JP2022123648A - イムノクロマトグラフィー用キット、ポリペプチドの定量方法 - Google Patents

Abstract

【課題】ＩｇＧ１とＩｇＧ２を簡便に定量することができる新たな手段を提供する。【解決手段】試料中の異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量することが可能であり、前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下である、イムノクロマトグラフィー用キット【選択図】図２

Description

本発明は、イムノクロマトグラフィー用キットに関する。また、本発明は、ポリペプチドの定量方法に関する。

免疫グロブリン（Ｉｇ）は体液性免疫に関与するポリペプチドであり、抗体とも呼ばれる。免疫グロブリンは、その定常領域（Ｆｃ）の違いにより、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＥの５つのクラス（アイソタイプ）に分けられる。そのうち、ＩｇＧは、生体の血漿中の免疫グロブリンの大部分（例えば、ヒトでは７０～７５％）を占め、体液性免疫の主要な機能を担う。

ＩｇＧはさらにいくつかのサブクラスに分けられる。例えば、ヒトではＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４の４つのサブクラスからなり、マウスではＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ及びＩｇＧ３の４つのサブクラスからなる。そして、ＩｇＧ１及びＩｇＧ２がＩｇＧの大多数を占める。例えばヒトでは、ＩｇＧ１：ＩｇＧ２：ＩｇＧ３：ＩｇＧ４が概ね６５：２５：７：３であり、マウスではＩｇＧ１：ＩｇＧ２ａ：ＩｇＧ２ｂ：ＩｇＧ３が概ね４６：２４：２７：２である。

近年、例えばＢｅｔｈｙｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社やＺｅｐｔｏＭｅｔｒｉｘ社から、ＩｇＧの定量のための酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）試薬が市販されている。しかし、これらのキットが各ＩｇＧサブクラスをどの程度の感度で認識できるのかは不明であるうえに、ＥＬＩＳＡは定量に数時間を要するという課題がある。

また、特許文献１には、ヒトＩｇＧのＦｃを特異的に認識する２種の抗ヒトモノクローナル抗体と、それらを利用したヒトＩｇＧのＦｃを含有するポリペプチドの測定方法が開示されている。しかし、当該文献の表８によれば、当該測定方法では、ＩｇＧの各サブクラスの検出感度にはバラつきがあり、ヒトと異なる動物種のＩｇＧサブクラス量比の試料におけるＩｇＧの定量精度も不明である。

特開２００９－１４２２６９号公報

医薬や研究用試薬等に用いられるモノクローナル抗体は、通常は活性化した複数のＢ細胞の中から、特定の抗原に特異的な抗体を発現するＢ細胞クローンをスクリーニングして抗体産生に用いる。このとき、抗体の結合活性の測定に加えてＩｇＧの定量ができれば、高い力価（比活性）の抗体を産生するＢ細胞クローンをスクリーニングすることができる。

しかし、免疫刺激で活性化したＢ細胞クローンのほとんどはＩｇＧを産生するものの、そのサブクラスは上記のように一定の比率で産生され得る。そのため、サブクラスごとに感度が大きく異なるＩｇＧの定量方法の場合、ＩｇＧを精度よく定量するには、そのサブクラスの特定をしたうえで検量線の作成や補正を行う必要があり、測定に時間と手間がかかるという課題があった。

本発明者らは、ＩｇＧの中に占める割合が大きいサブクラスであるＩｇＧ１及びＩｇＧ２を同程度の感度で定量することができれば、多くのＢ細胞クローンから産生されるＩｇＧの定量を簡易迅速に行うことができると考えた。

そこで、本開示では、ＩｇＧ１とＩｇＧ２を簡便に定量することができる新たな手段を提供することを課題とした。

本開示の実施形態の一つであるイムノクロマトグラフィー用キットは、
異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量することが可能であり、
前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、
前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下である、ことを特徴とする。

前記キットにおいて、前記異なるサブクラスのＩｇＧが、少なくともＩｇＧ１及びＩｇＧ２を含んでもよい。

前記キットにおいて、ＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、例えばネズミ目（Ｒｏｄｅｎｔｉａ）生物、より具体的にはマウス又はラットに由来し、かつ、前記ポリクローナル抗体は、鯨偶蹄目（Ｃｅｔａｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ）生物、より具体的にはヤギ、ヒツジ又はウシに由来する。このような構成は、前記ポリクローナル抗体を容易に得ることができる点で好ましい。

前記異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドは、好ましくは互いに分子量が同程度であるものであり、例えば、異なるサブクラスの２種以上のＩｇＧである。

前記ポリクローナル抗体は、下記の（ｉ）、（ｉｉ）のいずれか又はそれらの両方を経ていることを特徴とする：
（ｉ）前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドを担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる精製、
（ｉｉ）血清成分を担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる吸収処理。
当該実施形態によれば、前記ポリペプチドの定量性をさらに高めることができる。

前記ポリクローナル抗体は、例えば、標識抗体、抗原捕捉抗体又はそれらの両方の用途でイムノクロマトグラフィーに用いられる。

前記キットは、さらに少なくともイムノクロマトグラフィー試験片を含み、該イムノクロマトグラフィー試験片に前記ポリクローナル抗体が固相化された構成とすることができる。
別の実施形態では、前記ポリクローナル抗体は、例えば乾燥物又は溶液としてキットに含まれ得る。この場合、前記ポリクローナル抗体は、例えばイムノクロマトグラフィー試験片の作製に使用される。

前記キットは、さらに下記の（Ａ）～（Ｃ）のいずれか１以上を満たす緩衝液を含むことが好ましい：
（Ａ）０．１質量％以上の非イオン性界面活性剤を含有する；
（Ｂ）アルカリ金属イオンの濃度が４００ｍＭ以下である；
（Ｃ）ｐＨ緩衝成分の濃度が２５ｍＭ以上である。
当該緩衝液は（Ａ）～（Ｃ）のいずれか２以上を満たすことがより好ましく、（Ａ）～（Ｃ）の全てを満たすことが更に好ましい。

