパク質ループの柔軟性部分に位置すること、かつ特定のアミノ酸に挟まれている必要があるが、リジン残基に関しては区別無く、例えば、アルキレンアミノ化合物のアミノ基をリジンのε－アミノのサロゲートとして容易に受け入れる(Fontana et al．2008を参照)。
典型的なトランスグルタミナーゼを介したコンジュゲーションでは、以下に示すように、グルタミン残基は抗体上に位置し、アミノ基はリンカー－パートナー分子部分に位置する：
Figure 2022512481000002
 。
ポリペプチド鎖上のグルタミン残基の位置は、アミンアクセプターとしてのその利用可能性に大きな影響を与える。通常、抗体上のグルタミン残基のいずれも利用できず、利用できるようにするためには、抗体に何らかの改変が必要となる。通常、抗体は、重鎖のアスパラギン２９７(Ｎ２９７)でグリコシル化されている(Ｎ－結合グリコシル化)。Ｊｅｇｅｒら(２０１０)は、Ｎ２９７Ａ置換によってグリコシル化部位を除くか、翻訳後に酵素により脱グリコシル化することで、近傍のグルタミン２９５(Ｑ２９５)がＳ．ｍｏｂａｒａｅｎｓｉｓ由来のトランスグルタミナーゼによるアミド基転移に利用できるようになることを見出した。さらに、Ｎ２９７Ｑ置換により、グリコシル化が除かれるだけでなく、２番目のグルタミン残基(２９７位)が導入され、この残基もアミンアクセプターとなることが示された。このように、単純な脱グリコシル化では、抗体あたりにトランスグルタミナーゼ反応性のグルタミン残基が２つ(Ｑ２９５の位置で、重鎖あたりに１つ)生成されるのに対し、Ｎ２９７Ｑ置換を持つ抗体では、トランスグルタミナーゼ反応性のグルタミン残基を４つ(Ｑ２９５およびＱ２９７の位置で、重鎖あたりに２つ)有する。
Ｊｅｇｅｒら(２０１０)が開示したＮ２９７ＡおよびＮ２９７Ｑ置換に加えて、トランスグルタミナーゼの基質となるように抗体または他のタンパク質を改変することについてその他の開示がある：
(ａ) Ｓｔｒｏｐら(２０１７)およびＦａｒｉａｓら(２０１６)は、ＬＬＱＧＧ、ＬＳＬＳＱＧ、ＧＧＧＬＬＱＧＧ、ＧＬＬＱＧなどのグルタミン含有タグを含むように設計された抗体のＦｃ領域を開示しており、タグ中のグルタミンは、アミンアクセプターとして作用し、そのカルボキシ末端を含む抗体重鎖または軽鎖の様々な場所に配置することが可能である：
(ｂ) Ｃｈｅｎら(２００５)は、ＸがＬまたはＩであるタグＱＳＫＶＸによるタンパク質の改変の後に、トランスグルタミナーゼとコンジュゲートすることができることを開示している：
(ｃ) Ｆｉｓｃｈｅｒら(２０１５)は、Ｆｃドメインが欠如している抗体フラグメントに、
式：(Ｑ)－ＮＨ－(Ｃ)－Ｘ－Ｌ－(Ｖ－(Ｙ－(ＭまたはＺ)ｚ)ｑ)ｒ
のグルタミン(Ｑ)含有タグを組み込むことを開示している：
(ｄ) Ｒａｏ－Ｎａｉｋら(２０１８)は、トランスグルタミナーゼ反応性とするために、抗体にグルタミン含有重鎖Ｃ－末端伸長部分を付加することを開示している。
トランスグルタミナーゼ反応性とするために抗体を改変することへの相補的なアプローチとして、Ｒａｏ－Ｎａｉｋら(２０１７)は、トランスグルタミナーゼを改変して、野生型抗体へのコンジュゲートが可能となったことを開示している。
また、低分子ペプチドを含む分子を用いたトランスグルタミナーゼの基質特異性に関する研究もある：Ando et al. 1989, Kamiya et al. 2011, Ohtsuka et al. 2000。
トランスグルタミナーゼを用いた抗体または他のタンパク質のコンジュゲーションに関するその他の開示は、以下の通りである:Bregeon 2016, Bregeon et al. 2016, Bregeon et al. 2017, Dennler et al. 2014, Innate Pharma 2013, Lin et al. 2006, Mero et al. 2009, Mindt et al. 2008, Sato 2002, Sato et al. 2001, Schibli et al. 2007, and Sugimura et al. 2007。
また、マレイミド基へのマイケル付加を介したコンジュゲーションを行う目的のために、システインを含む末端伸長部分を抗体に結合させることも知られている。Ｌｉｕら(２０１４)は、重鎖のＣ末端にそのような伸長部分を結合することを開示している。Ｂａｂｃｏｏｋら(２０１７)は、そのような伸長部分を軽鎖Ｃ末端に結合させることを開示している。
本明細書で引用した文書についての筆頭著者または発明者および発行年による完全な引用は、本明細書の末部に記載されている。
我々は、抗体の重鎖および軽鎖の定常領域のループが、トランスグルタミナーゼによるコンジュゲーション(アミド基転移)に適合するように抗体を改変するための好ましい位置であることを見出した。
従って、一実施態様では、下記からなる群から選択される置換配列を有するＩｇＧ全長抗体を提供する：
(ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
(ｉｉ) 重鎖のＥＵ１６０～１６４のアミノ酸の、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１６または配列番号：１７のアミノ酸による置換；
(ｉｉｉ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８、配列番号：１９または配列番号：２０のアミノ酸による置換；
(ｉｖ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２、配列番号：２３または配列番号：２４のアミノ酸による置換；
(ｖ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
(ｖｉ) 重鎖のＥＵ２８０～２８４のアミノ酸の、配列番号：２９、配列番号：３０または配列番号：３１のアミノ酸による置換；
(ｖｉｉ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
(ｖｉｉｉ) 重鎖のＥＵ３１４～３１９のアミノ酸の、配列番号：４８、配列番号：４９または配列番号：５０のアミノ酸による置換；
(ｉｘ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
(ｘ) 重鎖のＥＵ３５８～３６２のアミノ酸の、配列番号：５４または配列番号：５５のアミノ酸による置換；
(ｘｉ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３または配列番号：６４のアミノ酸による置換；
(ｘｉｉ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８または配列番号：６９のアミノ酸による置換；
(ｘｉｉｉ) 軽鎖のＥＵ１２２～１２６のアミノ酸の、配列番号：７０、配列番号：７１または配列番号：７２のアミノ酸による置換；
(ｘｉｖ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３、配列番号：７４または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
(ｘｖ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８１または配列番号：８２のアミノ酸による置換；
(ｘｖｉ) 軽鎖のＥＵ１８２～１９０のアミノ酸の、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６または配列番号：８７のアミノ酸による置換；および
(ｘｖｉｉ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：８９、配列番号：９０、配列番号：９１、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５または配列番号：９６のアミノ酸による置換。
別の実施態様では、以下からなる群から選択される置換配列を有するＩｇＧ全長抗体を提供する：
(Ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
(ＩＩ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８のアミノ酸による置換；
(ＩＩＩ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２のアミノ酸による置換；
(ＩＶ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
(Ｖ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
(ＶＩ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
(ＶＩＩ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：６３のアミノ酸による置換；
(ＶＩＩＩ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６６または配列番号：６８のアミノ酸による置換；
(ＩＸ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
(Ｘ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７８または配列番号：８２のアミノ酸による置換；および
(ＸＩ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：９２、配列番号：９３または配列番号：９４のアミノ酸による置換。
別の態様では、本明細書は、式(ＩＶ)：
Figure 2022512481000003
 [式中、
Ａｂは、上記の下位項目(ｉ)－(ｘｖｉｉ)の置換配列を有する全長抗体であり；
Ｌは、置換配列のグルタミンに、アミド結合：
Figure 2022512481000004
 を介してＡｂに結合したリンカー成分であり；および
Ｄは、タンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤および治療剤からなる群から選択される]
のコンジュゲートを提供する。
別の態様では、本明細書は、以下の工程：
(ａ) 上記の下位項目(ｉ)－(ｘｖｉｉ)の置換配列を有する全長抗体を、トランスグルタミナーゼの存在下で、第一級アミンならびにタンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤および治療剤からなる群から選択される成分を含むアミンドナー化合物と混合する工程；および
(ｂ)トランスグルタミナーゼが、置換配列のグルタミンの側鎖カルボキサミドとアミンドナー化合物の第一級アミンとの間のアミド結合の形成を触媒して、抗体コンジュゲートを作成する工程、
を含む、抗体コンジュゲートの製造方法を提供する。
別の態様では、本明細書は、以下の工程：
(ａ) 上記の下位項目(ｉ)－(ｘｖｉｉ)の置換配列を有する全長抗体を、トランスグルタミナーゼの存在下で、第一化合物(第一化合物とは、第一級アミンおよび第一の反応性官能基を有するアミンドナー化合物である)と混合する工程；
(ｂ) トランスグルタミナーゼが、置換配列のグルタミンの側鎖カルボキサミドと第一化合物の第一級アミンとの間にアミド結合の形成を触媒して、抗体および第一化合物との付加体を形成する工程；
(ｃ) 前記付加体を、第二の反応性官能基ならびにタンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤および治療剤からなる群から選択される成分を有する第二化合物と接触させる工程：前記第二の反応性官能基は、第一の反応性官能基と反応して、それらの間に共有結合を形成することができる；および
(ｄ) 第一および第二の反応性官能基を反応させて、それらの間に共有結合を形成させることにより、抗体コンジュゲートを作成する工程、
を含む、抗体コンジュゲートの製造方法を提供する。
成分(場合によっては、第一化合物または第二化合物中の成分)が、タンパク質である場合、結果として得られるコンジュゲートは融合タンパク質である。成分が、放射性同位体である場合、結果として得られるコンジュゲートは、放射線治療または放射性物質を用いるイメージングに使用することができる。成分が、アッセイ剤、例えば、蛍光標識、重水素化ポリマーまたはビオチンのようなリガンドである場合、コンジュゲートは、病状の診断、治療のモニタリング、分析用途に使用することができる。好ましくは、成分は、治療剤であり(この場合、製品は、抗体－薬剤コンジュゲートまたはＡＤＣとも呼ばれる)、医学的治療(特に、癌の治療)に使用することができる。
図１は、本明細書で開示されているような改変を行うことができるヒトＩｇＧ１のＣＨ１領域のループの位置を示す概略図である。 図２は、本明細書で開示されているような改変を行うことができるヒトＩｇＧ１のＣＨ２領域におけるループの位置を示す概略図である。 図３は、本明細書で開示されているような改変を行うことができるヒトＩｇＧ１のＣＨ３領域におけるループの位置を示す概略図である。 図４Ａ、図４Ｂおよび図４Ｃは、配列番号：１の連続するアミノ酸番号とヒトＩｇＧ１抗体の重鎖定常領域のＥＵ番号、さらにその中のループ関連アミノ酸との間の相関関係を示す。 図５Ａおよび図５Ｂは、ヒトＩｇＧ１(配列番号：１)、ＩｇＧ２(配列番号：２)、ＩｇＧ３(配列番号：３)およびＩｇＧ４(配列番号：４)の定常領域のループ関連アミノ酸のアライメントを示す。 図６は、本明細書に開示されているように改変を行うことができるループのアライメントを、ヒトのカッパ(κ)およびラムダ(λ)軽鎖の定常領域を重ね合わせて示した概略図である。 図７は、配列番号：５の連続したアミノ酸番号とヒト抗体のκ軽鎖定常領域のＥＵ番号、さらにその中のループ関連アミノ酸との間の相関関係を示す。 図８は、ヒトκ(配列番号：５)およびλ(配列番号：６)定常領域のループ関連アミノ酸の間のアライメントを示す。 図９は、トランスグルタミナーゼ反応性グルタミンを含むように、ループをどのように改変することができるかを示す概略図である。 図１０は、トランスグルタミナーゼを用いてコンジュゲートを製造するための一段階方法および二段階方法を比較したものである。 図１１Ａ、図１１Ｂおよび図１１Ｃは、抗メソテリン抗体およびその抗体薬剤コンジュゲート(ＡＤＣ)の、様々なヒト癌細胞株への結合を比較したものである。
発明の詳細な説明
定義
「抗体」とは、全抗体およびそのあらゆる抗原結合フラグメント(すなわち「抗原結合部分」)または一本鎖のバリアントをいう。全抗体は、ジスルフィド結合により、相互に連結された少なくとも２本の重鎖(Ｈ)および２本の軽鎖(Ｌ)からなるタンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域(ＶＨ)および３つのドメイン(ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３)を含む重鎖定常領域を含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域(ＶＬまたはＶＫ)および１つのシングルドメインであるＣＬを含む軽鎖定常領域を含む。ＶＨおよびＶＬ領域は、保存性が高いフレームワーク領域(ＦＲ)と共に存在する相補性決定領域(ＣＤＲ)と呼ばれる超可変領域にさらに細分化され得る。各ＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲを含んでおり、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって、以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４で配置されている。可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。定常領域は、宿主の組織または因子、例えば、免疫系の様々な細胞(例えば、エフェクター細胞)または古典的な補体系の第一成分(Ｃｌｑ)との抗体の結合を媒介し得る。抗体が５×１０－８Ｍ以下、より好ましくは１×１０－８Ｍ以下、より好ましくは６×１０－９Ｍ以下、より好ましくは３×１０－９Ｍ以下、さらに好ましくは２×１０－９Ｍ以下のＫＤで抗原Ｘに結合する場合、抗体は抗原Ｘに「特異的に結合する」と言える。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体または、好ましくはヒト抗体であり得る。重鎖定常領域は、グリコシル化のタイプまたは程度に影響を与えるか、抗体の半減期を延ばすか、エフェクター細胞または補体系との相互作用を増強または低下するか、またはその他の特性を調節するように生物工学的に設計することができる。設計とは、１または複数のアミノ酸の置換、追加または削除によるか、ドメインを別のイムノグロブリン由来のドメインに置換するか、あるいはこれらの組み合わせにより行うことができる。
抗体の「抗原結合フラグメント」および「抗原結合部分」(または単に「抗体部分」または「抗体フラグメント」)とは、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１または複数のフラグメントを意味する。抗体の抗原結合機能は、全長抗体のフラグメント、例えば、(ｉ)ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインからなる１価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；(ｉｉ)ヒンジ領域でジスルフィド架橋により結合された２つのＦａｂフラグメントを含む２価のフラグメントであるＦ(ａｂ')２フラグメント；(ｉｉｉ) 主にヒンジ領域の部分を有するＦａｂであるＦａｂ'フラグメント(例えば、Abbas et al., Cellular and Molecular Immunology, 6th Ed., Saunders Elsevier 2007を参照されたい)；(ｉｖ) ＶＨドメインおよびＣＨ１ドメインを含むＦｄフラグメント；(ｖ) 抗体のシングルアームのＶＬドメインとＶＨドメインを含むＦｖフラグメント；(ｖｉ) ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546)；(ｖｉｉ) 単離された相補性決定領域(ＣＤＲ)；および(ｖｉｉｉ) １つの可変ドメインと２つの定常ドメインを含む重鎖可変領域であるナノボディがある。好ましい抗原結合フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆ(ａｂ')２、Ｆａｂ'、ＦｖおよびＦｄフラグメントである。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子によってコードされているが、それらを、組換え法を用いて、合成リンカーにより結合させて、ＶＬ領域およびＶＨ領域が対になって一価の分子を形成する単一のタンパク質の鎖として作成できる(単鎖ＦｖまたはｓｃＦｖとして知られている)；例えば、Bird et al., (1988) Science 242：423-426；およびHuston et al.,(1988)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883) を参照されたい。このような一本鎖抗体も、抗体の「抗原結合部分」という用語に包含される。
別段の記載が無ければ、例えば、配列表中のアミノ酸位置の番号付けについて、即ち抗体の重鎖または軽鎖の可変領域(ＶＨまたはＶＬ)のアミノ酸位置の番号付けについては、Ｋａｂａｔシステム(Kabat et al., "Sequences of proteins of immunological interest, 5th ed., Pub. No. 91-3242, U.S. Dept. Health & Human Services, NIH, Bethesda, Md., 1991, 以下「Ｋａｂａｔ」)に従い、抗体の重鎖または軽鎖の定常領域(ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３またはＣＬ)のアミノ酸位置の番号付けについては、Ｋａｂａｔに記載されているＥＵインデックスに従う(Lazar et al., US 2008/0248028 A1を参照されたい；その開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる)。さらに、ImmunoGeneTics Information System(IMGT)は、"IMGT Scientific Chart: Correspondence between C Numberings" と題した表をそのウェブサイトで公開しており、重鎖定常領域に関するその番号付けシステム、ＥＵ番号付け、Ｋａｂａｔ番号付けの間の対応を示している。
「単離された抗体」とは、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を意味する(例えば、抗原Ｘを特異的に結合する単離された抗体は、抗原Ｘ以外の抗原を特異的に結合する抗体を実質的に含まない)。しかし、抗原Ｘに特異的に結合する単離された抗体は、他の抗原、例えば、別の種由来の抗原Ｘ分子との交差反応性を有する場合がある。ある実施態様においては、単離された抗体は、ヒト抗原Ｘに特異的に結合し、その他の(ヒト以外の)抗原Ｘの抗原とは交差反応しない。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まないものであり得る。
「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」とは、特定のエピトープに対して１つの結合特異性および親和性を示す、単一の分子組成の抗体分子の調製物を意味する。
「ヒト抗体」とは、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域(存在する場合には、定常領域)の両方が、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列から得られる可変領域を有する抗体を意味する。ヒト抗体は、後の改変(天然または合成の改変を含む)を含んでもよい。ヒト抗体は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列にコードされていないアミノ酸残基を含んでいてもよい(例えば、イン・ビボでのランダムまたは部位特異的突然変異誘発あるいはイン・ビトロでの体細胞突然変異により導入された突然変異)。しかし、「ヒト抗体」には、マウスなどの別の哺乳類種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列を、ヒトのフレームワーク配列に組み込んだ抗体は含まれない。
「ヒトモノクローナル抗体」とは、フレームワーク領域およびＣＤＲ領域の両方が、ヒト生殖細胞由来の免疫グロブリン配列から得られる可変領域を有している１つの結合特異性を示す抗体を意味する。一実施態様では、ヒトモノクローナル抗体は、不死化細胞に融合したヒト重鎖導入遺伝子および軽鎖導入遺伝子を含むゲノムを有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばトランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含むハイブリドーマにより産生される。
(実施態様)
一般的には、トランスグルタミナーゼ反応性グルタミンは、タンパク質鎖が突出しており(即ち、暴露されており、かつアクセシブルである)、かつ柔軟性のある領域に存在している必要がある。野生型抗体の重鎖には、約１２個のグルタミンがあり、軽鎖にはさらに約６個のグルタミンが存在するが、Ｊｅｇｅｒらが(２０１０年)示したように、トランスグルタミナーゼによってアミド基転移され得るものは、重鎖のＱ２９５のみである。なお且つ、Ｑ２９５のアミド基転移には、近傍のｓ２９７位でのグリコシル化を未然に防ぐことが必要である。
重鎖のＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３ドメインおよび軽鎖の定常領域には、ループと呼ばれる突出した配列がある。これらのドメインは、Ｑ２９５以外には、トランスグルタミナーゼ反応性のグルタミンを持っていないが、このドメインにアミド基転移が可能なグルタミンを導入するためのタンパク質工学の設計にとって適切な部位になり得ることを見出した。ループとは、一般的に、重鎖および軽鎖の定常領域に存在する突出した領域、いわゆるサブドメインであり、適切に配置されたグルタミンが存在する場合、トランスグルタミナーゼがより接近しやすい領域であると考えられる。
我々は、ヒトＩｇＧ１(ｈＩｇＧ１)のＣＨ１ドメイン内に、改変候補となる５つのループを同定した。図１は、これらのループの位置を示す模式図である。また、ｈＩｇＧ１のＣＨ２ドメインに６つ、ＣＨ３ドメインに５つのこのようなループを同定し、それらの位置を、各々図２および図３に示した。
図４Ａ、４Ｂおよび４Ｃは、配列番号(配列番号：１)およびＥＵ番号を用いたヒトＩｇＧ１のアミノ酸の相関関係をまとめて示すものである。さらに、各ループに関連するアミノ酸(つまり、ループ内またはループに隣接するもの)は、強調されている。４つのヒトＩｇＧアイソタイプ－ＩｇＧ１(配列番号：１)、ＩｇＧ２(配列番号：２)、ＩｇＧ３(配列番号：３)およびＩｇＧ４(配列番号：４)－は、ＣＨ１、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインで相同性が高く、主にヒンジ領域において相違している。図５Ａおよび図５ＢのようにＥＵ番号に従って並べると、４つのアイソタイプの間では、ループ関連アミノ酸において相同性が高いことが直ぐに判った(ｈＩｇＧ２、ｈＩｇＧ３およびＩｇＧ４のアミノ酸のＥＵ番号は、図４Ａ～４ＣのＩｇＧ１について示された相関関係として、またはＬａｚａｒら、ＵＳ ２００８／０２４８０２８ Ａ１などの刊行物を参照することにより得られる)。好ましい実施形態では、置換配列は、ＩｇＧ１抗体に挿入される。別の好ましい実施形態では、置換配列はＩｇＧ４抗体に挿入されている。