また、本開示の実施形態の一つである、試料中の異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を有する２種以上のポリペプチドを定量する方法は、
（ａ）試料供給部、展開部及び捕捉部を含むイムノクロマトグラフィー試験片に、試料を接触させること；及び
（ｂ）前記イムノクロマトグラフィー試験片の捕捉部の前記ポリペプチドと抗体の複合体のシグナルを検出すること；を含み、
前記抗体が、前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、
前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下であることを特徴とする。

前記方法において、（ａ）の試料は、以下の（Ａ）～（Ｃ）のいずれか１以上を満たす緩衝液で希釈されることが好ましい。
（Ａ）０．１質量％以上の非イオン性界面活性剤を含有する；
（Ｂ）アルカリ金属イオンの濃度が４００ｍＭ以下である；
（Ｃ）ｐＨ緩衝成分の濃度が２５ｍＭ以上である。
当該緩衝液は（Ａ）～（Ｃ）のいずれか２以上を満たすことがより好ましく、（Ａ）～（Ｃ）の全てを満たすことが更に好ましい。

前記（ａ）の試料を接触させた時点から前記（ｂ）の検出の時点までの時間は、例えば２５～４５分とすることができる。

本開示の実施形態の一つであるポリクローナル抗体の作製方法は、下記の（Ｉ）及び（ＩＩ）を含む：
（Ｉ）動物に、前記異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む組成物を接種して免疫刺激された動物から回収された血清を準備すること；及び
（ＩＩ）前記血清に対して、（ｉ）前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドを担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる精製、及び（ｉｉ）ウシ又はウマの血清成分を担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる吸収処理、のいずれか一方又はそれらの両方を行うこと。

前記ポリクローナル抗体は、例えば、ＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドの検出又は定量に使用することができる。

前記ポリクローナル抗体は、例えば、イムノクロマトグラフィー、ＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴法、ラテックス凝集法、免疫拡散法、ウェスタンブロット法、ドットブロット法、免疫沈降法、免疫電気泳動法又は免疫電気拡散法に使用することができる。

本開示のイムノクロマトグラフィー用キット及び本開示の方法によれば、ＩｇＧ１重鎖Ｆｃ領域を有するポリペプチドとＩｇＧ２重鎖Ｆｃ領域を有するポリペプチドを同程度の感度で定量することができる。

試験例１のヤギの免疫スケジュールの概略図である。 試験例３において、サブクラスの異なるマウスＩｇＧをイムノクロマトグラフィーで測定して得られた吸光度を比較したグラフである。 試験例３において、マウスＩｇＧ１とＩｇＭをイムノクロマトグラフィーで測定して得られた吸光度を比較したグラフである。 試験例３において、マウスＩｇＧ１を含有する試料と、マウスＩｇＧ１に加えて１０％ウシ胎仔血清をさらに含有する試料とをイムノクロマトグラフィーで測定して得られた吸光度を比較したグラフである。 試験例３において、種々の濃度のマウスＩｇＧ１を含有する試料を滴下した直後からイムノクロマトグラフィー測定したときの各試料の吸光度の経時変化を表すグラフである。 図５Ａのデータを、吸光度が安定化したときの値（ほぼ最大値に相当する）で各試料の吸光度を規格化して比較したグラフである。 試験例３において、種々の濃度のＩｇＧ１を含有する試料を３回測定して得られた吸光度の平均値と、測定値から得られた検量線を表すグラフである。

本明細書において、「抗体」とは、抗原に対して非共有結合的そして特異的に抗原に結合することができる免疫グロブリン（Ｉｇ）ファミリーのポリペプチドを表す。
本明細書において、「ポリクローナル抗体」は複数の抗体分子種からなる抗体集団を指し、「モノクローナル抗体」は単一の分子種からなる抗体集団を表す。

本明細書において、「ＩｇＧ」は免疫グロブリンＧを表す。ＩｇＧ分子は２本の重鎖及び２本の軽鎖であってジスルフィド結合によって相互結合されたものからなる、分子量約１５万、１～３％の糖鎖を含むポリペプチドである。各重鎖は重鎖可変領域（「ＶＨ」と表す）と重鎖定常領域（「ＣＨ」と表す）からなる。重鎖定常領域は３つのドメインからなり、それぞれ「ＣＨ１」、「ＣＨ２」、「ＣＨ３」と表す。各軽鎖は、軽鎖可変領域（「ＶＬ」と表す）と軽鎖定常領域（「ＣＬ」と表す）からなる。

ＩｇＧは重鎖の種類によってサブクラスに分けられる。例えば、ヒトのＩｇＧでは重鎖としてＨ_γ１、Ｈ_γ２、Ｈ_γ３及びＨ_γ４の４種類があり、それぞれの重鎖を含むＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４である。また、マウス及びラットのＩｇＧでは重鎖としてＨγ１、Ｈ_γ２ａ、Ｈ_γ２ｂ及びＨ_γ３の４種類があり、それぞれの重鎖を含むＩｇＧサブクラスは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ２ｂ、及びＩｇＧ３である。

本明細書において、単純に「ＩｇＧ２」と表した場合、マウス及びラットにおいては、ＩｇＧ２ａとＩｇＧ２ｂの両方を区別なく表すものとする。

本明細書において、「Ｆｃ」又は「Ｆｃ領域」とは、免疫グロブリンをタンパク質分解酵素であるパパインで消化して得られる断片のうち、重鎖Ｃ末端が含まれる断片又は該断片に相当するポリペプチド鎖上の部分を表す。ＦｃはＣＨ２及びＣＨ３を含む。

本明細書において、「エピトープ」とは、抗体が特異的に結合する、抗原上の部位を指す。

本明細書において、「連結（conjugation）」又は「連結する（conjugate）」とは、ある分子種又は原子種を、共有結合又は非共有結合（特に限定されないが、例えば、配位結合、疎水結合、水素結合、静電結合など）で一体化することを表す。

本明細書において、標識抗体とは、標識された抗体を指す。また、抗原捕捉抗体とは、固相に固定化され、抗原と結合性のある抗体を指す。

［イムノクロマトグラフィー用キット］
本開示の実施形態の一つであるイムノクロマトグラフィー用キットは、
異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量することが可能であり、
前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、
前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下である、ことを特徴とする。

（異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチド）
前記イムノクロマトグラフィー用キットは、異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドの定量に用いられる。当該２種以上のポリペプチドのうちの少なくとも２種は、それぞれ同種由来で互いにサブクラスが異なるＦｃを含む。当該２種以上のポリペプチドは、本発明の効果を顕著に奏する観点から、互いに分子量が同程度であるものが好ましい。例えば当該２種以上のポリペプチドは、異なるサブクラスの２種以上のＩｇＧであり得る。

本明細書において、ＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドとは、ＩｇＧのＦｃ領域を少なくとも１以上含有していれば特に限定されず、他の部分とＦｃ領域とが共有結合していてもよいし、疎水結合、配位結合、静電結合等により非共有結合して一体となっていてもよい。このようなＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドとしては、例えばＩｇＧ抗体、ＩｇＧのＦｃ領域の断片、及びそれらを含むポリペプチド（例えば、ポリペプチド、薬物、標識等が連結した抗体又はＦｃ領域等）が挙げられる。

本明細書において「２種以上のポリペプチドを定量することが可能である」とは、２種以上のポリペプチドを一度に定量することができる場合に限定されず、例えば、別々の試料として同じキット又は方法に供して、それぞれの試料が定量できる場合も包含する。

（ポリクローナル抗体）
本実施形態のポリクローナル抗体は、異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を抗原として認識することを特徴とする。その結果、試料中の異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量することができる。

前記ポリクローナル抗体は、エピトープとして、例えば、前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域の少なくとも一部を認識することができる。

前記ポリクローナル抗体の重鎖Ｆｃ領域と前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域とのアミノ酸配列の類似度は、例えば、７７％以下、７５％以下、７０％以下、６５％以下又は６０％以下であり得る。また、前記ポリクローナル抗体の重鎖Ｆｃ領域と前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域とのアミノ酸配列の類似度は、例えば、５０％以上、５５％以上、６０％以上、６５％以上、７０％以上又は７５％以上であり得る。
本明細書において、アミノ酸配列の類似度は、ＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴ（ＵＲＬ：https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）のｂｌａｓｔｐ ｓｕｉｔｅのデフォルトの設定で２つの配列のアラインメントを行って得られるｐｏｓｉｔｉｖｅの数値で表される。

前記ポリクローナル抗体の由来は、その重鎖Ｆｃ領域が上記のアミノ酸配列類似度を満たす限りにおいて特に限定されない。
例えば、前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域がネズミ目（Ｒｏｄｅｎｔｉａ）生物に由来する場合、前記ポリクローナル抗体は鯨偶蹄目（Ｃｅｔａｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ）生物に由来するものであり得る。即ち、例えば前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域がマウス又はラットに由来する場合、前記ポリクローナル抗体はヤギ、ヒツジ又はウシに由来するものであり得、一実施形態ではヤギに由来するものであり得る。
また、例えば前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域が鯨偶蹄目生物に由来する場合、前記ポリクローナル抗体はネズミ目生物に由来するものであり得る。即ち、例えば前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域がヤギ、ヒツジ又はウシに由来する場合、前記ポリクローナル抗体はマウス又はラットに由来するものであり得る。

前記ポリクローナル抗体は、例えば、上記の由来となる動物に、前記異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む組成物を抗原として接種して免疫した後の血清から得られる。当該免疫に用いる組成物としては、例えば、特定の生物種の血清から得られるポリクローナル抗体のパパイン消化物、又はその精製物が挙げられる。

例えばヤギを免疫する場合、抗原接種は、例えば１回、２回、３回、４回、５回又は６回以上行うことができる。また、抗原摂取は１～２週間おきに行うことができる。中でも、抗原接種は、第１回目の抗原接種後に２週間おきに４回の計５回行うことが好ましい。免疫刺激には、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、水酸化アルミニウム（ミョウバン）等のアルミニウム塩などのアジュバントを適宜併用することができる。一実施形態では、アジュバントとして、完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント、又はそれらの両方が使用される。

例えば、抗原接種を行った後で、ポリクローナル抗体が産生されているかどうかを確認するための採血を、最初の抗原接種から、例えば３～１２週間後、４～１０週間後又は５～８週間後に行ってもよい。一実施形態では、当該採血は、例えば最初の抗原接種から５週間後及び／又は７週間後に行われる。

例えばヤギにポリクローナル抗体を産生させる場合、最初の抗原接種から、例えば５～１５週間後、７～１２週間後又は８～１０週間後に全採血を行ってもよい。一実施形態では、当該採血は、例えば最初の抗原接種から９週間後に行われる。

免疫刺激後に得られるポリクローナル抗体を含有する血清は、そのまま本キットに使用することもできるが、保存安定性及び定量性の向上の観点から、ポリクローナル抗体は精製してキットに使用することが好ましい。精製処理としては、例えば、硫安沈殿、プロテインＡ若しくはプロテインＧ又はイオン交換樹脂等によるクロマトグラフィー等を用いた一般的なＩｇ画分の精製；ポリクローナル抗体の抗原である前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域部分を含むポリペプチドを担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる精製から選ばれる１以上の手段を用いることができる。特定の実施形態では、血清は、プロテインＧカラムによる精製を経た後に、前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドを担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる精製を行う。これにより、より定量性に優れたポリクローナル抗体を得ることができる。