グルタミンをトランスグルタミナーゼの基質として利用できるように設計され得るループも、軽鎖に存在する。カッパ鎖と軽鎖のタイプの間では、４つのＩｇＧ重鎖の間に比べてアミノ酸配列の相同性は低いが、低いにも拘らず、十分な構造的相同性が存在する。図６は、カッパ軽鎖とラムダ軽鎖の定常ドメインを重ね合わせた図であり、ループ領域がどのようにオーバーラップしているかを示している。図７は、配列の番号(配列番号：５)とＥＵ番号を用いたヒトκ軽鎖定常ドメイン(Ｃκ)のアミノ酸の相関関係を示しており、またループ関連アミノ酸が強調されている。図８は、カッパおよびラムダ軽鎖定常ドメインのＥＵ番号付けシステムに従うアライメントを示す(ラムダ鎖定常ドメイン(Ｃλ)のアミノ酸のＥＵ番号は、図７またはＬａｚａｒ ｅｌ ａｌ.，ＵＳ ２００８／０２４８０２８ Ａ１などを参照して導き出すことができる)。
表Ａは、ＥＵ番号表記を用いて、各ループについての関連アミノ酸を挙げたものである。
Figure 2022512481000005
トランスグルタミナーゼの基質となり得るグルタミンを含むようにループを生物工学的に設計する方法は様々である。生物工学的設計は、ループ内でも、その周辺部でも行うことができる。
いくつかのループはヘリックスを含んでおり、ＣＨ３ループ４の場合のように、ネイティブなグルタミンが存在する場合でも、ヘリックスのコイル状性質がアミド基転移を阻害する。このヘリックスを破壊すると、広がった柔軟なループとなり、そこに存在するグルタミンはアミド基転移が可能となり得る。ループの破壊には、セリン、プロリンまたはグリシンを用いることができる。このコンセプトは、図８のスキームに示されている(この画角は、図３のものとは異なる)。
置換配列中のグルタミンは、トランスグルタミナーゼの好ましい基質モチーフとして、－ＶＬＱ－のように、バリンとロイシンによってアミノ側に挟まれているのが好ましい。したがって、好ましい置換配列は、トリペプチド－ＶＬＱ－を含む。
ループ内に元々存在するが、アミド基転移には不利な位置に存在するグルタミンを、異なるアミノ酸で置換して、別のグルタミンをより有利な位置のループ内に挿入することができる。あるいは、置換配列は、ネイティブなグルタミンをアミド基転移により有利な位置に配置するように設計され得る。
実証として、Ｔｅｒｒｅｔｔら、ＵＳ ８,２６８,９７０ Ｂ２(２０１２年)の抗体６Ａ４と同じ重鎖および軽鎖ＣＤＲを有するＩｇＧ１抗メソテリン抗体を改変した。その重鎖および軽鎖の配列は、配列番号：９８および配列番号：９９として各々示されている。表Ｂは、そのＣＨ１ドメインで行われた置換の一覧である。
Figure 2022512481000006
表Ｃは、そのＣＨ２ドメインで行われた置換の一覧である。
Figure 2022512481000007
Figure 2022512481000008
表Ｄは、そのＣＨ３ドメインで行われた置換の一覧である。
Figure 2022512481000009
表Ｅは、その軽鎖(κ)定常ドメインで行われた置換の一覧である。
Figure 2022512481000010
Figure 2022512481000011
本発明の抗体は、ホモ二量体であってもヘテロ二量体であってもよい。ホモ二量体である場合、２つの軽鎖－重鎖の対は同一である；即ち、軽鎖－重鎖の各対は、同一の置換配列および同一の可変領域を含む。ヘテロ二量体抗体は、両方の軽鎖－重鎖の対が、同じ可変領域を有する一方で、２つの軽鎖－重鎖の対の１つだけが置換配列を含むか、または各軽鎖－重鎖の対が異なる置換配列を含むという意味でヘテロ二量体抗体と言える。あるいは、ヘテロ二量体抗体は、同じ置換配列を持ちながら、異なる抗原に特異的に結合するように軽鎖－重鎖の各対が異なる可変領域を持つという意味で、二重特異性抗体であるとも言える。最後に、ヘテロ二量体抗体は、両方の意味でヘテロ二量体であり得る。
本願発明の方法によって改変およびコンジュゲートすることができる抗体には、以下の抗原を認識するものが含まれる：メソテリン、前立腺特異的膜抗原(ＰＳＭＡ)、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ７０、Ｂ７Ｈ３、Ｂ７Ｈ４(Ｏ８Ｅとしても知られる)、タンパク質チロシンキナーゼ７(ＰＴＫ７)、グリピカン－３、ＲＧ１、フコシル－ＧＭ１、ＣＴＬＡ４およびＣＤ４４。抗体は、動物(例えば、マウス)の抗体、キメラ抗体、ヒト化抗体、または好ましくは、ヒト抗体であり得る。抗体は、好ましくはモノクローナルであり、特にモノクローナルヒト抗体である。前記の抗原の一部に対するヒトモノクローナル抗体の製造は、Ｋｏｒｍａｎ ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,６０９,８１６Ｂ２(２０１３年；Ｂ７Ｈ４、０８Ｅとしても知られている；特に、抗体２Ａ７、１Ｇ１１および２Ｆ９)；Ｒａｏ－Ｎａｉｋ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,０９７,７０３Ｂ２(２０１２年；ＣＤ１９；特に、抗体５Ｇ７、１３Ｆ１、４６Ｅ８、２１Ｄ４、２１Ｄ４ａ、４７Ｇ４、２７Ｆ３および３Ｃ１０)；Ｋｉｎｇ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,４８１,６８３Ｂ２(２０１３年；ＣＤ２２；特に、抗体１２Ｃ５、１９Ａ３、１６Ｆ７および２３Ｃ６)；Ｋｅｌｅｒ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ７,３８７,７７６Ｂ２(２００８年；ＣＤ３０；特に、抗体５Ｆ１１、２Ｈ９および１７Ｇ１)；Ｔｅｒｒｅｔｔ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,１２４,７３８Ｂ２(２０１２年；ＣＤ７０；特に、抗体２Ｈ５、１０Ｂ４、８Ｂ５、１８Ｅ７および６９Ａ７)；Ｋｏｒｍａｎ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ６,９８４,７２０ Ｂ１(２００６年；ＣＴＬＡ－４；特に、抗体１０Ｄ１、４Ｂ６および１Ｅ２)；Ｖｉｓｔｉｃａ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,３８３,１１８ Ｂ２(２０１３年；フコシル－ＧＭ１、特に、抗体５Ｂ１、５Ｂ１ａ、７Ｄ４、７Ｅ４、１３Ｂ８および１８Ｄ５)；Ｋｏｒｍａｎ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,００８,４４９ Ｂ２(２０１１年；ＰＤ－１；特に、抗体１７Ｄ８、２Ｄ３、４Ｈ１、５Ｃ４、４Ａ１１、７Ｄ３および５Ｆ４)；Ｈｕａｎｇ ｅｔ ａｌ., ＵＳ２００９／０２９７４３８ Ａ１(２００９年；ＰＳＭＡ．特に、抗体１Ｃ３、２Ａ１０、２Ｆ５、２Ｃ６)；Ｃａｒｄａｒｅｌｌｉ ｅｔ ａｌ., ＵＳ７,８７５,２７８ Ｂ２(２０１１年；ＰＳＭＡ；特に、抗体４Ａ３、７Ｆ１２、８Ｃ１２、８Ａ１１、１６Ｆ９、２Ａ１０、２Ｃ６、２Ｆ５および１Ｃ３)；Ｔｅｒｒｅｔｔ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,２２２,３７５ Ｂ２(２０１２年；ＰＴＫ７；特に、抗体３Ｇ８、４Ｄ５、１２Ｃ６、１２Ｃ６ａおよび７Ｃ８)；Ｔｅｒｒｅｔｔ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,６８０,２４７ Ｂ２(２０１４年；グリピカン－３；特に、抗体４Ａ６、１１Ｅ７および１６Ｄ１０)；Ｈａｒｋｉｎｓ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ７,３３５,７４８ Ｂ２(２００８年；ＲＧ１；特に、抗体Ａ、Ｂ、ＣおよびＤ)；Ｔｅｒｒｅｔｔ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,２６８,９７０ Ｂ２(２０１２年；メソテリン；特に、抗体３Ｃ１０、６Ａ４および７Ｂ１)；Ｘｕ, ｅｔ ａｌ, ＵＳ２０１０／００９２４８４ Ａ１(２０１０年；ＣＤ４４；特に、抗体１４Ｇ９.Ｂ８.Ｂ４、２Ｄ１.Ａ３.Ｄ１２および１Ａ９.Ａ６.Ｂ９)；Ｄｅｓｈｐａｎｄｅ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,２５８,２６６ Ｂ２(２０１２年；ＩＰ１０；特に、抗体１Ｄ４、１Ｅ１、２Ｇ１、３Ｃ４、６Ａ５、６Ａ８、７Ｃ１０、８Ｆ６、１０Ａ１２、１０Ａ１２Ｓおよび１３Ｃ４)；Ｋｕｈｎｅ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ８,４５０,４６４ Ｂ２(２０１３年；ＣＸＣＲ４；特に、抗体Ｆ７、Ｆ９、Ｄ１およびＥ２)；およびＫｏｒｍａｎ, ｅｔ ａｌ., ＵＳ７,９４３,７４３ Ｂ２(２０１１年；ＰＤ－Ｌ１；特に、抗体３Ｇ１０、１２Ａ４、１０Ａ５、５Ｆ８、１０Ｈ１０、１Ｂ１２、７Ｈ１、１１Ｅ６、１２Ｂ７および１３Ｇ４)；これらの開示内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
式(ＩＶ)のコンジュゲートに関して、
Figure 2022512481000012
(ａ) Ｄは、好ましくは、一実施態様において、細胞毒性薬剤であり；
(ｂ) 別の好ましい実施態様では、Ｄは、ＴＬＲ７、ＳＴＩＮＧ、ＮＲＬＰ３またはＲＩＧ－１アゴニストであり；
(ｃ) 好ましい実施態様では、Ｌは－(ＣＨ２)２－６－であり；
(ｄ) 別の好ましい実施態様では、Ｌは、
Figure 2022512481000013
(式中、
Ｔは、自己開裂性基であり；
ｔは、０または１であり；
ＡＡａおよび各ＡＡｂは、独立して、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から独立して選択され；
ｐは、１、２、３または４であり；
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；および
ｒは、０、１、２、３、４または５である)
である。
一般的に、トランスグルタミナーゼを介した抗体コンジュゲートの製造は、図２のスキームに示されているように、一段階方法または二段階方法により行うことができる。一段階方法では、トランスグルタミナーゼが、アミンアクセプターとして作用する伸長部分上のグルタミンカルボキサミドと、アミンドナー化合物であるＨ２Ｎ－Ｌ－Ｄ(式中、Ｌはリンカー成分であり、パートナー分子Ｄは、タンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤または治療剤である)を結合させて、コンジュゲートを直接形成させる。二段階方法では、トランスグルタミナーゼの触媒作用により、アミンアクセプターとして作用する伸長部分上のグルタミンカルボキサミドと、アミンドナー化合物である第一化合物(Ｈ２Ｎ－Ｌ'－Ｒ')(式中、Ｌ'は第一のリンカー成分であり、Ｒ'は第一の反応性官能基である)との間で最初のアミド基転移付加体が形成される。その後、該付加体を、第二化合物(Ｒ''－Ｌ''－Ｄ)(式中、Ｒ''は、Ｒ'と反応可能な第二の反応性官能基であり、Ｌ''は、第二のリンカー成分であり、Ｄは上記に定義したとおりである)と反応させる。化学工程および酵素工程の両方を伴うことから、一段階方法を酵素工程と呼び、二段階方法を化学－酵素工程と呼ぶこともある。Ｌ、Ｌ'およびＬ''の各々は、アルキル鎖－(ＣＨ２)ｍ－(式中、ｍは２～１０の整数である)であるか、または特にＬおよびＬ''の場合には、後述するようなより複雑な構造であり得る。
アミンドナーは、Ｈ２Ｎ－Ｌ－ＤまたはＨ２Ｎ－Ｌ'－Ｒ'のいずれであっても、グルタミンカルボキサミドと抗体リジンのε－アミノ基との間の望ましくないアミド基転移を抑制するために、大過剰量で使用されることが多い。Ｄが高価であったり、入手困難であったりする場合には、大過剰量で使用することは現実的ではない。そのような場合には、追加工程が必要であるとしても、二段階方法が好ましい場合がある。
好ましい実施態様において、一段階方法におけるアミンドナー化合物は、式(Ｉ):
Figure 2022512481000014
 (式中、Ｄは、タンパク質、放射性同位体、アッセイ剤または治療剤である)
により表される。
別の好ましい実施態様において、一段階方法のためのアミンドナー化合物は、式(Ｉａ)：
Figure 2022512481000015
 (式中、
Ｄは、タンパク質、放射性同位体、アッセイ剤または治療剤であり；
Ｔは、自己開裂性基であり；
ｔは、０または１であり；
ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から独立して選択され；
ｐは、１、２、３または４であり；
ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；および
ｒは、０、１、２、３、４または５である)
により表される構造を有する。
式(Ｉａ)、(Ｉａ')および(ＩＩＩ)(下記)において、－ＡＡａ－[ＡＡｂ]ｐ－は、ｐの値によって長さが決まるポリペプチド(例えば、ｐが１である場合はジペプチドであり、ｐが３である場合はテトラペプチドである)を表す。ＡＡａは、ポリペプチドのカルボキシ末端にあり、そのカルボキシル基はＤ(または、Ｔが存在する場合はＴ)のアミン窒素とペプチド(アミド)結合を形成している。逆に、最後のＡＡｂは、ポリペプチドのアミノ末端にあり、そのα－アミノ基は、
Figure 2022512481000016
 とペプチド結合を形成する。