前記ポリクローナル抗体を含む組成物は、さらに非特異反応を除くために、血清成分を担体としたアフィニティークロマトグラフィーによる吸収処理（吸着処理）を行ってもよい。吸収処理に用いる血清成分としては、例えば細胞培地に含まれる血清が挙げられる。より具体的には、吸収処理に用いる血清成分は、例えばウシ又はウマの血清である。これにより、より定量性に優れたポリクローナル抗体を得ることができる。

前記ポリクローナル抗体は、異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを検出又は定量する用途で、イムノクロマトグラフィー（ラテラルフローイムノアッセイ、ストリップテスト）法の他に、例えば、ＥＬＩＳＡ法、表面プラズモン共鳴法、ラテックス凝集法、免疫拡散法、ウェスタンブロット法、ドットブロット法、免疫沈降法（Ouchterlony法等）、免疫電気泳動法（Mancini法）、免疫電気拡散法（ロケット法）等に用いることができる。これらの分析法では、例えば、前記ポリクローナル抗体は下記の標識抗体の形態で使用される。

（標識抗体、抗原捕捉抗体）
前記ポリクローナル抗体は、イムノクロマトグラフィーにおける標識抗体、抗原捕捉抗体又はそれらの両方に用いることができる。一実施形態では、前記ポリクローナル抗体は、標識抗体及び抗原捕捉抗体の両方に用いられる。

前記ポリクローナル抗体を標識抗体して用いる場合、ポリクローナル抗体は、例えば、微小粒子、蛍光物質、酵素、ビオチン、放射性標識体、磁性粒子等の標識が予め連結されて本キットに含まれてもよく、また本キットによって標識抗体を調製してもよい。

微小粒子としては、抗体の抗原結合性を損なわない限りにおいて特に限定されず、例えば、金コロイドのような金属コロイド粒子、着色ラテックス粒子のような着色粒子等が挙げられる。

蛍光物質としては、抗体又はその機能性断片の抗原結合性を損なわない限りにおいて特に限定されず、例えば、ローダミン系、クマリン系、オキサジン系、カルボピロニン系、シアニン系、ピロメセン系、ナフタレン系、ビフェニル系、アントラセン系、フェナントレン系、ピレン系、カルバゾール系、Ｃｙ系、ＥｖｏＢｌｕｅ系、フルオレセイン系又はこれらの誘導体等が挙げられる。

酵素としては、抗体又はその機能性断片の抗原結合性を損なわない限りにおいて特に限定されず、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリフォスファターゼ、ペルオキシダーゼ、β－Ｄ－ガラクトシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ等が挙げられる。

放射性標識体としては、特に限定されないが、例えば、^３Ｈ、^１４Ｃ、^１５Ｎ、^３５Ｓ、^９０Ｙ、^９９Ｔｃ、^１１１Ｉｎ、^１２５Ｉ、^１３１Ｉ等が挙げられる。

標識抗体がイムノクロマトグラフィーに用いられる態様としては、例えば下記の（ａ）～（ｃ）のいずれかが挙げられる。
（ａ）本キットがイムノクロマトグラフィー試験片を含み、該試験片に標識抗体が予め含まれる態様
（ｂ）標識抗体が乾燥物又は溶液としてキットに含まれ、イムノクロマトグラフィー試験片の作製に使用される態様
（ｃ）標識抗体が定量の際に試料溶液に添加されるか、又は試料溶液とともにイムノクロマトグラフィー試験片に滴下されて使用される態様。

前記ポリクローナル抗体が抗原捕捉抗体としてイムノクロマトグラフィーに用いられる態様としては、例えば下記の（ａ）又は（ｂ）が挙げられる。
（ａ）本キットがイムノクロマトグラフィー試験片を含み、該試験片に前記ポリクローナル抗体が予め固相化されて含まれる態様
（ｂ）前記ポリクローナル抗体が乾燥物又は溶液としてキットに含まれ、イムノクロマトグラフィー試験片の作製に使用される態様。

（その他構成）
（１．イムノクロマトグラフィー試験片）
本キットは、イムノクロマトグラフィー試験片を含むことが好ましい。当該イムノクロマトグラフィー試験片には、上記の標識抗体、抗原捕捉抗体、又はそれらの両方を含むことが好ましい。

前記試験片が前記ポリクローナル抗体を含む場合、その含有量は、使用するポリクローナル抗体、定量するポリペプチド、測定条件等によって適宜選択し得るが、試験片１枚当たり、例えば標識抗体は５～１０μｇ、抗原捕捉抗体は１０～３０μｇとすることができる。

前記試験片は、例えばテストストリップを含む。当該テストストリップは、第１の開口部と第２の開口部が形成された、例えばプラスチック製のケースの内部に収容され、テストストリップの表面の一部がこれらの開口部から露出している構成とすることができる。例えば、テストストリップの実施形態の一つとして、特に限定されないが、例えば特開２０１９－１５８７９１号公報に記載されたものが挙げられる。下記に、その具体的な実施形態を示す。詳細は当該公報の記載から理解することができる。
＜テストストリップの実施形態の例＞
テストストリップは、例えば、試料滴下部と、展開部と、捕捉部とを備える。テストストリップは、全体として、例えば濾紙などの多孔質支持体で構成される。
試料滴下部は、試料が滴下される部分であり、例えばフィルタペーパによって構成される。試料滴下部は、第１の開口部に露出する。
試料は、第１の開口部から試料滴下部に滴下される。試料滴下部に滴下された検体は、多孔質支持体に吸収され、毛細管現象によって展開部へと向かう。
展開部は、検体をクロマト展開させる部分であり、例えばニトロセルロースメンブレンで構成される。
捕捉部は、使用時には抗原捕捉抗体が、例えば線状又は帯状に固相化される。補足部は、第２の開口部に露出しており、第２の開口部を介して捕捉部上の前記ポリペプチドと抗体の複合体のシグナルを検出によるシグナルを検出することができる。
テストストリップは、試料滴下部から展開部までの間に、さらに標識抗体を保持する標識保持部を備えてもよい。標識試薬が定量の際に試料溶液に添加する態様、又は試料溶液とともにイムノクロマトグラフィー試験片に滴下される態様においては、テストストリップは、標識保持部を備えていなくてもよい。
前記テストストリップは、さらに吸収部を備えてもよい。吸収部は例えばフィルタペーパによって構成され、試料溶液を吸い上げることで、試料滴下部から標識保持部へスムーズに導くことができる。

前記試験片には、例えばＱＲコード（登録商標）などの二次元コードがさらに記載されてもよい。当該二次元コードに含まれる情報は、例えば分析項目、有効期限、ロット番号などの試験片の基本情報、及び、例えば反応時間、検量線などの試験片に固有の呈色反応に関連する情報などである。

（２．試薬、器具等）
本キットは、さらにｐＨ緩衝成分、界面活性剤、塩類及びブロッキング剤からなる群より選ばれる１種単独又は２種以上の組み合わせを含むことが好ましい。

ｐＨ緩衝成分としては、特に限定されないが、例えば、リン酸、ホウ酸、酢酸、クエン酸、ギ酸、カコジル酸等の酸又はこれらの塩；グリシン等のアミノ酸；トリスヒドロキシアミノメタン（Ｔｒｉｓ）；ＨＥＰＥＳ、ＭＥＳ等のグッドバッファー等から選ばれる１種の成分単独又は２種以上の成分の組み合わせが挙げられる。

界面活性剤としては、特に限定されないが、非イオン性界面活性剤が好ましく、エステルエーテル型、エステル型、エーテル型のいずれも用いることができる。より具体的にはＴｗｅｅｎ２０、Ｔｗｅｅｎ４０、Ｔｗｅｅｎ８０、Ｔｒｉｔｏｎ－Ｘ１００、ポリオキシエチレン（６０）ソルビタンモノステアレート、ポリオキシエチレン（６５）ソルビタントリステアレート、ポリオキシエチレン（８０）ソルビタンモノオレエート、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ノニデットＰ－４０及びＣＨＡＰＳからなる群より選ばれる１種以上が挙げられる。

塩類としては、例えばアルカリ金属（ナトリウム、カリウム等）、アルカリ土類金属塩（マグネシウム、カルシウム等）、アルミニウム、鉄、銅、亜鉛、マンガンの塩が挙げられ、少なくともアルカリ金属塩を含むことが好ましい。一実施形態では、本キットは、塩類として塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化マグネシウムからなる群より選ばれる１種以上を含む。

ブロッキング剤としては、例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、スキムミルク及び血清からなる群より選ばれる１種以上が挙げられる。

上記のｐＨ緩衝成分、界面活性剤、塩類及びブロッキング剤からなる群より選ばれる少なくとも１種以上は、緩衝液として本キットに含まれていても良い。当該緩衝液は、例えば、イムノクロマトグラフィー試料の希釈に用いられる。

イムノクロマトグラフィー試料の希釈用緩衝液は、例えば以下の（Ａ）～（Ｃ）のうち少なくとも１以上を満たし、好ましくは２以上、より好ましくは３つ全てを満たす。
（Ａ）０．１質量％以上の非イオン性界面活性剤を含有する；
（Ｂ）アルカリ金属イオンの濃度が４００ｍＭ以下である；
（Ｃ）ｐＨ緩衝成分の濃度が２５ｍＭ以上である。

（Ａ）の非イオン性界面活性剤は、例えばＴｗｅｅｎ２０が挙げられる。
（Ａ）の非イオン性界面活性剤の含有量は、バックグラウンドシグナルを抑える観点から、例えば０．１質量％以上、好ましくは０．１５質量％以上、より好ましくは０．２質量％以上であり、例えば０．８質量％以下、好ましくは０．５質量％以下、より好ましくは０．４質量％以下又は０．３質量％以下とすることができる。

（Ｂ）のアルカリ金属イオンは、例えばナトリウムイオンが挙げられる。
（Ｂ）のアルカリ金属イオンの含有量は、バックグラウンドシグナルを抑える観点から、例えば４００ｍＭ以下、２００ｍＭ以下、１００ｍＭ以下又は５０ｍＭ以下、好ましくは１ｍＭ以下であり、アルカリ金属イオンを実質的に含まないことがより好ましい。ここで実質的に含まないとは、例えば公知の定量分析法によりアルカリ金属イオンの定量分析を行った場合に、０．１ｍＭ以下となることを表す。

（Ｃ）のｐＨ緩衝成分は、例えばＴｒｉｓ－ＨＣｌが挙げられる。
（Ｃ）のｐＨ緩衝成分の含有量は、バックグラウンドシグナルを抑える観点から、例えば２５ｍＭ以上、５０ｍＭ以上又は１００ｍＭ以上、好ましくは２００ｍＭ以上、より好ましくは４００ｍＭ以上である。また、（Ｃ）のｐＨ緩衝成分は、例えば１Ｍ以下、８００ｍＭ以下又は５００ｍＭ以下であり得る。

希釈用緩衝液はブロッキング剤を含んでもよいが、バックグラウンドシグナルを抑える観点から、ブロッキング剤の濃度は、好ましくは０．５質量％以下、より好ましくは０．１質量％であり、ブロッキング剤を実質的に含まないことが更に好ましい。

上記の緩衝液中の成分の含有量は、試料を希釈する際の濃度であって、本キット中に含まれる緩衝液はその濃縮物（例えば、上記成分の各濃度の整数倍の濃度の濃縮物）であってもよい。

本キットには、前記異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域と同じサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む１種以上のポリペプチドをさらに含んでもよい。当該ポリペプチドは、陽性対照として、あるいは、例えば、定量の際の検量線の作成、検量線の補正等の標準試料として用いることができる。例えば、当該ポリペプチドは、サブクラスの特定されていないＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４からなる群より選ばれる１種以上であり得る。