好ましいポリペプチド－ＡＡａ－[ＡＡｂ]ｐ－は、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｌｙｓ、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ａｓｐ－Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｖａｌ－Ａｌａ、Ｌｙｓ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ａｌａ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－Ｇｌｙ、Ｖａｌ－ＧｌｎおよびＡｓｐ－Ｖａｌ－Ｃｉｔであり、Ｈ２Ｎ－Ｖａｌ－Ｃｉｔ－ＣＯ２Ｈのように従来のＮからＣ方向に記載されている)。より好ましくは、ポリペプチドは、Ｖａｌ－Ｃｉｔ、Ｖａｌ－ＬｙｓまたはＶａｌ－Ａｌａである。好ましくは、ポリペプチド－ＡＡａ[ＡＡｂ]ｐ－は、標的細胞の内部に存在する酵素、例えば、カテプシン(特に、カテプシンＢ)によるか、または標的臓器もしくは組織の周辺に存在する酵素により切断できる。
下付き文字のｓが１である場合、化合物(Ｉａ)は、ポリ(エチレングリコール)(ＰＥＧ)基を含んでおり、この基は、化合物(Ｉａ)の溶解性を有利に向上させて、水性媒体中で行われる工程である抗体とのコンジュゲーションを促進させ得る。また、ＰＥＧ基は、抗体の立体形態がペプチド切断酵素の作用を立体的に妨害しないように、抗体とペプチド－ＡＡａ－[ＡＡｂ]ｐ－間のスペーサーとして機能し得る。
下付き文字ｔが、ｔ＝０または１として示される場合、自己開裂性基Ｔは、所望により存在していてもよい。自己開裂性基とは、場合に応じて、ＡＡａまたはＡＡｂの開裂により、自己開裂性基がＤから離脱し、Ｄが治療的機能を発揮できるようになる反応経路を開始する基である。自己開裂性基Ｔは、好ましくはｐ－アミノベンジルオキシカルボニル(ＰＡＢＣ)基であり、その構造を、以下に示す。式中のアスタリスク(＊)は、Ｄのアミン窒素に結合したＰＡＢＣの末端を示し、波線(
Figure 2022512481000017
 )は、ポリペプチド－ＡＡａ－[ＡＡｂ]ｐ－への結合末端を示している。ＰＡＢＣ基は、２０１９年５月２９日に出願された米国仮出願番号第１６／４２５,５９６号に開示されるように置換され得る：
Figure 2022512481000018
 。
別の自己開裂性基としては、Ｆｅｎｇ, ＵＳ７,３７５,０７８ Ｂ２(２００８)に開示されている置換されたチアゾールを使用できる。
二段階のコンジュゲーションでは、基Ｒ'およびＲ''の多くの組み合わせを使用することができる。Ｒ'およびＲ''(または、その逆、Ｒ''およびＲ')の好適な組み合わせには、以下のものが挙げられる：
(ａ) マレイミド基およびスルフヒドリル基(下記のようにマイケル付加体を形成する)：
Figure 2022512481000019
(ｂ) ジベンゾシクロオクチン基およびアジド基(下記のように「クリック」ケミストリーによる環化付加体を形成する)：
Figure 2022512481000020
(ｃ) Ｎ－ヒドロキシスクシンイミドエステルおよびアミン(下記のようにアミドを形成する)：
Figure 2022512481000021
 (ｄ) アルデヒドまたはケトン(ここで、「アルキル」は、好ましくはＣ１－３アルキルである)およびヒドロキシルアミン(以下のようにオキシムを形成する)：
Figure 2022512481000022
 。
従って、Ｒ'は、
Figure 2022512481000023
 から選択することができるが一方で、Ｒ''は、
Figure 2022512481000024
 から選択することができる。
二段階方法のための適切なアミンドナーである第一化合物は、式(ＩＩ)：
Figure 2022512481000025
 (式中、Ｒ'は、上記に定義した通りであり、好ましくは、
Figure 2022512481000026
 である)
に示される。
対応する適切な化合物Ｒ''－Ｌ''－Ｄは、式(ＩＩＩ)：
Figure 2022512481000027
 (式中、Ｒ''は、上記に定義した通りであり、好ましくは、
Figure 2022512481000028
 であり、ｒ、ｑ、ＡＡｂ、ｐ、ＡＡａ、Ｔ、ｔおよびＤは、式(Ｉａ)に関して上記の定義した通りである)
により示される。
癌治療にコンジュゲートを使用することを目的としている例では、治療剤は、標的となる癌細胞の死を引き起こす細胞毒性薬剤であり得る。コンジュゲートに使用することができる細胞毒性薬剤には、以下の化合物のタイプならびにそのアナログおよび誘導体が挙げられる：
(ａ) エンジイン類、例えば、カリケアマイシン(例えば、Lee et al., J. Am. Chem. Soc. 1987, 109, 3464 and 3466を参照のこと)およびウンシアラマイシン(例えば、Davies et al., WO 2007/038868 A2 (2007)；Chowdari et al., US 8,709,431 B2 (2012)；およびNicolaou et al., WO 2015/023879 A1 (2015)を参照のこと)；
(ｂ) ツブリシン類(例えば、Domling et al., US 7,778,814 B2 (2010)；Cheng et al., US 8,394,922 B2 (2013)；およびCong et al., US 8,980,824 B2 (2015)を参照されたい)；
(ｃ) ＤＮＡアルキル化剤、例えば、ＣＣ－１０６５およびデュオカルマイシンのアナログ(例えば、Yang et al., US 2018/0051031 A1 (2018)；Boger, US 6,5458,530 B1 (2003)；Sufi et al., US 8,461,117 B2 (2013)；およびZhang et al., US 8,852,599 B2 (2014)を参照のこと)；
(ｄ) エポチロン類(例えば、Vite et al., US 2007/0275904 A1 (2007)およびUS RE42930 E (2011)を参照のこと)；
(ｅ) オーリスタチン類(例えば、Senter et al., US 6,844,869 B2 (2005)およびDoronina et al., US 7,498,298 B2 (2009)を参照のこと)；
(ｆ) ベンゾジアゼピン二量体(例えば、Zhang et al., US 9,527,871 B2 (2016)；Zhang et al., US 9,688,694 B2 (2017)；McDonald et al., US 9,526,801 B2 (2016)；Howard et al., US 2013/0059800 A1(2013)；US 2013/0028919 A1 (2013)；およびWO 2013/041606 A1 (2013)を参照のこと)；および
(ｇ) メイタンシノイド類、例えば、ＤＭ１およびＤＭ４(例えば、Chari et al., US 5,208,020 (1993)およびAmphlett et al., US 7,374,762 B2 (2008)を参照のこと)。
好ましくは、薬剤は、ＤＮＡアルキル化剤、ツブリシン、オーリスタチン、ピロロベンゾジアゼピン、エンジインまたはメイタンシノイド化合物である。具体的な例として、
Figure 2022512481000029
Figure 2022512481000030
 を例示するが、これに限定するものではない。
免疫系には、病原体関連分子パターン(ＰＡＭＰ)を天然のリガンドとする受容体がある。ＰＡＭＰがその受容体に結合すると、免疫系が活性化され、関連病原体による感染を防止する。さらに、これらの受容体は、合成アゴニストによっても活性化され、実際の病原体感染以外の様々な症状を治療する際にワクチンまたは免疫療法剤の作用に対してアジュバント効果を示す。特に、イピリムマブ、ニボルマブおよびペムブロリズマブなどの免疫腫瘍剤は、このアジュバント効果の恩恵を受けることができる。合成アゴニストによって活性化され得る受容体としては、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９(各々Ｔｏｌｌ様受容体－３、－７、－９)、ＳＴＩＮＧ(インターフェロン遺伝子の刺激因子；ＭＰＹＳ、ＴＭＥＭ１７３、ＭＩＴＡまたはＥＲＩＳとしても知られる)、ＮＬＲＰ３(ＮＯＤ様受容体タンパク質３)およびＲＩＧ－Ｉ(レチノイン酸誘導性遺伝子Ｉ)が挙げられる。従って、別の実施態様では、治療剤は、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰ３またはＲＩＧ－Ｉのアゴニストである。特に、治療剤は、Ｐｏｕｄｅｌ ｅｔ ａｌ., ＵＳ ２０１９/００５５２４３ Ａ１(２０１９)；Ｙｏｕｎｇ ｅｔ ａｌ., ＵＳ ２０１９/００５５２４４ Ａ１(２０１９)；Ｐｏｕｄｅｌ ｅｔ ａｌ., ＵＳ ２０１９/００５５２４５ Ａ１(２０１９)；Ｈｅ ｅｔ ａｌ., ＵＳ ２０１９/００５５２４６ Ａ１(２０１９)；Ｈｅ ｅｔ ａｌ., ＵＳ ２０１９/００５５２４７ Ａ１(２０１９)；およびＰｕｒａｎｄａｒｅ ｅｔ ａｌ., ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ/ＵＳ２０１９/０２８６９７(２０１９年４月２３日提出)に開示されているようなＴＬＲ７アゴニストであり得る。
本発明の実施は、例示のために提供される以下の実施例を参照することにより、さらに理解することができるが、これらに限定するものではない。
実施例１－改変抗体のコンジュゲーション
本明細書に開示された改変抗体を、抗がん剤としてのツブリシンアナログならびにアミンドナーとして機能し得るアルキルアミノ基でターミネートされたジペプチドリンカーを有する化合物Ａ(Ｙｏｕｎｇ ｅｔ.ａｌ.，２０１９年６月１１日出願の米国出願番号第１６／４３７０４７号)に結合させた。
Figure 2022512481000031
組換えバクテリアのトランスグルタミナーゼを用いたアミンドナーとしての化合物Ａと本明細書に記載の改変抗体とのコンジュゲーションを、以下に記載のプロトコルに従って行った。
トランスグルタミナーゼを用いて、本明細書に記載されたように改変された抗体とアミンドナーとのコンジュゲーションを、以下に示すプロトコルに従って行った。Ｖ６５ＩおよびＹ７５Ｆの点変異を有するディスパーゼ活性化ＢＴＧａｓｅを使用した。それを使用する前に調製物(２０ｍＭ酢酸緩衝液、１０％グリセロール；ｐＨ４)を５０ｍＭ酢酸ナトリウム(ｐＨ５.５)中で透析した。
５０ｍＭ Ｔｒｉｓ-ＨＣｌ(ｐＨ８.０)または２０ｍＭ ヒスチジン、５０ｍＭ イミジゾールおよび１０％スクロース(ｐＨ～７.８)中の抗体(～２ｍｇ／ｍＬ)を、抗体あたり０.２モル過剰のトランスグルタミナーゼの存在下で、部位あたり１０倍モル過剰のアミンドナーと反応させた。反応を、穏やかに攪拌しながら３７℃で終夜行った。
抗体薬剤コンジュゲートを、０.２μｍでろ過を行い、ｍＡｂ Ｓｅｌｅｃｔ ＳｕＲｅ(登録商標)カラム(GE Healthcare)を用いて精製した。このコンジュゲートを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ(ｐＨ８.０)で予め平衡化済のカラムにロードし、１０ＣＶ(カラム容量)の平衡化緩衝液で洗い、その後１０ＣＶの５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ、１７％アセトニトリル(ｐＨ８.０)で洗い、未反応のアミンドナーを除去した。カラムを、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ(ｐＨ８.０)を用いて再度平衡化した後、０.１Ｍ クエン酸塩(ｐＨ３.５)を用いて、１ｍＬの画分で溶出させて、溶出量の１／１０の１Ｍ Ｔｒｉｓ(ｐＨ８.０)を用いて中和した。目的の分画物を、調製用緩衝液(２０ｍＭ ヒスチジン、１０％シュクロース(ｐＨ６.０))中で透析して、純度および薬剤／抗体比について、ＬＣ－ＭＳ(ＥＳＩ－ＱＴＯＦ)、ＲＰ－ＨＰＬＣおよびＳＤＳ－ＰＡＧＥにより分析した。
実施例２－コンジュゲートされた改変抗体の特徴分析
Ｔｅｒｒｅｔｔらの抗メソテリン抗体６Ａ４(US 8,268,970 B2(2012))を、トランスグルタミナーゼによる化合物Ａへの結合を可能にするために、本明細書に開示された置換配列の性能を評価するためのモデル抗体として使用した。酵素を介したコンジュゲーションを防止するために、この抗体はＫ２２２Ｒ部位特異的変異を含む。
５０ｍＭ イミダゾール、１０％スクロース(ｐＨ８)中の抗体(５ｍｇ/ｍＬ)を、抗体あたり０.２モル過剰の組換えバクテリアトランスグルタミナーゼの存在下で、部位あたり１０倍モル過剰のアミンドナーと反応させた。穏やかに攪拌しながら３７℃で終夜インキュベーションを行った後に、反応混合物を、ＤＡＲ評価のためにＬＣ－ＭＳ(ＥＳＩ－ＱＴＯＦ)により分析した。
トランスグルタミナーゼによってコンジュゲートされたことが上記方法により確認された抗体を表Ｆに示す。薬剤－抗体比またはＤＡＲは、各抗体に結合した薬剤成分(ツブリシンアナログ)の数である。非グリコシル化抗体は、Ｑ２９５ＡおよびＮ２９７Ａの変異を有しており、そのため野生型のＮ２９７Ａグリコシル化部位が除去されている。
Figure 2022512481000032
Figure 2022512481000033