本発明のキットには、その他の試薬又は器具として、さらに水（ＭｉｌｌｉＱ水、脱イオン水、蒸留水等）、発色又は蛍光検出用基質、スポイト、シリンジ、チップ、プラスチックチューブからなる群より選ばれる１種以上を含んでもよい。

（用途）
本キットは、異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量することが可能であるが、当該定量の用途に限定されない。例えば、本キットは、異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを検出する用途に使用することができる。
本明細書において、「検出」とは、物質の有無の定性的な判別を表す。

本キットは、少なくともＩｇＧ１重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドと、ＩｇＧ２重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドを定量することができる。本キットは、これらのポリペプチドを同程度の感度で定量することができるため、個別に検量線の作成や補正を行う必要がなく、簡易迅速に定量が可能である。よって、本キットは、例えばＩｇＧ抗体やその産生細胞のスクリーニング等において、サブクラスが特定されていない試料のＩｇＧの定量に適している。

定量又は検出の対象となる前記２種以上のポリペプチドを含む試料は、イムノクロマトグラフィーが可能な液状物であれば特に限定されない。例えば、本キットの試料は、血液、尿、唾液、鼻汁、鼻腔拭い液、咽頭拭い液、リンパ液、髄液、腹膜液、***、膣液、涙液、眼内液、硝子体液、糞便、汗若しくは他の体液、又はそれらの分離物若しくは抽出物（血清等）などの生体試料；細胞培養培地上清（例えば、ハイブリドーマ培養上清）；細胞又は組織の抽出物、などが挙げられる。

［異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を有する２種以上のポリペプチドを定量する方法］
本開示の実施形態の一つである、試料中の異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を有する２種以上のポリペプチドを定量する方法は、
（ａ）試料供給部、展開部及び捕捉部を含むイムノクロマトグラフィー試験片に、試料を接触させること；及び
（ｂ）前記イムノクロマトグラフィー試験片の捕捉部の前記ポリペプチドと抗体の複合体のシグナルを検出すること；を含み、
前記抗体が、前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、
前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下である、
ことを特徴とする。

本方法の前記イムノクロマトグラフィー試験片は、例えば、上記の［イムノクロマトグラフィー用キット］の項に記載されたイムノクロマトグラフィー試験片を用いることができる。

前記ポリペプチドと抗体の複合体において、当該抗体は、例えば標識抗体及び抗原捕捉抗体を含む。当該抗体の全てが前記ポリクローナル抗体であってもよいし、別の抗体を標識抗体、抗原捕捉抗体等として含んでもよい。

前記ポリクローナル抗体は、標識抗体、抗原捕捉抗体又はそれらの両方であり、特定の実施形態では、標識抗体及び抗原捕捉抗体の両方である。

前記ポリペプチドと抗体の複合体のシグナルの発生には、例えば標識抗体の標識物質自体から、又は標識物質が集合することが関与する。シグナルの測定は当該標識物質の種類によって適宜選択することができ、例えば標識物質に由来する吸光度、反射光、蛍光、磁気、電磁波（可視光線、Ｘ線等）、粒子線（α線、β線等）等の測定が挙げられる。
例えば、前記標識抗体の標識が金コロイドである場合、前記シグナルは、例えば捕捉部の赤色の着色、又は５００ｎｍ～６００ｎｍ（好ましくは５２０～５４０ｎｍであり、例えば５２５ｎｍ）の波長の光を照射した場合の吸光度の変化である。

本方法において、ＩｇＧの定量におけるバックグラウンドシグナルを抑える観点から、（ａ）の試料は、以下の（Ａ）～（Ｃ）のいずれか１以上を満たす緩衝液で希釈されることが好ましい。
（Ａ）０．１質量％以上の非イオン性界面活性剤を含有する；
（Ｂ）アルカリ金属イオンの濃度が４００ｍＭ以下である；
（Ｃ）ｐＨ緩衝成分の濃度が２５ｍＭ以上である。
当該緩衝液は、例えば、上記の［イムノクロマトグラフィー用キット］の項に記載された希釈用緩衝液を用いることができる。

前記（ａ）の試料を当該緩衝液で希釈する際の希釈倍率は、例えば、５倍以上、１０倍以上、２０倍以上、３０倍以上又は４０倍以上である。さらに、試料の夾雑物による定量への影響を抑制する観点から、希釈倍率は、好ましくは５０倍以上であり、例えば１００倍以上、１５０倍以上、２００倍以上、２５０倍以上又は３００倍以上であってもよい。

また、（ａ）の試料に動物の血清（例えば、ウシ血清、ウマ血清等）を含有する場合は、試料の夾雑物による定量への影響が抑制する観点から、試料中の動物の血清の濃度が１０質量％以下、５質量％以下、１質量％以下又は０．１質量％以下となるように試料を希釈することが好ましい。

前記（ａ）の試料を接触させた時点から前記（ｂ）の検出の時点までの時間は、温度、湿度、使用する抗体、試料、緩衝液等によって適宜選択し得る。当該時間は、例えば室温（約２５℃）においては、例えば１分以上、５分以上、１０分以上、又は１５分以上とすることができ、シグナルの安定性（定量性）を向上させる観点から、好ましくは２０分以上、より好ましくは２５分以上である。また、当該時間は、例えば２４時間以下、１２時間以下、６時間以下、２時間以下、６０分以下又は４５分以下とすることができる。