置換配列を持つ選択した抗体について、Ｑ２９５ＡおよびＮ２９７Ａの変異を起こさず、野生型のＮ２９７Ａのグリコシル化部位をそのまま残し、グリコシル化が存在することについてのＤＡＲへの影響も調べた。その結果を表Ｇに示した。
Figure 2022512481000034
実施例３－改変抗体コンジュゲートのがん細胞への結合
置換配列ＣＨ３－４.１４、ＣＨ１－４.６またはＣＨ３－２.１１により改変した抗メソテリン抗体６Ａ４を、化合物Ａと結合させた。アイソタイプコントロールとして、抗ＣＤ７０抗体と化合物Ａとのコンジュゲートを作成した。抗ＣＤ７０抗体は、グリコシル化を避けるためにＮ２９７Ａの部位特異的置換を有しており、近傍のＱ２９５をアミド基転移部位として利用することができる。
細胞株および培養条件：ヒト上皮癌細胞株Ｈ２２６、Ｎ８７およびＯＶＣＡＲ３ならびにハムスター卵巣細胞株ＣＨＯ－Ｋ１を、アメリカンタイプ・カルチャー・コレクション(ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ)から入手した。細胞は、１０％のＦＢＳ(Gibco, USA)を添加したＲＰＭＩまたはＤＭＥＭ(Ｇｉｂｃｏ，ＵＳＡ)において、標準的な条件下(３７℃、５％ＣＯ２を含む加湿雰囲気)で培養した。アッセイ時に細胞は、８０％のコンフルエンシーであった。濃度および生存率は、トリパンブルー排除アッセイを用いて、血球計数板で測定した。
表面結合抗体分析：試験サンプルの独立した連続希釈液(最終容量５０μＬ)を、１％ＦＢＳを含む培養培地を用いて９６ウェルプレートにおいて二連で調製した。ＣｅｌｌＳｔｒｉｐｐｅｒ剥離試薬(Ｃｏｒｎｉｎｇ)を用いて細胞を剥離した。ＰＢＳで洗浄した後、細胞を試験サンプルの連続希釈液と共に２５℃で１時間インキュベートし、その後、アッセイ緩衝液を用いて遠心分離器により１回洗浄した。細胞を、アッセイ緩衝液を用いて、１：５０に希釈した検出試薬(ＰＥ結合ヤギＦ(ａｂ’)２抗ヒトＩｇＧ(Jackson Immuno Research))に再懸濁した。プレートを２５℃で３０分間インキュベートした後、アッセイ緩衝液で遠心分離器にかけながら１回洗浄した。細胞を、８０μｌのアッセイ緩衝液に再懸濁して、ＣｙｔｏＦＬＥＸにより分析した。
図１１Ａ、１１Ｂおよび１１Ｃは、各々Ｈ２２６、ＯＶＣＡＲ３およびＮ８７細胞に対する３つのコンジュゲート(ＡＤＣ)の結合を、非コンジュゲート抗体６Ａ４の結合と比較したものである。これら３つの細胞株は、細胞表面にメソテリンを発現しているが、ＣＤ７０は発現していない。図から理解され得るが、３つのコンジュゲートの結合は、非コンジュゲート抗体６Ａ４の結合と実質的に区別がつかない。これらの結果は、置換配列による抗体の改変が抗原への結合に影響を与えないことを示している。予想した通り、抗Ｃｄ７０抗体を用いたアイソタイプコントロールは、これらの細胞に結合しなかった。
実施例４－改変抗体コンジュゲートの細胞毒性
Ｎ８７細胞、ＯＶＣＡＲ３細胞、Ｈ２２６細胞に対する前記実施例の３つのコンジュゲートのイン・ビトロの細胞毒性を測定した。全てのものが、１ｎＭ未満のＩＣ５０を示し、高い効力を示した。その結果を表Ｈに示す。
Figure 2022512481000035
イン・ビトロ細胞毒性アッセイの手順は以下の通りであった：ＡＤＣは、Ｎ８７、Ｈ２２６、ＯＶＣＡＲ３およびＣＨＯ Ｋ１細胞(後者は、ネガティブコントロールとして)に対するイン・ビトロでの効力を評価した。細胞を、１０％ＦＢＳを含む１００μＬのＲＰＭＩ－１６４０培地で、９６ウェルの平底プレートに１０４細胞/ウェル(Ｎ８７、ＯＶＣＡＲ３およびＨ２２６)および１０００細胞/ウェル(ＣＨＯ Ｋ１)で播種した。３７℃で４時間、細胞を接着させた。各ＡＤＣの３倍濃度のストック溶液を、１：３系列で連続希釈し、細胞に添加した後、薬剤処理後に５０μｌの追加の増殖培地を添加した。処理した細胞を、３７℃で７日間培養し、プロメガ社のＣｅｌｌ Ｔｉｔｅｒ-Ｇｌｏ(ＣＴＧ) 発光細胞生存性アッセイを用いて細胞の生存率を評価した。調製したＣＴＧ試薬１００μＬを各ウェルに加えて、１０分間穏やかに振盪を行った。Ｃｙｔａｔｉｏｎ ５(Biotek Instruments)を用いて、発光を測定した。細胞生存率は、以下の式で算出した：処理したサンプルの平均発光量／未処理のコントロールサンプルの平均発光量)×１００。ＥＣ５０値は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ｖ７.０２ソフトウェア(La Jolla, CA, USA)を用いたロジスティック非線形回帰分析により決定した。ＡＤＣは、メソテリンを発現していないＣＨＯ Ｋ１細胞の増殖に対する抑制効果はなかった。
実施例５－改変抗体コンジュゲートの安定性
化合物Ａの抗がん剤として作用するツブリシンアナログは、アセテート基を有している(上記構造式中の点線の枠を参照されたい)。加水分解(脱アセチル化)によってその基が失われると、ツブリシンアナログはその細胞毒性を失う。
本明細書で開示した置換配列を有する抗メソテリン抗体６Ａ４を用いて作成したコンジュゲートの安定性を、置換配列を有さない同じ抗体の安定性と比較した。２つのパラメータを測定した：(ａ)脱アセチル化率、および(ｂ)示差走査熱量計(ＤＳＣ)で測定した抗体の熱誘導性解離に対する耐性。その結果を表Ｉに示す。
Figure 2022512481000036
ＳＣＩＤマウス血清中のＡＤＣにおけるツブリシンアナログの脱アセチル化を、以下の通りに測定した：ＡＤＣを、５００μＬのＳＣＩＤマウス血清において、５０μｇ／ｍｌの目的濃度に希釈して、３７℃でインキュベートした。インキュベートしたサンプルプレートから８０μｌの血清サンプルを採取して、０日目、１日目、２日目、５日目に直ちに凍結した。全てのＡＤＣを、「単一親和性」または「二重親和性」捕捉法を用いて血清から抽出して、ＬＣ－ＨＲＭＳにより分析した。簡単に言うと、ＡＤＣは、常用の抗ヒトＦ(ａｂ)２試薬を用いて血清から捕捉した。ＬＣ－コンジュゲートＡＤＣ(ＬＣ Ｃ－ｔｅｒｍ)の場合、ＡＤＣを、ビーズから溶出した後、鎖間ジスルフィド結合の還元によりＬＣとＨＣを分離した。ＨＣ－ＦａｂコンジュゲートＡＤＣ(Ｓ１９０)の場合、固定されたＡＤＣを、ＩｄｅＳ酵素で「ビーズ上」で消化した後、Ｆ(ａｂ’)２を溶出させ、鎖間ジスルフィドを還元して、ＬＣとＦｄを分離した。ＨＣ－ＦｃコンジュゲートＡＤＣ(Ｑ２９５、Ｑ４１８、Ｇ３８５、ＨＣＣ－ｔｅｒｍ)の場合、捕捉したＡＤＣを、ＩｄｅＳ(非グリコシル化ＡＤＣ)またはＩｄｅＳ＋ＰＮＧａｓｅ Ｆ(Ｎ－グリカンＡＤＣ)で消化し、脱グリコシル化Ｆｃフラグメントを放出させた。ビーズを捨てて、消化混合物中に存在するＦｃを、抗ヒトＦｃ捕捉用試薬でコーティングされた第二のビーズを加えてさらに捕捉した。
前述の発明の詳細な説明には、本発明の特定の部分または態様と、大部分または排他的に関係する箇所が含まれている。これは、明確化および利便性のためであり、特定の特徴は、それが開示されている箇所以外にも関連している可能性があり、本明細書の開示は、異なる箇所に見られる情報のすべての適切な組み合わせを含むことを理解されたい。同様に、本明細書の様々な図や説明は、本発明の特定の実施態様に関するものであるが、特定の特徴が特定の図または実施態様の文脈で開示されている場合、かかる特徴は、適切な範囲で、別の図または実施態様の文脈で別の特徴と組み合わせて、または本発明全般に使用できることも理解されたい。
さらに、本発明を特定の好ましい実施態様により具体的に説明してきたが、本発明はそのような好ましい実施態様に限定されるものではない。むしろ、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲によって定義される。
(引用文献)
本明細書において筆頭著者(または発明者)および日時により略式にて引用された以下の文献についての全ての引用文献を、以下に記載する。これらの各文献は、あらゆる目的のために本明細書に組み込まれる。
Figure 2022512481000037

Figure 2022512481000038

Claims (24)

  1. 下記：
    (ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ｉｉ) 重鎖のＥＵ１６０～１６４のアミノ酸の、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１６または配列番号：１７のアミノ酸による置換；
    (ｉｉｉ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８、配列番号：１９または配列番号：２０のアミノ酸による置換；
    (ｉｖ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２、配列番号：２３または配列番号：２４のアミノ酸による置換；
    (ｖ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (ｖｉ) 重鎖のＥＵ２８０～２８４のアミノ酸の、配列番号：２９、配列番号：３０または配列番号：３１のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉｉ) 重鎖のＥＵ３１４～３１９のアミノ酸の、配列番号：４８、配列番号：４９または配列番号：５０のアミノ酸による置換；
    (ｉｘ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ｘ) 重鎖のＥＵ３５８～３６２のアミノ酸の、配列番号：５４または配列番号：５５のアミノ酸による置換；
    (ｘｉ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３または配列番号：６４のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８または配列番号：６９のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉｉ) 軽鎖のＥＵ１２２～１２６のアミノ酸の、配列番号：７０、配列番号：７１または配列番号：７２のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｖ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３、配列番号：７４または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (ｘｖ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８１または配列番号：８２のアミノ酸による置換；
    (ｘｖｉ) 軽鎖のＥＵ１８２～１９０のアミノ酸の、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６または配列番号：８７のアミノ酸による置換；および
    (ｘｖｉｉ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：８９、配列番号：９０、配列番号：９１、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５または配列番号：９６のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される改変を有する、ＩｇＧ全長抗体。
  2. ＩｇＧ１抗体である、請求項１記載の抗体。
  3. 改変が重鎖である、請求項２記載の抗体。
  4. 改変が、以下：
    (Ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ＩＩ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８のアミノ酸による置換；
    (ＩＩＩ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２のアミノ酸による置換；
    (ＩＶ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (Ｖ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：６３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩＩ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６６または配列番号：６８のアミノ酸による置換；
    (ＩＸ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (Ｘ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７８または配列番号：８２のアミノ酸による置換；および
    (ＸＩ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：９２、配列番号：９３または配列番号：９４のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される、請求項２に記載の抗体。
  5. 改変が、カッパ軽鎖に存在する、請求項２に記載の抗体。
  6. 置換配列が、トリペプチド-ＶＬＱ-を含む、請求項２に記載の抗体。
  7. 式(ＩＶ)：
    Figure 2022512481000039
     [式中、
    Ａｂは、下記：
    (ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ｉｉ) 重鎖のＥＵ１６０～１６４のアミノ酸の、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１６または配列番号：１７のアミノ酸による置換；
    (ｉｉｉ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８、配列番号：１９または配列番号：２０のアミノ酸による置換；
    (ｉｖ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２、配列番号：２３または配列番号：２４のアミノ酸による置換；
    (ｖ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (ｖｉ) 重鎖のＥＵ２８０～２８４のアミノ酸の、配列番号：２９、配列番号：３０または配列番号：３１のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉｉ) 重鎖のＥＵ３１４～３１９のアミノ酸の、配列番号：４８、配列番号：４９または配列番号：５０のアミノ酸による置換；
    (ｉｘ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ｘ) 重鎖のＥＵ３５８～３６２のアミノ酸の、配列番号：５４または配列番号：５５のアミノ酸による置換；
    (ｘｉ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３または配列番号：６４のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８または配列番号：６９のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉｉ) 軽鎖のＥＵ１２２～１２６のアミノ酸の、配列番号：７０、配列番号：７１または配列番号：７２のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｖ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３、配列番号：７４または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (ｘｖ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８１または配列番号：８２のアミノ酸による置換；
    (ｘｖｉ) 軽鎖のＥＵ１８２～１９０のアミノ酸の、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６または配列番号：８７のアミノ酸による置換；および
    (ｘｖｉｉ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：８９、配列番号：９０、配列番号：９１、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５または配列番号：９６のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される置換配列を有する全長抗体であり；
    Ｌは、置換配列のグルタミンに、アミド結合：
    Figure 2022512481000040
     を介してＡｂに結合したリンカー成分であり；および
    Ｄは、タンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤および治療剤からなる群から選択される]
    のコンジュゲート。
  8. Ｄが、治療剤である、請求項７に記載のコンジュゲート。
  9. Ｄが、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰ３またはＲＩＧ－Ｉアゴニストである、請求項７に記載のコンジュゲート。
  10. Ｌが、式(Ｉａ')：
    Figure 2022512481000041
     (式中、
    Ｔは、自己開裂性基であり；
    ｔは、０または１であり；
    ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から独立して選択され；
    ｐは、１、２、３または４であり；
    ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；および
    ｒは、０、１、２、３、４または５である)
    である、請求項７に記載のコンジュゲート。
  11. 抗体が、以下：
    (Ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ＩＩ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８のアミノ酸による置換；
    (ＩＩＩ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２のアミノ酸による置換；
    (ＩＶ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (Ｖ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：６３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩＩ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６６または配列番号：６８のアミノ酸による置換；
    (ＩＸ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (Ｘ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７８または配列番号：８２のアミノ酸による置換；および
    (ＸＩ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：９２、配列番号：９３または配列番号：９４のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される改変を含む、請求項７に記載のコンジュゲート。
  12. 以下の工程：
    (ａ) 全長抗体を、トランスグルタミナーゼの存在下で、第一級アミンならびにタンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤および治療剤からなる群から選択される成分を含むアミンドナー化合物と混合する工程であって、該抗体が、
    (ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ｉｉ) 重鎖のＥＵ１６０～１６４のアミノ酸の、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１６または配列番号：１７のアミノ酸による置換；
    (ｉｉｉ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８、配列番号：１９または配列番号：２０のアミノ酸による置換；
    (ｉｖ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２、配列番号：２３または配列番号：２４のアミノ酸による置換；
    (ｖ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (ｖｉ) 重鎖のＥＵ２８０～２８４のアミノ酸の、配列番号：２９、配列番号：３０または配列番号：３１のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉｉ) 重鎖のＥＵ３１４～３１９のアミノ酸の、配列番号：４８、配列番号：４９または配列番号：５０のアミノ酸による置換；
    (ｉｘ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ｘ) 重鎖のＥＵ３５８～３６２のアミノ酸の、配列番号：５４または配列番号：５５のアミノ酸による置換；
    (ｘｉ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３または配列番号：６４のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８または配列番号：６９のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉｉ) 軽鎖のＥＵ１２２～１２６のアミノ酸の、配列番号：７０、配列番号：７１または配列番号：７２のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｖ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３、配列番号：７４または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (ｘｖ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８１または配列番号：８２のアミノ酸による置換；
    (ｘｖｉ) 軽鎖のＥＵ１８２～１９０のアミノ酸の、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６または配列番号：８７のアミノ酸による置換；および
    (ｘｖｉｉ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：８９、配列番号：９０、配列番号：９１、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５または配列番号：９６のアミノ酸による置換
    からなる群から選択される置換配列を有する工程；ならびに
    (ｂ)トランスグルタミナーゼが、置換配列のグルタミンの側鎖カルボキサミドとアミンドナー化合物の第一級アミンとの間のアミド結合の形成を触媒して、抗体コンジュゲートを作成する工程、
    を含む、抗体コンジュゲートの製造方法。
  13. アミンドナー化合物が、以下の構造：
    Ｈ２Ｎ－Ｌ－Ｄ
    (式中、Ｌはリンカー成分であり、Ｄは、タンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤または治療剤である)
    を有する、請求項１２に記載の方法。
  14. アミンドナー化合物が、以下の構造：
    Figure 2022512481000042
     を有する、請求項１３に記載の方法。
  15. アミンドナー化合物が、式(Ｉａ)：
    Figure 2022512481000043
     (式中、
    Ｄは、タンパク質、放射性同位体、アッセイ剤または治療剤であり；
    Ｔは、自己開裂性基であり；
    ｔは、０または１であり；
    ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から独立して選択され；
    ｐは、１、２、３または４であり；
    ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；および
    ｒは、０、１、２、３、４または５である)
    により示される構造を有する、請求項１２に記載の方法。
  16. 成分が、治療剤である、請求項１２に記載の方法。
  17. 治療剤が、ＴＬＲ３、ＴＬＲ７、ＴＬＲ９、ＳＴＩＮＧ、ＮＬＲＰ３またはＲＩＧ－Ｉアゴニストである、請求項１６に記載の方法。
  18. 抗体が、以下：
    (Ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ＩＩ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８のアミノ酸による置換；
    (ＩＩＩ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２のアミノ酸による置換；
    (ＩＶ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (Ｖ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：６３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩＩ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６６または配列番号：６８のアミノ酸による置換；
    (ＩＸ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (Ｘ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７８または配列番号：８２のアミノ酸による置換；および