本方法のその他の具体的な態様については、上記の［イムノクロマトグラフィー用キット］の項の、用途の項の記載に準じる。

以下、本発明に関し、実施例を用いて詳細に説明するが、本発明はその要旨を超えない限り、以下の実施例に限定されるものではない。

［試験例１．イムノクロマトグラフィー試験片の調製］
（ＩｇＧのＦｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体の調製）
以下の手順でマウスＩｇＧのＦｃ領域に結合可能な、ヤギ由来のポリクローナル抗体を調製した。免疫刺激から血清の分離までは、イワキ株式会社に委託して実施した。
（１）ヤギ（若齢成獣）にマウスＩｇＧのＦｃ領域を抗原として接種した。
使用した抗原は、マウス血清のＩｇＧの精製物をパパイン消化して断片化したものであり、マウスＩｇＧの４種類のサブクラスのＦｃ領域全てを含む。
接種は委託先の６３日の標準免疫スケジュール（図１）に沿って実施した。即ち、第１回目の抗原接種後に２週間おきに４回抗原接種を行った。１回につき当該抗原を２ｍｇ／頭で、アジュバントとともに接種した。アジュバントは、初回は完全フロイントアジュバント（ＦＣＡ）、２回目以降は不完全フロイントアジュバント（ＦＩＡ）を使用した。
（２）抗原刺激後６３日目にヤギから血液を採取した。
（３）血液から血清を遠心分離した。そして、プロテインＧカラムを用いて血清から免疫グロブリン画分を分離した。
（４）次に、（１）の抗原に用いたＦｃ領域をアガロースビーズに固定した担体を用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、（３）で得られた免疫グロブリン画分からＦｃ領域に結合可能な抗体の画分を分離した。
（５）さらに、得られた抗体画分をウシ血清及びウマ血清を固定化した担体に接触させる吸収処理を行い、これらの血清に対する交差性を抑えたポリクローナル抗体画分を調製した。

（イムノクロマトグラフィー試験片の作製）
以下の手順で、抗原捕捉抗体として上記ヤギ由来ポリクローナル抗体、標識抗体として当該ポリクローナル抗体の金コロイド標識体を含む、イムノクロマトグラフィー試験片を作製した。
（１）上記のヤギ由来ポリクローナル抗体の一部を、物理吸着により金コロイド標識して、標識抗体を調製した。
（２）（１）で調製した標識抗体５μｇを幅８ｍｍ×長さ５ｍｍのグラスファイバー製のパッド（ミリポア社製）に浸み込ませて乾燥させることにより、試料滴下部かつ標識保持部であるコンジュゲートパッドを調製した。
（３）特開第２０１９－１５８７９１号公報の図４の捕捉部のように、幅２５ｍｍ×長さ５ｍｍのニトロセルロースメンブレンの第１の端から１０ｍｍの位置に、抗体塗布機を用いて０．８μＬ／ｃｍの塗布量で、上記のヤギ由来ポリクローナル抗体（抗原捕捉抗体）を含む溶液を線状に塗布した。次に塗布後のメンブレンを５５℃、３０分乾燥させて、抗原捕捉抗体を固相化した。
（４）上記のメンブレンの第１の端に、さらにコンジュゲートパッドの上に試料をしみこませるためのグラスファイバー製のサンプルパッド（幅５ｍｍ×長さ２０ｍｍ、ミリポア社製）を重層した。これらを特開第２０１９－１５８７９１号公報の図２に示されるような２つの開口部が設けられたケースに挟み込んでイムノクロマトグラフィー試験片を作製した。このとき、第１の開口部（試料注入口）に試料滴下部が、もう一方の第２の開口部（観察窓）に捕捉部が露出するように配置した。

［試験例２．試料用緩衝液の検討］
１０μｇ／ｍＬ又は０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ1を含むハイブリドーマ培養液を、表１の種々の組成の緩衝液で５０倍に希釈したものを調製した。
上記の試験例１のイムノクロマトグラフィー試験片の試料注入口に、試料１００μＬを滴下し、室温（２５℃）で所定の時間イムノクロマト展開した３０分後にポイントリーダー（登録商標、ウシオ電機株式会社製）を用いて、標識抗体の金コロイドの凝集により吸収される波長５２５ｎｍの光を観察窓に露出する捕捉部に照射し、吸光度を測定した。

表１に測定結果を示した。１０μｇ／ｍＬ ＩｇＧを含有する場合の吸光度Ａ１は、いずれの緩衝液でも測定に適した十分大きい値を示した。そこで、それぞれの緩衝液のＩｇＧを含有しない場合の吸光度Ａ２が小さいほどバックグラウンドシグナルが小さく良好であると考えて、緩衝液の組成の最適化を検討した。Ｎｏ．３～６及び９の比較から、Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ濃度が高いほどＡ２が小さくなることが示される。また、Ｎｏ．１～３の比較及びＮｏ．７～９の比較から、ＮａＣｌの濃度が低いほどＡ２が小さくなることが示される。Ｎｏ．７とＮｏ．１０の比較及びＮｏ．２とＮｏ．１１、１２との比較から、Ｔｗｅｅｎ２０が０．２質量％で最適であることが示される。さらに、Ｎｏ．２とＮｏ．１３の比較から、ＢＳＡ濃度が低いほどＡ２が小さくなることが示される。

［試験例３．イムノクロマトグラフィー法によるＩｇＧの定量試験］
本試験例は、試験例１のイムノクロマトグラフィー試験片に試料を滴下し、所定の時間イムノクロマト展開した後に試験例２に記載の方法で、ポイントリーダーで吸光度測定を行った。希釈液として、４００ｍＭ Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ９．３）、２００ｍＭ ＮａＣｌ、及び０．２質量％ Ｔｗｅｅｎ２０を含有する水溶液を使用した。

（ＩｇＧサブクラス間の反応性の比較）
マウスＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ又はＩｇＧ２ｂを０、２．５、５．０又は１０μｇ／ｍＬ含有し、さらに１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を含有するハイブリドーマ用培地（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ－ＳＦＭ、Ｇｉｂｃｏ社製）を調製した。これらの溶液を上記の希釈液で５０倍に希釈した溶液を試料として滴下し、３０分間イムノクロマト展開してから吸光度測定した。結果を図２に示した。ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ及びＩｇＧ２ｂは各濃度に対して同等の吸光度を示していることから、試験例１の試験片は、サブクラス間の反応性の差が少ないことが明らかとなった。

（交差反応性の検証）
マウスＩｇＭを０、２．５若しくは１２．５μｇ／ｍＬ含有する、又はＩｇＧ１を０、２．５若しくは１２．５μｇ／ｍＬ含有する、１０％ウシ胎仔血清含有ハイブリドーマ用培地を調製した。これらの溶液を上記の希釈液で５０倍に希釈した溶液を試料として試験片に滴下し、３０分間イムノクロマト展開してから吸光度を測定した。結果を図３に示した。試験例１の試験片はマウスのＩｇＭに反応しないことが示された。

（ａ）５．０μｇ／ｍＬとなるようにマウスＩｇＧを加えたハイブリドーマ用培地と、（ｂ）５．０μｇ／ｍＬとなるようにマウスＩｇＧを加えた１０％ウシ胎仔血清含有ハイブリドーマ用培地、のそれぞれを希釈液で５０倍に希釈したものを試料として試験片に滴下し、３０分イムノクロマト展開してから吸光度を測定した。結果を図４に示した。（ａ）と（ｂ）の試料の吸光度に差がないことから、試験例１の試験片を用いたＩｇＧの定量において、ウシ胎仔血清による妨害を受けないことが示された。

（試料を滴下した後、測定するまでのイムノクロマト展開時間の検討）
０．５、１．５、３．０、４．５、６．０、７．０、８．０、９．０及び１２．０μｇ／ｍＬのマウスＩｇＧ１を含有するハイブリドーマ用培地を調製した。これらの溶液を上記の希釈液で５０倍に希釈したものを試料として試験片に滴下し、すぐに吸光度測定を開始して、０から９０分間までの吸光度の経時変化を測定した。得られた各試料の吸光度の経時変化を表すグラフを図５Ａに示した。また、図５Ｂは、図５Ａで得られたデータについて、各濃度のＩｇＧ１を含有する試料の吸光度を、吸光度が安定したときの値で規格化して表したグラフである。これらのグラフから、試料中のＩｇＧ濃度に関係なく、試料滴下後２０～６０分、より好ましくは２５～４５分室温でインキュベートすることによって、安定した高いシグナル強度が得られることが判明した。

（検量線の作成）
表２に示す実濃度のマウスＩｇＧ１を含有する緩衝液を試料として試験片に滴下して３０分後に吸光度測定を行った。測定は同じ実濃度の試料について３回実施した。得られたデータから作成された検量線を図６に示した。また、測定された吸光度から当該検量線を用いて計算される測定濃度の平均値、標準偏差及び変動係数を表２に示した。いずれの濃度においても測定濃度は実濃度にほぼ一致しており、変動係数（ＣＶ％）が２０％以下と定量性が良好な検量線が得られた。

Claims (9)

1. 異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量することが可能であり、
   前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、
   前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下である、イムノクロマトグラフィー用キット。
2. 前記異なるサブクラスのＩｇＧが、少なくともＩｇＧ１及びＩｇＧ２を含む、請求項１に記載のイムノクロマトグラフィー用キット。
3. 前記ポリペプチドのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域が、ネズミ目（Ｒｏｄｅｎｔｉａ）生物に由来し、前記ポリクローナル抗体が鯨偶蹄目（Ｃｅｔａｒｔｉｏｄａｃｔｙｌａ）生物に由来する、請求項１又は２に記載のイムノクロマトグラフィー用キット。
4. 前記ポリクローナル抗体は、下記の（ｉ）、（ｉｉ）のいずれか又はそれらの両方を経ていることを特徴とする、請求項１～３のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフィー用キット
   （ｉ）前記２種以上のポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域を含むポリペプチドを担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる精製、
   （ｉｉ）血清成分を担体とするアフィニティークロマトグラフィーによる吸収処理。
5. さらに少なくともイムノクロマトグラフィー試験片を含み、該イムノクロマトグラフィー試験片に前記ポリクローナル抗体が固相化される、請求項１～４のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフィー用キット。
6. 下記の（Ａ）～（Ｃ）のいずれか１以上を満たす緩衝液を含む、請求項１～５のいずれか一項に記載のイムノクロマトグラフィー用キット：
   （Ａ）０．１質量％以上の非イオン性界面活性剤を含有する；
   （Ｂ）アルカリ金属イオンの濃度が４００ｍＭ以下である；
   （Ｃ）ｐＨ緩衝成分の濃度が２５ｍＭ以上である。
7. 異なるサブクラスのＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域を含む２種以上のポリペプチドを定量する方法であって、
   （ａ）試料供給部、展開部及び捕捉部を含むイムノクロマトグラフィー試験片に、試料を接触させること；及び
   （ｂ）前記イムノクロマトグラフィー試験片の捕捉部の前記ポリペプチドと抗体の複合体のシグナルを検出すること；を含み、
   前記抗体が、前記異なるサブクラスのＩｇＧの重鎖Ｆｃ領域に結合可能なポリクローナル抗体を含み、
   前記ポリペプチドの重鎖Ｆｃ領域と前記ポリクローナル抗体のＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域のアミノ酸配列類似度が７７％以下である、方法。
8. 前記（ａ）の試料が、以下の（Ａ）～（Ｃ）のいずれか１以上を満たす緩衝液で希釈されることを含む、請求項６に記載の方法：
   （Ａ）０．１質量％以上の非イオン性界面活性剤を含有する；
   （Ｂ）アルカリ金属イオンの濃度が４００ｍＭ以下である；
   （Ｃ）ｐＨ緩衝成分の濃度が２５ｍＭ以上である。
9. 前記（ａ）の試料を接触させた時点から前記（ｂ）の検出の時点までの時間が２５分～４５分間である、請求項７又は８に記載の方法。

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