    (ＸＩ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：９２、配列番号：９３または配列番号：９４のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される改変を有する、請求項１６に記載の方法。
  19. 下記工程：
    (ａ) 全長抗体を、トランスグルタミナーゼの存在下で、第一化合物(第一化合物とは、第一級アミンおよび第一の反応性官能基を有するアミンドナー化合物である)と混合する工程であって、該抗体が、
    (ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ｉｉ) 重鎖のＥＵ１６０～１６４のアミノ酸の、配列番号：１１、配列番号：１２、配列番号：１３、配列番号：１４、配列番号：１６または配列番号：１７のアミノ酸による置換；
    (ｉｉｉ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８、配列番号：１９または配列番号：２０のアミノ酸による置換；
    (ｉｖ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２、配列番号：２３または配列番号：２４のアミノ酸による置換；
    (ｖ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２５、配列番号：２６、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (ｖｉ) 重鎖のＥＵ２８０～２８４のアミノ酸の、配列番号：２９、配列番号：３０または配列番号：３１のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３３、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３６、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：４７、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ｖｉｉｉ) 重鎖のＥＵ３１４～３１９のアミノ酸の、配列番号：４８、配列番号：４９または配列番号：５０のアミノ酸による置換；
    (ｉｘ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ｘ) 重鎖のＥＵ３５８～３６２のアミノ酸の、配列番号：５４または配列番号：５５のアミノ酸による置換；
    (ｘｉ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５６、配列番号：５７、配列番号：５８、配列番号：５９、配列番号：６０、配列番号：６１、配列番号：６２、配列番号：６３または配列番号：６４のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６５、配列番号：６６、配列番号：６７、配列番号：６８または配列番号：６９のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｉｉ) 軽鎖のＥＵ１２２～１２６のアミノ酸の、配列番号：７０、配列番号：７１または配列番号：７２のアミノ酸による置換；
    (ｘｉｖ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３、配列番号：７４または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (ｘｖ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７６、配列番号：７７、配列番号：７８、配列番号：７９、配列番号：８１または配列番号：８２のアミノ酸による置換；
    (ｘｖｉ) 軽鎖のＥＵ１８２～１９０のアミノ酸の、配列番号：８３、配列番号：８４、配列番号：８５、配列番号：８６または配列番号：８７のアミノ酸による置換；および
    (ｘｖｉｉ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：８９、配列番号：９０、配列番号：９１、配列番号：９２、配列番号：９３、配列番号：９４、配列番号：９５または配列番号：９６のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される置換配列を有する工程；
    (ｂ) トランスグルタミナーゼが、置換配列のグルタミンの側鎖カルボキサミドと第一化合物の第一級アミンとの間にアミド結合の形成を触媒して、該抗体および第一化合物との付加体を形成する工程；
    (ｃ) 前記付加体を、第二の反応性官能基ならびにタンパク質、放射性同位元素、アッセイ剤および治療剤からなる群から選択される成分を有する第二化合物と接触させる工程；前記第二の反応性官能基は、第一の反応性官能基と反応して、それらの間に共有結合を形成することができる；ならびに
    (ｄ) 第一および第二の反応性官能基を反応させて、それらの間に共有結合を形成させることにより、抗体コンジュゲートを作成する工程、
    を含む、抗体コンジュゲートの製造方法。
  20. 第一化合物が、下記構造：
    Ｈ２Ｎ－Ｌ'－Ｒ'
    (式中、Ｌ'は第一のリンカー成分であり、Ｒ'は第一の反応性官能基である)であり、
    第二化合物が、下記構造：
    Ｒ''－Ｌ''－Ｄ
    (式中、Ｒ''は、Ｒ'と反応できる第二の反応性官能基であり、Ｌ''は、第二のリンカー成分であり、Ｄは、タンパク質、放射性同位体、アッセイ剤または治療剤である)
    である、請求項１９に記載の方法。
  21. Ｒ'は、
    Figure 2022512481000044
     から選択することができるが一方で、Ｒ''は、
    Figure 2022512481000045
     から選択することができる、請求項２０に記載の方法。
  22. 第一化合物は、式(ＩＩ)：
    Figure 2022512481000046
     に示される構造を有し、
    第二化合物は、式(ＩＩＩ)：
    Figure 2022512481000047
     (式中、
    Ｒ'は、第一の反応性官能基であり；
    Ｒ''は、Ｒ'と反応することができる第二の反応性官能基であり；
    Ｄは、タンパク質、放射性同位体、アッセイ剤または治療剤であり；
    Ｔは、自己開裂性基であり；
    ｔは、０または１であり；
    ＡＡａおよび各ＡＡｂは、アラニン、β－アラニン、γ－アミノ酪酸、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、γ－カルボキシグルタミン酸、シトルリン、システイン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよびバリンからなる群から独立して選択され；
    ｐは、１、２、３または４であり；
    ｑは、０、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０であり；および
    ｒは、０、１、２、３、４または５である)
    に示される構造を有する、請求項２０に記載の方法。
  23. Ｒ'は、
    Figure 2022512481000048
     から選択することができるが一方で、Ｒ''は、
    Figure 2022512481000049
     から選択することができる、請求項２２に記載の方法。
  24. 抗体が、以下：
    (Ｉ) 重鎖のＥＵ１３１～１３５のアミノ酸の、配列番号：９または配列番号：１０のアミノ酸による置換；
    (ＩＩ) 重鎖のＥＵ１７５～１７７のアミノ酸の、配列番号：１８のアミノ酸による置換；
    (ＩＩＩ) 重鎖のＥＵ１９０～１９６のアミノ酸の、配列番号：２２のアミノ酸による置換；
    (ＩＶ) 重鎖のＥＵ２６４～２６９のアミノ酸の、配列番号：２７または配列番号：２８のアミノ酸による置換；
    (Ｖ) 重鎖のＥＵ２９２～２９７のアミノ酸の、配列番号：３４、配列番号：３５、配列番号：３７、配列番号：３８、配列番号：３９、配列番号：４０、配列番号：４１、配列番号：４２、配列番号：４３、配列番号：４４、配列番号：４５、配列番号：１００、配列番号：１０１、配列番号：１０２または配列番号：１０３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩ) 重鎖のＥＵ３３０～３３１のアミノ酸の、配列番号：５１、配列番号：５２または配列番号：５３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩ) 重鎖のＥＵ３８４～４０２のアミノ酸の、配列番号：５７、配列番号：５８または配列番号：６３のアミノ酸による置換；
    (ＶＩＩＩ) 重鎖のＥＵ４１４～４１９のアミノ酸の、配列番号：６６または配列番号：６８のアミノ酸による置換；
    (ＩＸ) 軽鎖のＥＵ１５２～１５５のアミノ酸の、配列番号：７３または配列番号：７５のアミノ酸による置換；
    (Ｘ) 軽鎖のＥＵ１６７～１７０のアミノ酸の、配列番号：７８または配列番号：８２のアミノ酸による置換；および
    (ＸＩ) 軽鎖のＥＵ１９９～２０４のアミノ酸の、配列番号：９２、配列番号：９３または配列番号：９４のアミノ酸による置換、
    からなる群から選択される改変を含む、請求項１９記載の方法。
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018009916A1 (en) 2016-07-07 2018-01-11 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Antibody adjuvant conjugates
WO2020190725A1 (en) 2019-03-15 2020-09-24 Bolt Biotherapeutics, Inc. Immunoconjugates targeting her2
JP2024518709A (ja) 2021-04-10 2024-05-02 プロファウンドバイオ ユーエス カンパニー Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
AU2022262644A1 (en) 2021-04-23 2023-11-09 Profoundbio Us Co. Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same
CA3238167A1 (en) 2021-11-19 2023-05-25 Maria Leia Smith Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
EP4201956A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Kutzneria albida (kalbtg) transglutaminase used for antibody conjugations
EP4201430A1 (en) * 2021-12-23 2023-06-28 F. Hoffmann-La Roche AG Modified antibody for site-specific conjugation and its diagnostic use

Family Cites Families (59)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
EP0725145A4 (en) 1994-08-23 1997-06-11 Drug Delivery System Inst Ltd PROTEIN MODIFICATION PROCESS
EP1151299A4 (en) 1999-01-22 2003-06-04 Smithkline Beecham Corp PROCESS OF LOCATION-SPECIFIC MARKING OF PROTEINS AND APPLICATIONS
JP4118462B2 (ja) 1999-07-19 2008-07-16 株式会社リコー 携帯電子機器
EP1792991A1 (en) 1999-08-24 2007-06-06 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
CA2471702C (en) 2002-01-09 2013-03-19 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies against cd30
US7374762B2 (en) 2003-05-14 2008-05-20 Immunogen, Inc. Drug conjugate composition
WO2004106939A2 (en) 2003-06-03 2004-12-09 Paul Scherrer Institut Method for the linkage of bifunctional chelating agents and (radioactive) transition metal complexes to proteins and peptides
UY28424A1 (es) 2003-07-22 2005-02-28 Schering Ag Anticuerpos rgi y usos de los mismos.
NZ583292A (en) 2003-11-06 2012-03-30 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
KR20130133302A (ko) 2003-12-10 2013-12-06 메다렉스, 인코포레이티드 Ｉｐ―１０ 항체 및 그의 용도
AU2005216251B2 (en) 2004-02-23 2011-03-10 Genentech, Inc. Heterocyclic self-immolative linkers and conjugates
AU2005227326B2 (en) 2004-03-24 2009-12-03 Xencor, Inc. Immunoglobulin variants outside the Fc region
US7778814B2 (en) 2004-03-30 2010-08-17 Siemens Aktiengesellschaft Method and device for simulating an automation system
ES2386366T3 (es) 2005-02-18 2012-08-17 Medarex, Inc. Anticuerpo monoclonal humano contra el antígeno de membrana específico de la próstata (PSMA)
US7875278B2 (en) 2005-02-18 2011-01-25 Medarex, Inc. Monoclonal antibodies against prostate specific membrane antigen (PSMA) lacking in fucosyl residues
KR101339628B1 (ko) 2005-05-09 2013-12-09 메다렉스, 인코포레이티드 예정 사멸 인자 1(ｐｄ-1)에 대한 인간 모노클로날 항체, 및 항-ｐｄ-1 항체를 단독 사용하거나 기타 면역 요법제와 병용한 암 치료 방법
CA2611814A1 (en) 2005-06-20 2007-01-04 Medarex, Inc. Cd19 antibodies and their uses
KR101888321B1 (ko) 2005-07-01 2018-08-13 이. 알. 스퀴부 앤드 선즈, 엘.엘.씨. 예정 사멸 리간드 1 (피디-엘1)에 대한 인간 모노클로날 항체
JP2009509510A (ja) 2005-09-26 2009-03-12 メダレックス インコーポレーティッド Ｃｄ７０に対するヒトモノクローナル抗体
WO2007038868A2 (en) 2005-10-03 2007-04-12 The University Of British Columbia Novel enediyne compound and uses thereof
AU2006321553B2 (en) 2005-12-08 2012-03-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human monoclonal antibodies to O8E
KR101446510B1 (ko) 2005-12-08 2014-10-20 메다렉스, 엘.엘.시. 푸코실-지엠1에 대한 인간 모노클론 항체 및 항-푸코실-지엠1 사용법
KR101373464B1 (ko) 2005-12-08 2014-03-14 메다렉스, 엘.엘.시. 단백질 티로신 키나제 7(ｐｔｋ7)에 대한 인간 단일클론항체 및 그의 용도
PE20080102A1 (es) 2006-05-25 2008-02-11 Bristol Myers Squibb Co Conjugados de analogos de aziridinil-epotilona y composiciones farmaceuticas que comprenden los mismos
AR061181A1 (es) 2006-05-25 2008-08-13 Bristol Myers Squibb Co Compuestos de aziridinil-epotilona
ES2553553T3 (es) 2006-10-02 2015-12-10 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Anticuerpos humanos que se unen a CXCR4 y usos de los mismos
TWI447124B (zh) 2006-12-01 2014-08-01 Medarex Llc 結合ｃｄ２２的人類抗體與其應用
UY30776A1 (es) 2006-12-21 2008-07-03 Medarex Inc Anticuerpos cd44
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
SI2178921T1 (sl) 2007-07-17 2016-05-31 E.R. Squibb & Sons, L.L.C. Monoklonska protitelesa proti glipikan-3
WO2009045957A1 (en) 2007-10-01 2009-04-09 Medarex, Inc. Human antibodies that bind mesothelin, and uses thereof
WO2010002042A1 (ja) 2008-07-04 2010-01-07 国立大学法人 九州大学 タンパク質ラベル化用酵素基質
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
NZ602933A (en) 2010-04-15 2014-09-26 Seattle Genetics Inc Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
MX2012011900A (es) 2010-04-15 2013-03-21 Seattle Genetics Inc Conjugados de pirrolobenzodiazepina diana.
JP6105477B2 (ja) 2010-11-05 2017-03-29 ライナット ニューロサイエンス コーポレイション 操作されたポリペプチドコンジュゲートおよびトランスグルタミナーゼを用いてそれを作製する方法
US8852599B2 (en) 2011-05-26 2014-10-07 Bristol-Myers Squibb Company Immunoconjugates, compositions for making them, and methods of making and use
CN103987718A (zh) 2011-09-20 2014-08-13 斯皮罗根有限公司 作为非对称二聚体pbd化合物用于内含在靶向结合物中的吡咯并苯并二氮杂卓
US9764038B2 (en) 2011-12-23 2017-09-19 Innate Pharma Enzymatic conjugation of antibodies
SI2814829T1 (sl) 2012-02-13 2017-02-28 Bristol-Myers Squibb Company Spojine enediyna, njegovi konjugati in uporaba in postopki
WO2013181076A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 University Of Massachusetts Medical School Coated up-conversion nanoparticles
WO2014072482A1 (en) 2012-11-09 2014-05-15 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
KR102215954B1 (ko) 2013-02-14 2021-02-15 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 튜부리신 화합물, 그의 제조 및 사용 방법
WO2014202773A1 (en) 2013-06-20 2014-12-24 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
EP3010548A1 (en) 2013-06-21 2016-04-27 Innate Pharma Enzymatic conjugation of polypeptides
EP3027224B1 (en) 2013-07-31 2020-06-03 Rinat Neuroscience Corp. Engineered polypeptide conjugates using transglutaminase
US9777013B2 (en) 2013-08-14 2017-10-03 William Marsh Rice University Derivatives of uncialamycin, methods of synthesis and their use as antitumor agents
JP6676058B2 (ja) 2015-01-14 2020-04-08 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ ヘテロアリーレン架橋したベンゾジアゼピン二量体、そのコンジュゲート、ならびに製造および使用方法
CN107428780B (zh) 2015-01-14 2020-09-04 百时美施贵宝公司 苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法
CN107406496A (zh) 2015-03-10 2017-11-28 百时美施贵宝公司 可通过转谷氨酰胺酶缀合的抗体和由其制备的缀合物
BR112017027258A2 (pt) 2015-06-23 2018-08-28 Bristol-Myers Squibb Company dímeros de benzodiazepina macrocíclicos, conjugados dos mesmos, preparação e usos
CN108472386A (zh) 2015-10-02 2018-08-31 百时美施贵宝公司 用于缀合抗体的转谷氨酰胺酶变体
CN109641911B (zh) 2016-08-19 2023-02-21 百时美施贵宝公司 seco-环丙吡咯并吲哚化合物和其抗体-药物缀合物以及制备和使用方法
US10487084B2 (en) 2017-08-16 2019-11-26 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a heterobiaryl moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10457681B2 (en) 2017-08-16 2019-10-29 Bristol_Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a tricyclic moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10508115B2 (en) 2017-08-16 2019-12-17 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having heteroatom-linked aromatic moieties, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10494370B2 (en) 2017-08-16 2019-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a pyridine or pyrazine moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor
US10472361B2 (en) 2017-08-16 2019-11-12 Bristol-Myers Squibb Company Toll-like receptor 7 (TLR7) agonists having a benzotriazole moiety, conjugates thereof, and methods and uses therefor

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